USULAN PENELITIAN

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK

METANOL BUNGA PACAR AIR (Impatiens balsamina

L.) TERHADAP Propionibacterium acnes

I DEWA MADE PRAJNA PUTRA NIM 161200045

I GEDE DEDY INDRAWAN NIM 161200046

I GUSTI NGURAH BAGUS DARMA SUWITRA NIM 161200048

I GUSTI AYU ARYA PUSPANINGSIH NIM 161200049

I KADEK ADI JAYANA PUTRA NIM 161200050

PROGRAM SARJANA

PROGRAM STUDI FARMASI KLINIS

INSTITUT ILMU KESEHATAN MEDIKA PERSADA BALI

2019

i
 USULAN PENELITIAN

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK

METANOL BUNGA PACAR AIR (Impatiens balsamina

L.) TERHADAP Propionibacterium acnes

I DEWA MADE PRAJNA PUTRA NIM 161200045

I GEDE DEDY INDRAWAN NIM 161200046

I GUSTI NGURAH BAGUS DARMA SUWITRA NIM 161200048

I GUSTI AYU ARYA PUSPANINGSIH NIM 161200049

I KADEK ADI JAYANA PUTRA NIM 161200050

PROGRAM SARJANA

PROGRAM STUDI FARMASI KLINIS

INSTITUT ILMU KESEHATAN MEDIKA PERSADA BALI

2019

ii
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kehadirat Ida Sang Hyang Widhi Wasa/Tuhan Yang Maha Esa

atas segala rahmat dan karunia yang telah dilimpahkan-Nya kepada penulis

sehingga usulan penelitian yang berjudul “Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak

Metanol Bunga Pacar Air (Impatiens Balsamina L.) Terhadap

Propionibacterium Acnes” selesai tepat pada waktunya. Usulan penelitian ini

disusun untuk memenuhi salah satu persyaratan akademik dalam meraih gelar

Sarjana Farmasi.

Banyak sekali hambatan yang dihadapi penulis dalam menyelesaikan

usulan Penelitian ini, namun berkat doa, dukungan, serta bantuan dari berbagai

pihak, akhirnya usulan penelitian ini dapat diselesaikan.

Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penulisan

usulan penelitian ini. Untuk itu, saran dan kritik yang bersifat membangun sangat

diharapkan dari para pembaca untuk menyempurnakan dan semoga usulan

Penelitian ini dapat bermanfaat bagi pembaca.

Denpasar, 18 Maret 2019

Penulis

iii
 ABSTRAK

Latar Belakang: Jerawat merupakan penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri
Propionibacterium acnes
Tujuan Penelitian: Untuk mengkaji ekstrak methanol bunga pacar air dalam
menghambat pertumbuhan bakteri Propionibacterium acnes
Metode penelitian: Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan
rancangan penelitian yaitu postest only control group design dimana pengujian dari
hasil penelitian hanya dilihat setelah perlakuan. Dalam penelitian ini, sampel yang
digunakan adalah bakteri Propionibacterium acnes yang akan diinokulasi selama 2
kali 24 jam dalam media blood agar dalam cawan petri dengan menggunakan 3
replikasi dan 1 kontrol sterilitas media sebagai pembanding.

Kata Kunci: Jerawat, Antibakteri, Bunga Pacar Air

iv
 DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN SAMPUL DEPAN .................................................................. i
HALAMAN SAMPUL DALAM ................................................................ ii
KATA PENGANTAR .................................................................................. iii
ABSTRAK ................................................................................................... iv
DAFTAR ISI ................................................................................................ v
DAFTAR GAMBAR ................................................................................... vii
DAFTAR SINGKATAN ............................................................................. viii
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................ 1
1.1 Latar Belakang .............................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ......................................................................... 3
1.3 Tujuan ........................................................................................... 3
1.4 Manfaat ......................................................................................... 4
1.4.1 Manfaat Teoritis ................................................................... 4
1.4.2 Manfaat Praktis .................................................................... 4
BAB III KERANGKA BERPIKIR, KONSEP DAN HIPOTESIS
PENELITIAN .............................................................................................. 5
3.1 Kerangka Berpikir ......................................................................... 5
3.2 Konsep .......................................................................................... 6
BAB IV METODE PENELITIAN .............................................................. 8
4.1 Rancangan Penelitian .................................................................... 9
4.2 Lokasi dan Waktu Penelitian ........................................................ 9
4.3 Ruang Lingkup Penelitian ............................................................. 9
4.4 Penentuan Sumber Data ................................................................ 9
4.4.1 Identifikasi Tanaman ............................................................ 9
4.4.2 Tanaman Pacar Air ............................................................... 9
4.5 Variabel Penelitian ........................................................................ 10
4.5.1 Variabel Bebas ..................................................................... 10
4.5.2 Variabel Tergantung ............................................................. 10
4.5.3 Variabel Terkontrol .............................................................. 10
4.5.4 Definisi Operasional ............................................................. 11
4.6 Bahan Penelitian ............................................................................ 11
4.7 Instrumen Penelitian ...................................................................... 11
4.7.1 Alat ....................................................................................... 11
4.7.2 Bahan .................................................................................... 12
4.7.2.1 Sampel Uji ................................................................ 12
4.7.2.2 Bahan Kimia ............................................................. 12
4.8 Prosedur Penelitian ........................................................................ 12
4.8.1 Pemilihan Bunga Pacar Air .................................................. 12
4.8.2 Penyiapan Bunga Pacar Air ................................................. 12
4.8.3 Ekstraksi Bunga Pacar Air ................................................... 12
4.8.4 Persiapan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol
Bunga Pacar Air .................................................................... 13
4.8.4.1 Pembuatan Media Blood Agar .................................. 13
4.8.4.2 Sterilisasi Alat .......................................................... 13

v
 4.8.4.3 Pembuatan Suspensi Bakteri Uji P. acnes ................ 13
4.8.4.4 Inokulasi Bakteri Uji ................................................ 14
4.8.4.5 Pembuatan Kertas Cakram ....................................... 14
4.8.5 Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Methanol Bunga
Pacar Air ............................................................................... 14
4.9 Analisis Data ................................................................................. 15
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 16
LAMPIRAN ................................................................................................. 18

vi
 DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 3.2 Skema Konsep .......................................................................... 24

vii
 DAFTAR SINGKATAN

atm : atmosfer

DMSO : Dimetil sulfoksida

DNA : Deoxyribo Nucleic Acid

HPMC : Hydroxypropyl methylcellulose

KBM : Kadar Bunuh Minimal

KHM : Kadar Hambat Minimal

MBC : Minimum Bactericidal Concentration

MIC : Minimum Inhibitory Concentration

P. acnes : Propionibacterium acnes

TEA : Triethanolamin

UV : Ultra Violet

viii
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Acne atau sering disebut jerawat merupakan salah satu masalah kulit yang

sering dijumpai di masyarakat yang bersifat kronis dan berulang. Walaupun bukan

merupakan suatu penyakit yang mengancam nyawa, namun acne dapat

menyebabkan masalah psikologis yang berbeda-beda, mulai dari perasaan rendah

diri hingga stres. Selain itu tidak jarang pula dapat terjadi bekas luka yang permanen

pada wajah. (Sutanto, 2013). Jerawat (Acne vulgaris) merupakan suatu penyakit

peradangan kronik dari unit pilosebaseus yang ditandai dengan adanya komedo,

papula, pustula, nodul, kista, dan bekas luka (Saragih et al, 2016). Jerawat sering

terjadi pada kulit wajah, leher, dada dan punggung (Tjekyan, 2008).

Propionibacterium acnes adalah bakteri anaerob Gram positif yang merupakan

bakteri paling dominan pada lesi jerawat (Sylvia, 2010). P. acnes berperan dalam

patogenesis acne dengan cara memecah komponen sebum yaitu trigliserida menjadi

asam lemak bebas yang merupakan mediator pemicu terjadinya inflamasi. Pada usia

pubertas, peningkatan hormon akan berpengaruh terhadap peningkatan produksi

sebum sehingga menyebabkan peningkatan kolonisasi bakteri P. acnes (Jappe,

2003). Selain itu, P. acnes dapat berperan sebagai immunostimulator yang mampu

memproduksi berbagai molekul biologis dan enzim-enzim seperti lipase, protease,

hyaluronidase dan faktor kemotaktik yang berperan dalam proses inflamasi

(Pothitirat et al., 2010). Peranan P. acnes dalam patogenesis acne juga terkait

1
 2

dengan kemampuannya untuk bertahan intraseluler dalam makrofag untuk waktu

yang lama (Jappe, 2003).

Terdapat produk-produk kosmetik yang dihasilkan untuk menangani masalah

jerawat, misalnya antibiotik benzoil peroksida, asam azelat dan retinoid (Oprica,

2004). Namun, obat-obat ini memiliki efek samping dalam penggunaannya sebagai

anti jerawat antara lain resistensi antibiotik, iritasi, kerusakan organ dan terjadinya

imunohipersensitivitas (Wasitaatmadja, 1997). Resistensi antibiotik oleh P. acnes

telah diteliti oleh Zandi et al. (2011), dimana dalam penelitian tersebut diperoleh

data tingkat resistensi P. acnes terhadap antibiotik yaitu: kotrimoksazol (22%),

eritromisin (12,2%), klindamisin 2 (7,3%), dan tetrasiklin (4,9%). Resistensi

terhadap antibiotik mendorong pengembangan agen antibakteri terhadap P. acne

menjadi menarik untuk diteliti, salah satunya adalah agen antibakteri yang berasal

dari bahan alam.

Indonesia ditinjau dari segi geografis merupakan negara yang sangat kaya

dengan berbagai spesies flora. Flora yang tumbuh di dunia sebanyak 300.000

spesies dan 30.000 di antaranya tumbuh di Indonesia, sekitar 74% masih tumbuh

liar di hutan – hutan namun sekitar 26% atau lebih dari 446 tumbuhan telah

dibudidayakan dan digunakan sebagai obat tradisional (Mursito, 2011). Banyak

bahan alami yang berasal dari tumbuhan, telah berkontribusi secara signifikan

dalam penemuan berbagai struktur kimia untuk menciptakan obat sebagai inovasi

pengobatan melawan penyakit. Pacar air (Impatiens Balsamina L.) merupakan

tanaman yang berpotensi tinggi dalam pengobatan penyakit, tapi tanaman ini belum

begitu populer di masyarakat umum. Bunga pacar air mengandung senyawa kimia
 3

flavonoid merupakan senyawa aktif yang menghambat aktifitas mikroba (Lim et

al., 2007).

Tanaman pacar air mempunyai bunganya mengandung antosianin (sianidin,

delpinidin, malpidin), quercetin dan kaemferol (Pramudita dkk., 2015). Kaempferol

terbukti mempunyai aktivitas antibakteri namun belum diketahui pasti bagaimana

mekanismenya. Struktur kaempferol hampir mirip dengan quercetin sehingga dapat

diasumsikan bahwa mekanisme hambatnya terhadap pertumbuhan bakteri sama

dengan quercetin yaitu menghambat sintesis DNA (Lim et al., 2007). Sebagai

senyawa antibakteri, quercetin mampu berikatan dengan dengan DNA girase

bakteri yang berperan dalam replikasi DNA. Quercetin mengganggu kerja enzim

girase sehingga proses replikasi DNA terhenti. (Plaper et al., 2003).

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melihat aktivitas antimikroba dari

ekstrak metanol bunga pacar air terhadap bakteri P. acnes dengan melihat zona

hambat yang terbentuk dengan metode disc diffusion.

1.2 Rumusan Masalah

Rumusan masalah dalam penelitian ini adalah

Bagaimanakah aktivitas antibakteri dari ekstrak metanol bunga pacar air

terhadap Propionibacterium acnes?

1.3 Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk

Untuk mengkaji ekstrak methanol bunga pacar air dalam menghambat

pertumbuhan bakteri Propionibacterium acnes

 4

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Teoritis

Manfaat dari penelitan ini adalah dapat menambah informasi bagi dunia

ilmu pengetahuan tentang ekstrak methanol bunga pacar air (Impatiens balsamina

Linn.) sebagai antibakteri alami

4.1.2 Manfaat Praktis

Dapat menambah pengetahuan masyarakat tentang tanaman yang berfungsi

sebagai bakteri alami dan berguna bagi kesehatan kulit khususnya unruk

menghilangkan jerawat. Diharapkan bahwa bunga pacar air dapat mengurangi

terjadinya resistensi terhadap antibakteri yang sudah ada

 BAB III

KERANGKA BERPIKIR DAN KONSEP PENELITIAN

3.1 Kerangka Berpikir

Jerawat (acne vulgaris) adalah kelainan pada kulit yang biasa terjadi pada usia

remaja. Pembentukan jerawat terjadi karena adanya penyumbatan folikel oleh sel-

sel kulit mati yang dapat disebabkan oleh beberapa hal, antara lain adalah aktivitas

hormon, faktor genetis (keturunan) dan infeksi oleh bakteri Propionibacterium

acnes (West et al., 2005).

Pengobatan jerawat sampai saat ini masih terus dikembangkan. Salah satu solusi

mengatasi jerawat dengan membunuh atau menghambat pertumbuhan bakteri

penyebab jerawat dengan antibiotik, seperti eritromisin, klindamisin, tetrasiklin dan

benzoil peroksida (Loveckova dan Havlikova, 2002). Penggunaan antibiotik yang

berlebihan dapat menyebabkan bakteri yang semula sensitif menjadi resisten

(Utami, 2012). Oleh karena itu, diperlukan pencarian senyawa antibakteri alami

yang tidak menimbulkan dampak negatif terhadap manusia, yaitu dengan

memanfaatkan zat aktif pembunuh bakteri yang terkandung dalam tanaman

(Khunaifi, 2010). Salah satu tanaman yang berpotensi sebagai antibakteri alami

terhadap pertumbuhan bakteri P. acnes adalah bunga pacar air (Impatiens

balsamina L.)

Bunga dari tanaman pacar air (Impatiens balsamina L.) mengandung senyawa

flavonoid seperti kaemferol dan quarcetin yang dapat digunakan untuk

menghambat pertumbuhan bakteri P. acnes (Lim et al, 2007), sehingga untuk

5
 6

mengetahui besarnya daya hambat antibakteri dari senyawa favonoid tersebut

dilakukan percobaan dari berbagai konsentrasi ekstrak bunga pacar air.

3.2 Konsep

P1
01

P2
02

P3
VD VI 03
D
P4
04

P5
05

Gambar 3.2 Skema Konsep

Keterangan:

VD : Variabel dependent (ekstrak metanol bunga pacar air)

VI : Variabel independent (antibakteri)

P 1 : Kontrol negatif (kelompok diberikan DMSO).

P 2 : Kontrol positif (kelompok diberi gel clindamicyn).

P 3 : Perlakuan 1 (kelompok diberi gel ekstrak methanol bunga pacar air

konsentrasi 20%)
 7

P 4 : Perlakuan 2 (kelompok diberi gel ekstrak methanol bunga pacar air

konsentrasi 40%)

P 5 : Perlakuan 3 (kelompok diberi gel ekstrak methanol bunga pacar air

konsentrasi 60%)

01 : Pengamatan pembentukan zona jernih jam ke-0 sampai ke-48

02 : Pengamatan pembentukan zona jernih jam ke-0 sampai ke-48

03 : Pengamatan pembentukan zona jernih jam ke-0 sampai ke-48

04 : Pengamatan pembentukan zona jernih jam ke-0 sampai ke-48

05 : Pengamatan pembentukan zona jernih jam ke-0 sampai ke-48

 BAB IV

METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan rancangan

penelitian yaitu postest only control group design dimana pengujian dari hasil

penelitian hanya dilihat setelah perlakuan. Dalam penelitian ini, sampel yang

digunakan adalah bakteri Propionibacterium acnes yang akan diinokulasi dalam

media blood agar dalam cawan petri selama selama 2 kali 24 jam, digunakan 3

replikasi dan 1 kontrol sterilitas media sebagai pembanding. Dalam 1 cawan petri

yang telah ditumbuhi bakteri P. acnes diuji dengan 5 perlakuan yaitu kelompok

perlakuan 1 diberikan gel Clindamisin sebagai kontrol positif, kelompok perlakuan

2 diberikan DMSO sebagai kontrol negatif, kelompok perlakuan 3 diberikan sampel

ekstrak metanol bunga pacar air konsentrasi 20%, kelompok perlakuan 4 diberikan

sampel ekstrak metanol bunga pacar air konsentrasi 40%, kelompok perlakuan 5

diberikan sampel ekstrak metanol bunga pacar air konsentrasi 60% menggunakan

metode disc diffusion. Metode disc diffusion dilakukan dengan menggunakan kertas

whatmaan no. 14 dengan bentuk bulat dan ukuran 6mm yang akan dicelupkan pada

larutan sampel dan larutan pembanding. Kertas whatmaan no. 14 tersebut

diletakkan diatas media blood agar yang telah ditanami bakteri P. acnes. Setelah

diinkubasi akan terlihat daerah hambatan yang terbentuk.

8
 9

4.2 Lokasi Dan Waktu Penelitian

Pada penelitian ini sampel yang digunakan adalah bunga pacar air (Impatiens

balsamina L.) yang tumbuh di Desa Getakan Kabupaten Klungkung. Penelitian ini

dikerjakan di Laboratorium Mikrobiologi Institut Ilmu Kesehatan Medika Persada

Bali, pada bulan Desember 2019

4.3 Ruang Lingkup Penelitian

Ruang lingkup penelitian ini termasuk farmasi herbal, khususnya pada uji

mikrobiologi. Penelitian ini mengambil tema farmasi herbal yaitu dengan

melakukan uji aktivitas antibakteri dari ekstrak yang telah dibuat.

4.4 Penentuan Sumber Data

4.4.1 Identifikasi Tanaman

Bunga pacar air (Impatiens balsamina L.) diidentifikasi untuk melihat

apakah tanaman yang digunakan dalam penelitian ini sudah benar. Dilakukan

determinasi di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Eka Karya Bedugul-

Bali.

4.4.2 Tanaman Pacar air

Bunga pacar air yang akan dipanen pada penelitian ini memiliki ciri-ciri

mempunyai kelopak berwarna merah, tidak dimakan ulat dan tidak busuk. Tanaman

yang digunakan adalah tanaman bunga pacar air yang hidup pada daerah dataran

rendah, bunga dipanen saat tanaman berumur 50 hari. Pada penelitian ini digunakan

adalah bagian bunga segar tanpa pangkal. Cara perlakuan bunga pacar air ada

beberapa tahap yaitu:

 10

1. Sortasi basah

Bunga pacar air dipisahkan dari kotoran-kotoran atau bahan asing lainnya

seperti rumput, daun, bunga yang telah rusak, serta kotoran lain harus dibuang.

2. Pencucian bahan

Pencucian bunga pacar air dilakukan dengan air bersih yang mengalir dari air

PAM. Setelah bahan dicuci bersih, dilakukan penirisan. Selama penirisan,

bahan dibolak-balik untuk mempercepat penguapan dan dilakukan di tempat

teduh dengan aliran udara cukup agar terhindar dari fermentasi dan

pembusukan.

3. Perajangan

Perajangan dilakukan dengan menggunakan pisau tajam yang terbuat dari bahan

steinles steel agar mempercepat proses perajangan dan menghasilkan irisan

yang tipis.

4.5 Variable Penelitian

4.5.1 Variabel bebas

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah ekstrak metanol bunga pacar air

(Impatiens balsamina L.), konsentrasi 20%, 40% dan 60%

4.5.2 Variable tergantung

Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah luas zona hambat.

4.5.3 Variabel terkontrol

Variabel yang dikendalikan pada penelitian ini adalah jenis bakteri, media

agar, kondisi lingkungan, waktu ekstraksi dan suhu penguapan

 11

4.5.4 Definisi operasional

1. Ekstrak metanol bunga pacar air adalah ekstrak kental yang diperoleh

menggunakan metode ultrasonik dari bahan bunga segar selama 3x5 menit

dengan pelarut metanol dan diekstraksi sebanyak tiga kali selama 3x5 menit

dengan pelarut metanol lalu diuapkan menggunakan vaccum rotary evaporator

hingaa diperoleh ekstrak kental

2. Zona hambat berupa zona bening disekeliling paper disk yang mengandung

esktrak, yang kemudian akan diukur dengan menggunakan jangka sorong dalam

satuan millimeter (mm)

3. Bunga yang digunakan dalam penelitian ini adalah bunga yang sedang mekar,

berwarna merah, bunga dipanen saat tanaman berumur 50 hari

4. Waktu ekstraksi yang dibutuhkan untuk mendapatkan ekstrak kental methanol

adalah ± 1jam

5. Suhu yang digunakan untuk menguapkan pelarut yang terdapat pada ekstrak

adalah 40oC selama 24 jam

4.6 Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan adalah bakteri Propionibacterium acnes

4.7 Instrumen Penelitian

4.7.1 Alat

Cawan petri, hot plate, alat-alat gelas, neraca digital, kaca arlogi, porselen,

autoklaf, pinset, lampu Bunsen, oven, jangka sorong, mikropipet, jarum ose, dan

kertas whatmann no.14.

 12

4.7.2 Bahan

4.7.2.1 Sampel Uji

Sampel utama yang digunakan adalah bunga pacar air (Impatiens balsamina

L.) yang tumbuh di Desa Getakan Kabupaten Klungkung

4.7.2.2 Bahan Kimia

Media Blood Agar, aquadest, NaCl 0.85%, metanol teknis, antibiotic

clindamicyn, larutan Mac Farland II, dan DMSO

4.8 Prosedur Penelitian

4.8.1 Pemilihan bunga pacar air (Impatiens balsamina L.)

Tahap awal dilakukan pengumpulan tanaman bunga pacar air air (Impatiens

balsamina L.) yang diperoleh dari Desa Getakan Kabupaten Klungkung. Dipilih

bunga pacar yang segar, mekar berwarna merah, tidak dimakan ulat dan tidak

busuk.

4.8.2 Penyiapan bunga pacar air (Impatiens balsamina L.)

Kelopak bunga pacar air (Impatiens balsamina L.) dilakukan proses sortasi

basah dengan menghilangkan mahkota dan putik bunga serta dicuci untuk

menghilangkan pengotor lainya yang masih menempel pada sampel dan dilakukan

proses perajangan.

4.8.3 Ekstraksi bunga pacar air (Impatiens balsamina L.)

Bunga pacar air segar yang telah potong dihaluskan dengan cara diblender.

Ditimbang sebanyak 50 gram bunga pacar air ditambahkan pelarut metanol

sebanyak 500 mL rasio bahan:pelarut 1:10 (b/v) lalu diultrasonik selama 3 x 5

menit. Setiap 5 menit dilakukan pengadukan sebelum diultrasonik kembali.

 13

Hasilnya disaring, filtrat ditampung, residu yang didapatkan dimasukkan ke beaker

gelas. Selanjutnya, semua filtrat yang diperoleh dipekatkan menggunakan vacuum

rotary evaporator dengan kecepatan 100rpm dan diuapkan dalam oven pada suhu

400C hingga diperoleh ekstrak dengan berat yang konstan.

4.8.4 Persiapan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol Bunga Pacar Air

(Impatiens balsamina L.)

4.8.4.1 Pembuatan Media Blood Agar

Prosedur pembuatan media Blood Agar adalah dengan menimbang bubuk

Blood Agar sesuai dengan petunjuk pabrik, dimasukkan kedalam Erlenmeyer

kemudian ditambahkan air dan dipanaskan sampai mendidih kemudian mulut

tabung disumbat dengan kapas, lalu dibungkus dengan aluminium foil distrerilkan

kedalam autoclave selama 15menit dengan tekanan 1 atm pada suhu 121oC.

kemudian dibiarkan dingin atau hangat selama 45 menit kemudian ditambahkan

darah 5-8% dan dituangkan pada cawan petri masing-masing 10ml kemudian

dibiarkan dingin sampai suhu 45-50oC.

4.8.4.2 Strerilisasi Alat

Cawan petri, tabung reaksi, Erlenmeyer, spatula, media agar, kapas,

mikropipet, dan seluruh alat yang akan digunakan dicuci bersih, dikeringkan dan

dibungkus dengan menggunakan aluminum foil. Kemudian disterilisasi di dalam

autoclave selama 15menit dengan tekanan 1 atm pada suhu 121oC.

4.8.4.3 Pembuatan Suspensi Bakteri Uji P. acnes

Biakan P. acnes diambil menggunakan jarum ose, kemudian dimasukkan

kedalam tabung reaksi yang berisi 10 mL larutan garam fisiologis (NaCl) 0,85%
 14

kemudian dibandingkan kekeruhannya dengan larutan Standar Mac Farland0,5 (1,5

x 108CFU/mL) dengan latar belakang kertas putih, apabila suspensi bakteri kurang

keruh ditambahkan koloni sedangkan apabila lebih keruh ditambahkan NacL

fisiologis 0,85%.

4.8.4.4 Inokulasi Bakteri P. acnes

Bakteri uji diambil dengan jarum ose steril sebanyak satu ose, kemudian

ditanam di media Blood Agar dengan cara menggores secara zigzag. Diinkubasi

didalam incubator pada suhu 37oC selama 2 kali 24 jam (Siregar, 2009)

4.8.4.5 Pembuatan Kertas Cakram

Diambil kertas whatmann no.14 lalu dibuat 15 buah cakram kertas

berukuran 6 mm untuk 3 buah untuk kontrol negatif (DMSO), 3 buah untuk kontrol

positif (antibiotic clindamicyn), 3 buah untuk gel ekstrak bunga pacar air

konsentrasi 20%, 3 buah untuk gel ekstrak bunga pacar air konsentrasi 40% dan 3

buah untuk gel ekstrak bunga pacar air konsentrasi 60%.

4.8.5 Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol Bunga Pacar Air (Impatiens

balsamina L.)

Uji aktivitas antibakteri dilakuakn dengan menggunakan metode disc

diffusion. Media yang digunakan adalah Blood Agar, gel ekstrak terdiri dari tiga

variasi kosentrasi yaitu 20%, 40%, dan 60%. Kontrol negatif yang digunakan

adalah DMSO dan kontrol positif yang digunakan adalah gel clindamicyn. Kertas

cakram yang telah dibuat direndam didalam gel ekstrak bunga pacar air (Impatiens

balsamina L.) dalam berbagai konsentrasi yang telah ditetapkan. Kertas cakram

kemudian diletakkan pada permukaan media yang telah diinokulasikan bakteri P.

 15

acnes. Bakteri diinkubasi pada suhu 37oC selama 48 jam. Pengujian dilakukan 3

kali pengulangan (CLSI, 2008).

4.9 Analisis Data

Data kuantitatif yang diperoleh meliputi diameter zona hambat ekstrak. Data

kemudian dianalisis dengan Uji One Way ANOVA (Analysis of Variance) untuk

membandingkan nilai signifikansi diameter zona hambat dari ekstrak konsentrasi I,

II, III; kontrol positif dan kontrol negative.

 DAFTAR RUJUKAN

Jappe, U. 2003. Pathological Mechanisms of Acne with Special Emphasis on

Propionibacterium acnes and Related Therapy. Acta Derm
Venereol;83:241-48

Khunaifi, M., 2010, Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong (Anredera
Cordifolia (Ten.) Steenis) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus
dan Pseudomonas aeruginosa. Skripsi. Jurusan Biologi Fakultas
Sains Dan Teknologi, Malang, Universitas Islam Negeri (UIN)
Maulana Malik Ibrahim

Lim, Y.H., Kim, I.H., Seo, J.J. (2007). In vitro Activity of Kaempferol Isolated
from the Impatiens balsamina alone and in Combination with
Erythromycin or Clindamycin against P. acnes. The Journal of
Microbiology, 45(5)

Mursito, B. 2011. Tanaman Hias Berkhasiat Obat. Penebar Swadaya, Depok

Pothitirat, W., Chomnawang, M. T., dan Grtsanapan, W. 2010. Free Radical and
Anti-Acne Activities of Mangosteen Fruit Rind Extracts Prepared
by Different Extraction Methods. Pharmaceutical Biology. 48 (2):
182- 6.

Siregar, S.F. 2009. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol dan Air Rebusan Kulit
Batang Ingul (Toona sinesis M. Roem) Terhadap Beberapa Bakteri.
Skripsi. Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatra Utara

Sutanto, R.S., 2013. Derajat Penyakit Acne Vulgaris Berhubungan Positif dengan
Kadar MDA. Universitas Udayana Denpasar. PhD Thesis.

Sylvia, lusita., 2010, Pada tesis : Hubungan Antara Jenis Mukroorganisme Yang
Ditemukan Pada Lesi Akne dengan Bentuk Lesi Akne. Universitas
Andalas.

Utami, R.E., 2012, Antibiotika, Resistensi dan Rasionalitas Terapi, Saintis Fakultas
Sains dan Teknologi UIN Maliki Malang, Malang.

Wasitaatmadja, S., 1997, Penuntun Ilmu Kosmetik Medik, Jakarta: Universitas

Indonesia Press, p. 3-15.

West, J.A., G.C. Zuccarello, J. Scott, J.D. Pickett-Heaps and G.H. Kim, 2005,
Observations on Purpureofilum apyrenoidigerum gen, et sp, nov,
from Australia and Bangiopsis Rhodophyta). Phycological
Research 53: 57–74

16
 17

Zandi S, Vares B, Abdollahi H. Determination of microbial agents of acne vulgaris

and Propionibacterium acnes antibiotic resistance in patients
referred to dermatology clinics in Kerman, Iran. Jundishapur J
Microbiol. 2011;4:17-22.
 LAMPIRAN

1. Perhitungan konsentasi ekstrak metanol bunga pacar air

a. Konsentrasi 20% dalam 10mL metanol
Ekstrak yang ditimbang = 20% x 10mL
= 2 gram
b. Konsentrasi 40% dalam 10mL metanol
Ekstrak yang ditimbang = 40% x 10mL
= 4 gram
c. Konsentrasi 60% dalam 10mL metanol
Ekstrak yang ditimbang = 60% x 10mL
= 6 gram

18