KK 2

AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN POLA KROMATOGRAFI
EKSTRAK ETANOL DAN FRAKSI BUAH SENDUDUK

(Melastoma malabathricum L.)
SKRIPSI
OLEH:
ZAHRATUL HAYATI
NIM 141501212
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018
Universitas Sumatera Utara

SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh

gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
OLEH:
ZAHRATUL HAYATI
NIM 141501212
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018

KATA PENGANTAR
Puji syukur saya panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan
berbagai nikmat dan karunia sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang
berjudul “Aktivitas Antikosidan dan Pola Kromatografi Ekstrak Etanol dan Fraksi
Buah Senduduk (Melastoma malabathricum L.)”. Skripsi ini diajukan sebagai
salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara.
Buah senduduk mengandung antosianin yang tinggi dan merupakan
bahan yang banyak menghasilkan antioksidan. Antioksidan sangat penting dalam
menetralkan dan menghancurkan radikal bebas yang dapat menyebabkan
kerusakan tubuh. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui aktivitas antioksidan dan
analisis kandungan kimia ekstrak etanol dan fraksi buah senduduk. Hasil yang
diperoleh ialah ekstrak etanol dan fraksi buah senduduk memiliki aktivitas
antioksidan dengan nilai IC50 bervariasi dan bnyak senyawa yang terkandung di
dalamnya. Diharapkan penelitian inj dapat bermanfaat sebagai alternatif
antioksidan dari bahan alam.
Pada kesempatan kali ini penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu
Dr. Marline Nainggolan, M.S., Apt., selaku pembimbing yang telah memberikan
waktu, bimbingan dan nasehat selama penelitian hingga selesainya penyusunan
skripsi ini. Ibu Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara. Bapak Dr. Panal Sitorus, M.Si., Apt., dan Bapak Drs.
Awaluddin Saragih, M.Si., Apt., selaku dosen penguji yang telah memberikan
saran dan kritikan kepada penulis hingga selesainya penulisan skripsi ini. Bapak
iv
Dadang Irfan Husori, S.Si., M.Sc., Apt., sebagai penasehat akademik yang telah
membimbing penulis selama masa pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas
Sumatera Utara. Ucapan terima kasih juga kepada Bapak dan Ibu staf pengajar
Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara yang telah mendidik dan memberi
arahan serta bimbingan kepada penulis selama masa perkuliahan. Pimpinan dan
staf tata usaha Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara yang telah membantu
penulis dalam semua proses administrasi.
Terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Ayahanda Elyus Faisal,
M.Biomed., Ibunda Inir Malawati, dan adinda Isni Dhiyah Almira yang telah
memberikan dukungan baik moril maupun materil. Serta tak lupa terimakasih
untuk teman-teman dan keluarga saya lainnya ( lingkaran mumtazah, keluarga At-
Thibb, laboratorium fitokimia, S-1farmasi stambuk 2014 dan semua yang tidak
dapat saya sebutkan satu persatu) atas dukungan dan semangat yang diberikan
kepada penulis hingga selesainya penyusunan skripsi ini.
Akhir kata penulis berharap semoga skripsi ini bermanfaat bagi ilmu
pengetahuan khusus bidang farmasi.
Medan, Juli 2018

Penulis,
Zahratul Hayati
NIM 141501212
v
vi
ABSTRAK
Senduduk merupakan tumbuhan suku melastomaceae yang mengandung

antosianin tinggi dan merupakan bahan yang banyak menghasilkan antioksidan.
Antioksidan sangat penting dalam menetralkan dan menghancurkan radikal bebas
yang dapat menyebabkan kerusakan sel dan biomolekul di dalam tubuh.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dan analisis
kandungan kimia ekstrak etanol dan fraksi buah senduduk.
Serbuk simplisia buah senduduk dilakukan karakterisasi dan skrining
fitokimia, selanjutnya diekstraksi secara maserasi pelarut etanol 80%. Ekstrak
etanol difraksinasi dengan pelarut n-heksan dan etilasetat secara ekstraksi cair-
cair. Uji aktivitas antioksidan dengan variasi konsentrasi menggunakan metode
DPPH serta analisis kandungan kimia secara kromatografi lapis tipis (KLT) dan
kromatografi kertas (KKt).
Hasil skrining fitokimia diperoleh senyawa alkaloid, tritepenoid, tanin,
flavonoid dan glikosida pada simplisia dan ekstrak buah senduduk. Hasil uji
aktivitas antioksidan menunjukkan bahwa ekstrak etanol, fraksi etilasetat fraksi n-
heksan dan fraksi air buah senduduk memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai
IC50 berturut-turut 14,53 µg/ml, 5,91 µg/ml, 41,93 µg/ml dan 54,13 µg/ml. Fraksi
etilasetat menunjukkan aktivitas antioksidan paling kuat. Hasil KLT ekstrak etanol
fase gerak terbaik yaitu n-heksan:eti asetat 50:50 (3 senyawa tritepenoid/steroid),
fraksi n-heksan fase gerak terbaik n-heksan:etilasetat 80:20 (4 senyawa
triterpenoid/steroid). Hasil KKt ekstrak etanol diperoleh 3 senyawa tanin, 1
glikosida dan 3 flavonoid; fraksi etilasetat diperoleh 3 senyawa tanin, 4 flavonoid
dan 1 glikosida; fraksi air diperoleh 2 senyawa tanin (fase gerak terbaik BAA).
Kata kunci: antioksidan, pola kromatografi, ekstrak etanol buah senduduk,

fraksi.
vii
ANTIOXIDANT ACTIVITY AND CHROMATOGRAPHIC PATTERN OF
ETHANOLIC EXTRACT AND FRACTIONS OF SENDUDUK FRUIT
ABSTRACT
Senduduk is a tribe of plants melastomaceae which contains high

anthocyanins and is a material that produces a lot of n antioxidants . Antioxidants
are very important in neutralizing and destroying free radicals that can cause
damage to cells and biomolecules in the body.
This study aims to determine the antioxidant activity and analyze chemical
content of ethanolic extract and fraction of senduduk fruit .
Simplicia powder of senduduk fruit was done characterization and
phytochemical screening, then extracted by maceration using 80% ethanol
solvent. The ethanol extract was fractionated with n -hexane and ethyl acetate
solvents by liquid-liquid extraction. Test of antioxidant activity with concentration
variation using DPPH method and analysis of chemical content by thin layer
chromatography (TLC) and paper chromatography.
The results of phytochemical screening were obtained alkaloid,
tritepenoid, tannin, flavonoid and glycoside compounds. The result of antioxidant
activity test showed that ethanol extract, ethyl acetate fraction, n- hexane fraction
and water fraction of senduduk fruit had antioxidant activity with IC50 value
consecutive 14.3 µg/ml, 5.91 µg/ml, 41.93 µg/ml and 54.13 µg/ml. Ethyl acetate
fraction showed the strongest antioxidant activity. Results of TLC: the best mobile
phase ethanol extract is n- hexane: ethyl acetate 50:50 (3 tritepenoid / steroid
compounds), the best mobile phase of n -hexane fraction is n- hexane: ethyl
acetate 80:20 (4 triterpenoid / steroid compounds). The results of KKt ethanol
extract obtained 3 tannin compounds, 1 glycoside and 3 flavonoids; ethyl acetate
fraction obtained 3 tannin compounds, 4 flavonoids and 1 glycoside; the water
fraction obtained 2 tannin compounds (BAW's best mobile phase).
Keywords: antioxidant, chromatography pattern, ethanolic extract of senduduk

fruit, fractions.
viii
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ....................................................................................................... i
HALAMAN JUDUL.................................................................................. ii
LEMBAR PENGESAHAN ....................................................................... iii
KATA PENGANTAR .............................................................................. iv
SURAT PERNYATAAN TIDAK PLAGIAT .......................................... vi
ABSTRAK ................................................................................................. vii
ABSTRACT ............................................................................................... viii
DAFTAR ISI .............................................................................................. xi
DAFTAR TABEL ...................................................................................... xv
DAFTAR GAMBAR ................................................................................ xvi
DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................. xvii
BAB I PENDAHULUAN .......................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ........................................................................ 1
1.2 Perumusan Masalah ................................................................ 3
1.3 Hipotesis Penelitian ................................................................. 3
1.4 Tujuan Penelitian .................................................................... 3
1.5 Manfaat Penelitian .................................................................. 4
1.6 Kerangka Pikir Penelitian ....................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tumbuhan .................................................................... 5
2.1.1 Habitat ........................................................................... 5
2.1.2 Morfologi ...................................................................... 5
ix
2.1.3 Klasifikasi tumbuhan ..................................................... 6
2.1.4 Sinonim ......................................................................... 6
2.1.5 Nama daerah .................................................................. 6
2.1.6 Kegunaan ....................................................................... 6
2.1.7 Kandungan kimia .......................................................... 6
2.2 Uraian Kimia ........................................................................... 7
2.2.1 Flavonoid ....................................................................... 7
2.2.2 Tanin .............................................................................. 7
2.2.3 Triterpenoid/Steroid ...................................................... 8
2.2.4 Glikosida ....................................................................... 8
2.2.5 Alkaloid ......................................................................... 9
2.2.6 Saponin .......................................................................... 9
2.3 Ekstraksi .................................................................................. 9
2.4 Radikal bebas ........................................................................... 11
2.5 Antioksidan ............................................................................. 12
2.5.1 Antioksidan alami ......................................................... 13
2.5.2 Vitamin C ...................................................................... 13
2.6 Spektrofotometer UV-Visible ................................................. 14
2.7 Metode DPPH ......................................................................... 14
2.7.1 Pelarut ............................................................................ 16
2.7.2 Pengukuran absorbansi-panjang gelombang maksimum 16
2.7.3 Waktu pengukuran ........................................................ 16
2.8 Uraian kromatografi ................................................................ 17
2.8.1 Kromatografi kertas ....................................................... 19
2.8.2 Kromatografi lapis tipis ................................................. 20
x
2.8.3 Kromatografi gas ........................................................... 21
2.8.4 Kromatografi penukar ion ............................................. 21
2.8.5 Kromatografi eksklusi ................................................... 21
BAB III METODE PENELITIAN............................................................. 23
3.1 Alat dan Bahan ....................................................................... 23
3.1.1 Alat ................................................................................ 23
3.1.2 Bahan ............................................................................. 23
3.2 Penyiapan Bahan Tumbuhan .................................................. 24
3.2.1 Pengambilan bahan tumbuhan ...................................... 24
3.2.2 Identifikasi tumbuhan ................................................. 24
3.2.3 Pembuatan simplisia buah senduduk ............................. 24
3.3 Pembuatan Pereaksi ................................................................. 25
3.3.1 Larutan air-kloroform ..................................................... 25
3.3.2 Larutan asam asetat 5% ............................................... 25
3.3.3 Larutan asam klorida 1%............................................. 25
3.3.4 Larutan asam klorida 2 N ............................................... 25
3.3.4 Larutan BAA (butanol:asam asetat:air) ......................... 25
3.3.5 Larutan besi (III) klorida 1% ........................................ 25
3.3.6 Larutan kloralhidrat ....................................................... 25
3.3.7 Larutan DPPH 0,5 Mm (konsentrasi 200 ppm) ............. 26
3.3.9 Pereaksi Bouchardat ....................................................... 26
3.3.10 Pereaksi Dragendorf ..................................................... 26
3.3.11 Pereaksi Liebermann-Bourchard (LB) ........................ 26
3.3.12 Pereaksi Mayer ............................................................. 26
3.3.13 Pereaksi Mollish ........................................................... 26
xi
3.3.14 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 N .................................. 26
3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia ...................................... 27
3.4.1 Pemeriksaan makroskopik ............................................. 27
3.4.2 Pemeriksaan mikroskopik ............................................. 27
3.4.3 Penetapan kadar air simplisia ........................................ 27
3.4.4 Penetapan kadar sari yang larut dalam air ..................... 28
3.4.5 Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol ............... 28
3.4.6 Penetapan kadar abu total .............................................. 28
3.4.7 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam ........ 28
3.5 Skrining Fitokimia .................................................................. 29
3.5.1 Pemeriksaan alkaloida ................................................... 29
3.5.2 Pemeriksaan glikosida ................................................... 30
3.5.3 Pemeriksaan flavonoida ................................................ 30
3.5.4 Pemeriksaan saponin ..................................................... 30
3.5.5 Pemeriksaan tanin ......................................................... 31
3.5.6 Pemeriksaan triterpenoid/steroid ................................... 31
3.6 Pembuatan Ekstrak dan Fraksinasi ......................................... 31
3.6.1 Pembuatan ekstrak ......................................................... 31
3.6.2 Pemisahan secara fraksinasi .......................................... 32
3.7 Uji Aktovitas Antioksidan dengan Metode DPPH .................. 32
3.7.1 Prinsip metode penangkapan radikal bebas DPPH ....... 32
3.7.2 Pembuatan larutan blanko ............................................. 32
3.7.3 Penentuan panjang gelombang serapan maksimum ...... 33
3.7.4 Pembuatan larutan induk sampel uji ............................. 33
3.7.5 Pembuatan larutan uji .................................................... 33
xii
3.7.6 Pembuatan larutan induk vitamin C .............................. 33
3.7.7 Pembuatan larutan uji vitamin C ................................... 33
3.7.8 Penentuan persen peredaman ........................................ 34
3.7.9 Penentuan nilai IC50 ....................................................... 34
3.8 Analisis Kandungan Kimia .................................................... 35
3.8.1 Analisis dengan kromatografi lapis tipis (KLT) ............ 35
3.8.2 Analisis dengan kromatografi kertas (KKt) .................. 35
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................... 36
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan ................................................... 36
4.2 Hasil Karakterisasi Simplisia .................................................. 36
4.3 Hasil Skrining Fitokimia ........................................................ 38
4.4 Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi ................................................ 39
4.5 Hasil Pengujian Antioksidan ................................................... 39
4.5.1 Hasil penentuan panjang gelombang maksimum .......... 39
4.5.2 Hasil analisis peredaman radikal bebas DPPH .............. 40
4.5.3 Hasil analisis nilai IC50 sampel uji ................................. 44
4.6 Hasil Analisis Kandungan Kimia ............................................ 46
4.6.1 Hasil analisis kromatografi lapis tipis (KLT) ................. 46
4.6.1.1 Hasil KLT ekstrak etanol .................................. 46
4.6.1.2 Hasil KLT fraksi n-heksan ................................ 46
4.6.2 Hasil analisis kromatografi kertas (KKt) ....................... 46
4.6.2.1 Hasil KKt ekstrak etanol ................................... 46
4.6.2.2 Hasil KKt fraksi etil asetat ................................ 47
4.6.2.3 Hasil KKt fraksi air ........................................... 48
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .................................................... 50
xiii
5.1 Kesimpulan.............................................................................. 50
5.2 Saran ....................................................................................... 50
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 51
LAMPIRAN .............................................................................................. 54
xiv
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Hasil karakterisasi serbuk simplisia buah senduduk ..................... 37
4.2 Hasil skrining fitokimia ................................................................ 38
4.3 Hasil analisis absorbansi DPPH terhadap penambahan ekstrak

dan fraksi buah senduduk serta vitamin C .................................... 41
4.4 Hasil persamaan regresi linier dan nilai IC50 yang diperoleh dari
ekstrak dan fraksi buah senduduk ................................................. 45
4.5 Data hasil analisis KKt ekstrak etanol ......................................... 47
4.6 Data hasil analisis KKt fraksi etil asetat ....................................... 48
4.7 Data hasil analisis KKt fraksi air ................................................... 48
xv
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1.1 Kerangka pikir penelitian ........................................................... 4
4.1 Kurva serapan maksimum larutan DPPH 40 µg/ml dalam

metanol secara spektrofotometer visible .................................. 39
4.2 Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan ekstrak etanol buah

senduduk..................................................................................... 42
4.3 Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan fraksi etil asetat buah
senduduk .................................................................................... 42
4.4 Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan fraksi n-heksan buah

senduduk .................................................................................... 43
4.5 Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan fraksi air buah

senduduk .................................................................................... 43
4.6 Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan vitamin C ................. 44
xvi
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Hasil identifikasi tumbuhan ................................................... 54
2 Gambar tumbuhan dan buah senduduk ................................... 55
3 Gambar simplisia dan serbuk simplisia buah senduduk ........ 56
4 Bagan pembuatan simplisia, karakterisasi dan skrining

fitokimia .................................................................................. 57
5 Bagan pembuatan ekstrak dan fraksinasi ................................ 58
6 Bagan pembuatan fraksi n-heksan fraksi etilasetat buah

senduduk ................................................................................ 59
7 Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia buah

senduduk ................................................................................. 60
8 Perhitungan hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia ....... 61
9 Hasil uji antioksidan ............................................................... 64
10 Perhitungan nilai IC50 ............................................................. 70
11 Kromatogram dan data Rf hasil KLT ekstrak etanol buah

senduduk ................................................................................. 75
12 Kromatogram dan data Rf hasil KLT fraksi n-heksan buah

senduduk ................................................................................. 77
13 Kromatogram dan data Rf hasil KKt ekstrak etanol buah

senduduk ................................................................................. 79
14 Kromatogram dan data Rf hasil KKt fraksi etilasetat buah

senduduk ................................................................................. 85
15 Kromatogram dan data Rf hasil KKt fraksi air buah

senduduk ................................................................................. 91
xvii
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Antioksidan adalah senyawa kimia yang mempunyai struktur molekul
yang dapat memberikan elektronnya kepada molekul radikal bebas dan dapat
memutus reaksi berantai dari radikal bebas (Kumalaningsih, 2006). Peranan
antioksidan sangat penting dalam menetralkan dan menghancurkan radikal bebas
yang dapat menyebabkan kerusakan sel dan juga merusak biomolekul, seperti
DNA (deoxyribonucleic acid), protein, dan lipoprotein di dalam tubuh yang
akhirnya dapat memicu terjadinya penyakit degeneratif seperti kanker, jantung,
artritis, katarak, diabetes dan hati (Salamah, 2015).
Senyawa antioksidan dapat berupa bahan sintetik maupun alami.
Penggunaan antioksidan sintetik seperti BHT (butyl hidroxytoluene) dan BHA
(butyl hidroxyanisol) mulai dibatasi karena dari hasil penelitian dilaporkan bahwa
antioksidan sintetik diduga dapat menjadi agen karsinogenik penyebab penyakit
kanker dan tumor (Hernani dan Raharjo, 2005). Adanya kekhawatiran akan
kemungkinan efek samping dari antioksidan sintetis ini menyebabkan antioksidan
alami menjadi alternatif yang sangat dibutuhkan (Sunarni, 2005).
Antioksidan alami banyak ditemukan dalam tumbuh-tumbuhan, dan
umumnya senyawa fenolik (polifenolik), atau dapat berupa senyawa flavonoid,
tokoferol, asam-asam organik polifenol, kumarin, turunan asam sinamat dan
lignan (Kumalaningsih, 2006). Senyawa-senyawa tersebut tersebar di beberapa
bagian tanaman, seperti pada kayu, kulit kayu, akar, buah, bunga, biji, dan daun
(Trilaksani, 2003).
1
Salah satu tumbuhan yang mengandung senyawa antioksidan adalah buah
senduduk (Melastoma malabathricum L.) suku Melastomaceae. Buah senduduk
mengandung antosianin yang tinggi dan merupakan bahan yang banyak
menghasilkan antioksidan, seperti senyawa delfinidin (Wibiani, 2010). Hasil uji
fitokimia esktrak buah senduduk mentah maupun esktrak buah masak,
menunjukkan kandungan kimia yang sama yaitu alkaloid, triterpenoid, flavonoid,
tanin dan fenol (Syafitri, dkk., 2014).
Metode yang digunakan untuk menentukan aktivitas antioksidan
penangkap radikal bebas, salah satunya adalah metode DPPH (1,1-diphenyl-2-
picrylhydrazyl), yang memberikan informasi reaktivitas senyawa yang diuji
dengan suatu radikal stabil. Penangkap radikal bebas menyebabkan elektron
menjadi berpasangan yang kemudian menyebabkan penghilangan warna (dari
warna violet gelap) yang sebanding dengan jumlah elektron yang diambil
(Sunarni, 2005). Metode ini banyak digunakan karena prosesnya sederhana, cepat,
tepat, tidak tergantung pada kepolaran bahan yang akan diuji dan juga sangat
sensitif sehingga tidak memerlukan banyak sampel (Winata, 2011).
Berdasarkan uraian di atas, maka pada penelitian ini dilakukan uji
aktivitas antioksidan dan pola kromatografi (analisa kandungan kimia) esktrak
dan fraksi buah senduduk yang meliputi karakterisasi simplisia, skrining
fitokimia, ekstraksi serbuk simplisia, dan dilanjutkan dengan fraksinasi
menggunakan pelarut n-heksan dan etilasetat. Ekstrak dan fraksi buah senduduk
diuji aktivitas antioksidannya dengan metode DPPH dan dilakukan analisa
kandungan kimia secara kromatografi lapis tipis (KLT) dan kromatografi kertas
(KKt) dengan variasi fase gerak, untuk mengetahui pola kromatografi (kandungan
kimia) dari buah senduduk.
2
1.2 Perumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang di atas, maka perumusan masalah pada
penelitian ini adalah :
a. Apakah esktrak etanol dan fraksi buah senduduk memiliki aktivitas
antioksidan?
b. Mana yang paling efektif antara ekstrak etanol dan fraksi buah senduduk yang
memiliki aktivitas antioksidan?
c. Berapa jumlah kandungan senyawa ekstrak etanol dan fraksi buah senduduk
menggunakan KLT dan KKt?
1.3 Hipotesis Penelitian
Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka hipotesis pada penelitian
ini adalah:
a. Ekstrak etanol dan fraksi dari buah senduduk memiliki aktivitas antioksidan.
b. Fraksi etilasetat memilki aktivitas antioksidan paling efektif.
c. Banyak senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol dan fraksi buah
senduduk yang diketahui dengan menggunakan KLT dan KKt.
1.4 Tujuan Penelitian
Adapun tujuan penelitian ini adalah untuk:
a. Mengetahui aktivitas antioksidan esktrak etanol dan fraksi buah senduduk.
b. Mengetahui fraksi yang paling efektif sebagai antioksidan.
c. Mengetahui kandungan senyawa ekstrak etanol dan fraksi dari buah senduduk
menggunakan KLT dan KKt.
3
1.5 Manfaat Penelitian
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah mengenai
aktivitas antioksidan dan kandungan kimia (pola kromatografi) ekstrak etanol dan
fraksi buah senduduk.
1.6 Kerangka Pikir Penelitian
Variabel bebas Variabel terikat Parameter
Serbuk simplisia
buah senduduk
Aktivitas antioksidan - IC 50
Ekstrak etanol - % peredaman
buah senduduk
Fraksi n-heksan,
fraksi etil asetat
dan fraksi air Pola kromatografi
(kandungan kimia) - Harga RF
(sisa)
- Warna noda
Gambar 1.1 Kerangka pikir penelitian
4
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tumbuhan
Uraian tumbuhan meliputi habitat, morfologi, klasifikasi, sinonim, nama
daerah, kegunaan dan kandungan kimia.
2.1.1 Habitat
Senduduk dengan nama latin Melastoma malabathricum L., termasuk
suku melastomataceae. Senduduk merupakan buah tropis Indonesia yang dapat
tumbuh di dataran rendah pada ketinggian 10 m – 1850 m dari permukaan laut.
Biasanya tumbuh liar di ladang atau di rawa dan dapat hidup pada tempat-tempat
yang mendapat cukup sinar matahari, seperti di lereng gunung, halaman rumah
dan semak-semak (Arisandi dan Andriani, 2000).
2.1.2 Morfologi
Tumbuhan senduduk berupa tanaman perdu, tegak dengan tinggi 0,5-4 m,
banyak bercabang, bersisik dan berambut. Daun tunggal, bertangkai, letak
berhadapan silang. Helai daun bundar telur, memanjang sampai lonjong, ujung
lancip, pangkal membulat, tepi rata, permukaan berambut pendek yang jarang dan
kaku sehingga teraba kasar dengan 3 tulang daun yang melengkung, panjang 2-20
cm, lebar 0,75-8,5 cm, warnanya hijau. Berbunga majemuk keluar diujung cabang
berupa malai rata dengan jumlah bunga tiap malai 4-18, mahkota 5, warnanya
ungu kemerahan. Buah masak akan merekah dan terbagi atas beberapa bagian,
warnanya ungu tua kemerahan dan dapat dimakan, sedangkan daun muda dapat
dimakan sebagai lalap atau disayur. Terdapat biji kecil-kecil berwarna coklat
(Dalimartha, 2000).
5
2.1.3 Klasifiksi tumbuhan
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Dicotyledoneae
Bangsa : Myrtales
Suku : Melastomataceae
Marga : Melastoma
Jenis : Melastoma malabathricum L. (Simanjuntak, 2008)
2.1.4 Sinonim
Nama lain dari senduduk (Melastoma malabathricum L) adalah
Melastoma affine G. Don., Melastoma polyanthum BI (Depkes R.I., 1995).
2.1.5 Nama daerah
Nama daerah tumbuhan ini adalah senggani, kluruk (Jawa), harendong
(Sunda), senduduk (Melayu) (Hariana, 2011).
2.1.6 Kegunaan
Tumbuhan senduduk dapat digunakan sebagai obat tradisional, daun
tumbuhan ini secara tradisional berkhasiat mengobati keputihan, cacingan pada
anak-anak, diare, sariawan, pendarahan rahim, bisul, luka berdarah dan luka bakar
(Djauhariya, 2004).
Tumbuhan ini berkhasiat sebagai penurun panas, penghilang rasa sakit,
peluruh urine, penghilang bengkak, pelancar aliran darah, dan penghenti
pendarahan (hemostatik) (Hariana, 2011).
2.1.7 Kandungan kimia
Kandungan kimia tumbuhan senduduk yang terdeteksi (Melastoma
malabathricum Linn) antara lain senyawa flavonoid, tanin, steroid/triterpenoid
6
(Depkes RI., 1995). Sedangkan menurut Sentra informasi IPTEK (2009), buah
senduduk berwarna ungu kemerahan yang menandakan adanya kandungan
antosianin. Kandungan antosianin yang tinggi merupakan penghasil antioksidan
(Wibiani, 2010).
2.2 Uraian Kimia
Uraian senyawa kimia yang dijabarkan meliputi senyawa flavonoid, tanin,
steroid/ triterpenoid, glikosida, alkaloid dan saponin.
2.2.1 Flavonoid
Flavonoid adalah sekelompok besar senyawa polifenol tanaman yang
tersebar luas dalam berbagai bahan makanan dan dalam berbagai konsenterasi.
Flavonoid memiliki kerangka dasar karbon yang terdiri atas 15 atom karbon, di
mana dua cincin benzen (C6) terikat pada suatu rantai propan (C3) sehingga
membentuk susunan C6-C3-C6 (Lenny, 2006).
Flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada
tumbuhan berwarna hijau dan terdapat pada semua bagian tumbuhan termasuk
daun, akar, kayu, kulit, tepung sari, bunga, buah dan biji.. Penyebaran jenis
flavonoid pada golongan tumbuhan yang tersebar yaitu angiospermae, klorofita,
fungi, briofita (Markham, 1988). Umumnya terdapat dalam bentuk terikat pada
gula, sehingga untuk menganalisis flavonoid lebih baik ekstrak tumbuhan
dihidrolisis terlebih dahulu untuk memecah ikatan gula dengan aglikon (Harborne,
1987).
2.2.2 Tanin
Tanin terdapat luas pda tumbuhan berpembuluh. Sebagaian besar
tumbuhan banyak mengandung tanin rasanya sepat (Robinson, 1995). Tanin
7
tumbuhan dibagi menjadi dua golongan, yaitu tanin terkondensasi dan tanin
terhidrolisis. Kadar tanin yang tinggi mempunyai arti penting bagi tumbuhan
yakni pertahanan bagi tumbuhan dan membantu mengusir hewan pemakan
tumbuhan. Tanin terkondensasi terdapat pada paku-pakuan, gimnospermae dan
angiospermae, sedangkan tanin terhidrolisis penyebarannya terbatas pada
tumbuhan berkeping dua. Beberapa tanin terbukti mempunyai antioksidan dan
menghambat pertumbuhan tumor (Harborne, 1987).
2.2.3 Steroid/Triterpenoid
Steroid adalah triterpena yang kerangka dasarnya sistem cincin
siklopentana pehidrofenantren dan merupakan senyawa organik yang berasal dari
hewan dan tumbuhan dengan struktur inti molekulnya C-27, tetrasiklis dengan
susunan 3 cincin segi enam dan 1 cincin segi lima. Triterpenoid adalah senyawa
yang kerangka karbonnya berasal dari 6 satuan isopren dan secara biosintesis
diturunkan dari hidrokarbon C-30 asiklik, yaitu skualen Triterpenoid dapat dibagi
atas 4 golongan senyawa, yaitu triterpen sebenarnya, steroid, saponin dan
glikosida jantung (Harborne, 1987).
2.2.4 Glikosida
Glikosida adalah senyawa yang terdiri atas gabungan dua bagian, yaitu
bagian gula dan bukan gula. Keduanya dihubungkan oleh ikatan berupa jembatan
oksigen, jembatan nitrogen, jembatan sulfur maupun jembatan karbon. Bagian
gula disebut glikon sementara bagian bukan gula disebut bagian aglikon atau
genin. Apabila glikon dan aglikon saling terikat maka senyawa ini disebut sebagai
glikosida. Jembatan oksigen yang menghubungkan glikon-aglikon ini sangat
mudah terurai oleh pengaruh asam, basa, enzim, air dan panas. Semakin pekat
kadar asam atau basa maupun semakin panas lingkungannya atau pengaruh
8
lainnya maka glikosida akan semakin mudah dan cepat terhidrolisis (Gunawan,
2004).
2.2.5 Alkaloid
Alkaloida sering diartikan dengan senyawa yang mengandung nitrogen
bersifat basa dan mempunyai aktivitas farmakologis. Alkaloida merupakan
senyawa yang mempunyai aktivitas fisiologi yang menonjol dan digunakan secara
luas dalam bidang pengobatan (Harborne, 1987). Ada tiga pereaksi yang
digunakan untuk mendeteksi alkaloid yaitu preaksi Meyer, Bouchardat dan
Dragendorf (Depkes R.I., 1995)
2.2.6 Saponin
Saponin berasal dari bahasa Latin yaitu “Sapo” yang berarti sabun dan
sifatnya menyerupai sabun. Saponin merupakan senyawa aktif permukaan yang
kuat dan menimbulkan busa, jika dikocok dengan air. Beberapa saponin bekerja
sebagai antimikroba. Dikenal dua jenis saponin, yaitu glikosida triterpenoida dan
glikosida struktur tertentu yang mempunyai rantai samping spiroketal. Kedua
jenis saponin ini larut dalam air dan etanol tetapi tidak larut dalam eter (Robinson,
1995).
2.3 Ekstraksi
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut
sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Simplisia
yang diekstraksi mengandung senyawa aktif yang dapat larut dan senyawa yang
tidak larut seperti serat, karbohidrat, protein dan lain-lain. Senyawa aktif yang
terdapat dalam berbagai simplisia dapat digolongkan ke dalam golongan minyak
atsiri, alkaloida, flavonoida, glikosia, tanin, saponin, steroid/triterpenoid dan lain-
9
lain. Menurut Ditjen POM (2000), ada beberapa metode ekstraksi dengan
menggunakan pelarut yaitu:
A. Cara dingin
1. Maserasi
Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan
pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur
ruangan (kamar). Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan yang kontinu.
Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan
penyaringan maserat pertama dan seterusnya.
2. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai
sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. Prosesnya terdiri
dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi
sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak), terus-menerus sampai diperoleh
perkolat yang jumlahnya 1-5 kali jumlah bahan.
B. Cara panas
1. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,
selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan
adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu
pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna.
2. Sokletasi
Sokletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang
umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan
jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
10
3. Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan adanya pengadukan kontinu) pada
temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu secara umum
dilakukan pada temperatur 40-50ºC.
4. Infundasi
Infundasi adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air
(bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur pada suhu
96-98ºC) selama waktu tertentu (15-20 menit).
5. Dekoktasi
Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (≥30 menit) dan
temperatur sampai titik didih air.
2.4 Radikal Bebas
Radikal bebas adalah setiap molekul yang mengandung satu atau lebih
elektron yang tidak berpasangan. Radikal bebas sangat reaktif dan dengan mudah
menjurus ke reaksi yang tidak terkontrol, menghasilkan ikatan dengan DNA,
protein, lipida, atau kerusakan oksidatif pada gugus fungsional yang penting pada
biomolekul ini. Radikal bebas juga terlibat dan berperan dalam patologi dari
berbagai penyakit degeneratif, yakni kanker, aterosklerosis, jantung koroner,
katarak, dan penyakit degeneratif lainnya (Silalahi, 2006).
Radikal bebas memiliki reaktivitas yang sangat tinggi. Hal ini ditunjukkan
oleh sifatnya yang sangat menarik atau menyerang elektron di sekelilingnya.
Senyawa radikal bebas juga dapat mengubah suatu molekul menjadi suatu radikal.
Bila senyawa radikal baru tersebut bertemu dengan molekul lain, akan terbentuk
radikal baru lagi, dan seterusnya sehingga akan terjadi reaksi berantai (chain
11
reactions).Reaksi seperti ini akan berlanjut terus dan baru akan berhenti apabila
reaktivitasnya diredam oleh senyawa yang bersifat antioksidan (Sayuti dan
Yenrina, 2015)
2.5 Antioksidan
Antioksidan adalah senyawa yang mempunyai struktur molekul yang
dapat memberikan elektronnya kepada molekul radikal bebas dan dapat memutus
reaksi berantai dari radikal bebas (Kumalaningsih, 2006).
Antioksidan atau reduktor berfungsi untuk mencegah terjadinya oksidasi
atau menetralkan senyawa yang telah teroksidasi dengan cara menyumbangkan
hidrogen dan atau elektron (Silalahi, 2006).
Menurut Kumalaningsih (2006), antioksidan tubuh dikelompokkan
menjadi 3 yakni:
(1). Antioksidan primer yang berfungsi untuk mencegah pembentuk senyawa
radikal baru karena dapat merubah radikal bebas yang ada menjadi molekul yang
berkurang dampak negatifnya, sebelum radikal bebas ini sempat bereaksi.
Contohnya adalah enzim superoksida dismutase (SOD) yang berfungsi sebagai
pelindung hancurnya sel-sel dalam tubuh karena radikal bebas.
(2) Antioksidan sekunder merupakan senyawa yang berfungsi menangkap
senyawa serta mencegah terjadinya reaksi berantai. Contohnya adalah vitamin E,
vitamin C, dan betakaroten yang dapat diperoleh dari buah-buahan.
(3) Antioksidan tersier merupakan senyawa yang memperbaiki kerusakan sel-sel
dan jaringan yang disebabkan radikal bebas. Contohnya enzim metionin
sulfoksidan reduktase untuk memperbaiki DNA pada inti sel.
12
2.5.1 Antioksidan alami
Data epidemiologi mendukung keterkaitan antara tingginya asupan sayur-
sayuran dan buah-buahan dengan rendahnya penyakit kronis. Hal ini dikarenakan
sayur-sayuran dan buah-buahan kaya akan zat gizi (vitamin, mineral, serat
pangan) serta berbagai kelompok zat bioaktif lain yang disebut zat fitokimia. Zat
bioaktif ini bekerja secara sinergis, meliputi mekanisme, pengaturan sintesis
kolesterol dan metabolisme hormon, penurunan tekanan darah, antioksidan,
antibakteri, serta efek antivirus (Silalahi, 2006).
Senyawa antioksidan alami tumbuhan umumnya adalah senyawa fenolik
atau polifenolik yang dapat berupa golongan flavonoid, turunan asam sinamat,
kumarin, tokoferol, dan asam-asam organik. Senyawa antioksidan alami
polifenolik dapat bereaksi sebagai pereduksi, penangkap radikal bebas, pengkelat
logam, dan peredam terbentuknya singlet oksigen (Kumalaningsih, 2006).
2.5.2 Vitamin C
Vitamin C atau asam askorbat mempunyai berat molekul 176,13 dengan
rumus bangun C6H8O6, dengan titik lebur ±190°C. Asam askorbat mengandung
tidak kurang dari 99,0% dan tidak lebih 100,5% C6H8O6. Pemerian: serbuk atau
hablur putih atau agak kuning, tidak berbau, rasa asam, oleh pengaruh cahaya
lambat laun menjadi gelap, dalam larutan cepat teroksidasi. Kelarutan: mudah
larut dalam air, agak sukar larut dalam etanol, tidak larut dalam kloroform, dalam
eter dan dalam benzena. Penyimpanan dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari
cahaya (Ditjen POM., 1995).
Vitamin C berperan dalam pencegahan penyakit jantung koroner,
mencegah kanker, meningkatkan sistem kekebalan tubuh terhadap infeksi virus
dan bakteri, dan berperan dalam regenerasi vitamin E (Silalahi, 2006).
13
Gambar 2.1. Rumus Bangun Vitamin C
2.6 Spektrofotometri UV-Visibel
Metode pengukuran menggunakan prinsip spektrofotometri adalah
berdasarkan absorpsi cahaya pada panjang gelombang tertentu melalui suatu
larutan yang mengandung kontaminan yang akan ditentukan konsentrasinya.
Prinsip kerja dari metode ini adalah jumlah cahaya yang diabsorpsi oleh larutan
sebanding dengan konsentrasi kontaminan dalam larutan (Lestari, 2009). Panjang
gelombang untuk sinar ultraviolet antara 200-400 nm sedangkan panjang
gelombang untuk sinar tampak/visible antara 400-750 nm (Gandjar dan Rohman,
2007).
Spektrofotometer pada dasarnya terdiri atas sumber sinar monokromator,
tempat sel untuk zat yang diperiksa, detektor, penguat arus dan alat ukur atau
pencatat. (Depkes RI, 1979). Alat ini menggunakan hukum Lambert Beer sebagai
acuan (Ewing, 1975).
2.7 Metode DPPH (1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl)
Pada tahun 1922, ditemukan senyawa berwarna ungu radikal bebas stabil
DPPH. DPPH berwarna sangat ungu seperti KMnO4 dan bentuk tereduksinya
berwarna oranye-kuning (Ionita, 2005).
14
DPPH merupakan singkatan umum untuk senyawa kimia yaitu 1,1-
Diphenyl-2-Picrylhydrazyl yang mempunyai berat molekul 394,32 dengan rumus
molekul C18H12N5O6. Bubuk berwarna gelap, larut dalam air dan penyimpanan
dalam wadah tertutup baik pada suhu -20ᵒC (Molyneux, 2004).
Gambar 2. Rumus Bangun DPPH
Metode DPPH adalah sebuah metode yang sederhana yang dapat
digunakan untuk menguji kemampuan antioksidan yang terkandung dalam
makanan. Metode DPPH dapat digunakan untuk sampel yang padat dan juga
dalam bentuk larutan. Prinsipnya dimana elektron ganjil pada molekul DPPH
memberikan serapan maksimum pada panjang gelombang 517 nm yang berwarna
ungu. Warna ini akan berubah dari ungu menjadi kuning lemah apabila elektron
ganjil tersebut berpasangan dengan atom hidrogen yang disumbangkan senyawa
antioksidan. Perubahan warna ini berdasarkan reaksi kesetimbangan kimia
(Prakash, 2001).
Parameter yang dipakai untuk menunjukan aktivitas antioksidan adalah
harga konsentrasi efisien atau efficient concentration (EC50) atau Inhibitory
Concentration (IC50) yaitu konsentrasi suatu zat antioksidan yang dapat
menyebabkan 50% DPPH kehilangan karakter radikal atau konsentrasi suatu zat
antioksidan yang memberikan persen peredaman sebesar 50%. Zat yang
15
mempunyai aktivitas antioksidan tinggi, akan mempunyai harga EC50 atau IC50
yang rendah (Molyneux, 2004).
2.7.1 Pelarut
Metode ini akan bekerja dengan baik menggunakan pelarut metanol atau
etanol dan kedua pelarut ini tidak mempengaruhi dalam reaksi antara sampel uji
sebagai antioksidan dengan DPPH sebagai radikal bebas (Molyneux, 2004).
2.7.2 Pengukuran absorbansi – panjang gelombang
Panjang gelombang maksimum (λmaks) yang digunakan dalam
pengukuran uji sampel uji sangat bervariasi. Menurut beberapa literatur panjang
gelombang maksimum untuk DPPH antara lain 515-520 nm. Bagaimanapun
dalam praktiknya hasil pengukuran yang memeberikan peak maksimum itulah
panjang gelombangnya yaitu sekitar panjang gelombang yang disebutkan diatas.
Nilai absorbansi yang mutlak tidaklah penting, karena panjang gelombang dapat
diatur untuk memberikan absorbansi maksimum sesuai dengan alat yang
digunakan (Molyneux, 2004).
2.7.3 Waktu pengukuran
Waktu pengukuran bertujuan untuk mengetahui waktu yang tepat dalam
melakukan pengukuran, yakni saat sample telah mencapai kesetimbangan
sehingga dalam kondisi stabil. Waktu pengukuran yang digunakan dalam
beberapa penelitian sangatlah bervariasi, yaitu 1-240 menit dan yang paling
banyak direkomendasikan adalah 60 menit (Rosidah, dkk., 2008).
Berikut ini dapat dilihat resonansi DPPH dan reaksi DPPH dengan atom H
netral yang berasal dari senyawa-senyawa yang bersifat antioksidan:
16
Gambar 3. Resonansi DPPH
Gambar 4. Reaksi antara DPPH dengan atom H yang berasal dari antioksidan
2.8 Uraian Kromatografi
Kromatografi adalah suatu nama yang diberikan untuk teknik pemisahan
tertentu. Cara yang asli telah diketengahkan pada tahun 1903 oleh Tswett, ia telah
menggunakannya untuk pemisahan senyawa-senyawa yang berwarna dan nama
kromatografi diambilkan dari senyawa yang berwarna. Elusi pertama-tama telah
digunakan oleh Tswett untuk pemisahan pigmen-pigmen daun, karena warna
tersebut maka cepat terlihat lokasinya dalam kolom. Kolom yang digunakan diisi
padatan kalsium karbonat dan dielusi dengan pelarut organik sehingga terjadi
pemisahan yang berupa pita-pita yang berwarna pada kolom. Pembatasan untuk
senyawa-senyawa yang berwarna tak lama dan hampir kebanyakan pemisahan
secara kromatografi sekarang diperuntukkan pada senyawa- senyawa yang tak
17
berwarna. Senyawa-senyawa tak berwarna dapat juga dilihat lokasinya, karena
flouresensi senyawa dalam sinar ultraviolet (Sastrohamidjojo, 1985).
Semua cara kromatografi pada dasarnya menggunakan dua fase yaitu fase
tetap (stationary) dan yang lainnya fase gerak (mobile), pemisahan-pemisahan
tergantung pada gerakan relatif dari dua fasa ini (Sastrohamidjojo, 1985). Fase
diam dapat berupa bahan padat atau porus dalam bentuk molekul kecil atau dalam
bentuk cairan yang dilapiskan pada pendukung padat atau dilapiskan pada dinding
kolom. Fase gerak dapat berupa gas atau cairan (Rohman, 2009).
Menurut Sastrohamidjojo (1985), cara-cara kromatografi dapat
digolongkan sesuai dengan sifat-sifat dari fase tetap yang dapat berupa zat padat
atau zat cair. Jika fase tetap berupa zat padat maka cara tersebut dikenal sebagai
kromatografi serapan (absorption chromatography), jika fase tetap cair dikenal
sebagai kromatografi partisi (partition chromatography). Karena fase gerak dapat
berupa zat cair atau gas maka ada empat macam sistem kromatografi yaitu:
1. Fase gerak zat cair – fase tetap padat :
Dikenal sebagai kromatografi serapan yang meliputi
- Kromatografi lapisan tipis
- Kromatografi penukar ion
2. Fase gerak gas – fase tetap padat : - Kromatografi gas padat
3. Fase gerak zat cair - fase tetap zat cair
Dikenal sebagai kromatografi partisi
- Kromatografi kertas
4. Fase gerak gas - fase tetap zat cair
- Kromatografi gas – cair
- Kromatografi kolom kapiler
18
Menurut Rohman (2009), berdasarkan pada mekanisme pemisahannya
kromatografi dibedakan menjadi:
a. Kromatografi adsorbsi
b. Kromatografi partisi
c. Kromatografi pasangan ion
d. Kromatografi penukar ion
e. Kromatografi eksklusi ukuran
f. Kromatografi afinitas
Menurut Rohman (2009), berdasarkan pada alat yang digunakan
kromatografi dapat dibagi atas:
a. Kromatografi kertas
b. Kromatografi lapis tipis
c. Kromatografi cair kinerja tinggi
d. Kromatografi gas
2.8.1 Kromatografi kertas
Kromatografi kertas atau KKt pada hakekatnya ialah KLT pada lapisan
tipis selulosa atau kertas. Cara ini ditemukan jauh sebelum KLT dan telah dipakai
secara efektif selama bertahun-tahun untuk pemisahan molekul biologi yang polar
seperti asam amino, gula dan nukleotida. KKt tidak memerlukan plat pendukung
dan kertas dapat dengan mudah diperoleh dalam bentuk murni sebagai kertas
saring (Gritter, dkk., 1991).
Pada kromatografi kertas sebagai penjerap digunakan sehelai kertas
dengan susunan serabut dan tebal yang sesuai. Kandungan air pada kertas dapat
dianggap sebagai fase diam, maka mekanisme partisi berperan penting dalam
pemisahan. Pemisahan dapat berlangsung menggunakan fase cair tunggal dengan
19
proses yang sama dengan kromatografi adsorpsi dalam kolom (Depkes RI., 1995).
Keberhasilan dari pemisahan kromatografi kertas tergantung juga pada proses
deteksi. Senyawa-senyawa yang berwarna tentu saja terlihat sebagai noda-noda
berwarna yang terpisah pada akhir pengembangan. Untuk senyawa-senyawa tak
berwarna memerlukan deteksi secara kimia dan fisika. Metoda fisika dilakukan
pengamatan di bawah sinar ultra ungu sebelum dan sesudah setiap metoda
dikerjakan. Metoda kimia adalah merupakan deteksi yang paling penting,
pereaksi-pereaksi yang digunakan biasanya dinyatakan sebagai “pereaksi-pereaksi
lokasi”. Cara yang digunakan untuk mendeteksi noda yaitu dengan jalan
penyemprotan (Sastrohamidjojo, 1985).
2.8.2 Kromatografi lapis tipis
Kromatografi lapis tipis (KLT) dikembangkan oleh Izmailoff dan
Schraiber pada tahun 1938. Pada kromatografi lapis tipis, fase diamnya berupa
lapisan yang seragam pada permukaan bidang datar yang didukung oleh lempeng
kaca, plat aluminium atau plat plastik (Rohman, 2009). Fase diam dapat berupa
serbuk halus yang berfungsi sebagai permukaan penjerap (kromatografi cair-
padat) atau berfungsi sebagai penyangga untuk lapisan zat cair (kromatografi cair-
cair). Fase diam yang umum dipakai adalah silika gel (asam silikat), alumina
(aluminium oksida), kieselgur (tanah diatom) dan selulosa (Gritter, dkk., 1991).
Fase gerak dapat berupa hampir segala macam pelarut atau campuran
pelarut. Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT
merupakan teknik yang sensitif (Rohman, 2009). Deteksi noda senyawa tidak
berwarna pada KLT dilakukan secara fisika atau kimia. Secara fisika dilakukan
dengan fluoresensi sinar ultraviolet dan pencacahan radioaktif, sedangkan secara
kimia dilakukan dengan cara penyemprotan (Sastrohamidjojo, 1985).
20
2.8.3 Kromatografi gas
Pada kromatografi gas fase geraknya berupa gas dan fase diam umumnya
suatu cairan, tetapi dapat berupa zat padat atau kombinasi zat padat dan zat cair.
Pada kromatografi gas-cair, fase diam cair sebagai lapisan tipis yang tetap pada
penyangga padat inert yang terbagi halus seperti tanah silika untuk kromatografi,
bata tahan api yang dilumatkan, butir kaca atau bagian dalam tabung berdiameter
kecil. Fase gerak atau gas pembawa umumnya dalam silinder bertekanan yang
dilengkapi dengan katup untuk mengatur tekanan, dialirkan melalui alat pengukur
aliran yang digunakan untuk pengaturan seksama laju aliran yang sesuai untuk
pemisahan suatu campuran tertentu (Ditjen POM.,1995).
2.8.4 Kromatografi penukar ion
Kromatografi penukar ion merupakan pemisahan senyawa-senyawa polar
dan ion berdasarkan muatan. Metode ini dapat digunakan untuk hampir semua
molekul bermuatan termasuk protein, nukleotida dan asam amino. Kromatografi
penukar ion sering digunakan untuk pemurnian protein, analisis air dan quality
control. Prinsip dasar kromatografi penukar ion adalah fase diam mampu menukar
ion dan pada permukaannya mempunyai muatan listrik, muatan dinetralkan oleh
ion balik (counter ion) dari fase gerak. Fase gerak yang mengandung ion dan
molekul cuplikan ionik bersaing dengan ion-ion itu mendapat tempat pada
permukaan fase diam (Rohman, 2009).
2.8.5 Kromatografi eksklusi
Kromatografi eksklusi adalah metode pemisahan yang tergantung pada
pertukaran molekul terlarut di antara pelarut fase gerak dan pelarut yang sama
dalam pori-pori bahan pengisi kolom. Rentang ukuran pori bahan pengisi kolom
menentukan rentang ukuran molekul pada pemisahan yang terjadi. Alat terdiri
21
dari kolom kromatografi berisi bahan yang mampu melakukan fraksinasi pada
rentang ukuran molekul yang sesuai dan dapat dikendalikan suhunya. Fase gerak
melewati kolom pada laju aliran yang tetap, baik oleh gravitasi atau menggunakan
pompa yang sesuai (Ditjen POM., 1995).
22
BAB III
METODE PENELITIAN
Metodologi penelitian adalah metode eksperimental laboratorium,
meliputi pengumpulan dan pengolahan sampel, pemeriksaan karakteristik
simplisia, skrining fitokimia, pembuatan ekstrak etanol 80%, fraksinasi
menggunakan pelarut n-heksan dan etilasetat, uji aktivitas antioksidan dengan
metode DPPH dan analisis kandungan kimia untuk mengetahui pola kromatografi
dengan KLT dan KKt. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Fitokimia dan
Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
3.1 Alat dan Bahan
3.1.1 Alat
Alat yang digunakan pada penilitian ini adalah alat-alat gelas
laboratorium, botol timbang, cawan penguap, chamber (Desaga), kaca objek, kaca
penutup, krus porselin, lemari pengering, mikroskop (Olympus), neraca analitik
(Vibra), neraca kasar (O’haus), oven listrik (Memmert), penangas air, rotary
evaporator (Stuart), tanur (Gallenkamp), dan spektrofotometer UV-Vis
(Shimadzu).
3.1.2 Bahan
Bahan tumbuhan yang digunakan pada penelitian ini adalah buah
senduduk (Melastoma malabathricum L.). Bahan kimia yang digunakan
berkualitas pro analisis kecuali dinyatakan lain yaitu : amil alkohol, asam asetat,
asam asetat anhidrida asam klorida (HCl), asam nitrat, asam sulfat (H2SO4), besi
(III) klorida, bismut nitrat, butanol, etilasetat, kalium iodida (KI), kloralhidrat,
23
kloroform, isopropanol, magnesium, metanol, natrium hidroksida (NaOH),
natrium sulfat anhidrat, n-heksan, raksa (II) klorida, timbal (II) asetat, toluen, -
naftol, 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). Akuades dan etanol hasil destilasi.
3.2 Penyiapan Bahan Tumbuhan
3.2.1 Pengambilan bahan tumbuhan
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah buah tumbuhan
senduduk (Melastoma malabathricum L.) yang masih segar, berwarna ungu
diambil dari daerah Sidikalang, Provinsi Sumatera Utara. Pengambilan sampel
dilakukan secara purposif tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama
dari daerah lain.
3.2.2 Identifikasi tumbuhan
Tumbuhan yang digunakan pada penelitian ini diidentifikasi di Herbarium
Bogoriense, Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan
Indonesia (LIPI).
3.2.3 Pembuatan simplisisa buah senduduk
Buah senduduk (Melastoma malabathricum L.) dibersihkan dari
pengotoran, dicuci, ditiriskan, dan dikeringkan di udara terbuka (diangin-
anginkan) terlindung dari cahaya matahari langsung. Sampel yang telah kering
dan rapuh diserbuk. Kemudian dilakukan karakterisasi simplisia.
3.3 Pembuatan Pereaksi
Pembuatan larutan pereaksi di bawah ini menurut: Depkes R.I. (1995),
yaitu larutan air-kloroform, asam klorida 2 N, besi (III) klorida 1%, kloralhidrat,
24
Bouchardat, Dragendorf, Mayer, Mollish dan timbal asetat 0,4 N; Merck (1978)
yaitu pereaksi Liebermann-Burchard; Molyneux (2004) yaitu larutan pereaksi
DPPH 0,5 mM (konsentrasi 200 ppm); Markham (1998) yaitu larutan asam asetat
5%, asam klorida 1% dan larutan BAA.
3.3.1 Larutan air-kloroform
Sebanyak 2,5 ml kloroform dikocok dengan 900 ml air suling, encerkan
dengan air suling hingga 1000 ml.
3.3.2 Larutan asam asetat 5%
Asam asetat glasial sebanyak 5 ml diencerkan dengan air suling sebanyak
100 ml dan dibiarkan selama 12 jam.
3.3.3 Larutan asam klorida 1%
Asam klorida pekat sebanyak 2,7 ml diencerkan dalam air suling hingga
100 ml, dibiarkan selama 12 jam.
3.3.4 Larutan asam klorida 2 N
Sebanyak 17 ml asam klorida pekat diencerkan dengan air suling sampai
100 ml.
3.3.5 Larutan BAA (butanol:asam asetat:air)
n-butanol–asam asetat–air suling dengan perbandingan 4:1:5 dicampur di
dalam corong pisah. Campuran dikocok dan dibiarkan selama 17 jam sampai
memisah sempurna, kemudian diambil lapisan atas.
3.3.6 Laruran besi (III) klorida 1%
Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam air suling sampai 100 ml.
3.3.7 Larutan kloralhidrat
Sebanyak 50 g kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam 20 ml air
suling.
25
3.3.8 Larutan pereaksi DPPH 0,5 mM (konsentrasi 200 ppm)
Sebanyak 19,7 mg DPPH ditimbang, kemudian dilarutkan dalam metanol
hingga volume 100 ml.
3.3.9 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida dilarutkan dalam air suling secukupnya
kemudian ditambahkan 2 g iodida dan dicukupkan dengan air suling.
3.3.10 Pereaksi Dragendorff
Larutan bismut nitrat P 40% b/v dalam asam nitrat P sebanyak 20 ml
dicampur dengan 50 ml kalium iodida P 54,4% b/v, didiamkan sampai memisah
sempurna. Lalu diambil lapisan jernih dan diencerkan dengan air suling
secukupnya hingga 100 ml.
3.3.11 Pereaksi Liebermann-Burchard (LB)
Campur secara perlahan 5 ml asam asetat anhidrida dengan 5 ml asam
sulfat 97%, kemudian tambahkan campuran tersebut ke dalam 50 ml etanol.
3.3.12 Pereaksi Mayer
Larutan raksa (II) klorida P 2,27% b/v sebanyak 60 ml dicampur dengan
10 ml larutan kalium iodida P 50% b/v, kemudian ditambahkan air suling
secukupnya hingga 100 ml.
3.3.13 Pereaksi Mollish
Sebanyak 3 g α-naftol dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N hingga diperoleh
volume 100 ml.
3.3.14 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 N
Timbal (II) asetat sebanyak 15,17 g dilarutkan dalam air suling bebas
karbondioksida hingga 100 ml.
26
3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi penetapan kadar air (WHO,
1992), pemeriksaan makroskopik, dan mikroskopik, penetapan kadar sari yang
larut dalam air, penetapan kadar sari yang larut dalam etanol, penetapan kadar abu
total dan penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam (Depkes R.I., 1995).
3.4.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan cara mengamati simplisia
meliputi bentuk, warna, ukuran, dan ketebalan dari simplisia buah senduduk.
3.4.2 Pemeriksaan mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia buah
senduduk dengan cara ditaburkan di atas kaca objek yang telah ditetesi dengan
larutan kloralhidrat kemudian ditutup dengan kaca penutup, diamati di bawah
mikroskop.
3.4.3 Penetapan kadar air simplisia
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode azeotropi (destilasi toluen).
Alat-alatnya terdiri dari labu alas bulat 500 ml, alat penampung, pendingin,
tabung penyambung, tabung penerima 5 ml, pemanas.
Cara kerja: sebanyak 200 ml toluen dan 2 ml air suling dimasukkan ke
dalam labu alas bulat, didestilasi selama 2 jam, toluen didinginkan selama 30
menit dan volume air di dalam tabung penerima dibaca. Selanjutnya ke dalam
labu dimasukkan sebanyak 5 g serbuk simplisia, dipanaskan hati-hati selama 15
menit, setelah toluen mendidih, kecepatan tetesan diatur 2 tetes untuk tiap detik
sampai sebagian air terdestilasi, kemudian kecepatan destilasi dinaikkan sampai 4
tetes tiap detik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas
dengan toluen, destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima
27
dibiarkan mendingin pada suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna,
dibaca volume air, selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan jumlah air
yang terdapat di dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen.
3.4.4 Penetapan kadar sari yang larut dalam air
Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan di udara dimaserasi selama
24 jam dalam 100 ml air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air sampai 1 liter)
dalam labu bersumbat sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama, kemudian
dibiarkan selama 18 jam, disaring. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering
dalam cawan dangkal berdasar rata dan telah ditara dan sisa dipanaskan pada suhu
105ᵒC sampai bobot tetap. Kadar sari larut dalam air dihitung terhadap bahan
yang telah dikeringkan di udara.
3.4.5 Pemeriksaan kadar sari yang larut dalam etanol
Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan di udara dimaserasi selama
24 jam dalam etanol 96% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6
jam pertama, dibiarkan selama 18 jam, kemudian disaring cepat untuk
menghindari penguapan etanol, 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan
dangkal berdasar rata yang telah ditara dan dipanaskan pada suhu 105ᵒC sampai
bobot tetap. Kadar sari yang larut dalam etanol dihitung terhadap bahan yang
telah dikeringkan di udara.
3.4.6 Penetapan kadar abu total
Sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama
dimasukkan ke dalam cawan porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian
diratakan. Krus dipijarkan pada suhu 600ᵒC sampai arang habis, kemudian
didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung
terhadap bahan yang dikeringkan di udara.
28
3.4.7 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam
Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu larut total dididihkan
dalam 25 ml asam klorida 2 N selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam
asam dikumpulkan disaring melalui kertas saring bebas abu kemudian dicuci
dengan air panas. Residu dan kertas saring dipijarkan pada 600ᵒC sampai bobot
tetap, kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu tidak larut dalam asam
dihitung terhadap bahan yang dikeringkan.
3.5 Skrining Fitokimia
Pemeriksaan skrining fitokimia (uji pendahuluan) meliputi senyawa
steroid/triterpenoid (Harborne 1987), alkaloid, glikosida, saponin, (Depkes RI
1995), Flavonoid dan tanin (Fransworth 1966).
3.5.1 Pemeriksaan alkaloida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambah 1 ml asam
klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit.
Dinginkan dan disaring. Filtrat digunakan untuk percobaan berikut :
 Filtrat sebanyak 3 tetes ditambah dengan 2 tetes larutan pereaksi mayer,
akan terbentuk endapan menggumpal berwarna putih atau kuning
 Filtrat sebanyak 3 tetes ditambah pereaksi bouchardat, akan terbentuk
endapan berwarna coklat sampai hitam.
 Filtrat sebanyak 3 tetes ditambah dengan 2 tetes pereaksi dragendorf, akan
terbentuk warna merah atau jingga.
Alkaloida positif jika terjadi endapan atau kekeruhan paling sedikit dua
dari ketiga percobaan di atas.
29
3.5.2 Pemeriksaan glikosida
Sebanyak 3 g serbuk simplisia ditimbang, lalu disari dengan 30 ml
campuran dari 7 bagian etanol 95% dan 3 bagian air. Direfluks selama 10 menit,
didinginkan lalu disaring. Pada 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml timbal (II) asetat
0,4 M dan 25 ml air, dikocok dan didiamkan selama 5 menit, disaring. Filtrat
disari 3 kali, tiap kali dengan 20 ml campuran kloroform-isopropanol (3:2). Pada
kumpulan sari di tambahkan natrium sulfat anhidrat, disaring dan diuapkan pada
suhu tidak lebih dari 50ᵒC, sisanya dilarutkan dengan 2 ml etanol. Larutan sisa
digunakan untuk percobaan berikut: 0,1 ml larutan percobaan dimasukkan dalam
tabung reaksi selanjutnya diuapkan di atas penangas air, pada sisa ditambahkan 2
ml akuades dan 5 tetes pereaksi molisch, lalu ditambahkan hati-hati 2 ml asam
sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuknya cincin ungu pada batas kedua
cairan menunjukkan adanya ikatan gula (glikon).
3.5.3 Pemeriksaan flavonoida
Sebanyak 10 g serbuk simplisia ditambahkan air panas, dididihkan selama
5 menit dan disaring dalam keadaan panas, ke dalam 5 ml filtrat ditambahkan 0,1
g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alkohol, dikocok
dan dibiarkan memisah. Flavonoida positif jika warna merah, kuning, jingga pada
lapisan amil alkohol.
3.5.4 Pemeriksaan saponin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia, dimasukkan ke dalam tabung reaksi.
Ditambahkan air panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10
detik. Jika terbentuk buih yang mantap setinggi 1 sampai 10 cm, tidak kurang
dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan asam klorida 2 N
menunjukkan adanya saponin.
30
3.5.5 Pemeriksaan tanin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia, disari dengan 10 ml air suling.
Dipanaskan dan kemudian disaring. Filtratnya diencerkan dengan air sampai
tidak berwarna. Larutan diambil sebanyak 2 ml dan ditambahkan 1-2 tetes
pereaksi besi (III) klorida 1%. Jika terjadi warna biru atau hijau kehitaman,
menunjukkan adanya tanin.
3.5.6 Pemeriksaan steroida/triterpenoida
Sebanyak 1 g serbuk simplisia dimaserasi dengan 20 ml n-heksan selama
2 jam, diasring, lalu filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa
ditambahkan 20 tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes asam sulfat pekat
(pereaksi Liebermann-Burchard), diteteskan pada saat akan mereaksikan sampel
uji. Apabila terbentuk warna biru atau biru hijau menunjukkan adanya steroid,
sedangkan warna merah, merah muda atau ungu menunjukkan adanya
triterpenoid.
3.6 Pembuatan ekstrak dan fraksinasi
3.6.1 Pembuatan ekstrak
Ekstraksi simplisia buah senduduk dilakukan menurut Depkes R.I., 2010.
Cara kerja: Satu bagian serbuk kering simplisia dimasukkan ke dalam maserator,
tambahkan 10 bagian etanol 80%. Rendam selama 6 jam pertama sambil sekali-
sekali diaduk, kemudian diamkan selama 18 jam. Pisahkan maserat dengan cara
pengendapan. Ulangi proses penyarian sekurang-kurangnya dua kali dengan jenis
dan jumlah pelarut yang sama. Hasil maserasi disaring, kemudian dipekatkan
dengan alat penguap vakum putar pada suhu ±40oC sampai diperoleh esktrak
31
etanol buah senduduk (EEBS) cukup kental dan dipekatkan di atas penangas air
hingga menjadi kental.
3.6.2 Pemisahan secara fraksinasi
Pembuatan fraksi-fraksi dilakukan secara ekstraksi cair-cair (ECC)
menggunakan pelarut n-heksan dan etilasetat. Sebanyak 10 g ekstrak etanol
ditambahkan etanol 20 ml dan air suling 40 ml, lalu dimasukkan ke dalam corong
pisah. Kemudian ditambahkan 40 ml n-heksan, dikocok lalu didiamkan sampai
diperoleh 2 lapisan, n-heksan (lapisan atas) dipisahkan dan fraksinasi dilakukan
sampai warna lapisan n-heksan jernih. Sisanya (lapisan bawah) kemudian
ditambahkan 50 ml etilasetat, dikocok lalu didiamkan sampai terdapat 2 lapisan,
lapisan etilasetat (lapisan atas) dipisahkan dan fraksinasi dilakukan sampai warna
lapisan etilasetat jernih. Semua fraksi, termasuk fraksi sisa terakhir (fraksi air)
yang diperoleh diuapkan sampai fraksinya kental.
3.7 Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
3.7.1 Prinsip metode penangkapan radikal bebas DPPH
Kemampuan sampel uji dalam meredam DPPH (1,1-Diphenyl-2-Picryl-
hidrazyl) sebagai radikal bebas dalam larutan metanol (sehingga terjadi
peredaman warna ungu DPPH) dengan nilai IC50 (konsentrasi sampel uji yang
mampu meredam radikal bebas sebesar 50%) digunakan sebagai parameter untuk
menentukan aktivitas antioksidan sampel uji tersebut (Molyneux, 2004).
3.7.2 Pembuatan larutan blanko
Larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 200 µg/ml) dipipet sebanyak 5 ml,
kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml, dilarutkan dan dicukupkan
volumenya dengan metanol sampai garis tanda (konsentrasi 40 µg/ml).
32
3.7.3 Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Larutan DPPH konsentrasi 40 ppm dihomogenkan dan diukur serapannya
pada panjang gelombang 400-800 nm (Graham, 1976).
3.7.4 Pembuatan larutan induk sampel uji
Sebanyak 10 mg ekstrak etanol, fraksi etil asetat, fraksi n-heksan dan
fraksi air buah senduduk ditimbang kemudian masing-masing dilarutkan dalam
labu tentukur 10 ml dengan metanol lalu volumenya dicukupkan dengan metanol
sampai garis tanda (konsentrasi 1000 µg/ml).
3.7.5 Pembuatan larutan uji
Masing-masing larutan induk dipipet sebanyak 0,03 ml; 0,06; 0,125 ml;
0,25 ml; 0,5 ml. kemudian masing-masing dimasukkan ke dalam labu tentukur 10
ml (untuk mendapatkan konsentrasi 3,125 µg/ml, 6,25 µg/ml, 12,5 µg/ml, 25
µg/ml, 50 µg/ml), ke dalam masing-masing labu tentukur ditambahkan 2 ml
larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 40 µg/ml) lalu volume dicukupkan dengan
metanol sampai garis tanda, didiamkan di tempat gelap selama 60 menit, lalu
diukur serapannya pada spektrofotometer UV-Visible.
3.7.6 Pembuatan larutan induk vitamin C
Sebanyak 10 mg vitamin C ditimbang kemudian dilarutkan ke dalam labu
tentukur 10 ml dengan metanol, lalu dicukupkan dengan metanol sampai garis
tanda (konsentrasi 1000 µg/ml ).
3.7.7 Pembuatan larutan uji vitamin C
Larutan induk dipipet sebanyak 0,02 ml; 0,04 ml; 0,06 ml dan 0,08 ml
kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 ml (untuk mendapatkan
konsentrasi 2 µg/ml, 4 µg/ml, 6 µg/ml dan 8 µg/ml), kemudian dalam masing-
33
masing labu tentukur ditambahkan 2 ml larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 40
µg/ml). Lalu volume dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda, didiamkan
di tempat yang gelap selama 60 menit lalu diukur serapannya pada spektrofometer
UV-Visible.
3.7.8 Penentuan persen peredaman
Kemampuan antioksidan diukur sebagai penurunan serapan larutan DPPH
(peredaman warna ungu DPPH) akibat adanya penambahan larutan uji. Nilai
serapan larutan DPPH sebelum dan sesudah penambahan larutan uji tersebut
dihitung sebagai persen peredaman.
ontrol- Sampel
% Peredaman = x 100%
ontrol
Keterangan : A Kontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel

A Sampel = Absorbansi sampel
3.7.9 Penentuan nilai IC50
Nilai IC50 merupakan bilangan yang menunjukkan konsentrasi sampel uji
(μg/ml) yang memberikan peredaman DPPH sebesar 50% (mampu meredam
proses oksidasi DPPH sebesar 50%). Nilai 0% berarti tidak mempunyai aktivitas
antioksidan, sedangkan nilai 100% berarti peredaman total dan pengujian perlu
dilanjutkan dengan pengenceran larutan uji untuk melihat batas konsentrasi
aktivitasnya. Hasil perhitungan dimasukkan ke dalam persamaan regresi dengan
konsentrasi ekstrak (μg/ml) sebagai absis (sumbu X) dan nilai % peredaman
(antioksidan) sebagai ordinatnya (sumbu Y) (Molyneux, 2004).
Secara spesifik, suatu senyawa dikatakan antioksidan sangat kuat jika nilai
IC50 kurang dari 50 μg/ml, kuat untuk IC50 bernilai 50-100 μg/ml, sedang jika IC50
34
bernilai 100-150 µg/ml, dan lemah jika IC50 bernilai 151-200 µg/ml (Molyneux,
2004)
3.8 Analisis Kandungan Kimia
3.8.1 Analisis dengan kromatografi lapis tipis (KLT)
Pemeriksaan secara KLT ekstrak etanol dan fraksi buah senduduk
dilakukan menggunakan fase gerak n-heksan-etil asetat dengan berbagai
perbandingan, fase diam plat pra lapis silika gel 60 F254 dan sebagai penampak
bercak digunakan pereaksi Lieberman-Burchard.
Cara kerja: larutan ekstrak ditotolkan pada plat pra lapis silika gel 60 F254
yang sebelumnya telah diaktifkan, kemudian dimasukkan ke dalam chamber yang
telah jenuh dengan uap pengembang dan ditutup rapat, setelah elusi selesai plat
dikeluarkan dari chamber dan dikeringkan di udara, kemudian plat disemprot
dengan larutan penampak bercak. Warna bercak yang terjadi diamati dan dihitung
harga Rf-nya.
3.8.2 Analisis dengan kromatografi kertas (KKt)
Pemeriksaan secara KKt dari ekstrak dan fraksi buah senduduk dilakukan
dengan menggunakan fase gerak BAA (4:1:5), HCl 1% dan asam asetat 5%
dengan fase diam kertas saring Whatmann nomor 1 dan sebagai penampak bercak
digunakan pereaksi AlCl3, NH3 dan FeCl3.
Cara kerja: larutan fraksi ditotolkan pada kertas Whatmann, kemudian
dimasukkan ke dalam chamber yang telah jenuh dengan uap pengembang dan
ditutup rapat, setelah elusi selesai plat dikeluarkan dari chamber dan dikeringkan
di udara, kemudian disemprot dengan pereaksi AlCl3, NH3 dan FeCl3. Warna
bercak yang terjadi diamati dan dihitung harga Rf-nya.
35
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan
Hasil identifikasi tumbuhan yang dilakukan di Herbarium Bogoriense,
Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia
(LIPI) Bogor menunjukkan bahwa sampel termasuk suku Melastomaceae, spesies
Melastoma malabthricum L. Hasil identifikasi, gambar tumbuhan senduduk,
gambar simplisia dan serbuk simplisia serta bagan kerja dapat dilihat pada
Lampiran 1, 2, 3, 4, 5 dan 6 halaman 54-58.
4.2 Hasil Karakterisasi Simplisia
Hasil pemeriksaan makroskopik simplisia buah senduduk dicirikan: buah
terdiri dari 5 ruas, namun karena ketika masih berbentuk buah segar cukup
lembek maka kebanyakan bentuk simplisia sudah tidak beraturan. Pada daging
buah terdapat biji-biji yang berukuran sangat kecil berwarna coklat dan mudah
terlepas, buahnya kecil dengan ukuran garis rentang lebih kurang 1,5 cm,
berwarna ungu kemerahan (gelap), dengan rasa sepat-sepat manis.
Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia diperoleh adanya sel batu
dengan bentuk berombak. Mesokarpium yang terdiri dari sel-sel parenkhim, dan
serabut sklerenkhim. Epikarpium merupakan epidermis kulit buah. Gambar hasil
pengamatan dapat dilihat pada Lampiran 6 halaman 59.
Hasil pemeriksaan kadar air, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol,
kadar abu total dan kadar abu yang tidak larut asam dapat dilihat pada Tabel 4.1.
36
Tabel 4.1 Hasil karakterisasi serbuk simplisia buah senduduk
No Karakteristik Simplisia Hasil (%)

1 Kadar air 5,31%
2 Kadar sari larut air 24,23%
3 Kadar sari larut etanol 29,82%
4 Kadar abu total 3,17%
5 Kadar abu tidak larut asam 0,67%
Hasil penetapan kadar air dari simplisia buah senduduk diperoleh 5,31 %,
yang menunjukkan bahwa kandungan air yang ada masih dalam batas minimal
yang dapat ditolerir karena kandungan air yang tinggi menyebabkan
ketidakstabilan ekstrak. Penetapan kadar air dilakukan untuk memberi batasan
atau rentang besarnya kandungan air di dalam simplisia atau ekstrak, karena
tingginya kandungan air dapat mempercepat pertumbuhan bakteri dan jamur
(Ditjen POM R.I., 2000).
Kadar sari yang larut dalam etanol adalah 29,82% dan kadar sari yang
larut dalam air adalah 24,23%. Kadar sari larut air dan etanol merupakan
pengujian untuk penetapan jumlah kandungan senyawa yang dapat larut dalam iar
dan kandungan senyawa yang dapat larut dalam etanol (Ditjen POM R.I., 2000).
Penetapan kadar sari larut air untuk mengetahui kadar senyawa yang bersifat polar
dalam simplisia dan kadar sari larut etanol untuk mengetahui kadar senyawa yang
bersifat non polar dan polar. Senyawa senyawa yang dapat larut dalam air adalah
glikosida, tanin, gula, enzim, zat warna dan asam organik. Senyawa-senyawa
yang larut dalam etanol adalah glikosida, flavonoid, sterioid/triterpenoid,
karotenoid dan dalam jumlah sedikit yang larut yaitu lemak (Depkes R.I., 1986).
Kadar abu total dengan bobot 3,17% dan kadar abu tidak larut dalam asam
adalah 0,67%. Penetapan kadar abu untuk mengetahui kandungan mineral internal
yang terdapat di dalam simplisia yang diteliti, serta senyawa anorganik yang
37
tersisa selama pembakaran. Kadar abu tidak larut asam untuk menentukan jumlah
silika, khususmya pasir yang ada pada simplisia (WHO, 1992).
4.3 Hasil Skrining Fitokimia
Hasil skrining fitokimia dari serbuk simplisia buah senduduk dilihat pada
Tabel 4.2.
Tabel 4.2 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan esktrak buah senduduk
No Parameter Hasil
1 Steroid/triterpen +
2 Alkaloid +
3 Flavonid +
4 Saponin -
5 Tanin +
6 Glikosida +
Keterangan: (+): mengandung senyawa
(-): tidak mengandung senyawa
Hasil skrining fitokimia simplisia dan esktrak buah senduduk
menunjukkan adanya senyawa alkaloid, glikosida, flavonoid, steroid/triterpenoid
dan tanin. Menurut Syafitri, dkk., (2014), hasil uji fitokimia esktrak buah
senduduk mentah maupun esktrak buah masak menunjukkan kandungan kimia
yang sama yaitu alkaloid, triterpenoid, flavonoid, tanin dan fenol.
Buah senduduk mengandung senyawa polifenol yang memiliki sifat
sebagai antioksidan. Menurut Fachraniah (2012), antioksidan merupakan zat yang
mampu memperlambat atau mencegah oksidasi. Zat ini secara nyata mampu
memperlambat atau menghambat oksidasi zat yang mudah teroksidasi meskipun
dalam konsentrasi yang rendah.
38
4.4 Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi
Hasil ekstraksi simplisia buah senduduk dengan pelarut etanol 80%
diperoleh ekstrak etanol buah senduduk sebanyak 66,17 g dari 300 g simplisia.
Persen rendemen diperoleh sebesar 22,06 %. Penggunaan pelarut etanol 80%
adalah untuk menarik semua senyawa metabolit sekunder pada buah.
Hasil fraksinasi dari ekstrak etanol buah senduduk dengan pelarut n-
heksan diperoleh 0,2 g dari 15 g ekstrak dan rendemennya 1,33%. Sedangkan
dengan pelarut etil asetat diperoleh 1,68 g dari 15 g ekstrak dengan rendemen
11,20%.
4.5 Hasil Pengujian Antioksidan
4.5.1 Hasil penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Hasil pengukuran serapan maksimum larutan DPPH 40 µg/ml dalam
metanol dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dapat dilihat pada
Gambar 4.1.
Gambar 4.1. Kurva serapan maksimum larutan DPPH 40 µg/ml dalam metanol
secara spektrofotometri visibel
39
4.5.2 Hasil analisis peredaman radikal bebas DPPH oleh sampel uji
Hasil uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH diperoleh serapan
yang diukur pada spektrofotometri dengan panjang gelombang 516 nm. Aktivitas
antioksidan ekstrak etanol, fraksi etil asetat, fraksi n-heksan dan fraksi air buah
senduduk diperoleh dari hasil pengukuran absorbansi dengan metode DPPH pada
menit ke-60 dengan adanya penambahan larutan uji dengan konsentrasi 3,125
µg/ml, 6,25 µg/ml, 12,5 µg/ml, 25 µg/ml dan 50 µg/ml yang dibandingkan dengan
kontrol DPPH (tanpa penambahan larutan uji). Dapat dilihat penurunan
absorbansi DPPH terhadap penambahan konsentrasi larutan uji dalam
menganalisis aktivitas antioksidan pada Tabel 4.3.
Pada tabel 4.3 menunjukkan adanya penurunan nilai absorbansi DPPH dari
ekstrak etanol buah senduduk, fraksi etil asetat, fraksi n-heksan, fraksi air dan
vitamin C yang diberi larutan uji dibandingkan terhadap kontrol pada setiap
kenaikan konsentrasi. Menurut Molyenux (2004), penurunan nilai absorbansi
menunjukkan adanya aktivitas antioksidan dari sampel. Interaksi antioksidan-
DPPH baik secara transfer elektron atau radikal hidrogen kepada DPPH, akan
menetralkan radikal bebas DPPH menjadi berpasangan, maka warna larutan
berubah dari ungu tua menjadi kuning terang dan absrobansi pada panjang
gelombang maksimumnya akan hilang.
40
Tabel 4.3 Hasil analisis absorbansi DPPH terhadap penambahan ekstrak dan
fraksi buah senduduk serta vitamin C
Larutan Uji Konsentrasi (µg/ml) Absorbansi

Ekstrak etanol 0 0,97
3,125 0,65
6,25 0,55
12,5 0,35
25 0,17
50 0,06
Fraksi etil asetat 0 0,96
3,125 0,45
6,25 0,39
12,5 0,15
25 0,06
50 0,05
Fraksi n-heksan 0 0,96
3,125 0,86
6,25 0,83
12,5 0,78
25 0,65
50 0,41
Fraksi air 0 0,96
3,125 0,88
6,25 0,88
12,5 0,80
25 0,74
50 0,52
Vitamin C 0 1,12
2 0,72
4 0,46
6 0,15
8 0,01
Nilai absorbansi larutan DPPH sebelum dan sesudah penambahan larutan
uji dihitung sebagai persen peredaman. Hasil analisis peredaman radikal bebas
oleh ekstrak dan fraksi buah senduduk dapat dilihat pada Gambar 4.2, 4.3, 4.4, 4.5
dan 4.6. berikut ini :
41
100
90
80
70
%peredaman
60
50
40
30
20
10
0
3,125 6,25 12,5 25 50
Konsentrasi (µg/ml)
Gambar 4.2 Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan ekstrak etanol buah
senduduk
100
90
80
70
%peredaman
60
50
40
30
20
10
0
3,125 6,25 12,5 25 50
Gambar 4.3 Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan fraksi etil asetat buah
senduduk
42
70
60
50
%peredaman
40
30
20
10
0
3,125 6,25 12,5 25 50
Gambar 4.4 Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan fraksi n-heksan buah
senduduk
50
45
40
35
%peredaman
30
25
20
15
10
5
0
3,125 6,25 12,5 25 50
Gambar 4.5 Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan fraksi air buah senduduk
43
120
100
%peredaman
80
60
40
20
0
2 4 6 8
Gambar 4.6 Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan vitamin C
Hasil analisis peredaman radikal bebas oleh ekstrak dan fraksi buah
senduduk serta vitamin C sebagai pembanding menunjukkan bahwa semakin
meningkat konsentrasi larutan uji, maka semakin meningkat aktivitas peredaman
DPPH karena semakin banyak atom hidrogen dari ekstrak buah senduduk yang
berpasangan dengan elektron pada radikal bebas DPPH sehingga serapannya
semakin menurun.
4.5.4 Hasil analisis nilai IC50 (inhibitory concentration) sampel uji
Nilai IC50 diperoleh berdasarkan persamaan regresi linier yang didapatkan
dengan cara memplot konsentrasi larutan uji dan persen peredaman DPPH sebagai
parameter aktivitas antioksidan dengan konsentrasi larutan uji (µg/ml) sebagai
absis (X) dan nilai persen peredaman sebagai ordinat (Y). Hasilnya dapat dilihat
pada Tabel 4.4.
Hasil tersebut menunjukkan bahwa ekstrak etanol, fraksi etil asetat, n-
heksan memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan nilai IC50 kurang
dari 50 µg/ml. Sedangkan fraksi air memiliki aktivitas antioksidan yang kuat
44
dengan nilai IC50 dalam rentang 50-100 µg/ml. Perbedaan nilai IC50 pada masing-
masing fraksi disebabkan adanya distribusi golongan senyawa metabolit sekunder
yang bersifat sebagai antioksidan (flavonoid, tanin dan steroid/triterpenoid)
berdasarkan kepolaran pelarut yang digunakan.
Tabel 4.4 Hasil Persamaan regresi linier dan nilai IC50 yang diperoleh dari ekstrak
dan fraksi buah senduduk
Larutan Uji Persamaan Regresi IC50 (µg/ml)

Ekstrak etanol Y= 1,59x + 26,77 14,53
Fraksi etil asetat Y= 1,39x +41,81 5,91
Fraksi n-heksan Y= 1,07x + 5,11 41,93
Fraksi air Y= 0,87x + 3,06 54,17
Vitamin C Y= 12,51x + 5,98 3,52
Pada tabel di atas juga terlihat fraksi etil asetat memiliki nilai IC50 yang
lebih kecil dibandingkan esktrak etanol dan fraksi n-heksan. Hal ini menunjukkan
bahwa untuk meredam warna radikal bebas hingga setengah konsentrasinya pada
fraksi etil asetat lebih efektif dibandingkan ekstrak etanol dan fraksi n-heksan,
tetapi masih kurang efektif jika dibandingkan dengan vitamin C.
Fraksi etil asetat dengan nilai IC50 5,91 µg/ml memiliki aktivitas
antioksidan terkuat diantara ekstrak dan fraksi buah senduduk diduga karena
adanya senyawa fenolik dan flavonoid. Menurut Gusrav, senyawa flavonoid
berperan sebagai antioksidan karena memiliki gugus hidroksil yang dapat
melepaskan proton dalam bentuk ion hidrogen. Ion hidrogen hanya memiliki satu
buah proton dan tidak memiliki elektron, sehingga dalam elektron radikal yang
terdapat pada atom nitrogen di senyawa DPPH berikatan dengan ion hidrogen
dan menghasilkan DPPH yang tereduksi (Gusrav, dkk., 2007). Radikal bebas
45
pada DPPH dapat tereduksi juga ketika bereaksi dengan donor higrogen yang
terdapat dalam senyawa fenolik (Arazo, dkk., 2011).
4.6 Hasil Analisis Kandungan Kimia
4.6.1 Hasil analisis kromatografi lapis tipis (KLT)
4.6.1.1 Hasil KLT ekstrak etanol
Hasil analisis KLT ekstrak etanol buah senduduk menggunakan fase gerak
n-heksan:etil asetat yang memberikan hasil terbaik adalah perbandingan 50:50
dengan penampak bercak Liebermann-Burchard diperoleh 4 noda dengan 3 noda
senyawa steroid/triterpenoid (Rf 0,11, 0,15 dan 0,82). Gambar kromatogram dan
Tabel data hasil analisis secara KLT secara keseluruhan dapat dilihat pada
Lampiran 10, halaman 74-75.
4.6.1.2 Hasil KLT fraksi n-heksan
Hasil analisis KLT fraksi n-heksan buah senduduk menggunakan fase
gerak n-heksan:etil asetat, yang memberikan hasil terbaik adalah perbandingan
80:20 dengan penampak bercak Liebermann-Burchard diperoleh 6 noda dengan 4
noda senyawa steroid/triterpenoid (Rf 0,08, 0,19, 0,52, 0,62). Gambar
kromatogram dan Tabel data hasil analisis secara KLT secara keseluruhan dapat
dilihat pada Lampiran 11, halaman 76-77.
4.6.2 Hasil analisis kromatografi kertas (KKt)
4.6.2.1 Hasil KKt ekstrak etanol
Pemisahan ekstrak etanol buah senduduk secara kromatografi kertas (KKt)
menggunakan fase gerak BAA (4:1:5), HCl 1%, dan asam asetat 5. Noda yang
terbentuk disemprot dengan pereaksi AlCl3, NH3 dan FeCl3. Hasil pemisahan
46
ekstrak etanol buah senduduk secara kromatografi kertas dapat dilihat pada Tabel
4.5.
Pada tabel terlihat bahwa hasil kromatografi ekstrak etanol buah senduduk
dengan KKt menunjukkan fase gerak terbaik adalah BAA (4:1:5), diperoleh 3
noda senyawa tanin yang berwarna kehitaman, 1 noda senyawa glikosida
berwarna merah muda dan 3 noda senyawa flavonoid yang berwarna kuning dan
coklat dengan AlCl3 dan NH3. Fase gerak HCl 1% dan asam asetat 5%
memberikan jumlah noda lebih sedikit dibanding fase gerak BAA (4:1:5). Gambar
kromatogram dapat dilihat pada Lampiran 12, halaman 78-83.
Tabel 4.5 Data hasil analisis KKt ekstrak etanol
Harga Rf
Fase gerak
AlCl3 NH3 FeCl3
0,10
0,08 0,20
BAA 0,18
0,23 0,90
0,53
0,04 0,06 0,08
HCl 1%
0,11 0,11 0,15
0,08
Asam asetat 5% 0,08 0,04
0,65
4.6.2 Hasil KKt fraksi etilasetat
Pemisahan fraksi etilasetat buah senduduk secara kromatografi kertas
(KKt) menggunakan fase gerak BAA (4:1:5), HCl 1%, dan asam asetat 5%. Noda
yang terbentuk disemprot dengan pereaksi AlCl3, NH3 dan FeCl3. Hasil
pemisahan fraksi etil asetat buah senduduk secara kromatografi kertas dapat
dilihat pada Tabel 4.6.
Pada tabel terlihat bahwa hasil kromatografi fraksi etil asetat buah
senduduk dengan KKt menunjukkan fase gerak terbaik adalah BAA (4:1:5),
47
diperoleh 3 noda senyawa tanin yang berwarna kehitaman dan 1 noda senyawa
glikosida berwarna merah muda dan 4 noda senyawa flavonoid yang berwarna
kuning dan coklat dengan AlCl3 dan NH3. Fase gerak HCl 1% dan asam asetat 5%
memberikan jumlah noda yang lebih sedikit dibanding fase gerak BAA (4:1:5).
Gambar kromatogram dapat dilihat pada Lampiran 13, halaman 84-89.
Tabel 4.6 Data hasil analisis KKt fraksi etilasetat
Harga Rf
Fase gerak
AlCl3 NH3 FeCl3
0,35 0,56
0,43
BAA 0,41 0,72
0,76
0,71 0,83
0,15
HCl 1% 0,11 - 0,42
0,65
0,20
Asam asetat 5% 0,12 - 0,50
0,70
4.6.3 Hasil KKt fraksi air
Pemisahan fraksi air buah senduduk secara kromatografi kertas (KKt)
menggunakan fase gerak BAA (4:1:5), HCl 1%, dan asam asetat 5%. Noda yang
terbentuk disemprot dengan pereaksi AlCl3, NH3 dan FeCl3. Hasil pemisahan
fraksi air buah senduduk secara kromatografi kertas dapat dilihat pada Tabel 4.7.
Tabel 4.7 Data hasil analisis KKt fraksi air
Harga Rf
Fase gerak
AlCl3 NH3 FeCl3
0,12
BAA - 0,08
0,23
HCl 1% 0,11 - 0,09
Asam asetat 5% - 0,28
48
Pada tabel terlihat bahwa hasil kromatografi fraksi air buah senduduk
dengan KKt menunjukkan fase gerak terbaik adalah BAA (4:1:5), diperoleh 2
noda senyawa tanin yang berwarna kehitaman dengan penampak bercak FeCl3.
Fase gerak HCl 1% dan asam asetat 5% memberikan jumlah noda yang lebih
sedikit dibanding fase gerak BAA (4:1:5). Gambar kromatogram dapat dilihat
pada Lampiran 14, halaman 90-95.
49
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa:
a. Ekstrak etanol, fraksi etilasetat, fraksi n-heksan dan fraksi air buah senduduk
memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 14,53 µg/ml, 5,91 µg/ml,
41,93 µg/ml, dan 54,17 µg/ml.
b. Fraksi etilasetat memiliki aktivitas antioksidan paling efektif dengan nilai IC50
yaitu 5,91 µg/ml.
c. Hasil analisis secara KLT, ekstrak etanol diperoleh 3 noda senyawa
steroid/triterpenoid dengan fase gerak terbaik n-heksan:etilasetat (50:50), fraksi
n-heksan diperoleh 4 senyawa steroid/triterpenoid dengan fase gerak terbaik
yaitu n-heksan:etilasetat (80:20). Sedangkan hasil analisis secara KKt, esktrak
etanol diperoleh 1 senyawa tanin, 1 senyawa glikosida, dan 3 senyawa
flavonoida, fraksi etil asetat diperoleh 1 noda senyawa glikosida, 4 senyawa
flavonoid, dan 3 senyawa tanin, fraksi air diperoleh 2 senyawa tanin dengan
fase gerak terbaik yaitu BAA (4:1:5).
5.2 Saran
Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk mengisolasi senyawa aktif
bersifat antioksidan dari fraksi etilasetat buah senduduk dan memformulasikannya
dalam bentuk sediaan obat.
50
DAFTAR PUSTAKA
Arazo, M., Bello, A., Rastrelli, L., Montelier, M., Delgado, L., Panfet., C., dkk.
(2011). Antioxidant properties of Pulp and Peel Yellow Mangosteen
Fruits. Emir. J. Food Agric. 23: 517.
Arisandi, Y., dan Andriani, Y. (2000). Tanaman Obat Plus Pengobatan

Alternatif. Jakarta: Setia Kawan. Halaman 76.
Dalimartha, S. (2000). Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Jilid 1. Jakarta: Trubus

Agriwidya. Halaman 130.
Depkes R.I. (1986). Sediaan Galenik. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik

Indonesia. Halaman 6-7.
Depkes R.I. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Direktorat
Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. Halaman 299-306, 321-325.
Depkes R.I. (2010). Suplemen I Farmakope Herbal Indonesia. Jakarta:

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 140-141.
Ditjen POM. (1995). Farmakope Indonesia Edisi Ke IV. Jakarta: Departemen

Kesehatan RI. Halaman 39.
Ditjen POM R.I. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.
Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 10-11.
Djauhariya, E. (2004). Gulma Berkhasiat Obat. Jakarta: Seri Agrisehat. Halaman

74.
Ewing, G.W. (1975). Instrumental Methods of Chemical Analysis. Fouth Edition.

Tokyo: McGraw-Hill Kogakusha. Halaman 34.
Farnsworth, N.R. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants.

Chicago: Reheis Chemical Company. Journal of Pharmaceuticals Science.
55(3): 247-268.
Gandjar, I.G., dan Rohman, A. (2007) Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta:

Pustaka Pelajar. Halaman 220-221.
Graham, T.W.S. (1976). Organic Chemistry. USA: John Willey & Sons. Halaman
568.
Gusrav, S., Deshkar, N., Gulkari, V., Duragkar, N., dan Patil, A. (2007). Free
Radical Scavenging Activity of Polygala chinensis Linn. Pharmacology.
2, 245-253.
51
Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan. Bandung: Penerbit ITB. Halaman 1, 10-11.
Hariana, A. (2011). Tumbuhan Obat dan khasiatnya. Jakarta: Penebar Swadaya.

Halaman 65.
Hernani dan Raharjo. (2005). Tanaman Berkhasiat Antioksidan. Jakarta: Penerbit

Swadaya.
Ionita, P. (2005). Is DPPH Stable Free Radical a Good Scavenger for Oxygen
Species?. Chem. Pap. 59(1)11-12.
Kumalaningsih, S. (2006). Antioksidan Alami, Penangkal Radikal Bebas: Sumber,

Manfaat, Cara Penyediaan dan Pengolahan. Cetakan Pertama. Surabaya:
Trubus Agrisarana. Halaman 3, 39, 53.
Lenny, S. (2006). Senyawa Flavonoida, Fenil Propanoida, dan Alkaloida. Karya

Ilmiah. Medan: Departemen Kimia FMIPA USU. Halaman 6.
Markham, K.R. (1998). Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung: ITB.

Halaman 1-3.
Merck, E., dan Darmstadt. (1978). Dyeing Reagents for Thin Layer and Paper
Chromatography. German: Federal Republic of Germany. Halaman 1.
Molyneux, P. (2004). The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazil

(DPPH) for Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin Journal
Science Technology. 26(2): 211-219.
Prakash, A. (2001). Antioxidant Activity. Medallion Laboratories-Analytical

Progress. 19(2):22.
Rohdiana, D. (2001). Aktivitas Daya Tangkap Radikal Polifenol Dalam Daun

Teh. Majalah Jurnal Indonesia. 12(1): 53-58.
Rohman, A. (2009). Kromatografi untuk Analisis Obat. Yogyakarta: Graha Ilmu.
Halaman 1, 47.
Robinson, T. (1995). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Bandung: ITB.

Halaman 71-72.
Salamah, N., dan Widyasari, E. (2015). Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol

daun Kelengkeng (Euphoria longan (L) Steud.) dengan Metode
Penangkapan Radikal 2,2-Difenil,-1-Pikrilhidrazil. Pharmaciana. 5(1):25-
34.
Sastrohamidjojo, H. (1985). Kromatografi. Yogyakarta: Penerbit Liberty.

Halaman 1, 2, 33.
52
Sentra Imformasi IPTEK. (2009). Senggani. http://www.iptek.net.id/ind.pd
tanobat/view.p hp? Mnu=2&id=156. Diakses pada tanggal 27 Juni 2018.
Silalahi, J. (2006). Makanan Fungsional. Yogyakarta: Kanisius. Halaman 40,

47, dan 48.
Simanjuntak, M.R. (2008). Ekstraksi dan Fraksinasi Komponen Ekstrak Daun

Senduduk (Melastoma malabathricum L.) serta Pengujian Efek Sediaan
Krim Terhadap Penyembuhan Luka Bakar. Skripsi. Medan: Universitas
Sumatera Utara. Halaman 23.
Sunarni, T. (2005). Aktivitas Antioksidan Penangkap Radikal Bebas Beberapa

kecambah Dari Biji Tanaman Familia Papilionaceae. Jurnal Farmasi
Indonesia 2 (2), 2001, 53-61.
Syafitri, N.E., Bintang, M., dan Falah, S. (2014). Kandungan Fitokimia, Total
Fenol dan Total Flavonoid Ekstrak Buah Harendong (Melastoma affine D.
Don). Current Biochemistry. 1(3): 105-115.
Trilaksani, W. (2003). Antioksidan: Jenis, Sumber, Mekanisme Kerja dan Peran

Terhadap Kesehatan. Bogor: Institute Pertanian Bogor. Halaman 1.
Wibiani, S. (2010). Isolasi dan Identifikasi Senyawa Antosianin Kulit Buah

Anggur ( Vitis vinifera var. Prabu Bestari). Skripsi. Malang:Universitas
Islam Negri (UIN) Maulana Malik Ibrahim.
Winata, H. (2011). Aktivitas Antioksidan dan Kandungan Kimiawi Ekstrak Duan

Wungu (Graptophyllum pictum L. Griff). Skripsi. Fakultas Matematika
dan IPA. Institut Pertanian Bogor.
WHO. (1992). Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials.
Switzerland: Geneva. Halaman 25-28.
53
Lampiran 1. Surat hasil identifikasi tumbuhan
54
Lampiran 2. Gambar tumbuhan dan buah enduduk (Melastoma malabathricum
L.)
55
Lampiran 3. Gambar simplisia dan serbuk simplisa buah senduduk
Simplisia buah senduduk
Serbuk simplisia buah senduduk
56
Lampiran 4. Bagan pembuatan simplisia, karakterisasi dan skrining fitokimia
Buah senduduk segar
 Dicuci bersih lalu ditiriskan

 Dikeringkan dalam lemari pengering
Simplisia
 Ditimbang berat kering

 Dihaluskan
Serbuk simplisia

Karakterisasi simplisia Skrining Fitokimia :

kental
meliputi penetapan : - Alkaloid
- Kadar air - Flavonoid
- Kadar sari larut air - Glikosida
- Kadar sari larut - Saponin
etanol - tanin
- Kadar abu total - triterpenoid/steroid
- Kadar abu tidak larut
asam
57
Lampiran 5. Bagan pembuatan ekstrak etanol buah senduduk

Serbuk simplisia
 Dimaserasi dengan etanol 80% sebanyak 10

bagian pelarut selama 6 jam sambil diaduk dan
didiamkan selama 18 jam
 Disaring
 Diremaserasi ampas dengan jenis dan jumlah
pelarut yang sama sekurang-kurangnya dua kali
Ampas
 Diremaserasi ampas dengan jenis

dan jumlah pelarut yang sama
sekurang-kurangnya dua kali
 Disaring
Maserat I Maserat II
 Digabung
Maserat
 Dipekatkan dengan rotary

evaporator
 Diuapkan di atas penangas air
Ekstrak kental buah

senduduk
58
Lampiran 6. Bagan pembuatan fraksi n-heksana dan fraksi etilasetat buah
senduduk
Ekstrak etanol buah senduduk
Ditambahkan etanol dan

akuades
Dihomogenkan
Dimasukkan ke dalam corong
pisah
Diekstraksi dengan n-heksana
sampai tidak memberikan
hasil positif dengan pereaksi
Liebermann-Burchard
Dikocok dan didiamkan
sampai terbentuk dua lapisan
dan dipisahkan
Fraksi air Fraksi n-heksana
Diekstraksi dengan etil asetat Dikumpulkan

Dikocok dan didiamkan Dipekatkan
sampai terbentuk dua dengan
lapisan dan dipisahkan rotary
evaporator
Fraksi n-
heksana pekat
Fraksi air Fraksi etil asetat
Dikumpulkan Dikumpulkan
Dipekatkan dengan Dipekatkan dengan
waterbath rotary evaporator
Fraksi air Fraksi etil
pekat asetat pekat
59
Lampiran 7. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia buah senduduk
Fragmen epikarp
Sel batu
Fragmen parenkhim
serabut sklerenkhin
60
Lampiran 8. Perhitungan hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia buah
senduduk
1. Perhitungan penetapan kadar air
( )
Kadar air simplisia = x100%
( )
No Berat sampel (g) Volume air (ml) Kadar air (%)

1 5,01 0,20 3,99%
2 5,02 0,20 3,99%
3 5,03 0,40 7,95%
Kadar air simplisia I = x100% = 3,99%
Kadar air simplisia II = x100% = 3,99%
Kadar air simplisia III = x100% = 7,95%
Kadar air rata-rata = = 5,31%
2. Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam air
Kadar sari larut air = x x 100%
No Berat sampel (g) Berat sari (g) Kadar sari (%)

1 5,02 0,20 19,92
2 5,02 0,29 28,88
3 5,02 0,24 23,90
Kadar sari larut air I = x x 100% = 19,92 %
Kadar sari larut air II = x x 100% = 28,88 %
60
Lampiran 8. (lanjutan)
Kadar sari larut air III = x x 100% = 23,90%
Kadar sari larut air rata-rata = = 24,23%
3. Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam etanol
Kadar sari larut etanol = x x 100%
No Berat sampel (g) Berat sari (g) Kadar sari (%)

1 5,03 0,30 29,82
2 5,03 0,30 29,82
3 5,03 0,30 29,82
Kadar sari larut etanol I = x x 100% = 29,82 %
Kadar sari larut etanol II = x x 100% = 29,82 %
Kadar sari larut etanol III = x x 100% = 29,82 %
Kadar sari larut etanol rata-rata = = 29,82%
4. Perhitungan penetapan kadar abu total serbuk simplisia buah senduduk
Kadar abu total = X 100%
No Berat sampel (g) Berat abu (g) Kadar abu (%)

1 2 0,07 3,50
2 2 0,06 3
3 2 0,06 3
61
Kadar abu total I = X 100% = 3,50%
Kadar abu total II = X 100% = 3%
Kadar abu total III = X 100% = 3%
Kadar abu total rata-rata = = 3,17%
5. Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut asam
Kadar abu tidak larut asam = X 100%
No Berat sampel (g) Berat abu (g) Kadar abu (%)

1 2 0,02 1
2 2 0,01 0,50
3 2 0,01 0,50
Kadar abu tidak larut asam I = X 100% = 1%
Kadar abu tidak larut asam II = X 100% = 0,50%
Kadar abu tidak larut asam III = X 100% = 0,50%
Kadar abu tidak larut asam rata-rata = = 0,67 %
62
Lampiran 9. Hasil uji antioksidan
1. Ekstrak etanol
Penurunan absorbansi dan persen peredaman DPPH

Larut Konsentrasi Absorbansi Rata- %
an uji (µg/ml) I II III rata Peredaman
EEBS 0 0.97 0.97 0.97 0,97 -

3,125 0,65 0,65 0,65 0,65 32,99%
6,25 0,55 0,55 0,55 0,55 43,30%
12,5 0,35 0,35 0,35 0,35 63,92%
25 0,17 0,17 0,17 0,17 82,47%
50 0,06 0,06 0,06 0,06 93,81%
-

 Konsentrasi 3,125 µg/ml
-
% Peredaman = x 100% = 32,99%
-
% Peredaman = x 100% = 43,30%
-
% Peredaman = x 100% = 63,92%
 konsentrasi 25 µg/ml
% Peredaman = x 100% = 82,47%
63
 Konsentrasi 50 µg/ml
-
% Peredaman = x 100% = 93,81%
2. Fraksi etilasetat

Larutan Konsentrasi Absorbansi Rata- %
uji (µg/ml) I II III rata Peredaman
Fraksi 0 0,96 0,96 0,96 0,96 -

Etilaset 3,125 0,45 0,45 0,45 0,45 53,13%
at 6,25 0,39 0,39 0,39 0,39 59,38%
12,5 0,15 0,15 0,15 0,15 84,38%
25 0,06 0,06 0,06 0,06 93,75%
50 0,05 0,05 0,05 0,05 94,79%
-

-
% Peredaman = x 100% = 53,13%
-
% Peredaman = x 100% = 59,38%
64
Lampiran 9. (Lanjutan)
-
% Peredaman = x 100% = 84,38%
-
% Peredaman = x 100% = 93,75%
-
% Peredaman = x 100% = 94,79%
3. Fraksi n-heksan

Absorbansi Rata- %
Larutan Konsentrasi
I II III rata Peredaman
uji (µg/ml)
Fraksi 0 0.9653 0.9650 0.9650 0,9651 -

N- 3,125 0,8632 0,8633 0,8631 0,8632 10,5585%
Heksan 6,25 0,8263 0,8271 0,8273 0,8269 14,3198%
EEBS 12,5 0,7814 0,7811 0,7812 0,7812 19,0550%
25 0,6478 0,6480 0,6479 0,6479 32,8671%
50 0,4100 0,4095 0,4096 0,4097 57,5484%
-

-
% Peredaman = x 100% = 10,5585%
65
-
% Peredaman = x 100% = 14,3198%
-
% Peredaman = x 100% = 19,0550%
-
% Peredaman = x 100% = 32,8671%
-
% Peredaman = x 100% = 57,5484%
4. Fraksi air

uji (µg/ml) I II III rata Peredaman
Fraksi 0 0.9622 0.9623 0.9622 0,9622 -

Air 3,125 0,8849 0,8848 0,8851 0,8849 8,0337%
EEBS 6,25 0,8845 0,8844 0,8842 0,8844 8,0856%
12,5 0,8032 0,8026 0,8023 0,8027 16,5766%
25 0,7385 0,7385 0,7394 0,7388 23,2176%
50 0,5160 0,5160 0,5161 0,5160 46,3729%
-

66
-
% Peredaman = x 100% = 8,0337%
-
% Peredaman = x 100% = 8,0856%
-
% Peredaman = x 100% = 16,5766%
-
% Peredaman = x 100% = 23,2176%
-
% Peredaman = x 100% = 46,3729%
5. Vitamin C

uji (µg/ml) rata Peredaman
I II III
Vitamin 0 1,117 1,117 1,116 1,117 -

C 2 0,723 0,723 0,723 0,723 35,2731%
4 0,461 0,461 0,461 0,461 58,7287%
6 0,148 0,148 0,148 0,148 86,7502%
8 0,007 0,007 0,007 0,007 99,3733%
-
67

-
% Peredaman = x 100% = 35,2731%
-
% Peredaman = x 100% = 58,7287%
-
% Peredaman = x 100% = 86,7502%
-
% Peredaman = x 100% = 99,3733%
68
Lampiran 10. Perhitungan Nilai IC50
1. Ekstrak etanol buah senduduk

No. X Y XY X2 Y2
1. 0 0 0 0 0
2. 3,125 32,99 103,09 9,77 1088,34
3. 6,25 43,30 270,63 39,06 1874,89
4. 12,5 63,92 799,00 156,25 4085,77
5. 25 82,47 2061,75 625 6801,30
6. 50 93,81 4690,50 2500 8800,32
∑ = ∑ = ∑ = ∑ 2= ∑ 2=
96,88 316,49 7924,97 3330,08 22650,61
̅=
̅ = 52,75
16,15
X = Konsentrasi (µg/ml)
Y = % Peredaman
∑ - ∑ ∑
a=
- ∑
-
a=
-
a=
a= 1,59
̅= a ̅ + b
b= ̅ - a ̅
b= 52,75 – (1,59)(16,15)
b= 27,01
Jadi, persamaan regresi Y = 1,59X + 27,01

Nilai IC50 : Y = 1,59X + 27,01
50 = 1,59X + 27,01
X = 14,53 µg/ml
IC50 ekstrak etanol = 14,46 µg/ml
69
2. Fraksi etilasetat buah senduduk

No. X Y XY X2 Y2
1. 0 0 0 0 0
2. 3,125 53,13 166,30 9,80 2822,80
3. 6,25 59,38 371,13 39,06 3525,98
4. 12,5 84,38 1054,75 156,25 7119,98
5. 25 93,75 2343,75 625 8789,06
6. 50 94,79 4739,50 2500 8985,14
= ∑ = ∑ = ∑ 2= ∑ 2=
96,88 385,43 8675,42 3330,11 31242,97
= 16,15 ̅ = 64,24
Y = % Peredaman
∑ - ∑ ∑
a=
- ∑
-
a=
-
a=
a= 1,39
̅= a ̅ + b
b= ̅ - a ̅
b= 64,24 – (1,39)(16,15)
b= 41,82

Nilai IC50 : Y = 1,39X + 41,82
50 = 1,39X + 41,82
X = 5,88 µg/ml
IC50 fraksi etilasetat = 5,8 µg/ml
70
3. Fraksi n-heksan buah senduduk

No. X Y XY X2 Y2
1. 0 0 0 0 0
2. 3,125 10,5585 32,9953 9,7656 111,4819
3. 6,25 14,3198 89,4988 39,0625 205,0567
4. 12,5 19,0550 238,1875 156,25 363,0930
5. 25 32,8671 821,6775 625 1080,2463
6. 50 57,5484 2877,4200 2500 3311,8183
∑ = ∑ = ∑ = ∑ 2= ∑ 2=
96,8750 134,3488 4059,7791 3330,0781 5071,6962
̅= ̅=
16,1458 22,3915
Y = % Peredaman
∑ - ∑ ∑
a=
- ∑
-
a=
-
a=
a= 1,0706
̅= a ̅ + b
b= ̅ - a ̅
b= 22,3915 – (1,0706)(16,1458)
b= 5,1059

Nilai IC50 : Y = 1,0706X + 5,1059
50 = 1,0706X + 5,1059
X = 41,93 µg/ml
IC50 fraksi n-heksana = 41,93 µg/ml
71
4. Fraksi air buah senduduk

No. X Y XY X2 Y2
1. 0 0 0 0 0
2. 3,125 8,0337 25,1053 9,7656 64,5403
3. 6,25 8,0856 50,5350 39,0625 65,3769
4. 12,5 16,5766 207,2075 156,25 274,7837
5. 25 23,2176 580,4400 625 539,0569
6. 50 46,3729 2318,6450 2500 2150,4459
= ∑ = ∑ = ∑ 2= 2
∑ = 3094,2037
96,8750 102,2864 3181,9328 3330,0781
= ̅=
16,1458 17,0477
Y = % Peredaman
∑ - ∑ ∑
a=
- ∑
( )( )
( )-
a=
(
- )
a=
a= 0,8666
̅= a ̅ + b
b= ̅ - a ̅
b= 17,0477 – (0,8666)(16,1458)
b= 3,0552

Nilai IC50 : Y = 0,8666X + 3,0552
50 = 0,8666X + 3,0552
X = 54,17 µg/ml
IC50 fraksi air = 54,17 µg/ml
72
5. Vitamin C
No. X Y XY X2 Y2
1. 0 0 0 0 0
2. 2 35,2731 70,5462 4 1244,1916
3. 4 58,7287 234,9148 16 3449,0602
4. 6 86,7502 520,5012 36 7525,5972
5. 8 99,3733 794,9864 64 9875,0528
= 20 ∑ = ∑ = 2 ∑ 2=
∑ = 120
280,1253 1620,9486 22093,9017
=4 ̅=
56,0251
Y = % Peredaman
∑ - ∑ ∑
a=
- ∑
( )( )
( )-
a=
- )
a=
a= 12,5112
̅= a ̅ + b
b= ̅ - a ̅
b= 56,0251 – (12,5112)(4)
b= 5,9803

Nilai IC50 : Y = 12,5112X + 5,9803
50 = 12,5112X + 5,9803
X = 3,52 µg/ml
IC50 vitamin C = 3,52 µg/ml
73
Lampiran 11. Kromatogram dan Rf KLT ekstrak etanol buah senduduk (EEBS)
Fase gerak n-heksan:etilasetat

(50:50) (60:40) (70:30) (80:20) (90:10)
Keterangan:
Fase diam= plat silika gel 60 F254, fase gerak = n-heksan : etilasetat, penampak
bercak= Liebermann-Burchard, TP= Titik penotolan, BP= Batas pengembangan,
Jarak rambat= 8 cm, AK= Abu-abu kehitaman, B= Biru, C= Coklat, HK= Hijau
kehitaman, K= Kuning, KK= Kuning kehijauan, MM= Merah muda, U= Ungu.
74
Data Rf hasil KLT EEBS dengan fase gerak n-heksan:etilasetat
Fase gerak Penampak noda

No Harga Rf
n-heksan:etilasetat Liebermann-Bourchard
0,3125 Hijau kehitaman
1 90:10 0,4 Biru
0,475 Merah muda
0,05 Kuning kehijaun
0,125 Ungu
2 80:20
0,59 Ungu
0,62 Biru
0,05 Biru
3 70:30 0,18 Kuning
0,675 Ungu
0,05 Coklat
4 60:40 0,087 Biru
0,788 Ungu
0,05 Abu abu kehitaman
0,112 Merah muda
5 50:50
0,15 Biru
0,825 Ungu
75
Lampiran 12. Kromatogram dan Rf hasil KLT fraksi n-heksan buah senduduk
Fase gerak n-heksana:etilasetat

(50:50) (60:40) (70:30) (80:20) (90:10)
Keterangan:
Fase diam= plat silika gel 60 F254, fase gerak= n-heksan : etilasetat, penampak
bercak= Liebermann-Burchard, TP= Titik penotolan, BP= Batas pengembangan,
Jarak rambat= 8 cm, K= Kuning, KJ= Kuning jingga, MM= Merah muda, U=
Ungu, UK= Ungu kehitamanan.
76
Data Rf KLT fraksi n-heksan buah senduduk dengan fase gerak n-heksan :
etilasetat
Fase gerak Noda penampak bercak

No Harga Rf
n-heksan : etilasetat Liebermann-Bourchard
0,2625 Kuning jingga
1 90: 10 0,375 Ungu
0,4625 Kuning
0,08 Ungu
0,1875 Merah muda
0,3875 Kuning jingga
2 80:20
0,525 Ungu
0,625 Ungu
0,8125 Kuning
0,9125 Kuning
3 70:30
0,9625 Ungu
0,3875 Merah muda
4 60:40
0,625 Kuning
0,1375 Ungu
0,35 Kuning
5 50:50
0,725 Ungu kehitaman
0,975 Ungu
77
Lampiran 13. Kromatogram dan data RF hasil KKt ekstrak etanol buah senduduk
Fase gerak BAA (4:1:5)
BP
MM
MK
H
CK
C
TP
A B C
Keterangan:
Fase diam= Kertas saring whatmann, fase gerak = BAA (4:1:5), Penampak
bercak (A = AlCl3, B = NH3, C = FeCl3), TP = Titik penotolan, BP = Batas
pengembangan, Jarak rambat = 17 cm, C = Coklat, CK = Coklat kehitaman, H =
Hitam, K = Kuning,, MK= Merah kehitaman, MM = Merah muda.
78
Data Rf hasil KKt ekstrak etanol dengan fase gerak BAA (4:1:5)

Penampak bercak Harga Rf Warna
0,08 Coklat
AlCl3
0,23 Kuning
0,2 Coklat kehitaman
NH3
0,9 Merah muda
0,1 Hitam
FeCl3 0,18 Hitam
0,53 Merah kehitaman
79
Fase gerak HCl 1%
BP
BK
U
MK
J
C
TP
A B C
Keterangan:
Fase diam= Kertas saring whatmann, fase gerak = HCl 1%, Penampak bercak (A
= AlCl3, B = NH3, C = FeCl3), TP = Titik penotolan, BP = Batas pengembangan,
Jarak rambat = 17 cm, BK = Biru keunguan, C = Coklat, H = Hitam, J = Jingga,
MK = Merah kehitaman, U = Ungu.
80
Data Rf hasil KKt ekstrak etanol dengan fase gerak HCl 1%
Fase gerak HCl 1%

0,04 Coklat
AlCl3
0,11 Ungu
0,06 Jingga
NH3
0,11 Biru keunguan
0,08 Hitam
FeCl3
0,15 Merah kehitaman
81
Fase gerak Asam asetat 5%
BP
MM
C C
TP
A B C
Keterangan:
Fase diam= Kertas saring whatmann, fase gerak = asam asetat 5%, Penampak
pengembangan, Jarak rambat = 17 cm, C = Coklat, H = Hitam, MM = Merah
muda.
82
Data Rf hasil KKt ekstrak etanol dengan fase gerak asam asetat 5%

AlCl3 0,08 Coklat
NH3 0,04 Coklat
0,08 Hitam
FeCl3
0,65 Merah muda
83
Lampiran 14. Kromatogram dan data RF hasil KKt fraksi etilasetat buah
senduduk
BP
KK J BK
MMK
BK
K
MM
TP
A B C
Keterangan:
Fase diam= Kertas saring whatmann, fase gerak = BAA (4:1:5), Penampak bercak
(A= AlCl3, B= NH3, C = FeCl), TP = Titik penotolan, BP = Batas pengembangan,
Jarak rambat = 17cm, BK = Biru kehitaman, C = Coklat, J = Jingga, K = Kuning,
KK = Kuning kecoklatan, MM = Merah muda, MMK = Merah muda kehitaman.
84
Data Rf hasil KKt fraksi etilasetat dengan fase gerak BAA (4:1:5)

0,435 Coklat
AlCl3
0,7558 Kuning kecoklatan
0,353 Merah muda
NH3 0,41 kuning
0,7117 jingga
0,559 Biru kehitaman
FeCl3 0,718 Merah muda kehitaman
0,8323 Biru kehitaman
85
Fase gerak HCl 1%
BP
MM
BK
TP
A B C
Keterangan:
= AlCl3, B = NH3, C = FeCl3), TP = Titik penotolan, BP = Batas pengembangan,
Jarak rambat = 17 cm, BK = Biru kehitaman, H = Hitam, K = Kuning, MK =
Merah kehitaman.
86
Data Rf hasil KKt fraksi etilasetat dengan fase gerak HCl 1%
Fase gerak HCl 1%

AlCl3 0,1059 Kuning
NH3 - -
0,15 Hitam
FeCl3 0,42 Biru kehitaman
0,65 Merah muda
87
BP
MM
BK
H
K
TP
A B C
Keterangan:
pengembangan, Jarak rambat = 17 cm, BK = Biru kehitaman, H = Hitam, K =
Kuning, MM = Merah muda.
88
Data Rf hasil KKt fraksi etilasetat dengan fase gerak asam asetat 5%

AlCl3 0,1206 Kuning
NH3 - -
0,2 Hitam
FeCl3 0,5 Biru kehitaman
0,7 Merah muda
89
Lampiran 15. Kromatogram dan data RF hasil KKt fraksi air buah senduduk
BP
H
C
TP
A B C
Keterangan:
Fase diam= Kertas saring whatmann, fase gerak = BAA (4:1:5), Penampak bercak
(A = AlCl3, B = NH3, C = FeCl3, TP = Titik penotolan, BP = Batas
pengembangan, Jarak rambat = 17 cm, C = Coklat, H = Hitam.
90
Data Rf hasil KKt fraksi air dengan fase gerak BAA (4:1:5)

AlCl3 - -
NH3 0,08 Coklat
0,1176 Hitam
FeCl3
0,2353 Hitam
91
Fase gerak HCl 1%
BP
C H
TP
A B C
Keterangan:
= AlCl3, B = NH3, C = FeCl3, TP = Titik penotolan, BP = Batas pengembangan,
Jarak rambat = 17 cm, C = Coklat, H = Hitam.
92
Data Rf hasil KKt fraksi air dengan fase gerak HCl 1%
Fase gerak HCl 1%

AlCl3 0,1059 Coklat
NH3 - -
FeCl3 0,0882 Hitam
93
BP
TP
A B C
Keterangan:
pengembangan, Jarak rambat = 17 cm, H = Hitam.
94
Data Rf hasil Kkt fraksi air dengan fase gerak asam asetat 5%

AlCl3 - -
NH3 - -
FeCl3 0,2794 Hitam
95

KK 2

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

KK 2

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN POLA KROMATOGRAFI

EKSTRAK ETANOL DAN FRAKSI BUAH SENDUDUK

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

Buah Senduduk (Melastoma malabathricum L.)”. Skripsi ini diajukan sebagai

Universitas Sumatera Utara.

Buah senduduk mengandung antosianin yang tinggi dan merupakan

bahan yang banyak menghasilkan antioksidan. Antioksidan sangat penting dalam

menetralkan dan menghancurkan radikal bebas yang dapat menyebabkan

dalamnya. Diharapkan penelitian inj dapat bermanfaat sebagai alternatif

antioksidan dari bahan alam.

waktu, bimbingan dan nasehat selama penelitian hingga selesainya penyusunan

membimbing penulis selama masa pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas

penulis dalam semua proses administrasi.

Terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Ayahanda Elyus Faisal,

kepada penulis hingga selesainya penyusunan skripsi ini.

pengetahuan khusus bidang farmasi.

Medan, Juli 2018

Senduduk merupakan tumbuhan suku melastomaceae yang mengandung

Kata kunci: antioksidan, pola kromatografi, ekstrak etanol buah senduduk,

Senduduk is a tribe of plants melastomaceae which contains high

Keywords: antioxidant, chromatography pattern, ethanolic extract of senduduk

LEMBAR PENGESAHAN ....................................................................... iii

KATA PENGANTAR .............................................................................. iv

SURAT PERNYATAAN TIDAK PLAGIAT .......................................... vi

ABSTRAK ................................................................................................. vii

ABSTRACT ............................................................................................... viii

DAFTAR ISI .............................................................................................. xi

DAFTAR TABEL ...................................................................................... xv

DAFTAR GAMBAR ................................................................................ xvi

DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................. xvii

BAB I PENDAHULUAN .......................................................................... 1

1.1 Latar Belakang ........................................................................ 1

1.2 Perumusan Masalah ................................................................ 3

1.3 Hipotesis Penelitian ................................................................. 3

1.4 Tujuan Penelitian .................................................................... 3

1.5 Manfaat Penelitian .................................................................. 4

1.6 Kerangka Pikir Penelitian ....................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Uraian Tumbuhan .................................................................... 5

2.1.1 Habitat ........................................................................... 5

2.1.2 Morfologi ...................................................................... 5

2.1.4 Sinonim ......................................................................... 6

2.1.5 Nama daerah .................................................................. 6

2.1.6 Kegunaan ....................................................................... 6

2.1.7 Kandungan kimia .......................................................... 6

2.2 Uraian Kimia ........................................................................... 7

2.2.1 Flavonoid ....................................................................... 7

2.2.2 Tanin .............................................................................. 7

2.2.3 Triterpenoid/Steroid ...................................................... 8

2.2.4 Glikosida ....................................................................... 8

2.2.5 Alkaloid ......................................................................... 9

2.2.6 Saponin .......................................................................... 9

2.3 Ekstraksi .................................................................................. 9

2.4 Radikal bebas ........................................................................... 11

2.5 Antioksidan ............................................................................. 12

2.5.1 Antioksidan alami ......................................................... 13

2.5.2 Vitamin C ...................................................................... 13

2.6 Spektrofotometer UV-Visible ................................................. 14

2.7 Metode DPPH ......................................................................... 14

2.7.1 Pelarut ............................................................................ 16