Machine Translated by Google

Jurnal Internasional
Penelitian Lingkungan dan
Kesehatan Masyarakat

Artikel
Menambah Pasteurisasi Berbasis Tekanan dari
Listeria monocytogenes dengan Sinergisme dengan Nisin dan
Panas Ringan

1 1 1
Sadiye Aras , Md Niamul Kabir , Shahid Chowdhury dan Aliyar Cyrus Fouladkhah 1,2,*
1
Laboratorium Mikrobiologi Kesehatan Masyarakat, Universitas Negeri Tennessee, Nashville, TN
37209, AS; saras@my.tnstate.edu (SA); mkabir@my.tnstate.edu (MNK); schowdh1@tnstate.edu (SC)
2
Program Ekstensi Koperasi, Universitas Negeri Tennessee, Nashville, TN 37209, AS
* Korespondensi: aliyar.fouladkhah@aya.yale.edu; Telp.: +1-970-690-7392

Diterima: 4 Desember 2019; Diterima: 11 Januari 2020; Diterbitkan: 15 Januari 2020

Abstrak: Studi saat ini menyelidiki inaktivasi Listeria monocytogenes menggunakan panas ringan dengan
tekanan hidrostatik tinggi dan nisin dalam kondisi buffer. Campuran patogen empat galur diekspos ke 0
(kontrol) dan hingga 9 menit (1) tekanan tinggi 4 C; (2) 4 C peningkatan tekanan dan nisin; (3) 4 c nisin; (4)
panas pada suhu 40 C; (5) tekanan tinggi 40 C; (6) peningkatan tekanan dan nisin 40 C; dan (7) nisin 40 C.
Peningkatan tekanan hidrostatik pada 400 MPa (Hub880 Explorer, Pressure BioScience Inc., Easton, MA,
USA) dan konsentrasi nisin 5000 IU/mL digunakan dalam percobaan.
Analisis varians dilakukan, diikuti oleh pemisahan rata-rata yang disesuaikan dengan Dunnett dan Tukey.
Di bawah kondisi percobaan ini, nisin augmented (p <0,05) kemanjuran dekontaminasi dari
40 C panas dan perawatan tekanan hidrostatik tinggi, terutama pada interval perawatan 3 menit.
Sinergisme dengan nisin ini memudar (p 0,05 ) seiring dengan bertambahnya waktu perawatan untuk pemrosesan
tekanan termal, tekanan tinggi, dan bantuan termal. Hasil penelitian kami, dengan demikian, menunjukkan bahwa
praktisi dan pemangku kepentingan teknologi berbasis tekanan dapat mengambil manfaat dari sinergi panas ringan
dan nisin untuk perawatan pasteurisasi tekanan tinggi jangka pendek untuk mencapai keamanan mikroba dan
kelayakan ekonomi yang sebanding dengan perlakuan panas tradisional. produk.

Kata kunci: Listeria monocytogenes; pemrosesan bertekanan tinggi; nisin; pemrosesan termal dengan
bantuan tekanan ; sinergisme

1. Perkenalan

Mempertimbangkan kompleksitas komunitas mikroba, kemampuan beradaptasi mereka terhadap perubahan

lingkungan, dan sifatnya yang ada di mana-mana, kontaminasi pasokan air dan produk makanan dengan patogen yang
menjadi perhatian kesehatan masyarakat praktis tidak dapat dihindari. Dengan demikian, menjamin keamanan pasokan
makanan dan air dari patogen mikroba alami dan antropogenik adalah tugas yang menakutkan dan target yang bergerak [1,2].
Di antara lebih dari 200 organisme patogen yang dapat menyebabkan penyakit bawaan makanan, rawat
inap, dan kematian, berbagai serotipe Listeria monocytogenes (khususnya 4b, 1/2a, dan 1/2b) sangat
penting bagi kesehatan masyarakat. Tinjauan Sistem Pelaporan Wabah Nasional (NORS) dari Pusat
Pengendalian dan Pencegahan Penyakit (CDC) menunjukkan bahwa dari 1998–2017, setidaknya ada 77
wabah tunggal atau multi-negara yang terkait dengan patogen ini, yang mengarah ke 881,689 , dan 140
kasus penyakit dikonfirmasi, rawat inap, dan episode kematian, masing-masing [3]. Yang paling penting
adalah sekitar 78% dan 20% tingkat rawat inap dan kematian, masing-masing, terkait dengan wabah ini.
Lebih dari 97% wabah juga terkait dengan makanan yang terkontaminasi [3]. Bukti epidemiologis dari data
pengawasan aktif CDC juga mengungkapkan tren serupa dengan setidaknya 1591 penyakit tahunan yang terkait
dengan L. monocytogenes (>99% kasus adalah bawaan makanan), dengan tingkat rawat inap 94% dan 15,9%

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563; doi:10.3390/ijerph17020563 www.mdpi.com/journal/ijerph
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 2 dari 13

tingkat kematian di Amerika Serikat [4]. Statistik dari Badan Keamanan Pangan Eropa memberikan gambaran epidemiologi serupa. Pada
tahun 2016, lima kejadian KLB L. monocytogenes dilaporkan, terdiri dari 25 kasus dengan tingkat rawat inap 56% [5,6]. Pada tahun yang
sama, tiga puluh negara UE/EEA secara kolektif melaporkan 2.555 kasus listeriosis yang dikonfirmasi dengan tingkat penyakit tertinggi untuk
bayi di bawah usia satu tahun dan di antara warga lanjut usia> 64 tahun, dengan tren peningkatan keseluruhan dalam tingkat pemberitahuan
[ 5,6].
Selain ketidakamanan konsumen dan beban ekonomi terhadap infrastruktur kesehatan masyarakat dan
industri swasta karena biaya yang terkait dengan pengujian, penarikan, dan investigasi wabah, L.
monocytogenes diperkirakan menyebabkan 8800 tahun hidup yang disesuaikan dengan kecacatan (disability-
adjusted life years/DALYs) setiap tahun di AS [7]. Selain demam dan nyeri otot, infeksi patogen dapat
menyebabkan sakit kepala, leher kaku, kebingungan, kejang, dan kehilangan keseimbangan. Selain itu, selama
kehamilan, infeksi L. monocytogenes dapat menyebabkan demam, gejala seperti flu, dan nyeri otot yang dapat
menyebabkan kasus keguguran, kelahiran prematur, lahir mati, atau infeksi yang mengancam jiwa bayi baru
lahir [8]. Beban kesehatan masyarakat saat ini dari patogen ini menunjukkan kebutuhan akan metode yang
lebih manjur dan mudah beradaptasi untuk menghilangkan patogen ini, sambil memenuhi tuntutan konsumen abad ke-21.
Nisin adalah agen antimikroba peptida alami yang diproduksi oleh Lactococcus lactis, bakteriosin
pertama yang disetujui secara hukum untuk digunakan dalam berbagai produk makanan dan pertama
kali dipasarkan secara komersial pada tahun 1953 [9]. Bahan ini merupakan bagian dari daftar aman
yang diakui secara umum oleh Badan Pengawas Obat dan Makanan AS [10] dan telah digunakan
sebagai antimikroba yang manjur melawan berbagai patogen, terutama bakteri Gram-positif dalam
berbagai konsentrasi, seperti 5000 IU per gram. produk [11]. Sementara serangkaian penelitian [12-17]
tersedia menyelidiki efek nisin pada peningkatan kemanjuran pasteurisasi termal dan nontermal, ada
penelitian terbatas untuk membahas kemanjuran antimikroba ini di bawah tekanan hidrostatik tinggi dan
di bawah kontrol suhu dan intrinsik yang tepat. misalnya, aktivitas air, nutrisi, pH) dan faktor ekstrinsik
lainnya (misalnya, kelembaban relatif, keberadaan gas, aktivitas dan keberadaan mikroorganisme
pesaing). Hal ini terutama disebabkan oleh fakta bahwa presisi dalam mengendalikan dan memantau
suhu perawatan berbasis tekanan telah menjadi tantangan besar bagi penelitian tekanan tinggi akademik
dan industri dalam beberapa dekade terakhir [18-20].
Pasteurisasi bertekanan tinggi adalah pemrosesan nontermal yang semakin populer dalam pembuatan
makanan karena kemampuannya untuk mempertahankan kualitas produk yang segar sambil menghilangkan
patogen mikroba dan mikroorganisme pembusuk. Produsen saat ini mengandalkan perawatan yang biasanya
berlangsung selama 3 menit pada tingkat intensitas hingga 87.000 pound-force per inci persegi (600 MPa) [20,21].
Pemanfaatan perlakuan dengan tingkat intensitas kurang dari 600 MPa dapat menjadi sangat penting bagi produsen karena perlakuan
dengan intensitas rendah dapat meminimalkan biaya operasi dan menyediakan pasar yang kompetitif untuk produk perlakuan tekanan yang
saat ini memiliki biaya operasional yang sedikit lebih tinggi relatif untuk produk perlakuan panas tradisional [20]. Studi kami menyelidiki
sinergisme nisin dengan pasteurisasi tekanan tinggi dan tekanan tinggi yang dibantu termal dari L. monocytogenes untuk memastikan
keamanan mikroba dan kelayakan ekonomi dari inaktivasi berbasis tekanan dari patogen mikroba yang penting bagi kesehatan masyarakat
ini.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Strain L. monocytogenes, Persiapan Kultur, dan Prosedur Inokulasi

Campuran empat galur patogen L. monocytogenes (ATCC 51772, 51779, BAA-2657, dan13932)
digunakan dalam penelitian ini. Setiap strain dipilih berdasarkan relevansi kesehatan masyarakat dan
industri makanan, yang mewakili garis keturunan dan ribotipe yang beragam. Untuk setiap strain individu,
0,5 mL bagian dari stok beku gliserol dipindahkan ke 10 mL Kaldu Kedelai Tryptic (Difco, Becton
Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA) dengan ekstrak ragi (0,6%) ditambah (TSB + YE). Setelah inkubasi
37 C selama 24 jam, bagian 100 L suspensi berbudaya disubkultur secara aseptik (untuk setiap strain
secara individual) dalam 10 mL TSB + YE steril untuk inkubasi 24 jam kedua pada 37 C. Sel masing-
masing dari empat galur yang disubkultur secara terpisah (2 mL per galur) kemudian dipanen dengan sentrifus pada 6000 pu
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 3 dari 13

per menit (3548 g, untuk rotor 88 mm) selama 15 menit (Eppendorf North America, Hauppauge, NY, USA; Model
5424, Rotor FA-45-24-11). Langkah ini diulang dua kali dengan menangguhkan kembali sel (masing-masing strain
secara individual) dalam saline buffer fosfat (PBS, VWR International, Radnor, PA, USA), untuk menghilangkan
komponen sel yang terkelupas, metabolit sekunder yang diekskresikan, dan media pertumbuhan. Keempat galur
yang telah dimurnikan kemudian digabungkan menjadi satu koktil inokulasi, yang diencerkan secara serial 10 kali
lipat dalam PBS untuk mencapai target inokulasi 7,5 log CFU/mL.

2.2. Penerapan Nisin, Panas Ringan, dan Peningkatan Tekanan Hidrostatik

Nisin bubuk (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), yang umumnya dikenal sebagai antimikroba alami yang
aman [10], digunakan pada konsentrasi 5000 IU/mL (1000 IU = 0,025 mg nisin), sebagai konsentrasi relevansi
dengan pemangku kepentingan dan industri swasta [11]. Penting untuk dicatat bahwa Unit Internasional (IU) nisin
menurut definisi adalah jumlah nisin yang dibutuhkan untuk menghambat satu sel Streptococcus agalactiae dalam
1 mL kaldu [22]. Produk bubuk nisin dicampur dengan 2 mL PBS dan disentrifugasi selama satu menit pada 3000
putaran per menit (RPM) menggunakan rotor dan instrumen sentrifus yang disebutkan di atas untuk menghilangkan
padatan yang tidak larut dan memastikan kemungkinan untuk sterilisasi filter [23,24].
Supernatan kemudian disterilkan dengan filter (0,2 m PES Steril Syringe Filter, VWR International,
Radnor, PA, USA) dan digunakan pada konsentrasi 5000 IU/mL dalam PBS yang diinokulasi dengan
koktail patogen yang disebutkan di atas. Pada dua suhu 4 dan 40 C dan pada tekanan hidrostatik
tinggi 400 MPa (Pressure BioScience Inc., unit Hub880 Explorer), sampel PBS yang diinokulasi
terkena tekanan, panas ringan, nisin, dan kombinasinya. Nilai suhu percobaan dikendalikan oleh jaket
air yang terbuat dari stainless steel, menutupi ruang perawatan. Jaket dihubungkan secara mekanis
ke bak air sirkulasi berpendingin (VWR International, Radnor, PA, USA, Model berpendingin 1160-an),
dan nilai suhu dicatat oleh termokopel tipe-t (Omega Engineering Inc., Norwalk, CT, USA) sebagai
lebih rinci dalam publikasi terbaru akses terbuka kami [20,21,25].
Perlakuan tekanan terjadi di dalam tabung PULSA tanpa disk (Pressure BioScience Inc., Easton, MA,
USA) yang mengandung 1,5 mL PBS yang diinokulasi dengan atau tanpa adanya antimikroba.
Perlakuan diterapkan selama 0, 3, 6, dan 9 menit, dengan pencatatan dan pemantauan suhu dan
parameter perlakuan setiap 3 detik menggunakan perangkat lunak HUB Explorer PBI Versi 1.0.8
(Pressure BioScience Inc., Easton, MA, USA). Secara total, tujuh perawatan diselidiki: (1) tekanan
tinggi 4 C ; (2) 4 C peningkatan tekanan dan nisin; (3) 4 c nisin; (4) panas pada suhu 40 C; (5) tekanan
tinggi 40 C; (6) peningkatan tekanan dan nisin 40 C; dan (7) nisin 40 C. Meskipun perawatan tekanan
tinggi dengan bantuan termal dapat memanfaatkan suhu setinggi 90 C dan di atasnya [26], suhu yang
lebih tinggi dari 50 C dapat mendiskualifikasi produk dari terminologi “dipres dingin” atau “diproses
dengan tekanan tinggi, ” salah satu keuntungan utama untuk pemasaran produk yang diberi tekanan,
dan selain itu dapat membatasi kemanjuran bakteriosin [27]. Jadi, pemilihan suhu untuk perlakuan
tekanan tinggi dengan bantuan termal yang efektif dan layak perlu mempertimbangkan literatur ilmiah
dan persyaratan peraturan nasional dan internasional untuk pasteurisasi berbasis tekanan.

2.3. Netralisasi, dan Analisis Mikrobiologis dan pH

Sebelum analisis mikrobiologi, sampel dinetralkan dengan 3 mL alikuot kaldu penetral D/E (Difco, Becton
Dickinson, Franklin Lakes, NJ USA) untuk setiap mililiter sampel yang diberi perlakuan untuk memastikan ketepatan
waktu pemaparan antimikroba (nisin). Sampel tambahan ditempatkan pada bubur air es segera setelah perawatan
untuk waktu pemaparan yang tepat dari sampel 40 C. Setiap sampel yang dirawat kemudian diencerkan 10 kali lipat
secara serial dalam Pengencer Pemulihan Maksimum (Difco, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA) untuk
memastikan memaksimalkan pemulihan sel mikroba yang layak tetapi terluka. Kemudian, pengencer yang telah
dinetralkan ditebarkan pada media agar dasar PALCAM (Becton, Dickinson and Company, Sparks, MD, USA) yang
dilengkapi dengan Ceftazidime (Becton, Dickinson and Company, Sparks, MD, USA) untuk pertumbuhan selektif
L .monocytogenes, dan pada permukaan Tryptic Soy Agar dilengkapi dengan ekstrak ragi (TSA + YE) untuk
pencacahan nonselektif. Kedua media selektif dan nonselektif kemudian diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 C.
Koloni mikroba kemudian
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 4 dari 13

dihitung secara fisik dan log-transformed. PH masing-masing sampel yang diberi perlakuan diukur setelah perlakuan
dan setelah netralisasi dengan pH meter yang dikalibrasi pada pH = 4,00, pH = 7,01, dan pH = 10,01 (Mettler Toledo,
Columbus, OH, USA).

2.4. Desain Eksperimental dan Statistik Deskriptif dan Inferensial

Dua blok, masing-masing berisi ukuran sampel tiga pengulangan per analisis, digunakan, berdasarkan
analisis daya yang dilakukan sebelumnya di laboratorium Mikrobiologi Kesehatan Masyarakat oleh paket
statistik Proc Power of SAS (SAS Institute, Cary, NC, USA) [28]. Setiap blok penelitian merupakan uji coba
yang independen secara biologis, sehingga penelitian ini merupakan rancangan acak kelompok lengkap.
Masing-masing pengulangan yang disebutkan di atas per blok juga diulang dalam rangkap dua sebagai
ulangan mikrobiologis/instrumental. Oleh karena itu, setiap nilai yang dilaporkan (rata-rata ± standar
deviasi) adalah rata-rata dari 12 pengamatan independen (dua blok, tiga ulangan, dua ulangan mikrobiologi/
instrumen). Pengelolaan data, konversi log, dan pameran deskriptif dilakukan dengan menggunakan Microsoft Excel.
Data kemudian diimpor ke SAS (SAS Institute, Cary, NC, USA), dan setiap analisis statistik inferensial dilakukan
pada kesalahan tipe 1 5% (ÿ = 0,05). Analisis varians (ANOVA) kemudian dilakukan dengan menggunakan Proc
GLM dari SAS diikuti dengan dua metode pemisahan rata-rata. Perbandingan berpasangan dilakukan dengan uji
yang disesuaikan dengan Tukey untuk semua sampel dan kontrol yang diperlakukan, hasil dari analisis ini
digabungkan dalam grafik menggunakan alfabet huruf besar. Sampel yang diberi perlakuan dan kontrol yang tidak
diberi perlakuan juga dibandingkan dengan menggunakan pemisahan rata-rata yang disesuaikan dengan Dunnett;
perlakuan tersebut berbeda secara statistik (p < 0,05) dibandingkan dengan kontrol
berdasarkan
yang ditandai
analisis dengan
yang disesuaikan
tanda *,
dengan Dunnett. Microsoft Excel dan perangkat lunak GInaFiT [29,30] versi 1.7 (Katholieke Universitiet, Leuven,
Belgia) digunakan untuk menghitung indeks inaktivasi (nilai D- dan Kmax ).

3. Hasil dan Pembahasan

Faktor intrinsik sampel memainkan peran penting pada validitas studi validasi rintangan
mikrobiologis. Sebagaimana dijelaskan lebih lanjut dalam Bagian 2.3., pH sampel diukur setelah setiap
perlakuan (dan untuk kontrol yang tidak diberi perlakuan). Sampel kemudian dinetralkan dengan kaldu
penetral D/E sebelum setiap analisis mikrobiologi. Sebelum netralisasi, nilai pH serupa (p 0,05 ) dan
rata- rata 7,14 ± 0,2 (kisaran 6,96 hingga 7,43). Hitungan setelah netralisasi juga serupa di antara
sampel, mulai dari 7,00 hingga 7,82 (rata-rata 7,64 ± 0,1). Standar deviasi dari sampel yang dinetralkan
dan tidak dinetralkan berkisar antara 0,0 hingga 0,3. Selain pH, suhu merupakan faktor penting lain
yang terkait dengan studi validasi pasteurisasi berbasis tekanan [20]. Dalam studi saat ini, seperti
yang dibahas dalam Bagian 2.2., uji coba dilakukan di bawah kontrol suhu yang tepat menggunakan
ruang yang ditutupi oleh jaket baja, yang terhubung secara mekanis ke penangas air yang bersirkulasi
dengan pendingin. Untuk sampel bertekanan tinggi, bertekanan tinggi dan nisin, dan hanya nisin yang
diolah pada 4 C dan untuk panas ringan (misalnya, 40 C), tekanan tinggi dengan panas ringan,
tekanan tinggi dan nisin dengan panas ringan, dan nisin dengan sampel panas ringan, nilai suhu yang
sama sebelum dan sesudah perlakuan. Untuk sampel 4 C, pengukuran suhu adalah 5,4 ± 0,2 (berkisar
dari 5,1 hingga 5,6) dan 5,4 ± 0,2 (berkisar dari 4,9 hingga 5,6) sebelum dan sesudah perlakuan.
Sampel diperlakukan di bawah panas ringan (40 C) memiliki pengukuran suhu 39,4 ± 0,6 (berkisar
38,1-40,3) dan 39,7 ± 0,6 (berkisar 38,5-40,4) sebelum dan sesudah perawatan, juga.
Penting untuk dicatat bahwa L. monocytogenes adalah patogen yang relatif beragam dengan ukuran genom
yang dapat berkisar dari 2,94 hingga 3,11 Mbp [31]. Penelitian lain juga melaporkan kisaran genom yang sama untuk
bakteri, seperti ukuran mulai dari 2,95 hingga 3,11 Mbp [32]. Selain itu, mikroba patogen dapat membawa bahan
ekstrakromosom yang dapat mengubah kemampuannya dalam merespons stresor lingkungan. Dengan demikian,
pemilihan galur juga merupakan bagian penting dari studi tantangan mikrobiologi. Satu strain yang digunakan dalam
penelitian ini (ATCC 13932) diisolasi dari cairan tulang belakang anak dengan meningitis akibat infeksi L.
monocytogenes. Strain lain (ATCC BAA-2657) adalah strain yang disediakan untuk Koleksi Kultur Tipe Amerika dari
Pusat Pengendalian dan Pencegahan Penyakit AS. Dua galur lainnya diisolasi dari perusahaan makanan (ATCC
51772 dan ATCC 51779). Dengan demikian, strain yang dipilih
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 5 dari 13

memberikan hasil yang dapat digeneralisasikan dari kesehatan masyarakat dan signifikansi industri makanan. Dapat
dimengerti, ada jumlah strain L. monocytogenes yang tidak diketahui dan beberapa secara inheren mungkin menunjukkan
kerentanan yang lebih atau kurang terhadap stresor lingkungan dan pemrosesan relatif terhadap strain yang dipilih dalam penelitian ini.
Memilih galur dengan karakteristik fenotipik yang langka dapat menghasilkan hasil yang tidak khas, praktis, atau
realistis dan mungkin mengarah pada rekomendasi yang terlalu konservatif atau terlalu liberal untuk inaktivasi
patogen ini. Kompleksitas ini harus dipertimbangkan sebelum mengadaptasi studi validasi mikrobiologi untuk
memastikan operasi menjaga kesehatan masyarakat, minimal mempengaruhi kualitas organoleptik, struktural,
dan nutrisi suatu produk, dan untuk memastikan bahwa suatu proses layak secara ekonomi dan memenuhi
persyaratan peraturan untuk perdagangan. Pemangku kepentingan tambahan bisa mendapatkan keuntungan
dari pendekatan teknologi beberapa rintangan untuk memastikan efektivitas biaya dan kemanjuran layak operasi
[33].

3.1. Inaktivasi L. monocytogenes dengan Pasteurisasi Tekanan Tinggi

Studi saat ini mengevaluasi sensitivitas L. monocytogenes terhadap peningkatan tekanan hidrostatik pada
400 MPa (58 K PSI) dan pada suhu target 4 dan 40 C (Gambar 1A,D dan Gambar 2B,F) hingga 9 menit. Jumlah
mikroba dihitung dari media selektif (jumlah PALCAM) serta media nonselektif (TSA) dengan suplementasi
ekstrak ragi (jumlah TSA + YE). Jumlah PALCAM secara konsisten lebih rendah (p <0,05) dibandingkan yang
diperoleh dari TSA + YE untuk sebagian besar kombinasi waktu/pengobatan, yang dapat dikaitkan dengan
adanya agen selektif dan diferensial serta indikator pH dengan bakterisida dan/atau bakteriostatik. sifat dalam
media selektif. Ini telah konsisten dengan literatur sebelumnya dan dikaitkan dengan adanya agen selektif dan
diferensial di PALCAM yang membatasi pemulihan sel yang terluka tetapi masih hidup [34,35]. Penambahan
ekstrak ragi ke TSA didasarkan pada percobaan awal dan untuk meningkatkan pemulihan sel yang layak tetapi
terluka setelah setiap perawatan [20]. Hitungan PALCAM dan TSA + YE sebelum pengobatan (kontrol yang tidak
diberi perlakuan) masing-masing adalah 5,77 ± 0,2 dan 7,98 ± 0,1 log CFU/mL (rata-rata ± standar deviasi), pada
4 C (Gambar 1A,D).
Hitungan ini dikurangi menjadi 4,80 ± 0,6 (hitungan PALCAM) dan 6,07 ± 0,6 (jumlah TSA + YE) setelah
perawatan 3 menit pada 400 MPa dan pada 4 C (Gambar 1A,D). Pengurangan log yang diperoleh dari
penghitungan TSA + YE diprediksi lebih menonjol untuk perlakuan dengan waktu perawatan yang lebih lama,
dan adalah 3,7 dan 4,5 untuk sampel yang dirawat selama 6 dan 9 menit pada tingkat tekanan yang disebutkan di atas (Gambar 1A,D
Suhu ringan menambah sensitivitas patogen terhadap peningkatan tekanan hidrostatik. Nilai reduksi
log (hitungan TSA + YE) yang terkait dengan sampel perlakuan 3, 6, dan 9 menit pada 400 MPa dan
pada 40 C masing-masing adalah 2,5, 3,6, dan 5,2 (Gambar 2B,F). Peningkatan dalam efektivitas
dekontaminasi dari unit pasteurisasi tekanan tinggi dengan adanya panas ringan serupa dengan yang
ada dalam literatur terbaru, di mana L. monocytogenes berkurang lebih efektif melalui pasteurisasi
tekanan yang dibantu termal relatif terhadap perawatan tekanan hidrostatik tinggi pada 4 C [25]. Hasil
penelitian saat ini juga selaras dengan literatur sebelumnya, di mana telah ditunjukkan bahwa
perlakuan tekanan pada suhu sekitar 43 C dapat menyebabkan pengurangan >5 log CFU untuk L. monocytogenes [18].
Perlu dicatat bahwa banyak studi literatur yang ada dilakukan dengan peralatan yang memiliki kemampuan
terbatas untuk mengontrol dan memantau suhu [18], dan studi saat ini merupakan upaya untuk menentukan
sensitivitas patogen terhadap tekanan, panas, dan nisin dengan tepat mengontrol suhu dan semua faktor intrinsik
dan ekstrinsik dalam lingkungan buffer.
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 6 dari 13

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, x 6 dari 13

Gambar
Gambar 1.1.Inaktivasi
Inaktivasi koktail
koktail empat
empat regangan
strain L. L. monocytogenes
monocytogenes (ATCC@
(ATCC@ 51772, 51772, 51779,
51779, BAA-2657, BAA-2657,
dan 13932) dan
dalam saline
buffer
13932)fosfat
dalamyang disterilkan,
saline diperlakukan
buffer fosfat dengan diolah
yang disterilkan, nisin (5000 IU/mL)
dengan nisindan peningkatan
(5000 IU/mL) danhidrostatik
peningkatan tekanan hidrostatik
pada 400 pada
tekanan MPa (Barocycler Hub880 Explore,
400 MPa (Barocycler Pressure
Hub880 Bioscience
Explore, Inc.,Bioscience
Pressure Easton, MA,Inc.,
USA) selamaMA,
Easton, 0, 3, USA)
6, selama 0, 3,
dan 9 menit
6, dan 9 menitpada
pada44C.
°C.DiDisetiap
setiap grafik danuntuk
grafik dan untuksetiap
setiap media
media mikrobiologi
mikrobiologi (PALCAM
(PALCAM (hitunganselektif),
(penghitungan selektif),+ TSA
YE
(penghitungan nonselektif)) secara
TSA + YE (penghitungan terpisah,
nonselektif)) kolomterpisah,
secara setiap interval
kolom waktu diikuti
setiap oleh huruf
interval waktubesar yang
diikuti berbeda
oleh huruf yang berbeda
mewakili nilai
huruf besar log CFU/mL
mewakili nilai log(Mean ± SD)
CFU/mL yang
(Mean secara
± SD) yang statistik (p <0,05)
secara statistik berbeda
(p 0,05)
(ANOVA yang disesuaikan
berbeda (ANOVA dengan
yang disesuaikan Tukey).
dengan HurufHuruf
Tukey). besar diikuti
besar dengan
diikuti tanda
dengan * secara
tanda * secarastatistik
statistik(p
(p<0,05)
0,05) berbeda
dibandingkan
kontrol
berbeda yang
daritidak diobati
kontrol yang(tidak
tidak diobati
diobati dengan antimikroba)
(tidak diobati dengan(ANOVA yang(ANOVA
antimikroba) disesuaikan
yangdengan Dunnett).
disesuaikan (A) Nonselektif
Dunnett). (A) jumlah
(Tryptic
Hitungan Soy Agar + ekstrak
nonselektif ragi Soy
(Tryptic [TSAAgar
+ YE]), diperlakukan
+ ekstrak dengan
ragi [TSA tekanan
+ YE]), hidrostatik pada
diperlakukan 400 tekanan
dengan MPa (58 K hidrostatik pada
pound-force
400 MPa (58 per inci persegi
K pound-force per[PSI])
squarepada
inch4[PSI])
C; (B) Jumlah
pada 4 °C; nonselektif (TSA nonselektif
(B) Penghitungan + YE), diperlakukan
(TSA + YE),dengan
tekananhidrostatik
perlakuan
pada 400 MPa (58 K PSI) dan terpapar nisin (5000 IU/mL) pada 4ÿC; (C) jumlah nonselektif (TSA +
dengan tekanan hidrostatik pada 400 MPa (58 K PSI) dan terpapar nisin (5000 IU/mL) pada 4° C; (C)
YE), hanya terpapar
penghitungan nisin
nonselektif (5000
(TSA IU/mL)
+ YE), hanyapada 4 C.nisin
terpapar (D) Selektif countpada
(5000 IU/mL) (PALCAM),
4 °C. (D) diperlakukan dengan
Selektif menghitung hidrostatik
tekanan pada
400 MPa (58diperlakukan
(PALCAM), K PSI) pada dengan
4 C; (E)tekanan
Selektif count (PALCAM),
hidrostatik diperlakukan
pada 400 MPa (58 Kdengan tekanan
PSI) pada 4 °C; hidrostatik
(E) Selektif menghitung pada
400 MPa (58 K PSI) dan terpapar nisin (5000 IU/mL) pada 4ÿC; (F) Selektif count (PALCAM), hanya
(PALCAM), diperlakukan dengan tekanan hidrostatik pada 400 MPa (58 K PSI) dan terpapar nisin (5000 IU/mL)
yang terpapar
pada 4°C; nisin (5000
(F) Selektif count IU/mL) pada
(PALCAM), 4 C.terpapar nisin (5000 IU/mL) pada 4 °C.
hanya
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 7 dari 13

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, x 7 dari 13

Gambar 2.Inaktivasi
Gambar 2. Inaktivasikoktail
koktail empat
empat regangan
strain L. monocytogenes
L. monocytogenes (ATCC@ (ATCC@ 51772,
51772, 51779, 51779, BAA-2657,
BAA-2657, dan dan 13932) dalam
saline
13932)buffer
dalamfosfat yang
saline disterilkan,
buffer diperlakukan
fosfat yang disterilkan,dengan nisin (5000
diolah dengan nisinIU/mL)
(5000 dan peningkatan
IU/mL) hidrostatik
dan peningkatan tekanan hidrostatik
pada 400 pada
tekanan MPa (Barocycler
400 MPa Hub880 Explore,
(Barocycler Pressure
Hub880 Bioscience
Explore, Inc., Easton,
Pressure MA, USA)
Bioscience Inc., selama
Easton,0, MA,
3, 6, USA) selama
0, 3, dan
6, dan 9 menit
9 menit pada
pada 40 C.
40 °C. Di setiap
Pada grafik dan
setiap grafik danuntuk
untuksetiap
setiapmedia
mediamikrobiologi
mikrobiologi (PALCAM
(PALCAM (hitungan
(selective selektif),
TSA +
YE (non-selective
counts), TSA + YEcount)) secara terpisah,
(non-selective counts)) kolom
secarasetiap interval
terpisah, kolomwaktu diikuti
setiap olehwaktu
interval kolomdiikuti
yang dengan
berbeda.huruf besar
mewakili nilai
huruf besar logberbeda
yang CFU/mL (Mean nilai
mewakili ± SD)
logyang secara
CFU/mL statistik
(Mean ± SD) (p <0,05)
yang secara statistik ( p
berbeda (ANOVA
0,05) berbeda yangyang
(ANOVA disesuaikan dengan
disesuaikan Tukey).
dengan Tukey).Huruf
Hurufbesar
besar diikuti dengantanda
diikuti dengan tanda**secara
secarastatistik
statistik
( p(p < 0,05)
berbeda dari kontrol
0,05) berbeda yang tidak
dari kontrol yang diobati (tidakperlakuan
tidak diberi diobati dengan antimikroba)
(tidak diobati dengan(ANOVA yang disesuaikan
antimikroba) Dunnett).
(Dunnett's-adjusted (A)
Nonselective counts (TSA + YE), diperlakukan dengan panas pada 40 C; (B) Nonselective count (TSA + YE),(TSA
ANOVA). (A) Hitungan nonselektif (TSA + YE), diperlakukan dengan panas pada 40 °C; (B) Penghitungan nonselektif
diperlakukan dengandengan
+ YE), diperlakukan tekanantekanan
hidrostatik pada 400
hidrostatik MPa
pada 400(58 K PSI)
MPa dan
(58 K pada
PSI) dan40 C; (C)
pada 40 Penghitungan nonselektif
°C; (C) Hitungan (TSA
nonselektif )
+ YE),
diobati dengan tekanan hidrostatik pada 400 MPa (58 K PSI) dan terpapar nisin (5000 IU/mL) pada
(TSA + YE), diperlakukan dengan tekanan hidrostatik pada 400 MPa (58 K PSI) dan terkena nisin (5000 IU/
mL)
pada40
40 C;
°C;(D)
(D) Jumlah nonselektif
Jumlah nonselektif (TSA
(TSA + YE),
+ YE), terpapar
terpapar nisin IU/mL)
nisin (5000 (5000 pada
IU/mL)
40 pada
°C. (E)40 C. (E)
Selektif Hitungan selektif
(PALCAM),
diperlakukan dengan
counts (PALCAM), panas padadengan
diperlakukan 40 C; (F) Selektif
panas pada count
suhu(PALCAM), diperlakukan
40 °C; (F) Selektif count dengan tekanan
(PALCAM), hidrostatik
diperlakukan pada
dengan
hidrostatik 400 MPa (58 K PSI) dan pada 40 C; (G) Selektif count (PALCAM), diperlakukan dengan tekanan hidrostatik pada 400
tekanan pada 400 MPa (58 K PSI) dan pada 40 °C; (G) Selektif count (PALCAM), diperlakukan dengan
hidrostatik
tekanan padaMPa
400 (58
MPaK(58
PSI) dandan
K PSI) terkena nisin
terpapar (5000
nisin (5000IU/mL) pada40
IU/mL) pada 40°C;
C;(H)
(H)Selektif
Selektif count (PALCAM),
menghitung nisin (5000 terpapar
IU/mL)
pada 40 C.
(PALCAM), terpapar nisin (5000 IU/mL) pada suhu 40°C.
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 8 dari 13

3.2. Inaktivasi L. monocytogenes oleh Nisin

Sebagai antimikroba yang umumnya diakui sebagai aman (GRAS), nisin adalah bakteriosin polipeptida
yang dapat berkhasiat melawan berbagai patogen bawaan makanan dan organisme pembusuk [36].
Dalam kondisi percobaan ini, kami menunjukkan hingga 5 log pengurangan CFU/mL L. monocytogenes yang
terkait dengan aplikasi nisin saja. Secara khusus, dengan menggunakan media nonselektif yang dirujuk di
atas , jumlah patogen sebelum pengobatan adalah 7,92 ± 0,0 log CFU/mL (rata-rata ± standar deviasi) pada
4 C (Gambar 1C). Jumlah nonselektif ini secara statistik berkurang (p <0,05) menjadi 7,09 ± 0,1, 2,91 ± 0,1,
dan 3,00 ± 0,1 setelah 3, 6, dan 9 menit paparan 5000 IU/mL nisin pada 4 C, masing-masing (Gambar 1C) .
Meskipun manjur dibandingkan dengan kontrol (p < 0,05), perlakuan 3 menit dan 6 menit pada 4 C tidak
berbeda secara statistik (p 0,05) satu sama lain (Gambar 1C). Pengurangan log yang terkait dengan
penghitungan nonselektif adalah 0,8, 5,0, dan 4,9 log CFU/mL untuk sampel yang diberi nisin 5000 IU/mL
masing-masing selama 3, 6, dan 9 menit pada suhu 4 C (Gambar 1C). Penghitungan yang diperoleh dari
media selektif (penghitungan PALCAM) pada 4 C juga mengungkapkan tren yang sama, meskipun seperti
yang dibahas dalam Bagian 3.1., penghitungan PALCAM secara konsisten lebih rendah daripada penghitungan
nonselektif. Di bawah kondisi percobaan kami, nisin (5000 IU/mL) pada suhu yang lebih tinggi dari 40 C juga
mampu secara signifikan (p <0,05) mengurangi jumlah patogen. Peningkatan suhu tidak meningkatkan (p
0,05 ) kemanjuran antimikroba relatif terhadap 4 C (Gambar 2D,H) untuk perawatan lebih dari 5 menit,
sementara itu meningkatkan (p <0,05) kemanjuran pengobatan selama 3 menit dirawat sampel (Gambar 1C,F
dan Gambar 2D,H). Pengurangan log L. monocytogenes (p <0,05), diperoleh dari media nonselektif, adalah
0,8 dan 2,7 log CFU/mL untuk sampel yang terpapar nisin (5000 IU/mL) selama 3 menit pada 4 dan 40 C.
Pengurangan ini serupa (p 0,05 ) dan 5,0 dan 4,4 log CFU/mL untuk sampel yang terpapar nisin (5000 IU/mL)
selama 6 menit, dan 4,9 dan 4,7 selama 9 menit sampel yang dirawat, pada 4 dan 40 C (Gambar 1C,F dan Gambar 2D,H).
Khasiat nisin untuk dekontaminasi mikroba patogen Gram-positif ini selaras dengan penelitian sebelumnya
di mana penerapan antimikroba ini telah berkhasiat untuk pengurangan hingga 5-log L. monocytogenes [36,37].
Demikian pula, penambahan nisin sebelumnya telah dilaporkan meningkatkan sensitivitas L. monocytogenes
terhadap peningkatan tekanan hidrostatik [18], di mana perlakuan 345 MPa pada 25 C yang berlangsung
selama 10 menit telah ditambah dengan adanya 3000 IU/mL nisin [38]. Studi saat ini menyelidiki sinergi nisin
dan pasteurisasi berbasis tekanan terhadap sel-sel planktonik L. monocytogenes. Studi sebelumnya juga
menunjukkan bahwa tekanan pada tingkat intensitas 400 MPa yang berlangsung hingga 10 menit dengan
adanya 1000 IU/mL nisin juga bisa berkhasiat untuk pengobatan sel sessile patogen ketika diuji terhadap L.
monocytogenes biofilm [ 39]. Nisin juga sama berkhasiat terhadap Listeria innocua pada 35 dan 50 C dan
intensitas tekanan 200-500 MPa [40].
Selain aktivitas antilisterial, antimikroba alami ini telah diuji untuk meningkatkan pasteurisasi spora bakteri
berbasis tekanan [41], Escherichia coli dan Staphylococcus aureus [42], Salmonella enterica serovar
Typhimurium dan Bacillus subtilis [43], dan Cronobacter patogen. sp. [44].
Sangat penting untuk dicatat bahwa meskipun perbandingan langsung dari dua studi yang dilakukan di
kendaraan yang berbeda secara inheren tidak layak karena setiap media atau produk memiliki faktor intrinsik dan
ekstrinsik yang berbeda, membandingkan berbagai studi menggunakan pengaturan yang sama dapat memberikan
tren dan media untuk bukti . pengambilan keputusan berbasis pemangku kepentingan, kesempatan bagi peneliti
akademis dan industri masa depan untuk mengasimilasi pengetahuan yang ada dan merumuskan eksperimen
baru, dan menciptakan peluang yang dipercepat untuk penilaian risiko oleh praktisi kesehatan masyarakat.
Seperti dijelaskan sebelumnya di Bagian 3, penelitian ini dilakukan di PBS untuk menghilangkan faktor intrinsik
dan ekstrinsik yang terkait dengan produk makanan tertentu untuk mempelajari sensitivitas patogen terhadap
tekanan tinggi, nisin, dan panas ringan. Kendaraan makanan kompleks memiliki faktor intrinsik dan ekstrinsik
tambahan, dan interaksi produk-patogen tertentu perlu dipertimbangkan untuk produk baru sebelum adaptasi hasil studi validasi.

3.3. Sinergi Nisin, Panas Ringan, dan Peningkatan Tekanan Hidrostatik

Perawatan tekanan hidrostatik yang berlangsung selama 3 menit sangat penting karena saat ini industri
swasta menggunakan perawatan 3 menit untuk sebagian besar produk yang tersedia secara komersial
[19,20,25]. Di bawah kondisi percobaan kami pada 4 C, paparan 400 MPa tekanan tinggi
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 9 dari 13

perawatan selama 3 menit menghasilkan pengurangan 1,9 log CFU/mL (p <0,05) dari L. monocytogenes (Gambar 1A,D).
Dengan adanya nisin (5000 IU/mL), perlakuan yang sama pada 4 C menghasilkan penurunan 4,0 log CFU/
mL (p <0,05) patogen (Gambar 1B,E). Ini menunjukkan kemampuan nisin untuk meningkatkan kemanjuran
pasteurizer bertekanan tinggi. Sementara paparan panas saja (40 C selama 3 menit) menghasilkan sedikit
pengurangan (p <0,05) 1,1 log CFU/mL L. monocytogenes (Gambar 2A,E), paparan panas ringan dan nisin
(5000 IU nisin pada 40 C selama 3 menit) menghasilkan pengurangan (p <0,05) 2,7 log CFU/mL L.
monocytogenes (Gambar 2D,H). Demikian pula, paparan panas ringan dan nisin dan tekanan hidrostatik
(5000 IU nisin pada 40 C selama 3 menit di bawah 400 MPa tekanan hidrostatik) menyebabkan pengurangan
(p <0,05) 3,0 log CFU/mL L. monocytogenes (Gambar 2C,G). Dengan demikian, dapat disimpulkan bahwa
nisin dapat meningkatkan efektivitas dekontaminasi panas serta pasteurisasi berbasis tekanan L.
monocytogenes pada interval waktu yang relevan dengan industri swasta. Meskipun panas dan nisin
mampu meningkatkan kemanjuran dekontaminasi berbasis tekanan L. monocytogenes, pemanfaatan panas
dan nisin secara bersamaan tidak menunjukkan efektivitas pengurangan patogen tambahan untuk
pasteurisasi berbasis tekanan. Untuk waktu pemaparan lebih dari 3 menit, sinergi antara tekanan, panas,
dan nisin ini kurang menonjol untuk inaktivasi L. monocytogenes. Sebagai contoh, perlakuan dengan panas
(40 C) saja selama 9 menit menyebabkan pengurangan (p <0,05) 3,1 log CFU/mL L. monocytogenes
(Gambar 2A,E), perlakuan dengan panas dan nisin (5000 IU nisin pada 40 C selama 9 menit) menyebabkan
pengurangan (p <0,05) 4,7 log CFU/mL L. monocytogenes (Gambar 2D,H), pengobatan di bawah tekanan
hidrostatik dan nisin (5000 IU nisin di bawah 400 MPa pada 4 C selama 9 menit) menyebabkan pengurangan
(p <0,05) 4,3 log CFU/mL L. monocytogenes (Gambar 1B), dan perlakuan panas di bawah tekanan
hidrostatik dan nisin (5000 IU nisin di bawah 400 MPa pada 40 C selama 9 menit) menghasilkan
pengurangan (p <0,05) 4,5 log CFU/mL L. monocytogenes (Gambar 2C,G). Perlu dicatat bahwa jumlah
mikroba yang dibahas dalam bagian ini (Bagian 3.3.) adalah yang berasal dari media nonselektif dengan
suplementasi ekstrak ragi yang memiliki kinerja superior dibandingkan media selektif untuk meningkatkan
pemulihan sel yang terluka dan dengan demikian memiliki validitas eksternal yang lebih tinggi [20] .

3.4. Indeks Inaktivasi untuk Inaktivasi L. monocytogenes

Indeks inaktivasi merangkum kemanjuran dekontaminasi pengobatan terhadap patogen spesifik dan
pada faktor intrinsik dan ekstrinsik spesifik produk. Dalam penelitian kami, kami menghitung nilai-D
berdasarkan model linier yang paling sesuai serta nilai Kmax berdasarkan model nonlinier dengan statistik
kecocokan tertinggi ( R2 tertinggi ). Nilai-D yang dilaporkan yang disajikan dalam penelitian ini sesuai
dengan waktu (dalam menit) yang diperlukan untuk mencapai pengurangan satu log (yaitu, pengurangan
90%) dari campuran L. monocytogenes di bawah kondisi penelitian, sementara Kmax menunjukkan jumlah
log siklus reduksi campuran L. monocytogenes dalam satuan 1/menit.
Pada 4 C, nilai-D dan inaktivasi Kmax untuk sampel yang diperlakukan pada 400 MPa hingga 9 menit masing-
masing adalah 1,96 dan 1,56 (Gambar 3A). Hal ini menunjukkan, dengan asumsi linieritas, bahwa setiap 1,96 menit,
perlakuan mampu mereduksi 90% patogen yang diinokulasi pada kondisi intrinsik dan ekstrinsik percobaan. Demikian
pula, perlakuan yang disebutkan di atas dengan adanya 5000 IU nisin menghasilkan nilai-D dan inaktivasi Kmax masing-
masing 2,24 dan 7,89 (Gambar 3B), sedangkan paparan nisin saja menghasilkan nilai-D dan inaktivasi Kmax 1,58 dan
1,86, masing-masing (Gambar 3C). Temuan ini selaras dengan hasil pengurangan log mikroba di Bagian 3.1-3.3, di
mana nisin berkhasiat untuk meningkatkan efektivitas dekontaminasi dari perawatan berbasis tekanan dan panas pada
interval waktu 3 menit tetapi kemanjurannya berkurang pada waktu yang lebih lama. interval. Pada 40 C, nilai D untuk
perlakuan panas (40 C), perlakuan tekanan (400 MPa), perlakuan tekanan dengan nisin (400 MPa, 5000 IU/mL), dan
perlakuan nisin (5000 IU/ mL) sampel masing-masing adalah 2,59, 1,78, 1,98, dan 1,89 menit (Gambar 4A-D).

Kmax inaktivasi dari perlakuan adalah 1,26, 9,78, 2,35, dan 2,10 (Gambar 4A-D). Baik indeks inaktivasi
linier dan nonlinier dapat memberikan informasi yang dapat disesuaikan untuk asimilasi pemangku
kepentingan, namun, penting untuk dicatat bahwa indeks inaktivasi perlu digunakan dan disesuaikan
dengan hati- hati setelah mempelajari hubungan spesifik patogen-produk untuk memastikan linier atau
nonlinier yang paling dapat digeneralisasikan. model telah dipilih [20-22].
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 Int. 10 dari 13
J.Lingkungan.
J.Lingkungan.Res.
Res.Kesehatan
KesehatanMasyarakat
Masyarakat2020,
2020,17,
17,xxInt. 10
10dari
dari13
13

99 99
HPP+NISIN
HPP+NISIN4ÿC4ÿC
88 88 Linear
LinearD-value=2.24
D-value=2.24
77 77 Non-linear
Non-linearKmax1=7.89
Kmax1=7.89
Non-Linear
Non-LinearKmax2=0.13
Kmax2=0.13 R-
66 66
Persegi
0,88 = 0,88 R-Persegi =
55 55
CFU/
mlLog
ml
CFU/
Log CFU/
mlLog
ml
CFU/
Log

44 44
HPP
HPP44CC
33 33
Linear
LinearD-value=1,96
D-value=1,96
22 Non-linear
Non-linearKmax1=1,56
Kmax1=1,56 22
Non-linear
Non-linearKmax2=0,66
Kmax2=0,66 R-
11 11
Square=0,82
0.82 R -Persegi =
00 00
0123456789 0123456789 0123456789 0123456789
SEBUAH.
SEBUAH.
jam
Jam(menit)
(menit) B.
B.
jam
jam(menit)
(menit)
99
88

77

66

55
CFU/
mlLog
ml
CFU/
Log

44
NISIN
NISIN4ÿC
4ÿC
33 Nilai
NilaiDDLinear=1,58
linier=1,58 Non-
22 linear
linearKKmax1=1,86
max1=1,86Non-
Non-
linear
linearKmax2=0,04
Kmax2=0,04Non-R-
11
Square=
0,87 0,87 R-Persegi =
00
0123456789 0123456789

C.
C. jam
jam(menit)
(menit)

Gambar
Indeks 3.inaktivasi
inaktivasiIndeks inaktivasi
linier
linier dan danlinier dan empat
nonlinier
nonlinier untuk nonlinier untukempat
untuk koktail
regangan koktail empat
regangan
-strain regangan L. monocytogenes
L.L.monocytogenes
cocktail monocytogenes ATCC@(ATCC@
( (ATCC@ 51772, Gambar
Gambar 3. Indeks3.
51779,
BAA-2657,
51772, dandan
BAA-2657, 13932)
51779, dalam
BAA-2657,
13932) saline
dan
dalam buffer
13932)
saline fosfat
dalam
buffer steril,
saline
fosfat diolah
buffer
steril, dengan
fosfat
diolah nisin
steril,
dengan (5000
diolah
nisin IU/mL)
dengan
(5000 nisin (5000
dan/atau 51772,tekanan
ditinggikan 51779,
hidrostatik
400 MPa pada
hidrostatik 400400
pada MPaMPa
(Barocycler (Barocycler
Hub880 Hub880
(Barocycler
Explore, Explore,
Hub880 Pressure
Explore,
Pressure Bioscience
Pressure
Bioscience Inc., IU/mL) Inc., IU/mL)
Easton,dan/atau
MA, USA) dan/atau
peningkatan
pada peningkatan
4 °C tekanan
(A) tekanan
hidrostatik
Diolah dengan pada
tekanan
Easton, MA,hidrostatik
AS)
Bioscience pada
Inc., pada
Easton, 400
4 C. (A) MPa
USA)(58 K PSI)
MA,Diperlakukan
pada 4dengan
°C. (A) tekanan hidrostatik
Diperlakukan dengan pada 400 MPa
tekanan (58 K PSI)
hidrostatik padapada
400 4MPa
C; (B)
(58 K PSI)
mL)Diperlakukan
IU/mL)
denganpada 4pada
tekanan 4 °C; (B) Diperlakukan
°C;hidrostatik
(B) Diperlakukan dengan
dengan
pada 400 MPa tekanan
tekanan
(58 dan hidrostatik
hidrostatik
K PSI) pada
padanisin
terpapar 400 400(58
MPa
(5000 MPaK (58
PSI)
IU/mL) Kdan
padaPSI)
Cdan
; (C)terkena
4 terpapar nisin nisin
Terkena(5000 (5000
nisinIU/
(5000
pada
IU/mL)
4 °C. pada 4 C. pada 4 °C; (C) Terkena nisin (5000 IU/mL) pada 4 °C. pada 4 °C; (C) Terkena nisin (5000 IU/mL)

99 99
88
HPP
HPP40ÿC
40ÿC
88
Linear
LinearD-value=1,78
D-value=1,78
77 Non-linear
77 Non-linearKmax1=9,78
Kmax1=9,78
66 66 Non-Linear
Non-LinearKmax2=1,06
Kmax2=1,06 R-
55
Square=0,77
0,77 R -Persegi =
CFU/
CFU/
log
log
ml
ml
55
CFU/
ml Log
ml
CFU/
Log

44 44
KENDALI
KENDALI40ÿC 40ÿC
33 Nilai
NilaiDDlinier=2,59
linier=2,59 33

22 Kmax1
Kmax1Non-linear=1,26
Non-linear=1,26 22
Kmax2
Kmax2Non-linear=0,42
Non-linear=0,42
11 11
R-Square=0,84
= 0,84 R -Persegi
00 00
0123456789 0123456789 Jam (menit) 0123456789 0123456789
SEBUAH.
SEBUAH.
jam (menit) B.
B.
jam
jam(menit)
(menit)
99 HPP+NISIN
HPP+NISIN40ÿC
40ÿC 99
Linear
LinearD-value=1,98
D-value=1,98 Non- NISIN
NISIN40ÿC
40ÿC
88 88
Linear
LinearKmax1=2,35
Kmax1=2,35Non-
Non- Nilai-D
Nilai-DLinear=1.89
Linear=1.89
77 Non-linear
Linear Kmax2=0,00 Non-Linear
Kmax2=0,00
77 Non-linearKmax1=2,10
Kmax1=2,10
66 Non-linear
Non-linearKmax2=0.21
Kmax2=0.21
R-Square
R-Square==0,56
0,56 66

55 R-Square=0.64
= 0,64 R -Persegi
CFU/
ml Log
ml
CFU/
Log
55
CFU/
ml Log
ml
CFU/
Log

44
44
33
33
22
22
11
11
0
0
0 0123456789 0123456789
0 0123456789 0123456789
C.
C. jam
jam(menit)
(menit) D.
D. jam
jam(menit)
(menit)

Gambar 4. Indeks inaktivasi linier dan nonlinier untuk koktail empat regangan L. monocytogenes (ATCC@ Gambar 4.
Indeks inaktivasi
inaktivasi linier
linier dan dan nonlinier
nonlinier untuk koktail
untuk empat reganganempat regangan
-strain cocktailL.L.monocytogenes
monocytogenes( (ATCC@
ATCC@ Gambar 4. Indeks
51772, 51779,
BAA-2657,
51772, dan 13932)
51779, dalamdan
saline bufferdalam
fosfatsaline
steril,buffer
diolahfosfat
dengan nisin (5000 IU/mL)nisin (5000 51772, 51779,
BAA-2657, danBAA-2657,
13932) dalam 13932)
saline buffer fosfat steril, diolah steril,
dengan diolah dengan
nisin (5000 dan/atau ditinggikan tekanan
hidrostatik
400 MPa pada
hidrostatik 400400
pada MPa
(Barocycler MPa(Barocycler
Hub880 Hub880
(Barocycler
Explore,Hub880 Explore,
Explore,
Pressure Pressure
Easton, Bioscience
Pressure
MA, USA)IU/mL) Inc.,
C.IU/mL)
padadan/atau
40 dan/atautekanan
(A)peningkatan
Diperlakukan peningkatan
dengan tekanan
hidrostatik
panas pada
pada 40
C; dengan
(B) Diperlakukan
dengan panas dengan
panas pada
pada 40
40 °C;tekanan
°C; (B) hidrostatik
(B) Diolah pada 400MPa
oleh hidrostatik
Diperlakukan dengan Bioscience
Bioscience Inc.,
Inc.,
hidrostatik Easton,
Easton,
(58 K PSI) MA,
MA,
dan USA)
USA) pada
padapada 40
40 C; 40 °C.
°C.
(C) (A)Diperlakukan
(A) Diperlakukan
Diperlakukan
dengan tekanan
Diperlakukan hidrostatik
dengan
(C) Diperlakukan pada
tekanan
dengan 400 MPa
hidrostatik
tekanan (58 K PSI)
padapada
hidrostatik dan
tekanan terkena
400 400
MPaMPa tekanan
(58 K(58 pada
K PSI)
PSI) 400
nisinpada MPa
(5000400 (58 K
MPapada
IU/mL) PSI)
(58 K40 dan
PSI) pada
C; dan 40 °C;
pada (C)
40 nisin
(D) Terkena °C;
(5000 IU/mL) pada 40 C. dan terpapar nisin (5000 IU/mL) pada 40 °C; (D) Terkena
terpapar nisin (5000 IU/mL) pada 40 °C; (D) Terkena nisin (5000 IU/mL) pada 40 °C. nisin (5000 IU/mL) pada 40 °C. dan
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 11 dari 13

4. Kesimpulan

Di bawah kondisi uji coba yang dilakukan, ditunjukkan bahwa nisin dapat meningkatkan kemanjuran
dekontaminasi panas ringan serta perawatan tekanan hidrostatik tinggi pada 400 MPa.
Efek sinergis ini lebih jelas dan nyata pada waktu perawatan 3 menit, waktu pemaparan yang saat ini paling
umum dalam pembuatan makanan swasta. Efek sinergis dengan nisin ini memudar seiring waktu perawatan
untuk pemrosesan tekanan termal, tekanan tinggi, dan bantuan termal meningkat. Dengan demikian,
sinergisme ini dapat menjadi penting untuk perawatan dengan intensitas sedang atau tinggi dan waktu yang
singkat. Hasil penelitian kami juga menunjukkan bahwa praktisi dan pemangku kepentingan teknologi
berbasis tekanan dapat mengambil manfaat dari sinergi panas ringan dan nisin dengan tekanan ringan
untuk perawatan jangka pendek untuk mencapai pengurangan L. monocytogenes hingga >5 log. Ini bisa
menjadi sangat penting untuk mencapai keamanan mikroba dan kelayakan ekonomi yang sebanding
dengan produk perlakuan panas tradisional dan memenuhi persyaratan peraturan seperti Analisis Bahaya
dan Titik Kontrol Kritis, dan Undang-Undang Modernisasi Keamanan Pangan.

Kontribusi Penulis: SA, sebagai asisten peneliti pascasarjana Laboratorium Mikrobiologi Kesehatan Masyarakat, melakukan
laboratorium dan percobaan pendahuluan, dan ikut menulis dan menganalisis penelitian ini sebagai pemenuhan sebagian dari
pelatihan doktoral dan disertasinya. MNK, sebagai rekan peneliti pasca-doktoral dari Laboratorium Mikrobiologi Kesehatan
Masyarakat, membantu dalam melakukan perawatan tekanan pada suhu terkontrol, analisis mikrobiologi, dan perekaman dan
analisis data. SC, sebagai teknisi penelitian Laboratorium Mikrobiologi Kesehatan Masyarakat, membantu dalam melakukan
perawatan tekanan, analisis mikrobiologi laboratorium, dan perekaman data. ACF, sebagai direktur fakultas Laboratorium
Mikrobiologi Kesehatan Masyarakat dan asisten profesor, mendapatkan dana ekstra dan menyiapkan desain uji coba utama
dan pendahuluan serta kode untuk analisis statistik. Dia ikut menulis, mengedit, dan merevisi manuskrip tersebut. Semua penulis
telah membaca dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.

Pendanaan: Proyek ini didanai sebagian oleh Pressure BioScience Inc. dan Departemen Pertanian Amerika Serikat, Institut
Pangan dan Pertanian Nasional (Hibah: 2017-07534, 2017-07975, dan 2016-07430).

Ucapan Terima Kasih: Pendanaan yang disediakan sebagian dari Pressure Bioscience Inc. dan USDA-NIFA sangat berterima
kasih kepada penulis terkait. Bantuan teknis dari Jayashan Adhikari untuk pengumpulan data dan semua staf dan mahasiswa
Laboratorium Mikrobiologi Kesehatan Masyarakat sangat berterima kasih kepada penulis. Penulis juga mengucapkan terima
kasih yang sebesar-besarnya atas dukungan administratif dari tim redaksi IJERPH dan tiga peninjau sejawat anonim dari naskah
ini.

Konflik Kepentingan: Penulis publikasi ini menyatakan tidak ada konflik kepentingan yang terkait dengan publikasi proyek
penelitian ini. Lembaga pendanaan proyek ini tidak memiliki peran untuk merancang penelitian, untuk pengumpulan, analisis
statistik, interpretasi data, penulisan naskah, dan keputusan untuk mempublikasikan hasilnya. Dengan demikian, isi publikasi
tidak serta merta mencerminkan pandangan lembaga pemberi dana.

Referensi

1. Fouladkhah, A. Perlunya penjangkauan berbasis bukti dalam lanskap peraturan keamanan pangan saat ini. J. Ekst.
2017, 55, 2COM1.
2. Fouladkhah, AC; Thompson, B.; Camp, JS Keamanan pasokan makanan dan air di lanskap perubahan
iklim. Mikroorganisme 2019, 7, 469. [CrossRef] [PubMed]
3. Sistem Pelaporan Wabah Nasional (NORS). Pusat Pengendalian dan Pencegahan Penyakit. 2019. Tersedia
daring: https://wwwn.cdc.gov/norsdashboard/ (diakses pada 15 November 2019).
4. Scalan, E.; Hoekstra, RM; Angulo, FJ; Taux, RV; Janda, MA; Roy, SL; Jones, JL; Griffin, PM
Penyakit bawaan makanan yang didapat di Amerika Serikat—Patogen utama. muncul. Menulari. Dis. 2011, 17, 7–15.
[CrossRef] [PubMed]
5. Pusat Pencegahan dan Pengendalian Penyakit Eropa. Listeriosis—Laporan Epidemiologi Tahunan untuk 2016.
Tersedia online: https://www.ecdc.europa.eu/sites/default/files/documents/AER_for_2016-listeriosis.pdf
(diakses pada 24 Desember 2019).
6. Otoritas Keamanan Makanan Eropa dan Pusat Pencegahan dan Pengendalian Penyakit Eropa. Laporan ringkasan Uni Eropa
tentang tren dan sumber zoonosis, agen zoonosis, dan wabah yang ditularkan melalui makanan pada tahun 2016. EFSA
J. 2017, 15, 5077. [CrossRef]
7. Scalan, E.; Hoekstra, RM; Mahon, BE; Jones, TF; Griffin, PM Penilaian dampak kesehatan manusia dari tujuh patogen
bawaan makanan terkemuka di Amerika Serikat menggunakan tahun kehidupan yang disesuaikan dengan disabilitas. Epidemiol.
Menulari. 2015, 143, 2795–2804. [CrossRef]
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 12 dari 13

8. Pusat Pengendalian dan Pencegahan Penyakit. Gejala Listeria (Listeriosis). 2019. Tersedia online: https://www.cdc.gov/listeria/
symptoms.html (diakses pada 15 November 2019).
9. Jalan Punyauppa, S.; Phumkhachorn, P.; Rattanachaikunsopon, P. Nisin: Produksi dan Mekanisme
tindakan antimikroba. Int. J. Curr. Res. 2015, 7, 47.
10. Administrasi Makanan dan Obat-obatan. Bahan Makanan Langsung Diakui Secara Umum Diakui Aman. Direvisi 1 April 2019. Tersedia online: https://

www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfCFR/CFRSearch.cfm?

CFRPart=184&showFR=1 (diakses pada 15 November 2019).

11. Samelis, J.; Bedi, GK; Sofos, JN; Belk, KE; Scanga, JA; Smith, GC Kombinasi nisin dengan asam organik atau garam untuk
mengontrol Listeria monocytogenes pada irisan daging babi bologna yang disimpan pada suhu 4 C dalam kemasan vakum.
LWT-Makanan Sci. teknologi. 2005, 38, 21-28. [CrossRef]
12. Gou, J.; Lee, HY; Ahn, J. Kinetika inaktivasi dan potensi virulensi Salmonella Typhimurium dan Listeria monocytogenes diobati dengan
kombinasi tekanan tinggi dan nisin. J. Makanan Prot. 2010, 73, 2203–2210. [CrossRef]
13. Garcia, P.; Martinez, B.; Rodríguez, L.; Rodríguez, A. Sinergi antara fag endolysin LysH5 dan nisin untuk membunuh Staphylococcus
aureus dalam susu pasteurisasi. Int. J. Mikrobiol Pangan. 2010, 141, 151–155. [CrossRef]
14. Lee, J.; Kaletunç, G. Inaktivasi strain Salmonella Enteritidis dengan kombinasi tekanan hidrostatik tinggi
dan nisin. Int. J. Mikrobiol Pangan. 2010, 140, 49–56. [CrossRef]
15. Klangpetch, W.; Noma, S. Efek penghambatan nisin dikombinasikan dengan antimikroba yang berasal dari tumbuhan pada bakteri
patogen dan interaksi dengan sistem makanan yang kompleks. J. Ilmu Pangan. teknologi. 2018, 24, 609–617. [CrossRef]
16. Moshtaghi, H.; Rashidimehr, A.; Shareghi, B. Aktivitas antimikroba nisin dan lisozim pada patogen bawaan makanan Listeria
monocytogenes, Staphylococcus Aureus, Salmonella Typhimurium, dan Escherichia coli pada pH yang berbeda. J. Nutr. Makanan
Aman. 2018, 3, 193–201. [CrossRef]
17. Modugno, C.; Kmiha, S.; Simon, H.; Aouadhi, C.; Cañizares, ED; Lang, E.; Andre, S.; Majri, S.; Maaroufi, A.; Perrier-
Cornet, JM Sensitisasi tekanan tinggi dari spora bawaan makanan yang tahan panas dan patogen terhadap nisin.
Mikrobiol Makanan. 2019, 84, 103244. [CrossRef] [PubMed]
18. Ferreira, M.; Almeida, A.; Delgadillo, saya.; Saraiva, J.; Cunha, A. Kerentanan Listeria monocytogenes terhadap tinggi
pemrosesan tekanan: Sebuah tinjauan. Makanan Rev Int. 2016, 32, 377–399. [CrossRef]
19. Ting, E. Pengolahan Makanan Tekanan Tinggi: Dulu, Saat Ini, dan Masa Depan. Dalam Sesi: Adopsi Industri dan Validasi Teknologi
Pemrosesan Minimal Berbasis Tekanan Tinggi (A. Fouladkhah, Penyelenggara Sesi).
Pertemuan Tahunan Institut Teknologi Pangan, Chicago, IL. 2018. Tersedia online: https://www. pressurebiosciences.com/
documents/food (diakses pada 15 November 2019).
20. Allison, A.; Daniels, E.; Chowdhury, S.; Fouladkhah, A. Pengaruh tekanan hidrostatik tinggi terhadap mikroflora latar belakang mesofilik
dan serovar Salmonella yang terhabituasi dalam jus jeruk. Mikroorganisme 2018, 6, 23. [CrossRef]

21. Kabir, MN; Aras, S.; Allison, A.; Adhikari, J.; Chowdhury, S.; Fouladkhah, A. Interaksi carvacrol, asam kaprilat, pembiasaan, dan panas
ringan untuk inaktivasi berbasis tekanan dari serogrup O157 dan non-O157 dari Escherichia coli penghasil toksin Shiga dalam
lingkungan asam. Mikroorganisme 2019, 7, 145. [CrossRef]
22. Tramer, J.; Fowler, GG Estimasi nisin dalam makanan. J.Sci. pertanian pangan. 1964, 15, 522–528. [CrossRef]
23. Ukuku, LAKUKAN; Shelef, LA Sensitivitas enam strain Listeria monocytogenes terhadap nisin. J. Makanan Prot. 1997, 60,
867–869. [CrossRef]
24. Reunanen, J.; Saris, PEJ Kelangsungan hidup aktivitas nisin di lingkungan usus. Bioteknologi. Lett. 2019, 31, 1229-1232. [CrossRef]

25. Allison, A.; Chowdhury, S.; Fouladkhah, A. Sinergisme pasteurisasi panas ringan dan tekanan tinggi terhadap Listeria monocytogenes
dan mikroflora alami dalam saline buffer fosfat dan susu mentah. Mikroorganisme 2018, 6, 102. [CrossRef]

26. Ting, E.; Balasubramaniam, VM; Raghubeer, E. Menentukan efek termal dalam pemrosesan tekanan tinggi.
Teknologi Pangan. 2002, 56, 31-35.
27. Prudêncio, CV; Dos Santos, MT; Vanetti, MCD Strategi untuk penggunaan bakteriosin pada bakteri gram negatif : Relevansi dalam
mikrobiologi makanan. J. Ilmu Pangan. teknologi. 2015, 52, 5408–5417. [CrossRef] [PubMed]
28. Allison, A.; Fouladkhah, A. Sensitivitas serovar Salmonella dan mikroflora alami terhadap pasteurisasi tekanan tinggi: Data akses terbuka
untuk penilaian risiko dan praktisi. Ringkasan Data 2018, 21, 480–484.
[CrossRef] [PubMed]
29. Geeraerd, AH; Valdramidis, Wakil Presiden; Van Impe, JF GInaFiT, alat freeware untuk menilai kurva penyintas mikroba non-log-linear.
Int. J. Mikrobiol Pangan. 2005, 102, 95–105. [CrossRef]
Machine Translated by Google

Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan Masyarakat 2020, 17, 563 13 dari 13

30. Fouladkhah, A.; Geornaras, saya.; Yang, H.; Sofos, JN Resistensi asam laktat Escherichia coli penghasil toksin Shiga dan Salmonella
Typhimurium dan Salmonella Newport yang resisten terhadap berbagai obat dan Salmonella dalam homogenat daging. Mikrobiol
Makanan. 2013, 36, 260–266. [CrossRef] [PubMed]
31. Allnutt, TR; Bradbury, MI; Mengipasi, S.; Chandry, PS; Fox, EM Draft urutan genom dari 15 isolat Listeria
monocytogenes Serotipe 1/2a, Subkelompok ST204. Pengumuman Genom. 2016, 4, e00935-16. [CrossRef]
[PubMed]
32. Rubah, EM; Allnutt, T.; Bradbury, MI; Mengipasi, S.; Chandry, PS Genom komparatif dari Listeria
monocytogenes subkelompok ST204. Depan. Mikrobiol. 2016, 7, 2057. [CrossRef] [PubMed]
33. Leistner, L.; Gorris, Pengawetan Makanan LG dengan teknologi rintangan. Tren Makanan Sci. teknologi. 1995, 6, 41–46.
[CrossRef]
34. Fouladkhah, A.; Geornaras, saya.; Sofos, JC Pengaruh Pemanasan Ulang Terhadap Listeria monocytogenes yang diinokulasikan pada
daging dada ayam matang yang disimpan secara aerob pada suhu 7 C. Makanan Prot. Tren 2012, 32, 697–704.
35. Fouladkhah, A.; Geornaras, saya.; Nychas, GJ; Sofos, JN Sifat antilisterial marinade selama penyimpanan berpendingin dan pemanasan
ulang oven microwave terhadap daging dada ayam yang diinokulasi setelah dimasak.
J. Ilmu Pangan. 2013, 78, M285–M289. [CrossRef]
36. Solomakos, N.; Govaris, A.; Koidis, P.; Botsoglou, N. Efek antimikroba dari minyak esensial thyme, nisin, dan kombinasinya terhadap
Listeria monocytogenes dalam daging sapi cincang selama penyimpanan berpendingin. Mikrobiol Makanan.
2008, 25, 120–127. [CrossRef] [PubMed]
37. Haris, LJ; Fleming, HP; Klaenhammer, TR Sensitivitas dan resistensi Listeria monocytogenes ATCC 19115, Scott A, dan UAL500
terhadap nisin. J. Makanan Prot. 1991, 54, 836–840. [CrossRef] [PubMed]
38. Kalchayanand, N.; Sikes, A.; Dunne, CP; Ray, B. Faktor-faktor yang mempengaruhi kematian dan cedera patogen bawaan makanan
dengan pasteurisasi tekanan hidrostatik. Mikrobiol Makanan. 1998, 15, 207–214. [CrossRef]
39. Gou, J.; Jung, LS; Lee, SH; Ahn, J. Pengaruh nisin dan asam pada inaktivasi dan pemulihan biofilm Listeria monocytogenes yang
dirawat dengan tekanan hidrostatik tinggi. Ilmu Makanan. Bioteknologi. 2011, 20, 1361. [CrossRef]
40. Pokhrel, PR; Toniazzo, T.; Boulet, C.; Satu, AKU; Sablani, SS; Tang, J.; Barbosa-Cánovas, GV Inaktivasi Listeria innocua dan Escherichia
coli dalam jus wortel dengan menggabungkan pemrosesan tekanan tinggi, nisin, dan perawatan termal ringan. inovasi Ilmu Makanan.
muncul. teknologi. 2019, 54, 93-102. [CrossRef]
41. Sikin, AM; Walkling-Ribeiro, M.; Rizvi, SS Pengolahan sinergis susu skim dengan nitrous oxide bertekanan tinggi, panas, nisin, dan
lisozim untuk menonaktifkan bakteri vegetatif dan pembentuk spora. Teknologi Bioproses Pangan.
2017, 10, 2132–2145. [CrossRef]
42. Li, H.; Xu, Z.; Zhao, F.; Wang, Y.; Liao, X. Efek sinergis karbon dioksida dan nisin bertekanan tinggi pada inaktivasi Escherichia coli dan
Staphylococcus aureus. inovasi Ilmu Makanan. muncul. teknologi. 2016, 33, 180–186.
[CrossRef]
43. Jayaweera, TSP; Jayasinghe, JMCS; Madushanka, DNN; Yasawathie, Ditjen; Ruwandeepika, HAD
Penilaian efek penghambatan nisin (E234) terhadap Salmonella Typhimurium dan Bacillus subtilis pada sosis ayam. Ilmu Makanan
Asia. J. 2018, 2, 1–11. [CrossRef]
44. Campion, A.; Morrissey, R.; Lapangan, D.; Cotter, PD; Bukit, C.; Ross, RP Penggunaan turunan nisin yang disempurnakan dalam
kombinasi dengan minyak food grade atau asam sitrat untuk mengendalikan Cronobacter sakazakii dan Escherichia coli O157: H7.
Mikrobiol Makanan. 2017, 65, 254–263. [CrossRef]

© 2020 oleh penulis. Penerima Lisensi MDPI, Basel, Swiss. Artikel ini adalah artikel akses terbuka yang
didistribusikan di bawah syarat dan ketentuan Creative Commons Attribution

(CC BY) lisensi (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).