Universitas Sumatera Utara

EFEK EKSTRAK METANOL DAN EKSTRAK n-HEKSANA
DAUN PEPAYA (Carica papaya L) TERHADAP JUMLAH DAN HITUNG

JENIS LEUKOSIT PADA TIKUS WISTAR JANTAN SETELAH
DIINDUKSI KARAGENAN
TESIS
OLEH
OKTO P. E. MARPAUNG
097008008/BM
PROGRAM MAGISTER ILMU BIOMEDIK
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2014
Universitas Sumatera Utara

DIINDUKSI KARAGENAN
TESIS
Diajukan untuk melengkapi persyaratan memperoleh Gelar Magister Biomedik
dalam Program Studi Magister Ilmu Biomedik
pada Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara
Oleh
OKTO P. E. MARPAUNG
097008008/BM
PROGRAM MAGISTER ILMU BIOMEDIK
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2014

Judul Tesis : EFEK EKSTRAK METANOL DAN EKSTRAK n-
HEKSANA DAUN PEPAYA (Carica papaya L)
TERHADAP JUMLAH DAN HITUNG JENIS LEUKOSIT
PADA TIKUS WISTAR JANTAN SETELAH DIINDUKSI
KARAGENAN
Nama : OKTO P. E. MARPAUNG
Nomor Pokok : 097008008
Program Studi : ILMU BIOMEDIK
Menyetujui
Komisi Pembimbing
dr. Datten Bangun,MSc,SpFK. Prof. Dr. Drs. Syafruddin Ilyas, M.Biomed.

Ketua Anggota
Ketua Program StudiBiomedik Dekan,
dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D. Prof. dr. Gontar A. Siregar,SpPD.,KGEH.

NIP : 195508071985032001 NIP : 195402201980111001
Tanggal Lulus : 11 Desember 2013

Telah diuji pada tanggal : 11 Desember 2013
PANITIA PENGUJI TESIS
Ketua : dr. Datten Bangun,MSc,SpFK
Anggota : 1. Prof. Dr. Drs. Syafruddin Ilyas, M. Biomed.
2. Prof. Dr. dr. Jazanul Anwar,SpFK
3. Prof. Dr. Urip Harahap,Apt

DIINDUKSI KARAGENAN
ABSTRAK
Saat ini Indonesia merupakan salah satu negara penghasil tanaman obat yang
potensial, dimana hasil alam yang paling banyak digunakan sebagai obat adalah
tumbuhan, dan telah digunakan dalam kurun waktu cukup lama. Penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya efek antiinflamasi ekstrak metanol dan
n-heksana dari daun pepaya.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan rancangan pre-test-
post test control group design menggunakan tikus Wistar jantan. Metodologi
penelitian meliputi penyiapan sampel, pembuatan ekstrak metanol dan n-heksana
dengan cara maserasi daun pepaya, dan pengujian efek antiinflamasi. Tikus
Wistar jantan dewasa, usia + 3 bulan dengan berat badan 150-250 gram sebanyak
36 ekor yang dibagi dalam 6 kelompok yaitu (1) P0 = mendapat Salin per oral
(kelompok Kontrol); (2) P1= Indometahcin 10 mg/kgBB per oral; (3) P2=
mendapat ekstrak metanol daun pepaya dosis 250 mg/kg; (4) P3= mendapat
ekstrak metanol daun pepaya dosis 500 mg/kg; (5) P4= mendapat ekstrak n-
heksana daun pepaya dosis 250 mg/kg; (6) P5= mendapat ekstrak n-heksana daun
pepaya dosis 500 mg/kg.
Setelah mengalami aklimatisasi selama 1 minggu, seluruh kelompok diambil
spesimen darah dari ekor tikus, dan setelahnya mendapat perlakuan sesuai dengan
kelompok di atas, satu jam kemudian kaki tikus disuntik secara intraplantar
dengan 0,1 ml larutan karagenan 1%. Tiga jam dan 6 jam setelah penyuntikan
karagenan, spesimen darah kembali diambil dari ekor tikus. Terhadap seluruh
spesimen darah yang diperoleh dilakukan pemeriksaan hitung jumlah dan jenis
leukosit.
Dari hasil analisis data diperoleh bahwa jumlah leukosit tikus Wistar jantan
yang mendapat ekstrak metanol daun pepaya lebih rendah namun tidak
signifikan/nyata (p>0,05) dibandingkan dengan yang tidak mendapat ekstrak
metanol daun pepaya. Ekstrak n-heksana daun pepaya tidak dapat menahan
peningkatan jumlah leukosit secara nyata. Ekstrak metanol dan n-heksana daun
pepaya menyebabkan perubahan hitung jenis leukosit pada keadaan inflamasi
akut. Ekstrak metanol daun pepaya secara nyata mampu menahan peningkatan
jumlah neutrofil dan monosit pada keadaan inflamasi akut. Pada inflamasi akut
yang diinduksi oleh karagenan terjadi penurunan yang nyaa dari jumlah eosinofil
yang disebabkan oleh penekanan eosinofil oleh peningkatan kadar Interleukin.
Kata kunci: inflamasi, karagenan, daun pepaya, Carica papaya l

ABSTRACT
Currently that Indonesia is one of the country that produce the medicinal
plants, where natural products. The leaves of Carica papaya has been used by
local people as antiinflammation. So, in this experiment the anti-inflamatory
activity of methanol extract and ethanolic extract of Carica papaya leaves was
investigated in rats using carrageenan induced paw oedema.
The research design was an experimental pre-test –post-test control group
design using adult male Wistar rats. The research methodology includes sample
preparation, preparation of methanol extract and n-hexane extract of Carica
papaya leave by maceration, and the testing of anti-inflammatory effect. Adult
male Wistar rats with + 3 months of age, with body yweight 150-250 grams, total
of 36 rats were divided into 6 groups: (1) P0= received oral saline (control
group), (2) P1= received Indomethacin 10 mg/kg orally; (3) P2= received
methanol extract of papaya leaves (250 mg/kg); (4) P3 = received methanol
extract of papaya leaves (500mg/kg); (5) P4= received n-hexane extract of
papaya (250 mg/kg), (6) P5 = received n-hexane extract of papaya leaves (500
mg/kg).
After an acclimation period of 1 week, from the entire group of rat, the blood
specimens were taken, and each group treated according to the above mentioned,
one hour later the in the rat paw were injected intraplantar with 0,1 ml
carrageenan 1%. Three hours and 6 hours after injection of carrageenan, blood
specimens taken from rats. The whole blood specimen got the examination count
by number and types of leukocytes.
From the analysis of the data, the leukocytes count of male Wistar rats that
received the methanol extract of papaya leave is lower but not significantly
(p>0,05) than those who did not receive the methanol extract of papaya leaves. N-
hexane extract of papaya leaves can not hold a real increase in the number of
leukocytes. Methanol extract and n-hexane extract of carica papaya leaves cause
changes in leukocyte counts at acute inflammatory states. Methanol extract of
papaya leaves are able to withstand significantly the increased number of
neutrophils and monocytes in acute inflammatory states. In acute inflammation
induced by carrageenan a significant decrease of the number of eosinophils was
caused by suppression of eosinophils by interleukin level.
Key words: inflammation, carrageenan, papaya, Carica papaya l
ii

KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis ucapkan kepada Allah karena rahmat-Nya penulis
dapat menyelesaikan Tesis dengan judul :”EFEK EKSTRAK METANOL DAN
EKSTRAK n-HEKSANA DAUN PEPAYA (Carica papaya L) TERHADAP
JUMLAH DAN HITUNG JENIS LEUKOSIT PADA TIKUS WISTAR JANTAN
SETELAH DIINDUKSI KARAGENAN” sebagai salah satu syarat dalam
menyelesaikan jenjang strata 2 pada program studi Ilmu Biomedik Fakultas
Kedokteran Universita Sumatera Utara.
Proses penulisan tesis ini tidak lepas dari bimbingan, bantuan dukungan dan
doa dari berbagai pihak dan pada kesempatan ini ucapan terima kasih yang
sebesar-besarnya penulis sampaikan dengan hormat kepada:
1. Prof. Dr. Syahril Pasaribu, DTMH, MSc (CTM), SpA(K), Rektor
2. Prof. dr. Gontar A. Siregar, SpPD-KGEH., Dekan Fakultas Kedokteran
Universitas Sumatera Utara.
3. Dr. Yahwardiyah Siregar,PhD., Ketua Program Studi Biomedik, yang
memberi banyak masukan kepada penulis
4. Dr. Datten Bangun,MSc,SpFK, Ketua Komisi Pembimbing yang
senantiasa bersedia meluangkan waktu untuk membimbing,
memberikan masukan dan pemikiran dengan penuh kesabaran kepada
penulis untuk menyelesaikan tesis ini.
5. Prof. Dr. Drs. Syafruddin Ilyas, M.Biomed., Anggota Komisi
Pembimbing yang telah banyak memberikan bimbingan, masukan,
motivasi dan dukungan kepada penulis untuk menyelesaikan tesis ini.
6. Prof. Dr. dr. Jazanul Anwar,SpFK, Dosen Pembanding yang senantiasa
bersedia meluangkan waktu untuk membimbing, memberikan
masukan dan pemikiran dengan penuh kesabaran kepada penulis untuk
menyelesaikan tesis ini.
7. Prof. Dr. Urip Harahap,Apt., Dosen Pembanding yang senantiasa
bersedia meluangkan waktu untuk membimbing, memberikan
iii

masukan dan pemikiran dengan penuh kesabaran kepada penulis untuk
menyelesaikan tesis ini.
8. Dr. Mutiara Indah Sari,M.Kes, sekretaris program studi yang banyak
membantu dan memberikan motivasi kepada penulis.
9. Kepada kedua orangtua saya dan istri yang sudah banyak membantu
baik dalam bidang moril maupun material, juga atas doanya selama ini
sehingga bisa menyelesaikan pendidikan ini.
10. Teman-teman seangkatan 2009 yang banyak memberikan dorongan
dan motivasi. Kalian adalah teman-teman terbaikku dalam suka dan
duka yang selalu memberikan semangat kepadaku.
Penulis berharap semoga proses pendidikan yang penulis jalani
memberikan manfaat baik bagi penulis sendiri dan bagi orang lain. Akhir
kata, penulis berterima kasih atas masukan saran dan kritikan dari semua
pihak guna perbaikan dari penelitian ini.
Medan, Juli 2014

Penulis
(Okto P. E. Marpaung)
iv

RIWAYAT HIDUP
Nama : Okto Parningotan Elia Marpaung
Tempat/tanggal lahir : Medan, 10 Oktober 1983
Agama : Kristen Protestan
Status : Menikah
Nama istri : Sarah Puji Tumanggor
Nama anak :
Pertama : Matthew Arthorius Christiansen Martco Marpaung
Kedua : Michelle Abigail Marpaung
Alamat : Jl. Pertemuan No. 18 Medan
Hp. : 081263128274
Email : okto_doc@yahoo.com
Pendidikan :
TK Rolina Medan :1989-1990
SD RK Setia Budi Medan :1990-1996
SLTP ST. Thomas-1 Medan : 1996-1999
SLTA ST. Thomas-1 Medan : 1999-2002
Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara : 2002-2007
Pekerjaan :
Staf Pengajar Tetap Fakultas Kedokteran

Universitas HKBP Nommensen Medan : 2009- sekarang

DAFTAR ISI
ABSTRAK ....................................................................................................................... i
ABSTRACT ...................................................................................................................... ii
KATA PENGANTAR .................................................................................................... iii
RIWAYAT HIDUP ......................................................................................................... v
DAFTAR ISI ................................................................................................ vi
DAFTAR TABEL....................................................................................................................................................................viii
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................................................................................ix
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................................................................................ x
BAB I PENDAHULUAN ..............................................................................................................1

1.1. Latar Belakang Penelitian .......................................................................................... 1
1.2. Rumusan Masalah ................................................................................................................ 2
1.3. Kerangka Konsep ........................................................................................... 4
1.4. Tujuan Penelitian ........................................................................................... 4
1.4.1. Tujuan Umum ............................................................................................................4
1.4.2. Tujuan Khusus .......................................................................................... 4
1.5. Hipotesis Penelitian ........................................................................ 5
1.6. Manfaat Penelitian ............................................................................... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................... 7

2.1. Tanaman Pepaya (Carica papaya L.)............................................................. 7
2.1.1. Morfologi Pepaya .......................................................................... 7
2.1.2. Taksonomi Pepaya ........................................................................ 7
2.1.3. Sifat dan Khasiat Daun Pepaya ..................................................... 8
2.2. Inflamasi....................................................................................................... 11
2.3. Leukosit ........................................................................................................ 16
2.3. Hitung Jenis Leukosit ................................................................................... 17
2.4. Obat antiinflamasi ........................................................................................ 18
2.5. Karagenan .................................................................................................... 21
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ................................................................... 25

3.1. Jenis Penelitian ................................................................................................................... 25
3.2. Tempat dan Waktu Penelitian ....................................................................................................25
3.3. Populasi Penelitian ........................................................................ 25
3.4. Sampel Penelitian ....................................................................................................................................................25
3.5. Variabel penelitian ....................................................................................... 26
3.6. Definisi Operasional ............................................................................... 27
3.7. Etika Penggunaan Binatang Percobaan......................................................................................................................27
3.8. Alat dan Bahan ....................................................................................... 27
3.9. Rancangan Percobaan .................................................................................. 28
3.10. Prosedur pemeriksaan jumlah leukosit ..................................................... 34
3.11. Prosedur pemeriksaan hitung jenis leukosit .............................................. 35
vi

3.12. Analisis data ............................................................................................... 35
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN....................................................................... 40

4.1. Hasil .............................................................................................................................. 40
4.2. Pembahasan .................................................................................................. 46
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................................ 49

5.1. Kesimpulan ...................................................................................... 49
5.2. Saran .......................................................................................... 50
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................................... 51
vii

DAFTAR TABEL
No. Judul Halaman

3.1. Perlakuan hewan coba pada percobaan inflamasi akut 35
4.1. Hasil pemeriksaan kandungan daun pepaya 40
4.2. Jumlah leukosit dan hitung jenis leukosit pada tikus wistar 40
jantan sebelum dilakukan penyuntikan karagenan
4.3. Jumlah leukosit dan hitung jenis leukosit pada tikus wistar 40
jantan 3 jam setelah dilakukan penyuntikan karagenan
4.4. Jumlah leukosit dan hitung jenis leukosit pada 41
tikus wistar jantan 6 jam setelah dilakukan
penyuntikan karagenan
viii

DAFTAR GAMBAR
No. Judul Halaman

1.1. Bagan Kerangka Konsep Penelitian 4
2.1. Skema proses terjadinya inflamasi akut 14
2.2. Skema terjadinya inflamasi 15

2.3. Struktur Molekul Indomethacin 22
3.1. Diagram proses pembuatan ekstrak metanol dan n- 34

heksana daun pepaya
4.1. Perbandingan Jumlah leukosit sebelum, 3 jam dan 41
6 jam sesudah penyuntikan karagenan
4.2. Perbandingan Hitung jenis eosinofil sebelum, 3 42
jam dan 6 jam sesudah penyuntikan karagenan
4.3. Perbandingan hitung jenis basofil sebelum, 3 jam 43
sesudah dan 6 jam sesudah penyuntikan karagenan
4.4. Perbandingan hitung jenis neutrofil sebelum, 3 44
jam sesudah dan 6 jam sesudah penyuntikan
karagenan
4.5. Perbandingan hitung jenis limfosit sebelum, 3 jam 45
4.6. Perbandingan hitung jenis monosit sebelum, 3 jam 46
ix

DAFTAR LAMPIRAN
No. Judul Halaman

1 Uji Statistik 54
2 Dokumentasi Penelitian 66
3 Surat Ethical Clearance 70

DIINDUKSI KARAGENAN
ABSTRAK
Saat ini Indonesia merupakan salah satu negara penghasil tanaman obat yang
potensial, dimana hasil alam yang paling banyak digunakan sebagai obat adalah
tumbuhan, dan telah digunakan dalam kurun waktu cukup lama. Penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya efek antiinflamasi ekstrak metanol dan
n-heksana dari daun pepaya.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan rancangan pre-test-
post test control group design menggunakan tikus Wistar jantan. Metodologi
penelitian meliputi penyiapan sampel, pembuatan ekstrak metanol dan n-heksana
dengan cara maserasi daun pepaya, dan pengujian efek antiinflamasi. Tikus
Wistar jantan dewasa, usia + 3 bulan dengan berat badan 150-250 gram sebanyak
36 ekor yang dibagi dalam 6 kelompok yaitu (1) P0 = mendapat Salin per oral
(kelompok Kontrol); (2) P1= Indometahcin 10 mg/kgBB per oral; (3) P2=
mendapat ekstrak metanol daun pepaya dosis 250 mg/kg; (4) P3= mendapat
ekstrak metanol daun pepaya dosis 500 mg/kg; (5) P4= mendapat ekstrak n-
heksana daun pepaya dosis 250 mg/kg; (6) P5= mendapat ekstrak n-heksana daun
pepaya dosis 500 mg/kg.
Setelah mengalami aklimatisasi selama 1 minggu, seluruh kelompok diambil
spesimen darah dari ekor tikus, dan setelahnya mendapat perlakuan sesuai dengan
kelompok di atas, satu jam kemudian kaki tikus disuntik secara intraplantar
dengan 0,1 ml larutan karagenan 1%. Tiga jam dan 6 jam setelah penyuntikan
karagenan, spesimen darah kembali diambil dari ekor tikus. Terhadap seluruh
spesimen darah yang diperoleh dilakukan pemeriksaan hitung jumlah dan jenis
leukosit.
Dari hasil analisis data diperoleh bahwa jumlah leukosit tikus Wistar jantan
yang mendapat ekstrak metanol daun pepaya lebih rendah namun tidak
signifikan/nyata (p>0,05) dibandingkan dengan yang tidak mendapat ekstrak
metanol daun pepaya. Ekstrak n-heksana daun pepaya tidak dapat menahan
peningkatan jumlah leukosit secara nyata. Ekstrak metanol dan n-heksana daun
pepaya menyebabkan perubahan hitung jenis leukosit pada keadaan inflamasi
akut. Ekstrak metanol daun pepaya secara nyata mampu menahan peningkatan
jumlah neutrofil dan monosit pada keadaan inflamasi akut. Pada inflamasi akut
yang diinduksi oleh karagenan terjadi penurunan yang nyaa dari jumlah eosinofil
yang disebabkan oleh penekanan eosinofil oleh peningkatan kadar Interleukin.
Kata kunci: inflamasi, karagenan, daun pepaya, Carica papaya l

ABSTRACT
Currently that Indonesia is one of the country that produce the medicinal
plants, where natural products. The leaves of Carica papaya has been used by
local people as antiinflammation. So, in this experiment the anti-inflamatory
activity of methanol extract and ethanolic extract of Carica papaya leaves was
investigated in rats using carrageenan induced paw oedema.
The research design was an experimental pre-test –post-test control group
design using adult male Wistar rats. The research methodology includes sample
preparation, preparation of methanol extract and n-hexane extract of Carica
papaya leave by maceration, and the testing of anti-inflammatory effect. Adult
male Wistar rats with + 3 months of age, with body yweight 150-250 grams, total
of 36 rats were divided into 6 groups: (1) P0= received oral saline (control
group), (2) P1= received Indomethacin 10 mg/kg orally; (3) P2= received
methanol extract of papaya leaves (250 mg/kg); (4) P3 = received methanol
extract of papaya leaves (500mg/kg); (5) P4= received n-hexane extract of
papaya (250 mg/kg), (6) P5 = received n-hexane extract of papaya leaves (500
mg/kg).
After an acclimation period of 1 week, from the entire group of rat, the blood
specimens were taken, and each group treated according to the above mentioned,
one hour later the in the rat paw were injected intraplantar with 0,1 ml
carrageenan 1%. Three hours and 6 hours after injection of carrageenan, blood
specimens taken from rats. The whole blood specimen got the examination count
by number and types of leukocytes.
From the analysis of the data, the leukocytes count of male Wistar rats that
received the methanol extract of papaya leave is lower but not significantly
(p>0,05) than those who did not receive the methanol extract of papaya leaves. N-
hexane extract of papaya leaves can not hold a real increase in the number of
leukocytes. Methanol extract and n-hexane extract of carica papaya leaves cause
changes in leukocyte counts at acute inflammatory states. Methanol extract of
papaya leaves are able to withstand significantly the increased number of
neutrophils and monocytes in acute inflammatory states. In acute inflammation
induced by carrageenan a significant decrease of the number of eosinophils was
caused by suppression of eosinophils by interleukin level.
Key words: inflammation, carrageenan, papaya, Carica papaya l
ii

BAB I
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang Penelitian
Saat ini Indonesia merupakan salah satu negara penghasil tanaman obat
yang potensial, dimana hasil alam yang paling banyak digunakan sebagai bahan
obat adalah tumbuhan, dan telah digunakan dalam kurun waktu cukup lama.
Walaupun obat-obatan modern berkembang cukup pesat, namun potensi dari
tumbuhan obat tetap tinggi karena dapat diperoleh tanpa resep dokter, dapat
diramu sendiri, dan tumbuhan obat dapat ditanam sendiri oleh pemakainya
(Djauhariya dan Hermani, 2004).
Sayuran merupakan bahan salah satu pangan yang terdapat dalam menu
makanan sehari-hari. Dewasa ini konsumsi sayuran di Indonesia cenderung
meningkat seiring dengan makin berkembangnya kesadaran akan pentingnya
sayuran untuk kesehatan manusia. Sebagai negara tropis, Indonesia memiliki
kekayaan alam nutfah sayuran yang melimpah. Menurut catatan, terdapat 370
jenis tanaman penghasil sayuran yang secara teratur dimanfaatkan oleh
masyarakat (Mangoting, 2005).
Salah satu dari kekayaan alam Indonesia tersebut adalah tanaman pepaya.
Sejak zaman dahulu, nenek moyang kita sudah akrab dengan tanaman pepaya
(Warsino, 2003). Penelitian dengan menggunakan daun pepaya belum banyak
dilaporkan. Dari beberapa literatur diketahui bahwa skrining fitokimia dari daun
pepaya (Carica papaya) menghasilkan kandungan senyawa alkaloid, flavonoid,

2
tannin, cardiac glycosides, anthraquinones bebas dan terikat, phlobatinin, saponin
(Imaga et al. 2010, Owoyele et al. 2008).
Oladunmoye (2008) menemukan bahwa pada ekstrak daun pepaya
memiliki efek antiinflamsi pada tikus yang diinfeksi oleh Salmonella typhi dan
Staphylococcus aureus.Penelitian ini menggunakan parameter haematologi untuk
melihat pengaruh ekstrak daun pepaya terhadap infeksi (Leukosit, Hb,
Hematokrit, Neutrofil, limfosit, monosit dan limfosit).
Penelitian inflamasi sub kronik dengan penanaman kapas steril ke dalam
betis tikus selama tujuh hari, pemberian ekstrak etanol daun pepaya secara oral
menyebabkan persentase hambatan radang yang hampir sama dengan pemberian
oral indomethacin yaitu 65 - 70 % (Owoyele et al., 2008). Ekstrak daun papaya
berdasarkan penelitian Owoyele di Nigeria diketahui bahwa daun pepaya di sana
dapat berkhasiat sebagai antinflamasi, sehingga peneliti ingin mengetahui apakah
ektrak daun pepaya di Indonesia juga memiliki efek yang sama, dan bagian
ekstrak yang mana yang lebih berperan apakah Metanol (polar) atau n-heksana
(non-polar) yang lebih berperan sebagai antiinflamasi. Pada penelitian Owoyele
pengaruh antiinflamasi dari ekstrak daun pepaya diukur dengan melihat perubahan
volume kaki tikus yang dibuat inflamasi dengan karagenan.
Pada inflamasi akut sel-sel imun nonspesifik seperti neutrofil, sel mast,
basophil, eosinophil dan makrofag jaringan berperan. Sel-sel tersebut diproduksi
dan disimpan sebagai persediaan untuk sementara dalam sumsum tulang, hidup
tidak lama dan jumlahnya yang diperlukan di tempat inflamasi dipertahankan oleh
influks sel-sel batu dari persediaan tersebut. Neutrofil merupakan sel utama pada
inflamasi dini, bermigrasi ke jaringan dan puncaknya terjadi pada 6 jam pertama

3
(Baratawidjaja, 2010).Untuk memenuhi hal tersebut diperlukan peningkatan
produksi neutrofil dalam sumsum tulang. Pada inflamasi akut, neutrofil dapat
meningkat dengan segera dari 5.000/µl sampai 30.000/ µl. Peningkatan tersebut
disebabkan oleh migrasi neutrofil ke sirkulasi yang berasal dari sumsum tulang
dan persediaan marginal intravaskular. Persediaan marginal ini merupakan sel-sel
yang untuk sementara menempel pada dinding vaskular yang keluar dari sirkulasi.
Komposisi leukosit adalah 45% berada dalam sirkulasi dan 55% marginal.
Berbagai usaha telah dilakukan untuk mencari pengobatan alternatif baru
sebagai antiinflamasi. Beberapa penelitian telah membuktikan bahwa pemberian
ekstrak etanol daun pepaya dapat berperan sebagai antiinflamasi (Owoyele et al.,
2008). Namun belum diketahui senyawa yang berpengaruh kuat dalam proses
antiinflamasi. Berdasarkan hal tersebut maka perlu dilakukan penelitian untuk
mengetahui efek antiinflamasi ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya.
1.2. Rumusan Masalah
Berdasarkan uraian dari latar belakang penelitian, maka dapat disusun
rumusan masalah sebagai berikut:
a. Apakah pemberian ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya
mempengaruhi jumlah leukosit sehingga dapat digunakan sebagai petunjuk
adanya tidaknya aktifitas anti-inflamasi?
b. Apakah pemberian ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya
mempengaruhi hitung jenis leukosit sehingga dapat digunakan sebagai
petunjuk adanya tidaknya aktifitas anti-inflamasi?

4
c. Apakah efek anti-inflamasidari ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya
lebih baik dibandingkan dengan Indomethacin?
1.3. Kerangka Konsep
Secara skematis kerangka konsep penelitian ditunjukkan pada Gambar 1.1.
Gambar 1.1. Bagan Kerangka Konsep Penelitian
1.4. Tujuan Penelitian
1.4.1. Tujuan Umum:
Tujuan penelitian ini secara umum adalah untukmengetahui pengaruh pemberian
ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya terhadap jumlah leukosit dan hitung
jenis leukosit.

5
1.4.2. Tujuan Khusus:
Tujuan khusus penelitian ini adalah untuk:
a. Untuk mengkaji secara jelas perubahan dari jumlah leukosit yang terjadi
akibat pemberian ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya dalam dosis
yang berbeda
b. Untuk mengkaji secara jelas perubahan dari hitung jenis eosinofil yang
terjadi akibat pemberian ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya
c. Untuk mengkaji secara jelas perubahan dari hitung jenis basofil yang
terjadi akibat pemberian ekstrak metanol dan n-heksanadaun pepaya
d. Untuk mengkaji secara jelas perubahan dari hitung jenis neutrofil yang
e. Untuk mengkaji secara jelas perubahan dari hitung jenis limfosit yang
f. Untuk mengkaji secara jelas perubahan dari hitung jenis monosityang
terjadi akibat pemberian ekstrak metanol dan n-heksanadaun pepaya
1.5. Hipotesis
a. Pemberian ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya dapat
menyebabkan terjadinya penurunan jumlah leukosit pada keadaan
inflamasi
b. Pemberian ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya dapat
menyebabkan terjadinya penurunan jumlah hitung jenis eosinofil pada
keadaan inflamasi

6
c. Pemberian ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya dapat
menyebabkan terjadinya penurunan jumlah basofil pada keadaan inflamasi
d. Pemberian ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya dapat
menyebabkan terjadinya peningkatan jumlah neutrofil pada keadaan
inflamasi
e. Pemberian ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya dapat
menyebabkan terjadinya penurunan jumlah limfosit pada keadaan
inflamasi
f. Pemberian ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya dapat
menyebabkan terjadinya peningkatan jumlah monosit pada keadaan
inflamasi.
1.6 Manfaat Penelitian
Manfaat penelitian ini adalah:
1. Memberikan informasi efek anti-inflamasi ekstrak metanol dan n-heksana
daun pepaya terhadap tikus Wistar jantan dibandingkan dengan
Indomethacin
2. Memberikan perkembangan ilmu pengetahuan khususnya dalam dunia
obat-obatan tradisional.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Tanaman Pepaya (Carica papaya L)
Carica papaya L adalah tanaman yang berasal dari Amerika. Pusat
penyebaran tanaman pepaya diduga berada di daerah Meksiko bagian selatan dan
Nikaragua. Di Indonesia, tanaman pepaya umumnya tumbuh menyebar dari
daratan rendah sampai daratan tinggi, yaitu sampai ketinggian 1000 m di atas
permukaan laut (Kalie, 2008). Hampir di setiap daerah, pepaya memiliki nama
yang berbeda diantaranya: petek (Aceh), mbertik (Karo), tela (Batak), panancane
(Minangkabau), betik (Palembang), punti kayu (Lampung), gedang (Jawa Barat
dan Bali), kates (Jawa tengah, Jawa Timur, Madura), tapaya (Ternate), kuat
(Timor), asawa (Irian Jaya) (Suprapti, 2005).
2.1.1. Morfologi Pepaya (Carica papaya L)
Pepaya merupakan tanaman berbatang tegak dan basah. Semua bagian tanaman
pepaya bergetah putih yang mengandung papain. Pada ruas batang terdapat mata
yang mampu tumbuh menjadi tunas cabang baru.
a. Daun dan batang pepaya
Daun pepaya bercangap (berlekuk) menjari dengan tangkai daun yang panjang
dan berlubang. Bentuk daun menyerupai telapak tangan manusia (Agromedia,
2008). Batangnya berongga karena intinya berupa sel gabus. Berbatang lunak
berair. Bekas kedudukan tangkai daun meninggalkan tanda seperti ruas.
b. Bunga

8
Bunga pepaya keluar dari ketiak daun, tunggal atau dalam rangkain. Bunganya
ada yang berkelamin tunggal (betina/putik atau jantan/benang sari) dan
berkelamin sempurna (hermaprodit) yang mempunyai putik dan benangsari yang
fertil. Dengan demikian ada pohon betina, pohon jantan, dan pohon sempurna
sesuai dengan bunga yang dimilikinya. Pepaya tergolong penyerbuk silang dengan
perantara angin. Bunga berwarna putih dan berbentuk terompet kecil. Mahkota
bunga berwarna kekuningan.
c. Buah
Buah pepaya bergetah. Getahnya semakin hilang pada saat mendekati tua
(matang). Buah yang masak berwarna kuning kemerahan. Buah pepaya berbiji
banyak dalam rongga buah yang lebar. Biji-biji tersebut ada yang berwarna hitam
(fertil) dan ada yang berwarna putih (abortus, tidak tumbuh). Rongga dalam buah
berbentuk bintang jika penampang buahnya dipotong melintang.
d. Akar
Pepaya mempunyai akar tunggang dan akar samping yang lunak dan agak
dangkal. Akar pepaya tumbuh panjang, cenderung mendatar. Jumlahnya tidak
banyak dan lemah (Sunarjono, 2008).
2.1.2 . Taksonomi Tanaman Pepaya (Carica papaya L)
Carica papaya Dalam taksonomi tumbuh-tumbuhan diklasifikasikan sebagai
berikut:
Kingdom : Plantae
Divisio : Spermatophyta
Subdivisio : Angiospermae
Class : Dicotyledoneae

9
Ordo : Caricales
Familia : Caricaceae
Genus : Carica
Species : Carica papaya L
2.1.3. Sifat dan Khasiat Pepaya (Carica papaya L)
Buah pepaya rasanya manis dan bersifat netral. Buah pepaya berkhasiat
sebagai pengobatan konstipasi, diare kronis, demam, luka serta alergi. Buah
matang dapat memacu enzim pencernaan, peluruh empedu, penguat lambung dan
antiscorbut. Buah mengkal sebagai pencahar ringan, peluruh kencing,
memperlancar ASI. (Adi, 2006).
Akar tumbuhan pepaya berguna sebagai peluruh kencing (diuretik), obat
cacing, penguat lambung, serta perangsang kulit. Biji pepaya dapat dipakai untuk
obat cacing dan peluruh haid.
Daun pepaya dapat menambah nafsu makan, meluruhkan haid,
menghilangkan rasa sakit, memudahkan pengeluaran feses (mencegah konstipasi),
anti ambein. Daun pepaya berkhasiat pula sebagai antidiabetes, mencegah anemia,
dan antikanker. Daun pepaya yang masih muda dan agak tua kaya kalsium, sangat
baik untuk pengobatan rematik (encok dan penyakit tulang lainnya). Karpein pada
pepaya merupakan sejenis alkaloid yang dapat mengurangi gangguan jantung, anti
amuba, sebagai peluruh kencing. Getah pepaya (dari buah, daun, maupun batang)
mengandung papain yang bersifat proteolitik (merombak protein) (Adi, 2007;
Sunarjono, 2008).

10
2.1.4. Kandungan Senyawa Kimia Daun Pepaya (Carica papaya L)
Sejumlah mineral yang terkandung di dalam pepaya diantaranya kalium,
magnesium, dan antioksidan seperti karoten, vitamin C dan flavonoid, enzim
renin, alkalin pepaya, dan karpein serta enzim papain (Adi, 2006).
Senyawa flavonoida adalah suatu kelompok fenol terbesar yang ditemukan
di alam. Senyawa-senyawa ini merupakan zat warna merah, ungu dan biru serta
kuning yang ditemukan pada tumbuh-tumbuhan (Lenny, 2006).
Flavonoid termasuk metabolit sekunder tumbuhan yang merupakan golongan
terbesar senyawa fenol alam. Kebanyakan tumbuhan obat mengandung flavonoid
yang telah banyak diketahui menunjukkan beberapa jenis bioaktivitas, di
antaranya adalah anti alergi, antiinflamasi, anti mikroba, anti kanker, anti virus,
anti mutagen, anti trombosis, serta sebagai vasodilator. Selain itu, flavonoid juga
merupakan antioksidan yang memberikan perlindungan terhadap agen oksidatif
dan radikal bebas (Patil et al., 2004).
Senyawa polifenol dan flavonoid dilaporkan mampu menghambat enzim
siklooksigenase serta telah terbukti memiliki aktivitas penangkapan radikal bebas
(Ebadi, 2001).
Sebagai antiinflamasi, banyak flavonoid menunjukkan penghambatan
terhadap siklooksigenase dan lipoksigenase yang sepertinya berhubungan dengan
aktivitas antioksidan dari flavonoid dan dapat menimbulkan pengaruh lebih luas
karena pembentukan asam arakidonat dan metabolit proinflamasi (prostaglandin,
leukotrien, dan tromboksan) ikut terhambat pula (Miller, 2001).
Menurut Simon and Kerry (2000), senyawa flavonoid, steroid dan tanin
dalam bentuk bebas dan kompleks tanin-protein berkhasiat sebagai anti inflamasi.

11
Kandungan kimia pepaya meliputi:
a. Daun: enzim papain, alkaloid, pseudo-carpaina, glikosid, karposid dan saponin,
sakarosa, dekstrosa, dan levulosa.
b. Buah: beta karoten, pectin, d-galaktosa, l-arabinosa, papain, papayotimin
papain, fitokinase.
c. Biji: glucoside cacirin dan karpein.
d. Getah: papain, kemokapain, lisosim, lipase, glutamin, siklotransferase
(Dalimartha, 2008).
2.2. Inflamasi
Inflamasi didefenisikan sebagai reaksi lokal jaringan terhadap infeksi atau
cedera dan melibatkan lebih banyak mediator dibanding respon imun didapat.
Inflamasi merupakan respons fisiologis terhadap berbagai rangsangan seperti
infeksi dan cedera jaringan.Inflamasi dapat berupa inflamasi lokal, sistemik, akut
dan kronis yang menimbulkan kelainan patologis (Baratawidjaja, 2010).
Petanda respons inflamasi dibagi menjadi 3 kelompok yaitu tanda
makroseluler, mikroseluler dan biomolekuler. Tanda makroseluler berupa
kemerahan (rubor), bengkak (tumor), panas (calor) dan sakit (dolor) dan
kehilangan fungsi alat yang terkena (functio laesa). Sesudah beberapa menit
terjadinya cedera jaringan, ditemukan vasodilatasi yang menghasilkan
peningkatan volume darah di tempat.Volume darah yang meningkat di jaringan
dapat menimbulkan perdarahan.Dalam beberapa jam sel leukosit menempel pada
sel endotel di daerah inflamasi dan bermigrasi melewati dinding kapiler masuk ke
rongga jaringan yang disebut ekstravasasi. Tanda biomelekuler dari terjadinya

12
suatu inflamasi berupa peningkatan berbagai factor plasma seperti
immunoglobulin, komplemen, sistem aktivasi kontak-koagulasi-fibrinolitik,
interleukin, tumor necrosis factor, dan berbagai molekul lainnya.
Inflamasi akut pada umumnya berlangsung dengan awitan yang cepat dan
berlangsung sebentar. Inflamasi akut disertai dengan reaksi sistemik yang disebut
dengan respon fase akut. Pada respon fase akut terjadi perubahan cepat dalam
kadar beberapa protein dalam darah. Inflamasi akut merupakan respon khas
imunitas nonspesifik.
Sel-sel sistem imun nonspesifik seperti neutrophil, sel mast, basophil,
eosinophil dan makrfage jaringan berperan dalam inflamasi.Sel-sel tersebut
diproduksi dan disimpan sementara sebagai persediaan, masa hidup tidak lama
dan jumlah yang diperlukan pada daerah inflamasi dipertahankan oleh influks sel-
sel baru.
Neutrofil merupakan sel utama pada inflamasi akut, bermigrasi ke
jaringan dan puncaknya terjadi pada 6 jam pertama. Untuk memenuhi hal tersebut
diperlukan peningkatan produksi neutrofil dalam sumsum tulang.Orang dewasa
normal memproduksi lebih dari 1010neutrofil perhari tetapi pada inflamasi dapat
meningkat sampai 10 kali lipat. Pada inflamasi akut, neutrofil dalam sirkulasi
dapat meningkat dengan segera dari 5000 µl sampai 30000 µl. Peningkatan
tersebut disebabkan oleh migrasi neutrofil ke sirkulasi yang berasal dari sumsum
tulang dan persediaan marginal intravaskular.
Pada penelitian ini karena keterbatasan dana yang ada, maka hanya akan
meneliti dari sisi mikroseluler saja, yaitu berupa jumah leukosit dan hitung jenis
leukosit.

13
Mekanisme terjadinya inflamasi
Terjadinya inflamasi adalah reaksi setempat dari jaringan atau sel terhadap
suatu rangsang atau cedera. Proses terjadinya inflamasi dapat dibagi dalam dua
fase:
a. Perubahan vaskular
Respon vaskular pada tempat terjadinya cedera merupakan suatu yang
mendasar untuk reaksi inflamasi akut.Perubahan ini meliputi perubahan aliran
darah dan permeabilitas pembuluh darah. Perubahan aliran darah karena terjadi
dilatasi arteri lokal sehingga terjadi pertambahan aliran darah (hypermia) yang
disusul dengan perlambatan aliran darah. Akibatnya bagian tersebut menjadi
merah dan panas. Sel darah putih akan berkumpul di sepanjang dinding pembuluh
darah dengan cara menempel. Dinding pembuluh menjadi longgar susunannya
sehingga memungkinkan sel darah putih keluar melalui dinding pembuluh. Sel
darah putih bertindak sebagai sistem pertahanan untuk menghadapi serangan
benda-benda asing.
b. Pembentukan cairan inflamasi
Peningkatan permeabilitas pembuluh darah disertai dengan keluarnya sel
darah putih dan protein plasma ke dalam jaringan disebut eksudasi. Cairan inilah
yang menjadi dasar terjadinya pembengkakan. Pembengkakan menyebabkan
terjadinya tegangan dan tekanan pada sel syaraf sehingga menimbulkan rasa sakit
Cara kerja AINS sebagian besar berdasarkan hambatan sintesis
prostaglandin, dimana kedua jenis cyclooxygenase diblokir. AINS yang ideal
diharapkan hanya menghambat COX II (peradangan) dan tidak COX I

14
(perlindungan mukosa lambung), juga menghambat lipooxygenase (pembentukan
leukotrien).
Fenomena inflamasi meliputi kerusakan mikrovaskular, meningkatnya
permeabilitas kapiler dan migrasi leukosit ke jaringan radang. Gejala umum
proses inflamasi yang sudah dikenal yaitu, kolor, rubor,tumor, dolor, dan function
laesa. Selama proses inflamasi terjadi banyak mediator kimia yang dilepaskan
secara lokal antara lain histamine, 5-hidroksitriptamin (5-HT), faktor kemotatik,
bradikinin, leukotrien, dan PG (Baratawidjaja, 2010).
Gambar 2.1. Skema proses terjadinya inflamasi akut

15
Gambar 2.2. Skema terjadinya inflamasi (Biocarta, 2013)
Mediator inflamasi
Gejala inflamasi akut ditandai dengan penglepasan berbagai macam
mediator sel mast setempat (histamin dan bradikinin). Kejadian ini disertai
aktivasi komplemen dan sistem koagulasi. Sel endotel dan sel-sel inflamasi
masing-masing melepas mediator yang menimbulkan efek sistemik seperti panas,
neutrofilia dan protein fase akut..
Inflamasi akut berhubungan dengan produksi sitokin proinflamasi seperti
IL-1, IL-6, dan IL-8. Sitokinin merangsang hati untuk membentuk sejumlah
protein yang disebut protein fase akut yang terdiri atas a1-antitripsin, komplemen
(C3 dan C4), CRP, fibrinogen, dan haptoglobin.
Inflamasi dicetuskan oleh pelepasan mediator dari jaringan yang rusak dan
migrasi sel. Mediator kimiawi spesifik bervariasi dengan tipe peradangan

16
(inflamasi) diantaranya adalah histamin, bradikinin, prostaglandin dan interleukin.
Histamin merupakan mediator pertama yang dilepaskan dari sekian banyaknya
mediator lain dan segera muncul dalam beberapa detik yang menyebabkan
peningkatan permeabilitas kapiler. Bradikinin dan kalidin bereaksi lokal
menimbulkan rasa sakit, vasidilatasi, meningkatkan permeabilitas kapiler dan
berperan meningkatkan potensi prostaglandin.
Asam arakhidonat merupakan prekursor dari sejumlah besar mediator
inflamasi. Senyawa ini merupakan komponen utama lipid seluler dan hanya
terdapat dalam keadaan bebas dengan jumlah kecil yang sebagian besar berada
dalam bentuk fosfolipid membran sel. Bila membran sel mengalami kerusakan
oleh suatu rangsangan kimiawi, fisis atau mekanis, maka enzim fosfolipase A2
diaktivasi untuk mengubah fosfolipida tersebut menjadi asam arakhidonat.
Sebagai penyebab inflamasi, prostaglandin (PG) bekerja lemah, berpotensi
kuat setelah bergabung dengan mediator atau substansi lain yang dibebaskan
secara lokal seperti histamin, serotinin, atau leukotrien. Prostaglandin mampu
menginduksi vasodilatasi pembuluh darah dalam beberapa menit dan terlibat pada
terjadinya nyeri, inflamasi dan demam.
2.3. Leukosit
Leukosit adalah sel darah yang mengandung inti, disebut juga sel darah
putih. Terdapat dua jenis leukosit agranuler : limfosit sel kecil, sitoplasma sedikit;
monosit sel agak besar mengandung sitoplasma lebih banyak. Terdapat tiga jenis:
leukosir granuler: Neutrofil, Basofil, dan Asidofil (eosinofil) yang dapat
dibedakan dengan afinitas granula terhadap zat warna netral basa dan asam.

17
Granula dianggap spesifik bila ia secara tetap terdapat dalam jenis leukosit
tertentu dan pada sebagian besar precursor (pra zatnya). (Guyton, 2006)
Leukosit dan turunannya berperan sebagai (1) menahan invasi oleh
patogen (mikroorganisme penyebab penyakit, misalnya bakteri dan virus) melalui
proses fagositosis; (2) mengidentifikasi dan menghancurkan sel-sel kanker yang
muncul di dalam tubuh; dan (3) berfungsi sebagai ”petugas pembersih” yang
membersihkan ”sampah” tubuh dengan memfagosit debris yang berasal dari sel
yang mati atau cedera. Yang terakhir penting dalam penyembuhan luka dan
perbaikan jaringan . Untuk melaksanakan fungsinya, leukosit terutama
menggunakan strategi ”cari dan serang” yaitu sel-sel tersebut pergi ke tempat
invasi atau jaringan yang rusak. Alasan utama mengapa sel darah putih terdapat di
dalam darah adalah agar mereka cepat diangkut dari tempat pembentukan atau
penyimpanannya ke manapun mereka diperlukan. (Sherwood, 2007)
Jumlah leukosit dalam sirkulasi sangat mudah dan cepat berubah. Nilai
absolut maupun relatif dapat berubah oleh stimulasi selama beberapa menit atau
beberapa jam. Dampak yang paling jelas terlihat bila kelenjar adrenal dirangsang,
baik secara farmakologis maupun sebagai respon terhadap kebutuhan fisiologis.
2.4. Hitung Jenis Leukosit
Leukosit tidak memiliki hemoglobin (berbeda dengan eritrosit), sehingga
tidak berwarna (putih) kecuali jika diwarnai secara khusus agar dapat terlihat di
bawah mikroskop. Tidak seperti eritrosit, yang strukturnya uniform, berfungsi
identik, dan jumlahnya konstan, tetapi leukosit bervariasi dalam struktur, fungsi
dan jumlah. Terdapat lima jenis leukosit yang bersirkulasi yaitu neutrofil,

18
eosinofil, basofil, monosit dan limfosit dan masing-masing dengan struktur serta
fungsi yang khas. Mereka semua berukuran sedikit lebih besar daripada eritrosit.
Kelima jenis leukosit tersebut dibagi ke dalam dua kategori utama,
bergantung pada gambaran nukleus dan ada tidaknya granula di sitoplasma
sewaktu dilihat di bawah mikroskop. Neutrofil, eosinofil, dan basofil
dikategorikan sebagai granulosit (sel yang banyak mengandung granula) atau
polimorfonukleus (banyak bentuk nukleus). Nukleus sel-sel ini tersegmentasi
menjadi beberapa lobus dengan beragam bentuk, dan sitoplasma mereka
mengandung banyak granula terbungkus membran.
Sel leukosit utama yang terlibat dalam mekanisme inflamasi iakut adalah
neutrofil. Neutrofil kadang disebut “Soldier of the Body” karena merupakan sel
pertama yang dikerahkan ke tempat inflamasi. Eutrofil merupakan sebagian besar
dari leukosit dalam sirkulasi darah. Neutrofil biasanya hanya berada dalam
sirkulasi kurang 7-10 jam sebelum bermigraai ke jaringan. Butir-butir azurofilik
primer (lisosom) mengandung hidrolase asam, mieloperoksidase, dan
neuromidase (lisozim), sedang butir-butir sekunder atau spesifik
mengandunglaktoferin dan lisozim. Neutrofil mempuyai reseptor untuk Ig G dan
komplemen. Neutrofil yang bermigrasi pertama dari sirkulasi ke jaringan
terrinfeksi dengan cepat dilengkapi denga berbagai reseptor seperti TLR2 (Toll
like receptor), TLR4.
Hitung jenis leukosit hanya menunjukkan jumlah relatif dari masing-
masing jenis sel. Untuk mendapatkan jumlah absolut dari masing-masing jenis sel
maka nilai relatif (%) dikalikan jumlah leukosit total (sel/ μl). Hitung jenis
leukosit berbeda tergantung umur. Pada anak limfosit lebih banyak dari netrofil

19
segmen, sedang pada orang dewasa kebalikannya. Hitung jenis leukosit juga
bervariasi dari satu sediaan apus ke sediaan lain, dari satu lapangan ke lapangan
lain. Kesalahan karena distribusi ini dapat mencapai 15%. Bila pada hitung jenis
leukosit, didapatkan eritrosit berinti lebih dari 10 per 100 leukosit, maka jumlah
leukosit / μl perlu dikoreksi.
2.5 Obat-obat Anti-Inflamasi
Obat-obat inflamasi adalah golongan obat yang memiliki aktivitas menekan
atau merangsang peradangan. Obat anti-inflamasi terbagi menjadi 2 macam, yaitu:
Steroida dan NSAID
Obat Anti- Inflamasi golongan Steroida
Glukokortikoid mempunyai potensi efek antiinflamasi dan pertama kali
dipublikasikan, dianggap jawaban terakhir dalam pengobatan peradangan.
Sayangnya, toksisitas yang berat sehubungan dengan terapi kortikosteroid kronis
mencegah pemakaiannya kecuali untuk mengontrol pembengkakan akut penyakit
sendi (Katzung, 2009).
Glukokortikoid mempunyai efek mengurangi peradangan yang disebabkan
karena efeknya terhadap konsentrasi, distribusi dan fungsi leukosit perifer serta
penghambatan aktivitas fosfolipase A2. Setelah pemberian dosis tunggal
glukokortikoid bekerja singkat dengan konsentrasi neutrofil meningkat yang
menyebabkan pengurangan jumlah sel pada daerah peradangan (Katzung, 2009).
Efek glukokortikoid berhubungan dengan kemampuannya untuk
merangsang biosintesis protein lipomodulin yang dapat menghambat kerja
enzimatik fosfolipase, suatu enzim yang bertanggung jawab terhadap pelepasan

20
asam arakhidonat dan metabolitnya seperti prostaglandin (PG), leukotrin (LT),
prostasiklin dan tromboksan. Glukokortikoid dapat memblok jalur siklooksigenase
dan lipooksigenase, sedangkan NSAID (Non-Steroid Antiinflammatory Drugs)
hanya memblok jalur siklooksigenase (Katzung, 2009).
Efek glukokortikoid pada arthritis rheumatoid bersifat segera. Contoh
senyawa yang termasuk golongan ini adalah hidrokortison, prednisolon,
betametason, triamsinolon dan sebagainya (Katzung, 2009).
Obat Anti-Inflamasi golongan Non Steroid
Obat-obat AINS terbagi dalam beberapa golongan berdasarkan struktur
kimianya, perbedaan kimiawi ini menyebabkan luasnya batas-batas sifat
farmakokinetiknya. Obat ini efektif untuk peradangan akibat trauma (pukulan,
benturan, kecelakaan) juga setelah pembedahan, atau pada memar akibat olah
raga. Obat ini dipakai pula untuk mencegah pembengkakan bila diminum sedini
mungkin dalam dosis yang cukup tinggi (Tjay, 2002). Obat-obat anti-inflamasi
non steroid (AINS) terutama bekerja dengan jalan menghambat enzim
siklooksigenase tetapi tidak enzim lipoksigenase (Mycek, 2001).
Obat-obat antiinflamasi non steroid (AINS) merupakan suatu kelompok
obat yang secara kimia tidak sama, berbeda aktivitas antipiretik, analgesik dan
antiinflamasinya. Obat-obat ini terutama bekerja dengan jalan menghambat enzim
siklooksigenase. Aspirin adalah prototipe dari kelompok ini yang paling umum
digunakan (Mycek, 2001).
Aktivitas antiinflamasi obat AINS mempunyai mekanisme kerja yang sama
dengan aspirin terutama bekerja melalui penghambatan biosintesis prostaglandin.

21
Tidak seperti aspirin, obat-obat ini adalah penghambat siklooksigenase yang
reversibel. Selektivitas terhadap COX I dan COX II, bervariasi dan tak lengkap.
Misalnya aspirin, indometasin, piroksikam dan sulindak dianggap lebih efektif
menghambat COX I, metabolit aktif nabumeton sedikit lebih selektif terhadap
COX II. Dari obat AINS yang tersedia, indomethacin dan diklofenak dapat
mengurangi sintesis baik prostaglandin maupun leukotrin (Katzung, 2009). Obat-
obat antiinflamasi non steroid adalah ibuproven, indomethacin, ketorolak,
naporekson dan sebagainya.
Indomethacin
Indomethacin merupakan derivat indol asam asetat. Obat ini sudah dikenal
sejak 1963 untuk pengobatan arthritis remathoid dan sejenisnya. Indomethacin
memiliki efek antiinflamasi dan analgesik-antipiretik yang kira-kira sebanding
dengan aspirin. Telah terbukti bahwa indomethacin memiliki efek analgesik
perifer maupun sentral. In vitro indomethacin menghambat enzim
siklooksigenase.
Obat ini merupakan penghambat sintesis prostaglandin terkuat dan diabsorpsi
dengan baik setelah pemberian oral dan sebagian besar terikat dengan protein
plasma (Katzung, 2009).
Indomethacin dipilih sebagai kontrol positif sebagai obat antiinflamasi
untuk dibandingkan efeknya terhadap ekstrak metanol dan n-heksan dari daun
pepaya. Hal ini disebabkan karena indomethacin telah mempunyai profil
farmakologi yang lengkap, dan telah sering digunakan sebagai standar dalam
penelitian-penelitian untuk menguji efek antiinflamasi suatu zat.

22
Gambar 2.3. Struktur Molekul Indomethacin
Absorbsi dari usus baik dan cepat, secara rektal sangat tergantung dari basis
suppositoria yang digunakan.Kira-kira 92-99% Indomethacin terikat protein
plasma. Waktu paruh plasma kira-kira 2-4 jam. Ekskresi berlangsung separuh
sebagai glukoronida dengan kemih, separuh dengan tinja.
Efek-efek samping indomethacin tergantung dosis, antara lain gangguan
lambung dan usus, perdarahan akut (juga pada perdarahan rektal), dan efek
ulcerogen, begitu pula efek-efek terhadap susunan saraf pusat dengan nyeri
kepala, pusing, tremor, dan depresi.
2.6. Karagenan
Karagenan merupakan sulfat polisakarida bermolekul besar sebagai induktor
inflamasi yang bekerja dengan cara Lipopolysaccharide (LPS)-induced
Macrophage Activation.
Zat yang dapat digunakan untuk memicu terbentuknya inflamasi antara
lain: mustard oil 5%, dextran 1%, egg white fresh undiluted, serotonin kreatinin
sulfat, lamda karagenan 1% yang diinduksikan secara subplantar pada telapak
kaki tikus.
Pemilihan karagenan sebagai penginduksi radang dipilih karena memiliki
beberapa keuntungan yaitu: tidak meninggalkan bekas, dapat digunakan dalam
pengujian antiinflamasi pada keadaaan akut, tidak menimbulkan kerusakan

23
jaringan dan memberikan respon yang lebih peka terhadap obat antiinflamasi
dibanding senyawa iritan lainnya.
Karagenan memiliki beberapa tipe, yaitu lambda (λ) karagenan, iota (i) karagenan
dan kappa (k) karagenan. Lambda (λ) karagenin dibandingkan dengan jenis
karagenin yang lain, menyebabkan inflamasi dan memiliki bentuk gel yang baik
dan tidak keras .
Winter,1983 pertama sekali memakai karagenan sebagai zat penginduksi
radang untuk pengujian antiinflamasi, dimana karagenan bekerja menurut prinsip
‘log dose-response’, sehingga dapat dilakukan uji antiinflamasi dengan
menggunakan sedikit sampel dan dalam waktu beberapa jam saja.
Urutan peristiwa pada inflamasi akibat karagenan pada kaki (cakar) tikus
adalah sebagai berikut: karagenan yang merupakan suatu lipopolisakarida akan
menyebabkan teraktivasinya makrofag, selanjutnya mediator yang pertama-tama
dilepaskan yaitu yaitu histamin dan serotonin, diikuti oleh fase kedua, yaitu
pelepasan kinin yang mempertahankan peningkatan kepermeabelan pembuluh
darah. Hal kemidian diikuti oleh fase ketiga, yaitu pelepasan prostaglandin yang
bersamaan dengan migrasi leukosit ke lokasi radang. Zat antiradang nonsteroid
menekan migrasi ini. Pengaktifan dan pelepasan semua mediator yang telah
disebutkan di atas, tergantung pada sistem komplemen yang utuh. (Hamor,
G.H.1996, Zheng et al., 2012)
Karagenan diketahui menginduksi inflamasi berdasarkan rheumatological
models, secara molecular karagenan menginduksi produksi Interleukin 8 yang
berfungsi mengaktifkan Natural killer (NK) yang meningkatkan pelepasan Tumor

24
Necrosis Factor -alpha (TNF-α), yang selanjutnya akan menarik neutrofil ke
tempat cedera. (Borthakur, 2006)
Karagenan akan meningkatkan akumulasi leukosit yang akan
meningkatkan kadar leukosit dan proses ini dihambat oleh Indomethacin. (Zheng
et al., 2012)

BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
3.1. Jenis Penelitian
Penelitian yang dilakukan merupakan penelitian eksperimental dengan
menggunakan tikus Wistar jantan. Metodologi penelitian meliputi penyiapan
sampel, pembuatan ekstrak metanol dan n-heksana dengan cara maserasi daun
pepaya, pengujian efek antiinflamasi.
3.2 . Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan di laboratorium Farmakologi Farmasi Universitas
Sumatera Utara, laboratorium Kimia Organik Bahan AlamFMIPA Universitas
Sumatera Utara dan laboratorium Biologi FMIPA Universitas Sumatera Utara.
3.3. Populasi Penelitian
Adapun populasi penelitian ini digunakan tikus Wistar jantan (Rattus
norvegicus) yang diperoleh dari FMIPA USU.
3.4. Sampel Penelitian
Kriteria Inklusi:
1. Tikus jantan (Rattus norvegicus) strain Wistar, berat badan 150 - 250
gram, berusia 8 minggu
2. Sehat, diketahui dari Tikus jantan (Rattus norvegicus) strain Wistar tidak
cacat secara anatomi
25

26
Kriteria Eksklusi:
Tikus jantan (Rattus norvegicus) strain Wistar yang tidak sehat
Besar Sampel
Sampel penelitian adalah 36 ekor tikus jantan (Rattus norvegicus) strain Wistar
yang dipilih dengan teknik acak sederhana. Sampel dibagi ke dalam 6 kelompok
perlakuan, masing-masing menggunakan 6 ekor tikus.
3.5. Variabel Penelitian
a. Variabel bebas yaitu ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya (Carica
papaya L)
b. Variabel tergantung uji antiinflamasi (jumlah dan hitung jenis leukosit)
c. Variabel Kendali
Variable kendali adalah variabel luar yang dapat dikendalikan melalui
homogenisasi, yaitu:
i. Umur, Tikus berusia + 3 bulan.
ii. Variasi genetik, Tikus Wistar.
iii. Jenis kelamin, semua tikus yang digunakan dalam penelitian ini
berjenis kelamin jantan.
iv. Suhu lingkungan, tikus ditempatkan dalam ruangan dengan suhu
28 – 30ºC.
v. Jenis makanan, makanan berupa pakan standar, diberikan pada
tikus dua kali sehari, setiap pagi dan sore hari berupa pellet dengan

27
dosis 20 g/ekor/hari. Pakan standar adalah CP 551 berupa pelet
produksi PT. Charoen Pokphan.
vi. Kondisi psikologis, Kondisi psikologis tikus dapat dipengaruhi
oleh perlakuan yang berulang kali. Keadaan stres memacu produksi
hormon epinefrin, norepinefrin, kortikotropin dan glukokortikoid
yang akan meningkatkan tekanan darah (Guyton dan Hall, 2007).
Pengaruh ini dapat dikurangi dengan adanyawaktu adaptasi
sebelum percobaan dan pemisahan subyek penelitian dalam
kandang yang terpisah.
vii. Variabel terkendali, yaitu jenis kelamin, umur, berat badan,
makanan, lingkungan.
3.6. Definisi Operasional
a. Inflamasi akut Tikus jantan strain wistar jantan merupakan proses infamasi
yang dilihat melalui jumlah dan hitung jenis leukosit yang diperiksa dari darah
ekor tikus
b. Ekstraksi dau pepaya adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat
larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak larut dengan pelarut cair.
c. Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan menyari
simplisia nabati atau hewani menurut cara yang cocok diluar pengaruh cahaya
matahari langsung.
d. Maserasi adalah proses pengekstraksian simplisia menggunakan pelarut
dengan beberapa kali pengadukan dengan temperatur ruangan.

28
3.7. Etika Penggunaan Binatang Percobaan
Penggunaan dan penanganan hewan di laboratorium penelitian dilakukan
sesuai dengan aturan etika penelitian hewan coba yang diatur dalam Deklarasi
Helsinki untuk memperoleh “Ethical clearance” dari komite etik dan komite
ilmiah penelitian FMIPA Biologi USU Medan.
3.8. Alat dan Bahan Penelitian
3.8.1 Alat
Alat-alat yang digunakan adalah pipet tetes, timbangan, tabung uji (vial), wadah
bening, aerator, lampu, alat-alat gelas laboratorium (seperti beaker glass, labu
takar, erlenmeyer dan sebagainya), blender (Nowake), neraca listrik (Chyo JP 2-
6000), neraca hewan (Presica Geniwigher, GW-1500), alat PK-air (Azeotropi),
KLT, rotary evaporator (Buchi R-114), freeze dryer (Modulyo, Edwars, serial no:
3985), cawan porselen, mortar dan stamfer, oral sonde tikus, spuit (ukuran 1 ml
dan 3 ml), corong pisah, kandang tikus, Stop watch, pipet Leukosit, kamar hitung
Improve Neubaeur, Objek glass (kaca objek) dan deck glass, mikroskop cahaya
3.8.2 Bahan
Bahan yang digunakan daun pepaya, metanol, n-heksana, air suling,
karagenan, indomethacin, besi (III) klorida, toluene, asam klorida (p), natrium
hidroksida, timbal (II) asetat, asam asetat anhidrat, asam sulfat (p), merkuri (II)
klorida, kalium iodida, iodium, α-naftol, asam nitrat, bismuth nitrat, darah EDTA,
Larutan Turk untuk hitung jumlah leukosit, larutan Giemsa untuk pembuatan

29
hapusan darah yang berguna untuk pemeriksaan hitung jenis leukosit, minyak
imersi
3.9. Rancangan Percobaan
3.9.1. Pembuatan Larutan Pereaksi
Pembuatan larutan pereaksi menurut Materia Medika Indonesia jilid V.
3.9.1.1. Asam klorida 2 N
Sebanyak 20 ml HCl(p) diencerkan dengan air suling sampai 100 ml.
3.9.1.2. Besi (III) klorida 10% b/v
Sebanyak 10 g FeCl3 dilarutkan dalam air suling sampai 100 ml.
3.9.1.3.Natrium hidroksida
Sebanyak 8 gram kristal NaOH dilarutkan dalam air suling hingga 100 ml
3.9.1.4.Timbal (II) asetat
Sebanyak 15,17gram kristal timbal (II) asetat dilarutkan dalam air suling
hingga 100 ml
3.9.1.5.Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 gram kalium iodide dilarutkan dalam 20 ml air suling kemudian
ditambahkan 2 gram iodium sambil diaduk sampai larut, lalu ditambahkan
air suling hingga 100 ml.
3.9.1.6.Pereaksi Dragendorff
Sebanyak 8 gram bismuth nitrat dilarutkan dalam asam nitrat 20 ml
kemudian dicampur dengan larutan kalium iodida sebanyak 27,2 gram dalam 50
ml air suling. Campuran didiamkan sampai memisah sempurna. Larutan jernih
diambil dan diencerkan dengan air suling secukupnya hingga 100 ml.

30
3.9.1.7.Pereaksi Mayer
Sebanyak 5 gram kalium iodida dilarutkan dalam 10 ml air suling kemudian
ditambahkan larutan 1,36 gram merkuri (II) klorida dalam 60 ml air suling.
Larutan dikocok dan ditambahkan air suling hingga 100 ml.
3.9.1.8.Pereaksi Molish
Sebanyak 3 gram α-naftol dilarutkan dalam asam nitrat 0,5N secukupnya
hingga 100 ml.
3.9.2. Penyiapan Bahan
Penyiapan bahan meliputi determinasi tumbuhan, pengumpulan bahan dan
pembuatan simplisia.
3.9.2.1.Determinasi Tumbuhan
Determinasi tumbuhan dilakukan oleh Laboratorium Taksonomi
Tumbuhan FMIPA USU.
3.9.2.2.Pengumpulan Bahan
Sampel yang digunakan adalah daun pepaya yang biasa dikonsumsi oleh
masyarakat sebagai bahan baku sayuran. Sampel diambil dari kebun pepaya di
Medan. Pengambilan sampel dilakukan secara purposif yaitu tanpa
membandingkan dengan tempat tumbuh di daerah lain.
3.9.3 Pembuatan Simplisia
Daun pepaya dibersihkan dari kotoran, dicuci dengan air bersih, ditiriskan.
Daun dikering anginkan tanpa terkena cahaya matahari. Simplisia yang diperoleh
diserbuk dengan blender dan disimpan dalam wadah yang sesuai.

31
3.9.3.1. Pemeriksaan Pendahuluan Kandungan Kimia Serbuk Simplisia
Dilakukan pemeriksaan golongan alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin,
tannin, steroid.
3.9.3.1.1. Pemeriksaan alkaloid
Sebanyak 500 mg serbuk simplisia ditambahkan 1 ml HCl 2 N dan 9 ml air
suling, dipanaskan diatas penangas air selama 2 menit, didinginkan dan disaring.
Filtrat dipakai untuk percobaan berikut:
a. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer, akan terbentuk
endapan menggumpal berwarna putih atau kuning.
b. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat, akan
terbentuk endapan berwarna coklat sampai hitam.
c. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff, akan
terbentuk endapan berwarna merah atau jingga.
Alkaloid positif jika terjadi endapan atau kekeruhan paling sedikit dengan 2
atau 3 percobaan diatas.
3.9.3.1.2. Pemeriksaan Glikosida
Sebanyak 3 gram serbuk simplisia disari dengan 30 ml etanol 95% dan air
suling (7:3) dan 10 ml asam sulfat 2 N, lalu direfluks selama 1 jam. Didinginkan
dan disaring. Pada 20 ml filtrat ditambah dan didiamkan selama 5 menit, disaring.
Filtrat disari tiga kali, tiap kali dengan 20 ml campuran 3 bagian kloroform dan 2
bagian isopropanol. Kumpulan sari air diuapkan pada suhu tidak lebih dari 50 0C.
Sisa dilarutkan dengan 2 ml metanol. Larutan sisa dimasukkan ke tabung reaksi,
selanjutnya diuapkan di atas penangas air. Pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5

32
tetes larutan pereaksi Molish. Ditambahkan hati-hati 2 ml asam sulfat pekat
melalui dinding tabung, akan terbentuk cincin ungu pada batas kedua cairan
menunjukkan adanya glikosida.
3.9.3.1.3. Pemeriksaan Saponin
Sebanyak 0,5 gram serbuk dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambahkan
10 ml air panas, kemudian dikocok selama 10 detik, jika terbentuk busa setinggi 1
cm sampai 10 cm yang stabil selama tidak kurang dari 10 menit dan tidak hilang
dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2 N, menunjukkan adanya saponin.
3.9.3.1.4. Pemeriksaan Flavonoid
Sebanyak 0,5 g serbuk direfluks dengan 10 ml metanol selama 10 menit,
kemudian disaring. Filtratnya diencerkan dengan 10 ml air suling. Setelah dingin
ditambahkan 5 ml eter minyak tanah, dikocok hati-hati, dan didiamkan. Lapisan
metanol diambil, lalu diuapkan pada suhu 40 0C, sisanya dilarutkan dalam 1 ml
etanol, kemudian ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 10 ml asam klorida
pekat, jika terjadi warna merah jingga sampai merah ungu menunjukkan adanya
flavonoida.
3.9.3.1.5. Pemeriksaan Tanin
Sebanyak 500 mg sampel disari dengan 10 ml air, disaring, lalu diencerkan
sampai hampir tidak berwarna. Kepada 2 ml larutan sampel ditambahkan 1-2 tetes
larutan FeCl3 10 % dan diperhatikan warna yang terjadi, warna biru, biru-hitam,
hijau atau biru-hijau dan endapan menunjukkan adanya tanin.
3.9.3.1.6. Pemeriksaan Steroida
Sejumlah 1 g serbuk simplisia dimaserasi dengan 20 ml eter selama 2 jam,
disaring. Filtrat digunakan untuk reaksi berikut: 5 ml larutan eter diuapkan di

33
dalam cawan penguap, ke dalam sisa ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrat dan
1 tetes asam sulfat(p). reaksi steroida positif bila terjadi warna merah-ungu atau
biru-hijau.
3.9.4. Pembuatan Ekstrak Metanol dan n-Heksana
3.9.4.1. Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Pepaya
Sebanyak 1000 gram serbuk simplisia dimasukkan ke dalam bejana
bertutup dan dibasahi dengan sejumlah cairan penyari metanol, dimaserasi selama
48 jam. Cairan disaring hingga diperoleh cairan berwarna, diulangi hingga tiga
kali. Maserat dirotavapor hingga menjadi ekstrak agak pekat, selanjutnya metanol
diuapkan hingga tidak bersisa. Hasil akhir berupa ekstrak pekat. Untuk
penggunaan pada hewan coba, ekstrak pekat dikeringkan hingga membentuk
serbuk.
3.9.4.2. Pembuatan Ekstrak n-Heksana Daun Pepaya
Sebanyak 1000 gram serbuk simplisia dimasukkan ke dalam bejana
bertutup dan dibasahi dengan sejumlah cairan penyari n-heksana, dimaserasi
selama 48 jam. Cairan disaring hingga diperoleh cairan berwarna, diulangi hingga
tiga kali. Maserat dirotavapor hingga menjadi ekstrak agak pekat, selanjutnya n-
heksana diuapkan hingga tidak bersisa. Hasil akhir berupa ekstrak pekat. Untuk
penggunaan pada hewan coba, ekstrak pekat dikeringkan hingga membentuk
serbuk.

34
1000 gram daun pepaya
Dicuci, dikeringkan, diserbuk
Dimaserasi dengan metanol / n-heksana selama 48 jam (diulangi 3x)
Ekstrak metanol / n-heksana Residu

Diskrining fitokimia
Dirotavapor
Ekstrak metanol / n-heksana sedikit pekat
Diuapkan metanol/n-heksana dengan penangas air
Ekstrak pekat metanol / n-heksana
Gambar 3.1. Diagram proses pembuatan ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya
3.9.5. Penyiapan Bahan Uji, Kontrol, dan Obat Pembanding
Ekstrak metanol dan n-heksana daun pepaya dibuat dalam bentuk suspensi
menggunakan CMC 1 %. Obat pembanding indomethacin dibuat dalam bentuk
suspensi menggunakan CMC 1% dengan dosis 5 mg/kg BB. Kontrol yang
digunakan adalah suspensi CMC 1% dalam air suling.
3.9.6. Penyiapan Induktor Radang
Dibuat karagenan 1 % dalam air suling kemudian diaktifkan dengan cara
menginkubasinya pada suhu 37 0C selama 24 jam.

35
3.9.7. Persiapan Hewan Coba
Dua minggu sebelum pengujian, hewan percobaan dipelihara pada kandang
yang mempunyai ventilasi yang baik dan selalu dijaga kebersihannya. Hewan
yang sehat ditandai dengan kenaikan berat badan yang teratur dan memperlihatkan
gerakan yang lincah.
3.9.8. Prosedur Pengujian Antiinflamasi
3.9.8.1. Penelitian inflamasi akut
Pada hari pengujian, masing-masing hewan ditimbang. Sebelum
perlakuan, diambil darah dari pangkal ekor tikus, kenudian dilakukan pemeriksaan
jumlah leukosit dengan alat Haemocytometer dan pemeriksaan hitung jenis
leukosit. Kemudian pada masing-masing kelompok (P0-P5) diberikan perlakuan
seperti tabel di bawah ini.
Tabel 3.1. Perlakuan hewan coba pada percobaan inflamasi akut
No Kelompok Perlakuan Jumlah
1 Kelompok P0 Salin (per oral) 6
2 Kelompok P1 Indomethacin 10 mg/kgBB (per oral) 6
3 Kelompok P2 Ekstrak metanol daun pepaya dosis I (250 mg/kg) 6
4 Kelompok P3 Ekstrak metanol daun pepaya dosis II(500mg/kg) 6
5 Kelompok P4 Ekstrak n heksana daun pepaya dosis I(250 mg/kg) 6
6 Kelompok P5 Ekstrak n heksana daun pepaya dosis II(500mg/kg) 6
Satu jam kemudian masing-masing telapak kaki tikus disuntik secara
intraplantar dengan metode subkutan dengan 0,1 ml larutan karagenan 1 %

36
subkutan. Setelah 3 jam dan enam jam dari penyuntikan karagenan diambil lagi
dari pangkal ekor tikus, kenudian dilakukan pemeriksaan jumlah leukosit dengan
alat Haemocytometer dan pemeriksaan hitung jenis leukosit.
Secara skematis alur prosedur penelitian digambarkan sebagai berikut:
Gambar 3.2. Alur Prosedur Penelitian

37
3.10. Prosedur Pemeriksaan Jumlah Leukosit
Alat yang diperlukan :
a. Pipet Leukosit
b. Kamar hitung Improved Neubauer
c. Deck glass
Reagensia : Larutan Turk, saring sebelum dipakai
Cara Pemeriksaan :
1. Sampel darah kapiler atau darah EDTA / Oksalat Wintrobe
2. Pipet lekosit diisi dengan darah sampai garis 0,5 bila diduga lekopeni
sampai garis 1, bersihkan ujung pipet dengan kertas tissue
3. Sambil menahan darah pada ujung pipet, isi pipet dengan larutan Turk
sampai angka 11, letakkan pipet horizontal untuk menghindari
mengalirnya larutan keluar
4. Ujung pipet ditekan dengan kedua jari kemudian digoyang membuat angka
8 selama 3 sampai 5 menit
5. Buang 3 tetes larutan tersebut, kemudian dnegan membuat sudut 30 derajat
teteskan larutan ke dalam kamar hitung yang telah ditutup dengan kaca
penutup
6. Diamkan kamar hitung selama 2 menit
7. Hitung dibawah mikroskop dengan pembesaran 10 x bidang besar kamar.
Hitung A+B+C+D
8. Perhitungan :Pengencer pipet 20 x luas bidang besar 1 mm2 dan tinggi
kamar hitung 1/10 mm. Lekosit yang dihitung dalam 4 bidang besar adalah

38
A+B+C+D, jumlah luasnya 4 mm3. Faktor perkalian 50 kali Jumlah
lekosit adalah (A+B+C+D) x 50 /mm3
3.11. Prosedur pemeriksaan hitung jenis leukosit
3.11.1. Cara membuat sediaan hapus
1. Letakkan satu tetes kecil darah, pada 2 - 3 mm dari ujung kaca objek.
Letakkan kaca penghapus dengan sudut 30 - 45 derajat terhadap kaca
objek di depan tetes darah.
2. Tarik kaca penghapus ke belakang sehingga menyentuh tetes darah,
tunggu sampai darah menyebar pada sudut tersebut.
3. Dengan gerak yang mantap doronglah kaca penghapus sehingga terbentuk
hapusan darah sepanjang 3-4 cm pada kaca objek.
4. Biarkan hapusan darah mengering di udara.
3.11.2. Cara mewarnai sediaan hapus
1. Letakkan sediaan hapus pada dua batang gelas di atas bak tempat
pewarnaan.
2. Fiksasi sediaan hapus dengan metanol absolut selama 2-3 menit.
3. Genangi sediaan hapus dengan zat warna Giemsa 5%. Biarkan selama 20-
30 menit.
4. Bilas dengan air, mula-mula dengan aliran lambat kemudian lebih kuat
dengan tujuan menghilangkan semua kelebihan zat warna. Biarkan
mongering.

39
3.11.3. Pemeriksaan hitung jenis leukosit
1. Periksa hapusan darah yang telah diwarnai dan dikeringkan di bawah
mikroskop dengan pembesaran 10 x, cari bagian dimana eritrosit tersebar
merata. Biasanya terdapat di bagian tipis sediaan.
2. Lensa obyektif diganti dengan pembesaran 40x, kemudian 100x dan
sediaan diberi minyak emersi.
3. Golongkan dan catat tiap sel berinti pada daerah yang dilalui sampai genap
100 sel. Kemudian masing-masing dibuat persentasenya.
3.12. Analisa Data
Data-data pengamatan efek antiinflamasi ekstrak metanol dan n-heksana
daun pepaya dianalisis dengan Anova rancangan acak lengkap. Dari setiap tikus
wistar jantan diambil sampel darah sebanyak 3 kali yaitu pada saat:
1. Sebelum tikus wistar jantan diberikan karagenan
2. 3 jam setelah tikus wistar jantan disuntikkan karagenan
3. 6 jam setelah tikus wistar jantan disuntikkan karagenan
Dari ketiga jenis data tersebut untuk setiap kelompoknya dilakukan analisis
statistik dengan menggunakan Repeated Anova bila data memiliki sebaran
normal, namun jika sebaran data tidak normal dilakukan Uji Statistik Friedman,
dan bila didapati perbedaan dilanjutkan dengan uji Post Hoc yaitu Wilcoxon.
Untuk menguji adanya perbedaan yang bermakna antara kelompok uji digunakan
uji Student Newman Keuls (uji SNK). Data diproses dengan SPSS 15,0 dan diuji
secara uji Anova, dimana hasil uji statistik akan bermakna jika α ≤ 0,05.

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil
Pengumpulan data hasil penelitian yang telah dilakukan digambarkan
dalam bentuk grafik histogram. Parameter pengukuran adalah jumlah leukosit
dan hitung jenis leukosit dari tikus Wistar jantan (Tabel 4.1., 4.2., dan 4.3.)
Tabel 4. 1. Hasil pemeriksaan kandungan daun pepaya
Zat alkaloid flavonoid glikosida saponin tannin
Posif/Negatif + + - + +
Tabel 4.2. Jumlah leukosit dan hitung jenis leukosit pada tikus wistar jantan
sebelum dilakukan penyuntikan karagenan
Kelompok Hitung Jenis Leukosit (%) Jumlah Leukosit
n
Perlakuan Eosinofil Basofil Neutrofil Limfosit Monosit (/mm3)
P0 6 4,7 ± 0,52 1,8 ± 0,41 19,3 ± 1,21 69,8 ± 0,75 4,3 ± 1,03 6316,7 ± 160,21
P1 6 4,8 ± 0,75 2,3 ± 0,52 19,8 ± 1,17 67,1 ± 2,07 5,3 ± 1,63 6316,7 ± 147,20
P2 6 4,7 ±0,52 2,0 ± 0,63 19,2 ± 1,17 69,8 ± 1,47 4,3 ± 1,21 6333,3 ± 163,30
P3 6 4,5 ± 0,84 2,0 ± 0,63 18,7 ± 1,37 69,8 ± 1,72 5,0 ± 1,26 6433,3 ± 216,02
P4 6 4,5 ± 0,55 2,0 ± 0,63 20,2 ± 1,72 69,2 ± 1,33 4,2 ± 0,98 6366,7 ± 206,56
P5 6 4,8 ± 0,41 1,5 ± 0,55 18,8 ± 1,47 70,0 ± 1,26 4,8 ± 0,75 6416,7 ± 116,90
Tabel 4.3. Jumlah leukosit dan hitung jenis leukosit pada tikus wistar jantan 3 jam
setelah dilakukan penyuntikan karagenan
n
Perlakuan Eosinofil Basofil Neutrofil Limfosit Monosit (/mm3)
P0 6 2,3 ± 0,52 1,3 ± 0,82 35,2 ± 1,17 55,5 ± 1,38 5,7 ± 0,52 6933,3 ± 206,56
P1 6 3,2 ± 0,98 1,8 ± 0,41 27,0 ± 1,41 64,3 ± 0,82 3,7 ± 0,52 6566,7 ± 103,28
P2 6 3,2 ± 0,98 2,0 ± 0,00 24,7 ± 1,63 65,5 ± 1,05 4,7 ± 1,03 6750 ± 104,88
P3 6 3,0 ± 0,63 2,0 ± 0,00 24,5 ± 0,55 67,8 ± 0,75 2,7 ± 0,82 6700 ± 228,04
P4 6 1,5 ± 0,55 0,7 ± 0,52 33,3 ± 2,16 59,2 ± 2,14 5,3 ± 0,82 7000 ± 141,42
P5 6 2,5 ± 0,55 0,8 ± 0,41 28,8 ± 0,98 62,5 ± 1,87 5,3 ± 1,21 6916,7 ± 172,24
40

41
Tabel 4.4. Jumlah leukosit dan hitung jenis leukosit pada tikus wistar jantan 6 jam
setelah dilakukan penyuntikan karagenan
n
Perlakuan Eosinofil Basofil Neutrofil Limfosit Monosit (/mm3)osit
P0 6 0,0 ± 0,00 0,0 ± 0,00 51,2 ± 1,33 42,0 ± 1,41 6,8 ± 0,8 8466,7 ± 163,3
P1 6 3,7 '± 0,52 1,8 ± 0,41 22,5 ± 1,52 68,8 ± 2,04 3,2 ± 0,4 6366,7 ± 103,28
P2 6 2,7 ± 0,52 1,2 ± 0,41 21,5 ± 1,05 70,7 ± 1,51 4,0 ± 0,9 6950,0 ± 104,88
P3 6 3,2 ± 0,41 2,0 ± 0,00 16,8 ± 1,33 75,2 ± 1,94 ,2,8 ± 0,8 6416,7 ± 231,66
P4 6 1,7 ± 0,52 0,0 ± 0,00 43,2 ± 0,98 48,3 ± 1,21 6,8 ± 0,8 8016,7 ± 172,34
P5 6 1,5 ± 0,55 0,8 ± 0,41 44,5 ± 1,05 48,5 ± 0,84 4,7 0,5 7766,7 ± 163,30
Keterangan:
Nilai hitung jenis leukosi dan jumlah leukosit ditampilkan dalam bentuk x ±SD
Kelompok P0 Salin (per oral)

Kelompok P1 Indomethacin 10 mg/kgBB (per oral)
Kelompok P2 Ekstrak metanol daun pepaya dosis I (250mg/kg)
Kelompok P3 Ekstrak metanol daun pepaya dosis II (500mg/kg)
Kelompok P4 Ekstrak n-heksana daun pepaya dosis I (250mg/kg)
Kelompok P5 Ekstrak n-heksana daun pepaya dosis II (500mg/kg)
x= rerata dalam kelompok, SD =Standar deviasi dalam kelompok
Jumlah Leukosit
10000
9000
8000
JUMLAH LEUKOSIT (/MM3)
7000
6000
Pre
5000
3H
4000
6H
3000
2000
1000
0
P0 P1 P2 P3 P4 P5
KELOMPOK PERLAKUAN
Gambar 4.1. Perbandingan Jumlah leukosit sebelum, 3 jam dan 6 jam sesudah
penyuntikan karagenan
(Pre=sebelum, 3H=3 jam sesudah penyuntikan, 6H=6 jam sesudah penyuntikan)

42
Dari gambar 4.1. diatas dapat dilihat peningkatan jumlah leukosit yang nyata pada
jam ke-3 dan ke-6 pada kelompok P0, P2, P4 dan P5(p<0,05). Pada kelompok P1
dan P3tidak terdapat perbedaaan yang nyata (p> 0,05)jumlah leukosit pada jam
ke-3 dan ke-6 setelah pemberian karagenan.
Hitung Jenis Eusinofil

6
4.7 4.8 4.7 4.8

4 4.5 4.5
Eusinofil (%)
3.7
3
3.2 3.2 3.0 3.2
2.7 2.5
2 2.3
1 1.5 1.7 1.5

0.0
0
P0 P1 P2 P3 P4 P5
Kelompok Perlakuan
Pre 3H 6H
Gambar 4.2. Perbandingan Hitung jenis eosinofil sebelum, 3 jam dan 6 jam
sesudah penyuntikan karagenan
Dari gambar 4.2. diatas dapat dilihat bahwa terdapat penurunan yang nyata jumlah
hitung jenis eusinofil pada kelompok P0 (p<0,05) pada 3 jam dan 6 jam sesudah
pemberian karagenan terhadap hitung jenis eosinofil sebelum pemberian
karagenan yang merupakan kontrol negatif. Pada kelompok P1,P2, P4, P5
(p<0,05)terdapat perbedaan yang signifikan antara hitung jenis eosinofil sebelum
dan sesudah pemberian karagenan

43
Pada kelompok P1,P2,P4 tidak terdapat perbedaan yang signifikan (p>0,05) antara
hitung jenis eosinofil jam ke-3 dan jam ke-6 setelah pemberian karagenan
Pada kelompok P3 tidak terdapat perbedaan yang signifikan (p>0,05) antara
hitung jenis eosinofil sebelum dan sesudah pemberian karagenan.
Hitung Jenis Basofil

3
2
Basofil
(%)
0
P0 P1 P2 P3 P4 P5
Kelompok Perlakuan
Pre 3H 6H
Gambar 4.3. Perbandingan hitung jenis basofil sebelum, 3 jam sesudah dan 6 jam
Dari gambar 4.3. di atas dapat dilihat bahwa pada kelompok P0,P4,P5 terdapat
penurunan yang signifikan (p<0,05) dari jumlah hitung jenis basofil sebelum dan
sesudah pemberian karagenan. Pada kelompok P1,P2,P3 tidak terdapat perbedaan
yang signifikan (p>0,05) dari jumlah hitung jenis basofil sebelum dan sesudah
pemberian karagenan.

44
Hitung Jenis Neutrofil

60
55
50
45
40
Neutrofil
35
(%)
30
25
20
15
10
5
0
P0 P1 P2 P3 P4 P5
Kelompok Perlakuan
Pre 3H 6H
Gambar 4.4. Perbandingan hitung jenis neutrofil sebelum, 3 jam sesudah dan 6
jam sesudah penyuntikan karagenan
(pre=sebelum, 3h=3 jam sesudah penyuntikan, 6h=6 jam sesudah penyuntikan)
Dari gambar 4.4. di atas dapat dilihat bahwa pada kelompok P0, P1, P2, P3, P4
dan P5 terdapat perbedaan yang signifikan (p<0,05) aantara jumlah hitung jenis
neutrofil sebelum dan sesudah pemberian karagenan.

45
Hitung Jenis Limfosit

90
80
70
60
Limfosit (%)
50
40
30
20
10
0
P0 P1 P2 P3 P4 P5
Kelompok Perlakuan
Pre 3H 6H
Gambar 4.5. Perbandingan Hitung jenis Limfosit sebelum, 3 jam dan 6 jam
Dari gambar 4.5. dapat dilihat bahwa perbedaan yang signifikan hitung jenis
limfosit pada kelompok P0,P1, P2, P3, P4 dan P5 (p<0,05) sebelum dan sesudah
pemberian karagenan.

46
Hitung Jenis Monosit

8
5
Monosit (%)
0
P0 P1 P2 P3 P4 P5
Kelompok Perlakuan
Pre 3H 6H
Gambar 4.6. Perbandingan hitung jenis monosit sebelum, 3 jam sesudah dan 6 jam
Dari gambar di atas dapat dilihat bahwa terjadi peningkatan jumlah hitung jenis
monosit yang signfikan (p<0,05) pada kelompok P0, P3, P4 dan P4. Pada
kelompok P1, P2, P5tidak terdapat perbedaan hitung jenis monosit sebelum dan
sesudah pemberian karagenan (p>0,05)
4.2. Pembahasan
Dari data yang didapat, dapat disimpulkan bahwa hitung jenis leukosit
meningkat secara signifikan dengan stimulasi oleh karagenan (kelompok P0).
Pemberian indomethacin dan ekstrak metanol daun pepaya pada dosis 500mg/kg
dapat menahan peningkatan jumlah leukosit sehingga setelah penyuntikan
karagenan didapati jumlah leukosit yang tidak berbeda secara signifikan, sehingga

47
dapat disimpulkan bawah ekstrak metanol daun pepaya dengan dosis tersebut
mempunyai efek yang sama dibandingkan dengan indomethacin. Ekstrak n-
heksana dari daun pepaya tidak dapat menahan peningkatan jumlah leukosit
setelah pemberian karagenan pada kedua dosis ekstrak yang ada. Hal ini sesuai
dengan penelitian yang telah dilakukan sebelumnya oleh Nahed, et al (2008)
Pada hitung jenis eosinofilterjadi penurunan yang signifikan pada
kelompok kontrol negatif sampai tidak diperoleh eosinofil pada hitung jenis. Hal
ini terjadi karena penekanan yang disebabkan oleh peningkatan kadar Interleukin-
1 (IL-1). Pada kelompok P1,P2, P4 juga terjadi penurunan yang signifikan sama
dengan P0. Pada pemberian ekstrak metanol daun pepaya dengan dosis 500 mg/kg
tidak terdapat perbedaaan yang signifikan antara hitung jenis eosinofil sebelum
dan sesudah pemberian karagenan, hal ini mungkin disebabkan oleh penekanan
IL-1 oleh ekstrak metanol dari daun pepaya.
Pada hitung jenis basofil pada kelompok P0 (yang merupakan kontrol
negatif), P4, dan P5 terdapat penurunan jumlah basofil yang signifikan sebelum
dan sesudah pemberian karagenan. Pemberian indomethacin dan ekstrak metanol
dari daun pepaya menyebabkan tidak terdapat perbedaan yang signifikan dari
hitung jenis basofil sebelum dan sesudah pemberian karagenan. Hal ini juga
disebabkan oleh penekanan IL-1 oleh ekstrak metanol dari daun pepaya.
Pada hitung jenis neutrofil pada kelompok P0,P4 dan P5 terdapat
peningkatan yang signifikan dari jumlah hitung jenis neutrofil. Pada kelompok
yang mendapat indomethacin dan ekstrak metanol dari daun pepaya, terdapat
penurunan 52% dari hitung jenis neutrofil pada jam ke -6, namun penurunan yang
terjadi tidak signifkan.

48
Pada hitung jenis limfosit pada semua kelompok terdapat perbedaan yang
signifikan antara sebelum dan sesudah pemberian karagenan.
Pada hitung jenis monosit terdapat peningkatan jumlah hitung jenis
monosit yang signifikan pada kelompok P0,P3, dan P4, hal ini sejalan dengan
proses inflamasi akut yang terjadi. Pada kelompok P1,P2,P5 tidak terdapat
perbedaan yang signifikan sebelum dan sesudah pemberian karagena, hal ini
menunjukkan bahwa indomethacin dan ekstrak metanol dan n-heksan dari daun
pepaya menekan peningkatan jumlah monosit yang terjadi pada proses inflamasi
akut.

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan
Berdasarkan hasil dan pembahasanpenelitian tentangefek ekstrak
metanol dan ekstrak n-heksana daun pepaya (Carica papaya l) terhadap
jumlah dan hitung jenis leukosit pada tikus wistar jantan setelah diinduksi
karagenan, dapat disimpulkan :
a. jumlah leukosit tikus Wistar jantan yang mendapat ekstrak
metanol daun pepaya lebih rendah namun tidak
signifikan/nyata(p>0,05) dibandingkan dengan yang tidak
mendapat ekstrak metanol daun pepaya. Ekstrak n-heksana
daun pepaya tidak dapat menahan peningkatan jumlah
leukosit secara nyata.
b. ekstrakmetanol dan n-heksana daun pepaya menyebabkan
perubahan hitung jenis leukosit pada keadaan inflamasi
akut. Ekstrak metanol daun pepaya secara nyata mampu
menahan peningkatan jumlah neutrofil dan monosit pada
keadaan inflamasi akut.
c. Pada inflamasi akut yang diinduksi oleh karagenan terjadi
penurunan yang nyata dari jumlah eosinofil yang disebabkan
oleh penekanan eosinofil oleh peningkatan kadar
Interleukin.
49

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan
Berdasarkan hasil dan pembahasanpenelitian tentangefek ekstrak
metanol dan ekstrak n-heksana daun pepaya (Carica papaya l) terhadap
jumlah dan hitung jenis leukosit pada tikus wistar jantan setelah diinduksi
karagenan, dapat disimpulkan :
a. jumlah leukosit tikus Wistar jantan yang mendapat ekstrak
metanol daun pepaya lebih rendah namun tidak
signifikan/nyata(p>0,05) dibandingkan dengan yang tidak
mendapat ekstrak metanol daun pepaya. Ekstrak n-heksana
daun pepaya tidak dapat menahan peningkatan jumlah
leukosit secara nyata.
b. ekstrakmetanol dan n-heksana daun pepaya menyebabkan
perubahan hitung jenis leukosit pada keadaan inflamasi
akut. Ekstrak metanol daun pepaya secara nyata mampu
menahan peningkatan jumlah neutrofil dan monosit pada
keadaan inflamasi akut.
c. Pada inflamasi akut yang diinduksi oleh karagenan terjadi
penurunan yang nyata dari jumlah eosinofil yang disebabkan
oleh penekanan eosinofil oleh peningkatan kadar
Interleukin.
50

51
5.2. Saran
Hal-hal lain yang belum terungkap pada penelitian ini sehingga
mendukung aplikasi lanjut ke depan,disarankan agar :
a. dipakai sampel daun pepaya dari berbagai umur daun dan
konsentrasi
b. dilakukan pengukuran secara kuantitatif terhadap kandungan zat
kimia dalam daun pepaya

51
DAFTAR PUSTAKA
Adi, LT. 2006. Tanaman Obat dan Jus untuk Asam Urat dan Rematik. AgroMedia
Pustaka. Jakarta.
AgroMedia,2008.Buku Pintar Tanaman Obat,431 Jenis Tanaman Penggempur

Aneka Penyakit,Redaksi AgroMedia,
Baratawidjaja, K.G., dan Rengganis,I.,2010.Imunologi Dasar. Edisi ke-8 Fakultas

Kedokteran Indonesia
Biocarta.2013. Cytokines and Inflammatory Response, viewed 30 September

2013. <http://www.biocarta.com/pathfiles/h_inflampathway.asp>
Borthakur, A.2006. Carrageenan induces interleukin-8 production through distinct

Bcl10 pathway in normal human colonic epithelial cells. Am J Physiol
Gastrointest Liver Physiol. Mar;292(3)
Djauhariya,E., dan Hernani, 2004.Gulma Berkhasiat Obat. Jakarta:Seri Agrisehat.

Hal 74-75.
Ebadi, M. 2001. Pharmacodynamic Basis of Herbal Medicine. Crc Press.

Washington D.C. 395
Guyton.2006.Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology (Guyton

Physiology). Saunder Elsevier.
Hamor, G.H.1996. Zat Antiradang Nonsteroid, dalam, Foye, W.O., (Editor),

Prinsip-prinsip Kimia Medisinal, Jilid II, Edisi Kedua,Gajah Mada
University Press
Imaga et al. 2010. Analyses of antisickling potency of Carica papaya dried leaf
extract and fractions. Journal of Pharmacognosy and Phytotherapy Vol.
2(7): 97-102
Kalie, M. 2004. Bertanam Pepaya (edisi revisi). Jakarta : Penebar Swadaya
Katzung, B.G., Masters, S.B., Trevor, A.J. 2009. Basic & Clinical Pharmacology,
11th Ed. New York:McGraw-Hil

52
Lenny S. 2006. Senyawa flavonoida, fenil propanoid, dan alkaloid. [Skripsi].

Medan: Fakultas Matematika danIlmu Pengetahuan Alam, Universitas
Sumatera Utara.
Mangoting, D., I. Irawan dan S. Abdullah. 2005. Tanaman Lalap Berkhasiat Obat.
Penebar Swadaya, Jakarta.
Miller, A. 2001. Antioxidant Flavonoids: Structure, Function. Alternative

Medicine Review.Vol. 1, No.2
Mycek, M.J., Harvey, R.A., dan Champe C.C. 2001. Farmakologi Ulasan
Bergambar. Lippincottt’s Illustrated Reviews: Farmacology. Penerjemah
Azwar Agoes. Edisi II. Jakarta. Widya Medika.
Nahed M.A., Roba M.,Mohamed R.. 2008. Roles of Interleukin-1and Nitric Oxide
(No) in the Anti-Inflammatory Dynamics of Acetylsalicylic Acid Against
Carrageenan Induced Paw Oedema in Mice. Global Journal of
Pharmacology 2 (1): 11-19
Oladunmoye MK,and Osho IB, 2007.Antiinflammatory Activity of Ethanolic

Leaf Extract from Carica papaya in Rats Orogastrically Dosed with
Salmonella typhi and Staphylococcus aureus.Journal of Plant Sciences 2,
Vol 4: 447-452
Owoyele BV, Olubori M. Adebukola, Adeoye A. Funmilayo and Ayodele O.

2008. Anti-inflammatory activities of ethanolic extract of Carica papaya
leaves. Inflammopharmacology ,Vol.16:168–173
Patil, J., R. Gunasekera, F, McEnnulty, and N. Bax.2004, Development of genetic

probes for rapid assessment of the impacts of marine invasive species on
native biodiversity – Maoricolpus roseus, CSIRO,
Sherwood, L. 2007. Human Physiology: From Cells To Systems. 6th edition.

California: Brooks/Cole.
Simon, K. and Kerry B. 2000. Principles and Pracice of Phytotheraphy. Modern

Herbal Medicine. New York: Churchill Livingstone. Hal. 32, 69, 291
Sunarjono. H.H. 2008. Berkebun 21 Jenis Tanaman Buah. Jakarta: Penebar

Swadaya.

53
Suprapti, M. 2005. Aneka Olahan Pepaya Mentah dan Mengkel. Kanisius.

Yogyakarta.
Tjay, T.H., Rahardja, K. (2002). Obat-obat Penting : Khasiat, Penggunaan, dan

Efek-Efek Sampingnya. Edisi VI. Jakarta: Penerbit PT. Elex Media
Komputindo.
Warsino.2003.Budidaya Pepaya.Penerbit Kanisus.Jakarta
Winter C A, Risley E A & Nuss G W. 1983. Carrageenin-induced edema in hind

paw of the rat as an assay for antiinflammatory drugs. Proc. Soc. Exp.
Biol.Med. 111:544-7, 1962. [Merck Institute for Therapeutic Research, West
Point, PA]
Zheng X., Jiangrui Z., Jianmei C., Zhen Z., Xuejun S. dan Chunlei J.2012. Anti-
inflammation effects of hydrogen saline in LPS activated macrophages and
carrageenan induced paw oedema. Journal of Inflammation:2

54
Lampiran 1. Uji Statistik
1. Analisis Hitung jenis eosinofil pada kelompok P0

Dari analisis data didapati hasil:
a. Hitung jenis eosinofil sebelum ‘penyuntikan karagenan”(PK) berbeda
dengan hitung jenis eosinofil 3 jam setelah PK
b. Hitung jenis eosinofil sebelum ‘penyuntikan karagenan”(PK) berbeda
c. Hitung jenis eosinofil 3 jam setelah PK berbeda dengan hitung jenis
eosinofil 6 jam setelah PK
Test Statisticsb
Eosinofil_3H_ Eosinofil_6h_ Eosinofil_6h_
0- 0- 0-
Eosinofil_pre Eosinofil_pre_ Eosinofil_3H_
_0 0 0
a a
Z -2,232 -2,271 -2,271a
Asymp. Sig. (2- ,026 ,023 ,023
tailed)

c. Hitung jenis eosinofil 3 jam setelah PK tidak berbeda dengan hitung
jenis eosinofil 6 jam setelah PK
Test Statisticsc
Eosinofil_3H_ Eosinofil_6h_ Eosinofil_6h_
1- 1- 1-
Eosinofil_pre Eosinofil_pre_ Eosinofil_3H_
_1 1 1
a a
Z -2,041 -2,070 -1,134b
Asymp. Sig. (2- ,041 ,038 ,257
tailed)


55

Test Statisticsb
Eosinofil_3h_ Eosinofil_6h_ Eosinofil_6h_
2- 2- 2-
Eosinofil_pre Eosinofil_pre_ Eosinofil_3h_
_2 2 2
a a
Z -2,070 -2,264 -1,134a
Asymp. Sig. (2- ,038 ,024 ,257
tailed)
a. Based on positive ranks.
b. Wilcoxon Signed Ranks Test
Test Statisticsc
3- 3- 3-
_3 3 3
a a
Z -1,890 -2,070 -,577b
Asymp. Sig. (2- ,059 ,038 ,564
tailed)

Test Statisticsc
4- 4- 4-
_4 4 4
a a
Z -2,264 -2,232 -1,000b
Asymp. Sig. (2- ,024 ,026 ,317
tailed)

56

Test Statisticsc
4- 4- 4-
_4 4 4
a a
Z -2,264 -2,232 -1,000b
Asymp. Sig. (2- ,024 ,026 ,317
tailed)
7. Analisis Hitung jenis basofil pada kelompok P0

a. Hitung jenis baasofil sebelum ‘penyuntikan karagenan”(PK)tidak
berbeda dengan hitung jenis eosinofil 3 jam setelah PK
b. Hitung jenis basofil sebelum ‘penyuntikan karagenan”(PK) berbeda
c. Hitung jenis basofil 3 jam setelah PK berbeda dengan hitung jenis
Test Statisticsb
Basofil_3h_0 Basofil_6h_0 Basofil_6h_0
- - -
Basofil_pre_0 Basofil_pre_0 Basofil_3h_0
Z -1,134a -2,333a -2,070a
Asymp. Sig. (2- ,257 ,020 ,038
tailed)

a. Hitung jenis baasofil sebelum PKtidak berbeda dengan hitung jenis
b. Hitung jenis basofil sebelum PKtidak berbeda dengan hitung jenis
c. Hitung jenis basofil 3 jam setelah PK tidak berbeda dengan hitung jenis
Test Statisticsc
- - -
Z -1,732a -1,732a ,000b
Asymp. Sig. (2- ,083 ,083 1,000
tailed)

57

Test Statisticsc
- - -
Z ,000a -1,667b -2,236b
Asymp. Sig. (2- 1,000 ,096 ,025
tailed)

Test Statisticsb
- - -
Z ,000a ,000a ,000a
Asymp. Sig. (2- 1,000 1,000 1,000
tailed)

a. Hitung jenis baasofil sebelum PKberbeda dengan hitung jenis eosinofil
3 jam setelah PK
b. Hitung jenis basofil sebelum PKberbeda dengan hitung jenis eosinofil
6 jam setelah PK
Test Statisticsb
- - -
Z -2,271a -2,264a -2,000a
Asymp. Sig. (2- ,023 ,024 ,046
tailed)

58

a. Hitung jenis baasofil sebelum PKberbeda dengan hitung jenis eosinofil
3 jam setelah PK
b. Hitung jenis basofil sebelum PKberbeda dengan hitung jenis eosinofil
6 jam setelah PK
Test Statisticsc
- - -
Z -2,000a -2,000a ,000b
Asymp. Sig. (2- ,046 ,046 1,000
tailed)
13. Analisis Hitung jenis neutrofil pada kelompok P0

a. Hitung jenis neutrofil sebelum PKberbeda dengan hitung jenis eosinofil
3 jam setelah PK
b. Hitung jenis neutrofil sebelum PKberbeda dengan hitung jenis
c. Hitung jenis neutrofil 3 jam setelah PK berbeda dengan hitung jenis
Test Statisticsb
Neutrofil_3h_ Neutrofil_6h_ Neutrofil_6h_
0- 0- 0-
Neutrofil_pre Neutrofil_pre_ Neutrofil_3h_
_0 0 0
a a
Z -2,214 -2,207 -2,207a
Asymp. Sig. (2- ,027 ,027 ,027
tailed)

3 jam setelah PK

59
Test Statisticsc
1- 1- 1-
_1 1 1
a a
Z -2,214 -2,014 -2,207b
Asymp. Sig. (2- ,027 ,044 ,027
tailed)

3 jam setelah PK
b. Hitung jenis neutrofil sebelum PK tidak berbeda dengan hitung jenis
Test Statisticsc
2- 2- 2-
_2 2 2
a a
Z -2,201 -1,903 -2,032b
Asymp. Sig. (2- ,028 ,057 ,042
tailed)

3 jam setelah PK
b. Hitung jenis neutrofil sebelum PK tidak berbeda dengan hitung jenis
Test Statisticsc
3- 3- 3-
_3 3 3
a b
Z -2,207 -1,841 -2,214b
Asymp. Sig. (2- ,027 ,066 ,027
tailed)

3 jam setelah PK

60

Test Statisticsb
4- 4- 4-
_4 4 4
Z -2,214a -2,207a -2,226a
Asymp. Sig. (2- ,027 ,027 ,026
tailed)

3 jam setelah PK
Test Statisticsc
Neutrofil_3h_ Neutrofil_pre_ Neutrofil_6h_
5- 5- 5-
Neutrofil_pre Neutrofil_6h_ Neutrofil_3h_
_5 5 5
a b
Z -2,214 -2,226 -2,220a
Asymp. Sig. (2- ,027 ,026 ,026
tailed)
19. Analisis Hitung jenis limfositpada kelompok P0

a. Hitung jenis limfositl sebelum PKberbeda dengan hitung jenis eosinofil
3 jam setelah PK
b. Hitung jenis limfosit sebelum PKberbeda dengan hitung jenis eosinofil
6 jam setelah PK
c. Hitung jenis limfosit 3 jam setelah PK berbeda dengan hitung jenis
Test Statisticsb
Limfosit_3h_ Limfosit_6h_0 Limfosit_6h_
0- - 0-
Limfosit_pre_ Limfosit_pre_ Limfosit_3h_
0 0 0
a a
Z -2,271 -2,214 -2,207a
Asymp. Sig. (2- ,023 ,027 ,027
tailed)

61

3 jam setelah PK
6 jam setelah PK
Test Statisticsc
1- - 1-
1 1 1
a b
Z -2,023 -,948 -2,207b
Asymp. Sig. (2- ,043 ,343 ,027
tailed)

3 jam setelah PK
b. Hitung jenis limfosit sebelum PK tidak berbeda dengan hitung jenis
Test Statisticsc
2- - 2-
2 2 2
a b
Z -2,207 -,744 -2,207b
Asymp. Sig. (2- ,027 ,457 ,027
tailed)

a. Hitung jenis limfositl sebelum PKtidakberbeda dengan hitung jenis
6 jam setelah PK

62
Test Statisticsc
3- - 3-
3 3 3
a b
Z -1,857 -2,207 -2,207b
Asymp. Sig. (2- ,063 ,027 ,027
tailed)

3 jam setelah PK
6 jam setelah PK
Test Statisticsb
4- - 4-
Limfosir_pre_ Limfosir_pre_ Limfosit_3h_
4 4 4
a a
Z -2,207 -2,207 -2,207a
Asymp. Sig. (2- ,027 ,027 ,027
tailed)

3 jam setelah PK
6 jam setelah PK
Test Statisticsb
Limfosiit_3h_ Limfosit_6h_5 Limfosit_6h_
5- - 5-
Limfosit_pre_ Limfosit_pre_ Limfosiit_3h_
5 5 5
a a
Z -2,207 -2,214 -2,214a
Asymp. Sig. (2- ,027 ,027 ,027
tailed)
25. Analisis Hitung jenis monositpada kelompok P0

a. Hitung jenis monositl sebelum PKberbeda dengan hitung jenis eosinofil
3 jam setelah PK

63
b. Hitung jenis monosit sebelum PKberbeda dengan hitung jenis eosinofil

6 jam setelah PK
c. Hitung jenis monosit 3 jam setelah PK tidak berbeda dengan hitung jenis
Test Statisticsb
Monosit_3h_0 Monosit_6h_0
- - Monosit_6h_0
Monosit_pre_ Monosit_pre_ -
0 0 Monosit_3h_0
Z -2,070a -2,060a -1,841a
Asymp. Sig. (2- ,038 ,039 ,066
tailed)

a. Hitung jenis monositl sebelum PK tidak berbeda dengan hitung jenis
b. Hitung jenis monosit sebelum PK tidak berbeda dengan hitung jenis
c. Hitung jenis monosit 3 jam setelah PK tidakberbeda dengan hitung jenis
Test Statisticsb
- - Monosit_6h_1
1 1 Monosit_3h_1
Z -1,890a -1,841a -1,732a
Asymp. Sig. (2- ,059 ,066 ,083
tailed)


64
Test Statisticsc
- - Monosit_6h_2
2 2 Monosit_3h_2
Z -,412a -,425b -1,081b
Asymp. Sig. (2- ,680 ,671 ,279
tailed)

a. Hitung jenis monositl sebelum PKberbeda dengan hitung jenis eosinofil
3 jam setelah PK
6 jam setelah PK
Test Statisticsc
- - Monosit_6h_3
3 3 Monosit_3h_3
Z -2,032a -2,232a -,447b
Asymp. Sig. (2- ,042 ,026 ,655
tailed)

6 jam setelah PK
c. Hitung jenis monosit 3 jam setelah PK berbeda dengan hitung jenis
Test Statisticsb
- - Monosit_6h_4
4 4 Monosit_3h_4
Z -1,725a -2,214a -2,264a
Asymp. Sig. (2- ,084 ,027 ,024
tailed)

a. Hitung jenis monosit sebelum PKtidak berbeda dengan hitung jenis

65

c. Hitung jenis monosit 3 jam setelah PK tidak berbeda dengan hitung
Test Statisticsc
- - Monosit_6h_5
5 5 Monosit_3h_5
Z -,680a -,447b -1,134b
Asymp. Sig. (2- ,496 ,655 ,257
tailed)

66
Lampiran 2. Dokumentasi penelitian
Gambar 1. Pengeringan Daun Pepaya Gambar 2. Pelarut metanol dan n-heksana
Gambar 4. Penggunaan Rotary Evaporator

Gambar 3. Proses perendaman
Gambar 5. Penggunaan Rotary Evaporator

67
Gambar 6. Ekstrak Daun Pepaya Gambar 7. Freeze Dryer
Gambar 9. Larutan Karagenan

Gambar 8. Laturan CMC

68
Gambar 10. Larutan Ekstrak
Gambar 11. Binatang Percobaan Tikus

Wistar Jantan
Gambar 12. Pemberian ekstrak kepada

tikus wistar Gambar 13. Pengambilan darah tikus wistar

69
Gambar 15. Telapak kaki tikus wistar yang

Gambar 14. Pengambilan darah tikus wistar telah disuntik karagenan
Gambar 16. Telapak kaki tikus wistar yang

telah disuntik karagenan

Universitas Sumatera Utara

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Universitas Sumatera Utara

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

EFEK EKSTRAK METANOL DAN EKSTRAK n-HEKSANA

DAUN PEPAYA (Carica papaya L) TERHADAP JUMLAH DAN HITUNG

PROGRAM MAGISTER ILMU BIOMEDIK