SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF III, TAHUN 2015

Produksi Lipase dari Acinetobacter baumannii Teramobil

1 2
I Putu Parwata , Made Vivi Oviantari
1*
Universitas Pendidikan Ganesha, Singaraja
2
Universitas Pendidikan Ganesha, Singaraja, Indonesia

email : iputuparwata@gmail.com

Abstrak
Lipase adalah enzim yang secara luas digunakan sebagai biokatalis dalam berbagai
industri. Enzim murni kurang ekonomis digunakan sebagai biokatalis karena harganya
sangat mahal, untuk itu penggunaan bakteri penghasil enzim yang diamobilisasi pada
bahan pendukung lebih menguntungkan. Pada penelitian ini, bakteri penghasil lipase
Acinetobacter baumannii yang diisolasi dari tanah terkontaminasi minyak di Pasar Anyar
Singaraja Bali diamobilisasi pada adsorben serbuk gergaji kayu. Tujuan penelitian adalah
untuk mengetahui karakter bakteri teramobil dilihat dari aktivitas lipase yang dihasilkan.
Adsorben diaktivasi menggunakan larutan CaCl2 dengan variasi konsentrasi (0-12,5% b/v).
Bakteri ditumbuhkan pada media produksi lipase dengan komposisi (% b/v): pepton (0,5),
ekstrak ragi (0,5), NaCl (0,1), CaCl2 (0,05), kemudian diamobilisasi pada adsorben.
Amobilisasi dilakukan dengan memvariasikan umur kultur (8-24 jam). Bakteri teramobil
kemudian diuji aktivitas lipasenya dan dikarakterisasi berdasarkan parameter-parameter:
pH, temperatur, stabilitas katalitik dan stabilitas dalam pelarut etanol dan metanol. Hasil
penelitian menunjukkan serbuk gergaji kayu yang diaktivasi dengan larutan CaCl 2 2,5%
memberikan hasil amobilisasi bakteri terbaik. Hasil amobilisasi optimal tercapai pada
penggunaan kultur dengan umur 20 jam. Bakteri teramobil menunjukkan aktivitas lipase
optimum pada pH 8 dan temperatur 45 °C dengan nilai sebesar 0,136 Unit/g. Bakteri
teramobil memiliki stabilitas yang baik, mampu mempertahankan aktivitasnya hingga 44,5%
setelah sepuluh kali pemakaian. Stabilitas bakteri teramobil lebih baik dalam pelarut metanol
dibandingkan etanol, sehingga sangat baik digunakan sebagai biokatalis dalam produksi
biodiesel.

Kata kunci: amobilisasi, serbuk gergaji kayu, Acinetobacter baumannii, lipase

Abstract
Lipase is an enzyme that is widely used as biocatalysts in various industries. The use of
pure enzyme as biocatalyst less economical because the price is very expensive, therefor
the use of enzyme-producing bacteria immobilized on a support material more profitable. In
this study, lipase-producing bacteria of Acinetobacter baumannii isolated from oil
contaminated soil in Pasar Anyar Singaraja Bali was immobilized on adsorbent of wood
sawdust. The research objective was to determine the character of immobilized bacteria
based on lipase activity produced. The adsorbent was activated by CaCl2 solution with
various concentrations (0 to 12.5% w/v). The bacteria were grown in lipase production media
with the composition of (% w/v): peptone (0.5), yeast extract (0.5), NaCl (0.1), CaCl 2 (0.05),
and then immobilized on the adsorbent. Immobilization is done by varying the culture age (8-
24 hours). Immobilized bacteria then tested its lipase activity and characterized by
parameters of: pH, temperature, catalysis stability and stability in ethanol and methanol. The
results showed wood sawdust activated with 2.5% CaCl 2 solution gives best results of
bacterial immobilization. Optimal immobilization achieved at the age of 20-hour culture.
Immobilized bacteria showed optimum lipase activity at pH 8 and temperature of 45 °C with
a value of 0.136 units/g. Immobilized bacteria has good stability, is able to maintain its
activity up to 44.5% after ten times of usage. Stability of immobilized bacteria is better in
methanol than ethanol, so it is best used as a biocatalyst in the production of biodiesel.

Keywords : immobilization, wood sawdust, Acinetobacter baumannii, lipase

1. Pendahuluan ester (transesterifikasi) dari lipid (trigliserida)

Lipase (triasilgliserol hidrolase, EC (Treichel dkk., 2010). Untuk itu, lipase banyak
3.1.1.3) adalah enzim yang dapat diaplikasikan sebagai biokatalis dalam industri
mengkatalisis reaksi hidrolisis dan sintesis seperti industri kosmetika, detergen, farmasi,
ikatan ester, serta reaksi pemindahan gugus

496

makanan, tekstil, serta aplikasi bioteknologi
(Eltaweel et al., 2005).
Lipase dihasilkan oleh mikroorganisme
seperti bakteri, fungi dan jamur. Lipase dari
mikroba banyak dimanfaatkan dalam industri
karena stabilitas, selektifitas dan spesifisitas
substratnya yang luas(Dutra dkk., 2008;
Griebeler dkk., 2009). Diantara mikroba,
bakteri merupakan penghasil lipase ekstrasel
terbaik. Beberapa spesies bakteri penghasil
lipase yang umum seperti: Bacillus subtilis, B.
pumilus, B. licheniformis dan B. alcalophilus
(Ephraim dkk., 2014). Bakteri dari genus
Acinetobacter, seperti: A. baumannii, A. baylyi,
dan A. junii juga dilaporkan mampu
menghasilkan lipase ekstrasel (Park dkk.,
2009 ; Uttatree dkk., 2010 ; Anbu dkk., 2011).
Untuk keperluan industri, dibutuhkan
lipase yang stabil dan dapat digunakan secara
berulang. Amobilisasi lipase pada media
pendukung dapat meningkatkan stabilitas dan
durabilitas enzim. Namun proses pemisahan
dan pemurnian yang komplek dan mahal dari
enzim yang akan diamobilisasi menjadikan
teknik ini kurang efisien (Zeng et al., 2006).
Untuk itu, amobilisasi sel mikroba penghasil
enzim pada material pendukung lebih menarik
dari aspek ekonomi. Dengan teknik ini, biaya
yang diperlukan untuk isolasi, pemurnian dan
amobilisasi enzim dapat dihilangkan (Fukuda
et al., 2009; Xiao et al., 2009).
Amobilisasi sel mikroba dapat
memudahkan dalam proses produksi enzim
serta dapat mempertahankan aktivitas
katalisisnya dalam waktu yang lama
(Indumathi dan Paul Raj, 2013).Amobilisasi sel
mikroba memberikan beberapa keuntungan,
antara lain banyak biomassa yang dihasilkan,
aktivitas metabolik sel yang tinggi, serta
ketahanan sel terhadap berbagai bahan toksik
(Cai et al., 2011; Liu et al., 2012).
Ada beberapa teknik yang dapat
dilakukan untuk mengamobilisasi sel mikroba,
yaitu adsorbsi, ikatan kovalen/ikatan silang,
penjebakandan enkapsulasi (Mallick, 2002).
Setiap teknik memiliki kelebihan dan
kekurangan masing-masing. Namun, untuk
tujuan efisiensi dan efektifitas perlu
diupayakan teknik imobilisasi sel mikroba yang
murah dan efektif.
Pada penelitian ini, Acinetobacter
baumanni yang diisolasi dari sampel tanah
terkontaminasi minyak di Pasar Anyar
Singaraja Bali diamobilisasi pada serbuk
gergaji kayu meranti. Bakteri diamobilisasi
dengan teknik adsorpsi. Bakteri teramobil
yang diperoleh memiliki stabilitas katalitik yang
baik.
2. Metode
2.1 Alat dan Bahan Penelitian
497
SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF III, TAHUN 2015
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian
ini meliputi:Erlenmeyer, cawan petri,
autoclave(Hirayama HVE-50), oven (Carbolite
R38), water bath(Memmert), pH Meter
(Thermo Orion model 710 A+),
Spektrofotometer (Genesys 20), Inkubator
bergoyang (New Brunswick Scientific Edison
C25KC), alat sentrifugasi (Thermo scientific
SL 16R), neraca analitik (Mettler Toledo AG
204, USA).
Bahan-bahan yang digunakan dalam
penelitian ini meliputi: ekstrak ragi, pepton,
tripton, NaCl, CaCl2, bacto agar,buffer fosfat
(pH 6,0–8,0), buffer glisin-NaOH (pH 8,5-
10,0), metanol, etanol, p-nitrofenil palmitat, p-
nitrofenol.
2.2 Isolasi dan IdentifikasiBakteri dari
Koloni dengan Potensi Lipolitik
Penelitian sebelumnya menemukan
sembilan koloni bakteri penghasil lipase dari
sampel tanah terkontaminasi minyak di Pasar
Anyar Singaraja, Bali (Parwata dan Sukarta,
2013). Pada penelitian ini, satu koloni diisolasi
mengikuti teknik yang dikemukakan oleh
Prescott (2002). Koloni diisolasi menggunakan
teknik gores (streak) menggunakan media
Luria Bertani (LB) minimum dengan komposisi
(% b/v): tripton (0,1), ekstrak ragi (0,1), NaCl
(0,1) dan bacto agar (2). Teknik ini diulangi
beberapa kali hingga diperoleh koloni yang
seragam (isolat tunggal).Isolat tunggal yang
diperoleh diidentifikasi menggunakan sistem
API (Analytical Profil Index) 20E.
2.3 Aktivasi Serbuk Gergaji Kayu
Serbuk gergaji kayu diaktivasi
menggunakan larutan CaCl2 pada variasi
konsentrasi (% b/v: 0 ; 2,5 ; 5 ; 7,5 ; 10 ; dan
12,5). Serbuk gergaji kayu direndam dalam
larutan CaCl2 dengan perbandingan 1:15 (v/v),
diinkubasi dalam inkubator bergoyang pada
temperatur 37 °C dengan kecepatan 150 rpm
selama 20 jam. Serbuk kemudian disaring dan
dicuci dengan akuadest untuk menghilangkan
sisa CaCl2, kemudian dikeringkan dan
disterilkan.
2.4 Amobilisasi Sel Bakteri pada Serbuk
Gergaji Kayu Teraktivasi
Bakteri ditumbuhkan dalam media
produksi lipase dengan komposisi (% b/v):
pepton (0,5), ekstrak ragi (0,5), CaCl2 (0,05),
dan NaCl (0,1). Inokulum diinkubasi dalam
inkubator bergoyang pada temperatur 37 °C
dan kecepatan 150 rpm pada waktu bervariasi
(8, 12, 16, 20, dan 24 jam).
Bakteri dalam kultur kemudian dipisahkan
dari cairan media dengan sentrifugasi pada
temperatur 4 °C dan kecepatan 10.000 x g
 SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF III, TAHUN 2015

selama 10 menit. Pelet bakteri kemudian 3. Hasil dan Pembahasan

diresuspensi menggunakan media segar. 3.1Hasil Identifikasi Bakteri Penghasil
Amobilisasi dilakukan dengan memasukkan Lipase
serbuk gergaji kayu pada suspensi bakteri (0,1 Hasil identifikasi bakteri isolat tanah
g serbuk gergaji dalam 10 mL suspensi terkontaminasi minyak di Pasar Anyar
bakteri), diinkubasi dalam inkubator bergoyang Singaraja, Bali ditunjukkan pada Tabel 1.
pada temperatur 30 °C dan kecepatan 90 rpm Berdasarkan hasil tersebut, bakteri termasuk
selama 180 menit. spesies Acinetobacter baumannii. Bakteri
Efektifitas amobilisasi ditentukan dengan termasuk kelompok gram negatif dengan sel
mengukur berat bakteri yang teradsorpsi pada berbentuk batang.
serbuk gergaji kayu dan aktivitas lipase yang
dihasilkan oleh bakteri teramobil. Berat bakteri Tabel 1. Hasil Identifikasi Bakteri dengan sistem API 20E
teradsorpsi ditentukan dengan mengukur nilai Uji Biokimia Hasil Uji Biokimia Hasil
Uji Uji
optical density (OD) suspensi bakteri sebelum ONPG (2-
dan setelah amobilisasi. Selisih nilai OD yang GLU (D-
nitrofenil-BD- - +
Glukosa)
dikalibrasi pada kurva OD terhadap berat Galaktopiranosida)
kering bakteri menunjukkan banyaknya bakteri MAN (D-
ADH (L-Arginin) - -
Manitol)
yang teradsorpsi pada media. LDC (L- Lisin) - INO (Inositol) -
Aktivitas lipase diuji menggunakan teknik SOR (D-
ODC (L- Ornitin) - -
spektrofotometri (Lee dkk., 1999). Emulsi Sorbitol)
substrat dibuat dengan mencampurkan larutan CIT (Trinatrium RHA (L-
+ -
sitrat) Rhamnosa)
p-nitrofenil palmitat (pNPP) 10 mM dengan H2S (Natrium SAC (D-
buffer dan etanol dengan perbandingan 1:95:4 - -
tiosulfat) Sakarosa)
(v/v/v). Reaksi dimulai dengan URE (Urea) -
MEL (D-
+
menambahkan0,01 g bakteri teramobil ke Melibiosa)
AMY
dalam 980 µL emulsi substrat, kemudian TDA (L- Triptofan) -
(Amigdalin)
-
diinkubasi pada temperatur tertentu selama 20 IND (L- Triptofan/ ARA (L-
- +
menit. Absorbansi produk katalisis diukur pada Indole) Arabinosa)
panjang gelombang 405 nm. Sebagai standar, VP (Natrium
- Ox (Oksidase) -
piruvat)
digunakan senyawa p-nitrofenol. Aktivitas GEL (Gelatin) + Katalase -
lipase dinyatakan dalam satuan unit/g yang Pewarnaan Gram negatif Bentuk sel batang
didefinisikan sebagai µmol produk (p- Sumber: Laboratorium klinik Nikki Medika, Denpasar
nitrofenol) yang dihasilkan oleh lipase per
menit per g bakteri teramobil. Bakteri dari genus Acinetobacter telah
dikembangkan untuk aplikasi dalam bidang
2.5 Karakterisasi Lipase yang Dihasilkan medis, lingkungan dan bioteknologi. Bakteri
oleh Bakteri Teramobil dari genus ini dapat dimanfaatkan dalam
Lipase yang dihasilkan oleh biodegradasi limbah organik maupun
bakteriteramobil dikarakterisasi berdasarkan anorganik, serta mampu menghasilkan produk
parameter-parameter:pH, temperatur, biomolekul seperti polisakarida, poliester,
stabilitas katalitik dan stabilitas dalam metanol biosurfaktan, dan lipase (El-Haleem, 2003).
dan etanol. Karakterisasi pH dilakukan dengan
mengukur aktivitas lipase bakteri teramobil 3.2 Pengaruh Aktivasi Serbuk Gergaji
pada 37 °Cmenggunakan 0,1 M buffer dengan Kayu terhadap Amobilisasi Bakteri
rentang pH 6,0-10,0. Karakterisasi temperatur Perlakuan serbuk gergaji kayu meranti
ditentukan dengan mengukur aktivitas lipase dengan larutan CaCl2 memberikan perubahan
pada berbagai temperatur dalam rentang 30– pada struktur permukaan dan pori-pori bahan.
60 °C. Hasil SEM (scanning electron microscopy)
Stabilitas katalitik bakteri teramobil terhadap serbuk gergaji kayu menunjukkan
ditentukan dengan mengukur aktivitas lipase perlakuan dengan larutan CaCl2 menyebabkan
sisa dari bakteri teramobil setelah pemakaian permukaan bahan menjadi rusak dan kasar
berulang selama 10 kali. Stabilitas bakteri (Gambar 1.B), sehingga terbentuk banyak
teramobil terhadap metanol dan etanol celah (pori) pada bahan. Sementara itu,
ditentukan dengan mengukur aktivitas lipase serbuk gergaji kayu yang tidak direndam
sisa setelah diinkubasi dalam larutan dengan larutan CaCl2 menunjukkan
alkoholdengan kadar 0-60 % (v/v) pada suhu permukaan yang lebih halus dengan sedikit
37 °C dan kecepatan 150 rpm selama 60 pori-pori kecil (Gambar 1.A).
menit.
(A)

498
 SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF III, TAHUN 2015

dan Jastrzębska, 2011). Hal ini didukung oleh

hasil analisis EDS (Energy Dispersive
Spectroscopy) yang menunjukkan keberadaan
3+ 4+ 2+
kation-kation Al , Si , dan Ca pada
permukaan bahan (data tidak ditunjukkan).
Keberadaan ion-ion bermuatan dapat
mengganggu atau melemahkan interaksi
hidrofobik maupun elektrostatik sel bakteri
dengan adsorben.

0.120

Berat Bakteri Teradsorpsi (g/g adsorben)

0,102

Aktivitas Spesifik lipase (Unit/g)

0.100 0,095
0,090 0,091
0,087 0,086
(B)
0.080 0,073 0,072
0,069 0,067
0,064
0,061
0.060

0.040

0.020

0.000
0 2,5 5 7,5 10 12,5
Konsentrasi CaCl2 (% b/v)

Gambar 2. Berat Bakteri Teradsorpsi ( ) dan Aktivitas

Gambar 1. Morfologi Permukaan Serbuk Gergaji Kayu
Meranti. SEM dilakukan dengan perbesaran
5.000 x pada serbuk yang tidak diaktivasi (A)
dan yang diaktivasi dengan 2,5% b/v larutan
CaCl2 (B)
Permukaan yang kasar dan porus dari
serbuk gergaji kayu yang diberikan perlakuan
CaCl2 cukup mendukung adsorpsi bakteri
pada bahan. Hasil amobilisasi Acinetobacter
baumannii (Gambar 2) menunjukkan ada
peningkatan jumlah bakteri yang teradsorpsi
pada serbuk gergaji kayu yang diaktivasi
dengan larutan CaCl2. Serbuk gergaji kayu
tanpa perlakuan CaCl2 mampu mengadsorpsi
bakteri sejumlah 0,061 g/g adsorben,
sedangkan yang diaktivasi dengan larutan
2,5% b/v CaCl2 mampu mengadsorpsi bakteri
sejumlah 0,071 g/g adsorben. Peningkatan
konsentrasi CaCl2 tidak meningkatkan
adsorpsi bakteri pada bahan, namun
cenderung menurun.
Bila dilihat dari perubahan struktur serbuk
gergaji kayu sebelum dan setelah aktivasi
dengan CaCl2 (Gambar 1), dapat diharapkan
bahan mampu mengadsorpsi lebih banyak
bakteri pada celah atau pori-pori bahan.
Namun, hasil penelitian menunjukkan bahan
kurang optimal mengadsorpsi bakteri. Hal ini
kemungkinan disebabkan permukaan pori dari
bahan kurang optimal mendukung adsorpsi sel
bakteri yang secara umum terjadi melalui
interaksi hidrofobik dan elektrostatik (Górecka
Lipase ( ) dari Bakteri Teramobil.
Aktivitas lipase bakteri teramobil (Gambar
2) sejalan dengan jumlah bakteri yang
teradsorpsi pada serbuk gergaji kayu. Aktivitas
lipase bakteri yang diamobilisasi pada serbuk
gergaji kayu tanpa diaktivasi CaCl2 sebesar
0,087 unit/g, meningkat menjadi 0,102 unit/g
untuk bakteri yang diamobilisasi pada bahan
yang diaktivasi dengan 2,5% (b/v) CaCl2.
Peningkatan konsentrasi CaCl2 pada aktivasi
adsorben tidak meningkatkan aktivitas lipase
bakteri teramobil.
3.3 Pengaruh Umur Kultur terhadap
Amobilisasi Bakteri
Umur kultur dapat mempengaruhi
amobilisasi bakteri. Hasil variasi umur kultur
terhadap amobilisasi Acinetobacter baumannii
ditunjukkan pada Gambar 3. Hasil tersebut
menunjukkan variasi umur kultur tidak
memberikan dampak signifikan terhadap
peningkatan jumlah bakteri yang teradsorpsi
pada serbuk gergaji kayu, tetapi memberikan
pengaruh nyata terhadap aktivitas lipase yang
dihasilkan oleh bakteri teramobil. Aktivitas
lipase bakteri teramobil meningkat dengan
peningkatan umur kultur dan mencapai
optimum pada umur kultur 20 jam dengan
aktivitas lipase sebesar 0,115 unit/g.

499
 SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF III, TAHUN 2015

Berat Bakteri Teradsorpsi (g/g adsorben) 0.140 0.12

Aktivitas Spesifik Lipase (Unit/g)

0.120 0,115 0.10
Aktivitas Spesifik lipase (Unit/g)

0,099
0.100 0.08
0,091
0,081 0,082
0.06
0.080 0,069 0,068
0,062 0,063
0,057 0.04
0.060
0.02
0.040
0.00
0.020 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 9,5 10
pH
0.000
8 12 16 20 24
Umur Kultur (Jam) Gambar 4. Aktivitas Lipase dari Bakteri Teramobil pada
Berbagai pH

Gambar 3. Berat Bakteri Teradsorpsi ( ) dan Aktivitas Beberapa hasil penelitian lipase dari
Lipase ( ) dari Bakteri Teramobil pada Variasi
umur kultur
bakteri genus Acinetobakter menunjukkan
aktivitas optimum pada pH basa. Park dkk.
Hasil ini menunjukkan bahwa aktivitas (2009) melaporkan hasil kloning dan ekspresi
lipase bakteri teramobil tidak hanya gen lipase dari Acinetobacter baumanni BD5
dipengaruhi oleh banyaknya sel bakteri yang pada E. coli BL21 menunjukkan aktivitas
teradsorpsi pada adsorben, namun yang lebih optimal pada pH 8,3. Lipase yang diperoleh
menentukan adalah keadaan fisiologi sel memiliki stabilitas pH dengan rentang yang
bakteri yang teradsorpsi. Pada umur kultur 20 sangat sempit, di atas dan di bawah pH
jam, bakteri berada pada keadaan fisiologi optimum aktivitas lipase langsung turun
yang optimum untuk menghasilkan lipase. secara signifikan. Pada penelitian ini, lipase
Secara umum lipase ekstraseluler dihasilkan dari Acinetobacter baumanni yang diperoleh
secara maksimal ketika pertumbuhan sel-sel dari sampel tanah terkontaminasi minyak di
bakteri mencapai akhir fase logaritma (Jaeger Pasar Anyar Singaraja memiliki stabilitas pH
dkk., 1994). Hal ini didukung oleh hasil dengan rentang yang lebih lebar (7,5–10),
penentuan kurva pertumbuhan Acinetobacter sehingga lebih baik digunakan sebagai
baumannii yang menunjukkan bakteri telah biokatalis.
melewati fase logaritma pada waktu inkubasi Hasil penelitian lainnya, Uttatree dkk.
12 jam (data tidak ditunjukkan). (2010) memperoleh lipase dari Acinetobacter
baylyi yang diisolasi dari lumpur laut di
3.4 Karakter Lipase yang Dihasilkan Oleh Angsila, Thailand. Lipase tersebut memiliki
Bakteri Teramobil aktivitas optimal pada pH 8,0 dan stabil pada
3.4.1 Pengaruh pH Terhadap Aktivitas rentang pH 6-9. Hasil penelitian Wang, dkk.
Lipase Bakteri Teramobil (2011) menunjukkan lipase dari Acenitobacter
Aktivitas spesifik lipase dari Acinetobacter johnsonii strain LP28 menunjukkan aktivitas
baumannii teramobil pada berbagai pH baik pada rentang pH 8-11 dengan nilai
ditunjukkan pada Gambar 4. Lipase dari optimum pada pH 9. Lipase-lipase tersebut
bakteri teramobil menunjukkan aktivitas yang memiliki karakter pH yang mirip dengan lipase
baik pada rentang pH basa (7,5-10), dan yang diperoleh dari Acinetobacter baumannii
mencapai nilai optimal pada pH 8 dengan nilai pada penelitian ini.
sebesar 0,097 unit/g. Aktivitas lipase turun
secara drastis pada lingkungan netral (pH 7,0) 3.4.2 Pengaruh Temperatur Terhadap
dan menjadi tidak aktif pada keadaan asam Aktivitas Lipase Bakteri Teramobil
(pH< 7). Berdasarkan karakter tersebut, lipase Gambar 5 menunjukkan aktivitas spesifik
yang dihasilkan oleh Acinetobacter baumannii lipase dari Acinetobacter baumannii teramobil
teramobil ini sangat baik dikembangkan untuk pada berbagai temperatur. Lipase yang
industri detergent. Lipase yang digunakan dihasilkan oleh bakteri teramobil menunjukkan
dalam detergen harus memiliki stabilitas yang aktivitas optimum pada temperatur 45 °C
baik dalam kondisi pencucian yang ekstrim dengan nilai sebesar 0,136 unit/g. Lipase
seperti pH 8-11, dan suhu 20-50 °C (Kasana, stabil pada rentang temperatur 30-50 °C. Pada
dkk., 2008). temperatur 55 °C, lipase dari bakteri teramobil
masih mampu mempertahankan aktivitasnya
hingga 49,8% dari nilai optimal, namun pada

500
 SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF III, TAHUN 2015

temperatur lebih tinggi (60 °C) aktivitas lipase bakteri teramobil turun secara signifikan,
turun secara drastis hingga 73,3% dari namun masih menunjukkan aktivitas sebesar
aktivitas optimum. 45% setelah sepuluh kali katalisis.
Berdasarkan hasil uji tersebut, disarankan
bakteri teramobil digunakan untuk tujuh kali
0.16
proses katalisis.
Aktivitas Spesifik Lipase (Unit/g)

0.14

0.12 120

Aktivitas Residu Lipase (%)

100 98
0.10 100 91

0.08 77
80 72
66 63
0.06
60 47 46 45
0.04
40
0.02
20
0.00
30 35 40 45 50 55 60 0
Temperatur (oC) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Proses Katalisis ke-
Gambar 5. Aktivitas Lipase dari Bakteri Teramobil pada
Berbagai Temperatur Gambar 6. Aktivitas Residu Lipase dari Bakteri Teramobil
Setelah Proses Katalisis Berulang

Beberapa lipase dari Acinetobacter

memiliki aktivitas optimum pada temperatur Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa
relatif rendah. Lipase dari Acinetobacter amobilisasi bakteri dapat meningkatkan
baumannii BD5 yang dikloning pada E.coli stabilitas bakteri maupun enzim yang
BL21 menunjukkan aktivitas optimum pada dihasilkannya, sehingga dapat digunakan
temperatur 35 °C dan stabil pada rentang untuk mengkatalisis reaksi secara berulang.
temperatur 20-50 °C (Park dkk., 2009). Lipase Penelitian amobilisasi bakteri lainnya,
dari Acinetobacter junii yang diisolasi dari Aspergillus niger yang diamobilisasi pada
tanah terkontaminasi minyak di Korea selatan alginat mampu mempertahankan aktivitas
menunjukkan aktivitas optimum pada lipase yang dihasilkannya hingga empat kali
temperatur 30 °C (Anbu dkk., 2011). proses katalisis (Chandorkar dkk., 2014).
Sementara itu, lipase yang dihasilkan dari Penelitian Bisht dkk. (2013) menunjukkan
Acinetobacter baylyi yang diisolasi dari lumpur amobilisasi sel mutan Pseudomonas
laut di Angsila Thailand menunjukkan aktivitas aeruginosai pada agarosa mampu
optimum pada temperatur relatif tinggi, yaitu menghasilkan lipase dengan aktivitas stabil
60 °C. Namun pada temperatur di bawah dan hingga tujuh kali siklus produksi. Pada
di atas nilai optimum, aktivitas lipase langsung penelitian ini, Acinetobacter baumanni
turun secara drastis (Uttatree dkk., 2010). diamobilisasi pada adsorben dari bahan alami
Dapat dikatakan bahwa lipase yang yang melimpah dan murah, sehingga secara
diperoleh dari Acinetobacter baumannii pada ekonomi lebih menguntungkan.
penelitian ini memiliki stabilitas temperatur
yang mirip dengan lipase-lipase dari 3.4.4 Stabilitas Bakteri Teramobil dalam
Acinetobacter lainnya, namun temperatur Alkohol
optimumnya berbeda. Stabilitas terhadap Stabilitas Acinetobacter baumannii
temperatur yang cukup lebar ini sangat teramobil terhadap etanol dan etanol
mendukung bagi aplikasi lipase sebagai ditunjukkan pada Gambar 7. Dari hasil
biokatalisator. tersebut terlihat bahwa bakteri teramobil
memiliki stabilitas yang lebih baik terhadap
3.4.3 Stabilitas Katalitik Bakteri Teramobil metanol dibandingkan etanol. Bakteri
Hasil pengujian stabilitas Acinetobacter teramobil masih mampu mempertahankan
baumannii teramobil setelah proses katalisis aktivitas lipasenya hingga 93% setelah
secara berulang ditunjukkan pada Gambr 6. diinkubasi selama satu jam dalam pelarut
Hasil tersebut menunjukkan bahwa bakteri metanol 20% (v/v), namun pada pelarut etanol
teramobil memiliki stabilitas katalitik yang baik. aktivitas lipasenya turun menjadi 58% dari
Bakteri teramobil masih mampu aktivitas tanpa alkohol. Pada konsentrasi
mempertahankan 63% aktivitas lipasenya alkohol 40% (v/v), bakteri teramobil masih
setelah tujuh kali proses katalisis. Setelah mampu menunjukkan aktivitas lipase hingga
tujuh kali proses katalisis, aktivitas lipase 55% setelah diinkubasi dalam pelarut metanol,

501

sedangkan dalam pelarut etanol aktivitasnya
turun drastis dan hanya tersisa 13% dari
aktivitas awal. Pada konsentrasi alkohol 60%
(v/v), aktivitas lipase dari bakteri teramobil
turun drastis setelah inkubasi baik pada
pelarut etanol maupun metanol, namun pada
pelarut metanol aktivitas lipasenya lebih tinggi
dibandingkan pada pelarut etanol.
120
Aktivitas Residu Lipase (%)
100 100
100
80
58
60
40
20
0
0 20
Kadar Alkohol (% v/v)
Gambar 6. Aktivitas Residu Lipase dari Bakteri Teramobil
Setelah Diinkubasi dalam Etanol ( ) dan
Metanol ( ) pada Berbagai Konsentrasi.
Toksisitas pelarut organik terhadap
bakteri tergantung pada kadar pelarut yang
masuk ke dalam membrane sel bakteri. Hal ini
dipengaruhi oleh kelarutannya dalam air dan
kemampuan partisinya ke dalam membrane
sel yang bersifat hidrofobik (de Bont, 1998).
Pelarut yang lebih polar (hidrofilik) umumnya
akan lebih sulit masuk dalam lingkungan non
polar (hidrofobik). Metanol lebih polar
dibandingkan etanol, sehingga lebih sulit untuk
masuk ke dalam membran sel bakteri yang
bersifat non polar. Hal ini menyebabkan
bakteri lebih tahan terhadap metanol
dibandingkan etanol, sehingga mampu
menghasilkan lipase lebih banyak.
Berdasarkan stabilitas alkohol yang
dimiliki, Acinetobacter baumannii teramobil
yang diperoleh dalam penelitian ini potensial
dikembangkan sebagai biokatalis dalam
produksi biodiesel. Produksi biodiesel
dilakukan dengan mereaksikan minyak nabati
dengan alkohol (metanol atau etanol),
sehingga diperlukan biokatalis yang stabil
dalam pelarut alkohol.
4. Simpulan
Acinetobacter baumannii isolat tanah
terkontaminasi minyak di Pasar Anyar
Singaraja, Bali dapat diamobilisasi pada
serbuk gergaji kayu meranti yang diaktivasi
dengan larutan CaCl2. Bakteri teramobil
mampu menghasilkan lipase yang stabil pada
pH basa (7,5-10) serta temperatur sedang (30-
50 °C), sehingga sangat potensial
dimanfaatkan dalam industri detergen. Bakteri
SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF III, TAHUN 2015
teramobil memiliki stabilitas katalitik dan
stabilitas dalam pelarut metanol yang baik,
sehingga dapat dikembangkan sebagai
biokatalis dalam produksi biodiesel.
5. Ucapan Terima Kasih
Ucapan terima kasih disampaikan kepada
Universitas Pendidikan Ganesha yang telah
memberikan bantuan dana untuk
penyelesaian penelitian ini.
93 6. Daftar Pustaka
Anbu, P., Noh, M.J., Kim,, D-H., Seo, J-S., Hur, B-
55
K., dan Min, K.H. (2011). Screening and
optimization of extracellular lipases by
26 Acinetobacter species isolated from oil-
13 12 contaminated soil in South Korea. African
Journal of Biotechnology, 10(20): 4147-4156
40 60
Bisht, D., Yadav, S.K., Darmwal, N.S. (2013).
Optimization of immobilization conditions by
conventional and statistical strategies for
alkaline lipase production by Pseudomonas
aeruginosa mutant cells: scale-up at bench-
scale bioreactor level. Turkish Journal of
Biology, 37: 392-404
Cai T, Chen L, Ren Q, Cai S, Zhang J. (2011). The
biodegradation pathway of triethylamine and
its biodegradation by immobilized Arthrobacter
protophormiae cells. J. Hazard Mater, 186:59-
66
Chandorkar, V., Gomashe, A. V., dan Parlewar, S.
(2014). Production of lipase by Immobilized
Cells of Aspergillus niger. International Journal
of Current Microbiology and Applied Sciences,
3(8): 703-707
de Bont, J.A. (1998). Solvent-tolerant bacteria in
biocatalysis.Trends Biotechnology, 16: 493–
499
Dutra, J. C. V., Terzi, S. C., Bevilaqua, J. V.,
Damaso, M. C. T., Couri, S., Langone, M. A.
P., et al. (2008). Lipase production in
solidstate fermentation monitoring biomass
growth of Aspergillus niger using digital image
processing. Applied Biochemistry and
Biotechnology, 147: 63–75
El-Haleem, D. A. (2013). Acinetobacter:
Environmental and biotechnological
applications. African Journal of Biotechnology,
2(4): 71-74
Eltaweel, M. A., Rahman, R. N. Z. R. A., Salleh, A.
B., Basri, M. (2005). An Organic Solvent-
Stable Lipase From Bacillus sp. Strain 42.
Annals of Microbiology, 55(3): 187-192
Ephraim, D.P., Bhat, S.G., dan Muthuswamy, C.
(2014). Lipase production by Immobilized
marine Bacillus smithii BTMS11 and its
502

potential application in waste water treatment.
International Journal of Current Biotechnology,
2(12): 1-8
Fukuda H, Kondo A, Tamalampudi S. (2009).
Bioenergy: sustainable fuels from biomass by
yeast and fungal whole-cell biocatalysts.
Biochemical Engineering Journal, 44: 2–12
Górecka E, Jastrzębska M. (2011). Immobilization
techniques and biopolymer carriers.
Biotechnol. Food Sci. 75:65-86
Griebeler, N., Polloni, A.E., Remonatto, D., Arbter,
F., Vardanega, R., Cechet, J.L., dkk. (2009).
Isolation and screening of lipase-producing
fungi with hydrolytic activity. Food and
Bioprocess Technology, 4:578–586
Indumathi, R., Paul Raj, S. (2013). Biodiesel
production from microbial whole cell
biocatalyst. Journal of Biodiversity and
Environmental Sciences, 3(8): 94-101
Jaeger, K. E., Ransac, S., Dijkstra, B. W., Colson,
C., Heuvel, M. V., dan Misset, O. (1994).
Bacterial Lipases, FEMS Microbiology
Reviews, 15: 29-63
Kasana, R.C., Kaur, B., Yadav, S.K. (2008).
Isolation and identification of a psychrotrophic
Acinetobacter sp. CR9 and characterization of
its alkaline lipase, Journal ofBasic
Microbiology,48: 207–212
Lee, D., Koh, Y., Kim, K., Kim, B., Choi, H., Kim, D.,
Suhartono, M. T. dan Pyun, Y. (1999).
Isolation and Characterization of Thermophilic
Lipase from Bacillus thermoleovorans ID-1,
FEMS Microbiology Letters, 179: 393-400
Liu, H., Guo, L., Liao, S., Wang, G. (2012).
Reutilization of immobilized fungus Rhizopus
sp. LG04 to reduce toxic chromate. Journal of
Applied Microbiology, 112:651-659
Mallick, N., 2002. Biotechnological potential of
immobilized algae for wastewater N, P and
metal removal: a review. BioMetals 15:377-
390.
Park, I.H., Kim, S.H., Lee, Y.S., Lee, S.C., Zhou, Y.,
Kim, C.M., Ahn, S.C., Choi, Y.L. (2009). Gene
Cloning, Purification, and Characterization of a
Cold-Adapted Lipase Produced by
503
SEMINAR NASIONAL RISET INOVATIF III, TAHUN 2015
Acinetobacter baumannii BD5. Journal of
Microbiology Biotechnology, 19(2): 128–135
Parwata, I P. dan Sukarta, I N. (2013). Lipase Stabil
Pelarut Organik dari Bakteri Isolat Tanah
Terkontaminasi Minyak di Pasar Anyar
Singaraja, Bali. Prosiding Seminar Nasional
Riset Inovatif I, hal. 573-579, Universitas
Pendidikan Ganesha, Singaraja, 21-22
Nopember 2013
Prescott, H. (2002). Laboratory Exercises in
Microbiology (Fifth Edition). The McGraw-Hill
Companies
Treichel, H., Oliveira, D., Mazutti, M.A., Luccio,
M.D., Oliveira, J.V. (2010). A Review on
Microbial Lipases Production.Food Bioprocess
Technology, 3:182–196
Uttatree, S., Winayanuwattikun, P., dan
Charoenpanich, J. (2010): Isolation and
Characterization of a Novel Thermophilic-
Organic Solvent Stable Lipase From
Acinetobacter baylyi.Applied Biochemistry
Biotechnology, Published online: 24
February 2010
Wang, H.K., Shao, J., Wei, Y.J., Zhang, J., dan Qi,
W. (2011). A Novel Low-Temperature Alkaline
Lipase from Acinetobacter johnsonii LP28
Suitable for Detergent Formulation. Food
Technology Biotechnology, 49(1): 96–102
Wang, H., Zhong, S., Ma, H., Zhang, J., Qi, W.
(2012). Screening And Characterization Of A
Novel Alkaline Lipase From Acinetobacter
Calcoaceticus 1-7 Isolated From Bohai Bay In
China For Detergent Formulation. Brazilian
Journal of Microbiology, 148-156
Xiao, M., Mathew, S., Obbard, J.P. (2009).
Biodiesel fuel production via transesterification
of oils using lipase biocatalyst. GCB
Bioenergy,1: 115–125
Zeng, J., Du, W., Liu, X., Dai, L. (2006). Study on
the effect of cultivation parameters and
pretreatment on Rhizopus oryzae cell-
catalyzed transesterification of vegetable oils
for biodiesel production. Journal of Molecular
Catalysis B: Enzymatic, 43: 15–18