BIOKIMIA

LAPORAN PRAKTIKUM
UJI KARBOHIDRAT (HbA1C)

Disusun oleh :

Nama : Dhea Agustina Hariadi (P3.73.34.1.20.105)

Dosen : Dra. Warida, M.Kes

Burhannudin, M.Sc

PROGRAM STUDI DIII TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS KELAS REGULER SORE

POLTEKKES KEMENKES JAKARTA 3

TAHUN 2020/2021
 A. PENDAHULUAN

Hemoglobin A1c pertama kali ditemukan pada tahun 1960-an melalui suatu proses
elektroforesis hemoglobin. Huisman dan Dozy pada tahun 1962 melaporkan peningkatan
salah satu fraksi minor hemoglobin pada 4 pasien diabetes.Lima tahun kemudian, Rahbar
kembali menemukan fraksi tersebut pada 2 orang penderita diabetes yang menjalani skrining
karena hemoglobin yang abnormal. Tahun 1968 dilaporkan adanya suatu komponen
hemoglobin diabetes pada pasien diabetes tidak terkontrol, komponen diabetes tersebut
memiliki karakteristik kromatografik yang sama dengan HbA1c, yaitu suatu komponen
hemoglobin minor yang digambarkan oleh Schnek dan Schroeder pada tahun 1961.
Penggunaan HA1c untuk pemantauan derajat kontrol metabolisme glukosa pasien diabetes
pertama kali diajukan pada tahun 1976, dan diadopsi kedalam praktek klinik pada tahun
1990-an oleh Diabetes Control and Complication Trial (DCCT)dan the United Kingdom
Prospective Diabetes Study (UKPDS) sebagai alat monitoring derajat/ kontrol DM. Komite
ahli darithe American Diabetes Association (ADA) dan the European Association for the
Study of Diabetes (EASD) kemudian merekomendasikan penggunaan HbA1c untuk
diagnosis DM, dan pada tahun 2010 ADA memasukkan HbA1c ke dalam kriteria diagnosis
diabetes (Sri Rahayu P, 2014).

Hemoglobin A1c atau HbA1c adalah komponen minor dari hemoglobin yang
berikatan dengan glukosa. HbA1c disebut sebagai glikosilasi atau hemoglobin glikosilasi atau
glycohemoglobin. Hemoglobin adalah pigmen pembawa oksigen yang memberikan warna
merah pada sel darah merah dan juga merupakan protein dominan dalam sel darah merah
( Airin Que, 2013 ). Komponen utama hemoglobin adalah hemoglobin A (Adulf/dewasa),
yaitu sekitar 90% dari total komponen hemoglobin. Komponen minor hemoglobin adalah
hemoglobin A2 / HbA2 dan HbF, yang merupakan hasil rantai gen hemoglobin yang berbeda
δ dan Υ. Komponen minor lainnya adalah modikasi post-translasional hemoglobin A yaitu
A1a, A1b dan A1c . Hemoglobin A1c merupakan komponen minor paling besar dari sel darah
manusia, normalnya 4% dari total hemoglobin A. HbA1c adalah istilah secara internasional
untuk glycosylatedhemoglobin /glycated hemoglobinum yang direkomendasikan oleh ADA.
HbA1c (Hemoglobin Adulf 1c) merupakan derivat adulf hemoglobin (HbA), dengan
penambahan monosakarida (fruktosa atau glukosa).yang merupakan subtipe utama dan fraksi
terpenting yaitu sekitar 4-5% dari total hemoglobin yang banyak diteliti di antara tiga jenis
HbA1(HbA1a,b dan c). Hemoglobin A1c merupakan ikatan antara hemoglobin dengan
glukosa sedangkan fraksi-fraksi lain merupakan ikatan antara hemoglobin dan heksosa lain.
Struktur molekuler HbA1c adalah N-(1-doxy)-fructosyl-hemoglobin atau N-(1-
deoxyfructose-1-yl) hemoglobin beta chain.

Hemoglobin A1c adalah glukosa stabil yang terikat pada gugus N-terminal pada rantai
HbA0, membentuk suatu modifikasi post translasi sehingga glukosa bersatu dengan
kelompok amino bebas pada residu valin N-terminal rantai β hemoglobin. Schiff base yang
dihasilkan bersifat tidak stabil, kemudian melalui suatu penyusunan ulang yang ireversibel
membentuk suatu ketoamin yang stabil. Glikasi dapat terjadi pada residu lisin tertentu dari
hemoglobin rantai α dan β, glikohemoglobin total atau total hemoglobin terglikasi yang dapat
diukur, dik enal dengan HbA1c. Glikasi hemoglobin tidak dikatalisis oleh enzim, tetapi
melalui reaksi kimia akibat paparan glukosa yang beredar dalam darah pada sel eritrosit. Laju
sintesis HbA1c merupakan fungsi konsentrasi glukosa yang terikat pada eritrosit selama
pemaparan. Konsentrasi HbA1c tergantung pada konsentrasi glukosa darah dan usia eritrosit,
beberapa penelitian menunjukkan adanya hubungan antara konsentrasi HbA1c dan rata-rata
kadar glukosa darah ( Sri Rahayu P, 2014 ).

Kadar HbA1c normal adalah 3,5%-5%. Kadar rata-rata glukosa darah 30 hari
sebelumnya merupakan kontributor utama HbA1c. Kontribusi bulanan rata-rata glukosa
darah terhadap HbA1c adalah: 50% dari 30 hari terakhir, 25% dari 30-60 hari sebelumnya
dan 25% dari 60-120 hari sebelumnya. Hubungan langsung antara HbA1c dan rata-rata
glukosa darah terjadi karena eritrosit terus menerus terglikasi selama 120 hari masa hidupnya
dan laju pembentukan glikohemoglobin setara dengan konsentrasi glukosa darah, oleh sebab
itu pengukuran HbA1c penting untuk kontrol jangka panjang status glikemi pada pasien
diabetes.
 B. TUJUAN

Pemeriksaan HbA1c merupakan salah satu cara yang dapat dilakukan untuk
mendiagnosa dan mengontrol kondisi pasien diabetes. Pemeriksaan ini merupakan
pemeriksaan yang penting untuk dilakukan untuk memantau kondisi pasien dan juga melihat
efek terrapin / pengobatan yang diberikan kepada pasien diabetes. Hal ini dilakukan karena
melihat prediksi Kementerian Kesehatan bahwa angka penderita diabetes di Indonesia akan
terus meningkat. Sepanjang tahun 2020, tercatat ada sekitar 16,7 juta kasus diabetes.

Pemeriksaan HbA1c berfungsi untuk mengukur rata-rata jumlah hemoglobin A1c

yang berikatan dengan gula darah (glukosa) selama tiga bulan terakhir. Durasi ini sesuai
dengan siklus hidup sel darah merah, termasuk hemoglobin, yaitu selama tiga bulan.

C. MANFAAT

HbA1c bisa dijadikan parameter untuk mendeteksi dan mengurangi komplikasi

jangka panjang yang diakibat kan oleh diabetes militus. HbA1c ini mencerminkan
rata-rata kadar gula darah selama tiga bulan terakhir, jauh lebih akurat dibandingkan
pemeriksaan gula darah harian yang fluktuatif (tidak tetap)

D. PRINSIP PEMERIKSAAN

Immunochromatogrphy koloid emas digunakan untuk menentukan HbA1c dalam spesimen darah
manusia (whole blood). Dua antibodi monoklonal digunakan untuk mengidentifikasi HbA1c
secara spesifik, sehingga menghasilkan garis merah keunguan yang muncul pada garis uji setelah
sample uji dimasukan kedalam kaset test, sample akan masuk menggunakan aksi kapiler dan
membentuk reaksi dalam garis uji. Intensitas warna garis uji meningkat sebanding dengan
konsentrasi HbA1c.

E. KRITERIA IDENTITAS SAMPEL

Nama : Zulina, Ny

No. MR : 00088763

Diagnosa : DM Tipe II

Jenis Sampel : Darah EDTA

Tanggal Pemeriksaan : 17 Februari 2021

 F. PROSEDUR KERJA

Alat :

 Spuit 1 Cc

 Alkohol swab

 Touniquete

 Micropore

 Tabung EDTA

 Mikropipet volumetric 10-100 µL

 Tissue

 Yellow Tip

 Kaset HbA1C

 GeteinBiotech FIA8000

Bahan :

 Sampel Pasien (whole blood) dengan antikoagulan EDTA. (sampel hemolisis dan
Lipemik tidak dapat diuji).

 1 buffer HbA1C.

Cara kerja :

 Siapkan Alat dan Bahan

 Aktifkan GeteinBiotech FIA8000

 Q.C alat dengan Q.C SD dari Kit HbA1C (pastikan No. Lot sama
antara Q.C SD dan Kit yang digunakan)

 Setting mikropipet dalam ukuran 10 µL

  Setting alat dalam mode “inside” untuk inkubasi di dalam alat, apabila
ingin menginkubasi diluar alat ubah mode nya menjadi “outside”

 Pastikan sample yang di setting di alat adalah “Whole Blood”

 Masukan 10 µL darah EDTA pasien ke dalam buffer yang sudah di

siapkan, Homogenkan.

 Masukan 100 µL darah yang sudah di campur dengan buffer ke dalam

kaset HbA1C, tunggu hingga timbul warna ungu di dalam kaset lalu
masukan ke dalam alat GeteinBiotech FIA8000 (kaset jangan lupa
untuk dinamai)

 Tunggu selama 3 menit, hasil akan tertera di monitor alat.

 Buang kaset setelah selesai pemeriksan.

G. HASIL DAN PEMBAHASAN

 Hasil pemeriksaan alat : HbA1C 5.19 %

 Detection Range : 2.00 % - 14.00 %
 Nilai normal :
Normal : 3.80 % - 5.80 %
Pre-diabetes : 3.81% - 6.49 %
Diabetes : >= 6.50%

 Pembahasan :
Pada pasien Zulina, Ny menunjukan hasil normal pada pemeriksaan HbA1C metode
Colloidal Gold (quantitative immunoassay) dengan hasil 5.19 % dan dengan nilai normal
3.80 % - 5.80 %

H. KESIMPULAN

Setelah dilakukan pemeriksaan HbA1C pada pasien Ny.Zulina (penderita DM tipe II) dengan
metode Colloidal Gold (quantitative immunoassay) di RS. Kartika Husada Jatiasih, di dapatkan
hasil normal dengan hasil HbA1C = 5.19 % (pasien menggunakan suntik insulin untuk terapi
pengobatan nya).
I. REFERENSI

- Cagliero E. Levina E V, Nathan D M . immediate feedback of HbA1C levels improves

glicemic control in type 1 and insulin-treated type 2 diabetic patient. Diabetes care,
1999, 22(11).1758-1789

- Ozdamar O, Guin I, Keskin U,et al. The role of maternal serumbeta-HbA1C and
PAPP-A levels at gestational weeks 10 to 14 in the prediction of pre-eclampsia. 2014.

- EN ISO 18113-1:2011 in vitro diagnostic medical devices-information supplied by the

manufacturer (labelling) – part 1 : terms, definitions and general requirements.

- EN ISO 18113-1:2011 in vitro diagnostic medical devices-information supplied by the

manufacturer (labelling) – part 2: In vitro diagnostic reagents for professional use.

- BAB II.pdf (unimus.ac.id)