Universitas Sumatera Utara

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK ETANOL
ASAM CEKALA (Etlingera

( elatior (Jack) R. M. Sm.)
Sm DENGAN
METODE PEMERANGKAPAN DPPH (1,1-DIPHENYL
(1,1 DIPHENYL-2-
PICRYLHIDRAZYL)
SKRIPSI
OLEH:
DESSY PITTASARI SIMATUPANG
NIM 141501128
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018
Universitas Sumatera Utara

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK ETANOL
ASAM CEKALA (Etlingera
( elatior (Jack) R. M. Sm.)
Sm DENGAN
METODE PEMERANGKAPAN DPPH (1,1-DIPHENYL
(1,1 DIPHENYL-2-
PICRYLHIDRAZYL)
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
OLEH:
DESSY PITTASARI SIMATUPANG
NIM 141501128
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018

KATA PENGANTAR
Puji dan syukur ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa atas segala limpahan
kasih anugerah dan penyertaanNya, sehingga penulis dapat menyelesaikan
penelitian dan penyusunan skripsi ini yang berjudul “Uji Aktivitas Antioksidan
dari Ekstrak Etanol Asam Cekala (Etlingera elatior (Jack) R. M. Sm.) dengan
Metode Pemerangkapan DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhidrazyl)”. Skripsi ini
diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi dari
Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Radikal bebas merupakan suatu molekul yang memiliki elektron tidak
berpasangan dalam orbital terluarnya sehingga sangat reaktif. Radikal bebas
cenderung mengadakan ikatan berantai dalam tubuh dan menimbulkan kerusakan
pada tubuh sehingga tubuh memerlukan antioksidan tambahan yang dapat
mencegah sistem biologi tubuh dari kerusakan yang ditimbulkan reaksi oksidasi
berlebihan. Diketahui bahwa asam cekala memiliki potensi sebagai sumber
antioksidan alami. Hendaknya hasil penelitian ini menjadi masukkan bagi
masyarakat untuk menggunakan bahan alami seperti asam cekala sebagai
antioksidan untuk mencegah berbagai penyakit.
Pada kesempatan ini penulis menyampaikan terima kasih yang sebesar-
besarnya kepada Ibu Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku Dekan Fakultas
Farmasi Universitas Sumatera Utara. Bapak Prof. Dr. Ginda Haro, M.Sc., Apt.,
selaku dosen pembimbing yang telah membimbing dengan penuh kesabaran,
kebaikan, tulus dan ikhlas selama penelitian hingga menyelesaikan penulisan
skripsi ini, kepada Bapak Prof. Dr. rer. nat. Effendy De Lux Putra, SU., Apt., dan
Ibu Dra. Sudarmi, M.Si., Apt., selaku dosen penguji yang telah memberikan
iv

masukan, arahan, kritik dan saran dalam penyusunan skripsi ini beserta seluruh
dosen pengajar dan staf di Fakultas Farmasi atas arahan, bimbingan dan ilmu yang
diberikan kepada penulis selama duduk di bangku perkuliahan.

p
Penulis mempersembahkan rasa terima kasih yang tak terhingga dan
sebesar
penghargaan yang sebesar-besarnya kepada Orang tua tercinta Alm. Heri Anton
Ritonga adik tercinta Dewi Ernestia

Simatupang dan Farida Megawati Ritonga,
Simatupang serta sahabat terkasih, teman-teman

teman seangkatan dan seluruh keluarga
besar yang tiada hentinya berdoa dan berkorban dengan tulus ikhlas memberikan
hingga penyelesaian
dukungan baik moril maupun materil selama perkuliahan hingga
skripsi ini.
menyadar bahwa masih banyak kekurangan dalam penulisan

Penulis menyadari
skripsi ini, dengan itu sangat diharapkan kritik dan saran yang bersifat
membangun dari semua pihak guna perbaikan skripsi ini. Akhir kata penulis
berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi kita semua.

vi

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK ETANOL ASAM
CEKALA (Etlingera elatior (Jack) R. M. Sm.) DENGAN METODE
PEMERANGKAPAN DPPH (1,1-DIPHENYL-2-PICRYLHIDRAZYL)
ABSTRAK
Latar Belakang: Asam Cekala (Etlingera elatior (Jack) R. M. Sm.) merupakan

salah satu tumbuhan di Indonesia yang secara luas sudah dipergunakan
masyarakat lokal sebagai bumbu masakan maupun sebagai obat. Tanaman ini
diketahui mengandung senyawa fitokimia yaitu alkaloid, glikosida, flavonoid, dan
steroid. Komponen senyawa flavonoid telah banyak dilaporkan perannya sebagai
antioksidan.
Tujuan: Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antioksidan
ekstrak etanol asam cekala.
Metode: Sampel dikeringkan, diblender hingga menjadi serbuk, serbuk simplisia
diskrining dan dikarakterisasi, selanjutnya diekstraksi dengan cara maserasi
menggunakan pelarut etanol 96%, kemudian ekstrak di uji aktivitas antioksidan
terhadap DPPH. Alat yang digunakan adalah Spektrofotometer UV-Vis pada
panjang gelombang 516,5 nm.
Hasil: Hasil karakterisasi serbuk simplisia asam cekala diperoleh kadar air
sebesar 6,66%, kadar sari yang larut dalam air sebesar 35,2%, kadar sari yang
larut dalam etanol sebesar 12,56%, kadar abu total sebesar 4,16%, dan kadar abu
yang tidak larut dalam asam sebesar 1,32%. Hasil skrining fitokimia simplisia dan
ekstrak asam cekala mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, steroid,
dan glikosida. Hasil pengujian aktivitas antioksidan dengan metode DPPH
menunjukkan bahwa ekstrak etanol asam cekala memiliki aktivitas antioksidan
dengan nilai inhibitory concentration (IC50) sebesar 64,89 µg/mLdan termasuk
dalam golongan antioksidan kuat.
Kesimpulan: Hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa asam cekala
mengandung senyawa flavonoid dan memiliki aktivitas sebagai antioksidan.
Kata kunci: uji aktivitas antioksidan, Etlingera elatior (Jack) R. M. Sm., DPPH
vii

ANTIOXIDANT ACTIVITY TESTING FROM KECOMBRANG (Etlingera
elatior (Jack) R. M. Sm.) FRUIT ETHANOL EXTRACT USING DPPH (1,1-
DIPHENYL-2-PICRYLHIDRAZYL) METHOD
ABSTRACT
Background: Kecombrang fruit (Etlingera elatior (Jack) R. M. Sm.) is one type

of plants in Indonesia that has been widely used by local people as a cooking
spice or as a traditional medicine. This plant contains alkaloids, glycosides,
flavonoids, and steroids. Components of flavonoid compounds have been widely
reported its role as an antioxidant.
Objective: The purpose of this study was to determine the antioxidant activity of
ethanol extract of kecombrang fruit.
Method: The sample was dried, blended until it became a powder, simplisia
powder was screened and characterized, then extracted by maceration using 96%
ethanol solvent, then the extract was tested for antioxidant activity against DPPH.
The instrument used is UV-Vis Spectrophotometer at a wavelength of 516.5 nm.
Results: The results of the simplisia powder characterization of kecombrang fruit
obtained water content of 6.66%, the content of the water-soluble extract was
35.2%, the content of the soluble extract in ethanol was 12.56%, the total ash
content was 4.16%, and the content ash which is insoluble in acid by 1.32%.
Phytochemical screening results from kecombrang fruit contain alkaloids,
flavonoids, saponins, steroids, and glycosides.The results of the antioxidant
activity test using DPPH method showed that the ethanol extract of kecombrang
fruit had antioxidant activity with inhibitory concentration (IC50) of 64.89 µg/mL
and categorized in a class of strong antioxidants.
Conclusion: The results of this study could be concluded that the ethanol extract
of kecombrang fruit contain flavonoid and has the activity as antioxidant.
Keywords: antioxidant activity, Etlingera elatior (Jack) R. M. Sm., DPPH
viii

DAFTAR ISI
JUDUL ................................................................................................................ i
HALAMAN JUDUL .......................................................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ iii
KATA PENGANTAR ....................................................................................... iv
SURAT PERNYATAAN ORISINALITAS ....................................................... vi
ABSTRAK ........................................................................................................ vii
ABSTRACT ....................................................................................................... viii
DAFTAR ISI ...................................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ............................................................................................. xii
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xiii
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiv
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ............................................................................................... 1
1.2 Perumusan Masalah ...................................................................................... 4
1.3 Hipotesis ....................................................................................................... 4
1.4 Tujuan Penelitian .......................................................................................... 4
1.5 Manfaat Penelitian ........................................................................................ 5
1.6 Kerangka Pikir Penelitian .............................................................................. 6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................... 7
2.1 Uraian Tumbuhan .......................................................................................... 7
2.1.1 Morfologi Tumbuhan .................................................................................. 7
2.1.2 Sistematika Tumbuhan ............................................................................... 8
2.1.3 Nama Daerah ............................................................................................. 8
2.1.4 Kandungan Kimia ...................................................................................... 8
2.1.5 Khasiat ....................................................................................................... 8
2.2 Vitamin C ..................................................................................................... 9
2.3 Simplisia dan Ekstrak .................................................................................... 9
2.3.1 Simplisia .................................................................................................... 9
2.3.2 Ekstrak ...................................................................................................... 10
2.4 Radikal Bebas ............................................................................................. 12
2.5 Antioksidan ................................................................................................. 13
2.6 Spektrofotometer UV-Visibel ...................................................................... 16
2.7 Penentuan Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH ............................. 19
2.7.1 Pelarut ...................................................................................................... 21
2.7.2 Pengukuran Absorbansi-Panjang Gelombang ........................................... 21
2.7.3 Waktu Reaksi ........................................................................................... 21
BAB III METODE PENELITIAN .................................................................... 22
3.1 Alat dan Bahan ............................................................................................ 22
3.1.1 Alat .......................................................................................................... 22
3.1.2 Bahan-bahan ............................................................................................ 22
3.1.2.1 Sampel ................................................................................................... 22
3.1.2.2 Bahan Kimia .......................................................................................... 23
3.2 Pembuatan Larutan Pereaksi ........................................................................ 23
3.2.1 Pereaksi Liebermann-Burchard ................................................................. 23
3.2.2 Pereaksi Asam Sulfat ................................................................................ 23
3.2.3 Pereaksi Asam Nitrat 0,5 N ....................................................................... 23
3.2.4 Pereaksi Molisch ....................................................................................... 23
ix

3.2.5 Pereaksi Mayer ......................................................................................... 24
3.2.6 Pereaksi Besi (III) Klorida 10%` ............................................................... 24
3.2.7 Pereaksi Dragendorff................................................................................. 24
3.2.8 Pereaksi Bouchardat .................................................................................. 24
3.2.9 Pereaksi Timbal (II) Asetat 0,4 M ............................................................. 24
3.2.10 Pereaksi Asam Klorida 2 N ..................................................................... 25
3.2.11 Larutan Kloralhidrat ................................................................................ 25
3.3 Pengambilan dan Pengolahan Sampel .......................................................... 25
3.3.1 Pengambilan Sampel ................................................................................. 25
3.3.2 Identifikasi Tumbuhan .............................................................................. 25
3.3.3 Pembuatan Simplisia ................................................................................. 25
3.4 Karakterisasi Simplisia Asam Cekala ........................................................... 25
3.4.1 Pemeriksaan Makroskopik Simplisia Asam Cekala .................................. 26
3.4.2 Pemeriksaan Mikroskopik Simplisia Asam Cekala ................................... 26
3.4.3 Penetapan Kadar Air ................................................................................. 26
3.4.4 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air ..................................................... 27
3.4.5 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol.................................................. 27
3.4.6 Penetapan Kadar Abu Total ....................................................................... 27
3.4.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam .................................................. 28
3.5 Skrining Fitokimia ...................................................................................... 28
3.5.1 Pemeriksaan Alkaloid ............................................................................... 28
3.5.2 Pemeriksaan Glikosida .............................................................................. 29
3.5.3 Pemeriksaan Saponin ................................................................................ 29
3.5.4 Pemeriksaan Flavonoid ............................................................................. 29
3.5.5 Pemeriksaan Tannin .................................................................................. 30
3.5.6 PemeriksaanTriterpenoid/Steroid .............................................................. 30
3.6 Pembuatan Ekstrak Etanol Asam Cekala ...................................................... 30
3.7 Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPH .................................................... 31
3.7.1 Pembuatan Larutan Induk Baku DPPH ...................................................... 31
3.7.2 Pembuatan Larutan Blanko ....................................................................... 31
3.7.3 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ............................................... 31
3.7.4 Waktu Pengukuran .................................................................................... 32
3.7.5 Pembuatan Larutan Induk Baku Ekstrak Etanol Asam Cekala ................... 32
3.7.6 Pembuatan Larutan Induk Baku Vitamin C ............................................... 32
3.7.7Pembuatan Larutan Uji .............................................................................. 32
3.7.7.1 Larutan Uji Ekstrak Etanol Asam Cekala ............................................... 32
3.7.7.2 Larutan Uji Vitamin C ............................................................................ 32
3.8 Analisis Persen Pemerangkapan Radikal Bebas DPPH ................................ 33
3.9 Analisis Nilai IC50 ........................................................................................ 33
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................ 34
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan ........................................................................ 34
4.2 Hasil Pemeriksaan Makroskopik .................................................................. 34
4.3 Hasil Pemeriksaan Mikroskopik ................................................................... 35
4.4 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia ................................................... 35
4.5 Hasil Pemeriksaan Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak ....................... 36
4.6 Pemeriksaan Kandungan Antioksidan .......................................................... 37
4.6.1 Hasil Analisis Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH ................. 37
4.6.2 Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan ......................................................... 38
4.6.2.1 Sampel Uji Ekstrak Etanol Asam Cekala ................................................ 38

4.6.2.2 Sampel Uji Pembanding Vitamin C ........................................................ 39
4.6.3 Hasil Peredaman Radikal Bebas DPPH oleh Sampel Uji ........................... 40
4.6.4 Hasil Analisis Nilai IC50 ............................................................................ 41
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 44
5.1 Kesimpulan .................................................................................................. 44
5.2 Saran ........................................................................................................... 44
DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 45
LAMPIRAN ...................................................................................................... 48
xi

DAFTAR TABEL
4.1 Hasil Karakterisasi Serbuk Simplisia Asam Cekala ..................................... 35

4.2 Hasil Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak Asam Cekala ..................... 36
4.3 Penurunan Absorbansi DPPH olehEkstrak Etanol Asam Cekala ................... 38
4.4 Penurunan Absorbansi DPPH oleh Vitamin C .............................................. 40
4.5 Hasil Analisis Peredaman Radikal Bebas Ekstrak Etanol Asam Cekala
dan Vitamin C ............................................................................................. 41
4.6 Nilai IC50 Ekstrak Etanol Asam Cekala dan Vitamin C ................................. 41
4.7 Kategori Nilai IC50 Sebagai Antioksidan .................................................... 42
xii

DAFTAR GAMBAR
1.1 Kerangka Pikir Penelitian ............................................................................... 6

2.1 Komponen Utama Spektrofotometer ............................................................ 17
2.2 Struktur Kimia DPPH ................................................................................. 20
2.3 Reaksi DPPH dengan Senyawa Antioksidan ............................................... 21
4.1 Kurva Panjang Gelombang DPPH (516,5 nm) .............................................. 37
4.2 Grafik Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Asam
Cekala ......................................................................................................... 38
4.3 Grafik Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan Vitamin C ................................ 40
4.4 Reaksi Penangkapan Radikal Bebas DPPH oleh Fenol ................................. 42
xiii

DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN
1. Tanaman asam cekala .................................................................................... 49

2. Asam cekala dalam bongkolnya ..................................................................... 49
3. Buah asam cekala .......................................................................................... 50
4. Daun asam cekala ......................................................................................... 50
5. Simplisia asam cekala ................................................................................... 51
6. Serbuk simplisia asam cekala ........................................................................ 51
7. Hasil pemeriksaan mikroskopik .................................................................... 52
xiv

DAFTAR LAMPIRAN
1. Surat Hasil Identifikasi Tumbuhan ................................................................. 48

2. Gambar Tumbuhan ........................................................................................ 49
3. Gambar Simplisia ......................................................................................... 51
4. Hasil Pemeriksaan Mikroskopik......................................................................... 52
5. Bagan Kerja Penelitian.................................................................................... 53
6. Perhitungan Karakterisasi Simplisia Asam Cekala ......................................... 57
7. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan ..................................................................... 60
8. Perhitungan Nilai IC50 .................................................................................... 66
9. Data Waktu Pengukuran ................................................................................ 68
xv

BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Radikal bebas merupakan suatu molekul yang memiliki elektron tidak
berpasangan dalam orbital terluarnya sehingga sangat reaktif. Radikal ini
cenderung mengadakan reaksi berantai yang apabila terjadi didalam tubuh akan
dapat menimbulkan kerusakan-kerusakan yang berlanjut dan terus menerus.
Tubuh manusia memiliki sistem pertahanan endogen terhadap serangan radikal
bebas terutama terjadi melalui peristiwa metabolisme sel normal dan peradangan.
Jumlah radikal bebas dapat mengalami peningkatan yang diakibatkan karena
faktor stress, radiasi, asap rokok, dan polusi lingkungan sehingga menyebabkan
sistem pertahanan tubuh yang ada tidak memadai, sehingga tubuh memerlukan
tambahan antioksidan dari luar yang dapat melindungi dari serangan radikal bebas
(Wardaningsihdkk., 2011).
Antioksidan atau senyawa penangkap radikal bebas merupakan zat
yang dapat menetralkan radikal bebas, atau suatu bahan yang berfungsi mencegah
sistem biologi tubuh dari efek yang merugikan yang timbul dari proses ataupun
reaksi yang menyebabkan oksidasi yang berlebihan. Berbagai bukti ilmiah
menunjukkan bahwa senyawa antioksidan mengurangi resiko terhadap penyakit
kronis seperti kanker dan penyakit jantung koroner (Rosahdi dkk., 2013).
Indonesia terkenal dengan kekayaan alam yang memiliki berbagai jenis
tumbuhan yang berkhasiat sebagai obat. Obat tradisional telah dikenal dan
digunakan secara turun-temurun oleh masyarakat Indonesia. Antioksidan sintetik
seperti BHA (butylated hidroxy aniline) dan BHT (butylated hidroxy toluen) telah

diketahui memiliki efek samping yang besar antara lain menyebabkan
kerusakanhati. Hal tersebut mendorong semakin banyak dilakukan eksplorasi
bahan alam sebagai sumber antioksidan (Bahriul dkk., 2014).
Tumbuhan kecombrang (Etlingera elatior)merupakan tumbuhan yang
tersebar cukup luas diIndonesia. Tanaman ini mirip bungahias dan beraroma
harum segar. Saat berbentukbunga, warnanya makin cantik dan aromanyamakin
tajam. Hampir seluruh bagian daritumbuhan ini bisa dimanfaatkan. Di
Jawatumbuhan ini dinamakan Kecombrang, Sunda :Honje, Sumatera Utara:
cekala, kincuang dansambuang (Minangkabau), Di Tanah Karo, buah honje muda
disebutasam cekala. Kuncup bunga serta "polong" nya menjadi bagian pokok dari
sayur asam Karo; jugamenjadi peredam bau amis sewaktu memasak
ikan.Masakan batak populer, arsik ikan mas, jugamenggunakan asam cekala ini
(Br. Perangin Angin, 2015).
Kecombrang merupakan tanamanyang banyak dikonsumsi oleh
masyarakatsebagai bahan campuran atau bumbupenyedap. Namun, ternyata
kecombrangmerupakan tumbuhan multiguna, daun,bunga dan buahnya biasa
dimanfaatkan.Selain itu, dapat dimanfaatkan sebagai pengawet alami, obat-
obatan, dansebagainya. Kecombrang berpredikat sebagai“deodorant alami”.
Ramuan alami tersebutberperan sebagai antiseptik alami yangdapat mengurangi
aktifitas bakteripenyebab bau badan dan bau mulut (Sukmawati,2017). Ekstrak
Buah patikala diketahui memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus (Yusran dan Muhammad, 2018). Senyawa flavonoid dari
buah kecombrang juga diketahui memiliki kemampuan meningkatkan sistem
imunomodulator denganmeningkatkan efektivitas proliferasilimfokin yang
dihasilkan oleh sel Tsehingga akan merangsang sel–sel fagosituntuk melakukan

respon fagositosis (Wahyuni dkk., 2017). Penelitian yang dilakukan oleh Malik
dkk. (2018) menunjukkan bahwa ekstrak buah kecombrang memiliki efek sebagai
antipiretik dan antiinflamasi. Berdasarkan penelitian sebelumnya diketahui bahwa
ekstrak biji honje memiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel leukimia (Rusanti
dkk., 2017) dan senyawa asam protokatekuat yang diisolasi dari ekstrak etil asetat
biji honje memiliki aktivitas antioksidan (Sukandar dkk., 2018).Berdasarkan hasil
penelitian, kandungan fitokimia bunga, batang, rimpang, buah dan daun patikala
antara lain senyawa alkaloid, saponin, tanin, fenolik, flavonoid, triterpenoid,
steroid, dan glikosida yang berperan aktif sebagai antioksidan maupun
antilarvasida. Buah dan daun merupakan salah satu komponen yang terdapat pada
tanaman patikala (Etlingera elatior (Jack) R.M.Sm) yang memiliki kandungan
fenolik didalamnya (Ahmad dkk., 2015).
Senyawa fenolik merupakan senyawa bahan alam yang cukup luas
penggunaannya saat ini. Kemampuannya sebagai senyawa biologik aktif
memberikan suatu peran yang besar terhadap kepentingan manusia. Salah satunya
sebagai antioksidan untuk pencegahan dan pengobatan penyakit degeneratif,
kanker, penuaan dini, dan gangguan sistem imun tubuh (Farida dan Maruzy,
2016).
Berdasarkan hal tersebut, maka peneliti tertarik untuk melakukan
pengujian aktivitas antioksidan dari asam cekala dengan menggunakan
spektrofotometri sinar tampak menggunakan metode pemerangkapan DPPH (1,1-
diphenyl-2-picrylhidrazyl).

1.2 Perumusan Masalah
Berdasarkan uraian pada latar belakang diatas, maka perumusan masalah
penelitian adalah:
a. Golongan senyawa kimia apa yang terkandung dalam simplisia dan
ekstrak etanol asam cekala?
b. Apakah ekstrak etanol asam cekala (Etlingera elatior (Jack) R. M.
Sm.) memiliki aktivitas antioksidan?
c. Berapakah kekuatan antioksidan dari ekstrak etanol asam cekala
dibandingkan dengan vitamin C?
1.3 Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah diatas, maka hipotesis dari penelitian ini
adalah:
a. Simplisia dan ekstrak etanol asam cekala mengandung senyawa
alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin, tanin, dan
triterpenoid/steroid.
b. Ekstrak etanol asam cekala memiliki aktivitas antioksidan.
c. Ekstrak etanol asam cekala memiliki aktivitas antioksidan yang lebih
kecil dari vitamin C.
1.4 Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah:
a. Untuk mengetahui golongan senyawa kimia yang terkandung dalam
simplisia ekstrak etanol asam cekala.

b. Untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol asam
cekala.
c. Untuk mengetahui besar kekuatan aktivitas antioksidan dari ekstrak
etanol asam cekala dibandingkan dengan vitamin C.
1.5 Manfaat Penelitian
Diharapkan dari hasil penelitian ini, dapat diperoleh informasi tentang
golongan senyawa kimia dari simplisia dan ekstrak etanol asam cekala serta
aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol asam cekala.

1.6 Kerangka Pikir Penelitian
1. Makroskopik
Asam Cekala Karakterisasi 2. Mikroskopik
3. Penetapan kadar air
4. Penetapan kadar sari
yang larut air
5. Penetapan kadar sari
Simplisia asam yang larut etanol
cekala 6. Penetapan kadar abu
total
7. Penetapan kadar abu
yang tidak larut asam
Ekstrak etanol
asam cekala
1. Alkaloid
Skrining
Fitokimia 2. Glikosida
3. Flavonoid
4. Triterpenoid/Steroid
5. Saponin
6. Tanin
Pengujian
antioksidan ekstrak Nilai IC50
etanol asam cekala
Gambar 1.1 Kerangka Pikir Penelitian

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tumbuhan
2.1.1 Morfologi Tumbuhan
Genus Etlingera adalah genus yang banyak tersebar dari Thailand,
Malaysia, Indonesia dan New Guinea. Tinggi tanaman dapat mencapai sampai 8
m dan sering mendominasi di hutan sekunder. Kecombrang merupakan tumbuhan
yang termasuk dalam keluarga Zingiberaceae dan tersebar cukup luas di
Indonesia. Kecombrang merupakan semak annual (tahunan) dengan batang semu
berpelepah berwarna hijau dan tumbuh tegak membentuk rumpun. Daun tunggal
berbentuk lanset dengan pertulangan menyirip. Mahkota bunga bertajuk dan
berwarna merah jambu. Buah berjejalan dalam bongkol hampir bulat berwarna
putih atau merah jambu. Berbiji banyak dan berwarna coklat kehitaman.
Rimpangnya tebal dan berwarna kuning hingga coklat dan akar berbentuk serabut
(Farida dan Maruzy, 2016).
Tanaman ini adalah tanaman asli Indonesia yang dibuktikan dengan studi
etnobotani di pulau Kalimantan, dimana 70% dari spesies yang ada mempunyai
nama lokal lainnya di pulau tersebut dan lebih dari 60% spesies yang ada
mempunyai paling tidak satu manfaat yang digunakan oleh penduduk pulau
Kalimantan (Farida dan Maruzy, 2016).

2.1.2 Sitematika Tumbuhan
Sistematika dari Asam cekala menurut Herbarium Medanense (MEDA)
USU (2018) adalah sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Monocotyledonae
Ordo : Zingiberales
Famili : Zingiberaceae
Genus :Etlingera
Spesies :Etlingera elatior (Jack) R. M. Sm.
2.1.3 Nama Daerah
Asam cekala di Indonesia dikenal dengan nama yang berbeda-beda seperti
kencong atau kincung (Sumatera utara); kecombrang (Jawa); honje (sunda);
bongkot (Bali); sambuang (Sumatera Barat); kala, tere (Gayo Aceh); atimengo,
sulayo, katimbang (Sulawesi) (Br. Perangin Angin, 2015).
2.1.4 Kandungan Kimia
Asam Cekala diketahui memiliki senyawa-senyawa alkaloid, saponin,
tannin, fenolik, flavonoid, triterpenoid, steroid, glikosida, dan minyak atsiri
(Ahmad dkk., 2015).
2.1.5 Khasiat
Asam cekala (Etlingera elatior (Jack) R.M. Sm.) berkhasiat sebagai
penghilang bau badan dan bau mulut (Sukmawati, 2017), antibakteri (Yusran dan
Fadel, 2018), antipiretik dan antiinflamasi (Malik dkk., 2018).

2.2 Vitamin C
Salah satu contoh antioksidan alami yaitu vitamin C. Vitamin C (Ascorbic
Acid) terdapat dalam seluruh jaringan hidup dan dapat mempengaruhi reaksi
oksidasi-reduksi dalam jaringan tersebut.Sumber utama vitamin C terdapat pada
sayuran dan buah-buahan. Manusia dan kelinci untuk percobaan merupakan satu-
satunya jenis primata yang tidak dapat mensintesis vitamin C. Kebutuhan manusia
akan vitamin C belum dapat ditentukan secara pasti. Namun, telah diketahui rata-
rata kebutuhan vitamin C pada manusia per hari antara 45 sampai 75 mg. Keadaan
stres yang berkelanjutan dan terapi obat-obatan bisa meningkatkan kebutuhan
akan vitamin C (Sayuti dan Yenrina, 2015).
Vitamin C (asam askorbat) merupakan antioksidan alami yang mudah dan
murah bila dikonsumsi dari alam.Vitamin C sebagai antioksidan berfungsi untuk
mengikat O2 sehingga tidak mendukung reaksi oksidasi (oxygen scavanger).
Vitamin C mempunyai berat molekul 178 dengan rumus molekul C6H8O6, dalam
bentuk kristal tidak berwarna,memiliki titik cair 190-192 °C, bersifat larut dalam
air, sedikit larut dalam aseton/alkohol yang mempunyai berat molekul rendah.
Vitamin C sukar larut dalam kloroform, eter dan benzen (Sayuti dan Yenrina,
2015).
2.3 Simplisia dan Ekstrak
2.3.1 Simplisia
Simplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai obat yang
belum mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali dikatakan lain, berupa
bahan yang telah dikeringkan. Simplisia dibedakan menjadi simplisia nabati,
simplisia hewani dan simplisia pelikan (mineral) (Ditjen POM, 2000).

2.3.2 Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat
aktif dari simplisia nabati atau hewani menggunakan pelarutyang sesuai,
kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbukyang
tersisa diperlakukan sedemikian sehingga memenuhi baku yang telah ditetapkan
(Ditjen POM, 2000).
Pembuatan sediaan ekstrak dimaksudkan agar zat berkhasiat yang terdapat
di simplisia terdapat dalam bentuk yang mempunyai kadar yang tinggi dan hal ini
memudahkan zat berkhasiat dapat diatur dosisnya (Anief, 2008).
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut
sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan menggunakan pelarut
cair yang sesuai. Senyawa aktif yang terdapat dalam berbagai simplisia dapat
digolongkan kedalam golongan minyak atsiri, alkaloid, flavonoid dan lain-lain.
Diketahuinya senyawa aktif yang dikandung simplisia akan mempermudah
pemilihan pelarut dan cara ekstraksi yang tepat (Ditjen POM, 2000).
Menurut Ditjen POM (2000) beberapa metode ekstraksi yang sering
digunakan dalam berbagai penelitian antara lain yaitu:
a. Cara Dingin
1. Maserasi
Maserasi adalah proses pengekstraksi simplisia dengan menggunakan
pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur
ruangan (kamar). Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan yang kontinu
(terus-menerus). Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut
setelah dilakukan penyaringan maserat pertama dan seterusnya.
10

2. Perkolasi
Pekolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai
sempurna (Exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur
ruangan. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap perendaman
antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak) terus
menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang tidak bereaksi ketika
ditambahkan serbuk Mg dan asam klorida pekat.
b. Cara panas
1. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,
selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan
adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu
pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna.
2. Sokletasi
Sokletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang
umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan
jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
3. Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada
temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu secara umum
dilakukan pada temperatur 40 - 50°C.
4. Infundasi
Infundasi adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air
(bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur 96 -
98°C) selama waktu tertentu (15 – 20 menit).
11

5. Dekoktasi
Dekoktasi adalah infus pada waktu yang lebih lama (≥30 menit) dan
temperatur sampai titik didih air.
2.4 Radikal Bebas
Radikal bebas adalah molekul yang kehilangan elektron, sehingga molekul
tersebut tidak stabil dan selalu berusaha mengambil elektron dari molekul atau sel
lain. Radikal bebas dapat dihasilkan dari hasil metabolisme tubuh seperti pada
waktu kita bernafas (hasil samping proses oksidasi atau pembakaran) (Sayuti dan
Yenrina, 2015).
Menurut Sayuti dan Yenrina (2015) tahapan radikal bebas yaitu:
a. Tahap inisiasi, merupakan awal pembentukan radikal bebas.
Pada tahap ini radikal bebas mulai terbentuk yang diproduksi oleh
beberapa proses. Suhu tinggi, proses ekstruksi dan tekanan pada proses
pemotongan bahan polimer dapat menghasilkan senyawa radikal. Setelah oksidasi
dimulai, menyebabkan konsentrasi hidroperoksida menjadi besar.
RH → radikal bebas mis: R, ROO, RO, HO
ROOH → RO* + OH*
2ROOH → RO* + ROO* + H2O
ROOR → 2 RO*
Pada tahap inisiasi asam lemak (RH) bereaksi dengan oksigen triplet, dan
membenuk radikal lemak (R*) dan radikal peroksida (HOO*) dengan inisiator
cahaya atau panas.
12

b. Tahap Propagasi
Tahap propagasi merupakan awal pemanjangan rantai radikal atau reaksi,
dimana radikal-radikal bebas akan diubah menjadi radikal-radikal yang lain.
R* + 3O2 →ROO*
ROO* + RH → ROOH + R*
c. Tahap Terminasi
Tahap terminasi yaitu senyawa radikal yang bereaksi dengan radikal lain
atau dengan penangkap radikal, sehingga potensi propagasinya rendah.
R* + R’* → RR
R* + ROO* → ROOR
2.5 Antioksidan
Antioksidan adalah senyawa yang mempunyai struktur molekul yang
dapat memberikan elektronnya kepada molekul radikal bebas dan dapat memutus
reaksi berantai dari radikal bebas. Antioksidan juga berguna untuk mencegah
oksidasi komponen makanan yang mengandung senyawa tidak jenuh (mempunyai
ikatan rangkap) misalnya minyak dan lemak. Kombinasi beberapa jenis oksidasi
antioksidan memberikan perlindungan yang lebih baik (sinergisme) dibandingkan
dengan satu jenis antioksidan saja (Ramadhan, 2015).
Menurut Sayuti dan Yenrina (2015), berdasarkan mekanisme kerjanya,
antioksidan dapat digolongkan menjadi:
a. Antioksidan Primer
Antioksidan primer bekerja untuk mencegah pembentukan senyawa
radikal baru, yaitu mengubah radikal bebas yang ada menjadi molekul yang
berkurang dampak negatifnya sebelum senyawa radikal bebas bereaksi.
13

Antioksidan primer mengikuti mekanisme pemutusan rantai reaksi radikal dengan
mendonorkan atom hidrogen secara cepat pada suatu lipid yang radikal, produk
yang dihasilkan lebih stabil dari produk awal.
Antioksidan primer adalah antioksidan yang sifatnya sebagai pemutus
reaksi berantai (chain-breaking antioxidant) yang bisa bereaksi dengan radikal-
radikal lipid dan mengubahnya menjadi produk-produk yang lebih stabil.
Suatu molekul dapat beraksi sebagai antioksidan primer jika dapat
memberikan atom hidrogen secara cepat kepada radikal lipid dan radikal yang
berasal dari antioksidan ini lebih stabil daripada radikal lipidnya, atau diubah
menjadi produk-produk lain yang stabil.
Contoh antioksidan primer adalah Superoksida Dismutase (SOD),
Glutation Peroksidase (GPx), katalase dan protein pengikat logam. Superoksida
Dismutase (SOD), GPx disebut juga dengan antioksidan enzimatis yaitu
antioksidan endogenus yang melindungi jaringan dari kerusakan oksidatif yang
disebabkan oleh radikal bebas oksigen seperti anion superoksida (O2*-), radikal
hidroksil (OH*), dan hidrogen peroksida (H2O2).
b. Antioksidan Sekunder
Antioksidan sekunder bekerja dengan cara mengkelat logam yang
bertindak sebagai pro-oksidan, menangkap radikal dan mencegah terjadinya reaksi
berantai. Antioksidan sekunder berperan sebagai pengikat ion-ion logam,
penangkap oksigen, pengurai hidroperoksida menjadi senyawa non radikal,
penyerap radiasi UV atau deaktivasi singlet oksigen.
Lipida pangan umumnya mengandung ion-ion logam dalam jumlah sangat
kecil yang mungkin berasal dari enzim-enzim yang diaktifkan oleh logam, berasal
dari peralatan pemurnian minyak atau berasal dari proses hidrogenasi. Logam-
14

logam berat khususnya yang bervalensi dua atau lebih dengan potensial redoks
yang sesuai, seperti Co, Cu, Fe, Mn dan sebagainya, mempersingkat periode
induksi dan meningkatkan kecepatan maksimum dari oksida lipida.
Senyawa pengkelat logam yang membentuk ikatan-ikatan σ dengan logam
sifatnya efektif sebagai antioksidan sekunder karena hanya senyawa ini
menurunkan potensil redoks dan karenanya menstabilkan bentuk teroksidasi dari
ion-ion logam.
Asam sitrat, EDTA dan turunan asam fosfat adalah senyawa-senyawa
pengkelat ion-ion logam. Asam sitrat yang banyak digunakan dalam produk
pangan adalah pengkelat logam yang lemah. Meskipun demikian, senyawa ini
sangat efektif dalam menghambat kerusakan oksidatif dari lipida dalam bentuk
produk pangan dan umumnya ditambahkan kedalam minyak nabati sesudah
proses deodorisasi. Pengkelat ion-ion logam ini sering disebut sinergis karena
dapat meningkatkan aktivitas antioksidan fenolik. Contoh antioksidan sekunder
adalah vitamin E, vitamin C, β-caroten, isoflavon, bilirubin dan albumin. Potensi
antioksidan ini dengan cara memotong reaksi oksidasi berantai dari radikal bebas
atau dengan cara menangkapnya (scavenger free radical) sehingga radikal bebas
tidak beraksi dengan komponen seluler.
c. Antioksidan Tersier
Antioksidan tersier bekerja memperbaiki kerusakan biomolekul yang
disebabkan radikal bebas. Contoh antioksidan tersier adalah enzim-enzim yang
memperbaiki DNA dan metionin sulfida reduktase.
15

Menurut Ramadhan (2015), berdasarkan sumbernya, antioksidan dapat
digolongkan menjadi:
a. Antioksidan alami
Antioksidan alami adalah antioksidan yang merupakan hasil dari ekstraksi
bahan alami. Antioksidan alami dalam makanan dapat berasal dari senyawa
antioksidan yang sudah ada dari satu atau dua komponen makanan, senyawa
antioksidan yang terbentuk dari reaksi-reaksi selama proses pengolahan, senyawa
antioksidan yang diisolasi dari sumber alami dan ditambahkan ke makanan
sebagai bahan tambhan pangan. Contohnya: superoxide dismutase (SOD),
katalase, dan glutation peroxide (GSH).
b. Antioksidan sintetik
Antioksidan sintetik adalah antioksidan yang diperoleh dari hasil reaksi
kimia. Beberapa contoh antioksidan yang diizinkan penggunaannya untuk
makanan yang telah sering digunakan, yatu butil hidroksi anisol (BHA), tokoferol,
asam askorbat, dan butil hidroksi toluen (BHT). Antioksidan-antioksidan tersebut
merupakan antioksidan alami yang telah diproduksi secara sintesis untuk tujuan
komersial.
2.6 Spektrofotometer UV-Visibel
Ahli kimia telah lama menggunakan warna sebagai bantuan dalam
mengenali zat-zat kimia. Spektrofotometri dapat dianggap sebagai perluasan
pemeriksaan visual, yaitu dengan menggunakan alat untuk mengukur absorpsi
energi radiasi macam-macam zat kimia dan memungkinkan dilakukannnya
pengukuran kualitatif dari suatu zat dengan ketelitian yang lebih besar (Day dan
Underwood, 1987).
16

Spektofotometri serap adalah pengukuran serapan radiasi elektromagnetik
panjang gelombang tertentu yang sempit, mendekati monokromatik, yang diserap
zat. Pengukuran serapan dapat dilakukan pada daerah ultraviolet (panjang
gelombang 190 nm - 380 nm) atau pada daerah cahaya tampak (panjang
gelombang 380 nm - 780 nm). Meskipun spektrum pada daerah ultraviolet dan
daerah tampak dari suatu zat tidak khas, tetapi sangat cocok untuk penetapan
kuantitatif, dan untuk beberapa zat berguna untuk membantu identifikasi (Ditjen
POM, 1979).
Spektrofotometer yang sesuai untuk pengukuran didaerah spektrum
ultraviolet dan sinar tampak terdiri atas suatu sistem optik dengan kemampuan
menghasilkan sinar monokromatis dalam jangkauan panjang gelombang 200-800
nm. (Rohman, 2007).
Gambar 2.1 Komponen Utama Spektrofotometer
Menurut JR Day dan Underwood (2007) komponen utama
spektrofotometer yaitu:
1. Sumber
Sumber energi radiasi yang biasa untuk daerah tampak dari spektrum itu
maupun daerah ultraviolet deat dan inframerah dekat adalah sebuah lampu pijar
dengan kawat rambut terbuat dari wolfram. Pada kondisi operasi biasa, keluaran
lampu wolfram ini memadai dari seitar 325 atau 350 nm hingga 3 µm.
17

2. Monokromator
Ini adalah piranti optis untuk mengisolasi suatu berkas radiasi dari suatu
sumber berkesinambungan, berkas mana mempunyai kemurnian spektral yang
tinggi dengan panjang gelombang apa saja yang diinginkan. Komponen yang
hakiki (esensial) dari sebuah monokromator adalah suatu sistem celah dan suatu
unsur dipersif. Radiasi dari sumber difokuskan ke celah masuk, kemudian
disejajarkan oleh sebuah lensa atau cermin sehingga suatu berkas sejajar jatuh ke
unsur pendispersi, yang berupa prisma atau suatu kisi difraksi. Dengan memutar
prisma atau kisi itu secara mekanis, aneka porsi spektrum yang dihasilkan oleh
unsur dispersi dipusatkan pada celah keluar, dari situ, lewat jalan optis lebih jauh,
porsi-porsi itu menjumpai sampel.
3. Sel Sampel
Sel tampak dn ultraviolet yang khas mempunyai panjang lintasan 1 cm,
namun tersedia sel dengan ketebalan yang sangat beraneka, mulai dari lintasan
yang sangat pendek, kurang daripada 1 milimeter, sampai 10 cm atau bahkan
lebih.
4. Detektor
Dalam sebuah detektor untuk suatu spektrofotometer, kita menginginkan
kepekaan yang tinggi dalam daerah spektral yang diminati, respons yang linear
terhadap daya radiasi, waktu respons yang cepat, dapat digandakan, dan kestabilan
tinggi atau tingkat noise yang rendah, meskipun dalam praktiknya perlu untuk
mengkompromikan faktor-faktor ini.
5. Penguat dan pembaca
18

2.7 Penentuan Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Salah satu uji yang dapat dilakukan untuk menetukan potensi antioksidan
suatu senyawa adalah dengan menguji kemampuannya dalam meredam senyawa
radikal DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhidrazyl). DPPH merupakan radikal bebas
yang stabil pada suhu kamar dan sering digunakan untuk menilai aktivitas
antioksidan beberapa senyawaatau ekstrak bahan alam. Interaksi antioksidan
dengan DPPH baik secara transfer elektron atau radikal hidrogen pada DPPH
akan menetralkan karakter radikal bebas DPPH (Gurav dkk., 2007).
DPPH menerima elektron atau radikal hidrogen akan membentuk molekul
diamagnetik yang stabil. Interaksi antioksidan dengan DPPH baik secara transfer
elektron atau radikal hidrogen pada DPPH, akan menetralkan radikal bebas dari
DPPH dan membentuk reduksi DPPH. Warna larutan berubah dari ungu tua
menjadi kuning terang dan absorbansi dengan panjang gelombang 516 nm akan
hilang jika semua elektron pada radikal bebas DPPH menjadi berpasangan.
Perubahan ini dapat diukur sesuai dengan jumlah elektron atau atom hidrogen
yang ditangkap oleh molekul DPPH akibat adanya zat reduktor. Suatu zat
mempunyai sifat antioksidan bila nilai IC50 kurang dari 200 ppm. Bila nilai IC50
yang diperoleh berkisar antara 200-1000 ppm maka zat tersebut kurang aktif
namun masih berpotensi sebagai antioksidan (Molyneux, 2004)
DPPH merupakan radikal bebas yang stabil. DPPH menerima elektron
atau radikal hidrogen kemudian akan membentuk molekul diamagnetik yang
stabil(Rosidah dkk.,2008). Struktur kimia DPPH dapat dilihat pada Gambar 2.2
berikut:
19

Gambar 2.2Struktur kimia DPPH (Molyneux, 2004).
Keberadaan antioksidan dalam ekstrak tumbuhan akan menetralisasi
radikal DPPH dengan memberikan elektron kepada DPPH, menghasilkan
perubahan warna dari ungu menjadi kuning atau intensitas warna ungu larutan
jadi berkurang (Molyneux, 2004).
Parameter yang dipakai untuk menunjukkan aktivitas antioksidan adalah
harga konsentrasi efisien atau efficient concentration (EC50) atau Inhibition
Concentration (IC50) yaitu konsentrasi suatu zat antioksidan yang dapat
menyebabkan 50% DPPH kehilangan karakter radikal atau konsentrasi zat suatu
antioksidan yang memberikan % penghambatan 50%. Zat yang mempunyai
aktivitas antioksidan yang tinggi, akan mempunyai nilai EC50 atau IC50 yang
rendah (Molyneux, 2004).
Prinsip pengujian aktivitas antioksidan dengan metode DPPH adalah
mengukur daya peredaman sampel (ekstrak) terhadap radikal bebas DPPH. DPPH
akan bereaksi dengan atom hidrogen dari senyawa peredaman radikal bebas
membentuk DPPH yang lebih stabil. Senyawa peredaman radikal bebas yang
bereaksi dengan DPPH akan menjadi radikal baru yang lebih stabil atau senyawa
bukan radikal (Hapsari,2017). Reaksi antara DPPH dengan atom H dari senyawa
antioksidan dapat dilihat pada Gambar 2.3 berikut :
20

Gambar 2.3 Reaksi DPPH dengan senyawa antioksidan (Hapsari, 2017).
2.7.1 Pelarut
Metode ini akan bekerja dengan baik menggunakan pelarut metanol atau
etanol dan kedua pelarut ini tidak mempengaruhi dalam reaksi antara sampel uji
sebagai antioksidan dengan DPPH sebagai radikal bebas (Molyneux, 2004).
2.6.2 Pengukuran absrobansi-panjang gelombang
Panjang gelombang maksimum (λ maks) yang digunakan dalam
pengukuran uji sampel uji sangat bervariasi. Menurut beberapa literatur panjang
gelombang maksimum untuk DPPH antara lain 515 nm, 516 nm, 517 nm, 518 nm,
519 nm, dan 520 nm. Pada prakteknya hasil pengukuran yang memberikan
peakmaksimum itulah panjang gelombangnya yaitu sekitar panjang gelombang
yang disebutkan diatas. Nilai absorbansi yang mutlak tidaklah penting, karena
panjang gelombang dapat diatur untuk memberikan absorbansi maksimum sesuai
dengan alat yang digunakan (Molyneux, 2004).
2.7.3 Waktu Reaksi
Pada metode sebelumnya waktu yang direkomendasikan adalah 30 menit
dan sudah sering dilakukan. Waktu yang paling cepat yang pernah digunakan 5
menit atau 10 menit. Kenyataannya waktu reaksi yang benar adalah ketika reaksi
sudah mencapai kesetimbangan. Kecepatan reaksi dipengaruhi oleh sifat dari
aktivitas antioksidan yang terdapat didalam sampel (Molyneux, 2004).
21

BAB III
METODE PENELITIAN
Metode penelitian ini dilakukan secara eksperimental meliputi
pengumpulan, pengolahan sampel, skrining fitokimia, dan pembuatan ekstrak
etanol dari asam cekala (Etlingera elatior (Jack) R. M. Sm.). Dilakukan pengujian
aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol asam cekala (Etlingera elatior (Jack) R.
M. Sm.) dengan metode pemerangkapan radikal bebas DPPH (1,1-diphenyl-2-
picrylhidrazyl) menggunakan spektrofotometer UV-Visible. Penelitian ini
dilakukan di Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium Penelitian, Fakultas
Farmasi, Universitas Sumatera Utara.
3.1 Alat-alat dan Bahan
3.1.1 Alat-alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini terdiri dari alat-alat gelas
laboratorium, blender, cawan penguap berdasar rata, krus porselin, lemari
pengering, mikroskop, alat maserasi, neraca analitis (Vibra), oven listrik
(Memmert), penangas air, rotary evaporator (Stuart), spektrofotometer UV/Vis
(Shimadzu UV-1800) dan tanur (Gallenkamp).
3.1.2 Bahan-bahan
3.1.2.1 Sampel
Sampel yang digunakan adalah asam cekala (Etlingera elatior (Jack) R.
M. Sm.). Sampel diambil dari Pasar Raya MMTC, Medan, Sumatera Utara.
22

3.1.2.2 Bahan Kimia
Bahan-bahan kimia yang digunakan yaitu: 1,1-diphenyl-2-
picrylhydrazyl(DPPH), Vitamin C, metanol, toluen, kloroform, etanol 96%, asam
klorida 2N, Mayer, Bouchardat, Dragendorff, timbal (II) asetat 0,4M, isopropanol,
Molisch, serbuk magnesium, asam klorida pekat, amil alkohol, besi (III) klorida
10%, n-heksana, Liebermann-Burchard (LB).
3.2 Pembuatan Larutan Pereaksi
Pembuatan larutan pereaksi yang digunakan untuk penelitian ini meliputi
pereaksi Liebermann-Burchard, asam sulfat 2 N, asam nitrat 0,5 N, Molisch,
Mayer, besi (III) klorida 10%, Dragendorff, Bouchardat, natrium hidroksida 2 N,
timbal (II) asetat 0,4 M, asam klorida 2 N, larutan kloralhidrat (Depkes RI,1995).
3.2.1 Pereaksi Liebermann-Burchard
Sebanyak 5 ml asam asetat anhidrida dicampur perlahan dengan 5 ml
asam sulfat pekat tambahkan etanol hingga 50 ml (Depkes RI, 1995).
3.2.2 Pereaksi Asam Sulfat 2 N
Sebanyak 5,5 ml asam sulfat pekat diencerkan dengan akuades hingga
volume 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.2.3 Pereaksi Asam Nitrat 0,5 N
Sebanyak 4,2 ml asam nitrat pekat diencerkan dengan akuades hinga
volume 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.2.4 Pereaksi Molisch
Sebanyak 3 gram α-naftol ditimbang, dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N
hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).
23

3.2.5 Pereaksi Mayer
Sebanyak 1,359 gram raksa (II) klorida ditimbang dan dilarutkan dalam
akuades hingga diperoleh volume larutan 60 ml. Sebanyak 5 gram kalium iodida
ditimbang, dilarutkan dalam 10 ml akuades pada wadah yang berbeda, kemudian
kedua larutan dicampurkan dalam satu wadah. Campuran larutan tersebut
ditambahkan dengan akuades hingga diperoleh volume larutan sebanyak 100 ml
(Depkes RI, 1995).
3.2.6 Pereaksi Besi (III) Klorida 10%
Sebanyak 10 gram besi (III) klorida ditimbang, dilarutkan dalam akuades
hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.2.7 Pereaksi Dragendorf
Sebanyak 8 gram bismuth (III) nitrat ditimbang, dilarutkan dalam 20 ml
asam nitrat pekat. Dilarutkan 27,2 gram kalium iodida dalam 50 ml akuades pada
wadah lain. Kedua larutan dicampurkan dan didiamkan sampai memisah
sempurna. Larutan yang jernih diambil dan diencerkan dengan akuades hingga
volume larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.2.8 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 gram kalium iodida dilarutkan dalam akuades, kemudian 2
gram iodium dilarutkan dalam larutan kalium iodida dan dicukupkan dengan
akuades hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.2.9 Pereaksi Timbal (II) Asetat 0,4 M
Sebanyak 15,17 gram timbal (II) asetat dilarutkan dalam akuades bebas
CO2 hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).
24

3.2.10 Pereaksi Asam Klorida 2 N
Sebanyak 17 ml asam klorida pekat ditambahkan dengan akuades hinga
diperoleh 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.2.11 Larutan Kloralhidrat
Sebanyak 50 gram kristal kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam 20
ml akuades (Depkes RI, 1995).
3.3 Pengambilan dan Pengolahan Sampel
3.3.1 Pengambilan Sampel
Sampel yang digunakan adalah asam cekala (Etlingera elatior (Jack) R.
M. Sm.) secara purposif yaitu tanpa membandingkan tumbuhan yang sama
dengan daerah lain. Sampel diambil dari Pasar Raya MMTC, Medan, Sumatera
Utara.
3.3.2 Identifikasi Tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Medanense Universitas
Sumatera Utara.
3.3.3 Pembuatan Simplisia
Simplisia asam cekala dibuat dengan cara pemilihan buah yang baik,
kemudian dicuci dengan air mengalir, diangin-anginkan dipotong-potong menjadi
beberapa potong, lalu dikeringkan selama 14 hari didalam lemari pengering,
selanjutnya dihaluskan menggunakan blender sampai menjadi serbuk.
3.4 Karakerisasi Simplisia Asam Cekala
Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemerikasaan makroskopik,
pemeriksaan mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari yang larut
25

dalam air, penetapan kadar sari yang larut dalam etanol, penetapan kadar abu total
dan penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam.
3.4.1 Pemeriksaan Makroskopik Simplisia Asam Cekala
Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk luar dari
Simplisia Asam Cekala kemudian diambil gambar simplisia dengan menggunakan
kamera dengan posisi melintang.
3.4.2 Pemeriksaan Mikroskopik Simplisia Asam Cekala
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap simplisia asam cekala.
Serbuk ditaburkan diatas kaca penutup kemudian diamati dibawah mikroskop.
3.4.3 Penetapan Kadar Air
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi
toluen). Alat terdiri dari labu alas bulat 500 ml, pendingin, tabung penyambung,
tabung penerima 5 ml berskala 0,05 ml, alat penampung dan pemanas listrik.
a. Penjenuhan toluen
Sebanyak 200 mL toluen dan 2 mL air suling dimasukkan kedalam labu
alas bulat, dipasang alat penampung dan pendingin, kemudian didestilasi selama 2
jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin selama 30 menit, kemudian volume
air dalam tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,05 mL.
b. Penetapan kadar air simplisia
Sebanyak 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama
dimasukkan kedalam labu yang berisi toluen yang dijenuhkan, kemudian labu
dipanaskan hati-hati selama 15 menit, setelah toluen mendidih, kecepatan tetesan
diatur 2 tetes per detik sampai sebagian besar air terdestilasi. Kecepatan destilasi
dinaikkan sampai 4 tetes tiap detik, setelah semua air terdestilasi, bagian dalam
pendingin dibilas dengan toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian
26

tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu kamar. Setelah air dan toluen
memisah sempurna, lalu volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 mL. Selisih
kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam
bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen (WHO, 1998).
3.4.4 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dengan 100 ml
air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu
bersumbat, dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18
jam, kemudian disaring. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam
cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa
dipanaskan pada suhu 105oC sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang
larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI,
1995).
3.4.5Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol
Sebanyak 5 g simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml 96%
dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian
dibiarkan selama 18 jam. Kemudian disaring cepat untuk menghindari penguapan
etanol. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang
berdasar rata yang telat dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105oC
sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam etanol 96%
dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.4.6Penetapan Kadar Abu Total
Sebanyak 2 g serbuk simplisia yang telah digerus dan ditimbang seksama
dimasukkan dalam kurs porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian
diratakan. Kurs dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pijaran dilakukan pada
27

suhu 600oC selama 3 jam kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh
bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes
RI, 1995).
3.4.7Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu total dididihkan dalam
asam klorida encer sebanyak 25 ml selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam
asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, dicuci dengan air
panas, lalu dipijar sampai bobot tetap, kemudian didinginkan dan ditimbang.
Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang telah
dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.5 Skrining Fitokimia
Menurut Depkes RI (1995), skrining fitokimia serbuk simplisia meliputi
pemeriksaan alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin, tanin dan steroid/triterpenoid.
3.5.1 Pemeriksaan Alkaloid
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambahkan 1 ml
asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan diatas penangas air selama 2
menit, didinginkan dan disaring, filtrat dipakai untuk uji alkaloida: diambil 3
tabung reaksi, lalu ke dalamnya dimasukkan 0,5 ml filtrat.
Pada masing-masing reaksi:
a. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer
b. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat.
c. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff.
Alkaloid disebut positif jika terjadi endapan atau kekeruhan pada dua
atau tiga dari percobaan diatas (Depkes RI, 1995).
28

3.5.2 Pemeriksaan Glikosida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 2 g, lalu disari dengan 20 ml
campuran etanol 95% dengan air (7:2) dan 10 ml asam klorida 2 N, direfluks
selama 2 jam, didinginkan dan disaring. Diambil 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml
air suling dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan 5 menit lalu
disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran isopropanol dan kloroform (2:2),
dilakukan berulang kali sebanyak 2 kali. Sari air dikumpulkan dan diuapkan pada
temperatur tidak lebih dari 50°C. Sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol. Larutan
sisa digunakan untuk percobaan berikut: 0,1 ml larutan percobaan dimasukkan
dalam tabung reaksi dan diuapkan di atas penangas air. Pada sisa ditambahkan 2
ml air dan 5 tetes pereaksi Molisch. Kemudian secara perlahan-lahan ditambahkan
2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuknya cincin berwarna
ungu pada batas kedua cairan menunjukkan glikosida (Depkes RI, 1995).
3.5.3 Pemeriksaan Saponin
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g dan dimasukkan ke dalam
tabung reaksi, lalu ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan kemudian dikocok
kuat-kuat selama 10 detik. Jika terbentuk busa setinggi 1 sampai 10 cm yang
stabil tidak kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes
asam klorida 2 N menunjukkan adanya saponin (Depkes RI, 1995).
3.5.4 Pemeriksaan Flavonoid
Sebanyak 10 g serbuk simplisia ditambah air panas, dididihkan selama 5
menit dan disaring dalam keadaan panas. Ke dalam 5 ml filtrat ditambahkan 0,1 g
serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 1 ml amil alkohol, dikocok
dan dibiarkan memisah. Flavonoid positif jika terjadi warna merah kekuningan
atau jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth, 1966).
29

3.5.5 Pemeriksaan Tannin
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 1 g, dididihkan selama 2 menit
dalam 100 ml air suling lalu didinginkan dan disaring. Pada filtrat ditambahkan 1-
2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1 %. Jika terjadi warna biru kehitaman atau hijau
kehitaman menunjukkan adanya tanin (Farnsworth, 1966).
3.5.6 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid
Sebanyak 1 g serbuk simplisia dimaserasi dengan 20 ml n-heksan selama
2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa
ditambahkan beberapa tetes pereaksi Liebermann-Buchard. Timbulnya warna biru
atau biru hijau menunjukkan adanya steroida, sedangkan warna merah, merah
muda atau ungu menunjukkan adanya triterpenoida (Harborne, 1973).
3.6 Pembuatan Ekstrak Etanol Asam Cekala
Pembuatan ekstrak etanol asam cekala dilakukan dengan metode
maserasi. Serbuk simplisia asam cekala dimaserasi menggunakan pelarut etanol
96%. Masukkan 10 bagian simplisia kedalam wadah berwarna gelap, tuang 75
bagian cairan penyari, tutup, biarkan selama 5 hari telindung dari cahaya sambil
sering diaduk, serkai, peras, cuci ampas dengan cairan penyari secukupnya hingga
diperoleh 100 bagian. Pindahkan ke dalam bejana tertutup, biarkan di tempat
sejuk, terlindung dari cahaya, selama 2 hari. Enap tuangkan atau saring (BPOM
RI, 2008). Maserat diuapkan dengan rotary evaporator pada temperatur ±50°C
sampai diperoleh ekstrak kental (Wahyuni dkk., 2017). Bagan pembuatan ekstrak
etanol asam cekala dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 52.
30

3.7 Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode Pemerangkapan
Radikal Bebas DPPH
Pengujian aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol asam cekala
menggunakan metode pemerangkapan radikal bebas DPPH dengan prinsip
kemampuan sampel uji dalam meredam proses oksidasi DPPH (1,1-diphenyl-2-
picrylhidrazyl) sebagai radikal bebas dalam larutan metanol (sehingga terjadi
perubahan warna DPPH dari ungu menjadi kuning) dengan nilai IC50 (konsentrasi
sampel uji yang mampu meredam radikal bebas 50%) digunakan sebagai
parameter untuk menentukan aktivitas antioksidan sampel uji (Molyneux, 2004).
Bagan pengujian aktivitas antioksidan ekstrak etanol asam cekala dengan metode
pemerangkapan DPPH dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 53.
3.7.1 Pembuatan Larutan Induk Baku DPPH
Sebanyak 20mg DPPH ditimbang, kemudian dilarutkan dalam metanol
hingga volume 100 ml (200 µg/mL).
3.7.2 Pembuatan Larutan Blanko
Larutan DPPH (konsentrasi 200 µg/mL) dipipet sebayak 5 mL, kemudian
dimasukkan kedalam labu tentukur 25 mL, dicukupkan volumenya dengan
metanol sampai garis tanda (konsentrasi 40 µg/mL) (Molyneux,2004).
3.7.3 Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH
Panjang gelombang maksimum ditentukan dengan menggunakan larutan
DPPH konsentrasi 40 µg/mL dan diukur serapannya pada panjang gelombang
400-800 nm. Larutan DPPH 40 µg/mL ini juga digunakan sebagai larutan kontrol
(larutan uji dengan konsentrasi 0 µg/mL).
31

3.7.4 Waktu Pengukuran
Larutan blanko DPPH konsentrasi 40 µg/mL dibaca serapannya
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 516,5 nm tiap 1
menit selama 60 menit.
3.7.5 Pembuatan Larutan Induk Baku Ekstrak Etanol Asam Cekala
Sebanyak 25 mg sampel ditimbang kemudian dilarutkan dalam labu
tentukur 25 mL dengan metanol, lalu volumenya dicukupkan dengan metanol
sampai garis tanda (konsentrasi 1000 µg/ml).
3.7.6 Pembuatan Larutan Induk Baku Vitamin C
Sebanyak 25 mg serbuk asam askorbat ditimbang, dimasukkan ke dalam
labu tentukur 50 ml dilarutkan dengan metanol lalu volumenya dicukupkan
dengan metanol sampai garis tanda (konsentrasi 500 ppm).
3.7.7 Pembuatan Larutan Uji
3.7.7.1 Larutan Uji Ekstrak Etanol Asam Cekala
Larutan induk baku ekstrak dipipet sebanyak 0,3 mL; 0,35 mL; 0,4 mL;
dan 0,45 mL kemudian dimasukkan kedalam labu tentukur 5 mL (untuk
mendapatkan konsentrasi 60 µg/mL, 70 µg/mL, 80 µg/mL, dan 90 µg/mL),
kemudian kedalam masing-masing labu tentukur ditambahkan 1 ml larutan induk
baku DPPH 200 µg/mL, lalu volume dicukupkan dengan metanol sampai garis
tanda dan dihomogenkan.
3.7.7.2 Larutan Uji Pembanding Vitamin C
Larutan induk baku dipipet sebanyak 0,02 ml; 0,04 ml; 0,06 ml; dan 0,08
ml kemudian dimasukkan kedalam labu tentukur 5 ml (untuk mendapatkan
konsentrasi 2 µg/mL, 4 µg/mL, 6 µg/mL, dan 8 µg/mL) kemudian kedalam
masing-masing labu tentukur ditambahkan 1 ml larutan induk baku DPPH 200
32

µg/mL, lalu volume dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda dan
dihomogenkan.
3.8 Analisis Persen Pemerangkapan Radikal Bebas DPPH
Larutan uji yang telah dipersiapkan, segera diinkubasi selama 30 menit
terhindar dari cahaya. Selanjutnya larutan kontrol dan sampel uji diukur pada
panjang gelombang 516,5 nm. Menurut Fitriana dkk. (2015), penentuan persen
pemerangkapan radikal bebas oleh sampel uji, ekstrak etanol asam cekala dengan
Vitamin C sebagai kontrol positif, menggunakan metode pemerangkapan radikal
bebas 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), yaitu dihitung dengan rumus
sebagai berikut:
Aktivitas Pemerangkapan Radikal Bebas (%) = 100%
Keterangan: Ab = Absorbansi blanko
`As = Absorbansi senyawa uji
3.9 Analisis Nilai IC50
Perhitungan yang digunakan dalam metode ini adalah nilai IC50
(Inhibitory Concentration), nilai IC50 merupakan bilangan yang menunjukkan
sampel uji (µg/ml) yang memberikan peredaman DPPH sebesar 50%. Hasil
perhitungan dimasukkan kedalam persamaan regresi dengan konsentrasi ekstrak
etanol asam cekala (ppm) sebagai absis (sumbu x) dan nilai peredaman sebagai
ordinatnya (sumbu y) (Verawati, 2017).
33

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Medanense (MEDA)
Universitas Sumatera Utara, hasilnya adalah asam cekaladengan nama spesies
Etlingera elatior (Jack) R. M. Sm., suku Zingiberaceae. Hasil identifikasi dapat
dilihat pada Lampiran 1 halaman 48.
4.2 Hasil Pemeriksaan Makroskopik
Hasil pemeriksaan makroskopik dari asam cekala menunjukkan bahwa
asam cekala berbentuk kerucut dengan panjang kurang lebih 2-2,5 cm, berjejelan
dalam bongkol hampir bulat berdiameter 10-20 cm, berambut halus dan pendek
dibagian luar, berwarna kemerahan ketika masak, rasa agak asam, memiliki biji
berwarna coklat kehitaman yang di selubungi salut biji berwarna putih yang
berasa agak asam. Gambar asam cekala dapat dilihat pada Lampiran 2 halaman
49.
Hasil pemeriksaan makroskopik dari simplisia asam cekala menunjukkan
simplisia asam cekala berwarna coklat, berbau khas, rasa agak asam. Gambar
simplisia asam cekala dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 51.
Hasil pemeriksaan makroskopik dari serbuk asam cekala menunjukkan
serbuk asam cekala berwarna coklat kemerahan dan rasa agak asam. Gambar
serbuk asam cekala dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 51.
34

4.3 Hasil Pemeriksaan Mikroskopik
Hasil pemeriksaan mikroskopik yang dilakukan terhadap serbuk
simplisia asam cekala diperoleh adanya parenkim, kristal ca-oksalat bentuk druse,
kelenjar minyak,epidermis dan rambut penutup. Hasil pemeriksaan mikroskopik
yang dilakukan terhadap serbuk simplisia asam cekala dapat dilihat pada
Lampiran 4 halaman 52
4.4 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
Hasil pemeriksaan kadar air, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol,
kadar abu total, dan kadar abu tidak larut dalam asam dapat dilihat pada Tabel 4.1.
Hasil perhitungan terhadap karakterisasi dari simplisia asam cekala dapat dilihat
pada Lampiran 6 halaman 57.
Tabel 4.1 Hasil Karakterisasi Simplisia Asam Cekala

No. Parameter Hasil (%)
1. Kadar air 6,66 %
2. Kadar sari larut dalam air 35,2 %
3. Kadar sari larut dalam etanol 12,56 %
4. Kadar abu total 4,16 %
5. Kadar abu tidak larut asam 1,32 %
Tabel 4.1 menunjukkan kadar air pada simplisia asam cekala sebesar
6,66%. Kadar tersebut memenuhi persyaratan umum yaitu lebih kecil dari 10%.
Menurut literatur, kadar air dalam ekstrak tidak boleh melebihi 10%. Tujuan
pemeriksaan kadar air adalah untuk memberi batasan minimal besarnya
kandungan air dalam bahan baik ekstrak maupun simplisia, makin tinggi kadar
air, makin mudah untuk ditumbuhi jamur dan kapang sehingga dapat menurunkan
aktivitas biologi simplisia dalam masa penyimpanan (Salim dkk.,2016)
Penetapan kadar sari yang larut dalamair menyatakan jumlah zat yang
tersari dalam pelarut air (bersifat polar) yang terkandung dalam simplisia, dari
35

penelitian ini diperoleh hasil penetapan kadar sari yang larut dalam air yaitu
35,2%. Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol menyatakan jumlah zat yang
tersari dalam pelarut etanol (bersifat polar ataunon polar), dari penelitian ini
diperoleh hasil penetapan kadar sariyang larut dalam etanol yaitu 12,56%.
Penetapan kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam dari serbuk
simplisia berturut-turut adalahh 4,16% dan 1,32%. Kadar abu dan kadar abu tidak
larut dalam asam hendaknya menghasilkan nilai rendah karena uji ini merupakan
indikator adanya cemaran logam yang tidak akan hilang pada suhu tinggi (Salim
dkk.,2016).
4.5 Hasil Pemeriksaan Skrining Fitokimia Simplisiadan Ekstrak
Hasil pemeriksaan skrining fitokimia simplisiadan ekstraketanol asam
cekala dapat dilihat pada tabel 4.2.
Tabel 4.2 Hasil Skrining dan Ekstrak Asam Cekala

No. Identifikasi Simplisia Ekstrak
1. Flavonoid + +
2. Alkaloid + +
3. Saponin + +
4. Tanin - -
5. Glikosida + +
6. Steroid/terpenoid + +
Keterangan : (+) = mengandung golongan senyawa; (-) = tidak mengandung
golongan senyawa
Berdasarkan hasil skrining fitokimia dapat dilihat, golongan senyawa
metabolit sekunder yang terdapat di dalam simplisia asam cekala adalah
flavonoid, alkaloid, saponin, glikosida, dan steroid/terpenoid dan metabolit
sekunder yang terdapat didalam ekstrak asamcekala adalah flavonoid, alkaloid,
saponin, glikosida, dan terpenoid.
36

Menurut Huliselan dkk. (2015) tumbuhan mengandung metabolit
sekunder yang berpotensi sebagai antioksidan, diantaranya adalah alkaloid,
flavonoid, senyawa fenol, steroid, dan terpenoid. Senyawa fenol dapat meredam
radikal bebas dengan menyumbangkan elektronnya melalui atom hidrogen gugus
hidroksil (Halimatussa’diah dkk., 2014).
4.6 Pemeriksaan Kandungan Antioksidan
Salah satu metode pengujian aktivitas antioksidan yang sekarang ini
sedang popular adalah pemerangkapan radikal bebas 1,1-diphenyl-2-
picrylhidrazyl (DPPH) (Molyneux, 2004). Aktivitas antioksidan dari ekstrak
etanol asam cekala diperolehdari hasil pengukuran absorbansi radikal bebas
DPPH dengan adanya penambahan larutan uji ekstrak etanol asam cekala
menggunakan vitamin C sebagai pembanding.
4.6.1 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH
Pengukuran serapan maksimum larutan DPPH dengan konsentrasi 40
ppm dalam methanol menggunakan spektrofotometri UV-Visibel. Data hasil
pengukuran panjang panjang gelombang maksimum dapat dilihat pada Gambar
4.1.
Gambar 4.1 Kurva Panjang Gelombang Maksimum DPPH (516,5 nm)
37

Pengukuran ini menunjukkan bahwa DPPH dalam methanol
menghasilkan serapan maksimum pada panjang gelombang 516,5 nm.
4.6.2 Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan

4.6.2.1 Sampel Uji Ekstrak Etanol Asam Cekala
Aktivitas antioksidan ekstrak etanol asam cekala diperoleh dari hasil
absorbansi DPPH pada panjang gelombang 516,5 nm pada menit ke 30 dengan
adanya penambahan larutan uji dengan konsentrasi 60 ppm, 70 ppm, 80 ppm, dan
90 ppm yang dibandingkan dengan kontrol DPPH (tanpa penambahan larutan uji).
Hasil pengukuran penurunan absorbansi DPPH oleh EEAC dapat dilihat pada
Tabel 4.3.
Tabel 4.3 Penurunan Absorbansi DPPH oleh EEAC

Konsentrasi EEAC (ppm) Absorbansi
I II III
60 0,556 0,556 0,556
70 0,500 0,499 0,499
80 0,448 0,447 0,447
90 0,386 0,387 0,386
Dari tabel 4.3 diatas, dapat kita lihat bahwa terjadi penurunan absorbansi
DPPH. Hal ini disebabkan karena adanya aktivitas pemerangkapan oleh larutan
uji yaitu ekstrak etanol asam cekala. Untuk melihat hubungan absorbansi DPPH
terhadap pertambahan konsentrasi larutan uji dalam menganalisis aktivitas
antioksidan dapat dilihat pada Gambar 4.2.
38

1.2
0.8 Pengulangan I
Absorbansi
Pengulangan II
0.6 Pengulangan III
0.4
0.2
0
0 60 70 80 90
Konsentrasi (ppm)
Gambar 4.2Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan ekstrak etanol asam cekala
Penurunan nilai absorbansi menunjukkan peningkatan antioksidan.
Penurunan nilai absorbansi terjadi karena larutan asam cekala mampu menetralisir
DPPH (1,1-diphenyl-2-picrilhydrazyl) dengan memberikan elektron kepada
DPPH (1,1-diphenyl-2-picrilhydrazyl) sehingga atom dengan elektron yang tidak
berpasangan mendapat pasangan elektron dan tidak lagi menjadi radikal. Hal ini
ditandai dengan larutan yang berubah dari ungu tua menjadi kuning terang dan
absorbansi pada panjang gelombang maksimumnya yang menurun (Molyneux,
2004).
Prinsip dari metode uji aktivitas antioksidan ini adalah pengukuran
aktivitas antioksidan secara kuantitatif yaitu dengan melakukan pengukuran
penangkapan radikal DPPH oleh suatu senyawa yang mempunyai aktivitas
antioksidan dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis sehingga dengan
demikian akan diketahui nilai aktivitas peredaman radikal bebas yang dinyatakan
dengan nilai IC50 (Inhibitory Concentration). Prinsip kerja dari pengukuran ini
adalah adanyaradikalbebas stabil yaitu DPPH yang dicampurkan dengan senyawa
antioksidan yang memiliki kemampuan mendonorkan hidrogen, sehingga radikal
bebas dapat diredam (Al Ridho dkk., 2013).
39

4.6.2.2 Sampel Uji Pembanding Vitamin C
Aktivitas antioksidan dari vitamin C dengan konsentrasi 2 µg/mL, 4
µg/mL, 6 µg/mL, 8 µg/mL, diperoleh dari hasil pengukuran absorbansi DPPH
pada menit ke-30. Kemudian dibandingkan dengan kontrol DPPH (tanpa
penambahan larutan uji).Hasil pengukuran penurunan absorbansi DPPH oleh
sampel uji pembanding Vitamin C dapat dilihat pada Tabel 4.4. Untuk melihat
hubungan absorbansi DPPH terhadap pertambahan konsentrasi larutan uji
pembanding vitamin C dalam menganalisis aktivitas antioksidan dilihat pada
Gambar 4.3.
Tabel 4.4 Penurunan Absorbansi DPPH oleh Vitamin C

Konsentrasi Vitamin C (ppm) Absorbansi
I II III
2 0,752 0,752 0,752
4 0,542 0,542 0,542
6 0,297 0,297 0,297
8 0,106 0,106 0,106
1.2
0.8
Absorbansi
0.6
Pengulangan I
0.4 Pengulangan II
0.2 Pengulangan III
0
0 2 4 6 8
Konsentrasi (ppm)
Gambar 4.3 Grafik Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan Vitamin C
Pada pengujian aktivitas antioksidan digunakan larutan pembanding yaitu
asam askorbat. Penggunaan pembanding pada pengujian aktivitas antioksidan ini
adalah untuk mengetahui seberapa kuat potensi antioksidan yang ada pada ekstrak
etanol asam cekala jika dibandingkan dengan vitamin C. Apabila nilai IC50 sampel
40

sama atau mendekati nilai IC50 pembanding maka dapat dikatakan bahwa sampel
berpotensi sebagai salah satu alternatif antioksidan yang sangat kuat (Al Ridho
dkk., 2013).
4.6.3 Hasil Analisis Peredaman Radikal Bebas DPPH oleh Sampel Uji
Kemampuan antioksidan diukur pada menit ke-30 sebagai penurunan
serapan larutan DPPH (peredaman warna ungu DPPH) akibat adanya penambahan
larutan uji. Nilai serapan larutan DPPH sebelum dan sesudah penambahan larutan
uji dihitung sebagai persen peredaman. Dari hasil analisis yang telah dilakukan,
diperoleh nilai persen peredaman pada setiap kenaikan konsentrasi sampel uji
seperti yang terlihat pada tabel 4.5. Perhitungan analisis peredaman radikal bebas
ekstrak etanol asam cekala dan vitamin c dapat dilihat pada Lampiran 7 halaman
60.
Tabel 4.5 Hasil Analisis Peredaman Radikal Bebas Ekstrak Etanol Asam Cekala
dan Vitamin C
Jenis Konsentrasi Larutan % Peredaman
Ekstrak Uji (ppm) I II III Rata-rata
EEAC 0 - - - -
60 50,48% 50,44% 50,53% 50,48%
70 55,47% 55,52% 55,60% 55,53%
80 60,10% 60,16% 60,23% 60,16%
90 62,62% 65,50% 65,65% 65,59%
Vitamin 0 - - - -
C 2 22,55% 22,55% 22,55% 22,55%
4 44,18% 44,18% 44,18% 44,18%
6 69,41% 69,41% 69,41% 69,41%
8 89,08% 89,08% 89,08% 89,08%
Keterangan: EEAC (ekstrak etanol asam cekala)
Pada tabel diatas dilihat bahwa semakin meningkatnya konsentrasi larutan
uji maka aktivitas peredaman DPPH akan semakin meningkat dikarenakan
semakin banyak DPPH yang berpasangan dengan atom hidrogen dari ekstrak.
41

4.6.4 Hasil Analisis Nilai IC50 (Inhibitory Concentration)
Nilai IC50 diperoleh berdasarkan persamaan regresi linier yang
didapatkan dengan cara memplot konsentrasi larutan uji dan persen peredaman
DPPH sebagai parameter aktivitas antioksidan dimana konsentrasi larutan uji
(ppm) sebagai absis dan nilai persen peredaman sebagai ordinat. Hasil analisis
nilai IC50 yang diperoleh berdasarkan perhitungan persamaan regresi dapat dilihat
di Tabel 4.6.
Tabel 4.6 Nilai IC50 Ekstrak Etanol Asam Cekala dan Vitamin C
Sampel Persamaan Regresi IC50
EEAC Y=0,745X+1,652 64,89 μg/mL
Vitamin c Y= 11,251X+0,04 4,44 μg/mL
Nilai IC50 didefinisikan sebagai besarnya konsentrasi senyawa uji yang
dapat meredam radikal bebas sebanyak 50%. Semakin kecil nilai IC50 maka
aktivitas peredaman radikal bebas semakin tinggi (Al Ridho dkk., 2013).
Menurut kategori kekuatan antioksidan pada Tabel 4.7, menunjukkan
bahwa ekstrak etanol asam cekala memiliki aktivitas antioksidan yang tergolong
kuat sedangkan vitamin C memiliki aktivitas antioksidan yang tergolong sangat
kuat.Dari hasil perhitungan didapat nilai IC50 vitamin C adalah 4,44 μg/mL,
sedangkan nilai IC50 dari ekstrak adalah sebesar 64,89 μg/mL sehingga ekstrak
etanol asam cekala memiliki aktivitas antioksidan yang lemah bila dibandingkan
dengan vitamin C.
Tabel 4.7 Kategori Nilai IC50 Sebagai Antioksidan

No. Kategori Konsentrasi (ppm)
1. Sangat kuat < 50
2. Kuat 50-100
3. Sedang 101-150
4. Lemah 151-200
(Utami, 2017)
42

Menurut Samosir dkk. (2012) besarnya angka antioksidan tersebut erat
hubungannya dengan kandungan flavonoid. Semakin banyak senyawa flavonoid
yang terkandung maka semakin besar pula total aktivitas antioksidannya. Jenis
pelarut ekstraksi pada larutan sampel sangat berpengaruh terhadap perolehan
kadar zat tersari dan aktivitas antioksidan pada larutan sampel (Rivai dkk., 2012).
Gambar 4.4 Reaksi Penangkapan Radikal Bebas DPPH oleh Fenol (Hilwiyah
dkk., 2015)
Kadar total fenol dan flavonoid ekstrak semakin tinggi, maka
kemampuan meredam radikal bebas juga semakin tinggi. Hal ini ditunjukkan
dengan semakin kecilnya nilai IC50 (Hilwiyah dkk., 2015). Mekanisme peredaman
radikal bebas oleh fenol dapat dilihat pada Gambar 4.4.
43

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
a. Hasil pemeriksaan skrining fitokimia golongan senyawa kimia yang
terkandung dalam simplisia dan ekstrak etanol asam cekala menujukkan
adanya senyawa kimia golongan flavonoid, saponin, alkaloid, glikosida, dan
terpenoid.
b. Hasil pengujian aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode
pemerangkapan radikal bebas 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)
diperoleh ekstrak etanol asam cekala memiliki aktivitas antoksidan yang
tergolong kuat dengan nilai IC50 64,89 μg/mL.
c. Hasil pengujian aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode
pemerangkapan radikal bebas 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)
diperoleh ekstrak etanol asam cekala memiliki aktivitas antioksidan yang kecil
dibandingkan dengan Vitamin C dengan nilai IC50 yaitu 4,44 μg/mL.
5.2 Saran
Berdasarkan pembahasan dan kesimpulan, maka penulis menyarankan untuk
menguji aktivitas antioksidan asam cekala dengan metode ekstraksi dan pelarut
yang berbeda.
44

DAFTAR PUSTAKA
Ahmad, A.R., Juwita, Ratulangi, S.A.D., Malik, A. 2015. Penetapan Kadar

Fenolik dan Flavonoid Total Ekstrak Metanol Buah dan Daun Patikala
(Etlingera elatior (Jack) R.M.Sm). Pharm Sci Res. 2(1): 1-10.
Al Ridho, E.A., Sari, F., Wahdaningsih, S. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Metanol Buah Lakum Dengan Metode DPPH. Naskah Publikasi.
Tanjung Pura:Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran Universitas
Tanjung Pura, Pontianak. Hal. 8.
Anief, M. 2008. Ilmu Meracik Obat. Cetakan ke-14. Yogyakarta:Gadjah Mada
University Press. Hal.169.
Bahriul, P., Rahman, N., M. Diah, A.W. 2014. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Daun Salam (Szygium polyanthum) Dengan Menggunakan 1,1-difenil-2-
picrilhidrazyl. Jurnal Akademika Kimia. 3(3): 143-149.
BPOM RI. 2008. Acuan Sediaan Herbal. Vol. 4. Ed. 1. Jakarta: Badan Pengawas
Obat dan Makanan Republik Indonesia. Hal. 8.
Br. Perangin Angin, M.I. 2015. Karakterisasi Senyawa Kimia dan Uji Aktivitas
Antibakteri Minyak Atsiri Bunga Kecombrang (Etlingera elatior) yang
Diisolasi Dengan Destilasi Stahl. Agrica Ekstensia. 9(1): 27-33.
Day, R.A.,Underwood, A.L. 1998. Quantitative Chemical Analysis. Edisi VI.
Terjemahan Sopyan, I. (2001). Analisis Kimia Kuantitatif. Jakarta:
Penerbit Erlangga. Halaman: 396-400.
Ditjen POM R.I. 1979. Farmakope Indonesia. Edisi 3. Jakarta: Departemen
Kesehatan RI. Hal 1065.
Departemen Kesehatan R.I. 1995. Materia Medika Indonesia. Jilid keenam.
Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 299-305, 334-335.
Ditjen POM R.I. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.
Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 1,9-12,17.
Farnsworth, N.R. 1966. Biological and Phytochemical Screening of Plants.
Journal of Pharmaceutical Sciences. 55(3): 263.
Farida, S.,Maruzy, A. 2016. Kecombrang (Etlingera elatior): Sebuah Tinjauan
Penggunaan Secara Tradisional, Fitokimia dan Aktivitas Farmakologinya.
Jurnal Tumbuhan Obat Indonesia. 9(1): 19-27.
http://ejournal.litbang.depkes.go.id/index.php/toi/article/view/6389.
Fitriana, W.D., Fatmawati, S., Ersam, T. 2015. Uji Aktivitas Antioksidan terhadap
DPPH dan ABTS dari Fraksi-fraksi Daun Kelor (Moringa
oleifera).Prosiding Simposium Nasional Inovasi dan Pembelajaran Sains
2015. Bandung. Hal 658.
Gurav, S., Deshkar, N., Gulkari, V., Duragkar, N., Patil, A. 2007. FREE
RADICAL SCAVANGING ACTIVITY OF POLYGALA CHINENSIS
LINN. Pharmacologyonline. No.2. Halaman 249.
Hapsari, A.M. 2017. Pengujian Kandungan Total Fenol dan Flavonoid serta
Antioksidan Ekstrak Etanol Tempuyung (Shoncus arvensis L.). Skripsi.
Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Halaman 15-16, 40,
43.
Harborne, J.B. 1984. Phytochemical Methods. Penerjemah: Padmawinata, K., dan
Soediro, I. (1987). Metode Fitokimia. Bandung. Penerbit ITB. Hal. 147,
259.
45

Halimatussa’diah, F., Fitriani, V.Y., Rijai, L. 2014.Aktivitas Antioksidan
Kombinasi Daun Cempedak (Artocarpus Champedan) Dan Daun
Bandotan (Ageratum ConyzoidesL). J. Trop. Pharm. Chem. 2(5): 248.
Hilwiyah, A., Betty, L., Nugrahaningsih. 2015. Skrining Fitokimia Dan Uji
Aktivitas Antioksidan Serta Kadar Total Fenol - Flavonoid Ekstrak Etanol
Murbei (Morus Alba L.). Malang: University of Malang.http://jurnal-
online.um.ac.id/data/artikel/artikel28E5B5F81EB05F5AD9931E68B5E51
3D4.pdf. Diakses pada tanggal 10 Oktober 2018.
Huliselan, Y.M., Runtuwene, M.R.J., Wewengkang, D.S. 2015. Aktivitas
Antioksidan Ekstrak Etanol, Etil Asetat, Dan N-Heksan Dari Daun
Sesewanua (Clerodendron Squamatum Vahl.). PHARMACONJurnal
Ilmiah Farmasi. 4(3): 156.
MEDA. 2018. Hasil Identifikasi. Medan: Herbarium Medanense Universitas
Sumatera Utara.
Malik, F., Ningsi, A., Bafadal, M., Saktiani, D.N, Wahyuni. 2018. Uji Efek
Antipiretik Ekstrak Etanol Buah Wualae (Etlingera elatior (Jack) R. M.
Smith) Terhadap Mencit Jantan (Mus musculus L.) Galur Balb/C.
Pharmauho. 4(1): 9-11.
Molyneux, P. 2004. The Use of the Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH) for Estimating Antioxidant Activity.Songklanakarin J. Sci.
Technol. 26: (2): 212.
Ramadhan, P. 2015. Mengenal Antioksidan. Cetakan I. Yogyakarta: Graha Ilmu.
Halaman 17 dan 22.
Rivai, H., Putra, R.Y., Krisyanella. 2012. Penentuan Pengaruh Jenis Pelarut
Pengekstrak Terhadap Perolehan Kadar Senyawa Fenolat Dan Aktifitas
Antioksidan Dari Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.). Jurnal Farmasi
Higea. 4(1): 21.
Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Cetakan I. Yogyakarta: Pustaka
Pelajar. Halaman 261.
Rosahdi, T.D., Kusmiyati, M., Wijayanti, F.R. 2013. Uji Aktivitas Daya
Antioksidan Buah Rambutan Rapiah Metode DPPH.Jurnal Istek. 7(1):
2.http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/istek/article/view/242.Diakses pada
tanggal 10 Oktober 2018.
Rosidah, Yam, M.F., Sadikun, A., Asmawi, M.Z. 2008. Antioxidant Potential of
Gynura procumbens.Pharmaceutical Biology. 46(9): 616-625.
Rusanti, A., Sukandar, D., Rudiana, T., Adawiah. 2017. Profil Fraksi Sitotoksik
Terhadap Sel Murine Leukimia P-388 dari Ekstrak Biji Honje (Etlingera
elatior). Jurnal Kimia VALENSI. 3(1): 79-87.
Salim, M., Sulityaningrum, N., Isnawati, A., Sitorus, H., Yahya., Ni’mah, T.
2016. Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Kulit Buah Duku (Lansium
domesticum Corr) dari Provinsi Sumatera Selatan dan Jambi. Jurnal
Kefarmasian Indonesia. 6(3): 122.
Samosir, A.P., Runtuwene, M. R. J., Citraningtyas, G. 2012. Uji Aktivitas Antioksidan Dan Total
Flavonoid Pada Ekstrak Etanol Pinang Yaki (Areca
vestiaria).PHARMACON.Hal.5.https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/pharmacon/articl
e/view/460.Diakses pada tanggal 10 Oktober 2018.
Sayuti, K., Yenrina, R. 2015. Antioksidan Alami dan Sintetik. Cetakan Pertama.
Padang : Andalas University Press. Halaman 15-20.
46

Sukandar, D., Umedi, I,U., Nurbayti, S., Rudiana, T., Fathoni, A,. 2018. Asam
Protokatekuat dari Ekstrak Etil Asetat Biji Honje (Etlingera elatior) dan
Uji Aktivitas Antioksidannya. Jurnal Kimia VALENSI. 4(1): 52-56.
Sukmawati. 2017. Daya Hambat Ekstrak Buah Kecombrang (Etlingera elatior)
Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus Aureus dan Escherichia Coli.
Biogenerasi. 1(2):68-76.
Utami, N. H. 2017. Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Etanol Herba Poguntano
(Picria fel-terrae Lour.) secara In Vitro.Skripsi.Medan: Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara. Halaman 43.
Wahyuni, Malaka, M.H., Fristiohady, A., Yusuf, M.I., Sahidin. 2017. Potensi
Imunomodulator Ekstrak Etanol Buah Kecombrang (Etlingera elatior
(Jack) R. M. Smith) Terhadap Aktivitas Fagositosis Makrofag Mencit
Jantan Galur Balb/C. PHARMACONJurnal Ilmiah Farmasi. 6(3): 350-
355.
Wardaningsih, S., Setyowati, E.P., Wahyuno, S. 2011. Aktivitas Penangkap
Radikal Bebas Dari Batang Pakis (Alsophila Glauca J. Sm). Majalah Obat
Tradisional. 16(3): 157.
World Health Organization. 1998. Quality Control Methods For Medicinal Plant
Material. Switzerland: WHO. Hal.35-39.
Yusran, A.,Muhammad, F. 2018. Daya Hambat Ekstrak Buah Patikala (Etlingera
elatior (Jack) R. M. Sm) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus.
Makassar Dent J. 7(2): 95-99.
47

Lampiran 1.Surat Hasil Identifikasi Tumbuhan
48

Gambar Tumbuh
Lampiran 2.Gambar Tumbuhan
Gambar 1. Tanaman Asam Cekala
Gambar 2. Gambar Asam Cekala dalam bongkolnya
49

(lanjutan)
Lampiran 2.(lanjutan)
Gambar 3. Buah asam cekala
Gambar 4. Daun asam cekala
50

Gambar Simplisia
Lampiran 3.Gambar
Gambar 5. Simplisia asam cekala
Gambar 6. Serbuk simplisia asam cekala
51

Lampiran 4.Hasil Pemeriksaan Mikroskopik
Gambar 7. Hasil Pemeriksaan Mikroskopik

Keterangan : 1. Kristal Ca-Oksalat bentuk druse; 2. Rambut Penutup; 3.
Epidermis; 4. Kelenjar minyak; 5. Parenkim.
52

Lampiran 5. Bagan Kerja Penelitian
Asam Cekala
Dicuci di air mengalir

Ditiriskan
Ditimbang berat basahnya
Dipotong-potong
Dikeringkan
Ditimbang berat keringnya
Simplisia
Dihaluskan dengan blender
Disimpan
Serbuk Simpilisia
Karakterisasi Skrining fitokimia Pembuatan ekstrak
Dimaserasi
dengan
etanol 96%
1. Makroskopik 1. Alkaloid Ekstrak Kental

2. Mikroskopik 2. Glikosida
3. Penetapan kadar air 3. Flavonoid
4. Penetapan kadar 4. Triterpenoid/Steroid
sari yang larut air 5. Saponin
Uji Aktivitas
5. Penetapan kadar 6. Tanin
Antioksidan
sari yang larut
etanol
6. Penetapan kadar
abu total
7. Penetapan kadar
abu yang tidak larut
asam
53

Lampiran 5.(Lanjutan)
Bagan pembuatan ekstrak etanol asam cekala
500 gram serbuk simplisia asam cekala
Dimasukkan kedalam bejana

Dimaserasi dengan 75 bagian
etanol 96% selama 5 hari
Dibiarkan 5 hari terlindung dari
cahaya, sambil diaduk sesekali
Disaring
Maserat Ampas
Dimaserasi kembali
dengan 25 bagian
etanol 96% selama 2
hari
Dibiarkan selama 2
hari
Disaring
Maserat Ampas
Digabungkan
Diuapkan dengan rotary evaporator
Ekstrak Kental
54

Bagan pengujian aktivitas antioksidan ekstrak etanol asam cekala
20 mg serbuk DPPH
Dimasukkan kedalam labu

tentukur 100 ml
Dilarutkan dalam metanol hingga
volume 100 ml
LIB DPPH 200 µg/mL
Dipipet sebanyak 5 ml
tentukur 25 ml
Dicukupkan volume dengan
metanol sampai batas tanda
Larutan Blanko DPPH 40 µg/mL
pengukuran panjang pengukuran waktu kerja

gelombang maksimum
Dilakukan tiap 1
menit selama 60
menit
516,5 nm 30 menit
55

25 mg Ekstrak kental

tentukur 25 ml
Dilarutkan dengan metanol
sampai batas tanda
LIB ekstrak 1000 µg/ml
Dipipet masing-masing 0,3 ml:

0,35 ml; 0,4 ml; dan 0,45 ml.
Dimasukkan kedalam labu 5ml.
Ditambahkan 1 ml LIB DPPH
200 µg/ml.
Dilarutkan dengan metanol
hingga batas tanda.
Larutan Uji Larutan Uji Larutan Uji Larutan Uji

konsentrasi 60 konsentrasi 70 konsentrasi 80 konsentrasi 90
µg/ml µg/ml µg/ml µg/ml
Diinkubasi selama 30 menit.

Diukur serapan pada panjang
gelombang 516,5 nm.
Dihitung % pemerangkapan
DPPH
IC50
56

Lampiran 6. Perhitungan Karakterisasi Simplisia Asam Cekala
1. Penetapan kadar air
( )
% Kadar air simplisia = ( )
× 100%
No. Berat Sampel (g) Volume Awal (ml) Volume akhir (ml)
1 5,005 2,0 2,2
2 5,001 2,2 2,6
3 5,002 2,6 3,0
, ,
1. Kadar air = ,
× 100% = 3,996 %
, ,
2. Kadar air = ,
× 100% = 7,998 %
, ,
3. Kadar air = ,
× 100% = 7,996 %
, , ,
% Rata-rata kadar air = = 6,6633%
2. Penetapan kadar sari larut etanol
( )
% Kadar sari larut dalam etanol = ( )
× × 100%
No. Berat Sampel (g) Berat Sari (g)

1. 5 0,122
2. 5 0,128
3. 5 0,127
,
1. Kadar sari larut etanol = × × 100% = 12,2 %
,
,
, % , % , %
% Rata-rata kadar sari larut dalam etanol = = 12,56%
3. Penetapan kadar sari larut dalam air
( )
% Kadar sari larut dalam air = ( )
× × 100%
57

No. Berat Sampel (g) Berat sari (g)

1 5 0,367
2 5 0,372
3 5 0,317
,
1. Kadar sari larut air = × × 100% = 36,7 %
,
,
, % , % , %
% Rata-rata kadar sari larut dalam air = = 35,2%
4. Penetapan kadar abu total
( )
% Kadar abu total = ( )
× 100%
No. Berat Sampel (g) Berat Abu (g)

1. 2,002 0,084
2. 2 0,083
3. 2,003 0,083
.
1. Kadar abu total = ,
× 100% = 4,19%
.
2. Kadar abu total = × 100% = 4,15%
.
3. Kadar abu total = ,
× 100% = 4,14%
, % , % , %
% Rata-rata kadar abu total = = 4,16%
5. Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam
( )
% Kadar abu total = ( )
× 100%
No. Berat Sampel (g) Berat Abu (g)

1. 2,002 0,035
2. 2 0,023
3. 2,003 0,022
58

.
1. Kadar abu tidak larut dalam asam = ,
× 100% = 1,74%
.
2. Kadar abu tidak larut dalam asam = × 100% = 1,15%
.
3. Kadar abu tidak larut dalam asam = ,
× 100% = 1,09%
, % , % . %
% Rata-rata kadar abu tidak larut asam = = 1,32%
59

Lampiran 7. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan
1. Ekstrak etanol asam cekala
Data absorbansi pengukuran pertama
Konsentrasi larutan uji (µg/ml) Absorbansi % Peredaman

0 1,123 -
60 0,556 50,48
70 0,500 55,47
80 0,448 60,10
90 0,386 65,62
% peredaman= × 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman ekstrak etanol asam cekala
- Konsentrasi 60 µg/ml
, ,
% peredaman = ,
× 100% =50,48%
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 55,47%
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 60,10%
, ,
% peredaman= ,
× 100% = 65,62%
Data absorbansi pengukuran kedua

0 1,122 -
60 0,556 50,44
70 0,499 55,52
80 0,447 60,16
60

90 0,387 65,50
Keterangan:
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 50,44%
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 55,52%
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 60,16%
, ,
% peredaman= ,
× 100% = 65,50%
Data absorbansi pengukuran ketiga

0 1,124 -
60 0,556 50,53
70 0,499 55,60
80 0,447 60,23
90 0,386 65,65
Keterangan:
61

Lampiran 7. (Lanjutan)
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 50,53%
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 55,60%
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 60,23%
, ,
% peredaman= ,
× 100% = 65,65%
Data nilai rata-rata % peredaman ekstrak etanol asam cekala

Konsentrasi Larutan Uji % Peredaman
(µg/ml) I II III Rata-rata
0 - - - -
60 50,48 50,44 50,53 50,48
70 55,47 55,52 55,60 55,53
80 60,10 60,16 60,23 60,16
90 62,62 65,50 65,65 65,59
2. Vitamin C pembanding
Data absorbansi pengukuran pertama
Konsentrasi larutan uji Absorbansi % Peredaman

(µg/ml)
0 0,971 -
2 0,752 22,55
4 0,542 44,18
6 0,297 69,41
8 0,106 89,08
62

Keterangan:
Perhitungan % peredaman vitamin C
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 22,55%
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 44,18%
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 69,41%
, ,
% peredaman= ,
× 100% = 89,08%
Data absorbansi pengukuran kedua

(µg/ml)
0 0,971 -
2 0,752 22,55
4 0,542 44,18
6 0,297 69,41
8 0,106 89,08
Keterangan:
63

Perhitungan % peredaman vitamin C
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 22,55%
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 44,18%
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 69,41%
, ,
% peredaman= ,
× 100% = 89,08%
Data absorbansi pengukuran ketiga

(µg/ml)
0 0,971 -
2 0,752 22,55
4 0,542 44,18
6 0,297 69,41
8 0,106 89,08
Keterangan:
Perhitungan % peredaman vitamin c
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 22,55%
64

, ,
% peredaman = ,
× 100% = 44,18%
, ,
% peredaman = ,
× 100% = 69,41%
, ,
% peredaman= ,
× 100% = 89,08%
Data nilai rata-rata % peredaman vitamin C

Konsentrasi Larutan Uji % Peredaman
(µg/ml)
I II III Rata-rata
0 - - - -
2 22,55 22,55 22,55 22,55
4 44,18 44,18 44,18 44,18
6 69,41 69,41 69,41 69,41
8 89,08 89,08 89,08 89,08
65

Lampiran 8. Perhitungan Nilai IC50
1. Ekstrak etanol asam cekala
X Y XY X2
0 0 - -
60 50,48 3028,8 3600
70 55,53 3887,1 4900
80 60,16 4812,8 6400
90 65,59 5903,1 8100
∑X=300 ∑Y=231,76 ∑XY=17631,8 ∑X2=23000
X = 60 Y= 46,352
Keterangan: X = Konsentrasi (µg/ml); Y = % peredaman
(∑XY) - (∑X)(∑Y)/n
a= (∑X ) (∑X) /n
(17631,8) - (300)(231,76)/5
a= ( ) ( ) /
,
a=
a = 0,745
b = y- ax
= 46,352 – (0,745)(60)
= 46,352 – 44,7
= 1,652
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,745X + 1,652
Nilai IC50 : Y = 0,745X + 1,652
50 = 0,745X + 1,652
X = 64,89 µg/ml
IC50 ekstraketanol asam cekala = 64,89 µg/ml
2. Vitamin C pembanding
X Y XY X2
0 0 - -
2 22,55 45,1 4
4 44,18 176,72 16
66

X Y XY X2
6 69,41 416,46 36
8 89,08 712,64 64
∑X=20 ∑Y=225,22 ∑XY=1350,92 ∑X2=120
X=4 Y= 45,044
Keterangan: X = Konsentrasi (µg/ml); Y = % peredaman
(∑XY) - (∑X)(∑Y)/n
a= (∑X ) (∑X) /n
(1350,92) - (20)(225,22)/5
a= ( ) ( ) /
,
a=
a = 11,251
b = y - ax
= 45,044 – (11,251)(4)
= 0,04
Jadi, persamaan garis regresi Y = 11,251X + 0,04
Nilai IC50 : Y = 11,251X + 0,04
50 = 11,251X + 0,04
X = 4,44 µg/ml
IC50 Vitamin C pembanding= 4,44 µg/ml
67

Lampiran 9. Data Waktu Pengukuran
Menit Absorbansi Menit Absorbansi Menit ke- Absorbansi

ke- ke-
1 1.0172 25 1.0207 49 1.0268
2 1.0169 26 1.0204 50 1.0267
3 1.0168 27 1.0207 51 1.0270
4 1.0171 28 1.0218 52 1.0273
5 1.0168 29 1.0224 53 1.0276
6 1.0169 30 1.0234 54 1.0274
7 1.0171 31 1.0236 55 1.0276
8 1.0175 32 1.0236 56 1.0281
9 1.0174 33 1.0240 57 1.0284
10 1.0175 34 1.0243 58 1.0287
11 1.0178 35 1.0243 59 1.0287
12 1.0179 36 1.0244 60 1.0294
13 1.0179 37 1.0251
14 1.0179 38 1.0250
15 1.0180 39 1.0246
16 1.0183 40 1.0247
17 1.0184 41 1.0250
18 1.0191 42 1.0259
19 1.0197 43 1.0263
20 1.0199 44 1.0264
21 1.0201 45 1.0262
22 1.0205 46 1.0261
23 1.0208 47 1.0260
24 1.0210 48 1.0266
68

Lampiran 9 (Lanjutan)
Gambar 1. Grafik Waktu Pengukuran
69

Universitas Sumatera Utara

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Universitas Sumatera Utara

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK ETANOL

ASAM CEKALA (Etlingera

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI