Farmaka

Volume 16 Nomor 2 135

ARTIKEL TINJAUAN: ANTIOKSIDAN UNTUK KULIT

Ani Haerani, Anis Yohana Chaerunisa, Anas Subarnas

Program Studi Pascasarjana Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran, Bandung
Jl. Raya Bandung, Sumedang Km 21 Jatinangor 45363
nie_ermo@yahoo.com

ABSTRAK

Antioksidan adalah molekul yang dapat menghambat oksidasi molekul lain. Antioksidan dapat
melindungi kulit dari berbagai kerusakan sel akibat radiasi UV, antipenuaan dan perlindungan
dari ROS. Antioksidan banyak digunakan sebagai produk perawatan kulit / kosmetik. Ada 3 jenis
kosmetik antioksidan yaitu antioksidan endogen, eksogen dan tanaman. Tanaman adalah
antioksidan alami yang banyak digunakan sebagai produk perawatan kulit karena memiliki efek
samping yang lebih sedikit dan aman. Dalam formulasi antioksidan perlu diperhatikan mengenai
stabilitas, kompatibiliitas dan penetrasi supaya sediaan yang dihasilkan stabil, dan mudah
berpenetrasi ke dalam kulit untuk mencapai jaringan target dalam bentuk aktif dan bertahan lama
dikulit agar mendapatkan hasil yang diharapkan. Review ini bertujuan untuk memberikan
informasi mengenai manfaat antioksidan, formulasi terutama pada mekanisme penghantarannya
ke dalam kulit dan pengujian aktivitas antioksidan.

Kata Kunci: Antioksidan untuk kulit, manfaat antioksidan, kosmetik antioksidan, formulasi

ABSTRACT

Antioxidants are molecules that can inhibit the oxidation of other molecules. Antioxidants can
protect the skin from various cell damage caused by UV radiation, antiaging and protection from
ROS. Antioxidants are widely used as skin care / cosmetic products. There are 3 types of
antioxidant cosmetics that are endogenous, exogenous and plant antioxidants. Plants are natural
antioxidants that are widely used as skin care products because they have fewer side effects and
are safe. In the formulation of antioxidants, it is necessary to consider the stability, compatibility
and penetration so that the resulting dosage is stable, and easily penetrate into the skin to reach
the target tissue in active and durable form of skin to obtain the expected results. This review
focuses on the benefits of antioxidants, formulations especially on their delivery mechanisms into
the skin and testing of antioxidant activity.

Keywords: Antioxidant for skin, antioxidant efficacy, antioxidant cosmetic, formulation

Diserahkan: 28 Juni 2018, Diterima 5 Agustus 2018

PENDAHULUAN terhadap pengaruh lingkungan, serta dapat

Kulit adalah organ tubuh yang merupakan cermin bagi kesehatan seseorang
terletak paling luar dan terbesar pada (Brodell & Rosenthal, 2008). Perawatan dan
manusia, berfungsi sebagai lapisan pemeliharaan yang baik terhadap kulit
penghalang untuk untuk melindungi tubuh menjadikan penampilan kulit seseorang akan
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 136

tampak sehat, terawat dan memancarkan Produksi radikal bebas meningkat seiring
kesegaran. Kulit memiliki struktur jaringan bertambahnya usia sementara mekanisme
epitel yang kompleks, bersifat elastis, pertahanan endogen yang menghambatnya
sensitif serta mempunyai jenis dan warna menurun. Ketidakseimbangan ini mengarah
yang bervariasi bergantung pada iklim, ras, pada kerusakan progresif struktur seluler
jenis kelamin dan umur (Lai-Cheong & sehingga menghasilkan penuaan yang
McGrath, 2017). dipercepat (Allemann & Baumann, 2008).
Paparan kronis terhadap radiasi UV Antioksidan adalah zat yang bisa
menimbulkan banyak efek samping pada memberi perlindungan endogen dan tekanan
kulit, seperti penuaan dini, kanker kulit dan oksidatif eksogen dengan menangkap radikal
penurunan kemampuan respon imun. bebas (Lai-Cheong & McGrath, 2017;
Masalah kesehatan inisecara langsung Allemann & Baumann, 2008). Antioksidan
berkaitan dengan pembentukan spesies merupakan molekul yang mampu
oksigen reaktif (ROS) oleh radiasi UV (Jain, menghambat oksidasi molekul lain.
S.K., Jain, 2010). Banyak tanaman yang berkhasiat
Mekanisme pertahanan antioksidan sebagai antioksidan yaitu tanaman yang
pada kulit bisadipengaruhi oleh ROS; ketika mengandung karotenoid dan polifenol
mekanisme pertahanan tidak seimbang, stres terutama flavonoid sehingga banyak
oksidatif dapat merusak membran sel, diformulasikan sebagai antioksidan alami
protein, karbohidrat dan asam nukleat yang yang dapat dibuat dalam bentuk sediaan oral
memicu oksidasi (Reis Mansur et al., sebagai vitamin dan topikal sebagai produk
2016)(Galvez, 2010). perawatan kulit.
Pembentukan radikal bebas adalah Ekstrak tumbuhan dengan
mekanisme penting yang diterima secara antioksidan membangkitkan minat yang
luas yang menyebabkan penuaan kulit. besar dalam bidang fitokosmetik seperti
Radikal bebas memiliki molekul reaktif menyajikan molekul yang dapat
sangat tinggi dengan elektron tak menonaktifkan ROS memulihkan kulit
berpasangan yang dapat secara langsung homeostasis sehingga mencegah eritema dan
merusak berbagai struktur membran seluler, penuaan dini pada kulit (Calderon-Montano
lipid,protein, dan DNA. Efek merusak dari et al., 2011; Mansur et al., 2012).
senyawa oksigen reaktif ini diinduksi secara Vitamin dan antioksidan memiliki
internal selama metabolisme normal dan popularitas besar sebagai bahan dasar dalam
eksternal melalui berbagai tekanan oksidatif. produk sediaan topikal, dimana produk harus
Farmaka
Volume 16 Nomor 2
dapat mencegah penuaan dan menjaga kulit
dalam kondisi yang menyenangkan. Banyak
zat, dengan struktur kimia yang lebih atau
kurang kompleks, telah ditemukan memiliki
aktivitas antiradikal dan telah diperkenalkan
ke pasar sebagai produk anti penuaan (Ratz-
Lyko, Arct, & Pytkowska, 2012).
Dalam review ini akan dibahas
tentang manfaat antioksidan untuk kulit,
jenis – jenis antioksidan endogen dan
antioksidan eksogen, antioksidan dari bahan
alam, tantangan dan strategi formulasi
antioksidan beserta metode pengujian
aktivitas antioksidan secara in vitro dan in
vivo.
Manfaat Antioksidan Untuk Kulit
Radikal bebas yang dihasilkan
senyawa oksigen dan nitrogen merupakan
salah satu penyebab utama penuaan akibat
gangguan regulasi metabolisme pernafasan
sel melibatkan pengurangan oksigen yang
tidak lengkap di mitokondria dan produksi
anion superoksida, radikal hidroksil.
Antioksidan berfungsi untuk menghambat
reaksi radikal bebas.
Antioksidan memiliki banyak
manfaat untuk kesehatan kulit yaitu sebagai
antipenuaan, perlindungan dari ROS akibat
stress oksidatif dan perlidungan dari UV.
Antipenuaan
137
Penuaan adalah proses fisiologis
kompleks yang terkenal danselalu disertai
dengan terjadinya kehilangan memori
progresif, demensia, disfungsi kognitif,
skizofrenia, parkinson, penyakit Alzheimer
dan sebagainya (Lan et al., 2012). Stres
oksidatif memainkan peran pentingdalam
proses penuaan. Oksidasi yang tepat sangat
penting bagi organisme untuk produksi
energi proses metabolisme biologis. Namun,
stres oksidatif yang berlebihan, akibat
ketidakseimbangan antara sistem pertahanan
antioksidan dan produksi radikal bebas tidak
terkontrol yang berasal dari oksigen, dalam
metabolisme energi dapat menyebabkan
mutasi dan pada akhirnya dapat
menyebabkan terjadinya banyak penyakit
kronis (Zhong et al., 2013).
Asupan antioksidan, baik dari diet
atau dari suplementasi bermanfaat untuk
mengendalikan tingkat penuaan otak dan
memperpanjang rentang hidup. Ada dua
kategori dasar antioksidan : sintetis dan
alami. Penggunaan antioksidan sintetik
dibatasi karena efek sampingnya. Oleh
karena itu, banyak perhatian yang diberikan
untuk menemukan antioksidan alami dari
tanaman yang dapat menghasilkan banyak
antioksidan untuk mengendalikan stres
oksidatif disebabkan oleh sinar matahari dan
oksigen dan dapat menjadi sumber senyawa
baru dengan aktivitas antioksidan (Jain &
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 138

Agrawal, 2008)dengan sifat yang efektif dan epidermal seperti melanin dan asam
aman untuk menghambat proses penuaan. urokanik dan timbal untuk mengarahkan
kerusakan molekuler sekaligus
Perlindungan dari ROS menghasilkan ROS. Dengan adanya H2O2,
Jaringan hidup memiliki mekanisme radiasi UVB mengarah pada pembentukan
•
kontrol untuk menjaga keseimbangan ROS. OH yang menyebabkan kerusakan DNA.
Saat ROS dihasilkan secara invivo, banyak Sinar UVA (320-400 nm) menembus
antioksidan ikut bermain. Kepentingan lebih dalam dermis, meningkatkan produksi
relatif antioksidan tergantung pada ROS ROS, dan berkontribusi pada kerusakan
mana yang dihasilkan, bagaimana dan di jangka panjang. Baik UVA dan UVB
mana mereka dihasilkandan target kerusakan menginduksi aktivasi berbagai faktor
dianggap (Halliwell, 2007). Tubuh kita transkripsi pada sel kulit, termasuk NF-kB
bertahan terhadap fenomena ROS melalui (faktor transkripsi yang terlibat dalam
antioksidan endogen namun saat antioksidan respons stres peradangan dan seluler), yang
endogen menjadi tidak mencukupi atau tidak pada gilirannya dapat meningkatkan
seimbang dalam pertahanan terhadap produksi matriks metaloproteinase (MMPs),
oksidan, antioksidan eksogen dapat kelompok enzim yang menurunkan kolagen
membantu mengembalikan keseimbangan. dan elastin. Kulit terus dipengaruhi oleh
Antioksidan menghambat produksi faktor lingkungan dan terutama radiasi UV.
ROS dengan cara membelah langsung, Di kulit, radikal bebas yang disebabkan oleh
menurunkan jumlah oksidan di dalam dan di radiasi UV dapat menyebabkan kerusakan
sekitar sel, mencegah ROS untuk mencapai DNA dan untuk protein dapat mengacaukan
target biologisnya, membatasi penyebaran membran keratinosit sehingga menyebabkan
oksidan seperti yang terjadi selama penuaan sel kulit prematur. Saat terkena
peroksidasi lipid dan menggagalkan stres radiasi UV, kulit mengalami perubahan yang
oksidatif sehingga mencegah penuaan mengakibatkan radang, photoaging, dan
(Pouillot et al., 2011). berbagai kelainan kulit. photoaging kulit
disertai kerutan, kehilangan elastisitas,
Perlindungan dari UV meningkatnya kerapuhan kulit, dan
UV (180-400 nm) menyebabkan penyembuhan luka yang lebih lambat.
kerusakan beberapa sel, menghasilkan 1O2, Antioksidan dapat menghalangi
•
OH, H2O2, dan ROS lainnya. Sinar UVB pembentukan oksigen reaktif yang diinduksi
(290-320 nm) diserap oleh kromofor oleh sinar UVdan selanjutnya
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 139

mempotensiasi anti-inflamasi dan aktivitas Antioksidan Eksogen

antipenuaan (Oresajo et al., 2008). Vitamin E (tokoferol) adalah salah
satu antioksidan yang lebih dikenal
Kategori Antioksidan digunakan dalam formulasi perawatan kulit.
Antioksidan Endogen Ada delapan isoform aktif antioksidan
Antioksidan endogen pada dasarnya lipofilik, yang hadir dalam berbagai
adalah enzim yang secara katalitik makanan, seperti sayuran, biji-bijian, dan
menghilangkan oksidan. Antioksidan daging.
endogen mayor adalah superoksida α-Tokoferol adalah isoform yang
dismutase, superoksida reduktase, katalase, paling aktif secara biologiyang ditunjukkan
dan glutation peroksidase. Enzim ini oleh efek proteksi setelah aplikasi topikal
memainkan peran kunci dalam mengurangi mampu mengurangi jumlah sel-sel sunburn
kandungan oksidan dan mencegah kerusakan dan kerusakan imbas UVB dan menghambat
oksidatif. Molekul antioksidan endogen fotokarsinogenesis.
lainnya, seperti hemeoksigenase dapat Banyak penelitian menunjukkan
meminimalkan ketersediaan oksidan. kemampuan vitamin E secara topikal dan
Enzim ini sangat diinduksi oleh stres turunannya dapat menghambat peroksidasi
oksidatif dan menghilangkan oksidan (heme) lipid yang diinduksi oleh radiasi UV dan
sekaligus menghasilkan antioksidan beberapa peneliti telah menyarankan
(bilirubin 1O2) dan prooksidan (zat besi)). efektivitas vitamin E sebagai anti-penuaan.
Selain itu, tingkat feritin yang tinggi Investigasi lebih lanjut
menghasilkankapasitas pemulungan besi mengungkapkan bahwa kombinasi dua atau
yang meningkat yang dapat diberikan oleh lebih antioksidan dapat meningkatkan
peningkatan resistensi terhadap stres efektivitas sehingga memberikan
oksidatif. Tingkat dan komposisi molekul fotoproteksi yang lebih baik seperti yang
antioksidan endogen berbeda dari jaringan ditunjukkan untuk kombinasi vitamin E dan
ke jaringan dan dengan jenis sel. Kedua sel C (Montenegro, 2014).
induk embrionik dan dewasa terekspresikan Antioksidan Dari Tanaman
pada tingkat tinggi enzim antioksidan, yang Tanaman menghasilkan banyak
menurun seiring sel yang membedakan. antioksidan untuk mengendalikan stres
Molekul antioksidan endogen sering oksidatif disebabkan oleh sinar matahari dan
meningkat setelah terpapar oksidan. oksigen dan dapat menjadi sumber senyawa
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 140

baru dengan aktivitas antioksidan (Jain & kelompok penting dari senyawa antioksidan.
Agrawal, 2008). Polifenol terbesar adalah flavonoid
Asupan antioksidan alami dapat (flavonol, flavon, flavanon, antosianidin, dan
menurunkan risiko kanker, penyakit isoflavonoid) banyak digunakan dalam
kardiovaskular, diabetes dan penyakit yang produk perawatan kulit.
berhubungan dengan penuaan (Jain & Flavonoid, stilben dan terpen (Tabel
Agrawal, 2008). 1) membantu mencegah stres oksidatif sel
Sebagian besar fitoantioksidan ekstraselular sehingga memperlambat
mengandung senyawa polifenol atau terpen penuaan kulit.
(Gambar 1). Karotenoid dan polifenol adalah

Gambar 1. Fitoantioksidan dengan kategori polifenol dan terpen dengan subkategori flavonoid,
stilben, karotenoid, dan minyak esensial (Pouillot et al., 2011).
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 141

Tabel 1. Tiga Family Fitoantioksidan Dengan Sumber Dan Efek Masing-Masing

Flavonoid Antosianidin Antosian Blueberry : (Nakajima,
menghambat radikal Tanaka, Seo,
bebas dan lipid Yamazaki, &
peroksidasi Saito, 2004)
Flavanol Katekin Teh hijau, biji anggur, (Afaq & Mukhtar,
lengkeng : menghambat 2006)
produksi H2O2 yang
diinduksi oleh UV;
melindungi
sistem antioksidan
endogen
Flavonol Kuersetin Teh hijau, blueberry, (Kahraman A,
biji anggur, apel : 2002)
melindungi sistem
antioksidan di kulit
Isoflavon Genistein Gingko biloba : (Nakajima et al.,
meningkatkan aktivitas 2004; Rigano et
antioksidan endogen al., 2009)
Flavanon Silimarin Milk thistle : (Baliga &
menghambat Katiyar, 2006)
peroksidasi lipid,
membantu regenerasi
sel
Stilben Resveratrol Anggur, buah beri : (Baliga &
menghambat Katiyar, 2006)
produksi H2O2 dan
peroksidasi lipid
1
Terpen Karotenoid Likopen Menetralkan O2 : (Andreassi,
menangkap radikal Stanghellini,
bebas dan mengurangi Ettorre, Di
peroksidasi lipid Stefano, &
Andreassi, 2004)

Tantangan Formulasi Antioksidan

Stabilitas (da Silva, Ferreira, Pintado, & Sarmento,
Stabilitas antioksidan dapat 2016;Zhang et al., 2012).
dipengaruhi oleh cahaya, pH, suhu dan Asam ferulik adalah antioksidan
oksigen serta dapat bereaksi dengan senyawa tanaman yang kuat. Penggabungannya ke
lain, maka pada proses manufaktur dalam formulasi topikal dari 15% asam L-
antioksidan harus secara hati-hati supaya askorbatdan 1% α-tocoferol dapat
tidak mempengaruhi stabilitas antioksidan meningkatkan stabilitas kimia vitamin (C
dan E)(Lin et al., 2005).
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 142

Selain itu, vitamin C (asam askorbat Misalnya, larutan vitamin C harus

dan turunannya), vitamin E (tokoferol dan diformulasikan pada pH 3,5 atau lebih
turunannya), koenzim Q dan turunannya, rendah sehingga vitamin C lebih mudah
GSH dan prekursor seperti derivatif sistein terserap ke dalam kulit; pada pH ini, vitamin
(N-asetil sistein) dan asam lipoik juga dapat C terprotonasi, dan molekul tidak bermuatan
dibuat ke dalam formulasi sediaan topikal. (9).
Konsentrasi formulasi di
Kompatibilitas maksimalkan untuk penyerapan perkutan.
Kompatibilitas adalah perhatian Selama 3 hari, 15 % asam L-askorbat berada
utama dalam formulasi antioksidan, karena di jaringan kulit, kemudian pada hari ke-4
kompatibilitas dapat mempengaruhi terpenetrasi ke dalam kulit. Begitu berada di
kelarutan dan viskositas sediaan (Costa & dalam kulit, maka tidak bisa dihilangkan
Santos, 2017). dengan mencuci atau menggosok (Pinnell et
Antioksidan kurang stabil pada pH al., 2001). Vitamin C dan E akan
netral atau alkali; stabilitasnya ditingkatkan berinteraksi secara sinergis untuk
pada pH asam (Oresajo, Pillai, Manco, melindungi satu sama lain dan meningkatkan
Yatskayer, & Mcdaniel, 2012). efektivitas aktivitas antioksidan.
Sebagian besar antioksidan yang
larut dalam air asam (misalnya, asam Strategi Formulasi Antioksidan
askorbat dan polifenol tanaman) lebih stabil Stabilitas antioksidan menjadi
pada pKa asam (Oresajo et al., 2012). tantangan utama dalam formulasi karena
antioksidan mudah teroksidasi. Diperlukan
Penetrasi strategi stabilisasi untuk menjaga kestabilan
Sebagai agen proteksi, antioksidan formulasi antioksidan, seperti : kemasan
harus mudah menembus stratum korneum kedap oksigen, enkapsulasi, pH rendah,
untuk mencapai lapisan kulit yang lebih minimalisasi air, pemasukan elektrolit dan
dalam yaitu ke dalam jaringan target dalam antioksidan lainnya (Stamford, 2012).
bentuk aktif dan bertahan lama di dalam Beberapa pendekatan teknologi
kulit supaya menghasilkan efek optimal inovatif telah dilakukandalam beberapa
(Alonso et al., 2014). dekade terakhir untuk meningkatkan
Ada beberapa strategi yang penghantaran obat dermal dan transdermal
digunakan oleh formulator untuk (Manosroi, Chankhampan, Manosroi, &
meningkatkan penetrasi formulasi topikal. Manosroi, 2013; Muzzalupo et al., 2011).
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 143

Liposom dan niosom sistem (Pando et al., 2013). Oleh karena itu,
nanocarrier paling banyak untuk niosomdianggap sebagai alternatif yang baik
meningkatkan kemampuan pengiriman obat untuk liposom dan saat ini keduanya
melalui kulit, serta untuk menghasilkan obat memainkan peran penting dalam proses
untuk target terapeutiknya serta mengurangi penghantaran obat.
toksisitas obat.
Liposom dan niosom dapat Metode Pengujian Aktivitas Antioksidan
meningkatkan waktu tinggal obat di stratum Secara In Vitro
korneum dan epidermis, mengurangi Dalam pengujian antioksidan
penyerapan sistemik obat(Manconi, Sinico, terdapat beberapa metode pengujian secara
Valenti, Lai, & Fadda, 2006). Selanjutnya, in vitro yang dilakukan untuk mengevaluasi
vesikula ini meningkatkan sifat lapisan aktivitas antioksidan dari suatu sampel.
tanduk baik dengan mengurangi air Metode tersebut memiliki berbagai model uji
transepidermal dan mengganti lipid kulit yang bervariasi tergantung kepada jenis
yang hilang, meningkatkan kelembutan sampel dan senyawa target. Karena itu, sulit
kulit(Pando, Caddeo, Manconi, Fadda, & untuk membandingkan sepenuhnya satu
Pazos, 2013). metode dengan yang lainnya (Alam, Bristi,
Niosom memiliki dua keunggulan & Rafiquzzaman, 2013).
utama di atas liposom, yaitu stabilitas kimia Dari semua metode uji in vitro,
yang lebih tinggi dan biaya lebih rendah metode pengujian DPPH adalah metode
(Pando et al., 2013). Selain itu, surfaktan yang paling banyak digunakan karena lebih
dalam niosom berkontribusi pada penetrasi mudah, akurat, efisien, sederhana dan cepat
keseluruhanpeningkatan senyawa terutama dalam penentuan aktivitas antioksidan
oleh adsorpsi padaantarmuka,berinteraksi (Alam et al., 2013). Berikut ini merupakan
dengan membran biologis danmengubah beberapa macam metode penentuan aktivitas
fungsi penghalang stratum korneum, antioksidan secara in vitro (Tabel 2).
sebagaihasil modifikasi lipid reversibel
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 144

Tabel 2. Metode Pengujian Aktivitas Antioksidan Secara In Vitro

Metode Prinsip Referensi

Radikal Hidroksil Berdasarkan kuantifikasi produk degradasi (Hazra, Biswas, &
2-deoksiribose oleh kondensasi dengan Mandal, 2008)
TBA.
Radikal Superoksid Berdasarkan pengurangan NBT. Adenin (Hazra et al.,
fenazin metosulfatenikotinamid non 2008)
enzimatik sistem dinukleotida (PMS /
NADH) menghasilkan radikal superoksida,
yang mengurangi nitro blue tetrazolium
(NBT) menjadi formazan ungu
Radikal Oksigen Produksi oksigen singlet (1O2) ditentukan (Hazra et al.,
Singlet dengan memantau N, N-dimethyl-4- 2008)
nitrosoaniline (RNO), menggunakan metode
spektrofotometri.
Radikal Nitrit Oksid Pada pH fisiologis, oksida nitrat dihasilkan (Hazra et al.,
dari air natrium nitroprusside (SNP) larutan 2008)
berinteraksi dengan oksigen untuk
menghasilkan ion nitrit, yang dapat
dikuantifikasi oleh reaksi Griess Illosvoy.
DPPH DPPH [1,1-difenil-2-picryl hydrazyl] adalah (Jain & Agrawal,
radikal bebas yang stabil dengan warna 2008)
ungu, intensitas diukur pada λ = 510 nm
secara spektrofotometri.

Radikal ABTS Prinsip ABTS (2, 2'-azinobis-3- (Jain & Agrawal,

etilbenzothiozolin-6-sulfonat) berdasarkan 2008)
penangkapan cahaya oleh ABTS.

Metode Radikal Hidroksil (0-200 µg / ml) dari sampel uji. Setelah

Pengujian ini berdasarkan inkubasi selama 1 jam pada 37 °C, 0,5 ml
kuantifikasi produk degradasi 2-deoksiribose dari campuran reaksi ditambahkan 1 ml
olehkondensasi dengan TBA. Radikal TCA 2,8%, kemudian 1 mlTBA 1 % berair
hidroksil dihasilkanoleh Fe3+-askorbat- ditambahkan dan campuran diinkubasi pada
EDTA-H2O2 (reaksi Fenton). Campuran 90 °C selama 15 menit untuk
reaksi yang terkandung, dalam volume akhir mengembangkan warna. Setelah
1 ml, 2-deoksi-2-ribosa (2,8 mM); buffer pendinginan, absorbansi diukur pada 532 nm
KH2PO4-KOH(20 mM, pH 7.4); FeCl3(100 terhadap suatu larutan blanko yang
μM); EDTA (100 μM);H2O2(1,0 mM); asam sesuai.Semua tes dilakukan enamwaktu.
askorbat (100 μM) dan berbagai konsentrasi Mannitol, digunakan sebagai kontrol positif.
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 145

Persentase penghambatan dievaluasi dengan histidin, 10 μM RNO dan berbagai

membandingkan larutan uji dan blanko konsentrasi (0-200 µg / ml) sampel sebanyak
(Hazra et al., 2008). 2 ml. Diinkubasi pada 30 °C selama 40
menit dan penurunan absorbansi RNO
Metode Radikal Superoksid diukur pada 440 nm. Aktivitas penagkapan
Pengujian ini berdasarkan sampel dibandingkan dengan asam lipoik,
pengurangan NBT. Adenin fenazin digunakan sebagai standar (Hazra et al.,
methosulfatenikotinamid nonenzimatik 2008).
sistem dinukleotida (PMS / NADH)
menghasilkan radikal superoksida, yang Metode Radikal Nitrit Oksid
mengurangi nitro blue tetrazolium (NBT) Pada pH fisiologis, oksida nitrat
menjadi formazan ungu. Campuran reaksi 1 dihasilkan dari air natrium nitroprusside
ml terkandung buffer fosfat (20 mM, pH (SNP) solusi berinteraksi dengan oksigen
7.4), NADH (73 μM), NBT (50 μM), PMS untuk menghasilkan ion nitrit, yang dapat
(15 μM) dan berbagai konsentrasi (0–20μg / dikuantifikasi oleh reaksi Griess Illosvoy.
ml) dari larutan sampel. Setelah inkubasi Campuran reaksi mengandung 10 mM SNP,
selama 5 menit disuhu ambien, absorbansi fosfat buffer salin (pH7,4) dengan berbagai
pada 562 nm diukur terhadap larutan blanko dosis (0–70 µg / ml) larutan uji
yang sesuai untuk menentukankuantitas dalam volume terakhir 3 ml. Setelah
formazan yang dihasilkan. Semua tes inkubasi selama 150 menit pada 25 ° C, 1 ml
dilakukanenam kali. Quercetin digunakan sulfanilamid (0,33% dalam 20% glasial
sebagai kontrol positif (Hazra et al., 2008). (asam asetat) ditambahkan ke dalam 0,5 ml
larutan yang diinkubasi dandidiamkan
Metode Radikal Oksigen Singlet selama 5 menit. Kemudian 1 ml
Produksi oksigen singlet (1O2) naptiletilendiamin dihidroklorid (NED)
ditentukan dengan memantau N, N- (0,1% b / v) ditambahkan dan campuran
dimethyl-4-nitrosoaniline (RNO), diinkubasi selama 30 menit pada 25 ° C.
menggunakan metode spektrofotometri. Kromofor merah muda yang dihasilkan
Oksigen singlet dihasilkan dari reaksi antara selama diazotisasiion nitrit dengan
NaOCl dan H2O2, dan pemutihan RNO sulfanilamid dan kopling berikutnya dengan
dipantau pada 440 nm. Campuran reaksi NED diukur secara spektrofotometri
mengandung 45 mM dapar fosfat (pH 7,1), pada540 nm terhadap sampel. Semua tes
50 mMNaOCl, 50 mM H2O2, 50 mM
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 146

dilakukanenam kali. Curcumin digunakan ditandai warna hijau Dihitung secara

sebagai standar (Hazra et al., 2008). spektrofotometri pada λ = 734 nm.
Kation radikal ABTS bebas yang
Metode DPPH (2,2-diphenyl-1- dihasilkan dari reaksi ABTS dan APS,
picrylhydrazyl) ditambahkan 20 mL larutan uji PBS 10 μM
DPPH [1,1-difenil-2-picryl hydrazyl] pH 7,4 ditambah 230 mL larutan radikal
adalah radikal bebas yang stabil dengan ABTS 0,238 mM. Dihitung absorbansi pada
warna ungu, intensitas diukur pada λ = 510 panjang gelombang 734 nm. Reaksi kontrol
nm secara spektrofotometri. dilakukan tanpa sampel uji. Dibuat grafik
200 µl larutan uji ditambah 50 µL konsentrasi linier vs persentase
DPPH didiamkan pada suhu 25 ̊C selama 20 penghambatan kemudian dihitung nilai IC50
menit. Dihitung absorbansinya pada panjang (Jain & Agrawal, 2008).
gelombang 510 nm. Kemudian dihitung
IC50 dan persentase penghambatan Metode Pengujian Aktivitas Antioksidan
Secara In Vivo
Dalam pengujian antioksidan
Dimana : A0 = Absorbansi kontrol, tanpa
terdapat beberapa metode pengujian secara
ekstrak dan At = Absorbansi dengan adanya
in vivo yang dilakukan untuk mengevaluasi
ekstrak (Jain & Agrawal, 2008).
aktivitas antioksidan. Metode tersebut
memiliki berbagai model uji yang bervariasi
Metode Radikal ABTS
tergantung kepada jenis sampel dan aktivitas
Prinsip ABTS (2, 2'-azinobis-3-
antioksidan untuk target yang akan diteliti.
etilbenzothiozolin-6-sulfonat) berdasarkan
Karena itu, sulit untuk membandingkan
penangkapan cahaya oleh ABTS.
sepenuhnya satu metode dengan yang
Antioksidan dengan kemampuan
lainnya. Berikut ini merupakan beberapa
menyumbang atom hidrogen akan
macam metode penentuan aktivitas
menangkap radikal bebas, ABTS stabil
antioksidan secara in vivo (Tabel 3).
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 147

Tabel 3. Metode Pengujian Aktivitas Antioksidan Secara In Vivo

Metode Prinsip Referensi

Uji hewan Pengujian menggunakan hewan supaya (Jin,
mendapatkan serum yang digunakan untuk Saravanakumar, &
pengujian antioksidan secara in vivo Wang, 2018)
Tes superoksida Pengujian untuk SOD total didasarkan pada (Jin et al., 2018)
dismutase kemampuannya untuk menghambat
oksidasi oksimin oleh sistem xantin-xantin
oksidase.
Pengukur indeks Tes konten MDA dilakukan dengan (Jin et al., 2018)
peroksidasi lipid menggunakan kit komersial untuk melihat
tingkat peroksidasi lipid dalam nanomoles
per mililiter serum.
Pengujian total Kapasitas antioksidan total ekstrak tanaman (Jin et al., 2018)
kapasitas antioksidan dianalisis berdasarkan kekuatan antioksidan
(T-AOC) pereduksi besi dengan kapasitas total
kapasitas antioksidan (T-AOC) komersial
mengikuti prosedur operasional alat

1. Uji Hewan tikus dikorbankan oleh cervical disloted, dan

Tikus jantan (20 ± 2 g) ditempatkan darah dikumpulkan dan diproses untuk
dalam kandang tikus standar dengan akses mendapatkan serum yang digunakan untuk
makanan dan disimpan pada suhu 25 ± 1 ℃ pengujian antioksidan secara in vivo (Jin et
selama 12 jam dalam siklus gelap dan al., 2018).
terang. Setelah 1 minggu aklimatisasi ke
kandang, tikus-tikus itu secara acak dibagi 2. Tes superoksida dismutase (SOD)
sebagai berikut: Lima tikus dalam kelompok Pengujian untuk SOD total
kontrol (C) dan lima tikus dalam setiap didasarkan pada kemampuannya untuk
kelompok yang diberi ekstrak air atau menghambat oksidasi oksimin oleh sistem
metanol berbeda dosis 100 (T1), 300 (T2) xantin-xantin oksidase. Uji aktivitas SOD
dan 500μL / hari (T3). Kelompok kontrol total dilakukan dengan menggunakan
hanya menerima 1 mL air suling, dan komersial kit mengikuti instrumen yang
kelompok yang diberi perlakuan diberikan beroperasi. Nitrit hidroksilamin diproduksi
dosis yang berbeda dari ekstrak metanol atau oleh oksidasi oksimin memiliki puncak
air dalam 1 mL air suling dengan gavage absorbansi pada 550 nm. Aktivitas SOD
sekali sehari selama 15 hari. Pada hari ke 16,
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 148

dinyatakan sebagai satuan per mililiter mengandung karotenoid dan polifenol

serum (Jin et al., 2018). banyak digunakan sebagai bahan kosmetik.
Dalam formulasi antioksidan perlu
3. Pengukur indeks peroksidasi lipid diperhatikan mengenai stabilitas,
Tes konten MDA dilakukan dengan kompatibiliitas dan penetrasi supaya sediaan
menggunakan kit komersial. Absorbansi yang dihasilkan bersifat stabil dan mudah
diukur pada panjang gelombang 532 nm berpenetrasi ke dalam kulit.
dengan spektrofotometri dan tingkat Formulasi baru seperti produk
peroksida lipid dapat dinyatakan sebagai antioksidan topikal menggunakan teknologi
nanomoles per mililiter serum (Jin et al., liposom atau niosom lebih memudahkan
2018). antioksidan masuk ke dalam jaringan target
dalam bentuk aktif dan bertahan lama di
4. Pengujian total kapasitas antioksidan (T- dalam kulit.
AOC)
Kapasitas antioksidan total ekstrak
DAFTAR PUSTAKA
tanaman dianalisis berdasarkan kekuatan
Afaq, F., & Mukhtar, H. (2006). Botanical
antioksidan pereduksi besi dengan kapasitas
antioxidants in the prevention of
total kapasitas antioksidan (T-AOC) photocarcinogenesis and photoaging.
Experimental Dermatology, 15(9), 678–
komersial mengikuti prosedur operasional
684. https://doi.org/10.1111/j.1600-
alat (Chen et al., 2014). Warna stabil dari 0625.2006.00466.x
Alam, M. N., Bristi, N. J., & Rafiquzzaman,
Fe2+-o-fenantrolin kompleks diukur pada
M. (2013). Review on in vivo and in
panjang gelombang 520 nm. T-AOC vitro methods evaluation of antioxidant
activity. Saudi Pharmaceutical Journal,
diekspresikan dalam satuan per mililiter
21(2), 143–152.
serum. Satu U didefinisikan sebagai https://doi.org/10.1016/j.jsps.2012.05.0
02
peningkatan absorbansi (A=520) dari 0,01 /
Allemann, I. B., & Baumann, L. (2008).
menit / mg protein pada 37 ° C (Jin et al., Antioxidants Used in Skin Care
Formulations, 1–8.
2018).
Alonso, C., Rubio, L., Touriño, S., Martí,
M., Barba, C., Fernández-Campos, F.,
… Luís Parra, J. (2014). Antioxidative
KESIMPULAN
effects and percutaneous absorption of
Antioksidan memiliki banyak sekali five polyphenols. Free Radical Biology
and Medicine, 75, 149–155.
manfaat untuk kulit baik perlindungan dari
https://doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.
dalam maupun dari luar. Tanaman yang 2014.07.014
Andreassi, M., Stanghellini, E., Ettorre, A.,
Di Stefano, A., & Andreassi, L. (2004).
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 149

Antioxidant activity of topically applied Hazra, B., Biswas, S., & Mandal, N. (2008).
lycopene. Journal of the European Antioxidant and free radical scavenging
Academy of Dermatology and activity of Spondias pinnata. BMC
Venereology, 18(1), 52–55. Complementary and Alternative
https://doi.org/10.1111/j.1468- Medicine, 8, 1–10.
3083.2004.00850.x https://doi.org/10.1186/1472-6882-8-63
Baliga, M. S., & Katiyar, S. K. (2006). Jain, S.K., Jain, N. K. (2010). No Title.
Chemoprevention of Multiparticulate Carriers for Sun-
photocarcinogenesis by selected dietary Screening Agents. Int. J. Cosmet. Sci.
botanicals. Photochemical and Jansen, R., Wang, S.Q., Burn, 89–98.
Photobiological Sciences, 5(2), 243– Jain, P. K., & Agrawal, R. K. (2008).
253. https://doi.org/10.1039/b505311k Antioxidant and Free Radical
Brodell, L., & Rosenthal, K. (2008). Skin Scavenging Properties of Developed
Structure and Function: The Body’s Mono- and Polyherbal Formulations.
Primary Defense Against Infection. Asian J. Exp. Sci, 22(3), 213–220.
Infectious Diseases in Clinical Jin, T. Y., Saravanakumar, K., & Wang, M.
Practice, 16(2), 113–117. H. (2018). In vitro and in vivo
https://doi.org/10.1097/IPC.0b013e318 antioxidant properties of water and
1660bf4 methanol extracts of linden bee pollen.
Chen, Y., Miao, Y., Huang, L., Li, J., Sun, Biocatalysis and Agricultural
H., Zhao, Y., … Zhou, W. (2014). Biotechnology, 13(December 2017),
Antioxidant activities of saponins 186–189.
extracted from Radix Trichosanthis: An https://doi.org/10.1016/j.bcab.2017.12.
in vivo and in vitro evaluation. BMC 010
Complementary and Alternative Kahraman A, I. M. (2002). Protective effects
Medicine, 14, 1–8. of quercetin on ultraviolet A light-
https://doi.org/10.1186/1472-6882-14- induced oxidative stress in the blood of
86 rat. J. Appl. Toxicol, 22((5)), 303–309.
Costa, R., & Santos, L. (2017). Delivery Lai-Cheong, J. E., & McGrath, J. A. (2017).
systems for cosmetics - From Structure and function of skin, hair and
manufacturing to the skin of natural nails. Medicine (United Kingdom),
antioxidants. Powder Technology, 322, 45(6), 347–351.
402–416. https://doi.org/10.1016/j.mpmed.2017.0
https://doi.org/10.1016/j.powtec.2017.0 3.004
7.086 Lan, Z., Liu, J., Chen, L., Fu, Q., Luo, J.,
da Silva, S. B., Ferreira, D., Pintado, M., & Qu, R., … Ma, S. (2012). Danggui-
Sarmento, B. (2016). Chitosan-based Shaoyao-San ameliorates cognition
nanoparticles for rosmarinic acid ocular deficits and attenuates oxidative stress-
delivery-In vitro tests. International related neuronal apoptosis in d -
Journal of Biological Macromolecules, galactose-induced senescent mice.
84, 112–120. Journal of Ethnopharmacology, 141(1),
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2015. 386–395.
11.070 https://doi.org/10.1016/j.jep.2012.02.05
Galvez, M. V. (2010). Antioxidants in 0
photoprotection: do they really work? Lin, F. H., Lin, J. Y., Gupta, R. D., Tournas,
Actas Dermosifiliogr, 101, 197–200. J. A., Burch, J. A., Selim, M. A., …
Halliwell, B. G. J. (2007). No Title. Free Pinnell, S. R. (2005). Ferulic acid
Radicals in Biology and Medicine, 4th stabilizes a solution of vitamins C and
ed.(University Press). E and doubles its photoprotection of
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 150

skin. Journal of Investigative Understanding formulation and

Dermatology, 125(4), 826–832. efficacy, 25, 252–259.
https://doi.org/10.1111/j.0022- Oresajo, C., Stephens, T., Hino, P. D., Law,
202X.2005.23768.x R. M., Yatskayer, M., Foltis, P., …
Manconi, M., Sinico, C., Valenti, D., Lai, F., Pinnell, S. R. (2008). Protective effects
& Fadda, A. M. (2006). Niosomes as of a topical antioxidant mixture
carriers for tretinoin: III. A study into containing vitamin C. ferulic acid, and
the in vitro cutaneous delivery of phloretin against ultraviolet-induced
vesicle-incorporated tretinoin. photodamage in human skin. Journal of
International Journal of Cosmetic Dermatology, 7(4), 290–297.
Pharmaceutics, 311(1–2), 11–19. https://doi.org/10.1111/j.1473-
https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2005.1 2165.2008.00408.x
1.045 Pando, D., Caddeo, C., Manconi, M., Fadda,
Manosroi, A., Chankhampan, C., Manosroi, A. M., & Pazos, C. (2013). Nanodesign
W., & Manosroi, J. (2013). of olein vesicles for the topical delivery
Transdermal absorption enhancement of the antioxidant resveratrol. Journal
of papain loaded in elastic niosomes of Pharmacy and Pharmacology, 65(8),
incorporated in gel for scar treatment. 1158–1167.
European Journal of Pharmaceutical https://doi.org/10.1111/jphp.12093
Sciences, 48(3), 474–483. Pinnell, S. R., Yang, H., Omar, M.,
https://doi.org/10.1016/j.ejps.2012.12.0 Monteiro-Riviere, N., DeBuys, H. V,
10 Walker, L. C., … Levine, M. (2001).
Montenegro, L. (2014). Nanocarriers for Topical L-ascorbic acid: percutaneous
skin delivery of cosmetic antioxidants. absorption studies. Dermatologic
Journal of Pharmacy & Surgery : Official Publication for
Pharmacognosy Research, 2(4), 73–92. American Society for Dermatologic
Retrieved from Surgery [et Al.], 27, 137–142.
http://jppres.com/jppres/pdf/vol2/jppres https://doi.org/10.1046/j.1524-
14.033_2.4.73.pdf 4725.2001.00264.x
Muzzalupo, R., Tavano, L., Cassano, R., Pouillot, A., Polla, L. L., Tacchini, P.,
Trombino, S., Ferrarelli, T., & Picci, N. Neequaye, A., Polla, A., & Polla, B.
(2011). A new approach for the (2011). NATURAL ANTIOXIDANTS
evaluation of niosomes as effective AND, 239–257.
transdermal drug delivery systems. Ratz-Lyko, A., Arct, J., & Pytkowska, K.
European Journal of Pharmaceutics (2012). Methods for evaluation of
and Biopharmaceutics, 79(1), 28–35. cosmetic antioxidant capacity. Skin
https://doi.org/10.1016/j.ejpb.2011.01.0 Research and Technology, 18(4), 421–
20 430. https://doi.org/10.1111/j.1600-
Nakajima, J., Tanaka, I., Seo, S., Yamazaki, 0846.2011.00588.x
M., & Saito, K. (2004). LC/PDA/ESI- Reis Mansur, M. C. P. P., Leitão, S. G.,
MS profiling and radical scavenging Cerqueira-Coutinho, C., Vermelho, A.
activity of anthocysnins in various B., Silva, R. S., Presgrave, O. A. F., …
berries. Journal of Biomedicine and Santos, E. P. (2016). In vitro and in
Biotechnology, 5(5), 241–247. vivo evaluation of efficacy and safety
https://doi.org/10.1155/S111072430440 of photoprotective formulations
4045 containing antioxidant extracts.
Oresajo, C., Pillai, S., Manco, M., Brazilian Journal of Pharmacognosy,
Yatskayer, M., & Mcdaniel, D. (2012). 26(2), 251–258.
Antioxidants and the skin : https://doi.org/10.1016/j.bjp.2015.11.00
Farmaka
Volume 16 Nomor 2 151

6 Zhang, Y., Smuts, J. P., Dodbiba, E.,

Rigano, D., Cardile, V., Formisano, C.,
Maldini, M. T., Piacente, S.,
Bevilacqua, J., … Senatore, F. (2009).
Genista sessilifolia DC. and Genista
tinctoria L. inhibit UV light and nitric
oxide-induced DNA damage and
human melanoma cell growth.
Chemico-Biological Interactions,
180(2), 211–219.
https://doi.org/10.1016/j.cbi.2009.02.01
0 and anti-aging activities of mycelial
Stamford, N. P. J. (2012). Stability,
transdermal penetration, and cutaneous
effects of ascorbic acid and its
derivatives. Journal of Cosmetic
Dermatology, 11(4), 310–317.
https://doi.org/10.1111/jocd.12006
Rangarajan, R., Lang, J. C., &
Armstrong, D. W. (2012). Degradation
study of carnosic acid, carnosol,
rosmarinic acid, and rosemary extract
(rosmarinus officinalis L.) assessed
using HPLC. Journal of Agricultural
and Food Chemistry, 60(36), 9305–
9314. https://doi.org/10.1021/jf302179c
Zhong, W., Liu, N., Xie, Y., Zhao, Y., Song,
X., & Zhong, W. (2013). Antioxidant
polysaccharides from Lepista sordida.
International Journal of Biological
Macromolecules, 60, 355–359.
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2013.
06.018