Jurnal Usu Ekstrak Etanol DPPH

Universitas Sumatera Utara
Repositori Institusi USU http://repositori.usu.ac.id

Fakultas Farmasi Skripsi Sarjana
2019
Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol

Buah Kemloko (Phyllanthus emblica L.)
dengan Metode DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil)
Siregar, Sahril
http://repositori.usu.ac.id/handle/123456789/15407
Downloaded from Repositori Institusi USU, Univsersitas Sumatera Utara
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL BUAH
KEMLOKO (Phyllanthus emblica L.) DENGAN METODE DPPH
(1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)
SKRIPSI
OLEH:
SAHRIL SIREGAR
NIM 151501211
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2019

KEMLOKO (Phyllanthus emblica L.) DENGAN METODE DPPH
(1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana

Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
OLEH:
SAHRIL SIREGAR
NIM 151501211
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2019

KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah
melimpahankan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menjalani masa
perkuliahan dan penelitian hingga akhirnya menyelesaikan penyusunan skripsi
dengan judul “Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Buah Kemloko
(Phyllanthus emblica L.) dengan Metode DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil)”.
Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi
pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Penulis menyampaikan terima kasih kepada Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara, Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt. dan Wakil Dekan I, Dr.
Poppy Anjelisa Zaitun Hasibuan, M.Si., Apt., yang telah memberikan fasilitas
selama masa pendidikan dan penelitian.
Rasa hormat dan terimakasih yang sebesar-besarnya saya sampaikan
kepada Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku dosen pembimbing yang
membimbing penulis dengan motivasi yang luar biasa selama masa penelitian,
juga kepada bapak Prof. Dr. Ginda Haro, M.Sc., Apt., dan bapak Drs. Fathur
Rahman H., M.Si., Apt., selaku penguji yang telah memberikan kritik, saran, dan
nasihat yang membangun demi kesempurnaan skripsi ini, dan penulis juga ingin
menyampaikan rasa terima kasih kepada Prof. Dr. Jansen Silalahi, M.App.Sc.,
Apt., selaku penasihat akademik yang telah membimbing saya selama masa
perkuliahan.
Penulis menyampaikan rasa terima kasih serta penghargaan sebesar-
besarnya khususnya kepada kedua orang tua Bapak Dahlan Siregar dan Ibu
Homsia Sipahutar, dan saudara Ikhsan Siregar, Ira Ariani Siregar dan Riska Elida
iv
Siregar yang senantiasa memberi semangat dan memberikan dukungan penuh,
doa, serta materil selama perkuliahan hingga penyelesaian skripsi ini.
Pada kesempatan kali ini penulis juga mengucapkan terimakasih kepada
teman-teman terdekat yaitu Franky, Lea Amanda, grup Kedep, Road to 4, ASBO
Mantul, Mak Bebek, Penggeser Dispenser Botani, Siti Khalisyah, Bimbingan
Venyta, Netizen Alamiah, Pengabdi Spektro, Felix, Wanted, STF 15 yang telah
memberikan dukungan selama penelitian dan penyusunan skripsi ini berlangsung.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih memiliki banyak kekurangan.
Oleh sebab itu penulis bersedia menerima kritik dan saran yang membangun
untuk kesempurnaan skripsi ini pada waktu mendatang. Semoga skripsi ini dapat
bermanfaat dan menjadi sumber informasi tambahan bagi kita semua.
Medan, 29 Maret 2019

Penulis,
Sahril Siregar
NIM 151501211
v
vi
KEMLOKO (Phyllanthus emblica L.) DENGAN METODE DPPH (1,1-
difenil-2-pikrilhidrazil)
ABSTRAK
Latarbelakang:buah kemloko (Phyllanthus emblica L.) secara tradisional

digunakan sebagai obat diare dan telah diteliti bahwa buah ini mengandung
alkaloid, saponin, flavonoid, yang merupakan metabolit sekunder bersifat
antioksidan yang dapat menghambat reaksi oksidasi, dengan mengikat radikal
bebas dan molekul yang sangat reaktif.
Tujuan: untuk menguji aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol buah kemloko.
Metode: serbuk simplisia buah kemloko dilakukan pemeriksaan karakteristik dan
skrining fitokimia terhadap serbuk simplisia dan ekstrak meliputi pemeriksaan
golongan senyawa alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin, tanin, dan
steroid/triterpenoid. Ekstrak diperoleh secara perkolasi dengan pelarut etanol
96%. Ekstrak etanol buah kemloko dan vitamin C sebagai pembanding diuji
aktivitas antioksidan dengan metode pemerangkapan radikal bebas DPPH (1,1-
Diphenyl-2-Picrylhydrazyl) dengan mengukur absorbansi DPPH menggunakan
spekrofotometer uv-visibel pada panjang gelombang 515,5 nm.
Hasil: pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia buah kemloko diperoleh kadar
air 8,0%, kadar sari yang larut air 23,33%, kadar sari yang larut dalam etanol
30%, kadar abu total 6,66%, kadar abu yang tidak larut dalam asam 3,33%. Hasil
skrining fitokimia, serbuk simplisia dan ekstrak mengandung senyawa alkaloid,
flavonoid, glikosida, saponin, tanin, dan steroid/triterpenoid. Hasil pengukuran
aktivitas antioksidan yang diperoleh adalah aktivitas antioksidan yang sangat kuat
dari vitamin C dengan nilai IC50 sebesar 4,44 µg/ml dan juga aktivitas
antioksidan yang sangat kuat dari ekstrak etanol buah kemloko dengan nilai IC50
sebesar 1,12 µg/ml.
Kesimpulan:dari hasil pengujian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa
aktivitas antioksidan ekstrak etanol buah kemloko lebih kuat dibandingkan
vitamin C yang telah disesuaikan dengan parameter kekuatan antioksidan.
Kata kunci: Antioksidan, ekstrak etanol, Phyllanthus emblica L., DPPH
vii
ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF ETHANOL EXTRACT OF
KEMLOKO FRUIT (Phyllanthus emblica L.) WITH DPPH (1.1-diphenyl-2-
pikrylhydrazyl) METHOD
ABSTRACT
Background:kemloko fruit (Phyllanthus emblica L.) traditionally isused as

medicine for diarrhea and it has been studied to contain a chemical compound
consisting of alkaloids, saponins, flavonoids, which are secondary metabolites that
are antioxidants that can inhibit the oxidation reaction, to scavenge free radicals
and highly reactive molecules.
Objective: to test the antioxidant activity of ethanol extract of kemloko fruit.
Method: the simplicia powder of kemloko fruit continued for characteristics and
phytochemical screening of simplicia powder and extract. The extract obtained by
percolation with 96% ethanol. Ethanol extract of the kemloko fruit and vitamin C
as a comparison were tested for antioxidant activity by the method of trapping free
radicals DPPH (1.1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl) by measuring the absorbance of
DPPH using UV-visible spectrophotometer at a wavelength of 515.5 nm.
Results: the result of the simplicia characterization obtained level of water
content 8.0%, level of water-soluble extract 23.33%, level of ethanol-soluble
extract 30%, level of total ash 6.66%, and level of ash not soluble in acid 3.33%.
Phytochemical screening results, simplicia powder and extract containing
compounds alkaloids, flavonoids, saponins, tannins, glycosides, and
steroid/triterpenoid. Results of measuring the antioxidant activity is very strong
antioxidant activity vitamin C with IC50 values 4.44 µg/ml and also very strong
antioxidant activity from the ethanol extract of the kemloko fruit with IC50 values
1.12 µg/ml.
Conclusion:from the results of the tests carried out it can be concluded that the
antioxidant activity of ethanol extract of kemloko fruitis stronger than vitamin C
which has been adjusted according to the parameters of antioxidant strength.
Keywords: Antioxidants, extracts of ethanol, Phyllanthus emblica L., DPPH
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL ..................................................................................... i

HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... iii
KATA PENGANTAR ...................................................................................... iv
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS .............................................. vi
ABSTRAK ........................................................................................................ vii
ABSTRACT ........................................................................................................ viii
DAFTAR ISI ..................................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ............................................................................................ xii
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xiii
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN ................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... xv
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................. 1
1.1 Latar Belakang ............................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ........................................................................................ 3
1.3 Hipotesis....................................................................................................... 3
1.4 Tujuan Penelitian ......................................................................................... 4
1.5 Manfaat Penelitian. ...................................................................................... 4
1.6Kerangka Pikir Penelitian ............................................................................. 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA....................................................................... 6
2.1 Uraian Tumbuhan......................................................................................... 6
2.1.1 Sistematika tumbuhan ............................................................................... 6
2.1.2 Nama daerah.............................................................................................. 7
2.1.3 Nama asing ................................................................................................ 7
2.1.4 Habitat ....................................................................................................... 7
2.1.5 Sinonim ..................................................................................................... 8
2.1.6 Morfologi tumbuhan ................................................................................. 8
2.1.7 Kandungan kimia ...................................................................................... 8
2.1.8 Manfaat ..................................................................................................... 8
2.2 Ekstraksi ....................................................................................................... 9
2.2.1 Metode ekstraksi ....................................................................................... 10
2.3 Radikal Bebas............................................................................................... 13
2.4 Antioksidan .................................................................................................. 14
2.5 Metode Pengukuran Antioksidan ................................................................. 16
2.5.1 Pemerangkapan radikal bebas DPPH (1,1-diphenyl-2-picryilhydrazil).... 16
2.5.1.1 Pengukuran absorbansi panjang gelombang .......................................... 18
2.5.1.2 Waktu pengukuran ................................................................................. 18
2.6 Spektrofotometri UV-Visibel ...................................................................... 18
BAB III METODOLOGI PENELITIAN........................................................... 23
3.1 Alat-alat ........................................................................................................ 23
3.2 Bahan-bahan ................................................................................................. 23
3.3 Pembuatan Larutan Pereaksi ........................................................................ 24
3.3.1 Pereaksi natrium hidroksida 2N ................................................................ 24
3.3.2 Pereaksi besi (III) klorida 1% ................................................................... 24
3.3.3 Pereaksi asam klorida 2N .......................................................................... 24
3.3.4 Pereaksi Dragendorff ................................................................................ 24
ix
3.3.5 Pereaksi Bouchardat .................................................................................. 24
3.3.6 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M ............................................................... 24
3.3.7 Pereaksi Liebermann-Burchard ................................................................. 25
3.3.8 Pereaksi Meyer .......................................................................................... 25
3.3.9 Pereaksi Molisch ....................................................................................... 25
3.3.10 Pereaksi kloralhidrat................................................................................ 25
3.3.11 Pembuatan pereaksi DPPH ..................................................................... 25
3.4 Pengumpulan dan Pengolahan Bahan Tanaman .......................................... 25
3.4.1 Pengumpulan bahan tanaman .................................................................... 25
3.4.1 Identifikasi tanaman .................................................................................. 26
3.4.1 Pembuatan simplisia.................................................................................. 26
3.5 Karakterisasi Simplisia................................................................................. 26
3.5.1 Pemeriksaan makroskopik ........................................................................ 26
3.5.2 Pemeriksaan mikroskopik ......................................................................... 26
3.5.3 Penetapan kadar air ................................................................................... 26
3.5.4 Penetapan kadar sari larut dalam air ......................................................... 27
3.5.5 Penetapan kadar sari larut dalam etanol .................................................... 27
3.5.6 Penetapan kadar abu total.......................................................................... 28
3.5.7 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam.................................... 28
3.6 Skrining Fitokimia ...................................................................................... 28
3.6.1 Pemeriksaan flavonoida ............................................................................ 28
3.6.2 Pemeriksaan alkaloida ............................................................................... 29
3.6.3 Pemeriksaan saponin ................................................................................. 29
3.6.4 Pemeriksaan tanin ..................................................................................... 29
3.6.5 Pemeriksaan glikosida ............................................................................... 30
3.6.6 Pemeriksaan steroida/triterpenoida ........................................................... 30
3.7 Pembuatan Ekstrak ...................................................................................... 31
3.8 Pengujian Aktivitas Antioksidan dengan Spektrofotometer UV-Visibel ... 32
3.8.1 Prinsip metode pemerangkapan radikal bebas DPPH ............................... 32
3.8.2 Pembuatan larutan blanko ......................................................................... 32
3.8.3 Penentuan panjang gelombang serapan maksimum .................................. 32
3.8.4 Pembuatan larutan induk ........................................................................... 32
3.8.4 Pembuatan larutan induk ekstrak etanol buah kemloko (EEBK).............. 32
3.8.4 Pembuatan larutan induk vitamin c ........................................................... 32
3.8.5 Pembuatan larutan uji................................................................................ 33
3.8.5.1 Pembuatan larutan uji ekstrak etanol buah kemloko (EEBK) ............... 33
3.8.5.2 Pembuatan larutan uji vitamin c............................................................. 33
3.8.5.3 Analisis persen pemerangkapan radikal bebas DPPH ........................... 34
3.8.5.4 Analisis nilai IC50 ................................................................................. 34
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 35
4.1 Hasil Karakterisasi Simplisia ....................................................................... 35
4.1.1.Hasil pemeriksaan makroskopik ............................................................... 35
4.1.2 Hasil pemeriksaan mikroskopik ................................................................ 35
4.1.3 Hasil karakterisasi simplisia buah kemloko .............................................. 35
4.1.4 Hasil skrining fitokimia ............................................................................ 36
4.2 Hasil Identifikasi Tumbuhan ........................................................................ 38
4.3 Hasil Ekstraksi Buah Kemloko .................................................................... 38
4.4 Hasil Analisis Antioksidan........................................................................... 38
x
4.4.1.Hasil penentuan panjang gelombang serapan maksimum ........................ 38
4.4.2 Hasil penentuan operating time ................................................................ 39
4.4.3 Hasil analisis aktivitas antioksidan sampel uji .......................................... 39
4.4.4 Hasil analisis nilai IC50 (inhibitory concentration).................................. 41
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 43
5.1 Kesimpulan .................................................................................................. 43
5.2 Saran ............................................................................................................. 43
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 44
LAMPIRAN ....................................................................................................... 46
xi
DAFTAR TABEL
4.1 Hasil karakterisasi simplisia buah kemloko

(Phylanthus emblicaL.)............................................................................ 35
4.2 Hasil skrining fitokimia simplisia dan ekstrak buah kemloko
(Phylanthus emblicaL.) .......................................................................... 37
4.3Hasil persamaan regresi linier dan hasil analisis IC50 yang diperoleh
dari ekstrak etanol buah kemloko (EEBK) dan vitamin c ..................... 41
4.4 Kategori nilai IC50 sebagai antioksidan ................................................. 41
xii
DAFTAR GAMBAR
1.1 Kerangka Pikir Penelitian ...............................................................................5

2.1 Buah Kemloko (Phyllanthus emblica L.) ................................................. 6
2.2 Reaksi DPPH dengan Antioksidan............................................................ 17
4.1 Kurva Serapan Maksimum Larutan DPPH 40 µg/ml dalam Metanol
Menggunakan Spektrofotometer UV-Visibel ........................................... 38
4.2 Grafik Hasil Uji Aktivitas Antioksidan EEBK ......................................... 40
4.3 Grafik Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Vitamin C ................................... 41
xiii
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN
1. Buah kemloko ..................................................................................... 48

2. Simplisia buah kemloko ...................................................................... 48
3. Ekstrak etanol buah kemloko .............................................................. 48
4. Spektrofotometer UV-Visibel ............................................................. 49
5. Mikroskopik simplisia buah kemloko ................................................. 50
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
1. Hasil identifikasi tumbuhan ............................................................... 46

2. Bagan kerja penelitian ............................................................................47
3. Buah kemloko, simplisia buah kemloko, ekstrak etanol
buah kemloko ..................................................................................................... 48
4. Alat-alat penelitian ............................................................................. 49
5. Hasil uji mikroskopik simplisia buah kemloko.................................. 50
6. Hasil perhitungan karakterisasi simplisia buah kemloko .......................51
7. Hasil operating time ........................................................................... 54
8. Hasil uji aktivitas antioksidan ............................................................ 55
9. Perhitungan persen peredaman dan nilai IC50 EEBK ........................ 56
10. Perhitungan persen peredaman dan nilai IC50 vitamin c.................... 61
xv
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menetralkan radikal bebas di
dalam tubuh manusia. Enzim-enzim seperti superoksida dismutase (SOD),
gluthatione dan katalase merupakan antioksidan alami yang terdapat pada tubuh
manusia. Pertumbuhan radikal bebas yang melebihi kapasitas antioksidan di
dalam tubuh akan meningkatkan resiko timbulnya berbagai penyakit regeneratif
seperti kanker, jantung, katarak, penuaan dini dan lain-lain. Oleh karena itu, selain
mengandalkan antioksidan dari dalam tubuh, manusia juga membutuhkan
antioksidan dari luar tubuh untuk mencapai keseimbangan (Suzery dkk., 2017).
Sistem tubuh manusia setiap saat terpapar radikal bebas baik yang
dihasilkandari proses metabolisme normal maupun dari lingkungan, seperti asap
rokok dan polusi. Paparan radikal bebas yang berlebih terhadap tubuh dapat
berakibat terhadap kerusakan sel dan memicu patogenesis berbagai penyakit
seperti penyakit kardiovaskular, hipertensi, hiperlipidemia, diabetes, alzheimer,
dan Parkinson. Dalam hal ini antioksidan berperan mencegah terjadinya
kerusakan jaringan yang disebabkan radikal bebas dengan cara mengeliminir
terbentuknya radikal, meredam, atau meningkatkan penguraiannya (Saefudin
dkk., 2013).
Salah satu tanaman yang memiliki aktivitas antioksidan cukup tinggi
adalah buah kemloko (Phyllanthus emblica L.). Tanaman ini di India telah
digunakan untuk mengobati penyakit kanker, diabetes, hati (liver), gangguan
jantung dan anemia. Aktivitas biologis tersebut diduga disebabkan oleh adanya
1
senyawa-senyawa bioaktif dari metabolit sekunder yang terkandung didalamnya,
khususnya senyawa dari golongan fenolat dan flavonoid (Suzery dkk., 2017).
Ada sejumlah besar metode untuk menentukan kapasitas antioksidan
berdasarkan prinsip yang berbeda: pengumpulan radikal peroksil (Oxygen Radical
Absorbance capacity, ORAC); Total Radical-trapping Antioxidant Power
(TRAP); daya pereduksi logam (Ferric Reducing Antioksidant Power, FRAP);
Cupric Reducing Antioksidant Power (CUPRAC); pengumpulan radikal hidroksil
(uji deoxiribose); pengumpulan radikal organik (2,2-Azino-bis(3-ethylbenz-
thiazoline-6-sulfonic acid, ABTS); 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH);
kuantifikasi produk yang terbentuk selama peroksidasi lipid (Thiobarbituric Acid
Reactive Substances, TRAPS); Low-density Lipoproteins (LDL), dan lain-lain
(Marinova dan Batchvarov, 2011).
Penentuan aktivitas antioksidan pada penelitian ini menggunakan metode
DPPH. Metode uji aktivitas antioksidan dengan DPPH (1,1-difenil-2-
pikrilhidrazil) dipilih karena metode ini adalah metode sederhana, mudah, cepat
dan peka serta hanya memerlukan sedikit sampel untuk evaluasi aktivitas
antioksidan dari senyawa bahan alam sehingga digunakan secara luas untuk
menguji kemampuan senyawa yang berperan sebagai pendonor elektron (Al
Ridho dkk., 2013).
Prinsip dari metode uji aktivitas antioksidan ini adalah pengukuran
aktivitas antioksidan secara kuantitatif yaitu dengan melakukan pengukuran
penangkapan radikal DPPH oleh suatu senyawa yang mempunyai aktivitas
antioksidan dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis sehingga dengan
demikian akan diketahui nilai aktivitas peredaman radikal bebas yang dinyatakan
dengan nilai IC50 (Inhibitory Concentration). Nilai IC50 didefinisikan sebagai
2
besarnya konsentrasi senyawa uji yang dapat meredam radikal bebas sebanyak
50%. Semakin kecil nilai IC50 maka aktivitas peredaman radikal bebas semakin
tinggi. Prinsip kerja dari pengukuran ini adalah adanya radikal bebas stabil yaitu
DPPH yang dicampurkan dengan senyawa antioksidan yang memiliki
kemampuan mendonorkan hidrogen, sehingga radikal bebas dapat diredam (Al
Ridho dkk., 2013).
Berdasarkan uraian di atas, maka dilakukan penelitian karakteristik
simplisa, skrining fitokimia dan uji antioksidan ekstrak etanol buah kemloko
dengan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) mengukur serapannya dengan
spektrofotometer sinar tampak.
1.2 Rumusan Masalah
Rumusan masalah pada penelitian ini adalah:
a. Apakah karakteristik simplisia buah kemloko (Phyllanthus emblica L.)
memenuhi persyaratan secara umum.
b. Golongan senyawa kimia apa saja yang terkandung di dalam simplisia dan
ekstrak buah kemloko (Phyllanthus emblica L.).
c. Apakah ekstrak etanol buah kemloko (Phyllanthus emblica L.) memiliki
aktivitas antioksidan dengan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)?
1.3 Hipotesis
Dari hasil perumusan masalah diatas maka dapat dibuat hipotesis sebagai
berikut:
a. Karakteristik simplisia buah kemloko (Phyllanthus emblica L.) memenuhi
persyaratan secara umum.
3
b. Serbuk simplisia dan ekstrak buah kemloko (Phyllanthus emblica L.)
mengandung golongan senyawa kimia alkaloida, flavonoida, saponin,
tanin, glikosida, dan steroid/triterpenoid.
c. Ekstrak etanol buah kemloko (Phyllanthus emblica L.) memiliki aktivitas
antioksidan dengan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil).
1.4 Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian diatas adalah:
a. Untuk mengetahui karateristik serbuk simplisia buah kemloko
(Phyllanthus emblica L.).
b. Untuk mengetahui golongan senyawa kimia yang terkandung pada
simplisia dan ekstrak etanol buah kemloko (Phyllanthus emblica L.).
c. Untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak etanol buah kemloko
(Phyllanthus emblica L.) dengan metode DPPH (1,1-difenil-2-
pikrilhidrazil).
1.5 Manfaat Penelitian
Manfaat penelitian diatas adalah:
a. Dapat memberikan informasi karakteristik dan golongan senyawa kimia
yang terkandung pada buah kemloko (Phyllanthus emblica L.).
b. Dapat memberikan informasi terkait khasiat antioksidan ekstrak etanol
buah kemloko (Phyllanthus emblica L.).
4
1.6 Kerangka Pikir Penelitian
Penelitian ini melakukan pengujian aktivitas antioksidan ekstrak etanol
buah kemloko. Terdapat variabel bebas yaitu ekstrak etanol buah kemloko.
Sementara pada variabel terikat ditentukan aktivitas antioksidan (nilai
absorbansi). Kerangka pikir penelitian ini dapat dilihat pada Gambar 1.1.
Makroskopik dan
Buah
mikroskopik
Kemloko
Penetapan :
•Kadar Air
Dirajang •Kadar Sari yang
Dikeringkan Karakterisasi Larut Air
•Kadar Sari yang
Dihaluskan Larut Etanol
•Kadar Abu Total
Serbuk •Kadar Abu yang
Simplisia Tidak Larut Asam
Buah
kemloko •Flavonoid
•Alkaloid
Perkolasi
dengan Golongan •Saponin
Etanol 96% senyawa kimia •Tanin
•Glikosida
Ekstrak •Steroid/Triterpenoid
Etanol Buah
Kemloko
Variabel bebas Variabel terikat Parameter
Ekstrak Aktivitas
Etanol Buah antioksidan Nilai IC50
Kemloko (nilai absorbansi)
Gambar 1.1 Kerangka Pikir Penelitian
5
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tumbuhan
Uraian Tumbuhan meliputi sistematika tumbuhan, nama daerah, nama
asing, habitat, sinonim, morfologi tumbuhan, kandungan kimia dan manfaat.
2.1.1 Sistematika tumbuhan
Menurut Herbarium Medanesse (MEDA) kemloko memiliki taksonomi
sebagai berikut :
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Dicotyledoneae
Ordo : Malpighiales
Famili : Phyllanthaceae
Genus : Phyllanthus
Spesies : Phyllanthus emblica L.
Gambar 2.1 Buah Kemloko (Phyllanthus emblica L.)
6
2.1.2 Nama daerah
Phyllanthus emblica di Indonesia dikenal dengan nama kimalaka.
Masyarakat Sumatera Utara menyebut tumbuhan ini “balakka”, di Ternate dikenal
dengan metengo, Sunda (malaka) dan di pulau Jawa dikenal dengan kemloko
(Khoiriyah dkk., 2015).
2.1.3 Nama asing
Dalam bahasa Inggris tumbuhan ini disebut sebagai Indian gooseberry,
sedangkan di Malaysia disebut dengan popok melaka dan Thailand dikenal
dengan ma-kham-pom. Negara India menyebut tumbuhan ini dengan berbagai
nama misalnya aonla, nelli, amla, amlika, dhotri, emblica dan usuri (Khoiriyah
dkk., 2015).
2.1.4 Habitat
Balakka di Sumatera Utara umumnya dijumpai pada daerah tandus, panas
dan gersang, namun belum diketahui secara pasti daerah penyebarannya
berdasarkan curah hujan, tutupan lahan, dan jenis tanah di daerah Sumatera bagian
Selatan. Balakka (Phylanthus emblica) digolongkan dalam suku Phyllanthaceae
yang termasuk salah satu jenis buah-buahan asli Indonesia yang tumbuh liar di
kebun dan di hutan. Pohon ini banyak tumbuh di Indonesia yang tersebar di pulau
Jawa, Sumatera, Kalimantan, Maluku dan Nusa Tenggara. Phyllanthus emblica
umumnya tumbuh di daerah tropis dan subtropis termasuk India, China,
Indonesia, Semenanjung Malaysia, Thailand, Pakistan, Uzbekistan, dan Srilanka
(Khoiriyah dkk., 2015).
7
2.1.5 Sinonim
Phyllanthus emblica L. (Khoiriyah dkk., 2015).
2.1.6 Morfologi tumbuhan
Pohon kemloko berukuran kecil hingga sedang. Tingginya sekitar 8-18
m dengan kulit abu-abu tipis, dedaunan kecil, hijau muda, rapat di sepanjang
tangkai, terlihat seperti daun menyirip; bunga berwarna kuning kehijauan; buah
berbentuk bundar, berdaging, kuning pucat dengan enam alur vertikal yang
menunjukkan enam biji (Dasaroju dan Gottumukkala, 2014).
2.1.7 Kandungan kimia
Buah kemloko mengandung senyawa-senyawa fenolat, seperti geraniin,
quercetin 3-β-D-glukopiranosida, kaempferol 3-β-D-glukosapiranosida,
isokorilagin, quercetin, dan kaempferol. Selain itu, tanaman ini juga mengandung
senyawa asam galat, asam ellagat, 1-O-galloyl-beta-D-glukosa, asam-3-etilgalat
dan corilagin. Senyawa apeganin dan asam askorbat juga pernah ditemukan dalam
tanaman kemloko. Gugus hidroksil yang bersifat asam pada senyawa-senyawa
fenolat tersebut diduga sangat berperan dalam reaksi oksidasi-reduksi yang terjadi
di dalam tubuh (Suzery dkk., 2017).
2.1.8 Manfaat
Salah satu contoh tanaman yang diduga memiliki aktivitas antioksidan
cukup tinggi adalah kemloko (Phyllanthus emblica L.). Tumbuhan ini merupakan
bahan yang sering digunakan oleh masyarakat sebagai obat tradisional. Tanaman
ini di India telah digunakan untuk mengobati penyakit kanker, diabetes, hati
(liver), gangguan jantung dan anemia. Aktivitas biologis tersebut diduga
disebabkan oleh adanya senyawa-senyawa bioaktif dari metabolit sekunder yang
8
terkandung didalamnya, khususnya senyawa dari golongan fenolat dan flavonoid
(Suzery dkk., 2017).
2.2 Ekstraksi
Ekstrak adalah suatu produk hasil pengambilan zat aktif melalui proses
ekstraksi menggunakan pelarut, dimana pelarut yang digunakan diuapkan kembali
sehingga zat aktif ekstrak menjadi pekat. Bentuk dari ekstrak yang dihasilkan
dapat berupa ekstrak kental atau ekstrak kering tergantung jumlah pelarut yang
diuapkan (Marjoni, 2016).
Menurut Marjoni (2016), pembagian ekstrak :
1) Ekstrak cair adalah ekstrak hasil penyarian bahan alam dan masih mengandung
pelarut.
2) Ekstrak kental adalah ekstrak yang telah mengalami proses penguapan dan
sudah tidak mengandung cairan pelarut lagi, tetapi konsistensinya tetap cair
pada suhu kamar.
3) Ekstrak kering adalah ekstrak yang telah mengalami proses penguapan dan
tidak lagi mengandung pelarut dan berbentuk padat (kering).
Proses ekstraksi pada dasarnya adalah proses perpindahan massa dari
komponen zat padat yang terdapat pada simplisia ke dalam pelarut organik yang
digunakan. Pelarut organik akan menembus dinding sel dan selanjutnya akan
masuk ke dalam rongga sel tumbuhan yang mengandung zat aktif. Zat aktif akan
terlarut dalam pelarut organik pada bagian luar sel untuk selanjutnya berdifusi
masuk ke dalam pelarut. Proses ini terus berulang terus berulang sampai terjadi
keseimbangan konsentrasi zat aktif antara di dalam sel dengan konsentrasi zat
aktif di luar sel (Marjoni, 2016).
9
Ekstraksi dapat dilakukan dengan berbagai metode dan cara yang sesuai
dengan sifat dan tujuan ekstraksi itu sendiri. Sampel yang akan diekstraksi dapat
berbentuk sampel segar ataupun sampel yang telah dikeringkan. Sampel yang
umum digunakan adalah sampel segar karena penetrasi pelarut akan berlangsung
lebih cepat. Selain itu penggunaan sampel segar dapat mengurangi kemungkinan
terbentuknya polimer resin atau artefak lain yang dapat terbentuk selama proses
pengeringan. Penggunaan sampel kering juga memiliki kelebihan yaitu dapat
mengurangi kadar air yang terdapat di dalam sampel, sehingga dapat mencegah
kemungkinan rusaknya senyawa akibat aktivitas anti mikroba (Marjoni, 2016).
2.2.1 Metode ekstraksi
Menurut Marjoni (2016),metode ekstraksi dapat dibagi sebagai berikut :

a. Ekstraksi secara dingin
Metode ekstraksi secara dingin bertujuan untuk mengekstrak senyawa-
senyawa yang terdapat dalam simplisia yang tidak tahan terhadap panas atau
bersifat thermolabil. Ekstraksi secara dingin dapat dilakukan dengan beberapa
cara berikut ini :
1) Maserasi
Maserasi adalah proses ekstraksi sederhana yang dilakukan hanya dengan
cara merendam simplisia dalam satu atau campuran pelarut selama waktu tertentu
pada temperatur kamar dan terlindung dari cahaya.
2) Perkolasi
Perkolasi adalah proses penyarian zat aktif secara dingin dengan cara
mengalirkan pelarut secara kontinu pada simplisia selama waktu tertentu.
Prinsip dari perkolasi adalah penyarian zat aktif yang dilakukan dengan
cara mengalirkan suatu pelarut melalui serbuk simplisia yang telah terlebih dahulu
10
dibasahi selama waktu tertentu, kemudian ditempatkan dalam suatu wadah
berbentuk silinder yang diberi sekat berpori pada bagian bawahnya. Pelarut
dialirkan secara vertikal dari atas ke bawah melalui serbuk simplisia dan pelarut
akan melarutkan zat aktif dalam sel-sel simplisia yang dilaluinya sampai
mencapai keadaan jenuh.
Gerakan ke bawah disebabkan oleh gaya beratnya sendiri dan berat cairan
diatasnya dikurangi gaya kapiler yang cenderung untuk menahan gerakan ke
bawah. Faktor-faktor yang berperan penting pada proses perkolasi diantaranya
adalah : gaya berat, kekentalan cairan, daya larut zat aktif, tegangan permukaan,
difusi, tekanan osmosa, daya adesi, daya kapiler dan daya geseran (friksi).
Keuntungan metode perkolasi :
• Tidak memerlukan langkah tambahan.
• Tidak membutuhkan panas sehingga teknik perkolasi ini sangat cocok
untuk substansi yang bersifat termolabil.
• Sampel selalu dialiri oleh pelarut baru.
• Pelarut dialirkan melalui sampel sehingga proses penyarian lebih
sempurna.
Kerugian metoda perkolasi :
• Kontak antara sampel padat dengan pelarut tidak merata dan terbatas.
• Pelarut menjadi dingin selama proses perkolasi sehingga tidak melarutkan
komponen secara efisien.
• Apabila sampel dalam perkolator tidak homogen maka pelarut akan sulit
menjangkau seluruh area.
• Metode ini membutuhkan banyak pelarut dan memakan banyak waktu.
• Membutuhkan pelarut yang relatif banyak.
11
b. Ekstraksi secara Panas
Metode panas digunakan apabila senyawa-senyawa yang terkandung
dalam simplisia sudah dipastikan tahan panas. Metode ekstraksi yang
membutuhkan panas diantaranya :
1) Seduhan
Merupakan metoda ekstraksi paling sederhana hanya dengan merendam
simplisia dengan air panas selama waktu tertentu (5-10 menit).
2) Coque (penggodokan)
Merupakan proses penyarian dengan cara menggodok simplisia
menggunakan api langsung dan hasilnya dapat langsung digunakan sebagai obat
baik secara keseluruhan termasuk ampasnya atau hanya hasil godokannya saja
tanpa ampas.
3) lnfusa
lnfusa merupakan sediaan cair yang dibuat dengan cara menyari simplisia
nabati dengan air pada suhu 90°C selama 15 menit. Kecuali dinyatakan lain,
infusa dilakukan dengan cara sebagai berikut : “Simplisia dengan derajat
kehalusan tertentu dimasukkan ke dalam panci infusa, kemudian ditambahkan air
secukupnya. Panaskan campuran di atas penangas air selama 15 menit, dihitung
mulai suhu 90°C sambil sekali-sekali diaduk. Serkai selagi panas menggunakan
kain flanel, tambahkan air panas secukupnya melalui ampas sehingga diperoleh
volume infus yang dikehendaki”.
4) Digestasi
Digestasi adalah proses ekstraksi yang cara kerjanya hampir sama dengan
maserasi, hanya saja digesti menggunakan pemanasan rendah pada suhu 30-40°C.
Metoda ini biasanya digunakan untuk simplisia yang tersari baik pada suhu biasa.
12
5) Dekokta
Proses penyarian secara dekokta hampir sama dengan infusa, perbedaannya
hanya terletak pada lamanya waktu pemanasan. Waktu pemanasan pada dekokta
lebih lama dibanding metoda infusa, yaitu 30 menit dihitung setelah suhu
mencapai 90°C. Metoda ini sudah sangat jarang digunakan karena selain proses
penyariannya yang kurang sempurna dan juga tidak dapat digunakan untuk
mengekstraksi senyawa yang bersifat yang termolabil.
6) Refluks
Refluks merupakan proses ekstraksi dengan pelarut pada titik didih pelarut
selama waktu dan jumlah pelarut tertentu dengan adanya pendingin balik
(kondensor). Proses ini umumnya dilakukan 3-5 kali pengulangan pada residu
pertama, sehingga termasuk proses ekstraksi yang cukup sempurna.
7) Soxhletasi
Proses soxhletasi merupakan proses ekstraksi panas menggunakan alat
khusus berupa esktraktor soxhlet. Suhu yang digunakan lebih rendah
dibandingkan dengan suhu pada metoda refluks.
2.3 Radikal Bebas
Radikal bebas adalah molekul yang kehilangan elektron, sehingga molekul
tersebut menjadi tidak stabil dan selalu berusaha mengambil elektron dari molekul
atau sel lain. Radikal bebas dapat dihasilkan dari hasil metabolisme tubuh seperti
pada waktu kita bernapas (hasil samping proses oksidasi atau pembakaran), pada
saat terjadi infeksi. Pada saat terjadi infeksi, radikal bebas diperlukan untuk,
membunuh mikroorganisme penyebab infeksi. Tetapi paparan radikal bebas yang
berlebihan dapat menyebabkan kerusakan sel, dan pada akhirnya dapat
menyebabkan kematian sel. Radikal bebas bersifat reaktif, dapat menyebabkan
13
kerusakan sel, mengurangi kemampuan adaptasi sel, bahkan kematian sel
sehingga menyebabkan timbulnya penyakit (Ramadhan, 2015).
Sumber-sumber radikal bebas semakin sering dijumpai di masyarakat
sekarang ini seiring kemajuan ilmu pengetahuan dan teknologi, misalnya semakin
banyaknya kendaraan baru yang beredar di pasaran dan digunakan oleh
masyarakat yang nantinya semakin memperbanyak polusi udara akibat
penggunaannya, dimana polusi udara merupakan salah satu sumber radikal bebas.
Selain itu, gaya hidup yang semakin berkembang juga dapat berpengaruh
terutama di daerah perkotaan. Banyak masyarakat yang lebih suka mengkonsumsi
makanan cepat saji, banyak mengandung lemak serta zat-zat kimia berbahaya dan
penggunaan rokok, dimana bahan-bahan tersebut merupakan sumber radikal
bebas juga. Dengan demikian, semakin meningkatnya sumber radikal bebas yang
terpapar pada masyarakat, maka resiko untuk menderita penyakit-penyakit
(Ramadhan, 2015).
2.4 Antioksidan
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menetralkan radikal bebas di
dalam tubuh manusia. Enzim-enzim seperti superoksida dismutase (SOD),
gluthatione dan katalase merupakan antioksidan alami yang terdapat pada tubuh
manusia. Pertumbuhan radikal bebas atau spesi reaktif yang melebihi kapasitas
antioksidan di dalam tubuh akan meningkatkan resiko timbulnya berbagai
penyakit regeneratif seperti kanker, jantung, katarak, penuaan dini dan lain-lain.
Oleh karena itu, selain mengandalkan antioksidan dari dalam tubuh, manusia juga
membutuhkan antioksidan dari luar tubuh untuk mencapai keseimbangan.
Sumber-sumber antioksidan dapat berasal dari bahan yang diperoleh dari laut dan
tanaman yang tumbuh di darat (Suzery dkk., 2017).
14
Antioksidan adalah senyawa yang mampu menangkal atau meredam efek
negatif oksidan dalam tubuh, bekerja dengan cara mendonorkan satu elektronnya
kepada senyawa yang bersifat oksidan sehingga aktifitas senyawa oksidan
tersebut dapat dihambat (Ramadhan, 2015).
Antioksidan adalah senyawa yang mempunyai struktur molekul yang
dapat memberikan elektronnya cuma-cuma kepada molekul radikal bebas tanpa
terganggu sama sekali fungsinya dan dapat memutus reaksi berantai dari radikal
bebas (Ramadhan, 2015).
Antioksidan bermanfaat dalam mencegah kerusakan oksidatif yang
disebabkan radikal bebas dan ROS sehingga mencegah terjadinya berbagai
macam penyakit seperti penyakit kardiovaskuler, jantung koroner, kanker, serta
penuaan dini. Penambahan antioksidan ke dalam formulasi makanan, juga efektif
mengurangi oksidasi lemak yang menyebabkan ketengikan, toksisitas, dan
destruksi biomolekul yang ada dalam makanan (Ramadhan, 2015).
Asam askorbat adalah vitamin yang larut dalam air. Antioksidan yang
terdapat dalam buah jeruk, kentang, tomat dan sayuran yang berwarna hijau.
Manusia tidak mampu mensintesa l-askorbic acid dari d-glukosa karena tidak
mempunyai enzim l-gulakolakton oksidase. Oleh sebab itu manusia memperoleh
asam askorbat dari diet (Ramadhan, 2015).
Fungsi antioksidan vitamin c adalah kemampuannya sebagai agen
pereduksi (donor elektron) radikal bebas. Pemberian satu elektron yang berasal
dari asam askorbat membentuk radikal semi-dehidroaskorbat (DHA). Askorbat
bereaksi dengan O2- dan OH untuk membentuk DHA. Menurut penelitian Jialal
(l990), askorbat mempunyai kemampuan yang lebih kuat daripada tokoferol
15
dalam menghambat oksidasi LDL. Konsentrasi askorbat yang digunakan untuk
menghambat oksidasi LDL adalah sebesar 40-60 ppm (Ramadhan, 2015).
2.5 Metode Pengukuran Antioksidan
Ada sejumlah besar metode untuk menentukan kapasitas antioksidan
berdasarkan prinsip yang berbeda: pengumpulan radikal peroksil (Oxygen Radical
Absorbance capacity, ORAC); Total Radical-trapping Antioxidant Power
(TRAP); daya pereduksi logam (Ferric Reducing Antioksidant Power, FRAP);
Cupric Reducing Antioksidant Power (CUPRAC); pengumpulan radikal hidroksil
(uji deoxiribose); pengumpulan radikal organik (2,2-Azino-bis(3-ethylbenz-
thiazoline-6-sulfonic acid, ABTS); 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH);
kuantifikasi produk yang terbentuk selama peroksidasi lipid (Thiobarbituric Acid
Reactive Substances, TRAPS); Low-density Lipoproteins (LDL), dan lain-lain
(Marinova dan Batchvarov, 2011).
2.5.1 Pemerangkapan radikal bebas DPPH (1,1-diphenyl-2-picryilhydrazil)
Pengujian aktivtitas antioksidan dalam penelitian ini menggunakan metode
DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl). Prinsip metode penangkapan radikal
adalah pengukuran penangkapan radikal bebas dalam pelarut organik polar seperti
etanol atau metanol pada suhu kamar oleh suatu senyawa yang mempunyai
aktivitas antioksidan. Senyawa DPPH adalah suatu radikal bebas stabil yang dapat
bereaksi dengan radikal lain membentuk senyawa yang lebih stabil dan dapat
bereaksi dengan atom hidrogen membentuk DPPH tereduksi yang stabil. Suatu
senyawa dapat dikatakan memiliki aktivitas antioksidan apabila senyawa tersebut
mampu mendonorkan atom hidrogennya ditandai dengan perubahan warna ungu
menjadi kuning pucat (Sapri dkk., 2013).
16
Mekanisme penangkapan radikal DPPH oleh antioksidan yaitu berupa
donasi proton kepada radikal. DPPH dalam bentuk non-radikalakan kehilangan
warna ungunya yang mana pemudaran warna ini dapat ditunjukkan dengan
penurunan serapandari DPPH pada panjang gelombang maksimum yang diukur
menggunakan spektrofotometer Uv-Vis. Pengukuran penurunan serapan DPPH
pada larutan uji dihitung terhadap serapan kontrol yakni larutan DPPH dan pelarut
tanpa sampel (Sapri dkk., 2013).
Gambar 2.2 Reaksi DPPH dengan Antioksidan(Sapri dkk., 2013)
Proses penangkapan radikal ini melalui mekanisme pengambilan atom
hidrogen dari senyawa antioksidan oleh radikal bebas, sehingga radikal bebas
menangkap suatu elektron dari antioksidan. Radikal bebas sintetik yang
digunakan adalah DPPH. Senyawa DPPH bereaksi dengan senyawa antioksidan
melalui pengambilan atom hidogen dari senyawa antioksidan untuk mendapatkan
pasangan elektron. Senyawa yang bereaksi sebagai penangkap radikal akan
mereduksi DPPH yang dapat diamati dengan adanya perubahan ketika elektron
ganjil dari radikal DPPH telah berpasangan dengan hidrogen dari senyawa
penangkap radikal bebasyang akan membentuk DPPH-H tereduksi selanjutnya
17
radikal bebas DPPH akan membentuk senyawa bukan radikal yaitu DPPH yang
stabil (Sapri dkk., 2013).
2.5.1.1 Pengukuran absorbansi panjang gelombang
Panjang gelombang maksimum yang digunakan dalam pengukuran sampel
uji sangat bervariasi. Menurut beberapa literatur panjang maksimum untuk DPPH
antara lain 515-517 nm. Apabila pengukuran menghasilkan tinggi puncak
maksimum, maka itu merupakan panjang gelombangnya yaitu sekitar panjang
gelombang yang disebutkan diatas. Nilai absorbansi yang mutlak tidaklah penting,
karena panjang gelombang dapat diatur untuk memberikan absorbansi maksimum
sesuai dengan alat yang digunakan (Molyneux, 2004).
2.5.1.2 Waktu pengukuran
Lama pengukuran metode DPPH menurut beberapa literatur yang
direkomendasikan adalah selama 60 menit, tetapi dalam beberapa penelitian
waktu yang digunakan sangat bervariasi yaitu 5 menit, 10 menit, 20 menit, 30
menit dan 60 menit (Molyneux, 2004). Waktu reaksi yang tepat adalah ketika
reaksi sudah mencapai kesetimbangan. Kecepatan reaksi dipengaruhi oleh sifat
dari aktivitas antioksidan yang terdapat di dalam sampel (Rosidah dkk., 2008).
2.6 Spektrofotometri UV-Visibel
Spektrofotometer UV-Vis adalah pengukuran panjang gelombang dan
intensitas sinar ultraviolet dan cahaya tampak yang diabsorbsi oleh sampel. Sinar
ultraviolet dan cahaya tampak memiliki energi yang cukup untuk mempromosikan
elektron pada kulit terluar ke tingkat energi yang lebih tinggi. Spektroskopi UV-
Vis biasanya digunakan untuk molekul dan ion anorganik atau kompleks di dalam
larutan. Spektrum UV-Vis mempunyai bentuk yang lebar dan hanya sedikit
informasi tentang struktur yang bisa didapatkan dari spektrum ini. Tetapi
18
spektrum ini sangat berguna untuk pengukuran secara kuantitatif. Konsentrasi dari
analit di dalam larutan bisa ditentukan dengan mengukur absorban pada panjang
gelombang tertentu dengan menggunakan hukum Lambert-Beer. Sinar ultraviolet
berada pada panjang gelombang 200-400 nm sedangkan sinar tampak berada pada
panjang gelombang 400-800 nm (Dachriyanus, 2004).
Sebagai sumber cahaya biasanya digunakan lampu hidrogen atau
deuterium untuk pengukuran uv dan lampu tungsten untuk pengukuran pada
cahaya tampak. Panjang gelombang dari sumber cahaya akan dibagi oleh pemisah
panjang gelombang (wavelength separator) seperti prisma atau monokromator.
Spektrum didapatkan dengan cara scanning oleh wavelength separator sedangkan
pengukuran kuantitatif bisa dibuat dari spektrum atau pada panjang gelombang
tertentu (Dachriyanus, 2004).
Cahaya tampak hanyalah merupakan bagian kecil dari seluruh radiasi
elektromagnetik. Spektrum cahaya tampak terdiri dari komponen-komponen
merah, jingga, kuning, hijau, biru dan ungu, dimana masing-masing warna
mempunyai panjang gelombang yang berbeda. Satuan yang banyak dipergunakan
untuk menyatakan panjang gelombang adalah Angstrom, 1 A = 10-10 meter
(Triyati, 1985).
Susunan peralatan Spektrofotometer ultraviolet dan sinar tampak yang
meliputi bagian-bagian sebagai berikut: sumber cahaya dipergunakan untuk
pengukuran absorpsi. Sumber cahaya ini harus memancarkan sinar dengan
kekuatan yang cukup untuk penentuan dan pengukuran, juga harus memancarkan
cahaya berkesinambungan yang berarti harus mengandung semua panjang
gelombang dari daerah yang dipakai. Kekuatan sinar radiasi harus konstan selama
waktu yang diperlukan. Sumber cahaya tampak yang paling umum dipakai adalah
19
lampu Wolfram. Sedangkan sumber radiasi ultra-violet biasa dipergunakan lampu
Hidrogen atau Deuterium yang terdiri dari tabung kaca dengan jendela dari kwartz
yang mengandung Hidrogen dengan tekanan tinggi. Oleh karena kaca menyerap
radiasi ultra-violet, maka sistim optik spektrofotometer ultra-violet dan sel harus
dibuat dari bahan kwartz (Triyati, 1985).
Monokromator dipergunakan untuk memisahkan radiasi ke dalam
komponen-komponen panjang gelombang dan dapat memisahkan bagian
spektrum yang diinginkan dari lainnya (Triyati, 1985).
Sel absorpsi dipakai dari bahan silika, kuvet dan plastik banyak dipakai
untuk daerah sinar tampak. Kualitas data absorban sangat tergantung pada cara
pemakaian dan pemeliharaan sel. Sidik jari, lemak atau pengendapan zat pengotor
pada dinding sel akan mengurangi transmisi. Jadi sel-sel itu harus bersih sekali
sebelum dipakai (Triyati, 1985).
Detektor dipergunakan untuk menghasilkan signal elektrik. Dimana signal
elektrik ini sebanding dengan cahaya yang diserap. Signal elektrik ini kemudian
dialirkan ke alat pengukur. Rekorder dipergunakan untuk mencatat data hasil
pengukuran dari detektor, yang dinyatakan dengan angka (Triyati, 1985).
Suatu sumber cahaya; dipancarkan melalui monokromator. Monokromator
menguraikan sinar yang masuk dari sumber cahaya tersebut menjadi pita-pita
panjang gelombang yang diinginkan untuk pengukuran suatu zat tertentu, yang
menunjukkan bahwa setiap gugus kromofor mempunyai panjang gelombang
maksimum yang berbeda. Dari monokromator tadi cahaya/ energi radiasi
diteruskan dan diserap oleh suatu larutan yang akan diperiksa di dalam kuvet.
Kemudian jumlah cahaya yang diserap oleh larutan akan menghasilkan signal
elektrik pada detektor, yang mana signal elektrik ini sebanding dengan cahaya
20
yang diserap oleh larutan tersebut. Besarnya signal elektrik yang dialirkan ke
pencatat dapat dilihat sebagai angka (Triyati, 1985).
Menurut Triyati (1985), dalam analisis spektrofotometri ultraviolet dan
sinar tampak harus diperhatikan hal-hal sebagai berikut:
1. Kestabilan warna. Sedapat mungkin warna yang dihasilkan stabil untuk
beberapa lama.
2. Reaksi warna yang spesifik. Sebaiknya dipakai reaksi warna yang spesifik
untuk unsur tertentu, sehingga adanya unsur-unsur lain tidak mengganggu dan
pemisahan tidak perlu dilakukan.
3. Sifat zat warna. Kalau zat warna yang terbentuk berada dalam keadaan tertutup
dan segera diperiksa karena penguapan akan menyebabkan pemekatan larutan.
4. Sensitif. Sensitif yaitu dengan perubahan konsentrasi yang kecil, akan
menyebabkan pemekatan larutan.
5. Larutan homogen. Larutan yang homogen akan mengabsorpsi cahaya di setiap
bagian sama.
Kegunaan spektrofotometer ultra-violet dan sinar tampak dalam analisis
kimia adalah untuk analisis kualitatif dan kuantitatif. Kelemahan
Spektrofotometer ultra-violet dan sinar tampak dalam analisis kualitatif adalah
kurang teliti. Hal tersebut disebabkan karena pita-pita absorpsi yang diperoleh
melebar, dengan demikian kurang khusus atau terbatas pemakaiannya. Walaupun
demikian, berdasarkan spektrum serapan ultra-violet dan sinar tampak, dapat
dipakai untuk mengetahui ada atau tidak adanya gugus fungsional tertentu dalam
senyawa organik. Alat ini dapat juga dipergunakan untuk menentukan jumlah
kecil senyawa berkadar rendah yang dapat mengabsorpsi dalam media non
absorben (Triyati, 1985).
21
Menurut Triyati (1985), Pemakaian spektrofotometer ultra-violet dan sinar
tampak dalam analisis kuantitatif mempunyai beberapa keuntungan:
- Dapat dipergunakan untuk banyak zat organik dan anorganik. Adakalanya
beberapa zat harus diubah dulu menjadi senyawa berwarna sebelum
dianalisa.
- Selektif. Pada pemilihan kondisi yang tepat dapat dicari panjang gelombang
untuk zat yang dicari.
- Mempunyai ketelitian yang tinggi, dengan kesalahan relatif sebesar 1% —
3%, tetapi kesalahan ini dapat diperkecil lagi.
- Dapat dilakukan dengan cepat dan tepat.
22
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan metode eksperimental di
Laboratorium Biologi Farmasi dan Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara meliputi pengumpulan dan pengolahan bahan
tanaman, pemeriksaan karakterisasi simplisia, skrining fitokimia, pembuatan
ekstrak etanol buah kemloko. Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan
menggunakan metode DPPH dari bulan Agustus sampai bulan Oktober 2018.
3.1 Alat-alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas,
aluminium foil (Total Wrap), batang pengaduk, alat tanur (Nabertherm), blender
(philips), cawan porselin, Hotplate (Hanna), kertas perkamen, kertas saring, klem,
kondensor, koran, krus porselen, lemari pengering, lumpang, neraca analitik
(Mettler Toledo), oven (Memmert), penangas air, perkolator, pipet mikro
(Eppendorf; 10-100 µL), pipet mikro (Eppendorf; 100-1000 µL), pipet volume
(Herma; 1 ml), pipet volume (Herma; 2 ml), pipet volume (Herma; 5 ml), rotary
evaporator (Haake D), serbet, spatula, spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu),
stamfer, statif, sudip, dan tisu.
3.2 Bahan-bahan
Bahan tumbuhan yang digunakan dalam penelitian ini adalah buah
kemloko (Phyllanthus emblica L.), air suling, etanol 96%, bahan-bahan yang
berkualitas proanalisa : alfa naftol, amil alkohol, asam nitrat pekat, asam asetat
anhidrat, asam klorida pekat, asam sulfat pekat, benzena, besi (III) klorida,
23
bismuth nitrat, DPPH (1.1-diphenyl-2-picryl-hydrazil), iodium, isopropanol,
kalium iodida, kloroform, metanol, natrium hidroksida, raksa (II) klorida, serbuk
magnesium, serbuk seng, timbal (II) asetat dan toluena.
3.3 Pembuatan Larutan Pereaksi
3.3.1 Pereaksi natrium hidroksida 2 N
Sebanyak 8,001 g natrium hidroksida ditimbang, kemudian dilarutkan
dalam air suling hingga 100 mL (Depkes RI., 1995).
3.3.2 Pereaksi besi (III) klorida 1%
Sebanyak 1 g besi (III) klorida ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air
suling hingga 100 mL, lalu disaring (Marjoni, 2016).
3.3.3 Pereaksi asam klorida 2 N
Sebanyak 17 mL asam klorida pekat diencerkan dengan air suling hingga
100 mL (Marjoni, 2016).
3.3.4 Pereaksi Dragendorff
Sebanyak 8 g bismut nitrat dilarutkan dalam 20 mL HNO3, kemudian
dicampur dengan larutan larutan kalium iodida sebanyak 27,2 g dalam 50 mL air
suling. Campuran dibiarkan sampai memisah secara sempurna. Ambil larutan
jernih dan diencerkan dengan air secukupnya hingga 100 mL (Marjoni, 2016).
3.3.5 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida dilarutkan dalam air suling secukupnya, lalu
ditambahkan sedikit demi sedikit 2 g iodium, lalu dicukupkan dengan air
sulinghingga 100 mL (Depkes RI., 1995).
3.3.6 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M
Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam
air suling bebas karbon dioksida hingga 100 mL (Depkes RI., 1995).
24
3.3.7 Pereaksi Liebermann-Burchard
Sebanyak 5 mL asam asetat anhidrida dicampurkan dengan 5 mL asam
sulfat pekat kemudian ditambahkan etanol hingga volume 50 mL (Depkes RI.,
1995).
3.3.8 Pereaksi Meyer
5 g kalium iodida dalam 10 mL aquadest, kemudian ditambahkan larutan
1,36 gram merkuri (II) klorida dalam 60 mL air suling. Larutan kemudian dikocok
dan ditambahkan aquadest sampai 100 mL (Marjoni, 2016).
3.3.9 Pereaksi Molisch
Sebanyak 3 g alfa naftol dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N secukupnya
hingga diperoleh larutan 100 mL (Marjoni, 2016).
3.3.10 Pereaksi kloralhidrat
Larutan kloralhidrat dibuat dengan cara melarutkan kloralhidrat sebanyak
50 g dalam 20 mL air (Depkes RI., 1995).
3.3.11 Pembuatan pereaksi DPPH
Pembuatan pereaksi DPPH 0,5 mM, Sebanyak 20 mg DPPH ditimbang
kemudian dilarutkan dalam metanol hingga diperoleh volume larutan 100 mL
(konsentrasi 200 µg/mL) (Molyneux, 2004).
3.4 Pengumpulan dan Pengolahan Bahan Tanaman
3.4.1 Pengumpulan bahan tanaman
Pengambilan bahan tanaman dilakukan secara purposif yaitu tanpa
membandingkan tanaman yang sama dengan daerah lain. Bahan tanaman yang
digunakan adalah buah kemloko. Bahan diambil dari Desa Simardona, Kecamatan
Batang Onang, Kabupaten Padang Lawas Utara, Provinsi Sumatera Utara.
25
3.4.2 Identifikasi tanaman
Identifikasi tanaman dilakukan di Medanesse – Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam, Departemen Biologi, Universitas Sumatera Utara.
Hasil identifikasi dapat dilihat pada Lampiran 1 halaman 46.
3.4.3 Pembuatan simplisia
Buah kemloko dicuci bersih dari pengotoran dengan air mengalir sampai
bersih dan ditiriskan. Kemudian dikeringkan di lemari pengering dengan suhu 400
– 500C. Buah kemloko dianggap kering apabila sudah rapuh, kemudian simplisia
yang telah kering diserbuk menggunakan blender, dan disimpan dalam wadah
plastik yang tertutup rapat.
3.5 Karakterisasi Simplisia
3.5.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia buah
kemloko dengan mengamati bentuk, bau, rasa, dan warna.
3.5.2 Pemeriksaan mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia buah
kemloko. Serbuk simplisia ditaburkan di atas kaca objek yang telah ditetesi
dengan larutan kloralhidrat dan ditutup dengan kaca penutup, kemudian dimati di
bawah mikroskop.
3.5.3 Penetapan kadar air
a. Penjenuhan toluen
Sebanyak 200 mL toluen dimasukkan ke dalam labu alas bulat, lalu
ditambahkan 2 mL air suling, kemudian alat dipasang dan dilakukan destilasi
selama 2 jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin selama kurang lebih 30
menit, lalu volume air dalam tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,1 mL.
26
b. Penetapan kadar air simplisia
Labu berisi toluen tersebut dimasukkan 5 g simplisia yang telah ditimbang
seksama, dipanaskan hati-hati selama 15 menit, setelah toluen mendidih,
kemudian toluen diatur 2 tetes per detik sampai sebagian besar air terdestilasi,
kemudian kecepatan destilasi dinaikkan sampai 4 tetes per detik dan setelah
semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen. Destilasi
dilanjutkan selama 5 menit, tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu
kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume air dibaca dengan
ketelitian 0,1 mL. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kadar air
yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen
(WHO, 1998).
3.5.4 Penetapan kadar sari larut dalam air
Sebanyak 5 g simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 mL air-
kloroform (2,5 mL kloroform dalam aquadest sampai 1 L) dengan menggunakan
botol bersumbat sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama, kemudian
dibiarkan selama 18 jam dan disaring. Sebanyak 20 mL filtrat diuapkan hingga
kering dalam cawan yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Residu
dipanaskan dalam oven pada suhu 1050C sampai diperoleh bobot tetap. Kadar sari
yang larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI,
1995).
3.5.5 Penetapan kadar sari larut dalam etanol
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 mL
etanol 96 % dengan menggunakan botol bersumbat sambil sesekali dikocok
selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam dan disaring. Sebanyak
20 mL filtrat diuapkan hingga kering dalam cawan yang berdasar rata yang telah
27
dipanaskan dan ditara. Residu dipanaskan dalam oven pada suhu 1050C sampai
diperoleh bobot tetap. Kadar sari yang larut dalam air dihitung terhadap bahan
yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.5.6 Penetapan kadar abu total
Sebanyak 2,5 g serbuk simplisia yang telah digerus dan ditimbang
seksama, dimasukkan ke dalam krus porselin yang telah dijar dan ditara,
kemudian diratakan. Krus porselin bersama isinya dijarkan perlahan hingga arang
habis, didinginkan, ditimbang sampai diperoleh bobot yang tetap. kadar abu
dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes RI, 1995).
3.5.7 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam
Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu total didihkan dengan 25
mL asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut asam
dikumpulkan, disaring dengan kertas saring, lalu cuci dengan air panas. Residu
dan kertas saring dipijarkan sampai diperoleh bobot yang tetap, dinginkan dan
ditimbang beratnya. Kadar abu yang tidak larut asam dihitung terhadap bahan
yang telah dikeringkan di udara (Depkes RI, 1995).
3.6 Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia dari serbuk simplisia, ekstrak etanol meliputi
pemeriksaan golongan senyawa alkaloida, flavonoida, saponin, tanin, glikosida
dan steroida/ triterpenoida.
3.6.1 Pemeriksaan flavonoida
Sebanyak 10 g serbuk simplisia ditambahkan 100 mL air panas, didihkan
selama lebih kurang 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, ke dalam 5 mL
filtrat ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 1 mL asam klorida pekat dan 2
mL amil alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoida positif jika terjadi
28
warna merah, kuning, jingga pada lapisan amil alkohol (Marjoni, 2016).
3.6.2 Pemeriksaan alkaloida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambahkan 1 mL
asam klorida 2 N dan 9 mL air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2
menit. Didinginkan dan disaring. Filtratnya dipakai untuk percobaan sebagai
berikut:
a. Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan dengan 2 tetes larutan pereaksi
Meyer, akan terbentuk endapan menggumpal bewarna putih atau kuning.
b. Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan dengan 2 tetes larutan pereaksi
Bouchardat, akan terbentuk endapan bewarna coklat sampai hitam.
c. Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan dengan 2 tetes larutan pereaksi
Dragendorff, akan terbentuk endapan merah atau jingga.
Apabila terdapat endapan putih paling sedikit dengan 2 atau 3 dari
pengujian diatas, maka simplisia dinyatakan positif mengandung alkaloid
(Marjoni, 2016).
3.6.3 Pemeriksaan saponin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia dimasukkan ke dalam tabung reaksi,
ditambahkan 10 mL air panas, didinginkan kemudian dikocok selama 10 detik,
jika terbentuk busa setinggi 1 sampai 10 cm yang stabil tidak kurang dari 10 menit
dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2 N menunjukkan
adanya saponin (Marjoni, 2016).
3.6.4 Pemeriksaan tanin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia disari dengan 10 mL air suling lalu
disaring, filtratnya diencerkan dengan air sampai tidak berwarna. Larutan diambil
sebanyak 2 mL dan ditambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1 %.
29
Jika terjadi warna hijau, biru, atau kehitaman menunjukkan adanya tanin
(Marjoni, 2016).
3.6.5 Pemeriksaan glikosida
Menurut Depkes RI (1995), pemeriksaan glikosida yaitu sebanyak 3 g
serbuk simplisia disari dengan 30 mL campuran etanol 95 % dengan air suling
(7:3), ditambahkan asam sulfat pekat sehingga diperoleh pH 2, kemudian
direfluks selama 10 menit, didinginkan dan disaring. Sebanyak 20 mL filtrat
ditambahkan 25 mL air suling dan 25 mL timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok,
didiamkan 5 menit lalu disaring. Filtrat disari dengan 20 mL campuran
isopropanol dan kloroform (2:3), dilakukan berulang sebanyak 3 kali. Kumpulan
sari air diuapkan dengan temperatur tidak lebih dari 50 0C. Sisanya dilarutkan
dalam 2 mL metanol. Larutan sisa dipakai untuk percobaan berikut:
a. Larutan sisa dimasukkan ke dalan tabung reaksi selanjutnya diuapkan di
atas penangas air, pada sisa ditambahkan 2 mL air dan 5 tetes pereaksi
Molish. Tambahkan hati-hati 2 mL asam sulfat pekat melalui dinding
tabung, terbentuk cincin ungu pada batas kedua cairan, menunjukkan
adanya ikatan gula.
b. Larutan percobaan diuapkan di atas penangas air. Larutkan sisa dalam 5
mL asam asetat anhidrat. Tambahkan 10 tetes asam sulfat pekat, akan
terjadi warna biru atau hijau, menunjukkan adanya glikosida.
3.6.6 Pemeriksaan steroida/triterpenoida
Sebanyak 1 g sampel dimaserasi dengan 20 mL n-heksan selama 2 jam,
lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa ditambahkan 2
tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes asam sulfat pekat. Timbul warna biru atau
hijau menunjukkan adanya steroid dan timbul warna merah, pink atau ungu
30
menunjukkan adanya triterpenoid (Marjoni, 2016).
3.7 Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak dilakukan secara ekstraksi dingin yaitu dengan metode
perkolasi. Keuntungan metode perkolasi : tidak membutuhkan panas, sampel
selalu dialiri oleh pelarut baru, pelarut dialirkan melalui sampel sehingga proses
penyarian lebih sempurna (Marjoni, 2016).
Sebanyak 600 g serbuk simplisia dimasukkan ke dalam bejana bertutup,
kemudian direndam dengan cairan penyari etanol selama 3 jam. Kemudian massa
dimasukkan ke dalam perkolator, cairan penyari etanol dituang secukupnya
sampai terdapat selapis cairan penyari di atas serbuk simplisia, kemudian mulut
perkolator ditutup dengan aluminium foil dan dibiarkan selama 24 jam.
Kemudian, cairan perkolat dibiarkan menetes dengan kecepatan 1 tetes per detik
lalu tambahkan berulang-ulang etanol sehingga selalu terdapat selapis cairan
penyari diatas simplisia dan ditampung ke dalam botol berwarna bening. Perkolasi
dihentikan apabila cairan perkolat terakhir diuapkan diatas penangas air tidak
meninggalkan sisa(Ditjen POM Depkes RI, 1979). Penambahan pelarut dilakukan
sampai perkolat sudah tidak mengandung senyawa aktif lagi. Hal ini dapat
dilakukan dengan pengamatan secara visual dengan cara melihat secara fisik pada
tetesan perkolat. Apabila tetesan sudah tidak berwarna, maka penambahan pelarut
sudah dapat dihentikan. Sisa pelarut yang masih ada di dalam perkolator
dihabiskan dan dikumpulkan dengan perkolat sebelumnya (Marjoni,
2016).Perkolat dipekatkan dengan bantuan alat penguap rotary evaporator pada
suhu tidak lebih dari 40oC, lalu diuapkan sisa pelarut diatas penangas air sampai
diperoleh ekstrak kental kemudian disimpan di lemari pendingin (Ditjen POM
Depkes RI, 1979).
31
3.8 Pengujian Aktivitas Antioksidan dengan Spektrofotometer UV-Visibel
3.8.1 Prinsip metode pemerangkapan radikal bebas DPPH
Kemampuan sampel uji dalam meredam proses oksidasi radikal bebas
DPPH dalam larutan metanol (sehingga terjadi perubahan warna DPPH dari ungu
menjadi kuning) dengan nilai IC50 (konsentrasi sampel uji yang memerangkap
radikal bebas 50%) sebagai parameter menentukan aktivitas antioksidan sampel
uji tersebut (Sapri dkk., 2013).
3.8.2 Pembuatan larutan blanko
Ditimbang sebanyak 20 mg serbuk DPPH kemudian dilarutkan dalam
metanol hingga diperoleh volume larutan 100 mL (konsentrasi 200 µg/mL).
Larutan DPPH (konsentrasi 200 µg/mL) dipipet sebanyak 5 mL, kemudian
dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL, dicukupkan volumenya dengan
metanol sampai garis tanda (konsentrasi 40 µg/mL) (Sapri dkk., 2013).
3.8.3. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Larutan DPPH konsentrasi 40 µg/mL dihomogenkan dan diukur
serapannya pada panjang gelombang 400-800 nm (Sapri dkk., 2013).
3.8.4 Pembuatan larutan induk
3.8.4.1 Pembuatan larutan induk ekstrak etanol buah kemloko (EEBK)
Sebanyak 25 mg ekstrak etanol buah kemloko (Phyllanthus
emblicaL.)ditimbang kemudian dilarutkan dalam labu tentukur 25 mL dengan
metanol, lalu volumenya dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda
(konsentrasi 1000 µg/mL).
3.8.4.2 Pembuatan larutan induk vitamin c
Sebanyak 25 mg serbuk vitamin c ditimbang, dimasukkan ke dalam labu
tentukur 50 mL dilarutkan dengan metanol lalu volumenya dicukupkan dengan
32
metanol sampai garis tanda (konsentrasi 500 µg/mL).
3.8.5 Pembuatan larutan uji
3.8.5.1 Pembuatan larutan uji ekstrak etanol buah kemloko (EEBK)
Ditimbang sebanyak 25 mg ekstrak etanol buah kemloko kemudian
dilarutkan dalam labu tentukur 25 mL dengan metanol, lalu volumenya
dicukupkan denganmetanol sampai garis tanda (konsentrasi
1000µg/mL).Konsentrasi ditetapkan setelah dilakukan beberapa orientasi. Larutan
induk (konsentrasi 1000 µg/mL)dipipet sebanyak 50µl ke dalam labu tentukur
25mL (konsentrasi 2 µg/mL; LIB II), lalu larutan LIB II dipipet 1,25mL; 2,5 mL;
3,75mL; 5 mL ke dalam labu ukur 5mL(Konsentrasi masing-masing : 0,5 µg/mL,
1µg/mL, 1,5 µg/mL, 2µg/mL). ke dalam masing-masing labu ukur ditambahkan
1mL larutan DPPH 0.5 mM (konsentrasi 200 µg/mL) lalu volumenya dicukupkan
dengan metanol sampai garis tanda. Diamkan selama 60 menit pada suhu kamar,
lalu diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV-Visibel pada panjang
gelombang serapan maksimum yang diperoleh.
3.8.5.2 Pembuatan larutan vitamin c
Ditimbang sebanyak 25 mg serbuk vitamin c, dimasukkan ke dalam labu
tentukur 50 mL, dilarutkan dengan metanol lalu volumenya dicukupkan dengan
metanol sampai garis tanda (konsentrasi 500 µg/mL). Konsentrasi ditetapkan setelah
dilakukan beberapa orientasi. Larutan induk (konsentrasi 500 µg/mL) dipipet
sebanyak 20 µL; 40 µL; 60 µL; 80 µL ke dalam labu ukur 5 mL untuk
mendapatkan konsentrasi larutan uji 2 µg/mL, 4 µg/mL, 6 µg/mL, 8 µg/mL, ke
dalam masing-masing labu ukur ditambahkan 1 mL larutan DPPH 0.5 mM
(konsentrasi 200 µg/mL) lalu volumenya dicukupkan dengan metanol sampai
garis tanda. Diamkan selama 60 menit pada suhu kamar, lalu diukur serapannya
33
menggunakan spektrofotometer UV-Visibel pada panjang gelombang yang
diperoleh.
3.8.5.3 Analisis persen pemerangkapan radikal bebas DPPH
Menurut Al Ridho dkk. (2013), Prinsip dari metode uji aktivitas
antioksidan ini adalah pengukuran aktivitas antioksidan secara kuantitatif yaitu
dengan melakukan pengukuran penangkapan radikal DPPH oleh suatu senyawa
yang mempunyai aktivitas antioksidan dengan menggunakan spektrofotometri
UV-Vis sehingga dengan demikian akan diketahui nilai aktivitas peredaman
radikal bebas yang dinyatakan dengan nilai IC50 (inhibitory concentration), yaitu
dihitung dengan rumus sebagai berikut:
AKontrol − ASampel
Aktivitas pemerangkapan radikal bebas (%) = 𝑥 100%
AKontrol
Keterangan: Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
3.8.5.4 Analisis nilai IC50
Nilai aktivitas peredaman radikal bebas yang dinyatakan dengan nilai IC50
(inhibitory concentration) didefinisikan sebagai besarnya konsentrasi senyawa uji
yang dapat meredam radikal bebas sebanyak 50%. Semakin kecil nilai IC50 maka
aktivitas peredaman radikal bebas semakin tinggi. Prinsip kerja dari pengukuran
ini adalah adanya radikal bebas stabil yaitu DPPH yang dicampurkan dengan
senyawa antioksidan yang memiliki kemampuan mendonorkan hidrogen,
sehingga radikal bebas dapat diredam. Koefisien y pada persamaan ini adalah
sebagai IC50, sedangkan koefisien x adalah konsentrasi dari ekstrak yang akan
dicari nilainya, dimana nilai dari x yang didapat merupakan besarnya konsentrasi
yang diperlukan untuk dapat meredam 50% aktivitas radikal DPPH (Al Ridho
dkk., 2013).
34
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Karakterisasi Simplisia
4.1.1 Hasil pemeriksaan makroskopik
Hasil pemeriksaan makroskopik simplisia buah kemloko menunjukkan buah
kemloko berbentuk bulat dengan diameter kira-kira 2 cm. Berwarna kuning
kehijauan, berbau khas dan berasa masam (kecut) agak getir. Gambar
makroskopik simplisia buah kemlokodapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 48.
4.1.2 Hasil pemeriksaan mikroskopik
Hasil pemeriksaan makroskopik simplisia buah kemloko menunjukkan
terdapat jaringan parenkim, tetes minyak, jaringan gabus dan serat. Hasil
mikroskopik dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 50.
4.1.3 Hasil karakterisasi simplisia buah kemloko
Hasil karakteristik simplisia buah kemloko dapat dilihat pada Tabel 4.1
dan perhitungan dapat dilihat pada Lampiran 6 halaman 51.
Tabel 4.1 Hasil karakteristik simplisia buah kemloko (Phylanthus emblica L.)
No Pengujian Hasil Pemeriksaan (%)
1 Kadar air 8,0
2 Kadar sari larut air 23,33
3 Kadar sari larut etanol 30
4 Kadar abu total 6,66
5 Kadar abu tidak larut asam 3,33
Tabel 4.1 menunjukkan kadar air simplisia buah kemloko sebesar 8%
memenuhi persyaratan umum yaitu di bawah 10%. Kadar air ditetapkan
35
untukmenjaga kualitas ekstrakyaitu untukmenghindari pertumbuhan jamur dalam
ekstrak (Angelina dkk., 2015).
Penetapan kadar sari larut air menyatakan jumlah zat yang tersari larut
dalam air yaitu glikosida, gula, gom, protein, enzim, zat warna dan asam organik.
Penetapan kadar sari larut etanol menyatakan jumlah zat yang tersari dalam
pelarut etanol seperti glikosida, antrakuinon, steroida, flavonoida, saponin dan
tanin (Depkes RI, 1995). Hasil uji ini menunjukkan kadar senyawa dalam ekstrak
lebih banyak terlarut dalam etanol dibandingkan dalam air. Hal ini disebabkan
pelarut yang digunakan pada proses ekstraksi menggunakan pelarut organik yaitu
etanol sehingga senyawa-senyawa yang tersari atau terserap lebih besar senyawa
organik dibanding dengan senyawa anorganik (Angelina dkk., 2015).
Penentuan kadar abu bertujuan untuk memberikan gambaran kandungan
mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya
ekstrak.Prinsipnyaekstrak dipanaskan hingga senyawa organik dan turunannya
terdestruksi dan menguap sampai hanya unsur mineral dan anorganik sajayang
tersisa (Angelina dkk., 2015).
Besarnya kadar abu total dalam ekstrak menunjukkan bahwa ekstrak yang
diperoleh mengandung mineral. Sedangkan adanya kadar abu yang tidak larut
dalam asam menunjukkan adanya pasir atau pengotor lainnya yang masih ada
(Angelina dkk., 2015).
4.1.4 Hasil skrining fitokimia
Uji skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui golongan senyawa kimia
yang terkandung di dalam simplisia dan ekstrak buah kemloko. Hasil skrining
fitokimia dapat dilihat pada Tabel 4.2 di bawah ini :
36
Tabel 4.2 Hasil skrining fitokimia simplisia dan ekstrak buah kemloko
(Phylanthus emblica L.)
No Golongan Senyawa Simplisia Ekstrak Keterangan
Kimia
Preaksi Bouchardat : endapan

coklat kehitaman
1 Alkaloid + +
Pereaksi Dragendorff : warna
kuning jingga
2 Flavonoid + + lapisan amil alkohol : warna

kuning jingga
3 Tanin + + Pereaksi FeCl3 : warna biru
4 Saponin + + Busa tidak hilang dengan

penambahan HCl 2N
5 Steroid/Triterpenoi + + Pereaksi LB : warna hijau

d
6 Glikosida + + Dengan H2SO4 (p) : cincin

ungu
Keterangan : (+) = Mengandung senyawa
Hasil di atas menunjukkan simplisia dan ekstrak buah kemloko
(Phylanthus emblica L.) mengandung golongan senyawa kimia yaitu alkaloid,
flavonoid, saponin, tanin, steroid/triterpenoid dan glikosida.
Suatu jenis tumbuhan dapat memiliki aktivitas antioksidan jika mengandung
senyawa yang mampu menangkal radikal bebas seperti fenol, flavonoid, vitamin c
dan E, katekin, karoten dan resveratrol (Saefudin dkk., 2013). Buah kemloko
mengandung senyawa-senyawa fenolat, seperti geraniin, quercetin 3-β-D-
glukopiranosida, kaempferol 3-β-D-glukosapiranosida, isokorilagin, quercetin,
dan kaempferol. Selain itu, tanaman ini juga mengandung senyawa asam galat,
asam ellagat, 1-O-galloyl-beta-D-glukosa, asam-3-etilgalat dan corilagin.
Senyawa apeganin dan asam askorbat juga pernah ditemukan dalam tanaman
kemloko. Gugus hidroksil yang bersifat asam pada senyawa-senyawa fenolat
37
tersebut diduga sangat berperan dalam reaksi oksidasi-reduksi yang terjadi di
dalam tubuh (Suzery dkk., 2017).
4.2 Hasil Identifikasi Tumbuhan
Hasil identifikasi tumbuhan dari Herbarium Medanense (MEDA)
Universitas Sumatera Utara, diketahui bahwa sampel yang diteliti adalah buah
kemloko (Phylanthus emblica L.) famili phyllanthaceae. Hasil identifikasi buah
kemloko dapat dilihat pada Lampiran 1 halaman 46.
4.3 Hasil Ekstraksi Buah Kemloko
Hasil ekstraksi dari 600 g simplisia buah kemloko dengan menggunakan
pelarut etanol 96% sebanyak 21 L, kemudian diuapkan dengan rotary evaporator
pada suhu 40-50C sampai diperoleh ekstrak kental sebanyak 309,5 g. Gambar
ekstrak dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 48.
4.4 Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan
Hasil uji aktivitas antioksidan EEBK dengan metode pemerangkapan 1.1-
diphenyl-2-picrylhidrazyl (DPPH) secara spektrofotometri UV- Visibel.
4.4.1 Hasil penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Hasil pengukuran serapan maksimum larutan DPPH 40 µg/mL dalam
metanol dengan menggunakan spektrofotometer UV-Visibel. Hasil pengukuran
menunjukkan bahwa DPPH dalam metanol menghasilkan serapan maksimum
pada panjang gelombang 515,5 nm yang telah memenuhi syarat interval panjang
gelombang DPPH, dimana biasanya absorbansi DPPH dapat terukur pada panjang
gelombang 515-520 nm (Marxen dkk., 2007), dan hasil pengukuran tersebut
memenuhi kisaran panjang gelombang sinar tampak (400-800 nm), dimana warna
yang diserap adalah warna ungu yang akan memberikan serapan pada panjang
38
gelombang antara 500-560 nm (Skoog dkk., 2006). Data hasil pengukuran
serapan maksimum dapat dilihat pada Gambar 4.1.
Gambar 4.1 Kurva serapan maksimum larutan DPPH 40 µg/mL dalam metanol
menggunakan spektrofotometer UV-Visibel
4.4.2 Hasil penentuan operating time
Operating time adalah waktu yang tepat untuk pembacaan serapan larutan
yang diperiksa pada saat serapannya stabil pada kurva operating time. Sampel
yang digunakan adalah yang berwarna sehingga dapat diketahui pada menit
keberapa terjadi kestabilan (Prastiwati dkk., 2010). Lama pengukuran metode
DPPH menurut beberapa literatur yang direkomendasikan selama 60 menit
(Marinova dan Batchvarov, 2011). Hasil pengukuran diperoleh operating time
pada menit ke-10, namun data tersebut tidak sesuai dengan literatur. Menurut
Rosidah dkk. (2008), pengukuran dilakukan setelah masing-masing sampel yang
telah ditambahkan DPPH lalu didiamkan selama 60 menit pada suhu ruangan. Jadi
sampel tetap didiamkan sesuai dengan literatur yaitu 60 menit.
39
4.4.3 Hasil analisis aktivitas antioksidan sampel uji
Aktivitas antioksidan ekstrak etanol buah kemloko (EEBK) diperoleh hasil
pengukuran absorbansi DPPH pada menit ke-60 dengan adanya penambahan
larutanuji dengan konsentrasi 0,5 µg/mL; 1 µg/mL; 1,5 µg/mL dan 2
µg/mLyangdibandingkan dengan kontrol DPPH tanpa larutan uji. Penurunan
absorbansi DPPH dan persen peredaman EEBK dan vitamin c dapat dilihat pada
Lampiran 8 halaman 55.
Penurunan nilai absorbansi terjadi karena larutan uji memerangkap DPPH
dan pemerangkapan terjadi karena adanya senyawa yang bereaksi sebagai
penangkap radikal yang akan mereduksi DPPH membentuk DPPH-H yang
tereduksi. Reaksi ini diamati dengan adanya perubahan warna DPPH dari ungu
menjadi kuning ketika elektron ganjil dari radikal DPPH telah berpasangan
dengan hidrogen dari senyawa penangkap radikal bebas. Keberadaan antioksidan
dalam ekstrak tumbuhan akan menetralisasi radikal DPPH dengan
menyumbangkan elektron kepada DPPH, menghasilkan perubahan warna dari
ungu menjadi kuning atau intensitas warna ungu larutan jadi berkurang
(Molyneux, 2004). Penghilangan warna akan sebanding dengan jumlah elektron
yang diambil oleh DPPH sehingga dapat diukur secara spektrofotometri (Garcia
dkk., 2012).
Hubungan antara konsentrasi dengan persentase perendaman radikal bebas
DPPH oleh EEBK dapat dilihat pada Gambar 4.2 dan untuk vitamin c dapat
dilihat pada Gambar 4.3.
40
%Peredaman DPPH
Konsentrasi (µg/mL)
Gambar 4.2 Grafik hasil uji aktivitas antioksidan EEBK

%Peredaman DPPH
Konsentrasi (µg/mL)
Gambar 4.3 Grafik hasil uji aktivitas antioksidan vitamin c

4.4.4 Hasil analisis nilai IC50 (inhibitory concentration)
Nilai IC50diperoleh berdasarkan perhitungan persamaan regresi dengan
cara memplot konsentrasi larutan uji dan persen peredaman DPPH sebagai
parameter aktivitas antioksidan, konsentrasi sampel (µg/mL) sebagai absis (sumbu
X) dan nilai % inhibisi sebagai ordinat (sumbu Y). Hasil persamaan regresi linier
dan hasil analisisnilai IC50yang diperoleh dari sampel ujidan vitamin c dapat
dilihat padaTabel 4.3 dan Tabel 4.4.
41
Tabel 4.3 Hasil persamaan regresi linier dan hasil analisis IC50 yang diperoleh
dari ekstrak etanol buah kemloko (EEBK) dan vitamin c
Larutan Uji Persamaan Regresi Koefisien Korelasi IC50 (µg/mL)
EEBK Y = 45,52X - 0,99 0,99807 1,12
Vitamin C Y = 11,25X + 0,04 0,99949 4,44
Tabel 4.4 Kategori nilai IC50 sebagai antioksidan
NO Kategori Konsentrasi (µg/mL)
1. Sangat kuat < 50
2. Kuat 50 – 100
3. Sedang 101 – 150
4. Lemah 151 – 200
(Sumber: Izzati dkk., 2012).
Dari Tabel 4.3 dan 4.4 di atas diketahui bahwa EEBK dan vitamin
cmenunjukkan aktivitas antioksidan kategori sangat kuat dengan nilai IC50 EEBK
sebesar 1,12 µg/mL, dan vitamin c sebesar 4,44 µg/mL. Menurut Molyneux
(2004), menyatakan bahwa suatu zat mempunyai sifat antioksidan bila nilai IC50
kurang dari 200 µg/mL. Antioksidan berperan mencegah terjadinya kerusakan
jaringan yang disebabkan radikal bebas dengan cara mengeliminir terbentuknya
radikal, meredam atau meningkatkan penguraiannya (Saefudin dkk., 2013).
Kemloko atau amla (Phyllanthus emblica L.) kaya akan vitamin c dan
memiliki tannin terhidrolisis dengan berat molekul rendah yang membuat amla
menjadi antioksidan yang baik. Tanin dari amla seperti emblicanin-A (37%),
emblicanin-B (33%),punigluconin dan pedunculagin dikabarkan memberi
perlindungan terhadap radikal bebas termasuk hemolisis eritrosit darah perifer
tikus (Dasaroju dan Gottumukkala, 2014).
42
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Hasil penelitian yang dilakukan terhadap buah kemloko (Phyllanthus
emblica L.) diperoleh kesimpulan:
a. Karakteristik simplisia buah kemloko diperoleh hasil kadar air yang
memenuhi syarat, sedangkan hasil kadar sari larut air 23,33%, kadar sari larut
etanol 30%, kadar abu 6,66% dan kadar abu tidak larut asam 3,33%.
b. Hasil skrining serbuk simplisia dan ekstrak menunjukkan hasil positif pada
alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin, tanin, steroid/triterpenoida.
c. Kekuatan antioksidan ekstrak etanol buah kemloko menunjukkan kekuatan
dalam kategori sangat kuat dan memiliki kekuatan antioksidan yang lebih kuat
jika dibandingkan dengan vitamin c
5.2 Saran
Disarankan pada peneliti selanjutnya untuk melakukan pengujian aktivitas
antibakteri dan antikanker pada buah kemloko (Phyllanthus emblica L.)
43
DAFTAR PUSTAKA
Angelina, M., Amelia, P.,Irsyad, M., Meilawati, L., Hanafi, M. 2015.

KARAKTERISASI EKSTRAK ETANOL HERBA
KATUMPANGANAIR (Peperomia pellucidaL. Kunth). BIOPROPAL
INDUSTRI. 6(2): 53-61.
Al Ridho, E., Sari, R., Wahdaningsih, S. 2013. UJI AKTIVITAS
ANTIOKSIDAN EKSTRAK METANOL BUAH LAKUM (Cayratia
trifolia) DENGAN METODE DPPH (2,2-DIFENIL-1-
PIKRILHIDRAZIL). Program Studi Farmasi Fakultas kedokteran,
Universitas Tanjungpura. Halaman 5, 7.
Dachriyanus. 2004. Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi.
Lembaga Pengembangan Teknologi Informasi dan Komunikasi
(LPTIK)Universitas Andalas, Padang, Sumatera Barat, Indonesia. Halaman
1, 3.
Dasaroju, S. dan Gottumukkala, K. M. 2014. Current Trends in the Research of
Emblica officinalis (Amla): A Pharmacological Perspective. Int. J. Pharm.
Sci. Rev. Res. 24(2): 150-159.
Depkes RI. 1995. MATERIA MEDIKA INDONESIA. Jilid Keenam. Jakarta:
Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan.Halaman 300, 302-304,
306, 334, 540, 536.
Ditjen POM Depkes RI. 1979. FARMAKOPE INDONESIA. Edisi Ketiga. Jakarta:
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Departemen Kesehatan
Republik Indonesia. Halaman 31.
Garcia, E. J., Oldoni, T. L. C., Alencar, S. M. D., Reis, A., Loguercio, A. D.,
Grande, R. H. M. 2012. Antioxidant Activity by DPPH Assay of Potential
Solutions to be Applied on Bleached Teeth. Braz Dent J. 23(1): 23.
Izzati, N. N., Diniatik, Rahayu, W.S. 2012. AKTIVITAS
ANTIOKSIDANEKSTRAK PERASAN DAUN MANGGIS(Garcinia
mangostanaL.)BERDASARKAN METODE DPPH (2,2 Diphenyl-1-phycryl
hydrazil). PHARMACY. 9(3): 114.
Khoiriyah, U., Pasaribu, N., Hannum, S. 2015. Distribusi Phyllanthus emblica L.
di Sumatera Utara Bagian Selatan. Biosfera. 32(2): 98 - 99.
Marinova, G., dan Batchvarov, V. 2011. EVALUATION OF THE METHODS
FOR DETERMINATION OF THE FREE RADICAL SCAVENGING
ACTIVITY BY DPPH. Bulgarian Journal of Agricultural Science. 17(1):
12-24.
Marjoni, M.R. 2016. Dasar-Dasar FITOKIMIA Untuk Diploma III FARMASI.
Cetakan Pertama. Penerbit: Trans Info Media Jakarta. Halaman: 6-10, 12,
13, 16, 20-24, 50, 54, 58, 59.
Marxen, K., Vanselow, K. H., Lippemeier, S., Hintze, R., Ruser, A., Hansen, U.
P. 2007. Determination of DPPH Radical Oxidation Caused by Methanolic
Extracts of Some Microalgal Species by Linear Regression Analysis of
Spectrophotometric Measurements. Sensors 2007. 7: 2082.
Molyneux, P. 2004. The use of the stable free radical diphenylpicryl-hydrazyl
(DPPH) for estimating antioxidant activity. Songklanakarin Journal
Science Technology. 26(2): 211-219.
44
Prastiwati, R., Rahayu, W. S., Hartanti, D. 2010. PERBANDINGAN DAYA
ANTIOKSIDAN EKSTRAK METANOL DAUN TEMBAKAU (Nicotiana
tabacum L.) DENGAN RUTIN TERHADAP RADIKAL BEBAS 1,1-
DIPHENIL-2-PIKRILHIDRAZIL (DPPH). PHARMACY. 7(1): 5.
Ramadhan, P. 2015. Mengenal ANTIOKSIDAN. Cetakan Pertama. GRAHA
ILMU Yogyakarta. Halaman 1, 2, 17, 20, 21.
Rosidah, Yam, M. F., Sadikun, A., Asmawi, M. Z. 2008. Antioxidant Potential of
Gynura procumbens.Pharmaceutical Biology. 46(9): 616-625.
Saefudin, Marusin, S., Chairul. 2013. AKTIVITAS ANTIOKSIDAN PADA
ENAM JENISTUMBUHANSTERCULIACEAE. JURNAL Penelitian Hasil
Hutan. 31(2): 103-109.
Sapri, Pebrianti, R., Faizal, M. 2013. UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN
EKSTRAK METANOL TUMBUHAN SINGGAH PEREMPUAN
(Loranthus sp) DENGAN METODE DPPH (2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil).
Prosiding Seminar Nasional Kimia. Halaman 203-210.
Skoog, D. A., Holler, F. J., Crouch, S. R. 2006. Principles of Instrumental
Analysis. Edisi Keenam. USA: Thomson Brooks/ Cole. Halaman 1041.
Suzery, M., Isnaning, C.A., Cahyono, B. 2017. POTENSI EKSTRAK DAN
FRAKSI BUAH KEMLOKO (Phyllanthus emblica L.) SEBAGAI
SUMBER ANTIOKSIDAN. Laboratorium Kimia Organik, Jurusan Kimia
Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro. Halaman 167-
177.
Triyati, E. 1985. SPEKTROFOTOMETER ULTRA-VIOLET DAN SINAR
TAMPAK SERTA APLIKASINYA DALAM OSEANOLOGI. Pusat
Penelitian Ekologi Laut, Lembaga Oseanologi Nasional – LIPI Oseana.
10(1): 39-47.
WHO. 1992. Quality control methods for medical plant materials World Health
Organization. Switzerland: Geneva. Halaman 36-37.
45
Lampiran 1.Hasil identifikasi tumbuhan
46
Lampiran 2. Bagan kerja penelitian
Buah Kemloko (18 kg)
Dicuci dari pengotor sampai bersih, ditiriskan,

dan ditimbang sebagai berat basah (16,029 kg)
kemudian dirajang (berat setelah perajangan :
11,379 kg)
Dikeringkan dalam lemari pengering

Simplisia (1,850 kg)
Ditimbang berat kering
Dihaluskan
Serbuk Simplisia (600 g)
Karakterisasi Skrining Ekstraksi

Fitokimia
Diperkolasi dengan
Makroskopik dan
etanol 96%
mikroskopik •Flavonoid
Penetapan : •Alkaloid Perkolat
•Kadar Air •Saponin
• Kadar Sari yang •Tanin Diuapkan dengan
Larut Air •Glikosida rotary evaporator
•Kadar Sari yang •Steroid/Tri
Larut Etanol terpenoid Ekstrak kental (309,5 g)
•Kadar Abu Total
•Kadar Abu yang Dilakukan uji aktivitas
Tidak Larut Asam antioksidan secara
spektrofotometri UV-
visibel
Hasil
47
Lampiran 3. Buah kemloko, simplisia buah kemloko, ekstrak etanol buah
kemloko
Gambar 1 : Buah kemloko
Gambar 2 : Simplisia buah kemloko
Gambar 3 : Ekstrak etanol buah kemloko
48
Lampiran 4. Alat-alat penelitian
Gambar 4 : Spektrofotometer UV-Visibel
49
Lampiran 5. Hasil uji mikroskopik simplisia buah kemloko
Gambar 5 : Mikroskopik simplisia buah kemloko
Keterangan: (a) Jaringan parenkim; (b) Tetes minyak; (c) Jaringan gabus;
(d) Serat
50
Lampiran 6. Hasil perhitungan karakterisasi simplisia buah kemloko
6.1 Penetapan kadar air
Volume air (mL)

Kadar air = x 100%
Berat sampel (g)
1. Berat sampel =5g
Volume air = 0,4 mL

0,4
Kadar air = x 100% = 8%
5
2. Berat sampel =5g
Volume air = 0,4 mL

0,4
Kadar air = x 100% = 8%
5
3. Berat sampel =5g
Volume air = 0,4 mL

0,4
Kadar air = x 100% = 8%
5
8+8+8
Kadar air rata-rata = = 8%
3
6.2 Penetapan kadar sari larut etanol
Berat sari air (g) 100

Kadar sari larut air = Berat sampel (g) x x100%
20
1. Berat sampel =5g
Berat sari etanol = 0,3 g

0,3 100
Kadar sari larut etanol = x x100% = 30%
5 20
2. Berat sampel =5g

0,2 100
5 20
3. Berat sampel =5g
51
Lampiran 6. (Lanjutan)

0,4 100
5 20
30 + 20 + 40
Kadar sari larut etanol rata-rata = = 30%
3
6.3 Penetapan kadar sari larut air
Berat sari etanol (g) 100

Kadar sari larut etanol = x x100%
Berat sampel (g) 20
1. Berat sampel =5g
Berat sari air = 0,3 g

0,3 100
Kadar sari larut air = x x100% = 30%
5 20
2. Berat sampel =5g
Berat sariair = 0,1 g

0,1 100
5 20
3. Berat sampel =5g
Berat sari air = 0,3 g

0,3 100
5 20
30 + 10 + 30
Kadar sari larut air rata-rata = = 23,33%
3
6.4 Penetapan kadar abu total

Berat abu (g)
Kadar abu total =Berat sampel (g) x 100%
1. Berat sampel =2g
Berat abu = 0,1 g
0,1
Kadar abu total = x 100% = 5%
2
2. Berat sampel =2g
Berat abu = 0,1 g
52
0,1
2
3. Berat sampel =2g
Berat abu = 0,2 g
0,2
2
5 + 5 + 10
Kadar abu total rata-rata = = 6,66%
3
6.5 Penetapan kadar abu tidak larut asam
Berat abu (g)

Kadar abu tidak larut asam =Berat sampel (g) x 100%
1. Berat sampel =2g
Berat abu = 0,05 g
0,05
Kadar abu tidak larut asam = x 100% = 2,5%
2
2. Berat sampel =2g
Berat abu = 0,05 g
0,05
Kadar abu tidak larut asam = x 100% = 2,5%
2
3. Berat sampel =2g
Berat abu = 0,1 g
0,1
Kadar abu tidak larut asam = x 100% = 5%
2
2,5 + 2,5 + 5
Kadar abu tidak larut asam rata-rata = = 3,33%
3
53
Lampiran 7. Hasil operating time
54
Lampiran 8. Hasil uji aktivitas antioksidan
a.Tabel hasil uji aktivitas antioksidan EEBK

Larutan Konsentrasi Absorbansi % Peredaman
Uji (µg/mL)
I II III I II III Rata-rata
blanko 0,971 0,971 0,971 0,00 0,00 0,00 0,00
0,5 0,759 0,759 0,759 21,83 21,83 21,83 21,83
EEBK 1 0,572 0,572 0,572 41,09 41,09 41,09 41,09
1,5 0,291 0,291 0,291 70,03 70,03 70,03 70,03
2 0,100 0,100 0,100 89,70 89,70 89,70 89,70
b. Tabel hasil uji aktivitas antioksidan vitamin c
Larutan Konsentrasi Absorbansi % Peredaman

Uji (µg/mL)
I II III I II III Rata-rata
blanko 0,971 0,971 0,971 0,00 0,00 0,00 0,00
2 0,752 0,752 0,752 22,55 22,55 22,55 22,55
Vitamin 4 0,542 0,542 0,542 44,18 44,18 44,18 44,18

C
6 0,297 0,297 0,297 69,41 69,41 69,41 69,41
8 0,106 0,106 0,106 89,08 89,08 89,08 89,08
55
Lampiran 9. Perhitungan persen peredaman dan nilai IC50 EEBK
• Perhitungan persen peredaman EEBK
1. Tabel data absorbansi DPPH pengukuran I
NO Konsentrasi Larutan Uji (µg/mL) Absorbansi
1. 0 0,971
2. 0,5 0,759
3. 1 0,572
4. 1,5 0,291
5. 2 0,100
Akontrol−Asampel
Aktivitas Peredaman(%) = x 100%
Akontrol
Keterangan : Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Perhitungan % peredaman EEBK (pengukuran I)
- Konsentrasi 0,5 µg/mL
Akontrol−Asampel
% Peredaman = x 100%
Akontrol
0,971−0,759
0,971
= 21,83%
- Konsentrasi 1 µg/mL
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,572
0,971
= 41,09%
Akontrol−Asampel
Akontrol
56
0,971−0,291
0,971
= 70,03%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,100
0,971
= 89,70%
2. Tabel data absorbansi DPPH pengukuran II
1. 0 0,971
2. 0,5 0,759
3. 1 0,572
4. 1,5 0,291
5. 2 0,100
Akontrol−Asampel
Akontrol
Perhitungan % peredaman EEBK (pengukuran II)
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,759
0,971
= 21,83%
57
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,572
0,971
= 41,09%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,291
0,971
= 70,03%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,100
0,971
= 89,70%
3. Tabel data absorbansi DPPH pengukuran III
1. 0 0,971
2. 0,5 0,759
3. 1 0,572
4. 1,5 0,291
5. 2 0,100
Akontrol−Asampel
Akontrol
58
Perhitungan % peredaman EEBK (pengukuran III)
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,759
0,971
= 21,83%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,572
0,971
= 41,09%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,291
0,971
= 70,03%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,100
0,971
= 89,70%
59
• Perhitungan nilai IC50
Tabel IC50 dari EEBK
NO X Y XY X2 Y2
1 0 0 0 0 0
2 0,5 21,83 10,915 0,25 476,55
3 1 41,09 41,09 1 1688,39
4 1,5 70,03 105,045 2,25 4904,20
5 2 89,70 179,4 4 8046,09
TOTAL 5 222,65 336,45 7,5 15115,23
RATA-RATA 1 44,53 67,29 1,5 3023,05
Keterangan :
X = Konsentrasi (µg/mL)
Y = % Peredaman
r=
 XY − ( X . Y ) / n 336,45 − (5)(222,65) / 5
{ X − ( x) / n}{ Y − ( Y ) / n}  
=
2 2 2 2
{7,5 − (5) 2 / 5 }{15115,23 − [(222,65 2 ) / 5}
= 0,99807
a=
 XY − ( X . Y ) / n = 336,45 − (5)(222,65) / 5 =113,80 = 45,52
 X − ( x) / n
2 2
7,5 − (5) / 5 2 2,5
b = Y – aX
= 44,53– (45,52) (1) = -0,99
Jadi, persamaan garis untuk mendapatkan nilai IC50 adalah Y = 45,52X - 0,99
Nilai IC50 => Y = 45,52X - 0,99
50 = 45,52X - 0,99
X = 1,12 µg/mL
60
Lampiran 10. Perhitungan persen peredaman dan nilai IC50 vitamin c
• Perhitungan persen peredaman vitamin c
1. Tabel data absorbansi DPPH pengukuran I
1. 0 0,971
2. 2 0,752
3. 4 0,542
4. 6 0,297
5. 8 0,106
Akontrol−Asampel
Akontrol
Perhitungan % peredaman vitamin c (pengukuran I)
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,752
0,971
= 22,55%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,542
0,971
= 44,18%
Akontrol−Asampel
Akontrol
61
0,971−0,297
0,971
= 69,41%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,106
0,971
= 89,08%
2. Tabel data absorbansi DPPH pengukuran II
1. 0 0,971
2. 2 0,752
3. 4 0,542
4. 6 0,297
5. 8 0,106
Akontrol−Asampel
Akontrol
Perhitungan % peredaman vitamin c (pengukuran II)
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,752
0,971
= 22,55%
62
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,542
0,971
= 44,18%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,297
0,971
= 69,41%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,106
0,971
= 89,08%
3. Tabel data absorbansi DPPH pengukuran III
1. 0 0,971
2. 2 0,752
3. 4 0,542
4. 6 0,297
5. 8 0,106
Akontrol−Asampel
Akontrol
63
Perhitungan % peredaman vitamin c (pengukuran III)
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,752
0,971
= 22,55%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,542
0,971
= 44,18%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,297
0,971
= 69,41%
Akontrol−Asampel
Akontrol
0,971−0,106
0,971
= 89,08%
64
• Perhitungan nilai IC50
Tabel IC50 dari vitamin c
NO X Y XY X2 Y2
1 0 0 0 0 0
2 2 22,55 45,1 4 508,50
3 4 44,18 176,72 16 1951,87
4 6 69,41 416,46 36 4817,75
5 8 89,08 712,64 64 7935,25
TOTAL 20 225,22 1350,92 120 15213,37
RATA-RATA 4 45,04 270,18 24 3042,67
Keterangan :
X = Konsentrasi (µg/mL)
Y = % Peredaman
r=
 XY − ( X . Y ) / n 1350,92 − (20)(225,22) / 5
{ X − ( x) / n}{ Y − ( Y ) / n}  
=
2 2 2 2
{120 − (20) 2 / 5 }{15213,37 − [(225,22 2 ) / 5}
= 0,99949
a=
 XY − ( X . Y ) / n = 1350,92 − (20)(225,22) / 5 = 450,04 = 11,25
 X − ( x) / n
2 2
120 − (20) / 5 2 40
b = Y – aX
= 45,04– (11,25) (4) = 0,04
Jadi, persamaan garis untuk mendapatkan nilai IC50 adalah Y = 11,25X + 0,04
Nilai IC50 => Y= 11,25X + 0,04
50 = 11,25X + 0,04
X = 4,44 µg/mL
65

Jurnal Usu Ekstrak Etanol DPPH

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Jurnal Usu Ekstrak Etanol DPPH

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Universitas Sumatera Utara

Repositori Institusi USU http://repositori.usu.ac.id

Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

melimpahankan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menjalani masa

perkuliahan dan penelitian hingga akhirnya menyelesaikan penyusunan skripsi

dengan judul “Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Buah Kemloko

(Phyllanthus emblica L.) dengan Metode DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil)”.

pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Penulis menyampaikan terima kasih kepada Dekan Fakultas Farmasi

selama masa pendidikan dan penelitian.

Rasa hormat dan terimakasih yang sebesar-besarnya saya sampaikan

Penulis menyampaikan rasa terima kasih serta penghargaan sebesar-

doa, serta materil selama perkuliahan hingga penyelesaian skripsi ini.

Pada kesempatan kali ini penulis juga mengucapkan terimakasih kepada

Mantul, Mak Bebek, Penggeser Dispenser Botani, Siti Khalisyah, Bimbingan

memberikan dukungan selama penelitian dan penyusunan skripsi ini berlangsung.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih memiliki banyak kekurangan.

bermanfaat dan menjadi sumber informasi tambahan bagi kita semua.

Medan, 29 Maret 2019

Latarbelakang:buah kemloko (Phyllanthus emblica L.) secara tradisional

Kata kunci: Antioksidan, ekstrak etanol, Phyllanthus emblica L., DPPH

Background:kemloko fruit (Phyllanthus emblica L.) traditionally isused as

Keywords: Antioxidants, extracts of ethanol, Phyllanthus emblica L., DPPH

HALAMAN SAMPUL ..................................................................................... i

4.1 Hasil karakterisasi simplisia buah kemloko

1.1 Kerangka Pikir Penelitian ...............................................................................5

1. Buah kemloko ..................................................................................... 48

1. Hasil identifikasi tumbuhan ............................................................... 46

1.1 Latar Belakang

Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menetralkan radikal bebas di

dalam tubuh manusia. Enzim-enzim seperti superoksida dismutase (SOD),

manusia. Pertumbuhan radikal bebas yang melebihi kapasitas antioksidan di

dalam tubuh akan meningkatkan resiko timbulnya berbagai penyakit regeneratif

mengandalkan antioksidan dari dalam tubuh, manusia juga membutuhkan

dihasilkandari proses metabolisme normal maupun dari lingkungan, seperti asap

berakibat terhadap kerusakan sel dan memicu patogenesis berbagai penyakit

seperti penyakit kardiovaskular, hipertensi, hiperlipidemia, diabetes, alzheimer,

dan Parkinson. Dalam hal ini antioksidan berperan mencegah terjadinya

kerusakan jaringan yang disebabkan radikal bebas dengan cara mengeliminir

terbentuknya radikal, meredam, atau meningkatkan penguraiannya (Saefudin

Salah satu tanaman yang memiliki aktivitas antioksidan cukup tinggi

digunakan untuk mengobati penyakit kanker, diabetes, hati (liver), gangguan

Ada sejumlah besar metode untuk menentukan kapasitas antioksidan

berdasarkan prinsip yang berbeda: pengumpulan radikal peroksil (Oxygen Radical

Absorbance capacity, ORAC); Total Radical-trapping Antioxidant Power

(TRAP); daya pereduksi logam (Ferric Reducing Antioksidant Power, FRAP);

Cupric Reducing Antioksidant Power (CUPRAC); pengumpulan radikal hidroksil

(uji deoxiribose); pengumpulan radikal organik (2,2-Azino-bis(3-ethylbenz-

thiazoline-6-sulfonic acid, ABTS); 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH);

kuantifikasi produk yang terbentuk selama peroksidasi lipid (Thiobarbituric Acid

Reactive Substances, TRAPS); Low-density Lipoproteins (LDL), dan lain-lain

(Marinova dan Batchvarov, 2011).

Penentuan aktivitas antioksidan pada penelitian ini menggunakan metode

DPPH. Metode uji aktivitas antioksidan dengan DPPH (1,1-difenil-2-

menguji kemampuan senyawa yang berperan sebagai pendonor elektron (Al

Ridho dkk., 2013).

Prinsip dari metode uji aktivitas antioksidan ini adalah pengukuran

aktivitas antioksidan secara kuantitatif yaitu dengan melakukan pengukuran