PENGARUH PERBEDAAN METODE EKSTRAKSI

TERHADAP AKTIVITAS ANTIOKSIDANPADA

EKSTRAK DAUN SALAM (Syzygium
polyanthum (Wight) Walp.)

Defiani Sektiaji1, Aldi Budi Riyanta2, Purgiyanti3

Prodi DIII Farmasi, Politeknik Harapan Bersama Tegal, Indonesia
Jln. Mataram No. 09 Kota Tegal 52142, Telp/Faks (0283) 452000
E-mail: defianisektiaji1012@gmail.com

Abstrak

Tanaman salam (Syzygium polyanthum (Wight) Walp.) merupakan tanaman obat asli indonesia yang memiliki
banyak manfaat dalam dunia pengobatan. Daun salam diketahui mengandung senyawa bioaktif flavonoid yang berfungsi
sebagai antioksidan yang mampu menangkal aktivitas dari radikal bebas.
Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmasi Politeknik Harapan Bersama Tegal. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui aktivitas antioksidan serta untuk mengetahui pengaruh perbedaan metode ekstraksi terhadap aktivitas
antioksidan. Metode ekstraksi yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode maserasi dan perkolasi dengan pelarut
etanol 70%. Aktivitas antioksidan ditentukan dengan peredaman DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Data yang diperoleh
yaitu dari hasil ekstraksi, hasil analisis kualitatif dan hasil analisis kuantitatif.
Hasil penelitian menunjukkan kandungan antioksidan pada ekstrak maserasi daun salam memiliki IC50 132,72
ppm menunjukkan tingkat keaktifan aktivitas antioksidan sedang, sedangkan ekstrak perkolasi daun salam memiliki nilai
IC50 64,06 ppm menunjukkan tingkat keaktifan aktivitas antioksidan kuat.

Kata kunci: Daun salam, Metode ekstraksi, Antioksidan, DPPH, Spektrofotometri UV-Vis.

Abstract
Bay plants (Syzygium polyanthum (Wight) Walp.) Are plants that have benefits in the world of medicine. Bay
leaves are known to contain bioactive compounds of flavonoids which function as antioxidants that can counteract the
activity of free radicals.
The research was conducted at the Polytechnic of Harapan Bersama Laboratory. This study aimed to determine
antioxidant activity and to determine the effect of different extraction methods on antioxidant activity. The extraction
method used in this study was maceration and percolation with 70% ethanol. Antioxidant activity was determined by
reducing DPPH (1,1-diphenyl-2-pikrilhidrazil). The data obtained are from the results of extraction, the results of
qualitative analysis and the results of quantitative analysis.
The results showed that the antioxidant content of the macerated extract of bay leaves have IC50 132.72 ppm
indicating the level of activity of moderate antioxidant activity, whereas percolation extract of bay leaves had an IC50
value of 64.06 ppm indicating of activity level of strong antioxidant activity.

Key words: Bay leaves, Extraction method, Antioxidant, DPPH, UV-Vis spectrophotometry.
I. PENDAHULUAN
Indonesia terkenal dengan kekayaan
alam yang memiliki berbagai jenis tumbuhan
yang berkhasiat sebagai obat.Obat tradisional
telah dikenal dan digunakan secara turun-
temurun oleh masyarakat
Indonesia.Masyarakat yang jauh dari
pelayanan kesehatan pada umumnya
memanfaatkan tanaman sebagai obat. Di
Indonesia sendiri banyak penyakit yang sering
dijumpai oleh masyarakat Indonesia,
diantaranya yaitu penyakit panas, bisul, batuk,
stroke, katarak, asma, jantung, kanker dan
sebagainya. Pola hidup manusia zaman
sekarang yang tidak memperhatikan makanan
yang dimakan, beraktivitas di tempat yang
berpolusi, mengkonsumsi rokok sehingga
merugikan orang lain dan diri sendiri, terkena
langsung paparan sinar matahari, penggunaan
obat-obatan, dan stress memicu timbulnya
radikal bebas di dalam tubuh (Munte, 2015).
Radikal bebas merupakan faktor
penyebab terjadinya berbagai macam penyakit
didalam tubuh manusia.Radikal bebas dapat
merusak sel-sel didalam tubuh oleh sebab itu
tubuh kita membutuhkan antioksidan untuk
menangkal radikal bebas. Antioksidan adalah
zat yang dapat menghancurkan radikal bebas.
Adanya antioksidan di dalam tubuh, dapat
memberikan perlindungan dari ancaman
radikal bebas. Antioksidan dapat
mengeliminasi senyawa radikal bebas di dalam
tubuh sehingga tidak menginduksi suatu
penyakit.Banyak makanan yang mengandung
antioksidan alami seperti makanan yang
mengandung vitamin A, C, E dll. Selain itu
juga ada beberapa senyawa dalam tumbuhan
yang bermanfaat sebagai antioksidan salah
satunya adalah senyawa fenolik yang
terkandung dalam sayuran, buah-buahan,
rempah-rempah dan sebagainya (Munte,
2015).
Salah satu tanaman yang dapat
dijadikan sumber antioksidan alami yaitu daun
salam. Daun salamsebagai tanaman obat asli
Indonesia banyak digunakan oleh masyarakat
untuk menurunkan kolestrol, kencing manis,
hipertensi, gastritis, dan diare. Daun salam
diketahui mengandung flavonoid, selenium,
vitamin A, dan vitamin E yang berfungsi
sebagai antioksidan (Bahriul, 2014).
1
Senyawa antioksidan memiliki peran
yang sangat penting dalam kesehatan.Berbagai
bukti ilmiah menunjukkan bahwa senyawa
antioksidan mengurangi resiko berbagai
penyakit kronis seperti kanker dan penyakit
jantung koroner. Karakter utama senyawa
antioksidan adalah kemampuannya
menangkap radikal bebas (Kuntorini & Astuti,
2016)
Radikal bebas merupakan molekul
yang reaktif, hal ini dikarenakan molekul
tersebut memiliki satu atau lebih elektron dan
untuk mengembalikan keseimbangannya,
radikal bebas akan berusaha memperoleh
elektron dari molekul-molekul lain atau yang
melepas elektron yang tidak berpasangan.
Reactive Oxygen Species (ROS) merupakan
hasil metabolisme aerobik normal dalam tubuh
yang secara potensial dapat menyebabkan
kerusakkan, secara luas diyakini terlibat
sebagai penyebab berbagai penyakit seperti
penuaan dini, kanker, penyakit jantung
koroner, penyakit alzeimer, gangguan
neurodegeneratif, aterosklerosis, katarak dan
termasuk peradangan yang ditunjukkan dengan
tanda-tanda stress oksidatif. Senyawa ROS
diantaranya adalah radikal anion superoksida,
oksigen singlet, hidrogen peroksida dan
radikal hidroksil yang sangat reaktif (Nugraha,
Firmansyah, & Jumaryatno, 2017).
Penggunaan radikal bebas untuk
analisis aktivitas antioksidan merupakan salah
satu metode yang paling populer.Salah satu
indikasi bahwa sampel uji berefek sebagai
antioksidan adalah apabila sampel uji tersebut
mempunyai kemampuan untuk menangkap
radikal.Salah satu radikal bebas yang
digunakan adalah radikal DPPH (Nugraha et
al., 2017).
Antioksidan bereaksi dengan 1,1-
difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH) yang
menstabilkan radikal bebas dan mereduksi
DPPH. Kemudian DPPH akan bereaksi dengan
atom hidrogen dari senyawa peredam radikal
bebas membentuk 1,1-difenil-2-pikrilhidrazin
(DPPH-H) yang lebih stabil. Reagen DPPH
yang bereaksi dengan antioksidan akan
mengalami perubahan warna dari ungu ke
kuning, intensitas warna tergantung
kemampuan dari antioksidan (Kuntorini &
Astuti, 2016).
 Beberapa senyawa memiliki aktivitas
antioksidan.salah satunya adalah senyawa
golongan flavonoid, karena kemampuannya
yang dapat mereduksi radikal bebas. Golongan
flavonoid meliputi kalkon, flavon, isoflavon,
flavonol, flavanon dan katekin mempunyai
aktivitas sebagai antioksidan. Keaktifan
senyawa flavonoid sebagai antioksidan
dipengaruhi oleh adanya gugus hidroksi dan
gugus 4-oxo pada kerangka flavonoid
(Anastasia, Santi, & Manurung, 2016).
Senyawa flavonoid adalah suatu
kelompok senyawa fenol yang terbesar yang
ditemukan dialam.Senyawa- senyawa ini
merupakan zat warna merah, ungu dan biru
dan sebagai zat warna kuning yang ditemukan
dalam tumbuh-tumbuhan. Golongan flavonoid
memiliki kerangka karbon yang terdiri atas
dua cincin benzene tersubstitusi yang
disambungkan oleh rantai alifatik tiga
karbon.Sejumlah tanaman obat yang
mengandung flavonoid telah dilaporkan
memiliki aktivitas antioksidan, antibakteri,
antivirus, antiradang, antialergi, dan
antikanker.Senyawa flavonoid diduga sangat
bermanfaat dalam makanan karena, berupa
senyawa fenolik, senyawa ini yang bersifat
antioksidan kuat. Banyak kondisi penyakit
yang diketahui bertambah parah oleh adanya
radikal bebas seperti superoksida dan
hidroksil, dan flavonoid memiliki kemampuan
untuk menghilangkan dan secara efektif
‘menyapu’ spesies pengoksidasi yang merusak
ini. Oleh karena itu, makanan yang kaya
flavonoid dianggap penting untuk mengobati
penyakit-penyakit, seperti kanker dan penyakit
jantung (Wahyulianingsih, Handayani, &
Malik, 2016).
Senyawa flavonoid dapat diperoleh
dengan melakukan proses ekstraksi. Ekstraksi
merupakan suatu proses yang dilakukan untuk
memperoleh kandungan senyawa kimia dari
jaringan tumbuhan maupun hewan dengan
pelarut yang sesuai dalam standar prosedur
ekstraksi. Dalam proses ekstraksi suatu bahan
tanaman, banyak faktor yang dapat
mempengaruhi kandungan senyawa hasil
ekstraksi diantaranya: jenis pelarut,
konsentrasi pelarut, metode ekstraksi dan suhu
yang digunakan untuk mengekstraksi. Daun
salam dalam penelitian ini diekstraksi dengan
menggunakan pelarut etanol 70% dengan dua
macam metode ekstraksi yaitu maserasi dan
2
perkolasi. Maserasi dan perkolasi merupakan
metode ekstraksi dengan cara dingin. Alasan
menggunakan metode ekstraksi dengan cara
dingin dikarenakan flavonoid merupakan
senyawa polar yang tidak tahan terhadap
panas. Sehingga metode cara dingin dapat
menghindari rusaknya senyawa yang
dimaksud rusak karena pemanasan.
II. METODE PENELITIAN
Alat :
Chamber, Objek glass, deg glass,
beaker glass, batang pengaduk, labu ukur,
timbangan analitik, tabung reaksi, kertas
saring, cawan uap, mikroskop, dan
spektrofotometri UV-Vis.
Bahan :
Bahan-bahan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah ekstrak daun salam,etanol
70%, DPPH, HCl(pekat), serbuk Mg, H2SO4(pekat),
methanol, aquadest.
Pengumpulan sampel :
Pengumpulan sampel dilakukan
dengan memilih daun salam di Pasar Pagi
Kota Tegal.
Pembuatan Serbuk Daun Salam :
Daun salam dikumpulkan dan
dibersihkan dari kotoran, kemudian dicuci
dengan air mengalir hingga bersih untuk
selanjutnya dikeringkan dengan cara diangin-
anginkan. Serbuk simplisia yang diperoleh
disimpan dalam wadah bersih, kering dan
tertutup rapat.
Karakteristik Simplisia :
Dilakukan uji karakteristik simplisia
dengan uji mikroskopis.
Pembuatan Ekstak Daun Salam Dengan
Metode Maserasi :
Pembuatan ekstrak maserasi daun
salam dilakukan dengan menimbang 100 gram
serbuk daun salam kemudian diekstraksi
dengan pelarut etanol 70% sebanyak 750 mL,
dengan perbandingan sampel pelarut yaitu
1:7,5. Kemudian ekstrak disaring dan sambil
sering diaduk.Setelah itu ekstrak diuapkan
untuk mendapatkan ekstrak kental (Yudistira,
2013).
Pembuatan Ekstak Daun Salam Dengan
Metode Perkolasi :
Pembuatan ekstrak perkolasi dilakukan
dengan cara menimbang serbuk daun salam
sebanyak 50 gram, memasukkan kapas
kedalam perkolator, memasukkan serbuk yang
telah tercampur dengan etanol kedalam alat
perkolator, menambahkan etanol 70%
sebanyak 500 ml, kemudian membuka keran
atau tutup percolator sedikit demi sedikit 3.
hingga sampel menetes, menunggu sampai 1
menit meneteskan sebanyak 1 ml (Erviana,
2016).
Uji Bebas Etanol :
melakukan uji bebas etanol pada
ekstrak dengan cara memasukkan sedikit ke
dalam tabung reaksi, lalu menambahkan 2
tetes asam asetat dan 2 tetes H2SO4.
Mengamati perubahan bau, jika tidak berbau
etil asetat (ester) maka ekstrak terbebas dari 4.
etanol.Dengan suhu + 400C sampai diperoleh
ekstrak kental dan hitung rendemen yang
dihasilkan.
Uji Kandungan Fitokimia Flavonoid :
Dilakukan uji warna golongan
flavonoid yaitu dengan mengambil 2 mg
ekstrak daun salam. Masukkan kedalam 5.
tabung reaksi kemudian ditambahkan serbuk
Mg dan HCl pekat 2 tetes.Timbulnya merah
menunjukkan adanya senyawa flavonoid.
Uji Kromatografi Lapis Tipis :
Dilakukan uji senyawa flavonoid
dengan metode KLT. Menyiapkan alat dan
bahan. Plat KLT lapis silica gel yang akan 6.
digunakan dioven terlebih dahulu selama 3
menit pada suhu 450C untuk mengurangi kadar
air dalam plat KLT. Kemudian membuat fase
gerak dengan mengambil n-butanol : asam
asetat : air (4 : 1 : 5), dimasukkan kedalam
chamber dan dijenuhkan. Setelah jenuh proses
selanjutnya masukkan plat KLT yang 7.
sebelumnya sudah ditotolkan sampel kedalam
chamber yang sudah jenuh. Angkat plat KLT
dan dikeringkan dengan cara dianginkan
kemudian dilihat penampakan noda pada
lampu sinar UV 254 dan 366 mn. (Lutfitasari,
2016).
Uji Aktivitas Antioksidan : 8.
1. Pembuatan Larutan Blanko
Larutan blanko yang digunakan adalah
methanol. Pencatatan dilakukan terhadap
absorbansi pada panjang gelombang
maksimum.
2. Pembuatan DPPH 40 g/mL
Larutan DPPH dibuat dengan
melarutkan DPPH dengan konsentrasi 40
g/mL, dalam methanol yang dibuat segar
serta terlindung dari cahaya. Sebanyak
10mg DPPH, dilarutkan dengan methanol III. HASIL DAN PEMBAHASAN
dalam labu ukur 10mL dan dipipet 4 mL
dimasukkan ke labu ukur 100mL,
ditambahkan methanol sampai batas dan
3
didapatkan larutan pereaksi dengan
konsentrasi 40g/mL.
Penentuan Panjang Gelombang
Maksimum
Memipet larutan DPPH sejumlah
volume tertentu kedalam kuvet kemudian
ukur serapannya pada panjang gelombang
400-600 nm, kemudian mencatat
absorbansi yang dihasilkan oleh masing-
masing gelombang dan membuat kurva
hubungan antara panjang gelombang dan
absorbansi.
Pembuatan Larutan Induk Vitamin C
100 ppm
Serbuk vitamin C sebanyak 10 mg,
dilarutkan dalam methanol lalu
dimasukkan dalam labu ukur 100
mL.Volume dicukupkan dengan methanol
sampai tanda batas.
Pembuatan Larutan Uji Seri Vitamin C
(10, 20, 40, 80 ppm)
Larutan induk vitamin C masing-
masing dipipet 1, 2, 4, 8 mL dimasukkan
kedalam labu ukur 10 mL.Volume
dicukupkan dengan methanol sampai tanda
batas.
Pembuatan Larutan Induk 2000 ppm
Ekstrak daun salam ditimbang
sebanyak 100 mg dan dilarutkan dengan
methanol kemudian masukkan kedalam
labu ukur 50 mL. Volume dicukupkan
dengan methanol sampai tanda batas dan
kocok sampai homogen.
Pembuatan Larutan Uji Seri
Konsentrasi 50, 100, 200, 400ppm
Ekstrak daun salam masing-masing
dipipet 0,25 ; 0,5 ; 1 ; 2(mL) dimasukkan
ke dalam labu ukur 10 mL, volume
dicukupkan dengan methanol sampai tanda
batas.
Penentuan Aktivitas Antioksidan
Dengan Metode DPPH
Larutan uji sebanyak 1 mL dari
masing-masing sampel dipipet dan
dimasukkan dalam vial, kemudian
ditambahkan dengan larutan DPPH
sebanyak 1,5 mL dan dikocok sampai
homogen, kemudian inkubasi selama 30
menit ditempat yang terlindung dari
cahaya. Dibaca serapannya pada
gelombang 517 nm.
Pada penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui ada tidaknya pengaruh aktivitas
antioksidan dari daun salam (Syzygium
 polyanthum(Wight) Walp.) dengan metode
maserasi dan perkolasi. Pada penelitian ini
dilakukan analisa antioksidan dengan
metode spektrofotometri UV-Vis. Alasan
menggunakan metode tersebut karena dapat
digunakan secara kualitatif dan kuantitatif
senyawa dalam campuran dengan waktu
yang singkat, metode tersebut caranya
sederhana, dan juga memiliki tingkat
ketelitian yang baik.Penelitian dilakukan di
Laboratorium Farmasi Politeknik Harapan
Bersama Tegal.
Daun salam diperoleh dari Pasar Pagi
Kota Tegal dengan menggunakan teknik
simple purposive sampling. Sampel yang
telah disortir kemudian ditimbang sebanyak
2000 gram, kemudian daun salam
dikeringkan dengan cara diangin-anginkan
karena dilihat dari zat aktif berupa flavonoid
yang akan rusak terhadap suhu tinggi,
pengeringan dilakukan untuk mendapatkan
simplisia yang tidak mudah rusak, sehingga
dapat disimpan dalam waktu yang lebih
lama. Dari hasil pengeringan diperoleh berat
kering daun salam sebanyak 165,15 gram.
Dengan demikian didapatkan prosentase
berat basah terhadap berat kering. Hasil
pengeringan pada daun salam yaitu 8,25%
dan dapat dikatakan hasil pengeringan daun
salam baik karena nilai % kadar air <10%.
Selanjutnya daun salam dihaluskan dengan
menggunakan blender hingga menjadi
serbuk simplisia tujuannya yaitu untuk
memperluas permukaan pada daun salam.
Serbuk simplisia daun salam diuji
makroskopik dan mikroskopik. Secara
makroskopik daun salam berbentuk serbuk,
berwarna hijau, rasa kelat, dan berbau khas
daun salam. Hasil uji mikroskopik pada daun
salam menurut (Harrizul, 2015) meliputi
epidermis atas, berkas pembuluh, hablur
kalsium oksalat, epidermis bawah dengan
stomata tipe parasitik, serabut sklerenkim, dan
fragmen mesofil.
Metode yang digunakan untuk
mengambil ekstrak dari daun salam yaitu
dengan metode maserasi dan perkolasi.
Penggunaan metode maserasi dipilih karena
merupakan cara mengekstraksi yang paling
sederhana, dengan menghaluskan (diserbuk)
daun salam yang telah kering disatukan
dengan pelarut etanol 70%. Penggunaan etanol
sebagai pelarut karena etanol merupakan
pelarut semi polar, sehingga diharapkan
kandungan metabolit sekunder yang terdapat
4
pada daun salam dapat tersari dengan baik.
Perbandingan serbuk daun salam dengan
pelarutnya ialah 1:7,5 yang dimasukkan dan
disimpan pada wadah yang terlindung dari
cahaya langsung untuk mencegah reaksi yang
dikatalisis oleh cahaya atau perubahan warna.
Masa penyimpanan selama lima hari dengan
pengadukan selama + 5 menit setiap harinya.
Ekstrak yang diperoleh diuapkan diatas api
sedang untuk menghilangkan kandungan
etanolnya. Dalam penelitian ini ekstrak
maserasi yang diperoleh daun salam sebanyak
100 gram didapat ekstrak 26,63 gram sehingga
rendemen yang didapat 26,72 %.
Metode perkolasi juga merupakan cara
ekstraksi dingin namun membutuhkan alat
khusus yang disebut perkolator.
Keuntungannya metode ini dapat menyari
lebih sempurna dibandingkan metode maserasi
namun pelarut yang digunakan banyak dan
waktunya lama.Pada metode perkolasi
dilakukan dengan cara menimbang serbuk
daun salam sebanyak 50 gram, mengambil
etanol 70% sebanyak 500 mL, kemudian
memasukkan kapas kedalam perkolator,
memasukkan serbuk yang telah tercampur
dengan etanol kedalam alat perkolator,
menambahkan etanol 70% sebanyak 500 mL,
kemudian membuka keran atau tutup
perkolator sedikit demi sedikit hingga sampel
menetes, menunggu sampai 1 menit
meneteskan sebanyak 1 mL. Ekstrak yang
diperoleh diuapkan diatas api sedang untuk
menghilangkan kandungan etanolnya. Dalam
penelitian ini ekstrak perkolasi yang diperoleh
dari daun salam sebanyak 50 gram didapat
ekstrak 8,78 gram sehingga rendemen yang
didapat 17,58 %.
Untuk pembuktian bahwa ekstrak
tersebut telah benar-benar terbebas dari etanol
maka perlu dilakukan uji bebas etanol dengan
menggunakan pereaksi H2SO4pekat dan asam
asetat dan asam asetat kemudian mengamati
bau yang terjadi, apabila masih berbau ester
(bau khas yang mirip dengan balon) maka
ekstrak tersebut belum terbebas dari etanol dan
dilakukan kembali pemanasan pada ekstrak,
namun jika berbau khas ekstrak berarti ekstrak
tersebut sudah terbebas dari etanol.
Tabel 1. Uji Bebas Etanol Tabel 3. Penampakan Noda dari KLT pada
panjang gelombang 366 nm
Metode Uji Pustaka Hasil Sampel Rf hRf Standar
Ekstrak tetes Tidak Tidak Maserasi 0,81 81 0,65
Maserasi ekstrak + 2 berbau berbau Perkolasi 0,87 87
Ekstrak tetes ester ester (+)
Perkolasi H2SO4 Nilai Rf standart menurut
pekat + (Departemen Kesehatan Republik Indonesia,
asam 2008) yaitu 0,65. Dari hasil identifikasi KLT
asetat, ekstrak maserasi pada daun salam diperoleh
nilai Rf sebesar 0,81. Sedangkan pada ekstrak
Tabel 2. Uji Kandungan Flavonoid perkolasi pada daun salam diperoleh nilai Rf
sebesar 0,87. Perbedaan nilai Rf dipengaruhi
Sampel Reaksi Hasil Pustaka oleh beberapa faktor seperti pelarut atau fase
Identifikasi gerak, tingkat kejenuhan bejana kromatografi,
Ekstrak ekstrak + Merah Merah jumlah fase gerak yang digunakan, suhu,
Maserasi serbuk Mg (+) keseimbangan dan penotolan sampel (Era
Ekstrak + 2 tetes Sandhi Kusuma Yuda, 2017).
Perkolasi HCl pekat Pengujian aktivitas antioksidan dengan
metode spektrofotometri UV-Vis
Tabel diatas menunjukkan bahwa menggunakan DPPH (2,2-difenil-1-
ekstrak daun salam mengandung senyawa pikrihidrazil).Aktivitas antioksidan ditentukan
flavonoid dilihat dari hasil berwarna merah. dari kemampuan sampel uji untuk merubah
Penambahan HCl bertujuan untuk warna ungu dari DPPH menjadi warna kuning
menghidrolisis flavonoid menjadi aglikon pada panjang gelombang maksimalnya.
flavonoid dengan cara menghidrolisis aglikon. Metode DPPH dipilih karena metode DPPH
Glikosil yang terhidrolisis ini akan tergantikan merupakan metode yang sederhana, cepat dan
dengan atom H+ dari asam yang memiliki sifat mudah untuk penapisan aktivitas penangkapan
keletronegatifan yang kuat. Serbuk Mg yang radikal beberapa senyawa, selain itu metode
ditambahkan menghasilkan senyawa kompleks ini terbukti akurat, efektif dan praktis
yang berwarna merah. Ion magnesium ini (Yuswantina, 2009). Pembacaan absorbansi
diduga akan berikatan dengan senyawa terhadap perubahan warna dilakukan pada
flavonoid yang terdapat pada ekstrak sehingga waktu tertentu yang memberikan kesempatan
muncul larutan berwarna merah (Latifah, yang cukup untuk berlangsungnya reaksi
2015). antara DPPH dan senyawa radikal atau biasa
Kadar flavonoid ekstrak meserasi daun salam disebut dengan waktu inkubasi.Nilai
diukur menggunakan metode Kromatografi absorbansi DPPH dapat ditentukan dengan
Lapis Tipis (KLT), untuk memastikan bahwa nilai presentasi penghambatan radikal DPPH
ekstrak yang diperoleh mengandung senyawa (persen inhibisi).Dari persen inhibisi dapat
flavonoid sebagai antioksidan. Metode ini ditentukan nilai IC50(inhibitory
digunakan karena perlengkapan yang concentration).Nilai IC50merupakan bilangan
sederhana, memerlukan bahan yang sedikit, yang menunjukkan konsentrasi yang mampu
diperoleh pemisahan yang baik, dan menghambat radikal bebas sebesar
membutuhkan waktu yang singkat untuk 50%.Semakin kecil nilai IC50berarti semakin
pengerjaannya (Era Sandhi Kusuma Yuda, tinggi nilai antioksidannya.Nilai IC50 diperoleh
2017). Fase gerak yang digunakan dalam dari persamaan regresi linier.
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) adalah n- Penentuan panjang gelombang
butanol : asam asetat : air dengan maksimum bertujuan untuk mengetahui ketika
perbandingan 4 : 1 : 5. Fase diam yang absorbansi mencapai puncaknya maka
digunakan berupa silika gel absorbansinya pun mencapai maksimum
sehingga meningkatkan proses absorbansi
larutan terhadap sinar. Penentuan panjang
gelombang yang digunakan yaitu 400 nm –
600 nm.

5
 Tabel 4. Panjang Gelombang Maksimum Gambar 1. Pengukuran Panjang
DPPH Gelombang Maksimal
Panjang Gelombang Absorbansi
Pengukuran aktivitas antioksidan
400 0.208
410 0.224
sampel dapat dilakukan pada panjang
420 0.241 gelombang 510 nm dengan konsentrasi
430 0.253 DPPH 40 ppm.Antioksidan standar asam
440 0.270 askorbat digunakan sebagai pembanding
450 0.289 dibuat dengan konsentrasi 10, 20, 40, dan
460 0.316 80 ppm.Setelah didapatkan absorbansi
470 0.336 masing-masing konsentrasi kemudian
480 0.369 menghitung % inhibisinya.
490 0.402
500 0.438 Tabel 5. Aktivitas Antioksidan
510 0.471
520 0.445 Sampel Konsentrasi Absorbansi % Inhibisi
530 0.411 (ppm)
540 0.373 50 0,325 30,99
550 0.327 Maserasi 100 0,248 47,34
560 0.289 200 0,203 56,90
570 0.259 400 0,160 66,02
580 0.236 10 0,275 41,61
590 0.218 Vitamin 20 0,229 51,38
600 0.204 C 40 0,180 61,78
Berdasarkan hasil panjang gelombang 80 0,134 71,54
maksimal yang didapat adalah 510 nm 50 0,270 42,67
digunakan untuk pengukuran Perkolasi 100 0,202 57,11
selanjutnya.Alasan digunakan panjang 200 0,162 65,60
gelombang maksimum dalam pengujian
dengan spektrofotometri UV-Vis yaitu panjang
400 0,123 73,88
gelombang maksimum memiliki kepekaan
maksimal karena terjadi perubahan absorbansi
yang paling besar. Panjang gelombang Tabel 6.Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Maserasi Daun Salam Dalam Bentuk Probit
maksimum sendiri dicari untuk mengetahui
seberapa besar energi cahaya tertinggi yang
diserap oleh larutan (Agustina, Handayani, &
Sampel Persamaan Regresi IC50
Nurhamidah, 2017).
Linier
Maserasi
Kurva Hubungan Panjang Gelombang y = 0,911x + 3,066 132,72
dengan Absorbansi R = 0,996
Vitamin C
0,504 y = 0,803x + 3,992 17,9
Absorbansi (A)

0,454 R = 0,999
0,404 Perkolasi
0,354 y = 0,817x + 3,524 64,06
0,304 R = 0,998
0,254
0,204
400
410
420
430
440
450
460
470
480
490
500
510
520
530
540
550
560
570
580
590
600

Hasil penelitian pada ekstrak maserasi

daun salam diperoleh nilai R2 = 0,994 dan
Panjang Gelombang (ppm)
pada ekstrak perkolasi daun salam diperoleh
nilai R2 = 0,998 yang menunjukkan tingkat
akurasi yang cukup pada proses pengukuran

6
absorbansi larutan seri konsentrasi ekstrak Intensitas Nilai IC50(g/mL)
maserasi dan ekstrak perkolasi daun salam
karena harga R2 yang mendekati 1 Sangat Kuat <50
menunjukkan kolerasi atau terdapat pengaruh Kuat 50 – 100
antara konsentrasi dengan absorban dengan
persamaan y = 0,911x + 3,066 Sedang 101 – 150
Nilai IC50 menggambarkan besarnya Lemah >150
konsentrasi senyawa uji yang dapat
menangkap radikal bebas sebesar 50%.Nilai
IC50 diperoleh dengan menggunakan
persamaan regresi linier yang menyatakan 350
hubungan antara konsentrasi sampel (symbol 300
x) dengan aktivitas radikal bebas (symbol y) 250
dari seri replikasi pengukuran.Untuk 200
132,72
150

mendapatkan hasil yang baik, maka pada
penelitian ini menggunakan probit.Nilai IC50
ditentukan dengan analisis probit yang
diperoleh dari konversi % Inhibisi kedalam
nilai probit, sedangkan nilai konsentrasi
diubah kedalam nilai log konsentrasi.Nilai IC50
merupakan nilai antilog pada nilai probit 50.
Dari persamaan y = ax + b dapat dihitung
dengan rumus :
Semakin kecil nilai IC50 maka
senyawa uji tersebut mempunyai keaktifan
sebagai penangkap radikal yang lebih baik.
Tingkat kekuatan antioksidan senyawa uji
menggunakan DPPH dapat digolongkan
menurut nilai IC50(Armala, 2009).
Dalam penelitian ini hasil antioksidan
yang lebih tinggi adalah ekstrak hasil
perkolasi. Hal ini dikarenakan :
1. Aliran cairan penyari menyebabkan
adanya pergantian larutan dengan larutan
yang konsentrasinya lebih rendah,
sehingga meningkatkan derajat perbedaan
konsentrasi
2. Ruangan diantara serbuk-serbuk simplisia
membentuk saluran tempat cairan penyari.
Karena kecilnya saluran kapiler tersebut,
maka kecepatan pelarut cukup untuk
mengurangi lapisan batas, sehingga dapat
meningkatkan perbedaan konsentrasi
(Depkes RI, 1986).
3. Antara pelarut dan sampel yang digunakan
berbeda, seharusnya kondisi sama untuk
maserasi dan perkolasi.
Nilai IC50
100 64,06
50 17,9
0
Vitamin C Ekstrak Ekstrak
Maserasi Perkolasi
Sampel
Gambar 2 Grafik Perbandingan Nilai
IC50 Vitamin C Dengan Ekstrak
Maserasi Daun Salam dan Ekstrak
Perkolasi Daun Salam
Berdasarkan gambar dapat dilihat
bahwa standar antioksidan yang digunakan
yaitu vitamin C. Vitamin C merupakan
antioksidan yang sering dikonsumsi oleh
masyarakat secara luas. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa vitamin C berpotensi
aktif sebagai antioksidan dengan IC50 sebesar
17,9 ppm sedangkan ekstrak perkolasi
memiliki aktivitas antioksidan yang kuat
(IC50= 64,06 ppm) dibandingkan dengan
ekstrak maserasi yang memiliki aktivitas
antioksidan sedang (IC50= 132,72ppm).
IV. KESIMPULAN
Dari hasil penelitian yang teloah
dilakukan maka dapat diambil kesimpulan
berikut ini :
1. Ada pengaruh perbedaan metode
ekstraksi terhadap aktivitas
antioksidan pada ekstrak daun salam
2. Kandungan aktivitas antioksidan
pada ekstrak maserasi memiliki IC50
132,72 ppm sedangkan pada
ekstrak perkolasi memiliki IC50
64,06 ppm.

7
V. REFERENSI
[1] Agustina, W., Handayani, D., &
Nurhamidah. (2017). Skrining
Fitokimia Dan Aktivitas Antioksidan
Beberapa Fraksi Dari Kulit Batang
Jarak (Ricinus communis L.).Jurnal
Pendidikan Dan Ilmu Kimia.
[2] Amelia. (2011). Isolasi, Elusidasi Struktur
dan Uji Aktivitas Antioksidan
Senyawa Kimia dari Daun Garcinia
Benthami Piere (Tesis). Universitas
Indonesia, Depok.
[3] Anastasia, H., Santi, S. R., & Manurung,
M. (2016). Uji Aktivitas Antioksidan
Senyawa Flavonoid Pada Kulit Batang
Tumbuhan Gayam (Inocarpus
fagiferus Fosb.). Jurnal Kimia, 10(1),
15–22.
[4] Armala. (2009). Daya Antioksidan Fraksi
Air Ekstrak Herba Kenikir (Cosmos
caudatuc HBK) dan Profil KLT.
Universitas Islam Indonesia,
Yogyakarta.
[5] Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. (2008). Farmakope Herbal
Indonesia. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia.
[6] Era Sandhi Kusuma Yuda, P. (2017).
Skrining Fitokimia Dan Analisis
Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak
Tanaman Patikan Kebo (Euphorbia
hirta L.). Medicamento, 3.
[7] Harrizul, R. (2015). Pembuatan dan
Karakterisasi Ekstrak Kering Daun
Salam (Syzigium polyanthum (Wight)
Walp.). Jurnal Farmasi Higea, 7.
[8] Kuntorini, E. M., & Astuti, M. D. (2016).
Penentuan aktivitas antioksidan
ekstrak etanol bulbus bawang dayak
(eleutherine americana merr.). Jurnal
Sains Dan Terapan Kimia, 4(1), 1522.
[9] Latifah. (2015). Daya Antibakteri Ekstrak
Etanol Tunas Bambu Apus Terhadap
Bakteri Escherichia coli dan
Staphylococcus aureus Secara In
Vitro. Universitas Islam Negeri
Maulana Malik Ibrahim, Malang.
[10] Mariana, L., Andayani, Y., & Gunawan,
R. (2013). Analisis Senyawa
Flavonoid Hasil Fraksinasi Ekstrak
Diklorometana Daun Keluwih
(Artocarpus camansi). 6(2), 50–55.
[11] Munte, L. (2015). Aktivitas Antioksidan
Dari Ekstrak Daun Prasman
(Eupatorium triplinerve Vahl.).
Pharmacon, 4(3), 41–50.
[12] Mustikaningrum, M. (2015). Aplikasi
Metode Spektrofotometri Visibel
Genesys-20 Untuk Mengukur Kadar
Curcuminoid Pada Temulawak
(Curcuma Xanthorrhiza) (Application
Methods Spectrophotometry Visible
Genesys-20 For Measuring The
Content Curcuminoid Ginger
(Curcuma Xanthorrhiza). Universitas
Diponegoro, Semarang.
[13] Nugraha, A. T., Firmansyah, M. S., &
Jumaryatno, P. (2017). Profil Senyawa
Dan Aktifitas Antioksidan Daun
Yakon (Smallanthus Sonchifolius)
Dengan Metode Dpph Dan Cuprac.
Jurnal Ilmiah Farmasi, 13(1).
[14] Rustamsyah, A. (2015). Aktivitas
antioksidan seduhan sepuluh jenis
mutu teh hitam (Camellia sinensis ( L
.) O . Kuntze). J Penel Teh Kina. 95–
100.
[15] Wahyulianingsih, W., Handayani, S., &
Malik, A. (2016). Penetapan Kadar
Flavonoid Total Ekstrak Daun
Cengkeh (Syzygium aromaticum (L.)
Merr & Perry). Jurnal Fitofarmaka
Indonesia, 3(2), 188–193.
[16] Yuswantina, R. (2009). Uji Aktivitas
Penangkap Radikal Dari Ekstrak
Petroleum Eter, Etil Asetat dan Etanol
Rhizoma Binahong (Anredera
cordifolia (Tenore) Steen) Dengan
Metode DPPH. Fakultas Farmasi,
UMY., Surakarta.