Metoda Kimia 2 Add Your Company Slogan

Pemeriksaan HbA1c secara Ion-exchange HPLC

Presentan: M. Endang Frida S

Pembimbing: dr. M. I. Diah P, Sp.PK, MSc

PPDS I Patologi Klinik FK UNS Surakarta Januari 2012

LOGO

Tugas Stase Orientasi

No 1 Stase Imunologi Klinik Mikrobiologi Sampling Hematologi Sekresi Judul Metode Tanggal 28 Mei 2011 Pengampu dr. B. Rina Sidharta, SpPK dr. B. Rina Sidharta, SpPK dr. Tahono, SpPK (K) dr. Tahono, Sp.PK (K) dr. Yuwono, SpPK dr. M. I. Diah P, Sp.PK, MSc dr. M. I. Diah P, Sp.PK, MSc Metode Pemeriksaan IgM, IgG dan IgG aviditas Toxoplasma Metode Kultur Pus Patient Safety pada Plebotomi

2 3 4 5

30 Juni 2011 28 Juli 2011 16 Sept 2011 8 Nov 2011

Metode Penetapan Kadar Hemoglobin

Metode Pemeriksaan Cairan Transudat dan Eksudat Pemeriksaan Asam Urat secara Metode Direct Equilibrium Uricase Metoda Pemeriksaan HbA1c secara Ion-exchange HPLC

Kimia 1

15 Des 2011

Kimia 2

25 Jan 2012

Pendahuluan

Penyakit metabolik Kondisi hiperglikemik

Sultanpur, 2010

Pendahuluan...

Gambaran kadar gula plasma

Billous, 2009

mg/dL = 18 x mmol/L

Pendahuluan...

bulan

Pendahuluan...

N-1-deoxyfructosylhemoglobin HbA yang mengalami glikosilasi pada gugus valin rantai -globin Reaksi glikasi secara nonenzimatik Ikatannya stabil

Pendahuluan...

glukosa

Pendahuluan...

Metoda pengukuran kadar HbA1c:

Ion exchange HPLC Immunoassay Boronat afinitas

Pendahuluan...

- Suatu alat kromatografi - Stationary phase: material padat bermuatan ion - Mobile phase: liquid - Prinsip: ion-exchange Hemoglobin akan dipisah menjadi fraksi-fraksi berdasarkan muatan ionnya

Pendahuluan...

Ion-exchange HPLC

Bunner, 2010

Pra Analitik
Tujuan
Mengukur kadar HbA1c

Menegakkan diagnosis DM Menentukan panduan terapi DM Menilai efek terapi DM Mengetahui faktor risiko komplikasi DM

Pra Analitik...

Bio Rad

D10TM Sampel: Darah EDTA

Elution buffer 1: Bis-Tris/Phospate (pH 6,0)

Elution buffer 2: Bis-Tris/Phospate (pH 6,7) Penyimpanan: 15-30C 3 hari 2-8C 7 hari Wash/diluent solution : deionized water

Pra Analitik...

Persiapan pasien
Tidak ada persiapan khusus

PERKENI (Perkumpulan Endokrinologi Indonesia)

Setiap 3 bulan Minimal 2x setahun

ADA (American Diabetes Association) 2x setahun Tujuan terapi tercapai Kadar gula terkontrol 4x setahun Tujuan terapi tidak tercapai Perubahan terapi

Pra Analitik...

Persiapan alat
Kalibrasi
Material: Calibrator HbA1c Calibrator Diluent Dilakukan: Saat pertama kali instalasi Ganti/tambahan catridges analitik baru Setelah maintenance atau perbaikan

Pra Analitik...

Quality control
Analisis 2 level kontrol HbA1c: Low (HbA1c 4,6-6,0%) High (HbA1c 9,0-11,0%)

Bahan: Bio-Rad Lyphochek Diabetes Control atau Bio-Rad Liquichek Diabetes Control

Analitik
Prinsip pemeriksaan
Ion-exchange HPLC (cation-exchange)

Amount of material

Elution time

Jinseokseo, 2011

Analitik...

Metoda kerja
-

Masukkan 1,5 mL diluent solution ke dalam tabung sampel Tambahkan 5L darah EDTA Homogenisasi Letakkan dalam rak analisis Masukkan ke dalam alat HPLC

Analitik...

1 Injeksi sampel

Photometer Absorbansi 415nm

3 2 Buffer phosphat

Cationexchange 6 Limbah

Hasil

5
Schoenmakers, 2011

Paska Analitik
Hasil
-

Dalam bentuk gelombang kurva Gelombang HbA1c berwarna hitam Nilai dalam persentase (%) dan mmol/mol Range: 3,8 18,5 %

IFCC-HbA1c (mmol/mol) = [NSGP-HbA1c (%) - 2.15] x 10.929

NGSP: National Glycohemoglobin Standardization Programme (US)

Paska Analitik...

Amount of material

Retention time

Paska Analitik...

Interpretasi hasil

Kadar HbA1c Non Diabetik Diabetik Kontrol baik Kontrol sedang Kontrol buruk < 7% 7-10% > 10%
Provan, 2010

4-6%

Paska Analitik...

WHO (2011) cut off 6,5% ADA (2011) > 6,5%

ADA: American Diabetes Association

Paska Analitik...

Faktor yang mempengaruhi hasil

HbA1c

Hemoglobin

Metoda

Kadar Hb

Lifespan eritrosit

Co-elute

Paska Analitik...

Penurunan Palsu
Anemia (hemolitik) lifespan eritrosit menurun Vitamin C dan E Kehamilan trim 2 HbC, HbS

Peningkatan Palsu
lifespan eritrosit memanjang Carbamylated Hb Alkoholisme Bilirubin yang tinggi Aspirin HbF

Paska Analitik...

Faktor yang mempengaruhi hasil

Faktor interference

Kadar yang mempengaruhi

Ikterik Lipemik HbF A1c labil Carbamylated Hb

> 20 mg/dL > 5680 mg/dL > 10% > 4% > 3,5%

Paska Analitik...

Karakteristik metoda

Merupakan metoda referensi IFCC Spesifisitas kurang (pengaruh Hb varian) Nilai presisi tinggi

Simpulan

HbA1c merupakan komponen HbA yang mengalami glikosilasi. HbA1c memberikan gambaran kadar glikemik seseorang selama 2-3 bulan yang lampau, oleh karena itu HbA1c dapat digunakan untuk mengetahui sejauh mana diabetes seseorang terkontrol. HbA1c dapat diperiksa secara imunoasay, ionexchange HPLC dan afinitas boronat. Cationexchange HPLC merupakan metoda yang direkomendasikan oleh IFCC sebagai metoda rujukan untuk menilai kadar HbA1c.

Simpulan...

Prinsip metoda cation-exchange HPLC adalah memisahkan hemoglobin berdasarkan muatan listrik yang terdapat pada permukaan molekul hemoglobin rantai globin yang akan berikatan secara ionik dengan muatan material. Keuntungan metoda ion-exchange HPLC adalah nilai presisi yang tinggi. Kerugian metoda ion-exchange HPLC adalah spesifisitas yang rendah, dimana pemeriksaan dipengaruhi oleh adanya Hb varian.

Daftar pustaka
Anonim. 2010. D-10 Hemoglobin A1c Program Instruction Manual. United States: Bio-Rad Laboratories Inc. Bunn FH, Haney DN, Gabbay KH, Gallop PM. 1975. Further identification of the nature and linkage of the carbohydrate in hemoglobin A1c. Biochemical and Biophysical Research Communications. 67: 103-109. Catrone D, Pipes G, Cauchon G, Wislon J. 2008. Ion exchange Chromatography. Available at: http://www.analyticalventura.com/iex-hplc.shtml. (Diunduh 28 Desember 2011). Cowan D, Anand G, Engen J. 2010. HPLC Separation Modes. Available at: http://www.waters.com/waters/nav.htm?cid=10049076&locale=en_IN. (Diunduh 28 Desember 2011). Cuccia T. 2012. My Bio Rad D-10 Instrumentation. Available at: http://www.biorad.com/prd/en/US/CDG/PDP/b69d270d-0aef-473f-ae33-439a56d9128f/D-10%20Instrumentation. (Diunduh 5 Januari 2012). Hicks J, Muller M, Panteghini M, John G. 2007. Consensus statement on the worldwide standardisation of the HbA1c measurement. Diabetologia. DOI 10.1007/s00125-007-0789-7. zelik F et al. 2010. Comparison of Three Methods for Measurements of HbA1c. Turkish Journal of Biochemistry. 35 (4): 344-349. Plapp FV. 2011. Hemoglobin A1c. Available at: http://www.clinlabnavigator.com/TestInterpretations/hemoglobin-a1c.html. (Diunduh 19 Desember 2011). Provan D. 2010. Oxford Handbook of Clinical and Laboratory Investigation. New York: Oxford University Press. 190-195. Rudianto A, Lindarto D, Shahab A, Decroli E. 2011. Konsensus Pengendalian dan Pencegahan Diabetes Mellitus Tipe 2 di Indonesia 2011. Jakarta: PERKENI. Schoenmakers P, Janssen HG, Polite LN, Claessens H. 2011. How to Select The Technique. Available at: http://www.chromedia.org/chromedia?waxtrapp=xqegzCsHqnOxmOlIEcCbC&subNav=yarwnEsHqnOxmOlI EcCxBWT. (Diunduh 7 Januari 2012). Shroff S, Tharu R, Ravi T. 2011. Blood Sugar Chart. Available at: http://www.medindia.net/patients/calculators/bloodsugar_chart.asp. (Diunduh 4 Januari 2012). Sultanpur CM. 2010. Comprehensive Review on HbA1c in Diagnosis of Diabetes Mellitus. International Journal of Pharmaceuical Sciences Review and Research. 2: 119-122. World Health Organization. 2011. Use of Glycated Haemoglobin (HbA1c) in the Diagnosis of Diabetes Mellitus. Geneva: WHO Press.