LAPORAN TUGAS

Isolation and structural identification of the main anthocyanin monomer in Vitis

amurensis Rupr
Yang He, Liankui Wen, Hansong Yu, Yong Cao, Hailong Nan, Mengxing Gou, Chunyang Xie & Hai Xue
(2018) Isolation and structural identification of the main anthocyanin monomer in Vitis amurensis
Rupr, Natural Product Research, 32:7, 867-870, DOI: 10.1080/14786419.2017.1361956

1. Asal:
Antosianin merupakan senyawa flavonoid larut dalam air yang mengandung delphinidin
(Dp), cyanidin (Cy), petunidin (Pt), pelargonidin (Pg), peonidin (Pn), malvidin (Mv) dan
turunannya. Vitis amurensis Rupr adalah pohon anggur kayu gugur dari Vitis dari Vitaceae,
dengan warna kulit terdalam dan antosianin alami terkaya dalam spesies anggur. Buah V.
amurensis Rupr terutama digunakan untuk pembuatan anggur, sedangkan kulitnya dibuang.
'Beibinghong' V. amurensis Rupr banyak tumbuh di wilayah timur laut Cina, dan memiliki
pericarp merah dan tingkat antosianin yang tinggi, yang menjadikannya sumber yang sangat
baik untuk ekstraksi antosianin alami.
2. Isolasi:
Dalam penelitian ini, antosianin dari 'Beibinghong' diekstraksi dengan metode pulsed electric
field (medan listrik berdenyut), dan monomer diisolasi dengan HPLC fase cair semi-
preparatif. V. amurensis Rupr dicopot dari tangkainya dan digerus dengan
comminuter, dilanjutkan dengan penggilingan dalam colloid mill dengan kecepatan 3000 rpm
selama 15 menit. Berdasarkan cairan (36,0% HCl-air sulingan etanol, v/v/v = 1:65:34)-rasio
padat 8,5:1 (b/b), LDT-200/10-20.1. perangkat ekstraksi medan listrik berdenyut tegangan
tinggi (Huadi Biotechnology Development Co., Ltd., Changchun, China) digunakan untuk
mengekstraksi antosianin pada kekuatan medan 15 KV/cm untuk 4 nomor pulsa. Setelah
disentrifugasi pada 4500 r/min selama 10 menit, supernatan dipekatkan di bawah vakum pada
40-50 C. Antosianin dimurnikan dengan resin adsorpsi makropori D101, dengan eluen HCl-
etanol-air (0,01:75:25, v/v/v).
3. Elusidasi Struktur:
Spektroskopi UV-vis, FTIR, MS dan NMR digunakan untuk mengidentifikasi struktur
antosianin utama.

 UV–Vis spectroscopy

Turunan antosianin memiliki karakteristik puncak penyerapan dalam larutan HCl-metanol

0,1% (Amax = 535 nm) (Fossen et al. 2004). Dan setelah penambahan AlCl3 , puncak
serapan maksimum daerah tampak tidak bergeser pada arah gelombang yang panjang, hal ini
menunjukkan bahwa cincin B antosianin ini tidak memiliki gugus hidroksil ortofenolik
(Fuleki dan Francis 1967). Senyawa monomer dapat termasuk dalam golongan peonidin atau
malvidin. Rasio absorbansi antosianin A440/Amax adalah 14%. Menurut kesimpulan F. J.
Francis, monomer tersebut diduga sebagai 3,5-disubstitusi antosianin.
  FTIR spectroscopy

Menurut posisi dan bentuk puncak senyawa dan laporan sebelumnya (He et al. 2016),
senyawa tersebut mengandung cincin benzena, dan puncak serapan heterosiklik yang
mengandung hidroksil, metil dan oksigen, yang semuanya merupakan puncak serapan
karakteristik antosianin. Oleh karena itu, monomer tersebut dipastikan adalah antosianin.

 MS/MS spectrum

Puncak ion molekuler dari monomer adalah 655,2, dan puncak ion fragmen adalah 493,1 dan
331,1 (493,1 dan 331,1 adalah ion karakteristik malvidin-3-O-glukosida). Jadi monomer ini
bisa menjadi turunan malvidin-3-O-glukosida. Karena perbedaan antara ion molekul dan
puncak ion fragmen dari senyawa monomer adalah 162, ligan kemungkinan besar adalah
glukosida atau caffeoyl. MS/MS menunjukkan bahwa monomer dapat berupa malvidin-3,5-
O-diglucoside (Fraige et al. 2014) atau malvidin-3-O-(6-O-caffeoyl)-glucoside.

 NMR spectrometry

Data spektral 1H dan 13C NMR (ppm) dianalisis berdasarkan laporan sebelumnya (Cui et al.
2013; Hilbert et al. 2015), dan pergeseran kimia tercantum dalam Tabel S1. Kami
menggunakan teknik fisik pelengkap, beberapa sangat kuat seperti MS/MS dan NMR, untuk
tujuan identifikasi. Berdasarkan hasil UV-vis, FTIR, MS/MS dan NMR, monomer
diidentifikasi sebagai malvidin-3,5-O-diglucoside (Gambar S7).
4. Bioaktivitas:
 Antioxidant activity

Terdapat korelasi positif antara kandungan antosianin dengan aktivitas antioksidan (Chiou et
al. 2014; Guldiken et al. 2016). Malvidin-3,5-O-diglucoside dari V. amurensis Rupr memiliki
tingkat scavenging yang lebih tinggi untuk DPPH dan ABTS dibandingkan asam askorbat
pada konsentrasi rendah. Malvidin-3,5-O-diglucoside yang diekstrak dari V. amurensis Rupr
memiliki aktivitas antioksidan yang baik, sehingga lebih kondusif untuk pengembangan
produk antioksidan antosianin.