Ilmu Pengetahuan Malaysia 43(9)(2014): 1345–1354

Karakterisasi dan Stabilitas Pigmen yang Diekstrak dari Sargassum Binderi

Diperoleh dari Semporna, Sabah
(Pencirian dan Kestabilan Pigmen yang Diekstrak daripada Sargassum binderi dari Semporna, Sabah)

WU HON YIP, LIM SENG JOE, WAN AIDA WAN MUSTAPHA*, MOHAMAD YUSOF MASKAT &M AMOT SAID

ABSTRAK

Penelitian ini dilakukan untuk mengidentifikasi pigmen yang diekstrak dari rumput laut coklat Malaysia, Sargassum
binderi dan stabilitasnya dalam berbagai kondisi. Pigmen diekstraksi menggunakan metanol: kloroform: air (4: 2: 1,
v / v / v), yang merupakan bagian dari proses ekstraksi fucoidan, di mana pigmen adalah limbah. Karotenoid dan
klorofil ditemukan dalam ekstrak menggunakan UV-vis spektrofotometer (masing-masing 420 dan 672 nm).
Fucoxanthin diidentifikasi sebagai karotenoid hadir menggunakan HPLC,sementara kelompok fungsional dan struktur
ditentukan menggunakan FTIR dan 1H NMR,masing-masing. Stabilitas ekstrak fucoxanthinrich diuji pada pH yang
berbeda (pH1-13), paparan cahaya (gelap dan terang) dan suhu penyimpanan (4ºC, 25ºC dan 50ºC). Tes stabilitas
menunjukkan bahwa itu paling stabil pada pH5-7, disimpan dalam kondisi gelap dan pada suhu penyimpanan 4ºC
dan 25ºC. Ekstrak kaya fucoxanthin dari Sargassum binderi memiliki potensi untuk diterapkan sebagai makanan
bioingredient dan fungsional karena stabil dalam kondisi penyimpanan normal.

Kata kunci: Karotenoid; klorofil; fucoxanthin; pigmen; Sargassum binderi

ABSTRAK

Kajian ini dijalankan untuk mengenal pasti pigmen yang diekstrak daripada rumpai laut perang Malaysia, Sargassum
binderi dan juga kestabilannya dalam pelbagai keadaan. Pigmen diekstrak menggunakan metanol:kloroform:air
(4:2:1, v/v/v), yang merupakan sebahagian daripada proses pengekstrakan fukoidan, dengan pigmen merupakan
bahan buangan/ sisa. Kehadiran karotenoid dan klorofil telah ditentukan dengan menggunakan spektrofotometer
UV-vis (masing-masing 420 nm dan 672 nm). Fukoxantin telah dikenal pasti sebagai karotenoid yang hadir dengan
menggunakan kromatografi cecair prestasi tinggi (KCPT), manakala kumpulan berfungsi dan struktur fukoxantin
masing-masing dikenal pasti dengan menggunakan spektroskopi transformasi Fourier inframerah ( FTIR) dan
spektroskopi resonans magnet nukleus proton (1H NMR). Kestabilan pigmen telah diuji pada beberapa parameter
yang berbeza, iaitu pH (pH1-13), pendedahan cahaya (cerah dan gelap) dan suhu simpanan (4ºC, 25ºC dan 50ºC).
Ujian kestabilan menunjukkan bahawa pigmen adalah paling stabil pada pH5-7, disimpan dalam keadaan gelap dan
pada suhu simpanan 4ºC dan 25ºC. Pigmen yang diekstrak daripada Sargassum binderi ini mempunyai potensi untuk
diaplikasikan sebagai bioingredien dan makanan kerana ianya adalah stabil pada keadaan simpanan normal.

Kata kunci: Fukoxantin; karotenoid; klorofil; pigmen; Sargassum binderi

INTRODUKSI Malaysia. Menurut Phang (1998), ada 21 spesies

Rumput laut adalah sumber senyawa bioaktif yang
sangat baik seperti polifenol, karotenoid dan
polisakarida (Diplock et al. 1998; Lahaye, 1991; Shibata
et al. 2002; Wijesinghe dan Jeon 2011). Senyawa
bioaktif ini dapat diterapkan dalam makanan
fungsional, obat-obatan dan produk kosmetik karena
membawa manfaat kesehatan bagi konsumen
(Pangestuti &Kim 2011; Sangha et al. 2013; Wijesinghe
dan Jeon 2011).
Sargassum binderi adalah jenis rumput laut coklat
(Phaeophyceae) yang umumnya ditemukan di
Sargassum yang tercatat di Malaysia. Salah satu
senyawa bioaktif yang ditemukan dalam Sargassum
binderi adalah fucoidan, polisakarida yang
mengandung L-fucose dan sulfat, bersama dengan
sejumlah kecil gula lainnya (Percival &McDowell 1967;
Ponce et al. 2003). Fucoidan telah dilaporkan sebagai
agen antikoagulan (Chandia & Matsuhiro, 2008), agen
antivirus (Li et al. 1995; Mandal et al. 2007) dan
menunjukkan aktivitas antioksidan (Vo &Kim 2013;
Zhao et al. 2005). Sebelum ekstraksi fucoidan,
Sargassum binderi diobati dengan campuran pelarut
1346
metanol: kloroform: air (4: 2: 1, v / v / v) pada suhu
kamar untuk menghilangkan materi berwarna, lemak
dan senyawa berat molekul rendah (Lim et al. 2014).
Senyawa ini dianggap sebagai produk limbah dari
ekstraksi fucoidan. Namun, karena produk limbah yang
dikeluarkan dari binderi Sargassum mengandung
materi berwarna, oleh karena itu dihipotesiskan bahwa
materi berwarna adalah pigmen sargassum binderi.
Pigmen utama rumput laut coklat adalah fucoxanthin,
yang merupakan salah satu karotenoid paling
melimpah di alam (10% perkiraan total produksi
karotenoid) (Pangestuti &Kim 2011). Ini adalah pigmen
berwarna oranye, ditemukan dalam rumput laut coklat
bersama dengan klorofil, untuk memberikan warna
coklat atau zaitun-hijau (Chandini et al. 2008;
Hosokawa et al. 2009). Fucoxanthin memiliki struktur
yang unik, di mana ia mengandung ikatan allenic yang
tidak biasa dan 5,6-monoepoksida dalam molekulnya.
Namun, strain rumput laut coklat yang berbeda
menghasilkan komposisi dan profil fucoxanthin yang
berbeda (Pangestuti &Kim 2011). Dengan demikian,
diduga pigmen dari Sargassum binderi kaya akan
fucoxanthin. Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa
fucoxanthin memiliki sifat anticarcinogenic,
antioxidation dan antiobesity (Hosokawa et al. 1999;
Maeda et al. 2005; Yan et al. 1999). Fucoxanthin juga
merupakan pemulung radikal, dimana penelitian
sebelumnya melaporkan aktivitas pemulungan
radikal DPPH yang kuat yang ditunjukkan oleh
fucoxanthin dari berbagai sumber (Mise et al. 2011;
Yan et al. 1999). Juga dilaporkan dalam makalah ulasan
oleh Pangestuti dan Kim (2011) bahwa tidak ada efek
buruk dari fucoxanthin dalam studi tikus. Oleh karena
itu, fucoxanthin adalah pigmen dari rumput laut coklat
yang memiliki sifat meningkatkan kesehatan yang
menjanjikan dan cocok untuk diterapkan sebagai
makanan bioingredient dan fungsional. Untuk
menggunakan pigmen dalam ekstrak Sargassum
binderi (limbah) yang dihasilkan selama ekstraksi
fucoidan, jenis pigmen yang ada dalam ekstrak rumput
laut harus ditentukan terlebih dahulu dan karakteristik
dan stabilitasnya harus dipelajari. Oleh karena itu,
penelitian ini bertujuan untuk menentukan jenis
pigmen yang ada dalam ekstrak Sargassum binderi
dari Semporna, Sabah dan stabilitas pigmen.
MATERIALS DAN METHODS
BAHAN
Sargassum binderi (berasal dari Semporna, Sabah,
Malaysia – November 2010) dibeli dari SIRIM Bhd (Shah
Alam, Malaysia) dalam bentuk bubuk. Standar
Fucoxanthin dengan kemurnian ≥ 95% diperoleh dari
SigmaAldrich (St. Louis, AS). Semua bahan kimia lain
yang digunakan dalam penelitian ini adalah kelas
analitis dan dibeli dari Merck (Darmstadt, Jerman)
kecuali dinyatakan lain.
PERSIAPAN SAMPEL
Pigmen diekstrak dari bubuk sargassum binderi kering
(50 g) menggunakan metanol 500 mL: kloroform: air
(4: 2: 1, v / v / v) pada suhu kamar, selama 24 jam
dengan pengadukan mekanis (Lim et al. 2014). Ekstrak
dikumpulkan dalam botol Schott dan residu diekstraksi
dengan metanol 500 mL: kloroform: air (4: 2: 1, v / v /
v) lagi selama 3 kali. Ekstrak kemudian dikombinasikan
dan disaring sebelum sentrifugal pada 2500 rpm
selama 10 menit (Kubota Table Top Centrifuge 2420)
pada suhu kamar untuk menghilangkan residu padat
(Dere et al. 1998). Ekstrak rumput laut kemudian
diuapkan menjadi kekeringan pada 30 sampai 35 ° C
dalam evaporator putar sampai produk akhir dalam
bentuk kering (Heidolph, Laborota 4000 Efisien,
Schwabach, Jerman).
KARAKTERISASI FUCOXANTHIN
Ekstrak Sargassum binderi yang diperoleh dilarutkan
dalam metanol: air (1: 9, v / v) dan profil pigmen
ditentukan menggunakan spektrofotometer UV-Visible
sinar ganda (Shimadzu UV -2450, Kyoto, Jepang) pada
kisaran panjang gelombang 350750 nm pada suhu
kamar. Rentang panjang gelombang 350-750 nm dipilih
karena sebagian besar karotenoid menyerap lampu di
wilayah antara 400 dan 500 nm dan klorofil menyerap
cahaya pada suhu kamar 500 hingga 700 nm (Dere et
al. 1998). Hasil fucoxanthin dalam ekstrak mentah
ditentukan menggunakan kurva standar fucoxanthin
(dilarutkan dalam metanol: air (1: 9, v / v)) dengan
konsentrasi 1, 2, 4, 6, 8 dan 10 μg / ml, pada panjang
gelombang λ = 420 nm.
Pemurnian metode fucoxanthin diadopsi dari Noviendri
et al. (2011) dengan beberapa modifikasi pada pelarut
ekstraksi. Ekstrak kaya fucoxanthin yang diperoleh
dilarutkan dalam jumlah metanol yang cukup. Ekstrak
kaya fucoxanthin yang disusun kembali dipartisi dalam
corong pemisahan antara n-heksana dan 90% (v / v)
metanol berair selama tiga kali. Fase heksana dibuang.
Fase berair kemudian dipartisi dengan dietil eter dalam
corong pemisahan untuk mengekstrak fucoxanthin ke
dalam dietil eter. Fase dietil eter diuapkan menjadi
kekeringan menggunakan evaporator putar. Residu
dilarutkan kembali dalam jumlah minimum benzena
(Noviendri et al. Benzena yang mengandung residu

dimuat ke dalam kolom terbuka (300 mm, yaitu 24
mm) yang mengandung silika (Silika 60G, 0,040 - 0,063
mm, Merck). Elution awalnya dilakukan dengan n-
heksana (100%) untuk menghilangkan klorofil dan
karotenoid selain fucoxanthin. Elution dilanjutkan
dengan n-heksana: aseton (3: 2, v / v) untuk
memulihkan fucoxanthin. Akhirnya, residual
fucoxanthin disebut-sebut dengan aseton absolut.
Heksana: aseton (3: 2, v / v) dan fraksi aseton
dikumpulkan dan diuapkan menjadi kekeringan
menggunakan evaporator putar (Noviendri et al.
2011).
High Performance Liquid Chromatography(HPLC)Analisis
Fucoxanthin dimurnikan dilarutkan dalam jumlah
metanol yang cukup. Kehadiran fucoxanthin dalam
Binderi Sargassum diidentifikasi dengan
membandingkan waktu retensi fucoxanthin standar
dan fucoxanthin dimurnikan dari Sargassum binderi
menggunakan HPLC. Parameter HPLC diperoleh dari
Noviendri et al. (2011) dengan beberapa modifikasi
pada merek kolom dan detektor yang digunakan.
Sistem HPLC Shimadzu (Shimadzu LC-20AT)denganauto-
injector (Shimadzu Prominence)
HPLC Autosamplers SIL 20A HT)dilengkapi dengan
kolomC18 (Hypersil Gold, ukuran partikel 5,0 μm, 250
mm × 4,6 mm i.d.). Fucoxanthin disebut-sebut
menggunakan fase metanol: acetonitrile (7: 3, v / v),
dengan laju aliran 1,0 mL / menit, pada 28 ° C. Eluen
terdeteksi menggunakan detektor UV-Vis (Shimadzu
Prominence HPLC UV-Vis Detectors) pada 450 nm
(Noviendri et al. 2011).
Kelompok fungsional yang ada dalam fucoxanthin
yang dimurnikan ditentukan oleh Fourier transform
infrared spectroscopy (FTIR)dengan Perkin Elmer
Spectrum 400 FT-IR / FT-NIR & Spotlight 400 Imaging
System pada suhu kamar dibandingkan dengan standar
fucoxanthin. Sampel digiling dengan bubuk kalium
bromida (KBr) kelas spektroskopi dan kemudian
ditekan menjadi pelet 1 mm. Sebanyak 4 scan
digunakan pada sampel dalam bentuk pelet KBr,
dengan rentang pemindaian 4000 - 650 cm -1 dan
resolusi 4 cm-1 (Rodriguez-Jasso et al. 2011; Souza et al.
2012).
1347
Proton Nuclear Magnetic Resonance (1H
NMR)Strukturanalisis fucoxanthin ditentukan
menggunakan spektroskopi resonansi magnetik nuklir
proton (1H NMR). Fucoxanthin dimurnikan dilarutkan
dalam metanol deuterasi (MeOD) dan dianalisis
menggunakan Fourier mengubah resonansi magnetik
nuklir 600 MHz dilengkapi dengan Cryoprobe
(Bruker /AVANCE III 600 MHz) di bawah suhu kamar.
STUDI STABILITAS EKSTRAK MENTAH FUCOXANTHIN
Efek ekstrak pH Fucoxanthin-kaya dalam metanol
dicampur dengan larutan buffer pH yang berbeda.
Semua solusi disegel dalam botol universal kedap udara
dan disimpan pada suhu 4 ° C selama 4 minggu. Pelarut
yang digunakan untuk persiapan larutan buffer
ditunjukkan pada Tabel 1. Nilai pH diukur dengan pH-
meter.
Efek paparan cahaya pada stabilitas ekstrak kaya
fucoxanthin diuji dengan membandingkan absorbansi
ekstrak (dalam metanol) dalam gelap dan terkena
kondisi cahaya. Ekstrak kaya fucoxanthin dalam bentuk
metanol disimpan dalam botol universal kedap udara
dengan (kondisi gelap) dan tanpa (terkena kondisi
ringan) penyegelan aluminium foil. Semua botol yang
mengandung ekstrak kaya fucoxanthin ditempatkan di
lemari asap dengan lampu neon 20 W dengan botol
tegak lurus 1 meter di bawah sumber cahaya, pada
suhu kamar.
Efek suhu pada stabilitas ekstrak kaya fucoxanthin
diuji dengan menjaga ekstrak kaya fucoxanthin (dalam
metanol) di dalam botol universal kedap udara yang
ditutupi dengan aluminium foil dan disimpan pada 4 ° C
(kulkas), 25 ° C (bangku laboratorium) dan 50 ° C (oven
inkubasi).
Absorbansi ekstrak kaya fucoxanthin untuk ketiga pH,
cahaya dan efek suhu diukur pada 420 nm setiap
minggu selama empat minggu. Absorbansi mewakili
konsentrasi fucoxanthin dalam ekstrak kaya
fucoxanthin. Absorbansi berbanding lurus dengan
konsentrasi fucoxanthin, yang berarti bahwa semakin
tinggi absorbansi semakin tinggi konsentrasi
fucoxanthin dalam ekstrak kaya fucoxanthin.
ANALISIS STATISTIK
Tes stabilitas dilakukan dalam triplicates(n= 3) dan data
diperoleh sebagai rata-rata dan standar deviasi (SD)dan
dianalisis menggunakan ANOVA satu arah (dua ekor)
diikuti oleh tes multiple range
Duncan(DMRT)menggunakan SAS versi 6.12 untuk
1348
Windows. Perbedaan nilai rata-rata dianggap signifikan
ketika p<0,05.
RESULTS DAN DISCUSSION
KARAKTERISASI FUCOXANTHIN
Profil Pigmen dan Hasil Fucoxanthin Dua puncak
penyerapan ditunjukkan pada 420 nm dan 672 nm
dalam spektrum UV-Vis(Gambar 1). Pigmen yang
berbeda menyerap cahaya pada panjang gelombang
yang berbeda. Kebanyakan karotenoid menyerap
cahaya di wilayah antara 400-500 nm (Mercadante
2008a) dan klorofil menyerap cahaya pada panjang
TABEL 1. Asam / basa lemah dan basa / asam konjugat mereka dalam persiapan solusi buffer
Ph Asam/basa lemah
1 0.2 M HCl
3 0,2 M asam sitrat
5 0,2 M asam sitrat
7 0,2 M asam sitrat
9 0.1 M NaOH
11 0.1 M NaOH
13 0.2 M NaOH
gelombang sekitar 660 nm (Marquez &Sinnecker 2008).
Juga ditentukan bahwa hasil fucoxanthin dari
Sargassum binderi adalah 7,4 ± sampel 0,4 mg / g.
Berdasarkan studi sebelumnya oleh Mise et al. (2011),
hasil fucoxanthin dari Cladosiphon okamuranus
berkisar antara 39,6 hingga 270,0 μg / g, tergantung
pada pelarut ekstraksi dan ukuran partikel. Studi lain
oleh Jaswir et al. (2012) melaporkan bahwa kandungan
fucoxanthin dalam Sargassum binderi dan Sargassum
duplicatum masing-masing adalah 0,73±0,39 dan
1,01±0,10 mg / g. Hal ini menunjukkan bahwa Binderi
Sargassum Malaysia memiliki hasil fucoxanthin yang
tinggi, sehingga cocok untuk diekstraksi untuk aplikasi
makanan.
Konjugat basa /asam
0.2 M KCl
0.2 m na2HPO4
0.2 m na2HPO4
0.2 m na2HPO4
0,1 M asam borat
0.05 M Na2HPO4
0.2 M KCl
 1349

Dari UV -Vis spectrum, ekstrak pigmen

B ini a h w a a d
terdiri dari proporsi karotenoid yang lebih tinggi dibandingkan
Klorofil. Karena karotenoid memiliki fungsi yang bermanfaat dan
dengan
nilai-nilai dalam industri makanan dan farmasi, maka lebih lanjut
Analisis dalam penelitian ini difokuskan pada karotenoid.
Menurut Chandini dkk(2008) dan Hosokawa dkk.
(2009)Fucoxanthin adalah karotenoid utama yang ditemukan
rumput laut.warna
dalam Untuk coklat.
menentukan apakah karotenoid
hadir dalam ekstrak pigmen adalah fucoxanthin, fucoxanthin
standar (Sigma-Aldrich) dilarutkan dalam metanol: air
(1:9, v/v) dan dianalisis UV -Vis spektrofotometer.
Ya menggunakan
UV -Spektrum vis menunjukkan puncak penyerapan
pada 423 nm (Gambar 1). Menurut Papagiannakis dkk.
maksimum
(2005), absorbansi fucoxanthin berkisar dari 420-
470 Nm. Karena panjang gelombang penyerapan maksimum
kedua standar dan sampel serupa, ini menunjukkan
Bahwa karotenoid dalam Sargassum binderiEkstrak
fucoxanthin. Ekstrak mentah dimurnikanadalah menggunakan kolom
kromatografi dan dianalisis menggunakan
HPLC , FTIR danNMR
untuk berfungsi sebagai langkah konfirmasi lebih lanjut tentang
fucoxanthin
keberadaan dalam Sargassum
hal binderiekstrak mentah.
ini

2. HPLC chromatogram dari (a) fucoxanthin dimurnikan dari

PERAWAK
ANSargassum binderi
dan (b) standar fucoxanthin (metanol)

disarankan oleh penelitian sebelumnya (Yan et al. 1999; Zailanie &Purnomo

2011).
1350
Spektrum FTIR fucoxanthin dimurnikan ditunjukkan pada Gambar 3 dan
ditemukan bahwa fucoxanthin dimurnikan menunjukkan pita penyerapan
yang sama dengan standar fucoxanthin. Kelompok fungsional yang
deskriptif fucoxanthin adalah adanya ikatan allenic (C = C = C), di mana ia
ditemukan di
GAMBAR 1. Puncak penyerapan (a) ekstrak kaya fucoxanthin
dari Sargassum binderi dan (b) standar fucoxanthin
(metanol: air (1: 9, v / v)) (350-750 nm)
Analisis High Performance Liquid
Chromatography(HPLC) Kehadiran fucoxanthin dalam
ekstrak fucoxanthinrich dari Sargassum binderi
diidentifikasi menggunakan HPLC fase terbalik (RP-
HPLC). Dari kromatogram yang ditunjukkan pada
Gambar 2, waktu retensi untuk fucoxanthin dari
fucoxanthin yang dimurnikan adalah 3,425 menit dan
waktu retensi untuk standar fucoxanthin adalah 3,414
menit. Waktu retensi yang sama menegaskan bahwa
kedua senyawa itu sama, yaitu fucoxanthin.
Kromatogram juga menunjukkan spektrum pada
1929,21 cm dan 1929,03 cm untuk fucoxanthin standar
dan fucoxanthin dimurnikan dari Sargassum binderi
masing-masing (Pangestuti &Kim 2011). Namun, perlu
dicatat bahwa kehadiran puncak ikatan allenic di
fucoxanthin dari spektrum Sargassum binderi sangat
rendah. Hal ini diyakini bahwa sampel mengandung
jumlah kelembaban yang tinggi yang mengganggu
absorbansi inframerah. Kehadiran kelembaban
dikaitkan dengan puncak intens pada 3381,85 cm -1,
yang ditugaskan untuk hidrogen terikat O-H simetris
dan asimetris peregangan getaran (H2O mengandung
ikatan O-H). Puncak ini secara signifikan lebih intens
dibandingkan dengan yang ditemukan dalam spektrum
standar fucoxanthin. Selain itu, benjolan puncak dari
1528,19 cm-1 sampai 1647,72 cm-1 di fucoxanthin dari
spektrum Sargassum binderi adalah karena getaran
lentur HOH, yang juga menunjukkan adanya
kelembaban dalam sampel (Silverstein &Webster
1998). Benjolan puncak ini tidak diamati dalam
spektrum standar fucoxanthin, di mana ia memiliki tiga
puncak tajam masing-masing pada 1645,82 cm -
1,
1606,88 cm-1 dan 1577,75 cm-1.
Frekuensi penyerapan fucoxanthin dimurnikan pada
3381,85 cm-1 dan 3011,90 cm-1 menunjukkan adanya
ikatan -OH. Penyerapan pada 2956,34 cm -1 dan
2853,88 cm-1 menunjukkan adanya alkana dengan
ikatan C-H. Penyerapan pada 1732,54 cm -1
menunjukkan adanya keton dengan ikatan -C = O.
Penyerapan pada 1456,82 cm-1,1433,27 cm-1,1377,53
cm-1 dan 1363,65 cm-1 menunjukkan adanya gunting
-1 -1
dan lentur alkana dengan ikatan -C-H. Kehadiran ester
dengan ikatan -C-O disajikan oleh penyerapan pada
1034,58 cm-1. Semua ikatan ini biasanya ditemukan
dalam fucoxanthin (Zailanie &Purnomo 2011). Oleh
karena itu, kehadiran semua kelompok fungsional
dalam spektrum memvalidasi hasil UV-VIS dan HPLC
bahwa fucoxanthin dimurnikan memang fucoxanthin.
Proton Nuclear Magnetic Resonance (1H NMR)Spektrum
pergeseran kimia untuk fucoxanthin dimurnikan
ditunjukkan pada Gambar 4 dan puncak resolusi tinggi
diidentifikasi dengan kelompok fungsional dalam
molekul. Pergeseran kimia yang diperoleh dari 1H NMR
juga dibandingkan dengan penelitian sebelumnya
zailanie dan Purnomo (2011) menggunakan
fucoxanthin dimurnikan dari Sargassum filipendula
(Tabel 2) dan struktur yang diprediksi dari molekul
fucoxanthin ditunjukkan pada awal Gambar 4.
Perbandingan pergeseran kimia hadir dalam spektrum
menunjukkan bahwa keduanya sangat mirip, sehingga
memungkinkan kita untuk keluar dengan struktur
fucoxanthin yang diprediksi (Zailanie &Purnomo 2011).
Namun, ada beberapa proton (4, 7, 19, 2 ' dan 19 ' di
Tabel 2) dengan pergeseran kimia yang sedikit berbeda
dari Zailanie dan Purnomo (2011). Ini mungkin karena
berbagai spesies rumput laut dan pelarut yang berbeda
yang digunakan untuk analisis NMR (MeOD untuk
penelitian saat ini, dan CDCl3 untuk Zailanie dan
Purnomo (2011)).
TES STABILITAS PADA EKSTRAK KAYA FUCOXANTHIN
Stabilitas fucoxanthin diukur melalui absorbansinya, di
mana pada tingkat yang lebih tinggi absorbansi, lebih
banyak fucoxanthin hadir. Absorbansi yang lebih
rendah menandakan bahwa fucoxanthin telah
mengalami reaksi kimia, yang membuatnya tidak stabil
dan terdegradasi atau hancur. Gambar 5 menunjukkan
bahwa ekstrak kaya fucoxanthin mencapai stabilitas
tertinggi pada pH6.1, yang merupakan pH aslinya
(tanpa pengobatan). Penurunan absorbansi pada pH1,
3, 9, 11 dan 13 menunjukkan bahwa stabilitas menurun
dalam kondisi asam tinggi dan basa tinggi. Absorbansi
fucoxanthin adalah yang paling sedikit dalam pH1
menunjukkan bahwa fucoxanthin relatif tidak stabil
dalam kondisi asam tinggi. Kehadiran asam
menyebabkan degradasi pigmen dengan
mempromosikan isomerisasi trans-cis (Gliemmo et al.
 1351

2009; Ye &Eitenmiller 2006). Isomerisasi trans-cis kondisi asam tinggi (pH1), sampel yang disimpan dalam
terjadi melalui pembentukan karotenoid carbocation buffer alkali (pH11 dan 13) menunjukkan stabilitas yang
(CarH+)menengah (Konovalov &Kispert 1999). lebih besar. Menurut Ye dan Eitenmiller (2006),
Dibandingkan dengan sampel yang disimpan dalam karotenoid adalah

GAMBAR 3. Spektrum FTIR (a) standar fucoxanthin (Sigma-Aldrich) dan (b) fucoxanthin dimurnikan dari Sargassum binderi

GAMBAR 4. H fucoxanthin dimurnikan dari Sargassum binderi dan struktur

Spektrum NMR 1

fucoxanthin (inset) yang diprediksi

TABEL 2. Perbandingan pergeseran kimia (ppm) antara fucoxanthin dari ekstrak Sargassum binderi ^ dan
fucoxanthin dari Sargassum filipendula#
1352

Proton H NMR fucoxanthin dari

1 1
H NMR fucoxanthin dari ekstrak
(Gambar 4) ekstrak S. filipendula Sargassum binderi (ppm) ^
(ppm)#
2 1.36 1.35
1.49 1.49
3 3.80 3.80
4* 1.77 1.65
2.29 2.25
7* 2.59 -
3.64 3.35
16 1.37 1.35
17 0.95 0.95
18 1.34 1.34
19* 1.80 1.85
20 1.98 1.95
2'* 1.41 1.35
2.00 2.05
3' 5.37 5.40
4' 1.53 1.50
2.29 2.30
16' 1.37 1.35
17' 1.06 1.05
18' 1.34 1.34
19'* 1.80 1.85
20' 1.98 1.95
^ Studi saat ini – MeOD, 600 MHz
# Zailanie & Purnomo 2011 - CDCl3, 500 MHz
Proton dengan sedikit berbeda dalam pergeseran kimia

GAMBAR 5. Perbandingan kandungan fucoxanthin dalam ekstrak kaya fucoxanthin dari

Sargassum binderi (λ = 420 nm) dalam hal pH dan waktu (n= 3)
relatif stabil pada kondisi alkalin. Sebuah studi yang tidak berbeda secara signifikan(p>0,05) dengan pH6,1
dilakukan oleh Chen et al. (1996) melaporkan bahwa sepanjang percobaan menunjukkan bahwa ekstrak
tingkat degradasi karotenoid secara signifikan lebih fucoxanthinrich cocok untuk diterapkan dalam produk
lambat pada pH alkali daripada pada pH asam. makanan pada kisaran pH 5-7.
Absorbansi ekstrak kaya fucoxanthin pada pH5 dan 7
 1353

Efek Paparan Cahayaadalah faktor lain yang karena itu, ekstrak kaya fucoxanthin lebih cocok untuk
memiliki pengaruh besar pada stabilitas karotenoid diterapkan ke dalam produk makanan yang disimpan
(Chen et al. 1996; Hii et al. 2010; Mercadante, 2008a; pada suhu kamar atau lebih rendah.
Rodriguez-Amaya, 2001; Ye &Eitenmiller 2006). Efek
cahaya pada stabilitas fucoxanthin mempengaruhi
CONCLUSION
penggunaannya dalam industri makanan karena
paparan cahaya dapat terjadi selama pemrosesan dan Fucoxanthin ditemukan hadir dalam ekstrak Sargassum
penyimpanan. Absorbansi ekstrak kaya fucoxanthin binderi, yang terdeteksi menggunakan
yang disimpan dalam gelap dan terkena cahaya Spektrofotometer UV-Vis pada λmax= 420 nm dan
sepanjang percobaan ditunjukkan pada Gambar 6. diidentifikasi menggunakan
Sampel yang terkena cahaya menunjukkan lebih HPLC, FTIR dan NMR. Hasil fucoxanthin dari Sargassum
banyak pengurangan nilai absorbansi dibandingkan binderi adalah 7,4 ± sampel 0,4 mg / g. Ekstrak kaya
dengan sampel yang disimpan dalam gelap. Ini fucoxanthin dari Sargassum binderi ditemukan paling
menunjukkan bahwa ekstrak kaya fucoxanthin sensitif stabil dalam pH5 - 7, kondisi gelap dan sangat cocok
terhadap cahaya dan stabilitasnya menurun ketika untuk disimpan di kamar (25° C) atau suhu yang lebih
terkena cahaya. rendah (4 ° C). Oleh karena itu, ekstrak kaya
Karotenoid mengalami fotodegradasi dan isomerisasi fucoxanthin dari Sargassum binderi memiliki potensi
ketika terkena cahaya (Chen et al. 1996; Mercadante untuk diterapkan dalam produk makanan sebagai
2008b; Vásquez-Caicedo dkk. 2007). Cahaya dapat makanan bioingredien dan fungsional.
menggairahkan dan menyebabkan pembentukan
oksigen singlet. Oksigen singlet bereaksi dengan
karotenoid untuk menghasilkan karotenoid keadaan
bersemangat. Karotenoid keadaan bersemangat dapat
mengikuti jalur degradasi kimia yang mungkin
melibatkan serangan langsung pada ikatan ganda
karotenoid dengan oksigen singlet, membentuk
biradicals yang pada akhirnya dapat menyebabkan
produk pembelahan rantai karbonil (Garavelli et al.
1998). Cahaya juga dapat mempromosikan reaksi
isomerisasi trans-cis yang menyebabkan degradasi
pigmen.
Efek Suhu Penyimpanan Suhu penyimpanan yang
berbeda memiliki efek yang berbeda pada stabilitas
karotenoid. Tidak ada perbedaan yang signifikan
(p>0,05) dalam hal absorbansi antara ekstrak kaya
fucoxanthin yang disimpan pada 4 ° C dan 25 ° C selama
periode percobaan (Gambar 7). Ini menunjukkan
bahwa fucoxanthin stabil ketika disimpan pada suhu
rendah (4 ° C) dan kamar (25 ° C). Di sisi lain, absorbansi
ekstrak kaya fucoxanthin yang disimpan dalam 50 ° C
secara signifikan (p<0,05) lebih rendah dari dua sampel
lainnya yang disimpan dalam 4 ° C dan 25 ° C dari
minggu ketiga dan seterusnya. Perbedaan absorbansi
ekstrak kaya fucoxanthin yang disimpan pada 50 ° C
dengan 4 ° C dan 25 ° C masing-masing adalah 19,2%
dan 17,0% (hasil tidak ditampilkan). Ini menunjukkan
bahwa fucoxanthin tidak stabil pada suhu yang lebih
tinggi dan karenanya tidak cocok untuk disimpan dalam
suhu yang lebih tinggi dari suhu kamar. Suhu tinggi
dapat menyebabkan pecahnya ikatan rangkap dalam
molekul karotenoid dan menyebabkan degradasi
pigmen (Boon et al. 2010; Mercadante, 2008b). Oleh
1354

GAMBAR 6. Perbandingan kandungan fucoxanthin dalam ekstrak kaya fucoxanthin dari Sargassum
binderi (λ = 420 nm) dalam hal paparan cahaya dan waktu (n= 3)

GAMBAR 7. Perbandingan kandungan fucoxanthin dalam ekstrak kaya fucoxanthin

Sargassum binderi (λ = 420 nm) dalam hal suhu dan waktu (n= 3)
PENGAKUAN
Penelitian ini didanai oleh hibah STGL-007-2010 dan
OUP2012-128 dan Beasiswa MyBrain15 (MyPhD) oleh
Kementerian PendidikanMalaysia. Para penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada SIRIM Bhd, Malaysia
karena telah memasok sampel rumput laut dan Sekolah
Ilmu Kimia dan Teknologi Pangan, Fakultas Sains dan
Teknologi, Universitas Kebangsaan Malaysia untuk
fasilitas penelitian.
REFERENSI
Boon, C.S., McClements, D.J., Weiss, J. &Decker, E.A. 2010.
Faktor-faktor yang mempengaruhi stabilitas kimia
karotenoid dalam makanan. Ulasan Kritis dalam Ilmu
Pangan dan Nutrisi 50: 515-532.
Chandia, N.P. & Matsuhiro, B. 2008. Karakterisasi fucoidan
dari Lessonia vadosa (Phaeophyta) dan sifat antikoagulan
dan eksekutornya. Jurnal Internasional Makromolekul
Biologis 42: 235-240.
Chandini, S.K., Ganesan, P., Suresh, P.V. &Bhaskar, N. 2008.
Rumput laut sebagai sumber senyawa bergizi bermanfaat
- Sebuah tinjauan. Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan
45(1): 1-13.
Chen, H.E., Peng, H.Y. & Chen, B.H. 1996. Stabilitas karotenoid
dan vitamin A selama penyimpanan jus wortel. Kimia
Makanan 57(4): 497-503.
Dere, S., Gűnes, T. & Sivaci, R. 1998. Penentuan
spektrofotometri klorofil - A, B dan isi karotenoid total
dari beberapa spesies alga menggunakan pelarut yang
berbeda. Jurnal Turki Botany 22: 13-17.
Diplock, A.T., Charleux, J.L., Crozier-Willi, G., Kok, F.J.,
RiceEvans, C. &Roberfroid, M. 1998. Ilmu pangan

fungsional dan pertahanan terhadap spesies oksidatif
reaktif. British Journal of Nutrition 80: 77-112.
Gliemmo, M.F., Latorre, M.E., Gerschenson, L.N. &Campos,
C.A. 2009. Stabilitas warna labu(Cucurbita
moschata,Duchesne ex Poiret) puree selama
penyimpanan pada suhu kamar: Efek pH, kalium sorbate,
asam askorbat dan bahan kemasan. LWT - Ilmu dan
Teknologi Pangan 42: 196-201.
Garavelli, M., Bernardi, F., Olivucci, M. &Robb, M.A. 1998.
Studi DFT tentang reaksi antara singlet-oxygen dan model
karotenoid. Jurnal American Chemical Society 120:
10210-10222.
Hii, S.W., Choong, P.Y., Woo, K.K. &Wong, C.L. 2010. Studi
stabilitas fucoxanthin dari Sargassum binderi. Australian
Journal of Basic and Applied Sciences 4(10): 4580-4584.
Hosokawa, M., Wanezaki, S., Miyauchi, K., Kurihara, H.,
Kohno, H. &Kawabata, J. 1999. Efek apoptosis-inducing
fucoxanthin pada garis sel leukemia manusia HL-60.
Penelitian Ilmu dan Teknologi Pangan 5: 243-246.
Hosokawa, M., Okada, T., Mikami, N., Konishi, I. & Miyashita,
K. 2009. Biofungsi karotenoid laut. Ilmu Pangan dan
Bioteknologi 18: 1-11.
Jaswir, I., Noviendri, D., Salleh, H.M. & Miyashita, K. 2012.
Ekstraksi fucoxanthin rumput laut coklat dan analisis fraksi
lipid mereka dalam metanol. Penelitian Ilmu Pengetahuan
dan Teknologi Pangan 18(2): 251-257.
Konovalov, V.V. & Kispert, L.D. 1999. AMI, INDO / S dan studi
optik karbokations molekul karotenoid. Isomerisasi yang
diinduksi asam. Jurnal Masyarakat Kimia, Transaksi Perkin
20: 901-909.
Lahaye, M. 1991. Alga laut sebagai sumber serat: Penentuan
kandungan serat makanan yang larut dan tidak larut
dalam beberapa 'sayuran laut'. Jurnal Ilmu Pangan dan
Pertanian 54: 587-594.
Li, F., Tian, T.C. &shi, Y.C 1995. Studi tentang efek anti-virus
dari fucoidan in vitro. Jurnal Norman Bethune University of
Medical Science 21: 255-257.
Lim, S.J., Wan Aida, W.M., Maskat, M.Y., Mamot, S., Ropien, J.
&Mazita Mohd., D. 2014. Isolasi dan kapasitas antioksidan
fucoidan dari rumput laut Malaysia yang dipilih. Food
Hydrocolloids (dalam pers). DOI: 10.1016/j.
foodhyd.2014.03.007.
Maeda, H., Hosokawa, M., Sashima, T., Funayama, K. &
Miyashita, K. 2005. Fucoxanthin dari rumput laut yang
dapat dimakan, Undaria pinnatifida, menunjukkan efek
antiobesitas melalui ekspresi UCP1 dalam jaringan
adiposa putih. Komunikasi Penelitian Biokimia dan
Biofisik 332: 392-397.
Mandal, P., Mateu, C.G., Chattopadhyay, K., Pujol, C.A.,
Damonte, E.B. &Ray, B. 2007. Fitur struktural dan aktivitas
antivirus fucan sulfat dari rumput laut coklat Cystoseira
indica. Kimia Antivirus &Kemoterapi 18: 153-162.
Marquez, U.M.L. &Sinnecker, P. 2008. Analisis klorofil. Dalam
Pewarna Makanan: Sifat Kimia dan Fungsional,diedit oleh
Socaciu, C. New York: CRC Press. pp. 429-446.
Mercadante, A.Z. 2008a. Analisis karotenoid. Dalam Pewarna
Makanan: Sifat Kimia dan Fungsional,diedit oleh Socaciu,
C. New York: CRC Press. pp. 447-478.
1355
Mercadante, A.Z. 2008b. Karotenoid dalam makanan: Sumber
dan stabilitas selama pemrosesan dan penyimpanan.
Dalam Pewarna Makanan: Sifat Kimia dan
Fungsional,diedit oleh Socaciu, C. New York: CRC Press.
pp. 213-240.
Mise, T., Ueda, M. &Yasumoto, T. 2011. Produksi bubuk kaya
fucoxanthin dari Cladosiphonokamuranus. Jurnal
Kemajuan Ilmu dan Teknologi Pangan 3(1): 73-76.
Noviendri, D., Jaswir, I., Hamzah, M.S., Muhammad Taher,
Kazuo, M. &Nazaruddin, R. 2011. Ekstraksi Fucoxanthin
dan analisis asam lemak Sargassum binderi dan S.
Duplicatum. Jurnal Penelitian Tanaman Obat 5 (11):
2405-2412.
Pangestuti, R. &Kim, S.K. 2011. Aktivitas biologis dan efek
manfaat kesehatan dari pigmen alami yang berasal dari
ganggang laut. Jurnal Makanan Fungsional 3: 255-266.
Papagiannakis, E., Van Stokkum, I.H.M., Fey, H., Büchel, C.
&Van Grondelle, R. 2005. Karakterisasi spektroskopi
transfer energi eksitasi dalam protein fucoxanthin-klorofil
diatom. Penelitian Fotosintesis 86(1): 241-250.
Percival, E. &McDowell, R.H. 1967. Kimia dan Enzymology
dari Marine Algal Polysaccharides. New York: Pers
Akademik.
Phang, S.M. 1998. Sumber daya rumput laut malaysia. Dalam
Seaweed Resources of the World, diedit oleh, Critchley,
A.T. &Ohno, M. Japan: JICA. pp.79-91.
Ponce, N.M.A., Pujol, C.A., Damonte, E.B., Flores, M.L.
&Stortz, C.A. 2003. Fucoidans dari rumput laut coklat
Adenocystis utricularis:Metode ekstraksi, aktivitas
antivirus dan studi struktural. Penelitian Karbohidrat 338:
153-165.
Rodriguez-Amaya, D.B. 2001. Panduan untuk Analisis
Karotenoid dalam Makanan Amerika Serikat: ILSI Press.
Rodriguez-Jasso, R.M., Mussatto, S.I., Pastrana, L., Aguilar,
C.N. & Teixeira, J.A. 2011. Ekstraksi dibantu microwave
polisakarida sulfat (fucoidan) dari rumput laut coklat.
Polimer Karbohidrat 86: 1137-1144.
Sangha, J.S., Fan, D., Banskota, A.H., Stefanova, R., Khan,
W., Hafting, J., Craigie, J., Critchley, A.T. &Prithiviraj, B.
2013. Komponen bioaktif dari strain alga merah yang
dapat dimakan, Chondrus crispus,meningkatkan toleransi
stres oksidatif pada Caenorhabditis elegans. Jurnal
Makanan Fungsional 5: 1180-1190.
Shibata, T., Yamaguchi, K., Nagayama, K., Kawagushi, S. &
Nakamura, T. 2002. Aktivitas penghambatan phlorotannin
alga coklat terhadap glikosida dari jeroan cangkang
sorban Turbo cornutus. Jurnal Fiologi Eropa 37: 493-
500.
Silverstein, R.M. & Webster, F.X. 1998. Identifikasi
Spektrometri SenyawaOrganik. 6th ed. New York: John
Wiley &Sons, Inc. pp. 71-111.
Souza, B.W.S., Cerqueira, M.A., Bourbon, A.I., Pinheiro, A.C.,
Martins, J.T., Teixeira, J.A., Coimbra, M.A. &Vicente, A.A.
2012. Karakterisasi kimia dan aktivitas antioksidan
polisakarida sulfat dari rumput laut merah Gracilaria
birdiae. Hidrokoloid Makanan 27: 287-292.
Vásquez-Caicedo, A.L., Schilling, S., Carle, R. & Neidhart, S.
2007. Dampak kondisi kemasan dan penyimpanan pada
retensi warna dan β-karoten dari pure mangga yang
1356

dipasteurisasi. Penelitian dan Teknologi Pangan Eropa

224: 581-590.
Wijesinghe, W. A. J. P. & Jeon, Y.J. 2011. Ekstraksi asisten
enzim (EAE) komponen bioaktif: Pendekatan yang
berguna untuk pemulihan metabolit industri penting dari
rumput laut: Sebuah tinjauan. Fitoterapia 83(1): 6-12.
Yan, X., Chuda, Y., Suzuki, M. &Nagata, T. 1999. Fucoxanthin
sebagai antioksidan utama dalam Hijikia
fusiformis,rumput laut yang dapat dimakan umum.
Biosains, Bioteknologi dan Biokimia 63 (3): 605-607.
Ye, L. & Eitenmiller, R.R. 2006. Vitamin yang larut dalam
lemak. Dalam Handbook of Food Science, Technology, and
Engineering,diedit olehHui, Y.H. USA: CRC Press. pp.
212-241.
Zailanie, K. & Purnomo, H. 2011. Studi kandungan dan
identifikasi fukosantin dari tiga jenis rumput laut cokelat
(Sargassum cinereum, Sargassum echinocarpum dan
Sargassum filipendula) dari Padike, Talongo, Sumenep,
Madura. (Study of fucoxanthin content and identification
from three types of brown seaweeds (Sargassum
cinereum, Sargassum echinocarpum and Sargassum
filipendula) from Padike, Talongo, Sumenep, Madura.
Berkala Penelitian Hayati Edisi Khusus 7(A): 143–147 (In
Indonesian).
Zhao, X., Xue, C.H., Cai, Y.P., Wang, D.F. &Fang, Y. 2005. Studi
tentang aktivitas antioksidan fucoidan dari Laminaria
japonica. Huruf Teknologi Tinggi 11: 91-94.
Sekolah Ilmu Kimia dan Teknologi Pangan
Fakultas Sains dan Teknologi
Universitas Nasional Malaysia
43600 Bangi, Selangor
Malaysia

*Penulis yang sesuai; Email: wanaidawm@ukm.edu.my

Diterima: 14 Mei 2013

Diterima: 31 Desember 2013