Diseminasikan dalam Seminar Nasional MIPA 2013 MIPA Sebagai Landasan Kreasi dan Inovasi Teknologi

Fakultas MIPA Universitas Pakuan Bogor, Indonesia.

REDUKSI SENYAWA KETON MENJADI ALKOHOL SEKUNDER MENGGUNAKAN WORTEL

(DAUCUS CAROTA) SEBAGAI SUMBER BIOKATALIS

A. Herry Cahyana1* Lina Mardiana1 Bayu Ardiansah1

1
Departemen Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Indonesia
*Corresponding Author : herrykim@ui.ac.id

Abstract Reduction of ketone compound to
corresponding secondary alcohol using carrot (Daucus
carota) as biocatalyst source has been done
succesfully for the first time in Indonesia. Secondary
alcohol is an important intermediate compound in the
synthesis of drugs, fragrance, flavor, and any others
organic synthesis. In order to create a new synthesis
route, called green chemistry, carrot is used as an
alternative reducing agent for carbonyl compound. In
this research, alcohol dehidrogenase enzyme (ADH)
and coenzyme NAD(P)H found in carrot has been
successfully used to reduce ketone compound
(benzophenone as substrat model) to benzohydrol
(diphenyl methanol) with the yield and conversion is
84,96% and 97,96%. Experiment of reduction were
carried out by blending of carrot suspension (20 gram
in 50 mL phosphate buffer pH 7) and 0,5 mmol of
benzophenone in a 100 mL Erlenmeyer flask pyrex
reactor equipped with magnetic stirrer and 48 hours
reaction time at room temperature. Analysis using
FTIR shows that there is a peak at 3302,13 cm -1 for
hydroxyl funtional group in the product that are
characteristic for alcohol compound (in this case
diphenyl methanol). Besides that, UV Vis spectrum
of product indicate the maximum wavelength at 279
nm.
Keywords - reduction, biocatalyst, carrot, ketone
compound, secondary alcohol
pada sintesis inhibitor protease HIV, GS-9005 (Turcu,
2010). Sementara itu senyawa (S)-Rivastigmine, suatu
obat penyakit alzheimer dibuat dari alkohol sekunder
1-fenil-1-etanol (Mangas Sanchez et al., 2009).
Secara umum, alkohol sekunder dapat diperoleh dari
suatu senyawa keton melalui reaksi reduksi. Agen
pereduksi yang umum digunakan adalah litium
aluminium hidrida (LiAlH4) dan natrium borohidrida
(NaBH4). Beberapa kekurangan dari agen pereduksi
konvensional tersebut yaitu relatif mahal dan bersifat
toksik.
Keterbatasan yang terdapat pada agen pereduksi/
katalis konvensional dapat diatasi apabila reaksi
reduksi menggunakan biokatalis. Biokatalis memiliki
karakteristik yang unik apabila dibandingkan dengan
katalis komersial (homogen maupun heterogen), yaitu
bersifat enantioselektif, kemoselektif, regioselektif,
reaksi berlangsung dengan aman, dan tidak
membahayakan lingkungan karena biokatalis mudah
terdekomposisi setelah digunakan (Nakamura et al.,
2003). Beberapa biokatalis yang telah dipakai
misalnya Pseudomonas sp (alkohol dehidrogenase),
Lactobacillus kefir (alcohol dehidrogenase),
Geotrichum candidum (gliserol dehidrogenase),
Mucor javanicus (dihidroksiaseton reduktase), dan hati
kuda (alkohol dehidrogenase). Jaringan tumbuhan
untuk bioreduksi senyawa keton dapat berasal dari
apel, wortel, kentang, timun, bawang, dan lobak (Yang
et al., 2008).

II. METODE PENELITIAN

I.PENDAHULUAN
A. Alat dan Bahan

Senyawa alkohol sekunder merupakan senyawa
intermediet (building block) yang penting pada sintesis
obat obatan (bidang farmasetika), senyawa
agrokimia, pemberi rasa (flavor), aroma (fragrance),
dan senyawa kimia untuk bahan baku industri
(Lakshmi et al., 2011). Sebagai contoh, senyawa
bisfuran alkohol merupakan building block
Wortel diperoleh dari pasar lokal (asli Indonesia)
dan disimpan dalam lemari pendingin sebelum
digunakan. Beberapa bahan yang digunakan pada
penelitian ini adalah benzofenon, etil asetat (Merck),
n-heksana (Merck), buffer fosfat pH 7, Na2SO4,
ethanol. Peralatan yang dipakai adalah Pelat TLC
Silica Gel 60 F254, lampu UV 254 nm, magnetic stirrer
dan bar, Erlenmeyer 100 mL, labu ekstraksi, dan
peralatan gelas lain.
Diseminasikan dalam Seminar Nasional MIPA 2013 MIPA Sebagai Landasan Kreasi dan Inovasi Teknologi
Fakultas MIPA Universitas Pakuan Bogor, Indonesia.

2. 2. Preparasi Biokatalis
Bagian luar (kulit) wortel dikupas, sehingga
menyisakan daging buah. Daging buah diiris tipis kecil
kecil sampai didapatkan ukuran dengan panjang 1
cm. Irisan irisan ini kemudian direndam dalam air
bebas ion selama 30 jam. Suspensi ini telah siap
digunakan sebagai biokatalis. Dalam eksperimen
bioreduksi, digunakan suspensi yang terdiri dari 20
gram irisan wortel segar dalam 50 mL bufer fosfat pH
7,0.
2. 3. Reaksi Reduksi Gambar 1. Suspensi Biokatalis Wortel
Senyawa keton (benzofenon) dengan konsentrasi
Eksperimen reduksi senyawa keton menjadi alkohol
akhir 10 mmol/ L ditambahkan ke dalam gelas beaker
sekunder menggunakan wortel sebagai biokatalis
yang berisi suspensi 20 gram wortel dalam 50 mL
dilakukan dalam sebuah reaktor Pyrex berupa labu
bufer fosfat pH 7. Campuran diaduk menggunakan
Erlenmeyer 100 mL. Sebelum ditambahkan ke dalam
magnetic stirrer selama 48 jam, dan dilakukan pada
suspensi biokatalis wortel, benzofenon yang berbentuk
temperatur ruang. Reaksi reduksi diakhiri dengan
kristal berwarna putih harus diubah ke bentuk larutan
memisahkan potongan potongan wortel dengan
dengan cara melarutkannya dalam etanol. Hal ini
filtrasi menggunakan corong Buchner pada sistem
karena apabila benzofenon ketika direduksi masih
vakum. Filtrat diekstraksi menggunakan etil asetat
dalam bentuk padat, akan mempersulit kontak antara
(3x20 mL). Ke dalam fraksi etil asetat, ditambahkan
biokatalis dengan substrat (benzofenon) karena
garam Na2SO4 anhidrat. Pelarut etil asetat kemudian
perbedaan fasa dan polaritas antara medium dengan
diuapkan untuk mendapatkan kristal produk. Produk
senyawa keton. Larutan benzofenon kemudian
dianalisis kemurniannya dengan Kromatografi Lapis
ditambahkan ke dalam suspensi irisan wortel dalam air
Tipis (TLC).
(20 g dalam 50 mL bufer fosfat pH 7). Penggunaan
2.4. Karakterisasi Produk Menggunakan
bufer fosfat pH 7 dimaksudkan agar pH campuran
Spektrofotometer FTIR dan UV Vis
tetap konstan (tidak berubah secara signifikan). Hal ini
Analisis gugus fungsi yang terdapat pada produk
karena berdasarkan literatur (Fruchey, 2011), apabila
dilakukan menggunakan bantuan instrumentasi FTIR
reaksi reduksi dilakukan tanpa larutan buffer, selama
Simadzu Prestige 21 dengan metode pelet KBr.
reaksi berjalan campuran akan menjadi bersifat asam
Sedangkan panjang gelombang maksimum senyawa
(pH sekitar 5) sehingga mengganggu aktivitas enzim
produk dianalisis menggunakan Spektrofotometer UV
(biokatalis).
Vis 2450 Double Beam.

III. HASIL DAN PEMBAHASAN

Wortel yang dipilih sebagai biokatalis dalam
keadaan baik/ segar. Sebelum digunakan, wortel harus
dikupas terlebih dahulu yang bertujuan untuk
memaksimalkan kontak yang terjadi antara biokatalis
dan substrat (senyawa keton). Wortel diiris dengan
panjang 1 cm. Cara ini juga sama dengan yang
dilakukan oleh Lakshmi et al, 2011 dan Yang et al,
2008. Potongan wortel yang berukuran kecil kecil
akan memperluas permukaan kontak antara biokatalis
dalam wortel dengan senyawa keton, tetapi apabila
terlalu kecil akan menyulitkan dalam tahap
penyaringan filtrat produk reduksi.Perendaman irisan
wortel selama 30 jam dimaksudkan agar enzim alkohol
dehidrogenase (ADH) serta kofaktor NAD(P)H yang
berfungsi sebagai senyawa bioaktif proses reduksi ini
dapat keluar dari daging wortel dan larut di dalam air.
Apabila enzim dan kofaktor masih berada dalam
wortel maka memerlukan waktu untuk keluar menuju
larutan kemudian bereaksi dengan molekul keton.
Daucus carota
Temp. Ruang;
Stirrer 48 jam
Pada awal reaksi terbentuk dua fasa, yaitu fasa air
yang mengandung suspensi wortel dan fasa organik
yang mengandung benzofenon. Untuk memperbanyak
jumlah frekuensi tumbukan dan kontak antara
biokatalis dan substrat, serta membuat campuran
cairan menjadi satu fasa, reaksi dilakukan
menggunakan sistem magnetic stirrer selama 48 jam.
Setelah 48 jam berjalan, reaksi reduksi dihentikan.
Potongan wortel dipisahkan dari larutan dengan cara
filtrasi menggunakan corong Buchner pada suasana
vakum. Filtrat yang terbentuk berupa cairan agak
keruh berwarna sedikit kekuningan. Potongan
biokatalis wortel kemudian dicuci dengan air bebas ion
2 x 20 mL dan 2 x 10 mL etil asetat. Hal ini bertujuan
Diseminasikan dalam Seminar Nasional MIPA 2013 MIPA Sebagai Landasan Kreasi dan Inovasi Teknologi
Fakultas MIPA Universitas Pakuan Bogor, Indonesia.
agar tidak ada senyawa produk yang tertinggal di
dalam potongan wortel. Setelah proses ekstraksi (3x20
mL etil asetat) terbentuk 2 fasa, yaitu fasa air berada
pada lapisan bawah dan fasa etil asetat yang berwarna
sedikit kekuningan. Fasa organik yang telah ditambah
dengan Na2SO4 sebagai penarik air kemudian
diuapkan sehingga terbentuk kristal produk 0,0774
gram (84,96% yield kasar).
gambar 2. Kristal produk reduksi
Produk reaksi reduksi yang kemudian ditentukan
kemurniannya menggunakan teknik kromatografi lapis
tipis (TLC). Hasil analisis menunjukkan hanya
terbentuk satu spot pada spot produk, yang
menandakan produk sudah dalam keadaan cukup
murni. Sedangkan nilai Rf untuk starting material
(benzofenon) dan produk masing masing 0,52 dan
0,37 setelah dikembangkan dengan pelarut n-heksana :
etil asetat (20:1).
Spot Spot
benzofenon produk
gambar 3. Hasil Analisis dengan TLC
Hal ini sesuai dengan teori bahwa difenil metanol
sebagai produk reaksi bersifat lebih polar daripada
benzofenon sehingga difenil metanol lebih tertahan
oleh fasa diam TLC yang bersifat polar. Akibatnya,
difenil metanol memiliki nilai Rf yang lebih kecil.
Penentuan persen konversi benzofenon menjadi
benzohidrol dilakukan dengan bantuan
spektrofotometer UV Vis, dengan terlebih dahulu
membuat kurva standar.
Tabel 1. Nilai Absorbansi Larutan Standar
Gambar 4. Kurva Kalibrasi standar Benzofenon
Absorbansi produk sebesar 1,196. Setelah dilakukan
perhitungan secara matematis dan disesuaikan dengan
faktor pengenceran (dilution), didapatkan persen
konversi senilai 97,96%.
Gambar spektrum senyawa benzofenon
adalah adanya gugus karbonil dengan ciri khas puncak
pada bilangan gelombang sekitar 1700 cm -1, yang pada
spektrum produk kali ini gugus karbonil muncul pada
1666,50 cm-1. Perbedaan signifikan antara senyawa
benzofenon (substrat) dan difenil metanol (hasil
reduksi) adalah munculnya puncak pada bilangan
gelombang 3302,13 cm-1 yang merujuk pada
keberadaan gugus fungsi hidroksil (-OH) pada struktur
senyawa produk. Sedangkan pada senyawa
benzofenon tidak ditemui puncak tersebut. Pada
spektrum senyawa produk masih terdapat puncak
gugus karbonil 1724,36 cm-1 (bilangan gelombang
bergeser dari 1666,50 cm-1 pada senyawa awal). Hal
ini menandakan tidak semua benzofenon terkonversi
menjadi produk. Pada tabel berikut diberikan beberapa
bilangan gelombang spektrum yang penting dari
substrat (benzofenon) dan produk (benzohidrol).
Tabel 2. Perbandingan beberapa puncak spektrum
FTIR benzofenon dan produk.
Diseminasikan dalam Seminar Nasional MIPA 2013 MIPA Sebagai Landasan Kreasi dan Inovasi Teknologi
Fakultas MIPA Universitas Pakuan Bogor, Indonesia.
Panjang gelombang karakteristik (maks) untuk
produk ditentukan menggunakan spektrofotometer,
didapatkan hasil bahwa nilai maks produk berada pada
279 nm. Sedangkan senyawa keton awal, benzofenon,
memiliki panjang gelombang maksimum 252 nm.
Adanya perbedaan ini mengacu pada struktur
keduanya yang berbeda, gugus OH pada produk
termasuk gugus kromofor, yaitu dapat menyebabkan
pergeseran panjang gelombang ke arah yang lebih
besar.
Wavelenght = 252 nm
Abs = 1,852
Gambar 5. Spektrum UV Vis Benzofenon
maks = 279 nm
A =0,964
Gambar 6. Spektrum UV-Vis Produk Reduksi
IV. SIMPULAN
Wortel (Daucus carota) dapat digunakan secara efektif
dan efisien sebagai biokatalis reduksi senyawa keton
(dalam hal ini benzofenon) menjadi alkohol sekunder
(dalam hal ini benzohidrol) dengan yield dan konversi
masing-masing 84,96% dan 97,96%. Dengan
demikian, ditemukan rute baru sintesis senyawa
alkohol sekunder dari senyawa keton ynag bersifat
green chemistry dengan mengandalkan enzim
dehidrogenase beserta koenzimnya yang berada di
dalam wortel. Semakin banyak biokatalis (wortel)
yang ditambahkan, maka semakin banyak jumlah
alkohol yang terbentuk.
1. SARAN
a. Dalam rencana ke depannya, akan
memanfaatkan sayur sayuran hasil bumi
Indonesia sebagai biokatalis reduksi untuk
memproduksi senyawa alkohol sekunder yang
merupakan fine chemical yang sangat penting.
b. Alkohol sekunder yang penting dalam industri
obat/farmasi adalah yang bersifat khiral, sehingga
penelitian ke depan akan melakukan bioreduksi
terhadap prokhiral keton, sehingga diperoleh
alkohol dengan persen enantiomeric excess yang
tinggi, hal ini karena reduksi menggunakan
biokatalis dari sayur sayuran bersifat
enantioselektif..
DAFTAR PUSTAKA
Lakshmi, Ch Sree., Goka Roopa Reddy, Adari
Bashkar Rao. 2011. Asymmetric Reduction of
Heteroaryl Methyl Ketones Using Daucus carota.
Journal of Green and Sustainable Chemistry, Vol.
1, pp. 117 122.
Turcu, M. C. 2010. Lipase Catalyzed Approaches
Toward Secondary Alcohols : Intermadiate for
Enantiopure Drug. Medica Odontologica, pp.
910.
Mangas-Snchez, J., Rodrguez-Mata, M., Busto, E.,
Gotor-Fernndez, V., Gotor, V. 2009.
Chemoenzymatic synthesis of rivastigmine based
on lipase-catalyzed processes. J. Org. Chem., Vol.
74, pp. 5304-5310.
Nakamura, K., Yamanaka, R., Matsuda, T., and
Harada, T. 2003. Recent Development in
Asymmetric Reduction of Ketones with Biocatalyst.
Journal of Tetrahedron : Asymmetry, Vol. 14, pp.
2659 2681.
Yang, Z-H., Rong Zeng, Gai Yang, Yu Wang, Li-Zhen
Li, Zao-Sheng Lv, Man Yao, Bin Lai. 2008.
Asymmetric Reduction of Prochiral Ketones to
Chiral Alcohols Catalyzed by Plants Tissue. J Ind
Microbiol Biotechnol, Vol. 35,pp. 1047 1051.