PENGESAHAN

SKRIPSI

UJI SITOTOKSISITAS FRAKSI KLOROFORM DAUN SIRSAK

(Annona muricata L.) TERHADAP SEL HELA SECARA IN VITRO
DAN PROFIL KANDUNGAN KIMIA FRAKSI TERAKTIF

Oleh :
Dyah Ayu Witianingsih
NIM M0410023

Telah dipertahankan didepan Tim Penguji

pada tanggal 4 April 2014
dan dinyatakan telah memenuhi syarat

Surakarta, April 2014

Penguji I Penguji II

Dra. Marti Harini, M. Si. Siti Lusi Arum Sari, M.Biotech.

NIP. 19540323 198503 2 001 NIP. 19760812 200501 2 001

Penguji III Penguji IV

Estu Retnaningtyas, N. S.TP, M.Si. Prof. Dr. Okid Parama A., M.S.
NIP. 19680709 200501 2 001 NIP. 19630327 198601 2 002

Mengesahkan,
Dekan FMIPA UNS Ketua Jurusan

Prof. Ir. Ari Handono Ramelan, M.Sc (Hons)., Ph.D Dr. Agung Budiharjo, M.Si
NIP. 19610223 198601 1 001 NIP. 19680823 200003 1 001

ii
 PERNYATAAN

Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil penelitian saya sendiri
dan tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu
perguruan tinggi, serta tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau
diterbitkan oleh orang lain, kecuali secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan
dalam daftar pustaka. Apabila di kemudian hari dapat ditemukan adanya unsur penjiplakan
maka gelar kesarjanaan yang telah diperoleh dapat ditinjau dan/atau dicabut.

Surakarta, April 2014

Dyah Ayu Witianingsih

NIM. M0410023

iii
 UJI SITOTOKSISITAS FRAKSI KLOROFORM DAUN SIRSAK
(Annona muricata L.) TERHADAP SEL HELA SECARA IN VITRO
DAN PROFIL KANDUNGAN KIMIA FRAKSI TERAKTIF

Dyah Ayu Witianingsih

M0410023
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sebelas Maret, Surakarta

ABSTRAK

Kanker serviks merupakan penyebab utama kedua kematian kanker pada

wanita di seluruh dunia. Daun sirsak (Annona muricata L.) berpotensi sebagai ko-
kemoterapi kanker. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek sitotoksisitas,
efek antiproliferatif fraksi kloroform daun sirsak (A. muricata L.) terhadap sel
HeLa secara in vitro dan mengetahui profil kandungan kimia fraksi kloroform
teraktif daun sirsak.
Daun sirsak diekstraksi dengan etanol 96%, kemudian difraksinasi
menggunakan Vacum Liquid Chromatography (VLC) dengan pelarut kloroform
dan etil asetat. Fraksi yang diperoleh yaitu FA, FB, FC, FD, FE. Setiap fraksi diuji
sitotoksisitasnya terhadap sel HeLa dengan metode MTT Assay. Efek
antiproliferatif dari fraksi teraktif diamati melalui uji doubling time pada interval
waktu 24, 48, dan 72 jam. Fraksi teraktif ditentukan kandungan senyawa kimianya
menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT).
Hasil dari penelitian menunjukkan bahwa fraksi F B adalah fraksi yang
memiliki aktivitas sitotoksik terbaik dengan nilai IC50 sebesar 166,32 µg/mL dan
memiliki efek antiproliferatif terhadap sel HeLa dengan kemungkinan terjadi
mekanisme cell cycle arrest. Profil kandungan kimia fraksi teraktif mengandung
senyawa terpenoid dan steroid.

Kata kunci: Kanker serviks, Annona muricata L., sel HeLa, MTT Assay, doubling
time, KLT.

iv
 CYTOTOXICITY ASSAY OF SOURSOP LEAVES (Annona muricata L.)
CHLOROFORM FRACTION ON HELA CELLS IN VITRO
AND THEIR ACTIVE FRACTION CHEMICAL PROFILE

Dyah Ayu Witianingsih

M0410023
Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences,
Sebelas Maret University, Surakarta

ABSTRACT

Cervical cancer is the second leading cause of cancer mortality in women

worldwide. Annona muricata L. leaves have emerged as potentially promising co-
cancer chemotherapy. The purpose of this study was to determine the effects of
cytotoxicity, antiproliferative effects of soursop leaves (A. muricata L.)
chloroform fraction on HeLa cells by in vitro way, and to determine the chemical
constituents profiles of the most active fraction.
Soursop leaves were extracted in 96% ethanol, then fractionated using a
Vacum Liquid Chromatography (VLC) in chloroform and ethyl acetate. The
fractions FA, FB, FC, FD, FE were tested cytotoxicity on HeLa cells using MTT
assay. Antiproliferative effects of the active fraction were observed by doubling
time test at 24th, 48th, and 72th hours. Chemical contents of the most active fraction
were determined using Thin Layer Chromatography (TLC).
The results of the study showed that the fraction F B were the fraction that
has the best cytotoxic activity with IC50 value of 166,32 µg/mL and has
antiproliferative effects against HeLa cells with possible mechanisms of cell cycle
arrest. Chemical constituents profile of the most active fraction containing
compounds terpenoid and steroid.

Keyword: Cervical cancer, Annona muricata L., HeLa Cells, MTT Assay,
doubling time, TLC.

v
 MOTTO

“Do the best, For the best, Be the best”

“Sukses itu bukan tujuan, tapi sukses itu sebuah perjalanan”

vi
 PERSEMBAHAN

Skripsi ini kupersembahkan untuk:

 Orang tuaku Bpk. Sutaryanto dan Ibu Narni atas doa,
semangat, dan kasih sayang yang tidak terhingga
 Letda. Septyan Dwi Nuryadi S.T.Han. yang selalu
memberi motivasi dan doa
 Kawanku Dwimei Ayudewandari Pranatami dan
Meutia Srikansi Fitria yang berbagi suka dan duka
selama penelitian
 Sahabat – sahabatku Tyas Utami Ningsih, Fitria
Diniah, Dea Astuti, Evita Muliawati, Novi Widiyanti,
dan Chika Annisa K.
 Teman seperjuangan angkatan 2010 Jurusan Biologi
FMIPA UNS
 Almamater tercinta

vii
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah memberi limpahan rahmat
dan hidayah sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan
skripsi yang berjudul “Uji Sitotoksisitas Fraksi Kloroform Daun Sirsak
(Annona muricata L.) Terhadap Sel HeLa secara In Vitro dan Profil
Kandungan Kimia Fraksi Teraktif”. Penyusunan skripsi ini merupakan suatu
syarat untuk memperoleh gelar kesarjanaan strata 1 (S1) pada Jurusan Biologi,
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret
Surakarta.
Dalam melakukan penelitian maupun penyusunan skripsi ini, penulis telah
mendapatkan saran, bantuan, dan bimbingan dari berbagai pihak yang sangat
berguna dan bermanfaat secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu,
pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada:
Prof. Ir. Ari Handoko Ramelan, M.Sc. (Hons)., Ph.D., selaku Dekan
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret,
Surakarta yang telah memberikan dukungan dan dorongan.
Hibah Penelitian Unggulan DIKTI 2012 atas kesempatan, dukungan, dan
fasilitas yang diberikan sehingga penelitian ini dapat berjalan hingga selesainya
penyusunan skripsi.
Dr. Agung Budiharjo, M. Si., selaku Ketua Jurusan Biologi, Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret, Surakarta
yang telah memberikan izin dan dukungannya selama penelitian.
Prof. Dr. Okid Parama Astirin, M. S selaku dosen pembimbing I yang
telah memberikan proyek penelitian, bimbingan, dan dukungan baik secara moril
maupun materiil.
Estu Retnaningtyas N., S.TP, M.Si selaku dosen pembimbing II yang telah
memberikan saran, bimbingan, dan semangat dari awal penelitian hingga
terselesaikannya penyusunan skripsi.
Dra. Marti Harini, M. Si selaku dosen penelaah I yang telah memberikan
saran dan masukan hingga terselesaikannya penyusunan skripsi.

viii
 Siti Lusi Arum Sari, M.Biotech. selaku dosen penelaah II yang telah
memberikan saran dan masukan hingga terselesaikannya penyusunan skripsi.
Tjahjadi Purwoko, M.Si selaku dosen pembimbing akademik dan seluruh
dosen Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sebelas Maret Surakarta yang telah memberi dukungan dan
bimbingan selama masa perkuliahan.
Anif Nur Artanti, S. Farm., Apt, selaku dosen pembimbing lapangan yang
telah membimbing dan memberikan saran selama penelitian berlangsung.
Ibu Istini dan Bapak Anif Usman selaku teknisi di Laboratorium Pusat
Penelitian Terpadu, Universitas Gajah Mada yang membantu dalam penelitian.
Dwimei Ayudewandari Pranatami selaku teman seperjuangan dalam
penelitian ini yang saling membantu dan memberi semangat selama penelitian
berlangsung.
Teman-teman seperjuangan di Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret Surakarta atas doa dan
dukungan selama masa perkuliahan serta semua pihak yang tidak dapat
disebutkan satu per satu yang telah memberikan bantuannya.
Penulis menyadari bahwa dalam melakukan penelitian dan penyusunan
skripsi ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu, masukan yang berupa saran
dan kritik yang membangun dari pembaca akan sangat membantu. Semoga skripsi
ini bisa bermanfaat bagi kita semua dan pihak-pihak yang terkait.

Surakarta, April 2014

Penyusun

ix
 DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN JUDUL..................................................................................... i
HALAMAN PERSETUJUAN ..................................................................... ii
HALAMAN PERNYATAAN..........................................................................iii
ABSTRAK..................................................................................................... iv
ABSTRACT..................................................................................................... v
HALAMAN MOTTO....................................................................................... vi
HALAMAN PERSEMBAHAN....................................................................... vii
KATA PENGANTAR...................................................................................... viii
DAFTAR ISI.................................................................................................. x
DAFTAR TABEL.......................................................................................... xii
DAFTAR GAMBAR..................................................................................... xiii
DAFTAR LAMPIRAN.................................................................................. xiv
DAFTAR SINGKATAN............................................................................... xv
BAB I. PENDAHULUAN............................................................................. 1
A. Latar Belakang Masalah................................................................ 1
B. Perumusan Masalah....................................................................... 4
C. Tujuan Penelitian........................................................................... 4
D. Manfaat Penelitian........................................................................ 5
BAB II. LANDASAN TEORI....................................................................... 6
A. Tinjauan pustaka......................................................................... 6
1. Sirsak (Annona muricata L.)
6
a. Deskripsi dan Klasifikasi 6
b. Kandungan senyawa aktif 8
2. Kanker 10
3. Kanker Serviks 12
4. Human Papilloma Virus (HPV) 12
5. Sel HeLa 14
6. Apoptosis 15
7. Siklus Sel 17
8. Doubling Time 19
9. Sitotoksik 20
10. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) 20
B. Kerangka Pemikiran.................................................................... 22
C. Hipotesis...................................................................................... 24
BAB III. METODE PENELITIAN............................................................... 25
A. Waktu dan Tempat Penelitian.................................................... 25
B. Alat dan Bahan........................................................................... 25
C. Cara Kerja.................................................................................. 27
D. Analisis Data.............................................................................. 33
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN.......................................................... 35
A. Pemisahan Komponen Senyawa Kimia..................................... 35
1. Ekstraksi............................................................................... 35

x
 2. Fraksinasi............................................................................. 35
B. Uji Sitotoksisitas........................................................................ 37
C. Uji Doubling Time...................................................................... 44
D. Deteksi Kandungan Senyawa Fraksi Teraktif............................ 47
BAB V. PENUTUP...................................................................................... 52
A. Kesimpulan................................................................................ 52
B. Saran........................................................................................... 52
DAFTAR PUSTAKA.................................................................................... 53
LAMPIRAN................................................................................................... 62
RIWAYAT HIDUP PENULIS...................................................................... 75

xi
 DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Fase gerak yang digunakan dalam fraksinasi bagian 29

kloroform daun sirsak dengan metode VLC

Tabel 2. Fase gerak yang digunakan dalam fraksinasi ekstrak etanol 34

96% daun sirsak dengan metode VLC dan berat kering
fraksi yang diperoleh

Tabel 3. Nilai IC50 masing-masing fraksi terhadap sel HeLa 41

Tabel 4. Hasil uji KLT fraksi teraktif dengan berbagai pereaksi 48

semprot

xii
 DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Buah sirsak, bunga sirsak, dan daun sirsak 7

Gambar 2. Struktur dasar steroid dan sistem penomorannya 9
Gambar 3. Struktur kimia dari annonaceus acetogenin 10
Gambar 4. Human Papilloma Virus (HPV) 13
Gambar 5. Tahap-tahap apoptosis sel kanker 16
Gambar 6. Siklus Sel 18
Gambar 7. Bagan alur kerangka pemikiran 23
Gambar 8. Profil kromatogram masing-masing fraksi hasil 36
fraksinasi dari ekstrak etanol 96% daun sirsak dengan
(a) UV254, (b) UV366, (c) serium (IV) sulfat
Gambar 9. Morfologi sel HeLa setelah penambahan fraksi pada 39
perbesaran 100x dengan konsentrasi 250 µg/mL
Gambar 10. Grafik hubungan antara presentase viabilitas sel dengan 40
konsenstrasi fraksi uji
Gambar 11. Pengaruh pemberian FB terhadap proliferasi sel HeLa 45
pada konsentrasi 83,16 µg/mL.
Gambar 12. Grafik proliferasi Sel HeLa terhadap penambahan fraksi 46
kloroform teraktif daun sirsak
Gambar 13. Profil pertumbuhan Sel HeLa akibat pemberian fraksi 47
kloroform teraktif daun sirsak konsentrasi 82,16 µg/mL;
41,58 µg/mL; 20,79 µg/mL dan kontrol yang diamati
pada jam ke-24, 48 dan 72
Gambar 14. Profil kromatogram fraksi teraktif kloroform daun 49
sirsak dengan berbagai metode KLT untuk masing-
masing senyawa

DAFTAR LAMPIRAN

xiii
 Halaman

Lampiran 1. Komposisi media RPMI 1640 dari SIGMA- 62

ALDIRICH
Lampiran 2. Hasil perhitungan persentase viabilitas sel pada uji 63
pendahuluan dari masing-masing fraksi terhadap sel
HeLa
Lampiran 3. Morfologi sel HeLa pada Uji Sitotoksisitas 64
Lampiran 4. Data absorbansi perlakuan setiap fraksi terhadap sel 69
HeLa
Lampiran 5. Hasil perhitungan persentase viabilitas sel perlakuan 70
setiap fraksi pada sel HeLa
Lampiran 6. Perhitungan nilai IC50 fraksi aktif daun sirsak terhadap 71
sel HeLa
Lampiran 7. Morfologi sel HeLa pada Uji Doubling Time 72

Lampiran 8. Data absorbansi perlakuan fraksi teraktif terhadap sel 74

HeLa pada uji doubling time

DAFTAR SINGKATAN

xiv
Singkatan Kepanjangan
µg/mL mikrogram per mililiter
CCRC Cancer Chemopreventive Reserach Center
ATP Adenosine Triphosphate
DMSO Dimethyl sulfoxide
DNA Deoxyribo Nucleic Acid
FasL Fas-Ligand
FBS Fetal Bovine Serum
G Gap
HPV Human Papilloma Virus
IC50 Inhibition Concentration
KLT Kromatografi Lapis Tipis
LC50 Lethal Concentration
LPPT Lembaga Penelitian dan Pengujian Terpadu
M mitosis
mL mili liter
mm mili meter
nm nano meter
PBS Phosphate Buffer Saline
Rf Retardation Factor
RNA Ribo Nucleic Acid
ROS Reactive Oxygen Species
RPMI Rosewell Park Memorial Institute
S Sintesis
TNF Tumor Necrosis Factor
TNFR Tumor Necrosis Factor Receptor
UV ultra violet
VLC Vacum Liquid Chromatography

xv
xvi