“PRINSIP PEMERIKSAAN HEMATOLOGI

MANUAL DAN OTOMATIS”

Andriyansyah, Amd.AK
Application Support
PT Saba Indomedika

Jum’at, 10 November 2017

Slide 1
 PENDAHULUAN
PEMERIKSAAN LABORATORIUM

• PENUNJANG DIAGNOSIS DOKTER

• MONITORING
• PROGNOSIS

DIPERLUKAN HASIL :
TEPAT, AKURAT, TELITI, CEPAT DAN DAPAT
DIPERCAYA
Slide 2
Tahapan Pemeriksaan
Laboratorium

Input •Pra Analitik

Proses •Analitik

Output •Pasca Analitik

Slide 3
Tahapan Pemeriksaan
Laboratorium

Input •Pra Analitik

• persiapan pasien,
• data pasien,
• pengambilan sampel,
• penampungan sampel,
• penyimpanan sampel,
• pengiriman sampel.

Slide 4
Persiapan Pasien
Faktor yang dapat mempengaruhi hasil :
1. Makan / puasa Plasma turbid
2. Perokok RBC naik, Hb naik
3. Olahraga berat Vol. plasma turun
4. Kehamilan Vol. plasma lebih tinggi
5. Transfusi darah Susunan darah berubah
6. Obat
7. Data pasien

Slide 5
Penampungan Bahan
Tabung Vakum :
• Tabung EDTA (Ethylene Diamine Tetra Acetate)
• Tabung Sodium Citrate
• Tabung Heparin
• Tabung Serum

Slide 6
 Penampungan Bahan
 Tabung EDTA:
• Na2EDTA : pH asam
• K2EDTA : pH asam
• K3EDTA : pH netral
 Sebaiknya memakai : Tabung Vakum + K3EDTA spray-dried

K3EDTA : stabilitas darah lebih baik dari garam EDTA lain

(pH-nya mendekati pH darah)

 Wajib disposable

 Tanggal kadaluarsa
Slide 7
Penampungan Bahan

Rasio darah :
EDTA harus tepat (1 – 1.5 mg/mL)
Kadar EDTA >> RBC mengerut, Ht lebih rendah
Kadar EDTA << jumlah PLT menurun

Slide 8
Pengambilan Sampel

Jarum, kapas desinfektan, penampung, plester u/ menutup luka

 Disposable !!

Pembendungan
1. 7 – 10 cm dari siku
2. Maks. 1 menit / tekanan ≤ 60 mmHg
Terlalu lama  hemokonsentrasi, kerusakan dindingvena/jaringan
• 3. Terlalu ketat : darah tidak keluar
• 4. Dibuka setelah darah mengalir
• 5. Hindari daerah luka
Homogenisasi segera sesudah pengambilan, bahkan sebelum
menutup luka pasien (bila pakai tabung vakum)
Slide 9
Homogenisasi Sampel

Homogenisasi tabung EDTA:

8-10x inversion

Slide 10
Penyimpanan Bahan
Darah K3EDTA - Suhu Kamar

RBC :
Perubahan Morfologi : mulai jam ke-2

WBC :
Perubahan Morfologi : mulai jam ke-1
Slide 11
 Metode Manual
Hemacytometer

1. 2.
W - WBC
R - RBC
P - Platelets
3.
W W 4. 5.
R R

W W R
R

R
P
Slide 12
Slide 13
Slide 14
 ALAT HITUNG SEL DARAH OTOMATIS
Wallace Coulter 1952

•Hitung Partikel dalam suspensi

Hak Paten :
•Diterapkan pada sel Darah

Slide 15
First Hematology Cell Counter
• Coulter Counter in 1956

Impedance Method

Slide 16
Principle of Hematology
analyzer

Reaction
chamber
Processing
System

SRV Sensing
Zone Sample
RESULTS
Transport

Slide 17
 Diff Count WBC
• Dibagi menjadi 2 kelompok
• 3 part Diff
• 5 part diff

Slide 18
SKEMA HEMATOLOGY ANALYZER (PRINSIP
IMPEDANCE 3 part diff)
Detector Method
channels Dilution Ratio WBC count
WBC DC W-SCC
detector 1:250 W-MCC
W-LCC

S HGB
Spectrophotometric Hgb
R
detector 1:500 concentration
V

RBC count
RBC/PLT DC
PLT count
detector 1:25,000
HCT

Slide 19
KESALAHAN PRINSIP IMPEDANCE
Tinggi Palsu / False Increases Rendah Palsu / False Decreases

Slide 20
Hydrodynamic Focusing DC

Slide 21
 Flow Cytometry
Semiconductor Laser
• Wavelength l = 633 nm

• Polymethine Dye
– Basis for fluorescence optical detection
– Polymethine dye stains DNA/RNA
– Fluorescence intensity is proportional to DNA/ RNA content in cell

Slide 22
Fluorescence Flow Cytometry

(Fluorescence Light)

(Side Scattered Light)

(Forward Scattered Light)

Slide 23
Fluorescence FCM

Slide 24
Fluorescent Polymethine Dye Reaction

Slide 25
Adaptive Cluster Analysis

Slide 26
Differential scatter plot – Flagging Regions XE

Slide 27
Scattergram : WDF (XN)

Slide 28
Reagent reaction: WDF reagents improvement

XE XN

Slide 29
Pemeriksaan Hematologi (CBC)
• Hematologi lengkap (CBC)
– Hb,Ht,E, L,Tr,diff
– Hb,Ht,E.L,Tr,Rt,diff
– Hb.Ht,E,L,Tr,Rt, MCV,MCH,MCHC,RDW,diff
• Pemeriksaaan CBC :
– Data Hematology analyzer
– Evaluasi sediaan hapus darah tepi
• Informasi lain nya tidak dilaporkan

Slide 30
Flagging
• NEGATIVE No abnormality
• POSITIVE One or more of the 39 IP messages is
generated
• ERROR Classified as Func, functional abnormality
Classified as Result, Low reliability
Classified as Delta, Delta Check abnormality

report

Result review report

review report
Slide 31
Display

Slide 32
WBC Flagging

Slide 33
RBC Flagging

Slide 34
PLT Flagging

Slide 35
Data Displays & Interpretation

Slide 36
Display & Linearity Range

Slide 37
ISLH Guideline for Flag Review

Slide 38
A Normal Blood Sample under Microscope

Cell diameter (µm)

Leucocytes (WBC)
Thrombocyte Lymphocyte 7 - 12
Eosinophil Basophil 9 - 14
Band
Neutrophil 10 -15

Eosophil 11 -16

Monocyte 12 - 20

Erythrocyte (RBC) 6 - 8.5

Thrombocyte (Platelets) 3-5

Lymphocyte Neutrophil

Monocyte Basophil
Erythrocyte

Slide 39
Normal Scattergram

Leukocyte counting (WBC#)

Slide 40
Normal Histogram

Slide 41
Abnormal Scattergram

Slide 42
Slide 43
Slide 44
Slide 45
 NO. 4
DATUM: 9/10/95
15:11
MODE: whole blood
WBC 5,8x 103/µl
RBC 4,84x106/µl
HGB 13,7 g/dl
HCT 42,0 %
MCV 86,8 fl
MCH 28,3 pg
MCHC 32,6 g/dl
PLT 257x103/µl

WBC

300

WBC LYMPH%
MXD%
31,2
6,8
%
%
NEUT% 62,0 %
LYMPH# 1,8 x103/µl
MXD# 0,4 x103/µl
NEUT# 3,6 x103/µl

RBC RBC

250
RDW-SD 40,0 fl

PLT 40
PLT

PDW 13,1 fl
MPV 10,4 fl
P-LCR 28,1 %
Slide 46
Flag Pada Histogram Eritrosit
Mark “ RL “

LD

Kurva tidak dimulai pada

baseline

Penyebab:
• Giant Platelets Giant Platelets
• Micro-Erythrocytes
• Platelet Clumps Platelet Clumps

Perhatian:
Semua hasil yang ditandai “ RL “ harus dikonfirmasi

Slide 47
Slide 48
Flag Pada Histogram Eritrosit
Mark “ RU “
UD

Kurva tidak berakhir pada

baseline

Penyebab:
• Cold Agglutinins Cold Agglutinins
• Erythroblasts / Normoblasts

Perhatian:
Semua hasil yang ditandai “ RU “ harus dikonfirmasi

Slide 49
Flag Pada Histogram Eritrosit

“ MP “, multiple peaks

Puncak lebih dari satu

Penyebab:
• Transfusi

Slide 50
Flag Pada Histogram Eritrosit
“DW “, distribution width=abnormal histogram distribution

Distribusi kurva tidak memotong garis 20%

Penyebab : Anisocytosis
Penanganan : harus direview secara manual

Slide 51
Flag Histogram Trombosit

Mark “ PL “

Kurva tidak dimulai pada baseline

Kemungkinan penyebab:
• High blank value
• Cell fragments

Perhatian :
Check Background! Lakukan Auto Rinse

Slide 52
Flag Histogram Trombosit

Mark “ PU “

Kurva tidak berakhir pada baseline

Kemungkinan penyebab:
• Clotted blood sample
• EDTA-induced PLT clumping
• Micro-Erythrocytes
• Giant Platelets

Perhatian :
Check PLT dan semua parameter yang ditandai “ PU “

Slide 53
Flag Histogram Trombosit

Slide 54
Flag Histogram Trombosit
Mark “ MP “, Multiple Peaks

Kemungkinan penyebab:
• Platelet transfusion

Slide 55
HISTOGRAM WBC

• RBC dilisis oleh Stroma-WH

• Sel berukuran < 35 fL dikeluarkan dari hitung WBC
• 3 populasi WBC dipisah dengan floating discriminator yang
mencari lembah pada range 30 – 300 fL

Slide 56
FLAG HISTOGRAM WBC
Mark “ WL “

Possible causes :
• Thrombocytes - EDTA-not compatible (PLT clumps)
• Lyse - resistant erythrocytes
• Normoblasts / Erythroblasts
• cold agglutins

Perhatian :
Check WBC dan semua parameter yang ditandai “WL”
Slide 57
FLAG HISTOGRAM WBC
Mark “ WU “

Perhatian :
Check WBC dan semua parameter yang ditandai “WU”

Slide 58
FLAG HISTOGRAM WBC
Flag “ T1 “ dan “T2”

T1 tidak terdeteksi.
Catatan:
Tidak ditemukan • Konfirmasi
plateau. dengan
--> T 1 flag mikroskop jika
ditemukan flag
T1 atau T2.

• Jumlah leukosit
benar, jika
T1 terdeteksi, tetapi tidak ada flag
T2 tidak --> T2 lain.
flag

Slide 59
FLAG HISTOGRAM WBC
Flag “ F1 “, “F2” dan “F3”

• Semua leukosit
terhitung; Total
leukosit benar.
(Asumsi: tidak ada flag
lain)

• T 1 and T 2 terdeteksi

Ada kemungkinan populasi yang tercampur.

Slide 60
Display Hasil Analisis

Tanda Penyebab
“+++.+” Hasil melebihi display range
“***.*” Terjadi analisis error karena sample tidak bisa dikalkulasi
“---.-” Terjadi data error karena sample tidak bisa dikalkulasi

Tanda Penyebab
! Hasil melebihi linearity range
+ Hasil melebihi batas atas patient limit
- Hasil melebihi batas bawah patient limit
* Hasil perlu dikonfirmasi

Slide 61
Display Range & Linearity Range

Linearity
No Parameter Display Range
Range
1 WBC 1.0 – 99.9 x 103 0.0 – 299.9 x 103

2 RBC 1.0 – 7.0 x 106 0.00 – 19.99 x 106

3 HGB 0.1 – 25 g/dL 0 – 25.0 g/dL

4 HCT 10.0 – 60.0 % n/a

5 PLT 10 – 999 x 103 0 – 1999 x 103

Slide 62
Tindakan yang dilakukan bila muncul Flagging :
Konfirmasi Manual.

Slide 63
Slide 64