Penetapan Total Fenol Dan Flavanoid Daun Kucai

Universitas Sumatera Utara
Repositori Institusi USU http://repositori.usu.ac.id

Fakultas Hukum Skripsi Sarjana
2018
Penetapan Kadar Total Fenol dan Total

Flavonoid dari Ekstrak Daun Kucai
(Allium schoenoprasum L.) dengan
Metode Spektrofotometri UV-Vis
Sari, Marselina Purnama

http://repositori.usu.ac.id/handle/123456789/10626
Downloaded from Repositori Institusi USU, Univsersitas Sumatera Utara
PENETAPAN KADAR
TOTAL FENOL DAN TOTAL FLAVONOID DARI EKSTRAK
DAUN KUCAI (Allium schoenoprasum L.)
DENGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
SKRIPSI
OLEH:
MARSELINA PURNAMA SARI
NIM 141501062
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018

PENETAPAN KADAR
TOTAL FENOL DAN TOTAL FLAVONOID DARI EKSTRAK
DAUN KUCAI (Allium schoenoprasum L.)
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh

Gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
OLEH:
MARSELINA PURNAMA SARI
NIM 141501062
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018

KATA PENGANTAR
Puji dan syukur saya panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa karena
berkat kasih dan karunia-Nya, saya dapat melewati masa perkuliahan, penelitian
dan hingga penyusunan skripsi dengan baik. Adapun judul skripsi saya adalah
“Penetapan Kadar Total Fenol dan Total Flavonoid dari Ekstrak Daun Kucai
(Allium schoenoprasum L.) dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis”. Skripsi ini
merupakan salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Farmasi dari
Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Dalam menyelesaikan skripsi ini tidak terlepas dari hambatan ataupun
kesulitan yang saya temui, namun berkat bantuan moril maupun materil serta
dukungan dan saran dari berbagai pihak saya dapat melaluinya dengan baik
hingga skripsi ini selesai. Oleh karena itu, saya ingin mengucapkan terima kasih
yang sebesar-besarnya kepada Ibu Prof. Dr. Siti Morin Sinaga, M.Sc. Apt., selaku
pembimbing, yang telah mengajarkan, membimbing dan mengarahkan saya
selama penelitian hingga penyusunan skripsi ini sehingga menghasilkan skripsi
yang lebih baik. Ibu Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt., dan Ibu Dra. Masria Lasma
Tambunan, M.Si., Apt., selaku dosen penguji yang telah bersedia menguji dan
memberikan arahan untuk menyempurnakan skripsi ini. Bapak dan Ibu dosen
Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan ilmu-ilmu
yang berharga selama perkuliahan.
Saya juga mengucapkan terima kasih kepada orangtua tercinta, Ayahanda
Tiam Huang dan Ibunda Lie Tjin serta adik tercinta Descham Winaldo yang telah
memberikan dukungan dan kasih sayang yang tak terhingga serta doa yang selalu
mereka panjatkan agar jalan saya menuju Sarjana tidak menemui hambatan.
iv
Tak lupa saya ucapkan terima kasih kepada Delviana, S.Farm. yang telah
bersedia meluangkan waktunya untuk saling bertukar pikiran dan memberi saran
selama penelitian ini. Terima kasih kepada sahabat seperjuangan Octavina Bakie,
Gra Cella, Cyntia Syahrir, Jennifer Agustina, Vina Kumalasari, Cindy, Kevin, dan
Steven Tandiono yang telah banyak membantu saya dan saling berbagi ilmu untuk
kelancaran penelitian, sahabat tercinta, Pavita Puansari, Elvina Valencia, B. Ed.,
Sherly Roselliny Kencana, Emilia, teman-teman pengurus KMB-USU 2017/2018,
N.Y.P.D., asisten-asisten dan laboran Teknologi Sediaan Farmasi III (Steril) dan
teman-teman angkatan 2014 Farmasi Universitas Sumatera Utara yang senantiasa
selalu memberikan dukungan serta doa-nya sehingga saya selalu bersemangat
menyelesaikan skripsi ini.
Saya menyadari sepenuhnya bahwa skripsi ini masih belum sempurna,
sehingga saya mengharapkan kritik dan saran yang membangun untuk menambah
pengetahuan dan wawasan saya di masa depan.
Akhir kata saya berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi rekan-
rekan di bidang farmasi serta adik-adik Fakultas Farmasi Universitas Sumatera
Utara.
Medan, 17 Juli 2018

Penulis,
Marselina Purnama Sari

NIM 141501062
v
SURAT PERNYATAAN
Saya yang bertanda tangan di bawah ini:
Nama : Marselina Purnama Sari
Nomor Induk Mahasiswa : 141501062
Program Studi : S-1 Reguler Farmasi
Judul Skripsi : Penetapan Kadar Total Fenol dan Total Flavonoid

dari Ekstrak Daun Kucai (Allium schoenoprasum L.)
dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis.
Dengan ini menyatakan bahwa skripsi ini ditulis berdasarkan data dan hasil
pekerjaan yang saya lakukan sendiri, dan belum pernah diajukan orang lain untuk
memperoleh gelar kesarjanaan di perguruan tinggi lain, dan bukan plagiat karena
kutipan yang ditulis telah disebutkan sumbernya di dalam daftar pustaka.
Apabila dikemudian hari ada pengaduan dari pihak lain karena di dalam
skripsi ini ditemukan plagiat karena kesalahan saya sendiri, maka saya bersedia
mendapat sanksi apapun oleh Program Studi Fakultas Farmasi Universitas
Sumatera Utara, dan bukan menjadi tanggung jawab pembimbing.
Demikianlah surat pernyataan ini saya perbuat dengan sebenarnya untuk
dapat digunakan jika diperlukan sebagaimana mestinya.
Medan, 17 Juli 2018

Penulis
Marselina Purnama Sari

NIM 141501062
vi
PENETAPAN KADAR TOTAL FENOL DAN TOTAL FLAVONOID DARI
EKSTRAK DAUN KUCAI (Allium schoenoprasum L.)
ABSTRAK
Sumber daya alam bahan obat dan obat tradisional merupakan aset
nasional yang perlu digali, diteliti, dikembangkan dan dioptimalkan
pemanfaatannya. Salah satu sumber daya alam yang dapat dijadikan bahan obat
adalah tanaman kucai, terutama bagian daunnya. Daun kucai mengandung
senyawa flavonoid yang berpotensi sebagai antioksidan.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kadar total fenol dan total
flavonoid yang terkandung di dalam ekstrak simplisia daun kucai serta uji
aktivitas antioksidan dari ekstrak simplisia daun kucai dengan empat pelarut yang
memiliki polaritas yang berbeda. Penelitian ini dilakukan secara eksperimental
meliputi pengumpulan sampel, pengolahan sampel, skrining fitokimia dan
pembuatan ekstrak. Simplisia daun kucai kemudian diekstraksi dengan metode
infusa menggunakan pelarut air dan metode maserasi menggunakan pelarut
etanol, etil asetat dan n-heksan. Penetapan kadar total fenol dilakukan dengan
metode kolorimetri menggunakan reagen Folin-Ciocalteau dan penetapan kadar
total flavonoid dilakukan dengan metode kolorimetri dengan penambahan
pereaksi AlCl3. Penentuan uji aktivitas antioksidan ekstrak simplisia daun kucai
menggunakan metode peredaman radikal bebas DPPH (1,1-diphenyl-2-
picrylhydrazil) yang diukur menggunakan spektrofotometer UV-Vis.
Hasil penentuan kadar total fenol terbanyak terdapat pada ekstrak etanol
simplisia daun kucai sebesar 111,2839 mg GAE/g ekstrak sedangkan kadar total
flavonoid terbanyak terdapat pada ekstrak etil asetat sebesar 34,6390 mg QE/g
ekstrak. Aktivitas antioksidan terbesar terdapat pada ekstrak etil asetat simplisia
daun kucai dengan nilai IC50 236,5093 µg/ml.
Kata kunci : Daun kucai, total fenol, total flavonoid, antioksidan, IC 50, DPPH.
vii
DETERMINATION OF
TOTAL PHENOLIC AND TOTAL FLAVONOID CONTENT OF
EXTRACTS OF CHIVES LEAVES (Allium schoenoprasum L.)
USING SPECTROPHOTOMETRY UV-VIS METHOD
ABSTRACT
Natural resources and traditional medicines are national assets that need to
be explored, researched, developed and optimized for their use. One of the natural
resources that can be used as medicinal ingredients is chives, especially the
leaves. Chives leaves contains flavonoid which is potential as antioxidants.
This research aimed to determine the total phenol and total flavonoid
content and also to determine the antioxidant activity in extract of chives leaves
with four solvent that have different polarity. This research was conduted
experimentally and involved the collection, sample processing, production of
extract and phytochemical screening. Simplicia of chives leaves was being
extraction by using infusion method with water solvent and another extracts made
by maceration method using ethanol, ethyl acetate and n-hexana solvent. Total
phenolic content was determined by colorimetric method using Folin-Ciocalteu
reagent. Total flavonoid content was determined with colorimetric method using
AlCl3 reagent. Antioxidants activity was determined by using DPPH (1,1-
diphenyl-2-picrylhydrazil) as a free radical method and was measured by using
spectrophotometer UV-Vis.
The determination of total phenolic content was found in extract of ethanol
of chives leaves showed the value 111.2839 mg GAE/g extract while total
flavonoid content was found in extract of ethyl acetate 34.6390 mg QE/g extract.
The greatest antioxidant activity was found in the extract of ethyl acetate of chives
leaves with the value of IC50 was 236.5093 µg/ml.
Keywords : Chives, total phenolic content, total flavonoid content, antioxidant,

IC50, DPPH.
viii
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ................................................................................................... i
HALAMAN JUDUL............................................................................... ii
LEMBAR PENGESAHAN ................................................................... iii
KATA PENGANTAR ............................................................................ iv
SURAT PERNYATAAN........................................................................ vi
ABSTRAK ......................................................................................... vii
ABSTRACT ......................................................................................... viii
DAFTAR ISI .......................................................................................... ix
DAFTAR TABEL .................................................................................. xv
DAFTAR GAMBAR ............................................................................. xvi
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN ........................................ xvii
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................... xviii
BAB I PENDAHULUAN ................................................................. 1
1.1 Latar Belakang ................................................................ 1
1.2 Perumusan Masalah ........................................................ 4
1.3 Hipotesis ......................................................................... 4
1.4 Tujuan Penelitian ............................................................ 5
1.5 Manfaat Penelitian .......................................................... 5
1.6 Kerangka Penelitian ........................................................ 6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................... 7
2.1 Uraian Tumbuhan ............................................................ 7
2.1.1 Sistematika Tumbuhan .......................................... 7
ix
2.1.2 Nama Daerah .......................................................... 7
2.1.3 Nama Asing ........................................................... 7
2.1.4 Morfologi Tumbuhan ............................................. 7
2.1.5 Kandungan Kimia .................................................. 8
2.1.6 Kegunaan Kucai ..................................................... 9
2.2 Penelitian Mengenai Tumbuhan Kucai ........................... 9
2.3 Penelitian Mengenai Tumbuhan yang Berkhasiat sebagai

Antioksidan ..................................................................... 10
2.4 Ekstrak ............................................................................ 10
2.5 Senyawa Fenol ................................................................ 12
2.6 Senyawa Flavonoid ........................................................ 12
2.7 Radikal Bebas ................................................................. 14
2.8 Antioksidan ..................................................................... 15
2.9 Metode Pengujian Antioksidan ...................................... 16
2.10 Spektrofotometer UV-Vis .............................................. 18
BAB III METODE PENELITIAN....................................................... 20
3.1 Lokasi Penelitian ............................................................. 20
3.2 Alat-Alat Dan Bahan ...................................................... 20
3.2.1 Alat-alat ................................................................. 20
3.2.2 Bahan-bahan .......................................................... 20
3.3 Sampel penelitian ........................................................... 21
3.3.1 Identifikasi Sampel ............................................... 21
3.3.2 Penyiapan Sampel ................................................. 21
3.4 Pembuatan Pereaksi ........................................................ 21
3.4.1 Pereaksi H2SO4 2 N ................................................ 22
x
3.4.2 Pereaksi HNO3 0,5 N .............................................. 22
3.4.3 Pereaksi Molisch .................................................... 22
3.4.4 Pereaksi Liebermann-Bouchard ............................. 22
3.4.5 Pereaksi Mayer ....................................................... 22
3.4.6 Pereaksi Dragendorff .............................................. 22
3.4.7 Pereaksi Bouchardat ............................................... 23
3.4.8 Pereaksi HCl 2 N .................................................... 23
3.4.9 Pereaksi FeCl3 10% ................................................ 23
3.4.10 Pereaksi Pb(CH3COO)2 ........................................ 23
3.5 Karakterisasi Simplisia ................................................... 23
3.5.1 Penetapan Kadar Air ............................................. 24
3.5.2 Penetapan Kadar Abu Total .................................. 25
3.5.3 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam ............. 25
3.5.4 Penetapan Kadar Sari Larut Air ............................ 25
3.5.5 Penetapan Kadar Sari Larut Etanol ....................... 25
3.6 Skrining Fitokimia .......................................................... 26
3.6.1 Pemeriksaan Alkaloid ........................................... 26
3.6.2 Pemeriksaan Glikosida .......................................... 26
3.6.3 Pemeriksaan Saponin .............................. .............. 27
3.6.4 Pemeriksaan Flavonoid ......................................... 27
3.6.5 Pemeriksaan Tanin ................................................ 27
3.6.6 Pemeriksaan Triterpenoid/Steroid ......................... 28
3.7 Pembuatan Ekstrak .......................................................... 28
3.7.1 Pembuatan Infusa Kental 10% Daun Kucai ........... 28
xi
3.7.2 Pembuatan Ekstrak Kental Etanol Daun Kucai .... 28
3.7.3 Pembuatan Ekstrak Kental Etil Asetat Daun Kucai 29
3.7.4 Pembuatan Ekstrak Kental n-Heksan Daun Kucai 29
3.8 Penetapan Kadar Total Fenol ......................................... 30
3.8.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Asam Galat ......... 30
3.8.2 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Asam

Galat……. .............................................................. 30
3.8.3 Pembuatan Kurva Kalibrasi Asam Galat ............... 30
3.8.4 Penetapan Kadar Total Fenol Infusa Kental

Daun Kucai………. ............................................... 31
3.8.5 Penetapan Kadar Total Fenol Ekstrak Kental ..

Daun Kucai………. ............................................... 31
3.9 Penentuan Kadar Total Flavonoid .................................. 32
3.9.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Kuersetin ............ 32
3.9.2 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum

Kuersetin ............................................................... 32
3.9.3 Pembuatan Kurva Kalibrasi Kuersetin ................... 32
3.9.4 Penetapan Kadar Total Flavonoid Infusa Kental

Daun Kucai ............................................................ 33
3.9.5 Penetapan Kadar Total Flavonoid Ekstrak Kental

Daun Kucai ............................................................ 33
3.10 Pengujian Aktivitas Antioksidan Menggunakan ......

Metode Pemerangkapan Radikal Bebas DPPH ............. 33
3.10.1 Prinsip Metode Pemerangkapan Radikal Bebas

(DPPH) ............................................................... 33
3.10.2 Pembuatan larutan DPPH 0,5 mM ..................... 34
3.10.3 Pengukuran panjang gelombang serapan
xii
maksimum DPPH ............................................... 34
3.10.4 Pembuatan Larutan Uji Infusa Kental Daun

Kucai .................................................................... 34
3.10.5 Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Kental Daun

Kucai .................................................................... 35
3.10.6 Penentuan Persen Pemerangkapan Radikal

Bebas DPPH ……………… ............................... 35
3.10.7 Penentuan nilai IC50 ............................................ 35
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................. 36
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan .......................................... 36
4.2 Karakterisasi Simplisia Daun Kucai ............................... 36
4.3 Hasil Skrining Fitokimia ................................................ 37
4.4 Hasil Penentuan Kadar Total Fenol ................................. 38
4.4.1 Waktu Operasional (Operating Time) ................... 38
4.4.2 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan

Maksimum ............................................................. 38
4.4.3 Hasil Penentuan Kurva Serapan Asam Galat ......... 39
4.4.4 Hasil Penentuan Kadar Total Fenol pada

Infusa Kental dan Ekstrak Kental Daun Kucai ...... 40
4.5 Hasil Penetapan Kadar Total Flavonoid ......................... 41
4.5.1 Waktu Operasional ................................................ 41
4.5.2 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan

Maksimum ............................................................. 41
4.5.3 Hasil Penentuan Kurva Serapan Baku Kuersetin ... 42
4.5.4 Hasil Penentuan Kadar Total Flavonoid pada ...

Infusa Kental dan Ekstrak Kental Daun kucai... ... 43
xiii
4.6 Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan Infusa Kental
dan Ekstrak Kental Daun Kucai Dengan Metode DPPH 44
4.6.1 Waktu Operasional ................................................. 44
4.6.2 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan.

Maksimum DPPH ................................................. 44
4.6.3 Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan pada Infusa .

Kental dan Ekstrak Kental Daun Kucai ................. 45
4.6.4 Hasil Analisis Nilai IC50 ......................................... 47
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ............................................. 49
5.1 Kesimpulan ..................................................................... 49
5.2 Saran ............................................................................... 49
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................ 50
LAMPIRAN ........................................................................................... 53
xiv
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
2.1 Kandungan Zat Gizi pada Kucai ......................................... 8
2.2 Penelitian Mengenai Khasiat dari Tumbuhan Kucai ........... 9
2.3 Penelitian Mengenai Tumbuhan yang Berkhasiat

sebagai Antioksidan ............................................................ 10
4.1 Hasil Karakterisasi Simplisia Daun Kucai .......................... 36
4.2 Hasil Skrining Fitokimia Simplisia Daun Kucai ................. 37
4.3 Nilai Absorbansi Asam Galat .............................................. 39
4.4 Kadar Total Fenol pada Infusa Kental dan Ekstrak Kental
Daun Kucai................................................................. .......... 40
4.5 Nilai Absorbansi Kuersetin ................................................. 42
4.6 Kadar Total Flavonoid pada Infusa Kental dan Ekstrak

Kental Daun Kucai ............................................................... 43
4.7 Hasil Uji Aktivitas Persen Peredaman DPPH pada Infusa

Kental Daun Kucai………………………………………. 45
4.8 Hasil Uji Aktivitas Persen Peredaman DPPH pada Ekstrak

Kental Etanol 96% Daun Kucai…...……….……………… 46

Kental Etil Asetat Daun Kucai……….…………………… 46

n-Heksan Daun Kucai………….……………………. ….. 46
4.11 Nilai IC50 dari larutan Infusa Kental 10% Daun Kucai ........ 47
4.12 Nilai IC50 dari larutan Ekstrak Kental Etanol Daun Kucai .. 47
4.13 Nilai IC50 dari larutan Ekstrak Kental Etil Asetat Kucai .... 47
4.14 Nilai IC50 dari larutan Ekstrak Kental n-Heksan Kucai…. .. 47
xv
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1.1 Skema kerangka penelitian .................................................. 6
2.1 Kalkon, Auron dan Flavonoid ............................................. 13
2.2 Reaksi DPPH dengan Antioksidan ...................................... 18
4.1 Kurva panjang gelombang serapan maksimum asam

galat (775 nm) ...................................................................... 38
4.2 Kurva serapan asam galat ..................................................... 39
4.3 Kurva panjang gelombang serapan maksimum kuersetin

(431,5 nm) ............................................................................ 41
4.4 Kurva serapan kuersetin ...................................................... 42
4.5 Kurva panjang gelombang serapan maksimum DPPH

(516 nm) ............................................................................... 44
xvi
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN
Gambar Halaman
1 Rotary Evaporator ............................................................... 54
2 Panci Infusa .......................................................................... 54
3 Tanaman Kucai ................................................................... 55
4 Daun Kucai .......................................................................... 55
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Surat Hasil Identifikasi Tumbuhan ..................................... 53
2 Gambar Alat ......................................................................... 54
3 Tanaman Kucai .................................................................... 55
4 Bagan Alir Penyiapan Sampel dan Karakterisasi Simplisia 56
5 Bagan Alir Pembuatan Infusa dan Ekstrak Daun Kucai ...... 57
6 Bagan Alir Penetapan Kadar Total Fenol ............................ 61
7 Bagan Alir Pengukuran Kandungan Total ........................... 62
8 Bagan Alir Pengukuran Aktivitas Peredaman

Radikal Bebas DPPH ........................................................... 63
9 Perhitungan Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia

Daun Kucai ........................................................................... 65
10 Perhitungan Persamanan Regresi dari Kurva Serapan

Asam Galat ........................................................................... 68
11 Hasil Penetapan Kadar Total Fenol pada Infusa Kental

dan Ekstrak Kental Daun Kucai ........................................... 69
12 Contoh Perhitungan Kadar Total Fenol pada Infusa

13 Perhitungan Persamanan Regresi dari Kurva Serapan

Kuersetin .............................................................................. 72
14 Hasil Penetapan Kadar Total Flavonoid pada Infusa

Kental dan Ekstrak Kental Daun Kucai ............................... 73
15 Contoh Perhitungan Kadar Total Flavonoid pada Infusa

16 Contoh Perhitungan Persen Peredaman DPPH .................... 76
17 Contoh Perhitungan IC50 ...................................................... 77
xviii
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Sumber daya alam bahan obat dan obat tradisional merupakan aset
nasional yang perlu digali, diteliti, dikembangkan dan dioptimalkan
pemanfaatannya. Sebagai suatu negara dengan wilayah yang mempunyai tingkat
keanekaragaman hayati yang tinggi, potensi sumber daya tumbuhan yang ada
merupakan aset dengan nilai keunggulan komparatif dan sebagai modal dasar
utama dalam upaya pemanfaatan dan pengembangannya untuk menjadi komoditi
yang kompetitif (Kepmenkes RI, 2007).
Kucai (Allium schoenoprasum L.) merupakan salah satu tanaman di
Indonesia yang sering dikonsumsi oleh masyarakat. Seluruh bagian dari tanaman
kucai dapat dimakan (dari pucuk hingga bulbusnya). Bunga kucai dapat
digunakan sebagai rempah penyedap. Aromanya yang sedap membuat kucai
menjadi salah satu bumbu masakan yang favorit (Andarwulan dan Faradilla,
2012). Selain sebagai sumber pangan, daun kucai juga dapat digunakan sebagai
tanaman obat, di mana daun kucai dimakan untuk membersihkan parasit dalam
usus, meningkatkan sistem kekebalan tubuh, menstimulasi pencernaan dan
mengobati anemia (Al-Snafi, 2013).
Daun kucai mengandung zat gizi seperti kalori, protein, lemak,
karbohidrat, kalsium, fosfor, besi dan vitamin (Andarwulan dan Faradilla, 2012).
Daun kucai juga mengandung berbagai senyawa fitokimia antara lain alkaloid,
flavonoid, glikosida, steroid dan tanin (Al-Snafi, 2013). Kandungan zat non-gizi
1
pada kucai seperti senyawa flavonoid dan komponen zat non-gizi lainnya yang
penggunaannya kebanyakan sebagai tanaman obat yang berfungsi sebagai
antioksidan (Andarwulan dan Faradilla, 2012). Flavonoid merupakan turunan
senyawa fenol yang umumnya memiliki sifat analgetik, antiinflamasi,
meningkatkan mortilitas usus, antimikroba, dan lainnya (Andarwulan dan
Faradilla, 2012).
Kandungan total fenol dari daun kucai dapat ditetapkan kadarnya yang
setara dengan asam galat (Gallic acid Equivalent/GAE) dengan menggunakan
reagen Folin-Ciocalteau di medium alkali yang mengakibatkan fenol mengalami
reaksi redoks kompleks dengan asam phosphomolibdat pada reagen Folin-
Ciocalteau membentuk larutan berwarna biru kompleks yang dapat diukur dengan
spektrofotometer UV-Vis (Geng, dkk., 2015).
Sedangkan kandungan total flavonoid dari daun kucai dapat ditetapkan
kadarnya setara dengan kuersetin (Quercetine Equivalent/QE) dengan metode
kolorimetrik dengan menggunakan Aluminium klorida (AlCl 3), di mana AlCl3
akan membentuk kompleks stabil dari senyawa flavon (Bhaigyabati, dkk., 2014).
Penetapan kadar total fenol dan total flavonoid dari daun kucai dibuat dari
ekstrak daun kucai dengan menggunakan pelarut yang berbeda berdasarkan
kepolarannya, dari yang paling polar yaitu air, etanol, etil asetat dan n-heksana.
Untuk pelarut air digunakan dalam proses infusa simplisia daun kucai sedangkan
pada pelarut lainnya menggunakan metode maserasi untuk mendapatkan ekstrak
kental. Berdasarkan studi literatur yang dilakukan belum diketahui sifat senyawa
fenol dan flavonoid yang terdapat dalam daun kucai sehingga digunakan beberapa
jenis pelarut yang berbeda kepolarannya. Penggunaan pelarut yang memiliki
2
perbedaan kepolaran dikarenakan tiap jenis fenol dan flavonoid memiliki
kelarutan yang berbeda-beda tergantung kepada jumlah dan posisi gugus
hidroksil. Beberapa jenis flavonoid seperti rutin terlarut dalam pelarut polar,
kuersetin dalam pelarut semipolar dan sinersetin pelarut non polar (Suryani, dkk.,
2015).
Senyawa flavonoid memiliki potensi sebagai antioksidan. Antioksidan
adalah suatu senyawa atau komponen kimia yang dalam kadar atau jumlah
tertentu mampu menghambat atau memperlambat kerusakan akibat proses
oksidasi (Sayuti dan Yenrina, 2015).
Pengujian aktivitas antioksidan dapat dilakukan dengan berbagai metode,
salah satunya yaitu Electron Transfer Methods (ET), misalnya Ferric Reducing
Antioxidant Power (FRAP) dan 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil (DPPH) Free
Radical Scavenging Assay. Pada umumnya metode yang sering digunakan untuk
menguji aktivitas antioksidan adalah dengan menggunakan radikal bebas DPPH
karena metode ini sederhana, cepat dan tidak membutuhkan banyak reagen seperti
halnya metode lain (Sayuti dan Yenrina, 2015).
Pengukuran absorbansi peredaman DPPH dilakukan dengan
mengggunakan spektrofotometer UV-Vis (400-800 nm), kemudian hasil
absorbansi diinterpretasikan ke dalam nilai IC 50 (Inhibitory Concentration of
50%) di mana IC50 ini menunjukkan konsentrasi substrat yang mampu meredam
50% aktivitas dari radikal bebas DPPH (Molyneux, 2004).
Berdasarkan uraian diatas, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui
kadar total fenol dan total flavonoid yang terkandung di dalam ekstrak daun kucai
dengan pelarut yang berbeda serta pengaruhnya terhadap aktivitas senyawa yang
3
terkandung di dalam ekstrak daun kucai sebagai antioksidan dengan metode
peredaman radikal bebas DPPH yang diukur dengan menggunakan
spektrofotometer UV-Vis.
1.2 Perumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang di atas, maka perumusan masalah pada
penelitian ini adalah :
a. Golongan senyawa kimia apa saja yang terkandung pada simplisia daun
kucai?
b. Apakah penggunaan pelarut yang berbeda dalam pembuatan ekstrak daun
kucai mempengaruhi kandungan total fenol dan total flavonoid dari daun
kucai?
c. Apakah kandungan total fenol dan total flavonoid dalam ekstrak daun kucai
dengan pelarut yang berbeda dapat menunjukkan hasil peredaman aktivitas
radikal bebas yang berbeda?
1.3 Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka hipotesis pada penelitian
ini adalah :
a. Golongan senyawa kimia yang terkandung dalam simplisia daun kucai adalah
alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin, tanin, dan triterpenoid/steroid.
b. Ekstrak daun kucai dengan pelarut yang lebih polar menunjukkan kandungan
total fenol dan total flavonoid yang lebih tinggi dibandingkan ekstrak dengan
pelarut lainnya.
4
c. Semakin tinggi kadar total fenol dan total flavonoid dalam ekstrak maka
semakin tinggi aktivitas peredaman radikal bebas DPPH.
1.4 Tujuan Penelitian
Tujuan dilakukannya penelitian ini adalah :
a. Untuk mengetahui kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam simplisia
daun kucai.
b. Untuk mengetahui pengaruh kepolaran pelarut terhadap kandungan total fenol
dan total flavonoid dari ekstrak daun kucai.
c. Untuk mengetahui pengaruh kandungan total fenol dan total flavonoid
ekstrak daun kucai dalam pelarut yang berbeda terhadap aktivitas peredaman
radikal bebas DPPH.
1.5 Manfaat Penelitian
Manfaat dari penelitian ini adalah diharapkan hasil penelitian ini dapat
memberikan informasi dalam perkembangan farmasi khususnya di bidang
penemuan obat-obatan tradisonal yang baru sebagai antioksidan.
5
1.6 Kerangka Pemikiran
Daun
Kucai 1. Alkaloid
2. Glikosida
3. Flavonoid
4. Saponin
Simplisia daun Skrining
5. Tanin
Kucai Fitokimia 6. Steroid/
Triterpenoid
Kandungan
Infusa dan Ekstrak Total Fenol Uji Aktivitas
Antioksidan dengan
daun Kucai
metode peredaman
(air, etanol, etil- Kandungan radikal bebas (DPPH)
Total Flavonoid
asetat, n-heksan)
Nilai IC50
Gambar 1.1 Skema Kerangka Pemikiran
6
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tumbuhan
2.1.1 Sistematika Tumbuhan
Menurut Anonim (2018) sistematika tumbuhan kucai adalah sebagai
berikut:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Class : Monocotyledoneae
Ordo : Liliales
Famili : Liliaceae
Genus : Allium
Spesies : Allium schoenoprasum L.
2.1.2 Nama Daerah
Lokio (Melayu), ganda isi (Palembang), langkio dan kucai (Sunda, Jawa)
(Badan POM RI, 2008).
2.1.3 Nama Asing
Chivet, cive garlic, chive (Inggris); patzia (Cekoslovakia); ciboullete
(Perancis); schnittlauch (Jerman); cipoletta (Italia); cebollino (Spanyol); purlog
(Denmark); bislook (Belanda) (Badan POM RI, 2008).
2.1.4 Morfologi Tumbuhan
Tumbuhan kucai umumnya memiliki tinggi sekitar 15-50 cm, membentuk
rumpun, dan berumbi. Daun kucai berwarna hijau, ramping, pipih dan
7
memanjang, serta memiliki aroma yang tajam. Bunga kucai berwarna putih dan
ungu (Andarwulan dan Faradilla, 2012). Daun kucai berbentuk bulat dan biasanya
bertekstur halus. Bagian umbi kucai berwarna putih dengan ukuran yang kecil dan
bulat memanjang (Badan POM RI, 2008).
2.1.5 Kandungan Kimia
Kucai mengandung senyawa fitokimia seperti alkaloid, fenol, flavonoid
glikosida yang merupakan sumber biofarmaka dalam pengembangan tanaman
obat modern (Al-Snafi, 2013). Kandungan zat non-gizi pada kucai seperti
senyawa flavonoid dari golongan flavonol (kuersetin dan kaemferol) serta flavon
(mirisetin) dan komponen zat non-gizi lainnya yang penggunaannya kebanyakan
sebagai tanaman obat yang berfungsi sebagai antioksidan (Andarwulan dan
Faradilla, 2012).
Selain kandungan tersebut, kucai juga mengandungan zat gizi. Kandungan
zat gizi pada kucai dapat dilihat pada Tabel 2.1
Tabel 2.1 Kandungan zat gizi pada Kucai

Komponen zat gizi Kandungan per 100 g
Kalori 45 cal
Protein 2,2 g
Lemak 0,3 g
Karbohidrat 10,3 g
Kalsium 52 mg
Fosfor 50 mg
Besi 1,1 mg
Aktivitas Vitamin A 40 I.U.
Tiamin (Vitamin B1) 0,11 mg
Asam askorbat (Vitamin C) 17 mg
Air 83,4 %
Sumber : Andarwulan dan Faradilla (2012).
8
2.1.6 Kegunaan Kucai
Seluruh bagian dari tumbuhan kucai dapat dimakan (dari pucuk hingga
bawangnya). Daun kucai yang beraroma tajam dan pekat dapat dicacah dan
dicampurkan dengan masakan seperti telur dadar. Bunga kucai dapat digunakan
sebagai rempah penyedap (Andarwulan dan Faradilla 2012).
Kucai juga dimanfaatkan masyarakat Indonesia untuk mengatasi
keputihan, darah tinggi, sembelit, meningkatkan sistem kekebalan tubuh,
membunuh kuman bakteri dalam usus, mengobati anemia serta memiliki khasiat
melancarkan aliran darah dan menghindari pembekuan darah (Andarwulan dan
Faradilla, 2012; Al-Snafi, 2013).
2.2 Penelitian Mengenai Tumbuhan Kucai
Terdapat beberapa penelitian mengenai khasiat dari tumbuhan kucai yang
dapat dilihat pada Tabel 2.2.
Tabel 2.2 Penelitian mengenai khasiat dari tumbuhan Kucai

Bagian yang
Bahan Uji Khasiat Rujukan
digunakan
Semua bagian Ekstrak Antioksidan Al-Snafi, 2013
Semua bagian Ekstrak Antioksidan Lenkova, dkk., 2016
Bulbus Ekstrak Antihipertensi Amalia, dkk., 2008
Ervianingsih dan
Daun Ekstrak Antimikroba Razak, A., 2017
Umbi Ekstrak Antimikroba Sihombing, D. R., 2014
Daun Ekstrak Antilithogenesis Hutabalian, 2018
Daun Infusa Antilithogenesis Wardhany, S., 2018
9
2.3 Penelitian Mengenai Tumbuhan yang Berkhasiat sebagai Antioksidan
Penelitian dari berbagai tumbuhan yang berkhasiat sebagai antioksidan
dapat dilihat pada Tabel 2.3.
Tabel 2.3 Penelitian dari berbagai tumbuhan yang berkhasiat sebagai antioksidan
Tumbuhan Bahan Uji Metode Rujukan
Bawang putih
Ekstrak DPPH
(Allium sativum)
Lenkova, dkk., 2016
Bawang merah
Ekstrak DPPH
(Allium cepa)
Bawang prei
Ekstrak DPPH Al-Snafi, 2013
(Allium porrum)
Bawang putih
Ekstrak DPPH
(Allium sativum)
Sinaga, G., 2016
Bawang Batak
Ekstrak DPPH
(Allium chinense)
2.4 Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi
senyawa aktif yang terdapat dalam simplisia menggunakan pelarut yang sesuai,
kemudian pelarut akan diuapkan dan massa yang tersisa diperlakukan sedemikian
hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Anonim, 2000).
Terdapat beberapa metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut, yaitu:
i. Cara dingin
a. Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut
dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan.
Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan secara terus-menerus.
Remaserasi adalah pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan
penyaringan maserat pertama, dan seterusnya (Anonim, 2000).
10
b. Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna
yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. Proses terdiri dari
pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya
(penetesan/penampungan ekstrak) secara terus menerus sampai diperoleh
ekstrak (perkolat) yang jumlah satu sampai lima kali dari bahan (Anonim,
2000).
ii. Cara panas
a. Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut tertentu pada temperatur titik
didihnya, selama waktu tertentu dengan jumlah pelarut yang terbatas yang
relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Proses pengulangan dilakukan
pada residu pertama sebanyak tiga sampai lima kali hingga proses ekstraksi
sempurna (Anonim, 2000).
b. Sokletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang
dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi terus-menerus dengan
jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik (Anonim,
2000).
c. Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan terus-menerus) pada
temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan, yaitu secara umum
dilakukan pada temperatur 40-500C (Anonim, 2000).
d. Infusa adalah ekstraksi dengan pelarut air di mana bejana infus tercelup
dalam penangas air mendidih dengan temperatur 90 0C selama 15 menit
(Anonim, 2000).
e. Dekoktasi adalah infus pada waktu yang lebih lama (lebih dari 30 menit) dan
temperatur sampai titik didih air (Anonim, 2000).
11
2.5 Senyawa Fenol
Senyawa fenol adalah senyawa yang memiliki satu atau lebih gugus
hidroksil yang menempel di cincin aromatik. Senyawa fenol cenderung mudah
larut dalam air karena umumnya sering kali berikatan dengan gula sebagai
glikosida, dan biasanya terdapat dalam vakuola sel. Flavonoid merupakan salah
satu golongan terbesar fenol (Harborne, 1984).
Salah satu contoh senyawa fenolat adalah asam galat yang banyak terdapat
pada tumbuhan berkayu, merupakan senyawa yang sangat reaktif (Harborne,
1984).
2.6 Senyawa Flavonoid
Flavonoid terdistribusi luas pada tanaman. Flavonoid merupakan
kandungan khas tumbuhan yang terdapat hampir pada semua bagian tumbuhan
seperti daun, akar, kayu, kulit, tepung sari, nectar, bunga dan biji. Flavonoid
memiliki peranan yang cukup beragam pada tanaman, mulai dari memproduksi
pigmen berwarna kuning, merah, atau biru pada bunga, hingga sebagai penangkal
terhadap mikroba dan insekta (Andarwulan dan Faradilla, 2012).
Flavonoid biasanya terdapat dalam sebagai flavonoid O-glikosida; pada
senyawa tersebut terdapat satu gugus hidroksil flavonoid (atau lebih) terikat pada
satu gula (atau lebih) dengan ikatan hemiasetal yang tak tahan asam. Pengaruh
glikosilasi menyebabkan flavonoid menjadi kurang reaktif dan lebih mudah larut
dalam air; sifat terakhir ini memungkinkan penyimpanan flavonoid di dalam
vakuola sel (Markham, 1982).
12
Senyawa flavonoid merupakan salah satu senyawa polifenol yang
memiliki struktur dasar terdiri atas 15 atom C (C 6-C3-C6), dimana dua cincin
aromatik yang dihubungkan oleh satuan karbon yang dapat atau tidak dapat
membentuk cincin ketiga (Harborne, 1984).
Berdasarkan perbedaan struktur C3 yang mengikat dua gugus benzen,
flavonoid dapat dibagi menjadi tiga jenis. Ketiga jenis tersebut adalah kalkon,
auron, dan flavonoid (Andarwulan dan Faradilla, 2012). Gambar struktur kalkon,
auron dan flavonoid dapat dilihat pada Gambar 2.1.
(i) (ii)
(iii)
Gambar 2.1 (i) Kalkon; (ii) Auron dan (iii) Flavonoid (Andarwulan dan
Faradilla, 2012).
Kuersetin (3,4-dihidroksiflavonol) merupakan senyawa flavonoid dari
kelompok flavonol dan terdapat terutama pada tanaman teh, tomat, apel, kakao,
anggur dan bawang. Kuersetin dapat memberikan manfaat sebagai pemusnah
radikal bebas jika dikonsumsi dalam jumlah yang cukup (50-200 mg per hari)
sehingga dapat mencegah penuaan dini (Kosasih, dkk., 2004).
13
2.7 Radikal Bebas
Radikal bebas adalah atom atau molekul dengan susunan elektron yang
tidak lengkap atau tidak berpasangan sehingga bersifat tidak stabil dan memiliki
kecenderungan kuat untuk berpasangan. Proses ini terjadi berantai sehingga
menyebabkan kerusakan biologik seperti disfungsi sel yang diikuti inflamasi dan
akhirnya menjadi penyakit degeneratif (Kosasih, dkk., 2004).
Radikal bebas dapat digolongkan menjadi radikal bebas endogen dan
radikal bebas eksogen.
i. Radikal bebas endogen
Radikal bebas endogen adalah radikal bebas dari hasil samping reaksi
biokimia dalam tubuh. Makhluk hidup menghasilkan energi dari hasil
metabolisme dengan mengoksidasi zat zat makanan seperti karbohidrat, lemak
dan protein. Dalam proses oksidasi ini terbentuk radikal bebas dan ROS (Reactive
Oxidative Species), yaitu anion superoksid dan hidroksi radikal. Radikal bebas
dan ROS mudah menempel pada sel-sel tubuh dan merusak dengan mengambil
satu elektron dari sel-sel tubuh (Kosasih, dkk., 2004).
ii. Radikal bebas eksogen
Radikal bebas eksogen adalah radikal bebas yang terbentuk karena
pengaruh dari luar tubuh. Bahan dasar radikal bebas masuk ke dalam tubuh
meliputi obat-obatan (kemoterapeutika), udara (pestisida, polusi udara, asap
rokok, minuman beralkohol). Sinar ultraviolet juga dapat menyebabkan radikal
bebas jika sinar tersebut menerpa suatu benda terus-menerus yang menyebabkan
elektron atom benda tersebut melompat dari orbitnya. Radikal bebas juga
14
diperoleh karena rokok baik perokok aktif maupun perokok pasif (sekunder)
(Kosasih, dkk., 2004).
2.8 Antioksidan
Antioksidan adalah zat yang dapat menetralisir radikal bebas sehingga
atom dengan elektron yang tidak berpasangan mendapat pasangan elektron
sehingga tidak reaktif lagi sehingga melindungi tubuh dari beragam penyakit
degeneratif (Kosasih, dkk., 2004).
Antioksidan dapat dibedakan menjadi dua, yaitu antioksidan internal dan
antioksidan eksternal. Antioksidan internal adalah antioksidan yang diproduksi
oleh tubuh sendiri. Secara alami tubuh mampu menghasilkan antioksidan sendiri,
kemampuan tubuh untuk memproduksi antioksidan alami akan semakin berkurang
dengan bertambahnya usia. Contoh antioksidan internal adalah Super Oxide
Dismutase (SOD), enzim Glutathion Peroxide, dan enzim katalase. Antioksidan
eksternal adalah antioksidan yang diperoleh dari luar tubuh, seperti melalui
asupan makanan yang mengandung antioksidan seperti vitamin C, vitamin E, Beta
Karoten, dan senyawa flavonoid seperti isoflavon yang terdapat dalam kedelai dan
produk makanan dari kedelai (Sayuti dan Yenrina, 2015; Kosasih, dkk., 2004).
Berdasarkan fungsi dan mekanisme kerjanya, antioksidan dapat dibedakan
menjadi tiga jenis, yaitu:
a. Antioksidan primer, bekerja mencegah pembentukan senyawa radikal baru,
yaitu dengan mengubah radikal bebas yang ada menjadi molekul yang
berkurang dampak negatifnya sebelum senyawa radikal bebas bereaksi.
Antioksidan primer mengikuti mekanisme pemutusan rantai (chain-breaking
15
antioxidant) reaksi radikal dengan mendonorkan atom hidrogen secara cepat
pada suatu lipid yang radikal, produk yang dihasilkan lebih stabil dari produk
awal. Contohnya Superoksida Dismutase (SOD), Glutathion Peroxide (GPx),
katalase dan protein pengikat logam. (Sayuti dan Yenrina, 2015).
b. Antioksidan sekunder, berperan sebagai pengikat ion-ion logam, penangkap
oksigen, pengurai hidroperoksida menjadi senyawa non-radikal, penyerap
radiasi UV atau deaktivasi singlet oksigen. Contohnya vitamin E, vitamin C,
beta-karoten, isoflavon, bilirubin dan albumin. Potensi antioksidan ini dengan
cara memotong reaksi oksidasi berantai radikal bebas atau dengan cara
menangkapnya (scavenger free radical) (Sayuti dan Yenrina, 2015).
c. Antioksidan tersier, bekerja memperbaiki kerusakan biomolekul yang
disebabkan oleh serangan radikal bebas. Contoh antioksidan tersier adalah
enzim-enzim yang memperbaiki DNA dan metionin sulfida reduktase (Sayuti
dan Yenrina, 2015).
2.9 Metode Pengujian Antioksidan
Metode untuk menentukan kadar total fenol pada ekstrak tumbuhan yang
merujuk pada prosedur (Geng, dkk., 2015) menggunakan metode kolorimetrik
dengan reagen Folin-Ciocalteau. Senyawa fenol direaksikan dengan reagen Folin-
Ciocalteau dalam suasana basa, gugus hidroksil pada senyawa fenolik akan
bereaksi dengan reagen Folin-Ciocalteau membentuk kompleks molibdeum-
tungsten berwarna biru dan dapat dideteksi dengan spektrofotometer.
Metode untuk menentukan total flavonoid adalah dengan metode
kolorimetrik menggunakan reagen Aluminium klorida (AlCl 3). AlCl3 akan
16
membentuk asam kompleks yang stabil dengan C-4 kelompok keto dan baik C-3
atau C-5 gugus hidroksil dari flavon (Bhaigyabati, dkk., 2014).
Metode pengujian aktivitas antioksidan dikelompokkan menjadi tiga
golongan. Golongan pertama adalah Hydrogen Atom Transfer Methods (HAT),
misalnya Oxygen Radical Absorbance Capacity Method (ORAC) dan Lipid
Peroxidation Inhibition Capacity Assay (LPIC). Golongan kedua adalah Electron
Transfer Methods (ET), misalnya Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) dan
1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil (DPPH) Free Radical Scavenging Assay. Golongan
ketiga misalnya Total Oxidant Scavenging Capacity (TOSC) dan
Chemiluminescence (Sayuti dan Yenrina, 2015).
Metode yang paling umum digunakan untuk pengujian aktivitas
antioksidan adalah menggunakan radikal bebas 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil
(DPPH). Pengukuran antioksidan dengan metode DPPH karena sederhana, cepat
dan tidak membutuhkan banyak reagen seperti halnya metode lain (Sayuti dan
Yenrina, 2015).
Larutan DPPH akan bereaksi dengan senyawa antioksidan sehingga DPPH
akan berubah menjadi non-radikal. Peredaman radikal bebas DPPH akan ditandai
dengan berubahnya warna ungu tua menjadi warna merah muda atau kuning pucat
dan dapat diamati dan diukur menggunakan spektrofotometer sehingga aktivitas
peredaman radikal bebas oleh sampel dapat ditentukan (Molyneux, 2004).
Parameter yang digunakan untuk menunjukkan aktivitas antioksidan
adalah nilai konsentrasi efektif atau Effect Concentration (EC50) atau Inhibition
Concentration (IC50) yaitu konsentrasi suatu zat antioksidan yang menyebabkan
50% dari DPPH kehilangan sifat radikal atau konsentrasi zat antioksidan yang
17
memberikan % peredaman sebesar 50%. Zat yang mempunyai aktivitas
antioksidan yang tinggi, mempunyai nilai IC50 yang rendah (Molyneux, 2004).
Prinsip pengujian aktivitas antioksidan dengan metode DPPH adalah
mengukur daya peredaman sampel (ekstrak) terhadap radikal bebas DPPH. DPPH
akan bereaksi dengan atom hidrogen dari senyawa peredaman radikal bebas
membentuk DPPH yang lebih stabil. Senyawa peredaman radikal bebas yang
bereaksi dengan DPPH akan menjadi radikal baru yang lebih stabil atau senyawa
bukan radikal (Sayuti dan Yenrina, 2015).
Reaksi DPPH dengan antioksidan dapat dilihat pada Gambar 2.2.
Gambar 2.2 Reaksi DPPH dengan antioksidan (Sayuti dan Yenrina, 2015).
2.10 Spektrofotometer UV-Vis.
Spektrofotometri serapan adalah pengukuran serapan radiasi
elektromagnet panjang gelombang tertentu yang sempit, mendekati
monokromatik, yang diserap zat. Pengukuran serapan dapat dilakukan pada
daerah ultraviolet dengan panjang gelombang 190 nm - 380 nm atau pada daerah
cahaya tampak (Visibel) dengan panjang gelombang 380 nm – 780 nm (Ditjen
POM, Depkes RI, 1979).
18
Penetapan kadar sampel dengan spektrofotometer UV-Vis adalah dengan
menggunakan perbandingan absorbansi sampel dengan absorbansi baku, atau
dengan menggunakan persamaan regresi linier yang menyatakan hubungan antara
konsentrasi baku dengan absorbansinya. Persamaan kurva baku selanjutnya
digunakan untuk menghitung kadar dalam sampel (Rohman, 2007).
Menurut Rohman (2007), spektrofotometer yang sesuai untuk pengukuran
di daerah spektrum ultraviolet dan sinar tampak. Komponen- komponen dalam
spektrofotometer UV-VIS meliputi sumber-sumber lampu, monokromator dan
sistem optik.
(i) Sumber-sumber lampu
Sumber lampu deuterium digunakan untuk daerah UV pada panjang
gelombang 190-350 nm, sementara lampu halogen kuarsa atau lampu
tungsten digunakan untuk daerah visibel (sinar tampak) pada panjang
gelombang antara 350-900 nm.
(ii) Monokromator
Monokromator digunakan untuk mendispersikan sinar ke dalam komponen-
komponen panjang gelombangnya yang selanjutnya akan dipilih oleh celah
(slit).
(iii) Optik-optik
Optik dapat dibentuk untuk memecah sumber sinar sehingga sumber sinar
melewati 2 kompartemen, dan sebagaimana dalam spektrofotometer berkas
ganda (double beam), suatu larutan blanko dapat digunakan dalam satu
kompartemen untuk mengkoreksi pembacaan atau spektrum sampel, biasanya
berupa pelarut yang digunakan untuk melarutkan sampel atau pereaksi.
19
BAB III
METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan secara eksperimental yang terdiri dari variabel
terikat yaitu penetapan kadar total fenol dan total flavonoid dengan variabel bebas
menggunakan pelarut yang berbeda serta pengujian aktivitas senyawa antioksidan
menggunakan spektrofotometer UV-Vis.
3.1 Lokasi Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium
Penelitian Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara, pada bulan Januari 2018
sampai April 2018.
3.2 Alat dan Bahan
3.2.1 Alat - alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat-alat gelas
laboratorium, blender, rotary evaporator, cawan penguap, spot plate, stopwatch,
panci infus, krus porselin, oven listrik, lemari pengering, neraca analitik, penangas
air, spektrofotometer UV-Vis. Dapat dilihat pada Lampiran 2.
3.2.2 Bahan – bahan
Bahan- bahan kimia lainnya seperti DPPH (Sigma), asam galat, reagen
Folin-Ciocalteau (Sigma), kuersetin (Sigma). Produksi E-Merck: amil alkohol,
asam asetat anhidrida, asam klorida, asam nitrat, asam sulfat, serbuk magnesium,
kalium iodida, natrium karbonat (Na2CO3), akuades, etil-asetat, etanol, n-heksan,
natrium asetat (CH3COONa), AlCl3, metanol.
20
3.3 Sampel Penelitian
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun kucai dari Pasar
Baru, Perbaungan, Provinsi Sumatera Utara. Foto tanaman kucai dapat dilihat
pada Lampiran 3.
3.3.1 Identifikasi Sampel
Identifikasi daun kucai dilakukan di Herbarium Medanense, Laboratorium
Fakultas Matematika dan Ilmu Penegtahuan Alam (FMIPA) Universitas Sumatera
Utara.
3.3.2 Penyiapan Sampel
Daun kucai yang telah dikumpulkan, dibersihkan dari pengotornya,
selanjutnya dicuci dibawah air mengalir beberapa kali hingga bersih, kemudian
ditiriskan lalu disebarkan diatas perkamen sampai merata hingga airnya terserap,
setelah itu dipisahkan antara daun dan bulbusnya, daun dipotong-potong,
dimasukkan ke dalam lemari pengering pada suhu ± 40 0C selama 5 hari,
kemudian simplisia dihaluskan dan disimpan dalam wadah plastik untuk
mencegah pengaruh lembab dan pengotor lainnya. Simplisia yang dihasilkan
dibagi menjadi lima bagian yaitu untuk skrining fitokimia, pembuatan infusa 10%
daun kucai, ekstrak etanol 96% daun kucai, ekstrak etil-asetat daun kucai, dan
ekstrak n-heksan daun kucai. Untuk lebih jelas dapat dilihat bagan alir penyiapan
sampel dan karakterisasi simplisia pada Lampiran 4.
3.4 Pembuatan Pereaksi
Pembuatan pereaksi yang digunakan dalam penelitian ini meliputi peraksi
asam sulfat (H2SO4) 2 N, asam nitrat (HNO3) 0,5 N, Liebermann-Bouchard,
21
Molisch, Mayer, besi (III) klorida (FeCl3) 10%, Dragendorff, Bouchardat, natrium
hidroksida (NaOH) 2 N, timbal (II) asetat /Pb(CH3COO) 2 0,4 M, asam klorida
HCl 2 N (Depkes RI, 1995).
3.4.1 Pereaksi H2SO4 2 N
Sebanyak 5,5 mL H2SO4 pekat diencerkan dengan akuades hingga volume
100 mL (Dekpkes RI, 1995).
3.4.2 Pereaksi HNO3 0,5 N
Sebanyak 4,2 mL HNO3 diencerkan dengan akuades hingga diperoleh
volume larutan 100 mL (Depkes RI, 1995).
3.4.3 Pereaksi Molisch
Sebanyak 3 gram α-naftol ditimbang, dilarutkan dalam HNO3 0,5 N
hingga diperoleh larutan 100 mL (Depkes RI, 1995).
3.4.4 Pereaksi Liebermann-Bouchard
Sebanyak 5 mL CH3COOH anhidrida dicampurkan perlahan dengan 5 mL
H2SO4 pekat dan ditambahkan etanol hingga 50 mL (Depkes RI, 1995).
3.4.5 Pereaksi Mayer
Sebanyak 1,359 gram HgCl2 ditimbang dan dilarutkan dalam akuades
hingga diperoleh volume larutan 60 mL. Sebanyak 5 gram KI ditimbang,
dilarutkan dalam 10 mL akuades pada wadah yang berbeda, kemudian kedua
larutan dicampurkan dalam satu wadah. Campuran larutan tersebut ditambahkan
akuades hingga diperoleh volume larutan sebanyak 100 mL (Depkes RI, 1995).
3.4.6 Pereaksi Dragendorff
Sebanyak 8 gram Bi(NO)3 ditimbang dan dilarutkan ke dalam 20 mL
HNO3 pekat. Dilarutkan 27,2 gram KI dalam 50 mL akuades pada wadah lain.
22
Kedua larutan tersebut dicampurkan dan didiamkan sampai memisah sempurna.
Larutan yang jernih diambil dan diencerkan dengan akuades hingga diperoleh
larutan dengan volume 100 mL (Depkes RI, 1995).
3.4.7 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 gram KI dilarutkan dalam akuades, kemudian 2 gram iodium
dilarutkan dalam larutan kalium iodide dan dicukupkan dengan akuades hingga
diperoleh larutan 100 mL (Depkes RI, 1995).
3.4.8 Pereaksi HCl 2 N
Sebanyak 17 mL HCl pekat ditambahkan dengan akuades hingga
3.4.9 Pereaksi FeCl3 10%
Sebanyak 10 gram FeCl3 ditimbang dan dilarutkan dalam akuades hingga
3.4.10 Peraksi Pb(CH3COO)2 0,4 M
Sebanyak 15,17 gram Pb(CH3COO)2 dilarutkan dalam akuades bebas CO2
hingga 100 mL (Depkes RI,1995).
3.5 Karakterisasi Simplisia
Karaterisasi simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik, mikroskopik,
penetapan kadar air, penetapan kadar abu total, penetapan kadar abu tidak larut
dalam asam, penetapan kadar sari larut dalam air dan penetapan kadar sari larut
dalam etanol (WHO, 1998).
23
3.5.1 Penetapan Kadar Air
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi toluen).
Metode ini menggunakan alat destilasi, terdiri dari labu alas bulat 500 mL, tabung
penyambung, hot plate, pendingin bola, sirkulator, tabung penerima 10 mL.
a. Penjenuhan toluen
Sebanyak 200 mL toluen dan 2 mL akuades dimasukkan ke dalam labu
alas bulat, dipasang tabung penyambung, alat penambung dan pendingin bola,
kemudian didestilasi selama 2 jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin
selama 30 menit, kemudian volume air di dalam tabung penerima dibaca dengan
ketelitian 0,05 mL dan dicatat.
b. Penetapan kadar air pada simplisia
Ditimbang simplisia sebanyak 5 gram dan dimasukkan ke dalam labu alas
bulat yang berisi penjenuhan toluen tersebut, labu dipanaskan kembali selama 15
menit. Ketika toluen mulai mendidih, kecepatan tetesan diatur 2 tetes per detik
sampai sebagian besar air terdestilasi, kemudian dinaikkan kecepatan tetesan
menjadi 4 tetes per detik. Ketika semua air telah terdestilasi, bagian dalam
pendingin dibilas dengan toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian
tabung penerima dibiarkan mendingin sampai suhu kamar. Air dan toluen
memisah sempurna, volume air dapat dibaca dengan ketelitian 0,05 mL. Selisih
dari kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat di
dalam sampel. Kadar air dihitung dalam persen terhadap berat simplisia yang
ditimbang (WHO, 1998).
24
3.5.2 Penetapan Kadar Abu Total
Ditimbang simplisia yang sudah digerus sebanyak 2 gram, dimasukkan ke
dalam krus porselin yang telah lebih dahulu dipijarkan dan ditara, kemudian
diratakan. Krus dipijarkan sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung
dalam persen terhadap berat simplisia yang telah dikeringkan di udara (Depkes
RI, 1995).
3.5.3 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
Dididihkan abu yang diperoleh dari penetapan kadar abu dengan 25 mL
HCl encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan,
disaring dengan kertas saring bebas abu, dicuci dengan air panas. Residu dan
kertas saring dipijar sampai bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut dalam asam
dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes RI, 1995).
3.5.4 Penetapan Kadar Sari Larut Air
Ditimbang serbuk simplisia sebanyak 5 gram, dimaserasi selama 24 jam
dengan 100 mL air-kloroform (2,5 mL kloroform dalam air hingga 1 liter)
menggunakan labu bersumbat sambil dikocok sekali-kali selama 6 jam pertama,
dibiarkan selama 18 jam dan disaring. Sebanyak 20 mL filtrat diuapkan dalam
cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 1050C
hingga bobot tetap. Kadar sari yang larut dalam air dihitung dalam persen
terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.5.5 Penetapan Kadar Sari Larut Etanol
Ditimbang sebanyak 5 gram serbuk simplisia, dimaserasi selama 24 jam
dengan 100 mL etanol (96%) menggunakan labu tersumbat sambil dikocok
selama 6 jam pertama, dibiarkan selama 18 jam dan disaring. Sebanyak 20 mL
25
filtrat diuapkan dalam cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara. Sisa
dipanaskan pada suhu 1050C hingga bobot tetap. Kadar sari yang larut dalam
etanol dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.6 Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia serbuk simplisia daun kucai meliputi pemeriksaan
senyawa alkaloid, glikosida, saponin, flavonoid, tanin dan steroid/triterpenoid.
3.6.1 Pemeriksaan Alkaloid
Sebanyak 0,5 gram simplisia ditambahkan 1 mL HCl 2 N dan 9 mL air
suling. Dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit, didinginkan dan disaring.
Filtrat dipakai untuk uji alkaloid sebagai berikut :
a. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambah dengan 2 tetes larutan pereaksi Mayer
akan terbentuknya endapan menggumpal berwarna putih atau kuning.
b. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambah dengan 2 tetes larutan pereaksi
Bouchardat, akan terbentuk endapan berwarna coklat sampai kehitaman.
c. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan dengan 2 tetes larutan peraksi
Dragendorff, akan terbentuk endapan berwarna merah atau jingga.
Alkaloid positif jika terjadi endapan atau kekeruhan paling sedikit dua dari
tiga percobaan diatas (Depkes RI, 1995).
3.6.2 Pemeriksaan Glikosida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 3 gram kemudian disari dengan 30
mL campuran 7 bagian volume etanol 96% dan 3 bagian volume air suling
ditambahkan dengan 10 mL HCl 2 N. Direfluks selama 30 menit, lalu didinginkan
dan disaring. Diambil 20 mL filtrat ditambahkan 25 mL air suling dan 25 mL
26
Pb(CH3COO)2 0,4 M, lalu dikocok selama 5 menit dan disaring. Filtrat disari
dengan 20 mL campuran 3 bagian kloroform dan 2 isopropanol dilakukan
berulang sebanyak tiga kali. Kumpulan sari air diuapkan pada temperatur tidak
lebih dari 50oC. Sisa dilarutkan dalam 2 mL air suling dan 5 tetes pereaksi Molish,
kemudian secara perlahan ditambahkan 2 mL H2SO4 pekat. Glikosida positif jika
terbentuk cincin ungu (Depkes RI, 1995).
3.6.3 Pemeriksaan Saponin
Sebanyak 0,5 gram sampel simplisia dimasukkan ke dalam tabung reaksi
dan ditambahkan 10 mL air suling panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-
kuat selama 10 detik, timbul busa yang mantap tidak kurang dari 10 menit
setinggi 1-10 cm, ditambahkan 1 tetes HCl 2 N, bila buih tidak hilang
menunjukkan adanya saponin (Depkes RI, 1995).
3.6.4 Pemeriksaan Flavonoid
Sebanyak 10 gram serbuk simplisia kemudian ditambahkan 100 mL air
panas, dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, filtrat yang
diperoleh kemudian diambil 5 mL lalu ditambahkan 0,1 gram serbuk Mg dan 1
mL HCl pekat dan 2 mL amil alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoid
positif jika terjadi warna merah, kuning, jingga pada lapisan amil alkohol
(Farnsworth, 1996).
3.6.5 Pemeriksaan Tanin
Sebanyak 0,5 gram sampel disari dengan 10 mL air suling, disaring lalu
filtratnya diencerkan dengan air suling sampai tidak berwarna. Diambil 2 mL
larutan filtrat lalu ditambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi FeCl 3. Adanya warna
biru/ hijau kehitaman menunjukkan senyawa tanin (Farnsworth, 1996).
27
3.6.6 Pemeriksaan Stereoid/Triterpenoid
Sebanyak 1 gram sampel dimaserasi dengan n-heksan selama 2 jam, lalu
disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap, pada sisa ditambahkan 2 tetes
CH3COOH anhidrida dan 1 tetes H2SO4 pekat. Timbul warna biru/hijau
menunjukkan adanya steroid dan timbul warna merah, pink atau ungu
menunjukkan adanya triterpenoid (Farnsworth, 1996).
3.7 Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak yang menggunakan pelarut akuades digunakan metode
infusa sedangkan untuk pelarut lainnya menggunakan metode maserasi. Bagan
alir pembuatan infusa dan ekstrak daun kucai dapat dilihat pada Lampiran 5.
3.7.1 Pembuatan Infusa Kental 10% Daun Kucai
Ditimbang seksama 100 gram serbuk simplisia dimasukkan ke dalam
panci infusa kemudian ditambahkan dengan akuades hingga 1000 mL untuk
mendapatkan konsentrasi 10%, dipanaskan pada suhu 90 0C selama 15 menit
sambil diaduk sesekali, diserkai selagi panas dengan kain flanel, dibilas dengan
akuades panas hingga diperoleh volume infusa 1000 mL (Depkes RI, 1995).
Filtrat hasil infusa diuapkan di atas penangas air dengan suhu sekitar 60-700C
hingga dihasilkan infusa kental.
3.7.2 Pembuatan Ekstrak Kental Etanol 96% Daun Kucai
Ditimbang serbuk simplisia sebanyak 200 gram kemudian dimasukkan ke
dalam wadah kaca, dimasukkan 1500 mL etanol 96%, ditutup wadah kaca dan
dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya dan sesekali diaduk. Setelah 5 hari,
maserat disaring, dicuci ampas dengan etanol 96% secukupnya hingga diperoleh
28
2000 mL, lalu dipindahkan dalam bejana tertutup dan dibiarkan di tempat yang
sejuk dan terhindar dari matahari selama 2 hari, kemudian dienap-tuangkan dan
disaring. Maserat yang diperoleh dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu
700C sampai diperoleh maserat pekat (Ditjen POM, Depkes RI, 1979).
3.7.3 Pembuatan Ekstrak Kental Etil Asetat Daun Kucai
dalam wadah kaca, dimasukkan 1500 mL etil asetat ditutup wadah kaca dan
maserat disaring, dicuci ampas dengan etil asetat secukupnya hingga diperoleh
3.7.4 Pembuatan Ekstrak Kental n-Heksan Daun Kucai
dalam wadah kaca, dimasukkan 1500 mL n-heksana ditutup wadah kaca dan
maserat disaring, dicuci ampas dengan n-heksana secukupnya hingga diperoleh
29
3.8 Penetapan Kadar Total Fenol
Penetapan kadar total fenol pada penelitian Ahlem Rebaya, dkk. (2014)
yang dilakukan secara spektrofotometri UV-Vis menggunakan reagen Folin-
Ciocalteau dan asam galat sebagai baku pembanding. Bagan alir penetapan kadar
total fenol dapat dilihat pada Lampiran 6.
3.8.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Asam Galat
Ditimbang asam galat sebanyak 5 mg kemudian dilarutkan dengan
metanol hingga 10 mL dan dihomogenkan sehingga didapatkan larutan dengan
konsentrasi 500 µg/ml.
3.8.2 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Asam Galat
Dipipet 0,1 mL larutan baku asam galat kemudian ditambahkan 7,9 mL
akuades; 0,5 mL Folin-Ciocalteau, divortex selama ± 1 menit; serta ditambahkan
1,5 mL Na2CO3 20%; kemudian diinkubasi selama 90 menit. Diukur panjang
gelombang maksimum menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada rentang
400– 800 nm.
3.8.3 Pembuatan Kurva Kalibrasi Asam Galat
Dipipet dari larutan baku asam galat masing masing 0,3125 mL; 0,625
mL; 1,25 mL; 2,5 mL; 5 mL ke dalam masing- masing labu tentukur 5 mL,
kemudian ditambahkan metanol hingga batas kalibrasi labu tentukur sehingga
diperoleh larutan dengan konsentrasi 31,25 µg/ml; 62,5 µg/ml; 125 µg/ml; 250
µg/ml; dan 500 µg/ml. Dari masing- masing konsentrasi dipipet sebanyak 0,1 mL,
kemudian ditambahkan dengan 7,9 mL akuades; 0,5 mL reagen Folin-Ciocalteau,
divortex selama ± 1 menit; serta ditambahkan 1,5 mL Na 2CO3 20%; kemudian
diinkubasi selama 90 menit. Diukur absorbansi dari masing-masing konsentrasi
30
larutan terhadap reagen yang digunakan (blanko) secara spektrofotometri UV-Vis
(400-800 nm) pada panjang gelombang maksimum. Diperoleh kurva kalibrasi dan
persamaan garis regresi linear y = ax + b dari asam galat.
3.8.4 Penetapan Kadar Total Fenol pada Infusa Kental Daun Kucai
Ditimbang 10,0 mg infusa kental dilarutkan dengan metanol hingga 10 mL
sehingga diperoleh larutan 1000 µg/ml. Diambil larutan uji sebanyak 0,1 mL
kemudian ditambahkan 7,9 mL akuades 0,5 mL reagen Folin-Ciocalteau, divortex
selama ± 1 menit; serta ditambahkan 1,5 mL Na 2CO3 20%; kemudian diinkubasi
selama 90 menit. Diukur absorbansi larutan terhadap kalibrasi asam galat pada
panjang gelombang maksimum secara spektrofotometri UV-Vis.
3.8.5 Penetapan Kadar Total Fenol pada Ekstrak Kental Daun Kucai
Ditimbang 10,0 mg ekstrak kental dilarutkan dengan metanol hingga 10
mL sehingga diperoleh larutan 1000 µg/ml. Diambil larutan uji sebanyak 0,1 mL
kemudian ditambahkan 7,9 mL akuades 0,5 mL reagen Folin-Ciocalteau, divortex
selama ± 1 menit; serta ditambahkan 1,5 mL Na 2CO3 20%; kemudian diinkubasi
selama 90 menit. Diukur absorbansi masing-masing larutan ekstrak kental daun
kucai terhadap kalibrasi asam galat pada panjang gelombang maksimum secara
spektrofotometri UV-Vis. Konsentrasi fenol dalam larutan uji dihitung dari plot
kalibrasi dan kandungan total fenol dinyatakan dalam satuan mg GAE/ gram
ekstrak sampel.
31
3.9 Penetapan Kadar Total Flavonoid
Penetapan kadar total flavonoid ekstrak daun kucai mengacu pada
penelitian Chang C., dkk. (2002) yang dilakukan dengan metode kolorimetri dan
spektrofotometri menggunakan AlCl3 dan kuersetin sebagai pembanding. Bagan
alir penetapan kadar total flavonoid dapat dilihat pada Lampiran 7.
3.9.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Kuersetin
Dibuat larutan kuersetin dengan konsentrasi µg/ml. Sebanyak 10,0 mg
kuersetin dilarutkan dalam metanol sampai volume 100 mL.
3.9.2 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Kuersetin
Dipipet 2 mL dari larutan induk baku kuersetin, ditambahkan 0,1 mL
AlCl3 dan 0,1 mL CH3COONa dan 2,8 mL akuades, lalu diinkubasi selama 40
menit. Diukur panjang gelombang maksimum menggunakan spektrofotometer
UV-Vis pada rentang 400 nm – 800 nm.
3.9.3 Pembuatan Kurva Kalibrasi Kuersetin
Dipipet dari larutan baku kuersetin masing-masing 1,5 mL; 2,5 mL; 3,625
mL; 4,75 mL; dan 5,875 mL dan dimasukkan ke dalam masing-masing labu
tentukur 25 mL sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 6 µg/ml; 10 µg/ml;
14,5 µg/ml; 19 µg/ml; dan 23,5 µg/ml. Dipipet 2 mL dari masing-masing
konsentrasi dan ditambahkan 0,1 mL AlCl3 dan 0,1 mL CH3COONa dan 2,8 mL
akuades, lalu diinkubasi selama 40 menit. Diukur absorbansi dari masing-masing
konsentrasi larutan standard secara spektrofotometri UV-Vis (400-800 nm) pada
panjang gelombang maksimum. Diperoleh kurva kalibrasi kuersetin serta
persamaan garis regresi linear y = ax + b.
32
3.9.4 Penetapan Kadar Total Flavonoid Infusa Kental Daun Kucai
Ditimbang sebanyak 25 mg infusa kental dilarutkan dengan 50 mL
metanol sehingga diperoleh konsentrasi 500 µg/ml, kemudian diambil 15 mL
larutan uji dan diencerkan dengan metanol hingga 25 mL sehingga diperoleh
konsentrasi 300 µg/ml. Dipipet larutan ini sebanyak 2 mL, ditambahkan 0,1 mL
AlCl3 dan 0,1 mL CH3COONa serta 2,8 mL akuades, lalu diinkubasi selama 40
menit. Diukur absorbansi larutan terhadap standard kalibrasi kuersetin secara
spektrofotometri UV-Vis (400-800 nm) pada panjang gelombang maksimum.
3.9.5 Penetapan Kadar Total Flavonoid Ekstrak Kental Daun Kucai
Ditimbang sebanyak 25 mg ekstrak kental dilarutkan dengan 50 mL
metanol sehingga diperoleh konsentrasi 500 µg/ml, kemudian diambil 15 mL
larutan uji dan diencerkan dengan metanol hingga 25 mL sehingga diperoleh
konsentrasi 300 µg/ml. Dipipet larutan ini sebanyak 2 mL, ditambahkan 0,1 mL
AlCl3 dan 0,1 mL CH3COONa serta 2,8 mL akuades, lalu diinkubasi selama 40
menit. Diukur absorbansi terhadap kalibrasi kuersetin secara spektrofotometri
UV-Vis (400-800 nm) pada panjang gelombang maksimum. Konsentrasi
flavonoid dalam sampel uji yang dihitung dari plot kalibrasi dan dinyatakan dalam
satuan mg QE/gram ekstrak sampel.
3.10 Pengujian Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode
Pemerangkapan Radikal Bebas DPPH
3.10.1 Prinsip Metode Pemerangkapan Radikal Bebas (DPPH)
Kemampuan antioksidan dalam ekstrak tumbuhan dalam menetralkan
radikal bebas DPPH dengan melepaskan elektron kepada DPPH, menghasilkan
33
perubahan warna dari ungu menjadi kuning atau intensitas warna ungu larutan
DPPH berkurang, di mana perubahan warna ini menyebabkan adanya penurunan
absorbansi DPPH sehingga menandakan adanya aktivitas peredaman DPPH
(Molyneux, 2004). Bagan alir pengukuran aktivitas peredaman radikal bebas
DPPH dapat dilihat pada Lampiran 8.
3.10.2 Pembuatan Larutan DPPH 0,5 mM
Ditimbang 9,8 mg serbuk DPPH dilarutkan dengan metanol hingga 50 mL.
Diperoleh larutan dpph dengan konsentrasi 200 µg/ml (Molyneux, 2004).
3.10.3 Pengukuran Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH
Dipipet larutan baku DPPH sebanyak 5 mL, kemudian dimasukkan ke
dalam labu tentukur 25 mL, lalu ditambahkan dengan metanol hingga batas tanda
sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 40 µg/ml. Diukur absorbansinya
dengan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 400-800 nm
(Molyneux, 2004).
3.10.4 Pembuatan Larutan Uji Infusa Kental Daun Kucai
Ditimbang infusa kental sebanyak 25 mg dan dilarutkan dengan metanol
hingga 25 mL, diperoleh larutan dengan konsentrasi 1000 µg/ml. Diambil 0,5 mL;
1 mL; 2 mL; dan 4 mL dari masing-masing larutan ekstrak ditambahkan 2 mL
larutan DPPH (konsentrasi 200 µg/ml) dan ditambahkan dengan metanol hingga
tanda batas labu tentukur (10 mL) sehingga diperoleh konsentrasi larutan 50
µg/ml; 100 µg/ml; 200 µg/ml dan 400 µg/ml. Diinkubasi selama 30 menit
kemudian diukur absorbansi masing-masing konsentrasi larutan dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum yang diperoleh.
34
3.10.5 Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Kental Daun Kucai
Ditimbang masing-masing ekstrak kental sebanyak 25 mg dan dilarutkan
dengan metanol hingga 25 mL, diperoleh larutan dengan konsentrasi 1000 µg/ml.
Diambil 0,5 mL; 1 mL; 2 mL; dan 4 mL dari masing-masing larutan ekstrak
ditambahkan 2 mL larutan DPPH (konsentrasi 200 µg/ml) dan ditambahkan
dengan metanol hingga tanda batas labu tentukur (10 mL) sehingga diperoleh
konsentrasi larutan 50 µg/ml; 100 µg/ml; 200 µg/ml dan 400 µg/ml. Diinkubasi
selama 30 menit kemudian diukur absorbansi masing-masing konsentrasi larutan
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum
yang diperoleh.
3.10.6 Penentuan Persen Pemerangkapan Radikal Bebas DPPH
Penentuan persen pemerangkapan radikal bebas oleh sampel uji infusa dan
ekstrak daun kucai yaitu dihitung menggunakan rumus (Molyneux, 2004).
bs. kontrol – bs. sampel

Aktivitas Peredaman (%) = bs. Kontrol
Keterangan: Abs. kontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel

Abs. sampel = Absorbansi sampel
3.10.7 Penentuan Nilai IC50
Penentuan hasil dari metode pemerangkapan DPPH adalah dengan
menghitung IC50, nilai ini menunjukkan bahwa ekstrak tumbuhan dapat
menyebabkan peredaman sebanyak 50% dari aktivitas DPPH, hal ini dapat dilihat
juga dari perubahan warna dari sampel uji yang berwarna ungu pekat ketika
ditambahkan DPPH akan berubah menjadi kekuningan jika ekstrak memiliki
aktivitas peredaman. Hasil perhitungan dimasukkan ke dalam persamaan regresi
dengan konsentrasi sampel (µg/ml) sebagai absis (sumbu x) dan nilai persen
aktivitas peredaman sebagai ordinat (sumbu Y) (Molyneux, 2004).
35
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan
Hasil identifikasi tumbuhan yang dilakukan di Herbarium Medanese
Universitas Sumatera Utara menyebutkan bahwa tumbuhan yang digunakan
merupakan tumbuhan kucai (Allium schoenoprasum L.), famili Liliaceae. Hasil
identifikasi tumbuhan dapat dilihat pada Lampiran 1.
4.2 Hasil Karakterisasi Simplisia Daun Kucai
Karakterisasi simplisia sebagai uji pendahuluan. Perhitungan hasil
karakterisasi simplisia daun kucai dapat dilihat pada Lampiran 9. Hasil
Karakterisasi simplisia daun kucai dapat dilihat pada Tabel 4.1
Tabel 4.1 Hasil karakterisasi simplisia daun kucai

No. Parameter Hasil (%)
1. Kadar air 8,62
2. Kadar abu total 13,66
3. Kadar abu tidak larut asam 1,26
4. Kadar sari larut air 36,68
5. Kadar abu tidak larut etanol 26,87
Hasil karakterisasi simplisia daun kucai menunjukkan kadar air yang
diperoleh 8,62% dan sudah memenuhi syarat untuk simplisia yang lebih kecil dari
10%. Kadar air yang lebih dari 10% dapat menyebabkan ketidakstabilan sediaan
obat serta menjadi media pertumbuhan yang baik untuk jamur atau mikroba
lainnya (WHO, 1998).
36
Hasil penetapan kadar abu total pada simplisia daun kucai menunjukkan
kadar abu total sebesar 13,66% dan kadar abu tidak larut dalam asam sebesar
1,26%. Penetapan kadar abu dilakukan untuk mengetahui kandungan mineral
internal (abu fisiologis) dan mineral eksternal (non fisiologis) yang berasal dari
dalam atau luar jaringan tanaman itu yang terdapat dalam sampel. Kadar abu tidak
larut dalam asam untuk menunjukkan jumlah silikat yang ada terutama pasir yang
terdapat pada simplisia (WHO,1998).
Kadar sari yang larut dalam air sebesar 36,68% sedangkan kadar sari yang
larut dalam etanol 26,87%. Hasil ini menunjukkan bahwa kadar sari yang larut
dalam air lebih besar daripada sari larut dalam etanol, hal ini menunjukkan bahwa
senyawa yang terlarut dalam air lebih banyak seperti glikosida, gula, gom,
protein, enzim, zat warna dan asam organik (Depkes RI, 1995).
4.3 Hasil Skrining Fitokimia
Hasil skrining fitokimia simplisia daun kucai diketahui bahwa daun kucai
mengandung golongan-golongan senyawa kimia yang dapat dilihat pada Tabel 4.2
Tabel 4.2 Hasil skrining fitokimia

No. Metabolit Sekunder Simplisia
1. Alkaloid +
2. Glikosida +
3. Saponin -
4. Flavonoid +
5. Tanin +
6. Steroid/Triterpenoid + , hijau (steroid)
Keterangan: (+) positif = mengandung golongan senyawa
(-) negatif = tidak mengandung golongan senyawa
Hasil yang diperoleh pada Tabel 3.2 menunjukkan bahwa simplisia daun
kucai mengandung golongan senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, dan steroid.
37
Senyawa flavonoid yang yang terdapat dalam tanaman obat yang berfungsi
sebagai antioksidan (Andarwulan dan Faradilla, 2012). Hal ini menunjukkan
bahwa daun kucai memiliki potensi sebagai antioksidan.
4.4 Hasil Penentuan Kadar Total Fenol
4.4.1 Waktu Operasional (Operating time)
Pada penelitian ini, waktu operasional yang digunakan yaitu 90 menit
setelah penambahan reagen sehingga akan menghasilkan absorbansi yang stabil
(Geng, dkk., 2015).
4.4.2 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum
Penentuan panjang gelombang serapan maksimum pada baku asam galat
dengan konsentrasi 500 µg/ml yang dilakukan pada menit ke-90 setelah
penambahan reagen Folin-Ciocalteau dan Na2CO3 20% serta akuades
menggunakan spektrofotometer UV-Vis menghasilkan panjang gelombang
serapan maksimum 775 nm. Data hasil pengukuran kurva panjang gelombang
serapan maksimum asam galat dapat dilihat pada Gambar 4.1.
Gambar 4.1 Kurva Panjang gelombang serapan maksimum asam galat (775 nm)
38
4.4.3 Hasil Penentuan Kurva Serapan Asam Galat
Penentuan kurva serapan asam galat dengan mengukur absorbansi asam
galat pada konsentrasi 31,25 µg/ml; 62,5 µg/ml; 125 µg/ml; 250 µg/ml; dan 500
µg/ml pada panjang gelombang 775 nm. Nilai absorbansi asam galat dapat dilihat
pada Tabel 4.3 dan kurva serapan asam galat ditunjukkan oleh Gambar 4.2.
Perhitungan persamaan regresi dari kurva serapan asam galat dapat dilihat pada
Lampiran 10.
Tabel 4.3 Nilai Absorbansi Asam Galat

Konsentrasi (µg/ml) Absorbansi
0 0
31,25 0,0323
62,5 0,0671
125 0,1165
250 0,2276
500 0,4389
0.5
0.4
Absorbansi
0.3
y = 0.0009x + 0.0066
0.2
r = 0.9997
0.1
0
0 100
200 300 400 500
Konsentrasi (µg/ml)
Gambar 4.2 Kurva serapan asam galat
Dari kurva serapan asam galat di atas diperoleh nilai r 0,9997 dengan persamaan
regresi Y = 0,0009X + 0,0066. Kurva serapan adalah kurva yang menggambarkan
hubungan antara absorban suatu larutan terhadap panjang gelombang radiasi.
Kurva serapan ini dibuat dengan cara memplotkan nilai absorban pada sumbu Y
dan konsentrasi pada sumbu X. Parameter adanya hubungan linier digunakan
koefisien korelasi r pada regresi linier Y = aX + b.
39
Hubungan linier yang ideal dicapai jika nilai b = 0 dan r = +1 atau -1
tergantung pada arah garis (Harmita, 2004).
4.4.4 Hasil Penentuan Kadar Total Fenol pada Infusa Kental dan Ekstrak
Kental Daun Kucai
Hasil penentuan kadar total fenol pada infusa dan ekstrak daun kucai dapat
dilihat pada Tabel 4.4.
Tabel 4.4 Kadar total fenol pada infusa kental dan ekstrak kental daun kucai
Rata- rata
Kadar Total fenol
Sampel Kadar Total fenol
(mg GAE/g sampel)
(mg GAE/g sampel)
105,0532
Infusa Kental Daun
107,5066 105,9636
Kucai
105,3309
110,7388
Ekstrak Kental
112,8041 111,2839
Etanol 96% Daun Kucai
110,3089
107,2790
Ekstrak Kental
108,2896 107,6768
Etil Asetat Daun Kucai
107,4617
100,8435
Ekstrak Kental n-Heksan
102,1348 102,2592
Daun Kucai
103,5425
Dari Tabel 4.4 diatas, kadar total fenol dari setiap ekstrak uji memiliki
hasil yang berbeda, di mana kadar dari yang terbanyak terletak pada ekstrak kental
etanol sebesar 111,2839 mg GAE/g ekstrak, kemudian ekstrak kental etil asetat
107,6768 mg GAE/g ekstrak, infusa kental daun kucai 105,9636 mg GAE/g
ekstrak dan yang terakhir pada ekstrak kental n-heksan sebesar 102,2592 mg
GAE/g ekstrak. Kadar total fenol dalam ekstrak etanol 96% daun kucai
menunjukkan hasil tertinggi dikarenakan adanya senyawa fenol yang terdapat di
daun kucai memiliki kelarutan yang lebih baik dalam pelarut etanol (polar)
40
daripada pelarut lainnya. Hasil dan contoh perhitungan penetapan kadar total fenol
pada infusa kental dan ekstrak kental daun kucai terdapat pada Lampiran 11 dan
12.
4.5 Hasil Penetapan Kadar Total Flavonoid
4.5.1 Waktu Operasional
Waktu Operasional yang digunakan pada penelitian ini yaitu 40 menit,
tetapi dalam beberapa penelitian lain waktu yang digunakan bervariasi
(Stanojevic, dkk., 2009).
4.5.2 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum
Penentuan panjang gelombang serapan maksimum kuersetin dilakukan
pada menit ke-40 setelah penambahan reagen AlCl 3, CH3COONa 1 M, serta
akuades dengan konsentrasi 100 µg/ml menggunakan spektrofotometer UV-Vis
sehingga diperoleh panjang gelombang maksimum 431,5 nm. Hasil kurva
pengukuran panjang gelombang serapan maksimum kuersetin dapat dilihat pada
Gambar 4.3.
Gambar 4.3 Kurva Panjang gelombang serapan maksimum kuersetin (431,5 nm)
41
4.5.3 Hasil Penentuan Kurva Serapan Baku Kuersetin
Penentuan absorbansi kuersetin dengan menggunakan kurva serapan pada
konsentrasi 6 µg/ml; 10 µg/ml; 14 µg/ml; 19 µg/ml; dan 23,5 µg/ml pada panjang
gelombang 431,5 nm. Nilai absorbansi kuersetin dapat dilihat pada Tabel 4.5 dan
kurva serapan kuersetin dapat dilihat pada Gambar 4.4. Perhitungan persamaan
regresi dari kurva serapan kuersetin dapat dilihat pada Lampiran 13.
Tabel 4.5 Nilai absorbansi kuersetin

Konsentrasi (µg/ml) Absorbansi
0 0
6 0,2312
10 0,3712
14,5 0,5599
19 0,7079
23,5 0,8803
1
0.9
0.8
0.7
Absorbansi
0.6
0.5 y = 0.0374x + 0.0033
0.4 r = 0.9998
0.3
0.2
0.1
0
0 5 10 15 20 25
Konsentrasi (µg/ml)
Gambar 4.4 Kurva serapan kuersetin
Dari kurva serapan kuersetin diperoleh nilai r = 0,9998 dengan persamaan
regresi Y = 0,0374X + 0,0033. Kurva serapan adalah kurva yang menggambarkan
hubungan antara absorban suatu larutan terhadap panjang gelombang radiasi.
Kurva serapan ini dibuat dengan cara memplotkan nilai absorban pada sumbu Y
dan konsentrasi pada sumbu X. Parameter adanya hubungan linier digunakan
koefisien korelasi r pada regresi linier Y = aX + b. Hubungan linier yang ideal
42
dicapai jika nilai b = 0 dan r = +1 atau -1 tergantung pada arah garis (Harmita,
2004).
4.5.4 Hasil Penentuan Kadar Total Flavonoid pada Infusa Kental dan
Ekstrak Kental Daun Kucai
Hasil penentuan kadar total flavonoid pada infusa kental dan ekstrak kental
daun kucai dapat dilihat pada Tabel 4.6.
Tabel 4.6 Kadar total flavonoid pada infusa dan ekstrak daun kucai
Rata-rata Kadar
Kadar Total flavonoid
Sampel Total flavonoid
(mg QE/g sampel)
(mg QE/g sampel)
2,9344
Infusa Kental Daun
2,9291 2,8688
Kucai
2,7429
23,1581
Ekstrak Kental
22,8831 23,0663
23,1577
36,2364
Ekstrak Kental
39,3987 34,6390
38,2819
23,7364
Ekstrak Kental n-Heksan
15,8008 20,6981
Daun Kucai
23,0088
Dari Tabel 4.6 diatas, kadar total flavonoid dari setiap ekstrak uji memiliki
hasil yang berbeda, di mana kadar paling banyak terletak pada ekstrak kental etil-
asetat sebanyak 34,6390 mg QE/g ekstrak, kemudian ekstrak kental etanol
23,0663 mg QE/g ekstrak, ekstrak kental n-heksan 20,6981 mg QE/g ekstrak dan
yang terakhir terletak pada infusa kental daun kucai 2,8688 mg QE/g ekstrak.
Kadar total flavonoid tertinggi terdapat pada ekstrak kental etil asetat daun kucai
dikarenakan senyawa flavonoid yang terdapat pada daun kucai memiliki kelarutan
yang lebih baik dalam pelarut yang semipolar dibandingkan dnegan pelarut
43
lainnya. Hasil dan contoh perhitungan kandungan total flavonoid pada infusa
kental dan ekstrak kental daun kucai dapat dilihat pada Lampiran 14 dan 15.
4.6 Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan Infusa Kental dan Ekstrak Kental
Daun Kucai dengan Metode DPPH
4.6.1 Waktu Operasional
Waktu Operasional yang digunakan dalam penelitian ini berdasarkan
literatur yaitu 30 menit, tetapi dalam beberapa penelitian lain, waktu yang
digunakan bervariasi (Molyneux, 2004).
4.6.2 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH
Hasil penentuan panjang gelombang serapan maksimum DPPH dengan
konsentrasi larutan DPPH 40 µg/ml dalam pelarut metanol menggunakan metode
spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 400-800 nm sehingga
diperoleh panjang gelombang serapan maksimum pada 516 nm. Hasil pengukuran
panjang gelombang serapan maksimum DPPH dapat dilihat pada Gambar 4.5.
Gambar 4.5 Kurva Panjang gelombang serapan maksimum DPPH (516 nm)
44
4.6.3 Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan pada Infusa Kental dan Ekstrak
Kental Daun Kucai
Kemampuan antioksidan dalam ekstrak tumbuhan akan menetralkan
radikal DPPH dengan melepaskan elektron kepada DPPH, menghasilkan
perubahan warna dari ungu menjadi kuning atau intensitas warna ungu larutan
DPPH berkurang, di mana perubahan warna ini menyebabkan adanya penurunan
absorbansi DPPH (Molyneux, 2004).
Menurut Molyneux (2004) penentuan persen peredaman radikal bebas
oleh sampel uji dapat dihitung menggunakan rumus berikut:

Pengukuran aktivitas antioksidan sampel pada menit ke-30 setelah
penambahan reagen DPPH dengan konsentrasi masing-masing larutan ekstrak 50
µg/ml; 100 µg/ml; 200 µg/ml; dan 400 µg/ml. Hasil uji aktivitas persen
peredaman DPPH pada larutan infusa kental dan ekstrak kental dapat dilihat pada
Tabel 4.7; 4.8; 4.9 dan 4.10 berikut ini. Contoh perhitungan persen peredaman
DPPH dapat dilihat pada Lampiran 16.
Tabel 4.7 Hasil Uji Aktivitas Persen Peredaman DPPH pada Infusa Kental Daun
Kucai
Absorbansi pengukuran
Peredaman (%)
Konsentrasi ke-
(µg/ml) Rata-
I II III I II III
rata
0 1,0128 1,0125 1,0120 0 0 0 0
50 0,8678 0,8674 0,8675 14,32 14,33 14,27 14,03
100 0,6976 0,6981 0,6985 31,12 31,05 30,98 31,05
200 0,5330 0,5334 0,5298 47,38 47,32 47,65 47,45
400 0,4856 0,4847 0,4846 52,05 52,13 52,12 52,10
45
Tabel 4.8 Hasil Uji Aktivitas Persen Peredaman DPPH pada Ekstrak Kental
Peredaman (%)
Konsentrasi ke-
(µg/ml) Rata-
I II III I II III
rata
0 1,0461 1,0456 1,0457 0 0 0 0
50 0,9621 0,9619 0,9615 8,02 8,00 8,05 8,02
100 0,8512 0,8510 0,8512 18,63 18,61 18,60 18,61
200 0,6642 0,6637 0,6633 36,51 36,52 36,57 36,53
400 0,4071 0,4069 0,4069 61,08 61,08 61,09 61,08
Tabel 4.9 Hasil Uji Aktivitas Persen Peredaman DPPH pada Ekstrak Kental Etil-
Asetat Daun Kucai
Peredaman (%)
Konsentrasi ke-
(µg/ml) Rata-
I II III I II III
rata
0 1,0440 1,0438 1,0436 0 0 0 0
50 0,8512 0,8514 0,8515 18,47 18,43 18,41 18,44
100 0,7959 0,7957 0,7958 23,76 23,77 23,75 23,76
200 0,5480 0,5478 0,5475 47,51 47,52 47,54 47,52
400 0,2258 0,2258 0,2257 78,37 78,37 78,37 78,37
Tabel 4.10 Hasil Uji Aktivitas Persen Peredaman DPPH pada Ekstrak Kental
n-Heksan Daun Kucai
Peredaman (%)
Konsentrasi ke-
(µg/ml) Rata-
I II III I II III
rata
0 1,0340 1,0339 1,0339 0 0 0 0
50 1,0022 1,0026 1,0033 3,08 3,50 2,96 3,18
100 0,8376 0,8381 0,8378 18,99 19,34 18,97 19,10
200 0,6126 0,6126 0,6126 40,75 41,04 40,75 40,85
400 0,5234 0,5234 0,5233 49,38 49,62 49,39 49,46
Dari keempat tabel di atas dapat kita lihat bahwa terjadi penurunan
absorbansi DPPH dengan semakin meningkatnya konsentrasi larutan ekstrak pada
berbagai pelarut. Hal ini menunjukkan adanya aktivitas peredaman oleh infusa
kental dan larutan ekstrak kental daun kucai. Pada proses ini terjadi interaksi
antara larutan ekstrak kental daun kucai dengan DPPH. Ekstrak kental daun kucai
akan menyumbangkan 1 atom hidrogen kepada DPPH sehingga DPPH menjadi
46
bentuk reduksinya (Molyneux, 2004). Maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak
daun kucai memiliki aktivitas antioksidan.
4.6.4 Hasil Analisis Nilai IC50
Hasil absorbansi diinterpretasikan ke dalam nilai IC 50 (Inhibitory
Concentration of 50%) di mana IC50 ini menunjukkan konsentrasi substrat yang
mampu meredam 50% aktivitas dari radikal bebas DPPH (Molyneux, 2004).
Contoh perhitungan IC50 dapat dilihat pada Lampiran 17. Hasil perhitungan nilai
IC50 dari larutan infusa kental dan ekstrak kental dapat dilihat pada Tabel 4.11;
4.12; 4.13 dan 4.14 berikut.
Tabel 4. 11 Nilai IC50 dari larutan infusa kental 10% Daun Kucai
Koefisien IC50 Rata-rata
Persamaan Regresi
Korelasi (r) (µg/ml) IC50 (µg/ml)
Y = 0,1240X + 10,3816 0,9445 319,6487
Y = 0,1241X + 10,3474 0,9451 319,4609 319,3219
Y = 0,1243X + 10,3525 0,9444 318,8560
Tabel 4. 12 Nilai IC50 dari larutan Ekstrak Kental Etanol 96% Daun Kucai
Persamaan Regresi
Y = 0,1536X + 1,8077 0,9971 313,7150
Y = 0,1537X + 1,7956 0,9970 313,7020 313,6735
Y = 0,1537X + 1,8139 0,9970 313,6035
Tabel 4. 13 Nilai IC50 dari larutan Ekstrak Kental Etil Asetat Daun Kucai
Persamaan Regresi
Y = 0,1893X + 5,2225 0,9953 236,500
Y = 0,1894X + 5,2134 0,9953 236,5144 236,5093
Y = 0,1894X + 5,1993 0,9953 236,5136
Tabel 4. 14 Nilai IC50 dari larutan Ekstrak Kental n-Heksan Daun Kucai
Persamaan Regresi
Y = 0,1313X + 2,7524 0,9693 359,9617
Y = 0,1314X + 2,9892 0,9693 357,7416 359,2209
Y = 0,1314X + 2,7023 0,9692 359,9595
47
Menurut Molyneux (2004) nilai IC50 berbanding terbalik dengan aktivitas
antioksidan, semakin tinggi aktivitas antioksidannya, maka nilai IC 50 semakin
rendah. Berdasarkan Tabel 4.11 diperoleh bahwa ekstrak kental etil asetat yang
memiliki aktivitas antioksidan paling tinggi dibandingkan dengan pelarut lainnya
yaitu dengan nilai IC50 sebesar 236,5096 µg/ml.
IC50 menunjukkan bahwa sampel uji dapat menyebabkan peredaman
sebanyak 50% dari aktivitas DPPH, hal ini dapat dilihat juga dari perubahan
warna dari sampel uji yang berwarna ungu pekat ketika ditambahkan DPPH yang
akan berubah menjadi kekuningan jika sampel uji memiliki aktivitas peredaman
(Molyneux, 2004).
Ekstrak kental daun kucai dengan pelarut etil asetat memiliki aktivitas
antioksidan yang tertinggi dibandingkan ekstrak kental daun kucai dengan pelarut
lainnya dan infusa kental daun kucai. Hal ini dikarenakan senyawa bioaktif yang
berperan sebagai penghambat radikal bebas DPPH dari ekstrak daun kucai dapat
terekstrak dengan baik jika menggunakan pelarut etil asetat serta kemungkinan
kerusakan senyawa bioaktif pada infusa akibat dari pemanasan (Suryani, dkk.,
2015).
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan kandungan total flavonoid
pada ekstrak etil asetat lebih tinggi dibandingkan ekstrak dengan pelarut lainnya.
Hal ini dikarenakan senyawa flavonoid yang berpotensi sebagai antioksidan lebih
banyak terlarut dalam pelarut etil asetat sehingga aktivitas peredaman radikal
bebas DPPH yang tertinggi juga ditunjukkan oleh ekstrak dengan pelarut etil
asetat.
48
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dan pengamatan yang telah dilakukan dapat
disimpulkan:
a. Hasil skrining fitokimia simplisia daun kucai menunjukkan adanya golongan
senyawa alkaloid, glikosida, flavonoid, tanin dan steroid.
b. Penggunaan pelarut yang berbeda dapat mempengaruhi kadar total fenol dan
total flavanoid dalam infusa kental dan ekstrak kental daun kucai. Total fenol
terbanyak terdapat dalam ekstrak kental etanol daun kucai sedangkan pada
total flavonoid terbanyak terdapat pada ekstrak kental etil asetat daun kucai.
c. Kandungan total fenol dan total flavonoid dalam infusa kental dan ekstrak
kental daun kucai dengan pelarut yang berbeda dapat menunjukkan aktivitas
peredaman radikal bebas yang berbeda, di mana aktivitas peredaman tertinggi
terletak pada ekstrak kental etil asetat yang memiliki kadar total flavonoid
tertinggi.
5.2 Saran
Berdasarkan pembahasan dan kesimpulan, maka penulis menyarankan
untuk menguji aktivitas antioksidan daun kucai menggunakan fraksi dari ekstrak
kental etil asetat daun kucai.
49
DAFTAR PUSTAKA
Al-Snafi, A. E. (2013). Review Article: PHARMACOLOGICAL EFFECTS OF

ALLIUM SPECIES GROWN IN IRAQ. Int. J. Pharm. & H. Care Res.
Vol. 01(04): 142-144.
Amalia, L., Sukandar, E. Y., Roesli, R. M. A., dan Sigit, J. I. (2008). The Effect of
Ethanol Extract of Kucai (Allium schoenoprasum L.) Bulbs on Serum
Nitric Oxide Level in Male Wistar Rats. International Journal of
Pharmacology. 4(6): 487-491.
Andarwulan, N., dan Faradilla, R. H. F. (2012). Senyawa Fenolik Pada

Beberapa Sayuran Indigenous Dari Indonesia. Bogor: Southeast Asian
Food and Agricultural Science and Technology (SEAFAST) Center, IPB.
Halaman 9, 57-60.
Anonim. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan

Pertama. Jakarta: Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan,
Direktorat Pengawasan Obat Tradisional. Halaman 5, 10-11.
Anonim. (2018). Allium schoenoprasum (L). United States Department of

Agriculture Natural Resources Conservation Service. Diunduh dari
https://plants.usda.gov/core/profile?symbol=ALSC. Pada tanggal 21 Juni
2018.
Badan POM R. I. (2008). Acuan Sediaan Herbal. Volume Keempat. Edisi

Pertama. Jakarta: Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik
Indonesia. Halaman 35.
Bhaigyabati, Th., Devi, P. G., dan Bag, G. C. (2014). Total Flavonoid Content and
Antioxdant Activity of Aqueous Rhizome Extract of Three Hedychium
Species of Manipur Valley. Research Journal of Pharmaceutical,
Biological and Chemical Science. 5(5) : 970-975.
Chang, C. C., Yang, M. H., Wen, H. M., dan Chern, J. C. (2002). Estimation of
Total Flavonoid Content in Propolis by Two Complementary Colorimetric
Methods. Journal of Food and Drug Analysis. Vol. 10(3) : 178-182.
Depkes R. I. (1995). Materia Medika Indonesia. Cetakan Pertama. Jilid VI.

Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 112-114, 322-325, 333-337.
Ditjen POM, Depkes R. I. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi Ketiga. Cetakan

Pertama. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 33, 772.
50
Ervianingsih dan Razak, A. (2017). Uji Daya Hambat Ekstrak Daun Kucai
(Allium schoenoprasum L.) Terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans.
Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia. Vol. 3(2): 1-6.
Farnsworth, N. R. (1966). Review Article: Biological and Phytochemical

Screening of Plants. Journal of Pharmaceutical Sciences. Vol. 55(3) : 262-
265.
Geng, S., Liu, Y., Ma, H., dan Chen, C. (2015). Original Research Article:
Extraction and Antioxidant Activity of Phenolic Compounds from Okra
Flowers. Tropical Journal of Pharmaceutical Research. 14(5) : 807-814.
Harborne, J. B. (1984). Phytochemical methods. Second Editon. Penerjemah:

Padmawinata, K. dan Soediro, I. (1987). METODE FITOKIMIA.
Bandung: Penerbit ITB. Halaman 47, 49-51, 71.
Harmita. (2004). Review Artikel: PETUNJUK PELAKSANAAN VALIDASI

METODE DAN CARA PERHITUNGANNYA. Majalah Ilmu
Kefarmasian. Vol. 1(3) : 117-135.
Hutabalian, M. R. U. (2018). Kelarutan Kalsium Batu Ginjal Pada Ekstrak Daun

Kucai (Allium schoenoprasum L.) Secara Spektrofotometri Serapan Atom.
Skripsi. Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Kepmenkes R. I. (2007). Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia

Nomor 381/Menkes/SK/III/2007 Tentang KEBIJAKAN OBAT
TRADISIONAL TAHUN 2007. Departemen Kesehatan Republik
Indonesia.
Kosasih, E. N., Setiabudhi, T., dan Heryanto, H. (2004). Peran Antioksidan Pada
Lanjut Usia. Jakarta : Pusat Kajian Nasional Masalah Lanjut Usia.
Halaman 56-57.
Lenkova, M., Bystricka, J., Toth, T., dan Hrstkova, M. (2016). Evaluation and
Comparison of the content of total polypenols and antioxidant activity of
selected species of the genus Allium. Journal of Central European
Agriculture. 17(4): 1119-1133.
Markham, K. R. (1982). Techniques of flavonoid identification. Penerjemah:

Padmawinata, K. (1988). Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung:
Penerbit ITB. Halaman 1-3.
Molyneux, P. (2004). Original Article: The use of the stable free radical
diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity.
Songklanakarin J. Sci. Technol. Vol. 26(2) : 211-219.
51
Rebaya, A., Belghith, S. I., Baghdikian, B., Leddet, V. M., Mabrouki, F., Olivier,
E., Cherif, J. K., dan Ayadi, M. T. (2014). Total Phenolic, Total Flavonoid,
Tannin Content, and Antioxidant Capacity of Halimium halimifolium
(Cistaceae). Journal of Applied Pharmaceutical Science. Vol. 5(01): 052-
057.
Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Cetakan Pertama. Yogyakarta:

Pustaka Pelajar. Halaman 220; 252-256.
Sayuti, K. dan Yenrina, R. (2015). Antioksidan Alami dan Sintetik. Cetakan

Pertama. Padang: Andalas University Press. Halaman 31-32; 37-38; 75-77.
Sihombing, D. R. (2014). Aktivitas Antimikroba Ekstrak Umbi Lokio (Allium

schoenoprasum L.) Terhadap Bakteri Escherichia coli, Staphylococcus
aureus, Shigella dysenteriae, dan Lactobacillus acidophilus. Tesis.
Medan: Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara.
Sinaga, G. (2016). Uji Antioksidan Ekstrak Air Bawang Merah (ALLIUM CEPA
L.), Bawang Putih (Allium sativum L.) dan Bawang Batak (Allium
chinense L.) Dengan Metode Dpph. Skripsi. Medan: Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatera Utara.
Suryani, N. C., Permana, D. G. M., dan Anom Jambe, A. A. G. N. (2015).

Pengaruh Jenis Pelarut Terhadap Kandungan Total Flavonoid Dan
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Matoa (Pometia pinnata). Program
Studi Ilmu dan Teknologi Pangan. Bali: Fakultas Tekonologi Pertanian,
Universitas Udayana. Halaman 1-10.
Stanojevic, L., Stankovic, M., Nikolic, V., Nikolic, L., Ristic, D., Brunet, J. C.,
dan Tumbas, V. (2009). Article: Antioxidant Activity and Total Phenolic
and Flavonoid Contents of Hieracium pilosella L. Extracts. Sensors 9.
5702-5714.
Wardhany, S. (2018). Kelarutan Kalsium Batu Ginjal Pada Infus Daun Kucai
(Allium schoenoprasum L.) Secara Spektrofotometri Serapan Atom.
Skripsi. Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
WHO. (1998). Quality control methods for medicinal plant materials. World
Health Organization Geneva. Halaman 33-35.
52
Lampiran 1. Surat Hasil Identifikasi Tumbuhan
53
Lampiran 2. Gambar alat
Gambar 1. Rotary Evaporator
Gambar 2. Panci Infusa
54
Lampiran 3. Tanaman Kucai
Gambar 3. Tanaman Kucai
Gambar 4. Daun Kucai
55
Lampiran 4. Bagan Alir Penyiapan Sampel dan Karakterisasi Simplisia
Daun Kucai
dicuci, ditiriskan , dan ditimbang

sebagai berat basah
dikeringkan dalam lemari pengering
Simplisia
ditimbang berat kering

dihaluskan
Serbuk simplisia
Karakteristik Skrining fitokimia Infusa dan

simplisia Ekstraksi
Pemeriksan simplisia Pemeriksan Infusa Kental dan

terdiri dari: golongan Ekstrak Kental
- Penetapan kadar air senyawa yaitu:
- Penetapan kadar abu - Alkaloida
total - Glikosida
- Penetapan kadar abu - Flavonoid
- Saponin
tidak larut asam
- Tanin
- Penetapan kadar sari - Steroid/
larut air Triterpenoid
- Penetapan kadar sari
larut etanol
56
Lampiran 5. Bagan Alir Pembuatan Infusa Kental dan Ekstrak Kental Daun
Kucai
a. Pembuatan Infusa Kental 10% Daun Kucai
Serbuk Simplisia
ditimbang 100 g simplisia
dimasukkan ke dalam panci infusa
ditambahkan 750 ml akuades
dipanaskan di atas penangas air

selama 15 menit dihitung setelah suhu
mencapai 900C sambil sesekali
diaduk
diserkai selagi panas
dicuci ampas dengan air panas hingga

volume 1000 ml.
diuapkan filtrat diatas penangas air

dengan suhu 60-700C hingga
mengental
Infusa Kental
57
Lampiran 5. (lanjutan)
b. Pembuatan Ekstrak Kental Etanol 96% Daun Kucai
Serbuk Simplisia
dimasukkan ke dalam botol kaca
ditambahkan 1500 ml etanol 96% dan

ditutup
dibiarkan selama 5 hari dan disimpan

di tempat yang terlindung cahaya
sambil sesekali diaduk
diserkai, ampas dicuci dengan

etanol 96% secukupnya hingga
diperoleh 2000 ml.
dipindahkan ke dalam bejana tertutup

dan di biarkan ke tempat sejuk dan
terlindung dari cahaya selama 2 hari
dienap-tuangkan kemudian disaring
dipekatkan menggunakan alat rotary

evaporator pada suhu 700C
diuapkan maserat diatas penangas air

dengan suhu 700C hingga mengental
Ekstrak Kental
Etanol Daun Kucai
58
c. Pembuatan Ekstrak Kental Etil asetat Daun Kucai
Serbuk Simplisia
ditambahkan 1500 ml etil asetat dan

ditutup

diserkai, ampas dicuci dengan pelarut

etil asetat secukupnya hingga
diperoleh 2000 ml.


evaporator pada suhu 770C sampai
diperoleh maserat pekat
diuapkan maserat diuapkan diatas

penangas air dengan suhu 770C
hingga mengental
Ekstrak Kental
59
d. Pembuatan Ekstrak Kental n-Heksan Daun Kucai
Serbuk Simplisia
ditambahkan 1500 ml n-heksan dan

ditutup

diserkai, ampas dicuci dengan

n-heksan secukupnya hingga
diperoleh 2000 ml.


evaporator pada suhu 700C sampai
diperoleh maserat pekat
diuapkan diatas penangas air dengan

suhu 770C hingga mengental
Ekstrak Kental
n-heksan
60
Lampiran 6. Bagan Alir Penetapan Kadar Total Fenol
Total Fenol
asam galat Infusa kental Ekstrak kental

(Baku) ditimbang 10 mg ditimbang 10 mg
diukur dilarutkan hingga dilarutkan hingga
λ maksimum 10 ml dengan 10 ml dengan
metanol metanol
λ maksimal
775 nm Larutan dengan Larutan dengan
konsentrasi 1000 µg/ml konsentrasi 1000µg/ml
dibuat larutan
konsentrasi diambil 0,1 ml diambil 0,1 ml
31,25µg/ml;62,5
g/ml; 125 µg/ml; 250 ditambahkan 7,9 ml ditambahkan 7,9 ml
µg/ml dan 500 µg/ml. akuades akuades
diukur absorbansi ditambahkan 0,5 ml ditambahkan 0,5 ml

pada λ maksimum Folin-Ciocalteau Folin-Ciocalteau
Kurva Kalibrasi divortex selama divortex selama

± 1 menit ± 1 menit
dihitung
hasilnya ditambahkan 1,5 ml ditambahkan 1,5 ml
Persamaan regresi Na2CO3 Na2CO3
dan nilai koefisien
korelasi diinkubasi 90 menit diinkubasi 90 menit
diukur pada diukur pada

λ maksimum λ maksimum
dengan spektrofoto- dengan spektrofoto-
meter UV-Vis meter UV-Vis
Absorbansi Absorbansi
diinterpretasikan ke diinterpretasikan ke
dalam persamaan regresi dalam persamaan regresi
asam galat asam galat
Kadar Total fenol dalam Kadar Total fenol dalam
Infusa Kental Daun Kucai Ekstrak Kental Daun Kucai
61
Lampiran 7. Bagan Alir Penetapan Kadar Total Flavonoid
Total Flavonoid
Baku Infusa kental Ekstrak kental

(kuersetin) ditimbang 25 mg
ditimbang 25 mg
diukur dilarutkan hingga dilarutkan hingga
λ maksimum 50 ml dengan 50 ml dengan
metanol metanol
λ maksimum
431,5 nm Larutan dengan Larutan dengan
konsentrasi 500µg/ml konsentrasi 500 µg/ml
dibuat larutan
konsentrasi 6 ppm; diambil 15 ml diambil 15 ml
10 ppm; 14,5 ppm; ditambahkan ditambahkan
19 ppm dan 23,5 ppm. metanol hingga metanol hingga
25 mL 25 ml
diukur absorbansi
pada λ maksimum
Larutan dengan Larutan dengan
konsentrasi 300µg/ml konsentrasi 300 µg/ml
diambil 2 ml diambil 2 ml
Kurva Kalibrasi
ditambahkan 0,1 ml ditambahkan
dihitung hasilnya
AlCl3 0,1 ml AlCl3
ditambahkan 0,1 ml ditambahkan 0,1 ml

Persamaan regresi
CH3COONa CH3COONa
dan nilai koefisien
korelasi
ditambahkan 2,8 ml ditambahkan 2,8 ml
akuades akuades
diinkubasi 40 menit diinkubasi 40 menit
diukur pada diukur pada

λ maksimum dengan λ maksimum dengan
spektrofotometer UV-Vis spektrofotometer UV-Vis
diinterpretasikan diinterpretasikan
ke dalam ke dalam
persamaan regresi kuersetin persamaan regresi kuersetin
Kadar Total flavonoid Kadar Total flavonoid dalam
dalam Infusa Kental Daun kucai Ekstrak Kental Daun Kucai
62
Lampiran 8. Bagan Alir Pengukuran Aktivitas Peredaman Radikal Bebas DPPH
Penentuan Panjang Gelombang Maksimum DPPH
9,8 mg Serbuk DPPH

DPPHDPPH dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml
dilarutkan dengan metanol
ditambahkan dengan metanol hingga garis
tanda
Larutan Blanko DPPH 0,5 mM

(Konsentrasi 200 µg/ml)
dipipet 5 ml
dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml
dicukupkan dengan metanol hingga garis tanda
Larutan DPPH
(Konsentrasi 40 µg/ml)
diukur pada panjang gelombang 400-800 nm
Panjang Gelombang
maksimum (516 nm)
63
Infusa kental Daun Kucai Ekstrak kental Daun Kucai
ditimbang 25 mg ditimbang 25 mg
dilarutkan dalam metanol dilarutkan dalam metanol
hingga 25 ml hingga 25 ml
Larutan Uji (konsentrasi Larutan Uji (konsentrasi

1000 µg/ml) 1000 µg/ml)
dipipet sebanyak 0,5 ml; dipipet sebanyak 0,5 ml;
1,5 ml; 2 ml dan 4 ml 1,5 ml; 2 ml dan 4 ml
untuk mendapatkan untuk mendapatkan
konsentrasi larutan konsentrasi larutan
50 µg/ml; 100 µg/ml; 50 µg/ml; 100 µg/ml;
200 µg/ml; dan 400 µg/ml 200 µg/ml; dan 400 µg/ml
dimasukkan ke dalam dimasukkan ke dalam

labu tentukur 10 ml labu tentukur 10 ml
ditambahkan 2 ml larutan ditambahkan 2 ml larutan

DPPH 0,5 mM DPPH 0,5 mM
(konsentrasi 40 µg/ml) (konsentrasi 40 µg/ml)
ditambahkan metanol ditambahkan metanol

hingga batas tanda hingga batas tanda
didiamkan selama 30 menit didiamkan selama 30 menit
diukur dengan diukur dengan

spektrofotometer UV-Vis spektrofotometer UV-Vis
dengan λ maksimum 516 nm dengan λ maksimum 516 nm
dihitung persen peredaman dihitung persen peredaman dan
dan persamaan regresi persamaan regresi
Nilai IC50 Nilai IC50
64
Lampiran 9. Perhitungan Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia Daun Kucai
1. Penentuan Kadar Air

volume air ml
% Kadar air simplisia = berat sampel x 100%
g
No Berat Sampel (g) Volume Awal (ml) Volume Akhir (ml)
1. 5,0129 3,5 3,9
2. 5,0046 3,9 4,4
3. 5,0024 4,4 4,8
3 –3
1. Kadar air = x 100% = 7,98%
–3
2. Kadar air = x 100% = 9,99%
–
3. Kadar air = x 100% = 7,99%
% Rata- rata kadar air = = 8,62%

3
2. Penentuan Kadar Abu Total
berat abu g
% Kadar abu total = berat simplisia 100%
g
Berat Berat Berat Abu

Berat Sampel
No Krus porselen Krus porselen + (g)
(g)
Kosong (g) Abu (g)
1. 2,0090 25,8404 26,1032 0,2633
2. 2,0081 29,5269 29,7949 0,2680
3. 2,0062 30,2960 30,5874 0,2914
33
1. Kadar abu total = x 100% = 13,11%
2. Kadar abu total = x 100% = 13,35%
3. Kadar abu total = x 100% = 14,52%

3 33
% Rata- rata abu total = = 13,36%
3
65
3. Penentuan Kadar Abu Tidak Larut Asam
berat abu g
% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100%
berat simplisia g
Berat Berat
Berat Berat Krus
No Krus porselen Abu (g)
Sampel (g) porselen +Abu (g)
kosong (g)
1. 2,0090 25,8404 25,8645 0,0241
2. 2,0081 29,5269 29,5580 0,0311
3. 2,0062 30,2960 30,3166 0,0206
1. Kadar abu tidak larut asam = x 100% = 1,20%

3

3
% Rata- rata tidak larut asam = = 1,26%
3
4. Penentuan Kadar Sari Larut air
berat sari g
% Kadar sari larut dalam air = berat sampel 100%
g
Berat Berat Berat Berat

No Sari (g)
Sampel (g) Cawan kosong (g) Cawan +Sari (g)
1. 5,0253 56,5712 56,9351 0,3639
2. 5,0671 60,3445 60,7147 0,3702
3. 5,0205 64,2533 64,6278 0,3745
3 3
1. Kadar sari larut air = x x100% = 36,21%
3
3
2. Kadar sari larut air = x x100% = 36,53%
3
3. Kadar sari larut air = x x 100% = 37,30%
3 3 3 3 3
% Rata- rata sari larut air = = 36,68%
3
66
5. Penentuan Kadar Sari larut etanol

berat sari g
% Kadar sari larut dalam etanol = berat sampel 100%
g
Berat Berat Berat Berat

No Sari (g)
Sampel (g) Cawan kosong (g) Cawan +Sari (g)
1. 5,0088 55,6711 55,9366 0,2655
2. 5,0061 60,8943 61,1609 0,2666
3. 5,0059 63,9175 64,1927 0,2752
1. Kadar sari larut etanol = x x 100% = 26,50%

% Rata- rata sari larut etanol = = 26,87%

3
67
Lampiran 10. Perhitungan Persamanan Regresi dari Kurva Serapan Asam Galat
Kurva serapan asam galat
X Y XY X2 Y2
0 0 0 0 0
31,25 0,0323 1,0094 976,5625 0,0010
62,50 0,0671 4,1938 3.906,2500 0,0045
125,00 0,1165 14,5625 15.625,0000 0,0135
250,00 0,2276 56,9000 62.500,0000 0,0518
500,00 0,4389 219,4500 250.000,0000 0,1926
ƩX = ƩY=
968,75 0,8824
ƩXY= 296,1156 ƩX²=333.007,8125 ƩY²=0,2635
=
161,4583 0,1471
- n
a=
Ʃ - Ʃ n
- 3
a= =
333. - .
a = 0,0009
b=
b = 0,1471 – (0,0009)(161,4583)
b = 0,0066
Jadi, persamaan regresi adalah Y = 0,0009X + 0,0066
Koefisien korelasi (r),
Ʃ - Ʃ Ʃ n
r2 =
Ʃ - Ʃ n Ʃ - Ʃ n
-
r2 = = 0,9995
333. - 3 -
r = 0,9997
68
Lampiran 11. Hasil Penetapan Kadar Total Fenol pada Infusa Kental dan Ekstrak
Kental Daun Kucai
1. Kadar Total Fenol pada Infusa Kental 10% Daun Kucai

Berat Volume Konsen- Kadar total fenol
rata rata
sampel sampel FP Absorbansi trasi (mgGAE/g
absorbansi
(mg) (ml) (µg/ml) ekstrak)
0,1031
0,1039
0,1022
10,5 10 1 0,1026 106,7037 101,6226
0,1022
0,1022
0,1022
0,1011
0,1009
0,1015
10,1 10 1 0,1011 105,0000 103,9604
0,1011
0,1013
0,1007
0,1037
0,1039
0,1041
10,6 10 1 0,1038 107,9630 101,5819
0,1041
0,1033
0,1035
Keterangan : FP = Faktor Pengenceran
2. Kadar Total Fenol pada Ekstrak Kental Etanol 96% Daun Kucai
rata rata
absorbansi
0,1062
0,1071
0,1071
10,4 10 1 0,1068 111,3703 107,0869
0,1060
0,1071
0,1071
0,1099
0,1093
0,1097
10,5 10 1 0,1097 114,5370 109,0829
0,1096
0,1097
0,1099
0,1092
0,1098
0,1089
10,7 10 1 0,1093 114,1296 106,6632
0,1097
0,1091
0,1092
69
3. Kadar Total Fenol Pada Ekstrak Kental Etil Asetat Daun Kucai
rata rata
absorbansi
0,1012
0,1003
0,1011
10,1 10 1 0,1009 104,7778 103,7404
0,1008
0,1012
0,1008
0,1023
0,1033
0,1026
10,2 10 1 0,1026 0,1027 106,8148 104,7204
0,1027
0,1029
0,1045
0,1047
0,1051
10,5 10 1 0,1048 109,1111 103,9153
0,1049
0,1051
0,1045
4. Kadar Total Fenol Pada Ekstrak Kental n-Heksan Daun Kucai

Absorbansi rata rata
sampel sampel FP trasi (mgGAE/g
absorbansi
0,0973
0,0971
00975
10,3 10 1 0,0972 100,7037 97,7706
0,0971
0,0973
0,0971
0,0961
0,0966
00967
10,1 10 1 0,0964 99,7593 98,7715
0,0959
0,0963
0,0967
0,1015
0,1013
0,1008
10,5 10 1 0,1012 105,1296 100,1235
0,1011
0,1017
0,1009
70
Lampiran 12. Contoh Perhitungan Kadar Total Fenol pada Infusa Kental Daun
Kucai
Rumus perhitungan:
konsentrasi Vol.sampel
Kadar total fenol = x FP
erat sampel g
Absorbansi rata-rata = 0,1031
Berat sampel = 10,5 mg = 0,0105 g
Volume Sampel = 10 ml = 0,01 L
Persamaan regresi : Y = 0,0009X + 0,0066
3 –
X= = 106,7037 µg/ml
3 .
Kadar Total Fenol = x1
.
Kadar Total Fenol = 101,6226 mg GAE/g ekstrak
71
Lampiran 13. Perhitungan Persamanan Regresi dari Kurva Serapan Kuersetin
Kurva serapan kuersetin
X Y XY X2 Y2
0 0 0 0 0
6,0 0,2312 1,3872 36,00 0,0535
10,0 0,3712 3,7120 100,00 0,1378
14,5 0,5599 8,1186 210,25 0,3135
19,0 0,7079 13,4501 361,00 0,5011
23,5 0,8803 20,6871 552,25 0,7749
ƩY=
ƩX = 73
2,7505
ƩXY= 47,3550 ƩX²=1.259,50 ƩY²=1,7809
= 12,1667
0,4584
- n
a=
Ʃ - Ʃ n
3 - 3 3
a= =3
. - 3 3333
a = 0,0374
b=
b = 0,4584 – (0,0374)(12,1667)
b = 0,0033
Jadi, persamaan regresi adalah Y = 0,0374X + 0,0033
Koefisien korelasi (r),
Ʃ - Ʃ Ʃ n
r2 =
Ʃ - Ʃ n Ʃ - Ʃ n
3 - 3
r2 = = 0,9996
. - 3 –
r = 0,9998
72
Lampiran 14. Hasil Penetapan Kadar Total Flavonoid pada Infusa Kental dan
Ekstrak Kental Daun Kucai
1. Kadar Total Flavonoid pada Infusa Kental 10% Daun Kucai

Kadar total
Berat Volume Absor- Konsen-
rata rata Flavonoid
sampel sampel FP bansi trasi
absorbansi (mgQE/g
(mg) (ml) (µg/ml)
ekstrak)
0,0369
0,0363
0,0368
25,3 50 1,667 0,0366 0,8890 2,9289
0,0367
0,0358
0,0368
0,0385
0,0385
0,0368
25,4 50 1,667 0,0367 0,8922 2,9276
0,0355
0,0353
0,0354
0,0341
0,0345
0,0349
25,1 50 1,667 0,0342 0,8262 2,7436
0,0348
0,0337
0,0332
2. Kadar Total Flavonoid pada Ekstrak Kental Etanol 96% Daun Kucai
Kadar total
Berat Volume Konsen-
Absor- rata rata Flavonoid
sampel sampel FP trasi
bansi absorbansi (mgQE/g
(mg) (ml) (µg/ml)
ekstrak)
0,2662
0,2662
0,2662
25,3 50 1,667 0,2662 7,0303 23,1611
0,2662
0,2663
0,2663
0,2608
0,2614
0,2614
25,1 50 1,667 0,2611 6,8917 22,8854
0,2611
0,2608
0,2608
0,2703
0,2716
0,2719
25,8 50 1,667 0,2714 7,1689 23,1583
0,2708
0,2719
0,2720
73
3. Kadar Total Flavonoid pada Ekstrak Kental Etil Asetat Daun Kucai
Kadar total
(mg) (ml) (µg/ml)
ekstrak)
0,4135
0,4119
0,4135
25,2 50 1,667 0,4131 10,9572 36,2414
0,4135
0,4127
0,4135
0,4511
0,4532
0,4556
25,5 50 1,667 0,4517 12,0553 39,4042
0,4545
0,4545
0,4561
0,4481
0,4436
0,4417
25,4 50 1,667 0,4397 11,6676 38,2871
0,4388
0,4348
0,4310
4. Kadar Total Flavonoid pada Ekstrak Kental n-Heksan Daun Kucai
Kadar total
(mg) (µg/ml)
ekstrak)
0,2703
0,2714
0,2704
25,6 0,05 1,667 0,2708 7,1524 23,2872
0,2699
0,2729
0,2699
0,1822
0,1819
0,1825
25,2 0,05 1,667 0,1820 4,7776 15,8022
0,1816
0,1822
0,1815
0,2688
0,2669
0,2669
25,5 0,05 1,667 0,2666 7,0401 23,0115
0,2667
0,2659
0,2654
74
Lampiran 15. Contoh Perhitungan Kadar Total Flavonoid pada Infusa Kental
Daun Kucai
Rumus perhitungan:
konsentrasi Vol.sampel
Kadar total flavonoid = erat sampel g
x FP
Absorbansi rata-rata = 0,0366
Berat sampel = 25,3 mg = 0,0253 g
Faktor Pengenceran = 1,667
Volume Sampel = 50 ml = 0,05 L
Persamaan regresi : Y = 0,0374X + 0,0033
3 – 33
X= = 0,8890 µg/ml
3
g ml
Kadar Total Flavonoid = x 1,667
3g
Kadar Total Flavonoid = 2,9289 mg QE/g ekstrak
75
Lampiran 16. Contoh Perhitungan Persen Peredaman DPPH
Rumus perhitungan :

Keterangan: Abs. kontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Abs. sampel = Absorbansi sampel
Absorbansi pada larutan Infusa Simplisia Daun Kucai Konsentrasi 50 µg/ml:
Absorbansi Kontrol (konsentrasi 0 µg/ml) = 1,0128
Absorbansi sampel (konsentrasi 50 µg/ml ) = 0,8678
–
Aktivitas Peredaman (%) = = 14,32%
76
Lampiran 17. Contoh Perhitungan IC50
Perhitungan IC50 dari larutan Infusa Kental 10% Daun Kucai
X Y XY X2 Y2
0 0 0 0 0
50 14,3167 715,8373 2.500 204,9692
100 31,1216 3.112,1643 10.000 968,5567
200 47,3736 9.474,7235 40.000 2244,2597
400 52,0537 20.821,4850 160.000 2709,5890
ƩY=
ƩX = 750
144,8657 ƩXY=
ƩX²=212.500 ƩY²=6127,3745
34.124,2101
= 150
28,9731
- n
a=
Ʃ - Ʃ n
3 . -
a=
. -
a = 0,1240
b=
b = 28,9731 – (0,1240)(150)
b = 10,3817
Jadi, persamaan regresi adalah Y = 0,1240X 10,3817
Koefisien Korelasi (r),
Ʃ - Ʃ Ʃ n
r2 =
Ʃ - Ʃ n Ʃ - Ʃ n
3 . -
r2 = = 0,8921
. - . 3 – 3
r = 0,9445
Jadi, persamaan regresi untuk mendapatkan nilai IC50 adalah
Y = 0,1240X + 10,3817
Nilai IC50 = > 50 = 0,1240X + 10,3817
X = 319,6487 µg/ml
77

Penetapan Total Fenol Dan Flavanoid Daun Kucai

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Penetapan Total Fenol Dan Flavanoid Daun Kucai

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Universitas Sumatera Utara

Repositori Institusi USU http://repositori.usu.ac.id

Penetapan Kadar Total Fenol dan Total

Sari, Marselina Purnama

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

(Allium schoenoprasum L.) dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis”. Skripsi ini

Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Dalam menyelesaikan skripsi ini tidak terlepas dari hambatan ataupun

pembimbing, yang telah mengajarkan, membimbing dan mengarahkan saya

selama penelitian hingga penyusunan skripsi ini sehingga menghasilkan skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan ilmu-ilmu

yang berharga selama perkuliahan.

Saya juga mengucapkan terima kasih kepada orangtua tercinta, Ayahanda

kelancaran penelitian, sahabat tercinta, Pavita Puansari, Elvina Valencia, B. Ed.,

Sherly Roselliny Kencana, Emilia, teman-teman pengurus KMB-USU 2017/2018,

teman-teman angkatan 2014 Farmasi Universitas Sumatera Utara yang senantiasa

selalu memberikan dukungan serta doa-nya sehingga saya selalu bersemangat

menyelesaikan skripsi ini.

Saya menyadari sepenuhnya bahwa skripsi ini masih belum sempurna,

pengetahuan dan wawasan saya di masa depan.

rekan di bidang farmasi serta adik-adik Fakultas Farmasi Universitas Sumatera

Medan, 17 Juli 2018

Marselina Purnama Sari

Saya yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Marselina Purnama Sari

Nomor Induk Mahasiswa : 141501062

Program Studi : S-1 Reguler Farmasi

Judul Skripsi : Penetapan Kadar Total Fenol dan Total Flavonoid

kutipan yang ditulis telah disebutkan sumbernya di dalam daftar pustaka.

mendapat sanksi apapun oleh Program Studi Fakultas Farmasi Universitas

Sumatera Utara, dan bukan menjadi tanggung jawab pembimbing.

Demikianlah surat pernyataan ini saya perbuat dengan sebenarnya untuk

dapat digunakan jika diperlukan sebagaimana mestinya.

Medan, 17 Juli 2018

Marselina Purnama Sari

Keywords : Chives, total phenolic content, total flavonoid content, antioxidant,

LEMBAR PENGESAHAN ................................................................... iii

KATA PENGANTAR ............................................................................ iv

ABSTRAK ......................................................................................... vii

ABSTRACT ......................................................................................... viii

DAFTAR ISI .......................................................................................... ix

DAFTAR TABEL .................................................................................. xv

DAFTAR GAMBAR ............................................................................. xvi

DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN ........................................ xvii

DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................... xviii

BAB I PENDAHULUAN ................................................................. 1

1.1 Latar Belakang ................................................................ 1

1.2 Perumusan Masalah ........................................................ 4

1.3 Hipotesis ......................................................................... 4

1.4 Tujuan Penelitian ............................................................ 5

1.5 Manfaat Penelitian .......................................................... 5

1.6 Kerangka Penelitian ........................................................ 6

BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................... 7

2.1 Uraian Tumbuhan ............................................................ 7

2.1.1 Sistematika Tumbuhan .......................................... 7

2.1.3 Nama Asing ........................................................... 7

2.1.4 Morfologi Tumbuhan ............................................. 7

2.1.5 Kandungan Kimia .................................................. 8

2.1.6 Kegunaan Kucai ..................................................... 9