UNIT V PENGARUH PH TERHADAP AKTIVITAS ENZIM

NURUL KHOLISAH/200107502005

Pendidikan kimia A/Kelompok 6

Jurusan kimia, FMIPA, Universitas Negeri Makassar

Abstrak

The pH effect on chitinase enzyme activity of actinomycetes isolate by Somogyi-Nelson method has been
done. Chitinase enzymes can be produced by chitinolytic microorganisms, actinomycetes.This
actinomycetes is taken from Mangrove from Coastal Ringgung of Teluk Lampumg Waters, and has been
isolated in previous research. The actinomycetes isolates used were ANL-12, ANL-9, ANLd-2b-3, and ANL-4,
with chitinolytic activity of 1.9 cm, 2.0 cm, 2.3 cm, and 5.0 cm. The ANL-4 isolate, which has the largest
chitinolytic activity, was selected for the next process, the solid state fermentation process (SSF) by the
Somogy i-Nelson method. For this SSF process is done in one place. Chitinase enzyme activity was measured
using microplate reader by the somogy i-Nelson method. enzyme activity is calculated by measuring the
amount of glucose released in μg / ml rough enzyme / hour (U / mL) by substrate reaction under certain
conditions. From the research data showed that the purification enzyme had optimum activity at pH 7.0
with unit activity of 11,166 U / mL, while on chitin substrate without washing with NaOH yield optimum
activity at pH 6 with unit activity equal to 10,929 U / ml.

Kata Kunci : actinomycetes, kitin, kitinase, solid state fermentation (SSF)

1. PENDAHULUAN menyebabkanberhentinya aktivitas enzim akibat

A. Latar Belakang
Sel yang hidup merupakan pabrik kimiawi mini,
tempat terjadinya ribuanreaksi dalam ruang
berukuran mikroskopik. Gula dapat diubah
menjadi asamamino yang kemudian bertaut
satu sama lain menjadi protein
ketikadibutuhkan, dan protein diurai menjadi
asam-asam amino yang dapat diubahmenjadi
gula ketika makanan dicerna.
Enzim merupakan makromolekul yang bekerja
sebagai katalis yaitu agenkimiawi yang
mempercepat reaksi tanpa ikut terkonsumsi oleh
reaksi. Jikatidak ada regulasi oleh enzim,
lalu lintas kimiawi melalui jalur-
jalurmetabolisme akan macet total karena
banyak reaksi kimia akan berlangsungterlalu
lama. Banyak faktor-faktor lingkungan yang dapat
mempengaruhi carakerja enzim misalnya pH.
proses denaturasi pada struktur tigadimensi
enzim. Sebagian besar enzim dapat bekerja
paling efektif padakisaran pH lingkungan yang
agak sempit. Diluar pH optimum
tersebut,kenaikan atau penurunan pH
menyebabkan penurunan aktivitas enzim
dengancepat.
Salah satu jenis enzim yang banyak dihasilkan
oleh mikroorganismeadalah enzim amilase. Enzim
amilase bisa didapatkan pada kecambah biji-
bijian karena enzim amilasediperlukan biji pada
proses metabolisme senyawapatiyang berfungsi
untukmengkatalisis pemecahan atau hidolisis
senyawapati menjadi gula sederhana yanglarut
dalam air yang diperlukan untukperkecambahan
biji. Munculnya tunas padakecambah biji-bijian
dapatmengaktifkan enzim amilase, enzim
tersebut menyediakannutrisi yang palingbaik
untuk membantu pertumbuhan tunas.

Banyak enzim yang sensitif terhadap perubahan Untuk mengetahui lebih jelas mengenai pengaruh
pH dan setiap enzimmemiliki pH optimum untuk pH terhadap aktivitasenzim, maka kami
aktivitasnya. Perubahan pH dapat melakukan praktikum yang berjudul pengaruh pH
terhadapaktivitas enzim untuk mengetahui
bagaimana pengaruh yang dimaksud
B. Tujuan
Praktikum ini bertujuan agar mahasiswa dapat
membuktikan pengaruh pHterhadap aktivitas
enzim amilase.
C. Manfaat
Setelah melaksanakan praktikum ini,
mahasiswa telah mampumembuktikan
pengaruh pH terhadap aktivitas enzim amilase
serta telahmengetahui bagaimana pengaruh
tersebut
2. LANDASAN TEORI
Bioteknologi enzim yang bersumber dari
mikroorganisme secara umum banyak diminati
oleh industri (Ginting 2009; Alariya et al. 2013).
Salah satunya adalah enzim α–amilase
(EC.3.2.1.1) disebut juga sebagai 1,4–α-D-glukan
glukanohidrolase atau glukogenase. Enzim α–
amilase dapat diperoleh dari berbagai sumber
seperti tanaman, binatang dan mikroorganisme.
Saat ini sejumlah enzim amilase telah diproduksi
secara komersial.(Hidayati,2016).
Fungsi suatu enzim sebagai katalis untuk proses
biokimia yang terjadi dalam sel maupun di luar
sel. Suatu Enzim dapat mempercepat reaksi 10⁸
sampai 10¹¹ kali lebih cepat daripada apabila
reaksi tersebut dilakukan tanpa katalis.jadi Enzim
dapat berfungsi sebagai katalis yang sangat
efisien, Disamping itu mempunyai derajat
kekerasan yang tinggi.seperti juga katalis lainnya
maka Enzim dapat menurunkan energi aktivasi
suatu reaksi kimia.(Supriyanti,2015)
Enzim selulase adalah enzim yang mampu
mendegradasi selulosa dengan produk utamanya
yakni glukosa, selobiosa dan selooligosakarida.
Selulase memiliki sistem enzim yang terdiri dari
endo-1,4-β-glukanase, ekso-1,4-β-glukanase dan
β-D-glukosidase. Ketiga enzim ini bekerja
secarasinergis mendegradasi selulosa dan
melepaskan gula pereduksi sebagai produk
akhirnya.(Kusumaningrum,2019).
The α-glucosidase is the enzyme involved in the
degradation process of cellulose. This enzyme
was expected could be produced from the
fermentation of agro-industry waste product
using A. foetidus (Naka.) mold. This study was
aimed to determine the effect of pH and
additionof cations on the activity of α-glucosidase
enzyme from A. foetidus. The results show that
the highest activity of -glukosidase produced
from A. foetidus which was grown on the medium
contained 3% wheat pollard in room temperature
reached at days 6 of incubation period. The
activity was as much as 3.56 U/mL. The optimum
activity β-glucosidase was reached at pH 5.0 and
temperature 60º C. The stable condition of the β-
glucosidase is observed in the pH ranged from 4.2
to 5.0. Addition of Mg2+, Ba2+, and Mn2+ c
cations at concentration of 1 mM and 5 mM
proved increasing the activity of the enzyme
meanwhile addition of 1 mM Fe3+ decreased the
activity of the enzyme. On the contrary, the
addition of 5 mM increases the enzyme activity
up to 39%.(Sofihidayati,2016)
Characterization of the enzyme was determined
by testing the enzyme activity at various
temperatures by using a neutral pH. Various pH
conducted at an optimum temperature from the
previous treatment and the variety of substrate
concentration YPSs conducted under optimum
temperature and pH condition from the previous
treatments. Amylase enzyme activity data were
analyzed descriptively to determine the value of
the highest amylase enzyme activity in each
treatment. The results of this study showed that
Bacillus megaterium are able to produce the
amylase enzyme.(Istia'nah,2020)
Enzim dapat ditemukan baik pada hewan maupun
tumbuhan. salah satu enzim yang terdapat pada
tumbuhan adalah nama lain dari emigrasi adalah
diastase.enzim tersebut dapat menghidrolisis
amilum menjadi gula. amilase dihasilkan oleh
daun atau biji yang sedang berkecambah.
aktivitas amilase dipengaruhi oleh garam-garam
anorganik,PH, suhu dan cahaya.(Penuntun
praktikum,2021).
Aktivitas enzim disebut juga sebagai kinetik
enzim. Kinetik enzim adalah kemampuan anzim
dalam membantu reaksi kimia. Kemampuan
enzim ini dapat dihitung dengan mengukur
jumlah produk yang terbentuk, atau dengan
menghitung kurangnya substrat dalam satuan
waktu tertentu. Selain itu, dapat juga dihitung
kurangnya substrat dalam satuan waktu tertentu.
Selain itu dapat juga dihitung dengan
peningkatan atau penurunan koenzim.
Menghitung jumlah substrat, produk, atau
koenzim di laboratorium tidak mudah karena
jumlahnya yang sangat sedikit. Oleh karena itu,
praktek menghitung aktivitas enzim adalah
dengan mengukur perubahan absorbansi dalam
satuan waktu, pH, dan suhu tertentu sewaktu
reaksi berjalan. Aktivitas enzim dipengaruhi oleh
beberapa faktor, yaitu : suhu, pH, kadar substrat,
kadar enzim, inhibitor, dan toksik enzim.
(Rahmi,2020)
3. ALAT DAN BAHAN
1.Alat
a.Tabung reaksi 10 buah
b.Pipet tetes
c.Rak tabung reaksi
d.Lampu spiritus
e.Penjepit tabung
f.Gelas ukur 10 ml
g.Kertas label
2.Bahan
a.Ekstrak kacang hijau
b.Larutan amilum
c.Larutan Fehling A dan Fehling B
d.Larutan HCL 10%
5. HASIL DAN PEMBAHASAN
e.Larutan NaOH 1%
f.Korek Api
4. PROSEDUR KERJA
1.Menyiapkan alat dan bahan yang diperlukan.
2.Mengisi Tabung A1, A2, A3 dengan 1 ml
amilum dan selanjutnya menambahkan 1 ml
ekstrak kacang hijau. Kemudian mengecek pHnya
sebagai pH awal untuk semua larutan pada
tabung. Kemudian mamanaskannya setelah
tabung A1 didiamkan 5 menit, tabung A2
selama10 menit dan tabung A3 selama 15 menit.
Kemudian mengamati warnanya.
3.Mengisi tabung B1, B2, dan B3 dengan amilum
dan ekstrak, kemudian menambahkan 3 tetes
HCl. Kemudian mengecek pHnya. Menambahkan
Fehling A dan B kemudian mengamati warnanya
sebagai warna awal.Kemudian memanaskan
tabung B1 setelah didiamkan selama 5
menit,tabung B2 selama 10 menit dan tabung B3
selama 15 menit. Kemudian mengamati
warnanya.
4.Mengisi tabung C1, C2, dan C3 dengan amilum
dan ekstrak, kemudianmenambahkan 2 tetes
NaOH. Kemudian mengecek pHnya.
Menambahkan Fehling A dan B kemudian
mengamati warnanya sebagai warna
awal.Kemudian memanaskannya dengan
masing-masing tabung C1 setelahdidiamkan
selama 5 menit, tabung C2 selama 10 menit dan
tabung C3selama 15 menit. Kemudian mengamati
warnanya.
5.Mengisi tabung D dengan amilum dan ekstrak.
Setelah itu menambahkanfehling A dan B,
kemudian memanaskannya setelah didiamkan
selama 15menit kemudian mengamati perubahan
warna yang terjadi.
6.Membandingkan perubahan warna yang terjadi
dari tabung A, B, C, dan, D.kemudian membuat
tabel hasil pengamatan dan menarik kesimpulan.
A. Hasil pengamatan
Tabung No.Tabung PH
A 1 6 Biru
2 6
3 6
B 1 4 Biru
2 4
3 4
C 1 14
2 14
3 14
D - 14
E - 14
B.Pembahasan
1. Tabung A
Tabung A1, A2, A3 masing-masing diberikan 1 ml
amilum dan ekstrakkecambah kacang hijau,
kemudian didapatkan pHnya sebesar 6. Ketiga
tabung tersebut kemudian dipanaskan setelah
didiamkan selama masing-masing 5 menit, 10
menit, dan 15 menit. Hasil pemanasan
terjadi perubahan warna. Dari yang awalnya biru
berubah dan terdapat endapan merah bata. Hal
ini terjadi karena adanya Fehling A yang
merupakan larutan CuSO4 dan Fehling B yang
merupakan campuran larutan NaOH dan kalium-
natrium tartrat yang bereaksi dengan aldehida
atau gula pereduksi (seperti glukosa) sehingga
menghasilkan endapan Cu2O yang berwarna
merah bata.
2.Tabung B
Tabung B1, B2, B3 diberikan perlakuan yang
hampir sama dengantabung A. Namun, tabung B
ditetesi dengan larutan HCl 10% sehingga ekstrak
menjadi asam dengan pH 2. Ketiga tabung
Warna awal Warna akhir
Terdapat endapan
merah bata
Terdapat endapan
merah bata
Biru Terdapat endapan
bata cokelat merah
Biru Biru
Biru Biru
tersebut kemudian ditetesi larutan fehling A dan
fehling B kemudian didiamkan selamamasing-
masing 5 menit, 10 menit, dan 15 menit.hasilnya
yaitu terjadi perubhan warna yang awalnya
warna biru berubah menjadi endapan merah
bata. Hal ini menunjukkan aktivitas pada pH
optimum, larutan akan berwarna merah bata
setelah dipanaskan.
3.Tabung C
Tabung C1, C2 C3 diberi perlakuan yang hampir
sama dengan tabungA. Namun, tabung C
diberikan 1 tetes larutan NaOH 1 % dengan
harapanlarutan menjadi basa. Namun, pada
kenyataannya larutan menjadi netral dengan pH
7. Ketiga tabung tersebut kemudian ditetesi
larutan fehling A dan fehling B kemudian
didiamkan selama masing-masing 5 menit,
10menit, dan 15 menit. Warna ekstrak pada
setiap tabung berubah menjadi Biru. Masing-
masing tabung kemudian dipanaskan selama 2
menit danmenunjukkan perubahan warna yaitu
ekstrak pada setiap tabung menjadi endapan bata
cokelat merah. Hal ini sesuai dengan teori bahwa
jika terdapat glukosa dalam sampel maka akan
terbentuk endapan berwarna cokelat merah bata
yang merupakan endapan tembaga (I)oksida
(Cu2O) yang dihasilkan dari reduksi tembaga(II)
oksida (CuO)oleh glukosa yang merupakan
gulapereduksi.Bertambahnya endapan coklat
merah bata pada sampel menunjukkan bahwa
glukosa yang terbentuk semakin banyak.
.4.Tabung D
Tabung D diberikan perlakuan yang hampir sama
dengan tabung A.Namun, tabung D ditetesi
larutan fehling A dan fehling B kemudian
didiamkan selama 15 menit dan warna larutan
menjadi biru dan setelah di panaskan tidak terjadi
perubahan warna dan tetap menjadi warna biru
5. Tabung E
Tabung E diberikan perlakuan yang hampir sama
dengan tabung D.Namun, tabung E ditetesi
larutan fehling A dan fehling B juga kemudian
didiamkan selama 15 menit dan warna larutan
menjadi biru dan setelah di panaskan tidak terjadi
perubahan warna dan tetap menjadi warna biru
pula.
A. Kesimpulan
Berdasarkan praktikum yang telah dilaksanakan,
maka dapat disimpulkan bahwa konsentrasi pH
dapat mempengaruhi aktivitas enzim. Enzim
bekerja optimal pada kondisi yang tidak terlalu
asam dan tidak terlalu basa. Enzim menjadi
denaturasi bila diperlakukan pada kondisi asam
atau basa yang kuat. Sebagian besar enzim dapat
bekerja paling efektif pada kisaran pH lingkungan
yang agak sempit. Di luar pH optimum tersebut,
kenaikan atau penurunan pH tersebut
menyebabkan penurunan aktivitas enzim.
B. Saran
Adapun saran untuk praktikum selanjutnya
adalah sebagai berikut.
1. Sebaiknya praktikan selanjutnya lebih berhati-
hati menggunakan larutan HCl dan NaOH karena
dapat merusak jaringan kulit.
2. Diharapkan kepada asisten agar dapat
meningkatkan bimbingannya sehingga praktikan
dapat melakukan pengamatan dengan baik dan
benar.

3. Diharapkan kepada laboran agar menyediakan

6. KESIMPULAN DAN SARAN
alat praktikum yang lebih

DAFTAR PUSTAKA

Hidayati,2016.Jurnal Ilmu-ilmu hayati.vol 15,no 2

Supriyanti,2015. Dasar-dasar Biokimia.Jakarta,penerbit Universitas Indonesia

Kusumaningrum,2019.OPTIMASI SUHU DAN pH TERHADAP AKTIVITAS ENZIM ENDOGLUKANASE

MENGGUNAKAN RESPONSE SURFACE METHODOLOGY (RSM).vol ,no 2

Sofihidayati,2016.THE EFFECT OF PH AND CATION ON THE ACTIVITY OF B-GLUCOSIDASE ENZYME

PRODUCED FROM A. foetidus (Naka.)
Istia'nah,2020.Characterization of Amylase Enzyme from Bacillus megaterium Bacteria on Various
Temperature, pll and Substrate Concentration.vol 2,no 1.

Tim Dosen,2021.Buku penuntun praktikum.jurusan Biologi FMIPA,Universitas Negeri Makassar.

Rahmi,2020. Modul praktikum biokimia,program studi farmasi,Fakultas Farmasi dan sains.

Pertanyaan:

1. Apa guna larutan fehling A dan B dan JKJ ?

2. Mengapa kecambah perlu dicentrifuge terlebih dahulu?

3. Apa fungsi HCl dan NaOH pada percobaan diatas?

Jawaban:

1. Fungsi larutan fehling A dan fehling B yaitu sebagai larutan atau indikator untuk membuktikan adanya
kandungan glukosa di dalam larutan percobaan.Fungsi JKJ yaitu sebagai larutan atau indikator untuk
membuktikan adanya kandungan protein di dalam larutan percobaan.
2. Ekstrak enzim dari biji perlu dicentrifuge agar diperoleh cairan supernatan yang lebih murni dari
sebelumnya karena centrifuge dalam pemutarannya berfungsi untuk mengendapkan serat-serat atau
kotoran-kotoran dari cairan yang merupakan cairan supernatan.

3. HCL berfungsi untuk membuat sifat keasaman pada ekstrak, dan NaOH untukmembuat sifat kebasaan
pada ekstrak tersebut untuk membukuktikan tingkatpH yang sesuai dengan kerja enzim