PEMERIKSAAN HbA1c

METODE TURBIDIMETRIC INHIBITION IMMUNOASSAY (TINIA)

I. PENDAHULUAN

HbA1c adalah istilah secara internasional untuk glycosylatedhemoglobin

/glycated hemoglobinum yang direkomendasikan oleh ADA. HbA1c (Hemoglobin Adulf
1c) merupakan derivat adulf hemoglobin (HbA), dengan penambahan monosakarida
(fruktosa atau glukosa).yang merupakan subtipe utama dan fraksi terpenting yaitu sekitar
4-5% dari total hemoglobin yang banyak diteliti di antara tiga jenis HbA1(HbA1a,b dan
c). Hemoglobin A1c merupakan ikatan antara hemoglobin dengan glukosa sedangkan
fraksi-fraksi lain merupakan ikatan antara hemoglobin dan heksosa lain. (Rodriguez. G.
2019).

Glycated hemoglobin (HbA1c) awalnya diidentifikasi sebagai 'unusual’

hemoglobin pada pasien dengan diabetes lebih dari 40 tahun yang lalu. Setelah
penemuan itu, sejumlah kecil penelitian dilakukan mengkorelasikannya menjadi
pengukuran glukosa sebagai hasil dalam gagasan bahwa HbA1c dapat digunakan
sebagai pengukuran objektif dari kontrol glikemik. Studi A1C-Derived Average
glucose (ADAG) termasuk 643 peserta yang mewakili rentang kadar A1C, HbA1c
diperkenalkan ke dalam penggunaan klinis pada 1980-an dan kemudian menjadi
landasan dari praktek klinis. (Sherwani. 2016).

HbA1C terbentuk pasca-translasi yang berlangsung lambat dan tidak dipengaruhi

oleh enzim sepanjang masa hidup eritrosit. Karena itu pada eritrosit yang lebih tua
kadarnya lebih tinggi daripada eritrosit yang lebih muda. Hemoglobin bercampur
dengan larutan berkadar glukosa tinggi, rantai beta molekul hemoglobin mengikat satu
gugus glukosa secara ireversibel, maka proses ini dinamakan glikosilasi. Glikosilasi
terjadi secara spontan dalam sirkulasi dan tingkat glikosilasi ini meningkat apabila
kadar glukosa dalam darah tinggi. Pada orang normal, sekitar 4―6% hemoglobin
mengalami glikosilasi menjadi hemoglobin glikosilat atau HbA1C. Pada hiperglikemia
yang berkepanjangan, kadar HbA1C dapat meningkat hingga 18―20%. Glikosilasi
tidak mengganggu kemampuan hemoglobin mengangkut oksigen, tetapi kadar HbA1C
yang tinggi mencerminkan kurangnya pengendalian diabetes. Setelah kadar
normoglikemik menjadi stabil, kadar HbA1C kembali ke normal dalam waktu sekitar
 3 minggu. HbA1C terbentuk dari ikatan glukosa dengan gugus amida pada asam amino
valin di ujung rantai beta dari globulin Hb dewasa normal yang terjadi pada 2 tahap.
Tahap pertama terjadi ikatan kovalen aldimin berupa basa Schiff yang bersifat stabil
dan tahap kedua terjadi penyusunan kembali secara Amadori menjadi bentuk ketamin
yang stabil. (Cox, Mary E. and David Edelman. 2009)

Hemoglobin A1c atau HbA1c adalah komponen minor dari hemoglobin yang
berikatan dengan glukosa. HbA1c disebut sebagai glikosilasi atau hemoglobin glikosilasi
atau glycohemoglobin. Hemoglobin adalah pigmen pembawa oksigen yang memberikan
warna merah pada sel darah merah dan juga merupakan protein dominan dalam sel darah
merah (Sherwani. 2016).

Komponen utama hemoglobin adalah hemoglobin A (Adulf/dewasa), yaitu sekitar

90% dari total komponen hemoglobin. Komponen minor hemoglobin adalah hemoglobin
A2 / HbA2 dan HbF, yang merupakan hasil rantai gen hemoglobin yang berbeda δ dan
Υ. Komponen minor lainnya adalah modikasi post-translasional hemoglobin A yaitu
A1a, A1b dan A1c . Hemoglobin A1c merupakan komponen minor paling besar dari sel
darah manusia, normalnya 4% dari total hemoglobin A. (Rodriguez. G. 2019).
Struktur molekuler HbA1c adalah N-(1-doxy)-fructosyl-hemoglobin atau N-(1-
deoxyfructose-1-yl) hemoglobin beta chain. Hemoglobin A1c adalah glukosa stabil yang
terikat pada gugus N-terminal pada rantai HbA0, membentuk suatu modifikasi post
translasi sehingga glukosa bersatu dengan kelompok amino bebas pada residu valin N-
terminal rantai β hemoglobin. Schiff base yang dihasilkan bersifat tidak stabil, kemudian
melalui suatu penyusunan ulang yang ireversibel membentuk suatu ketoamin yang stabil.
Glikasi dapat terjadi pada residu lisin tertentu dari hemoglobin rantai α dan β,
glikohemoglobin total atau total hemoglobin terglikasi yang dapat diukur, dikenal dengan
HbA1c. Glikasi hemoglobin tidak dikatalisis oleh enzim, tetapi melalui reaksi kimia
akibat paparan glukosa yang beredar dalam darah pada sel eritrosit. Laju sintesis HbA1c
merupakan fungsi konsentrasi glukosa yang terikat pada eritrosit selama pemaparan.
Konsentrasi HbA1c tergantung pada konsentrasi glukosa darah dan usia eritrosit,
beberapa penelitian menunjukkan adanya hubungan antara konsentrasi HbA1c dan rata-
rata kadar glukosa darah (Herlina. 2015).
Kadar HbA1c normal adalah 3,5%-5%. Kadar rata-rata glukosa darah 30 hari
sebelumnya merupakan kontributor utama HbA1c. Kontribusi bulanan rata-rata glukosa
darah terhadap HbA1c adalah: 50% dari 30 hari terakhir, 25% dari 30-60 hari sebelumnya
dan 25% dari 60-120 hari sebelumnya. Hubungan langsung antara HbA1c dan rata-rata
glukosa darah terjadi karena eritrosit terus menerus terglikasi selama 120 hari masa
hidupnya dan laju pembentukan glikohemoglobin setara dengan konsentrasi glukosa
darah, oleh sebab itu pengukuran HbA1c penting untuk kontrol jangka panjang status
glikemi pada pasien diabetes. (Herlina. 2015).
Metode immunoassay yang tersedia di pasaran umumnya adalah EIA (enzyme
immunoassay) dan latex inhibition immunoassay. Metode enzyme immunoassay
menggunakan poliklonal atau monoklonal antibodi yang spesifik terhadap N-terminal
valin pada rantai beta HbA1c. Antibodi HbA1c ini terikat pada enzim, kemudian
ditambahkan substrat sehingga reaksi enzim ini dapat diukur. Alat ukur yang ada pada
umumnya berdasarkan micro titer plates (Refa. 2005).
Metoda immunoassay ini dapat digunakan pada instrument otomatik, tidak
memerlukan tenaga ahli serta hemat waktu namun kekurangannya pengukuran
glikohemoglobin dan hemoglobin total mesti terpisah dan reprodusibilitas tidak sebaik
metoda HPLC dengan CV sekitar 3-5%. Selain itu kurva kalibrasi tidak stabil untuk 24
jam sehingga perlu dikalibrasi lagi (Refa. 2005).
Beberapa faktor yang mendukung penggunaan HbA1c sebagai alat untuk skrining
dan diagnosis diabetes adalah :
1. Pemeriksaan HbA1c tidak perlu puasa dan dapat diperiksa kapan saja.
2. HbA1c mencerminkan glikemia jangka panjang dibandingkan glukosa plasma
3. Variabilitas biologisnya dan instabilitas preanalitiknya lebih rendah dibanding
glukosa plasma puasa
4. Kesalahan yang disebabkan oleh faktor non glikemik dapat diminimalisasi dengan
melakukan pemeriksaan konfirmasi diagnosis dengan glukosa plasma.
5. Relatif tidak dipengaruhi oleh gangguan akut (stress atau penyakit lain)
6. Lebih stabil pada suhu kamar dibandingkan glukosa plasma
7. Lebih direkomendasikan untuk monitoring pengendalian glukosa
8. Kadar HbA1c sangat berkorelasi dengan komplikasi DM

Selain itu seperti semua tes laboratorium lainnya HbA1c memiliki beberapa
keterbatasan, walaupun jarang haemoglobinopati dapat menyebabkan nilai HbA1c tinggi
palsu atau rendah, tetapi tes paling modern telah mengatasi kesulitan ini, meskipun staf
laboratorium dan staf klinis perlu untuk waspada. Thalasemia dan hemoglobinopati
seperti Hb C, Hb S, Hb E, dan lain-lain yang menyebabkan usia eritrosit memendek
menyebabkan penurunan kadar HbA1c. Pada cara kromatografi penukar kation Hb C dan
Hb S terhitung pada Hb total dan menurunkan hasil perhitungan HbA1c. Sebaliknya Hb
F, Hb H dan Hb Bart mungkin menyebabkan HbA1c tinggi palsu, tergantung pada cara
analisis. Kekurangan zat besi dapat menyebabkan nilai HbA1c meningkat palsu dan
harus dikenali ketika mendiagnosis pasien dengan diabetes menggunakan HbA1c saja.
Di sisi lain, pasien dengan “turn over" sel yang tinggi (terutama anemia hemolitik ,
malaria kronis, major blood loss, transfuse, anemia kronis akibat gagal ginjal dan
penyakit hati) akan memiliki nilai HbA1c rendah palsu. Usia dan etnis diduga juga dapat
mempengaruhi peningkatan HbA1c namun hal ini belum terlalu jelas (Refa. 2005).