LAPORAN DAN WORKSHEET

PRAKTIKUM IMUNOLOGI FARMASI

(FAF2773)

PERCOBAAN IV
ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) DAN WESTERN BLOT:
METODE DETEKSI PROTEIN DENGAN PRINSIP REAKSI ANTIGEN-ANTIBODI

Disusun oleh:
Grup/Kelompok: ………………………………………..
NIM Nama mahasiswa Kontribusi TTD

Tanggal pengumpulan : ………………………………………..

Dosen : ………………………………………..
Asisten : ………………………………………..

LABORATORIUM IMUNOLOGI
DEPARTEMEN KIMIA FARMASI
FAKULTAS FARMASI UGM
2022
 A. TUJUAN (tuliskan tujuan dari percobaan ini)

B. JAWABAN PERTANYAAN

1. Jawablah titik-titik berikut dengan isian singkat (10 poin).

Konsep ELISA
ELISA merupakan suatu teknik deteksi yang menggunakan …….. untuk mendeteksi dan
mengkuantifikasi protein di dalam suatu sampel. Sampel pada sistem deteksi ini dapat
berasal dari darah atau urin dari pasien atau suatu larutan sel yang ditumbuhkan di dalam
lab. ELISA tepat digunakan untuk diagnosa …….. dan menskrining banyak sampel
sekaligus, karena menggunakan ……..

Ada beberapa jenis ELISA, terutama indirect ELISA dan sandwich ELISA. Pada indirect
ELISA, …….. dilapiskan (coated) pada permukaan well-plate dan dideteksi dengan
antibodi. Sedangkan, pada sandwich ELISA, …….. dilapiskan (coated) pada permukaan
well-plate dan antigen di-sandwich-kan diantara antibodi.

indirect sandwic
h

Halaman 1 dari 6
2. Jawablah titik-titik berikut dengan isian singkat (15 poin).
Cara kerja ELISA dan interpretasinya

Langkah ke-1: Permukaan dilapis dengan antigen.

Langkah ke-2: Permukaan well-plate yang tidak diduduki oleh antigen diblok dengan
protein non-spesifik, yaitu misalnya ……..
Langkah ke-3: Antibodi …….. berikatan dengan antigen
Langkah ke-4: Antibodi …….. yang terkonjugasi dengan …….. berikatan dengan
antibodi primer
Langkah ke-5: Substrat ditambahkan dan diubah menjadi produk yang ……..

Jika kita bermaksud mendeteksi suatu penyakit misalnya virus SARS-CoV2, dengan
sistem indirect ELISA, maka protein virus SARS-CoV2 berperan sebagai …….. dan
serum pasien yang diperiksa berperan sebagai …….. yang ditambahkan pada langkah
kerja ke-…….. (lihat gambar langkah kerja ELISA di atas).

ELISA merupakan deteksi ekspresi protein secara kualitatif dan kuantitatif berdasar
terbentuknya warna dari reaksi enzimatik dimana intensitas warna yang terbentuk ……..
dengan jumlah protein dan bisa diukur dengan suatu alat yang disebut ELISA-……..

Halaman 2 dari 6
3. Amati gambar berikut (25 poin).
Cara kerja ELISA dan interpretasinya

Berdasarkan keterangan manual ELISA kit di atas lengkapilah isian berikut ini:

Enzim yang digunakan di atas adalah …….., sedangkan substrat yang digunakan adalah
……... Enzim dilabelkan pada antibodi ……...

Wash buffer mengandung phosphate buffer saline (PBS) dan Tween 20. Perhatikan
konsentrasi dari PBS dan Tween 20 pada tabel di atas. Jika dalam melakukan ELISA
Anda memerlukan 15 mL wash buffer yang mengandung 1x PBS dan 0,1% Tween 20,
maka volume PBS dan Tween 20 yang diambil dari larutan stok masing-masing adalah
…….. dan ……..

Tween 20, sebagaimana SDS, adalah suatu …….. dan fungsinya dalam ELISA untuk
……...
Jika reaksi enzim dan substrat menghasilkan warna biru, perkirakan warna yang timbul
pada negative control adalah warna …….., sedangkan pada positive control terbentuk
warna ……...

Halaman 3 dari 6
Western blot
4. Gambarkan (a) dan jelaskan (b) cara menyusun gel dan membran saat transfer dalam
Western blot beserta mekanisme transfernya (c)! Sebutkan dua hal penting dalam proses
blotting (d dan e)! (poin 20) (Halaman tambahan maksimal 1 halaman dapat digunakan jika
diperlukan)

Jawaban:

Halaman 4 dari 6
5. Berapa volume antibodi primer yang dibutuhkan untuk membuat total 3 mL sediaan
antibodi dan buffer, jika antibodi yang dibutuhkan harus di encerkan sebanyak 1:1000? (5
poin)

Jawaban:

6. a. Sebutkan 5 langkah dan tujuan masing-masing langkah tersebut dalam cara kerja
Western blot dimulai dari awal sampel protein hingga deteksi? (10 poin)

b. Apa fungsi metanol dalam transfer buffer pada proses blotting? Mana yang sebaiknya
dipilih saat blotting, konstan ampere atau konstan volt? (10 poin)

c. Sebutkan kelebihan dan kekurangan dari wet transfer dan semi dry transfer! Mana yang
lebih baik dari keduanya? Sertakan sumber pustakanya! (15 poin)
(Halaman tambahan maksimal 1 halaman dapat digunakan jika diperlukan)

Jawaban:

Halaman 5 dari 6
C. KESIMPULAN

D. DAFTAR PUSTAKA

Halaman 6 dari 6