J. MANUSIA DAN LINGKUNGAN, Vol. 21, No.1, Maret.

2014: 41-49

EFEK PERLAKUAN LOGAM BERAT KADMIUM TERHADAP APOPTOSIS MELALUI

AKTIVASI CASPASE-3 BULU BABI Deadema setosum: APLIKASI BIOMONITORING
PENCEMARAN DI PERAIRAN LAUT
(Effect of Cadmium Heavy Metal Treatment Toward Apoptosis Through Caspase-3 Activation of
Sea Urchin Deadema setosum: Application of Pollution Biomonitoring in Sea Waters)

Dominggus Rumahlatu1,*, Aloysius Duran Corebima2, Mohamad Amin2 dan Fatchur Rohman2
1
Program Studi Pendidikan Biologi, FKIP Universitas Pattimura, Jl. Dr. Tamaela, Ambon.
2
Jurusan Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Negeri Malang, Malang, Jawa Timur.
*
Penulis korespondensi. No Telp: 0911-312343; Email: dominggus_amq@yahoo.co.id

Diterima: 9 Oktober 2013 Disetujui: 24 Januari 2014

Abstrak

Kadmium yang terakumulasi pada hewan dapat menyebabkan karsinogenik, mutagenik, dan teratogenik. Pada
penelitian ini, dilakukan secara eksperimen nonfaktorial dalam RAL 6 level dengan 7 ulangan selama 4 minggu, untuk
mengkaji efek perlakuan logam berat Cd terhadap apoptosis melalui aktivasi protein caspase-3 bulu babi Deadema
setosum. Penelitian dilakukan di laboratorium Balai LIPI Ambon dalam 6 bak aquarium berukuran 100 x 60 x 70 cm3.Tiap
bak perlakuan diisi 200 L air laut yang diganti satu kali setiap minggu. Konsentrasi perlakuan adalah 0, 1, 3, 6, 9, dan 12
µg/L Cd terlarut. Pada tiap bak diterapkan satu level perlakuan konsentrasi Cd, dan tiap bak itu dihuni oleh 7 individu D.
setosum sebagai ulangan. Usia hewan uji sekitar 8 bulan berbobot 90 g dengan lingkar tubuh 15 cm. Hewan uji diberi
pakan lamun. Pengukuran konsentrasi protein caspase-3 dilakukan pada organ hepar dengan metode Caspase Colorimetric
Assay Kit, sedangkan pemeriksaan apoptosis dilakukan dengan teknik pengecatan Hematoxilen-Eosin (HE). Data penelitian
terkait konsentrasi protein caspase-3 dianalisis dengan One Way Anova dan uji lanjut dihitung dengan Duncan 0,05. Hasil
penelitian memperlihatkan bahwa perlakuan Cd sangat signifikan meningkatkan kadar protein caspase-3; semakin tinggi
kadar Cd, kadar protein caspase-3 juga makin tinggi. Konsentrasi protein caspase-3 pada konsentrasi perlakuan 12 µg/L Cd
adalah yang paling tinggi dibanding kontrol. Gambaran histologi hepar D. setosum yang mengalami apoptosis atas dasar
pengecatan HE sangat sesuai dengan tiap konsentrasi protein caspase-3 yang terekam. Hasil ini menunjukkan bahwa
protein caspase-3 memiliki potensi sebagai satu alternatif biomonitoring pencemaran Cd pada tingkat seluler D. setosum di
perairan laut.

Kata kunci: kadmium, Deadema setosum, apoptosis, caspase-3, biomonitoring pencemaran.

Abstract

Cadmium which accumulated in animals could cause carcinogenic, mutagenic and teratogenic. In this research, non
factorial experiments conducted in Complete Random Design (CRD) 6 level with 7 replication for 4 weeks, in order to
examine effect of Cd heavy metal treatment toward apoptosis through caspase-3 protein activation in sea urchin Deadema
setosum. Research conducted in LIPI Ambon laboratory using 6 aquarium tank size 100 x 60 x 70 cm3. Each tank was
filled with 200 L of sea waters that being replace once a week. Treatment concentrations in tanks are containing 0, 1, 3, 6,
9, and 12 µg/L dissolved Cd. In each tank there is one level Cd concentration treatment level, and each tank was filled with
seven D. setosum individual as replication. The age of animals is approximately 8 month with the weight 90 g and body
circumference 15 cm. These animals were fed with seagrass. Measurement of Caspase-3 protein concentration was
conducted in heparin organ using the method Caspase Colorimetric Assay kit, while apoptosis examination was conducted
by painting technique using Hematoxilen-Eosin (HE). Research data concerning caspase-3 protein concentration was
analyzed by One Way Anova and further test was calculated by Duncan 0.05. Result of this research showed that Cd
treatment is significantly increasing caspase-3 protein content; higher Cd content, caspase-3 protein would essentially
higher. Caspase-3 protein concentration in treatment concentration of 12 µg/L is the highest compared to control
treatment. Histological description of D. setosum heparin organ that experiencing apoptosis based on HE painting is in
accord with each recorded caspase-3 protein concentration. This result showed that caspase-3 protein has the potential to
become one alternative in Cd pollution biomonitoring at celluler level of D. setosum in the sea.

Keywords: cadmium, Deadema setosum, apoptosis, caspase-3, pollution biomonitoring.

42 J. MANUSIA DAN LINGKUNGAN
PENDAHULUAN
Kadmium dikenal sebagai logam berat non
esensial bagi tubuh, sehingga dengan kadar rendah
dapat menyebabkan karsinogenik, teratogenik, dan
mutagenik pada berbagai jenis hewan (Pal, 2006).
Bulu babi dikenal sebagai biota perairan yang sangat
sensitif terhadap polutan logam (Russo dkk., 2003;
Soualili dkk., 2008), dan imbasnya banyak penelitian
tentang akumulasi logam berat kadmium di
lingkungan perairan dan berbagai organ, dan tahapan
perkembangan embrio dan dewasa pada berbagai
biota perairan telah dilakukan selama beberapa
dekade. Deadema setosum dan Paracentrotus lividus
telah digunakan sebagai bioindikator untuk
mengevaluasi kontaminasi logam berat pada terumbu
karang di Indo-Pasific dan Mediterania (Warnau
dkk., 1995; Flammang dkk., 1997). Temara dkk.
(1998) memberikan gambaran terkait dengan
penentuan status tingkat pencemaran dengan
indikator berat kering Asterias rubens. Bielmyer dkk.
(2005) dalam penelitiannya menggunakan dua tahap
perkembangan D. antillarum tahap embrio dan
dewasa sebagai bioindikator logam berat dan
menunjukkan sensitivitas yang tinggi terhadap logam
berat Cu pada level kontaminasi yang rendah.
Rumahlatu (2011) juga melaporkan bahwa D.
setosum merupakan spesies bioindikator pencemaran
lingkungan perairan dan dapat digunakan sebagai
spesies biomonitoring logam berat kadmium di
perairan.
Kamrin (2004) dan Zhou dkk. (2008)
menjelaskan bahwa biomonitoring merupakan teknik
evaluasi lingkungan untuk mengukur jumlah bahan
kimia berdasarkan analisis pada jaringan dan molekul
organisme yang terpapar logam berat. Menurut
Angerer dkk. (2006), biomonitoring merupakan
pengukuran terhadap biomarker pada unit-unit
spesifik seperti darah, urin atau jaringan suatu
individu. Berdasarkan pendapat tersebut maka
monitoring toksisitas merupakan suatu pengukuran
kualitas lingkungan berdasarkan respons molekul-
molekul yang dapat digunakan sebagai biomarker.
Ayeni dkk. (2010) menjelaskan bahwa organisme
yang digunakan sebagai pemonitor logam berat, harus
dapat mengakumulasi logam berat dalam jumlah
yang tinggi, memiliki kemampuan hidup yang
panjang sehingga memungkinkan untuk
dibandingkan perbedaan antar umur, dan mudah
dipelihara pada kondisi laboratorium. Berdasarkan
hal tersebut, maka organisme yang memiliki
kemungkinan digunakan sebagai pemonitor
Vol. 21, No.1
pencemaran logam berat pada lingkungan perairan
adalah bulu babi dari filum Echinodermata.
D. setosum merupakan salah satu jenis bulu babi
dari kelas Deademetidae yang memiliki sensitivitas
yang tinggi terhadap logam berat kadmium, dan
dikenal sebagai spesies indikator dari lingkungan laut
yang tercemar (Flammang dkk., 1997; Danis dkk.,
2005; Rumahlatu, 2011). Dilaporkan oleh Russo dkk.
(2003) bahwa pemaparan yang kontinyu terhadap
embrio Paracentrotus lividus dengan konsentrasi Cd
yang tinggi, menyebabkan sejumlah abnormalitas,
seperti penundaan perkembangan, penurunan
perpanjanan perut, dan cacat tulang. Menurut Ayeni
dkk. (2010), biomarker berhubungan dengan respons
di dalam tubuh organisme terhadap tingkatan
pencemaran yang berbeda. Selain itu, biomarker
dalam kerang seperti glutathione (GSH) dan
metallothionein (MT) Paracentrotus lividus juga
telah digunakan untuk mengevaluasi kontaminasi
logam berat Cd di Perairan (Rainbow dkk., 2000;
Russo dkk., 2003). Roccheri dkk. (2004) melaporkan
bahwa paparan logam berat Cd dengan konsentrasi
tinggi menyebabkan perlambatan perkembangan
embrio bulu babi Paracentrotus lividus dan
meningkatnya respons biomolekuler berupa ekspresi
protein HSP60 dan HSP70. Menariknya, Faix dkk.
(2005) mengungkapkan bahwa Cd juga memicu
perubahan histopatologi dan menyebabkan
peroksidasi lipid pada organ liver dan ginjal roden.
Hasil penelitian Ros dkk. (1990), Quartacci dkk.
(2001) yang dirujuk dalam Hall (2002) dan Smiri
(2010) menunjukkan bahwa perlakuan dengan logam
berat jenis Cu dan Cd berpengaruh terhadap
komposisi lipid pada membran plasma, sedangkan
Fodor dkk. (1995) dalam Hall (2002) juga
menjelaskan bahwa logam berat jenis Cd akan
mereduksi aktivitas ATPase pada membran plasma
pada akar tanaman gandum dan bunga matahari
(sunflower). Tosepu (2012) dalam penelitiannya
mengungkapkan bahwa logam berat Cd pada
lingkungan perairan memberikan dampak negatif
bagi lingkungan perairan itu sendiri, namun kadar
logam berat di perairan akan berkurang dengan
menggunakan Cyperus papyrus sebagai
bioakumulator lingkungan karena akar Cyperus
papyrus memiliki struktur kimia yang baik dalam
menetralisir polutan perairan. Pada sisi lain, Agnello
& Roccheri (2010) mengungkapkan bahwa apoptosis
terjadi di bawah pengaruh sinyal internal atau
eksternal yang berasal dari lingkungan mikro dan
juga dipicu untuk merespon stimuli lingkungan untuk
menghilangkan sel yang rusak akibat stress kimia,
Maret 2014 RUMAHLATU, D.: EFEK PERILAKU LOGAM BERAT
fisik, dan mekanis pada berbagai organisme. Selain
itu, Dwipoyono (2007), Zhang dkk. (2002) dan
Nagata (1997) menjelaskan bahwa caspase-3
berperan dalam proses regulasi dan eksekusi proses
apoptosis. Dijelaskan oleh Agnello dkk. (2007)
bahwa akumulasi protein HSP berperan sebagai
signal transduksi terhadap respons stres dan
mengaktivasi terjadinya apoptosis. Itulah sebabnya
penelitian ini dilakukan untuk mengkaji efek
perlakuan logam berat Cd terhadap apoptosis melalui
aktivasi protein caspase-3 bulu babi D. setosum
sebagai satu alternatif biomonitoring pencemaran
perairan laut oleh logam berat Cd pada tingkat
seluler.
METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen
nonfaktorial dalam Rancangan Acak Lengkap (RAL)
6 level dengan 7 ulangan selama 4 minggu. Sampel
dalam penelitian ini adalah 42 individu D. setosum
hasil penangkaran pada Balai LIPI Ambon. Urutan
pelaksanaan penelitian dijelaskan sebagai berikut.
Penyediaan Hewan Uji
Penyediaan hewan uji dimulai dengan tahapan
budidaya pada Balai LIPI Ambon, Indonesia.
Tahapan budidaya D. setosum menggunakan sistem
air mengalir, yakni tahap pemijahan, tahap larva,
tahap pendedaran dan tahap pembesaran. Tahapan
pemijahan dilakukan pada kolam pemijahan dimulai
dari pemilihan induk, peneluran, pembuahan hingga
penetasan telur. Tahapan larva ini dilakukan di wadah
terkontrol (bak semen atau fiberglass). Fase sejak
telur menetas hingga mencapai umur 12-15 hari. Pada
tahap pendedaran, pemeliharaan benih D. setosum
dilakukan di bak semen atau fiberglass selama 1
bulan. Tahap pembesaran merupakan fase
membesarkan benih yang dilakukan selama 3-8 bulan
di bak semen atau fiberglass sampai individu D.
setosum mencapai lingkar tubuh 10-25 cm dan berat
tubuh 40-160 g.
Penentuan Hewan Uji
Penentuan individu D. setosum untuk
digunakan dalam perlakuan, yakni sampel individu
D. setosum yang dipelihara selama 8 bulan dengan
berat tubuh 90 g dan lingkar tubuh 15 cm sebanyak
42 individu yang dibagi menjadi 6 kelompok untuk 6
tingkatan konsentrasi logam berat Cd, dan pada
masing-masing kelompok digunakan 7 individu
sehingga total unit analisis adalah 42. Sampel
43
individu selanjutnya dimasukan ke dalam bak
aquarium berukuran 100 x 60 x 70 cm, dimana setiap
bak ditempati 7 individu D. setosum dan dilakukan
fase adaptasi selama 1 minggu pada kondisi
laboratorium.
Perlakuan
Tahapan perlakuan paparan kadmium pada
individu D. setosum mengikuti langkah-langkah
sebagai berikut. Sebanyak 42 individu D. setosum
yang telah melalui proses kapasitasi, selanjutnya
dibagi menjadi 6 kelompok sesuai dengan tingkatan
konsentrasi logam berat, yaitu 0, 1, 3, 6, 9, dan 12
µg/L Cd terlarut selama 4 minggu dalam bak
aquarium yang berisikan air laut 200L dengan
sirkulasi udara bak perlakuan menggunakan
aeratorlistrik. Semua perlakuan diulang sebanyak 7
kali. Selama perlakuan, dilakukan pengukuran faktor
fisika kimia pada bak perlakuan berupa suhu, pH,
salinitas, dan oksigen terlarut pada waktu pagi, siang
dan sore hari. Selama 4 minggu perlakuan, dilakukan
pergantian air aquarium 1 kali dalam 1 minggu.
Pemberian pakan berupa lamun dilakukan setiap pagi
dengan cara mengikat lamun pada bongkahan karang
dan diletakan dalam bak perlakuan serta menebar
lamun pada permukaan air bak perlakuan.
Setelah 4 minggu perlakuan, dilakukan
pembedahan terhadap 42 individu D. setosum untuk
diambil organ hati. Oragn hati yang telah dibedah,
dimasukan ke dalam pot sampel untuk pemeriksaan
apoptosis dan pengukuran konsentrasi protein
caspase-3 di Laboratorium Fisiologi dan Histologi
Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang.
Pemeriksaan Apoptosis dengan Pengecatan
Hematoxilen-Eosin (HE)
Pemeriksaan apoptosis pada hepar D. setosum,
diawali dengan pembuatan preparat spesimen hepar.
Langkah-langkah pembuatan preparat spesimen hepar
dijelaskan sebagai berikut.
Tahapan fiksasi jaringan diawali dengan
pencucian Hepar D. setosum dengan PBS 1x sampai
bersih, dan dimasukan dalam fiksatif selama 1 jam,
kemudian hepar dipotong 1 x 1 cm. Spesimen
direndam kembali dalam fiksatif dengan waktu < 24
jam. Spesimen dicuci dengan alkohol 50% secara
berulang tanpa memegang serta memencet spesimen.
Bila disimpan > 24 jam, spesimen direndam dalam
alkohol 70%, setelah itu dicuci lagi dengan alkohol
70%. Tujuan dari fiksasi adalah untuk meminimalis
atau menghentikan proses autokatalik dari jaringan.
44 J. MANUSIA DAN LINGKUNGAN
Langkah selanjutnya adalah pembuatan blok
parafin. Spesimen didehidrasi dalam alkohol 85%
selama 1-2 jam, alkohol 96% selama 1-2 jam, dan
alkohol 100% selama 2-3 jam. Spesimen dijernihkan
dengan xylol:alkkohol 100% = 1:3 selama 1 jam,
xylol:alkkohol 100% = 2:2 selama 1 jam,
xylol:alkkohol 100% = 3:1 selama 1 jam, xylol murni
I selama 1 jam, dan xylol murni II selama 1 jam.
Infiltrasi spesimen dikerjakan dalam oven dengan
xylol:parafin 1:1 (45-50 oC) selama 1 jam, parafin I
(65-70 oC) selama 1 jam, parafin II (65-70 oC) selama
1 jam. Tujuan dari proses ini untuk membersihkan
jaringan dari sisa-sisa alkohol agar mudah untuk
menempel digunakan mounting medium. Pembuatan
blok dengan kertas, spesimen dimasukan dalam kotak
kertas, diberi parafin cair, kemudian dilabeli. Parafin
didinginkan dengan air dingin. Pengeblokan dengan
parafin ini bertujuan untuk memudahkan pengirisan
jaringan dengan mikrotom dengan ketebalan 5-10
mikron.
Selanjutnya adalah langkah pemotongan blok
parafin. Blok parafin yang sudah siap selanjutnya
diiris dengan rotary microtome. Irisan jaringan hepar
setebal 4 µm, selanjutnya dilakukan mounting pada
gelas objek/slide dengan gelatin 5%.
Tahapan pewarnaan dilakukan berikutnya.
Setelah blok parafin diiris, lalu diletakkan di atas
gelas slide (object glass). Lapisan yang terjadi masih
terlapisi paraffin, maka perlu dihilangkan dulu
dengan cara merendamnya dalam larutan dehidrasi
(alkohol, xylol). Masih dalam rangka rangkaian
dehidrasi, dilakukan pewarnaan supaya jaringan yang
diamati tampak jelas. Larutan yang digunakan adalah
haemotoksilin eosin.
Sel hati yang mengalami apoptosis diamati
menggunakan mikroskop Olympus dengan
pemotretan slide blot pada lapang pandang
perbesaran 400x. Sel yang mengalami apoptosis
diamati berdasarkan ciri sel shrinkage, nukleus
mengalami kondensasi, dan pembentukan apoptotic
bodies.
Pengukuran Konsentrasi Caspase-3 dengan
Caspase Colorimetric Assay Kit
Penentuan konsentrasi caspase-3 mengikuti
Slee dkk. (1999), yaitu penghalusan jaringan hepar D.
setosum kemudian ditambahkan lysis buffer,
selanjutnya divortek dan diinkubasi 30 menit pada 4
°C. Sampel kemudian disentrifuse pada 2000 rpm dan
supernatan disimpan. Supernatan (ekstrak sitosol)
dipindahkan ke dalam tabung segar dan diletakkan di
es. Perlakuan assay pada konsentrasi protein dengan
Vol. 21, No.1
metode standar. Setiap ekstrak sitosol diencerkan
sampai konsentrasi 50-200 μg protein per 50 μL Cell
Lysis Buffer (1-4 mg/mL). Jumlah sampel diukur dan
dilakukan aliquot 2x pereaksi buffer secukupnya ke
dalam tabung kaca (diasumsikan 50 μL 2x Reaction
Buffer per sampel). Selanjutnya ditambahkan DTT ke
2x Reaction Buffer segera sebelum digunakan (10
mM konsentrasi akhir; ditambahkan 10 μL 1,0 stok
DTT per 1 mL 2x Reaction Buffer). Ke dalam sampel
ditambahkan 50 μL 2x Reaction Buffer (berisi 10
mM DTT) ke setiap sampel. Selanjutnya
ditambahkan 5 μL substrat 4 mM (200 μM
konsentrasi akhir) dan inkubasikan pada 37 oC selama
1-2 jam. Simpan sampel dalam gelap selama
inkubasi. Absorbansi sampel dibaca dalam 400 nm
atau 405 nm dengan microplate reader. Peningkatan
aktivitas caspase-3 ditentukan melalui perbandingan
langsung dengan level kontrol non-induksi.
Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis secara deskriptif
menggunakan metode kuantitatip dalam bentuk
persentase untuk menggambarkan jaringan hepar D.
setosum yang mengalami apoptosis.
Selain itu, digunakan statistik inferensial
ANOVA satu jalur (One Way Anova) untuk mengkaji
efek perlakuan logam Cd terhadap konsentrasi
protein caspase-3 dan dilakukan uji lanjut dengan
Duncan 0,05 untuk melihat perbedaan rata-rata
konsentrasi paparan logam berat terhadap konsentrasi
protein caspase-3 pada organ hepar D. setosum.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Apoptosis pada D. setosum akibat Paparan Logam
Berat Cd
Hasil pengamatan untuk memberikan gambaran
mengenai histologi hepar yang mengalami apoptosis
sebagai respons fisiologi D. setosum akibat terpapar
logam berat Cd, terlihat adanya noktah berwarna
ungu (Gambar 1). Noktah berwarna ungu yang
ditunjukan dengan tanda panah hitam menunjukkan
adanya apoptosis pada jaringan hepar D. setosum.
Jaringan hepar yang mengalami apoptosis, nukleus
selnya mengalami kondensasi dan pembentukan
apoptotic bodies. Semakin tinggi paparan konsentrasi
logam berat Cd, maka sel yang mengalami apoptosis
juga semakin tinggi. Peningkatan apoptosis jaringan
hepar D. setosum dapat terungkap, kadarnya
meningkat berturut-turut dari rendah ke tinggi, yakni
pada bak 1 < 2 < 3 < 4 < 5 < 6. Hal ini berarti bahwa
konsentrasi logam berat Cd meningkatkan apoptosis.
Maret 2014 RUMAHLATU, D.: EFEK PERILAKU LOGAM BERAT 45

Keberadaan apoptosis mengindikasikan bahwa logam berat Cd di dalam hepar D. setosum.

sel hepar D. setosum melakukan mekanisme
homoestasis untuk mempertahankan lingkungan
internal selnya dari paparan logam berat Cd, terlihat
infiltrasi sel-sel radang jaringan hepar diduga terkait
dengan adanya respons terhadap akumulasi logam
berat Cd pada sel hepar. Dijelaskan oleh Agnello dan
Roccheri (2010) bahwa apoptosis terjadi di bawah
pengaruh sinyal internal atau eksternal yang berasal
dari lingkungan mikro dan juga dipicu untuk
merespon stimuli lingkungan untuk menghilangkan
sel yang rusak akibat stress kimia, fisik dan mekanis
pada berbagai organisme. Keadaan ini menunjukkan
bahwa sel-sel hepar D. setosum memberikan respons
dengan melakukan homoestasis untuk
mempertahankan lingkungan internal selnya dari
paparan logam berat Cd. Menurut Saputra dkk.
(2012) kejadian kerusakan sel terjadi akibat adanya
penurunan ATP dalam mitokondria. Penurunan ATP
tersebut akan berakibat peningkatan ion Ca2+ dalam
mitikondria, Ca2+ akan mengaktifkan beberapa enzim
yaitu phospholipase, yaitu enzim yang dapat merusak
membran) dan protease adalah enzim yang dapat
merusak membran dan protein sitoskeletal serta
endonuclease ialah enzim yang bertanggung jawab
terhadap fragmentasi DNA dan kromatin, dimana
kerusakan membran sel merupakan tanda awal
kejadian nekrosis. Hal ini terjadi karena adanya
tekanan fisiologi akibat meningkatnya akumulasi
Dijelaskan oleh Huang dkk. (2003) bahwa hal
tersebut berkaitan dengan pelepasan berbagai jenis
senyawa biokimia, seperti beberapa jenis hormon
glukokortikoid dan sitokin. Sitokin yang dilepaskan
berperan penting dalam upaya tubuh
mempertahankan homeostasis akibat stress. Selama
terjadi akumulasi logam berat Cd pada hepar D.
setosum, dapat diduga sekresi sitokin meningkat. Hal
ini, menurut Caspani dkk. (2004) dapat meningkatkan
respons inflamasi. Disisi lain, paparan logam berat
yang tinggi menyebabkan sel tidak dapat
mempertahankan homoestasisnya, sehingga
menyebabkan beberapa jenis protein seluler
mengalami kerusakan, sehingga kejadian apoptosis
jaringan juga meningkat (Katschinski, 2004).
Dijelaskan oleh Dailanis & Kaloyianni (2004); Smiri
dkk. (2010) bahwa kadmium dapat menginduksi
kerusakan pada fungsi membran dengan merusak
komposisi lipid pada membran sel. Penelitian yang
dilakukan oleh El-Maraghy dkk. (2001); Wlostowski
dkk. (2003) dan Faix dkk. (2005) menyimpulkan
bahwa paparan logam berat jenis kadmium
menyebabkan perubahan histopatologi dan
peroksidasi lipid pada organ liver dan ginjal hewan
rodent.
Hasil penelitian ini telah menunjukkan
fenomena apoptosis akibat akumulasi logam berat
Cd. Hal ini cukup menarik mengingat hasil

A B C

D E F

Gambar 1. Hasil pemulasan jaringan hepar D. setosum dengan pengecatan Hematoxilen-Eosin (HE).
Pengamatan dengan mikroskop olympus untuk pemotretan slide blot dengan pembesaran 400x zoom. Gambar
dengan Notasi (a) kontrol; (b) konsentrasi 1,0 µg/L Cd; (c) 3,0 µg/L; (d) 6,0 µg/L; (e) 9,0 µg/L; dan (f) 12,0
µg/L. Tanda panah menunjukkan sel hepar yang mengalami apoptosis.
46 J. MANUSIA DAN LINGKUNGAN
penelitian apoptosis ini dapat dijadikan sebagai
model biomonitoring paparan logam berat Cd pada
tingkatan seluler dengan menggunakan D. setosum
sebagai spesies biomonitoring. Dijelaskan oleh
Roccheri dkk. (2005) bahwa over-expressed dalam
sel-sel yang terpapar logam berat berperan penting
untuk mencegah terjadinya kematian sel dan
memberikan kontribusi terhadap respon pertahanan
seluler akibat stres dan dapat digunakan sebagai
model biomonitoring paparan logam berat. Dengan
demikian, hasil penelitian pada kasus apoptosis
jaringan hepar D. setosum dapat digunakan sebagai
model biomonitoring seluler paparan logam berat Cd.
Pengaruh Konsentrasi Logam Berat Cd terhadap
Konsentrasi Protein Caspase-3 pada Organ Hepar
D. setosum
Hasil pengukuran konsentrasi protein caspase-3
dengan metode caspase colorimetric assay kit
(Gambar 2) menunjukkan adanya peningkatan
konsentrasi dengan semakin tingginya paparan logam
berat Cd. Terlihat bahwa konsentrasi protein caspase-
3, kadarnya meningkat berturut-turut dari rendah ke
tinggi, yakni pada bak 1 < 2 < 3 < 4 < 5 < 6. Dapat
disimpulkan bahwa semakin tinggi kadar logam berat
yang terakumulasi di dalam jaringan hepar D.
setosum sebagai suatu respons terhadap stress
oksidatif oleh adanya logam berat Cd sehingga
mengaktifkan dan meningkatkan konsentrasi
caspase-3.
Gambar 2. Konsentrasi protein caspase-3 dalam
jaringan hepar D. setosum akibat paparan konsentrasi
logam berat Cd.
Tabel 1. Hasil analisis varian, pengaruh konsentrasi logam berat Cd terhadap konsentrasi protein Caspase-3
pada organ hepar D. setosum
Sum of
Sumber varians
squares
Kons. Protein Between groups 0,165
Caspase-3
Within groups 0,477
Total 0,642
Vol. 21, No.1
Pada sisi lain, hasil pengujian hipotesis dengan
One Way Anova (Tabel 1), yakni konsentrasi logam
berat Cd berpengaruh sangat signifikan terhadap
konsentrasi protein caspase-3 pada organ hepar D.
setosum, dimana nilai signifikansi lebih kecil dari α
0.05 (p < 0.05). Selanjutnya, hasil analisis varians
yang menunjukkan pengaruh sangat signifikan,
kemudian dilanjutkan dengan uji Duncan 0,05 (Tabel
2), dimana terlihat adanya perbedaan notasi.
Perbedaan yang teramati pada kelompok perlakuan
konsentrasi Cd menunjukkan pengaruh paparan
konsentrasi Cd terhadap konsentrasi protein caspase-
3 pada hepar D. setosum.
Konsentrasi Cd secara signifikan meningkatkan
konsentrasi protein caspase-3. Hal ini menunjukkan
bahwa semakin tinggi konsentrasi Cd yang
dipaparkan maka konsentrasi protein caspase-3 yang
teraktivasi pada D. setosum juga semakin tinggi.
Secara kuantitatif dengan uji caspase
colorimetric assay kit (Gambar 2) menunjukkan
bahwa konsentrasi protein caspase-3 meningkat
seiring dengan semakin tingginya paparan
konsentrasi logam berat Cd. Terlihat konsentrasi
protein caspase-3 pada perlakuan konsentrasi 12
µg/L Cd adalah yang paling tinggi dibanding kontrol,
dengan tingkat konsentrasi yang paling tinggi. Selain
itu, berdasarkan hasil analisis varians (Tabel 1.)
menunjukkan bahwa konsentrasi logam berat Cd
berpengaruh sangat signifikan (p < 0.05) terhadap
konsentrasi protein caspase-3 pada organ hepar D.
setosum. Di sisi lain, hasil uji lanjut Duncan (Tabel
2.) menunjukkan adanya perbedaan rerata pada
kelompok tingkatan konsentrasi Cd. Hasil ini
menunjukkan bahwa respons biomolekuler D.
setosum berupa konsentrasi protein caspase-3
diaktifkan oleh adanya akumulasi logam berat Cd,
dan dapat dikatakan bahwa peningkatan konsentrasi
caspase-3 mengaktivasi terjadinya apoptosis pada
hepar D. setosum seperti yang terlihat pada Gambar
1. Hal ini berarti bahwa logam berat Cd menginduksi
apoptosis lewat aktivasi caspase-3.
Sig.
df Mean square Nilai F
(Nilai p)
5 0,033 2,485 0,049
36 0,013
41
Maret 2014 RUMAHLATU, D.: EFEK PERILAKU LOGAM BERAT
Tabel 2. Hasil uji Duncan dari hasil analisis varian terdapat pengaruh yang signifikan konsentrasi logam berat
Cd terhadap konsentrasi protein Caspase-3 pada organ hepar D. setosum (N = 7).
Konsentrasi logam berat Cd
0.0 (kontrol)
1,0 µg/L Cd
3,0 µg/L Cd
6,0 µg/L Cd
9,0 µg/L Cd
12,0 µg/L Cd
Dijelaskan oleh Dwipoyono (2007); Zhang dkk.
(2002) dan Nagata (1997) bahwa caspase-3 berperan
dalam proses regulasi dan eksekusi proses apoptosis.
Disisi lain, berdasarkan hasil pengamatan (Gambar 1)
terlihat adanya sel hepar D. setosum yang mengalami
apoptosis. Hasil ini sejalan dengan hasil pengukuran
konsentrasi protein caspase-3 (Gambar 2), dimana
semakin tinggi konsentrasi logam berat Cd yang
dipaparkan, maka protein caspase-3 yang
mengaktivasi terjadinya apoptosis menunjukkan hasil
yang tinggi. Nagata (1997) menjelaskan bahwa
aktivasi caspase-3 dapat menyebabkan terjadinya
apoptosis dan menghasilkan apa terlihat sebagai
apoptosis pada Gambar 1.
Peningkatan konsentrasi protein caspase-3 dapat
dikatakan sebagai salah satu mekanisme protektif di
dalam sel sehingga mengakibatkan terjadinya
apoptosis yang diinduksi oleh logam berat Cd.
Logam berat Cd yang meningkatkan konsentrasi
protein caspase-3 memiliki potensi sebagai
biomonitoring akumulasi logam berat Cd pada
tingkat seluler. Dijelaskan oleh Allen dan Moore
(2004) bahwa pengukuran langsung terhadap
biomarker paparan logam berat dilakukan untuk
menilai perubahan proses kimia dan fisiologi pada
tingkatan organisasi. Hal ini berarti bahwa
pengukuran konsentrasi protein caspase-3 pada D.
setosum dapat menjadi penanda biologi sekaligus
biomonitoring akumulasi logam berat Cd pada
tingkat seluler. Dijelaskan oleh Schoettger (1996)
bahwa respons yang timbul pada organisasi seluler
memang diperlukan untuk memastikan keberadaan
logam berat di lingkungan. Russo dkk. (2003)
menjelaskan bahwa invertebrata laut memiliki
sensivitas yang tinggi terhadap tekanan (stressor)
47
Rerata konsentrasi protein
Notasi
caspase-3 pada organ hepar
Duncan
D. setosum
0,46886 a
0,47957 a
0,54643 ab
0,60014 ab
0,60543 ab
0,63086 b
logam berat dan memiliki kemampuan untuk
merespons kontaminasi logam berat.
KESIMPULAN
Hasil pengukuran konsentrasi protein caspase-3
dengan caspase colorimetric assay kit dan
pemeriksaan apoptosis dengan teknik pengecatan HE
menunjukkan adanya peningkatan dengan semakin
tingginya konsentrasi logam berat Cd. Di sisi lain, D.
setosum dapat dipakai sebagai alat biomonitoring
pencemaran logam berat Cd di laut. Hal ini
didasarkan pada hasil analisis pengaruh perlakuan
logam berat Cd terhadap protein caspase-3 pada D.
setosum yang menunjukkan pengaruh yang sangat
signifikan. Kondisi ini mengindikasikan bahwa
caspase-3 pada D. setosum dapat digunakan sebagai
biomonitoring pencemaran logam berat di laut pada
tingkat seluler.
UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan terimakasih kepada
Kepala UPT Balai Konservasi Biota Laut LIPI
Ambon beserta staf, kepada Kepala Laboratorium
Fisiologi dan Histologi Fakultas Kedokteran
Universitas Brawijaya Malang, kepada Prof.
Shalihuddin Djalal Tanjung, Ph.D Dosen Ekologi dan
Ilmu Lingkungan Fakultas Biologi UGM. Ucapan
terimakasih juga penulis sampaikan kepada Ditjen
Dikti Kemendiknas yang telah memberikan BPPS
kepada penulis untuk menyelesaikan Program Doktor
(S3) Pendidikan Biologi di Program Pascasarjana
Universitas Negeri Malang tahun 2010/2011, dan
kepada para reviewer yang telah mengkoreksi artikel
ini.
48 J. MANUSIA DAN LINGKUNGAN
DAFTAR PUSTAKA
Agnello, M., dan Roccheri, M.C., 2010. Apoptosis:
Focus on Sea Urchin Development. Cell death
Res. 15(3):322-330.
Agnello, M., Filosto, S., Scudiero, R., Rinaldi, A.M.,
dan Roccheri, M.C., 2007. Cadmium Induces an
Apoptotic Response in Sea Urchin Embryos.
Cell Stress & Chaperones, 12(1):44–50.
Allen, J.I., dan Moore, M.N., 2004. Environmental
Prognostics: is The Current Use of Biomarkers
Appropriate for Environmental Risk Evaluation.
Marine Environ. Res. 58:227-232.
Angerer, J., Bird, M.G., Burke, T.A., Doerrer, N.G.,
Needham, L., Robinson, S.H., Sheldon, L., dan
Zenick, H., 2006. Strategic Biomonitoring
Initiatives: Moving The Science Forward,
Toxicol. Sci. 93:3-10.
Ayeni, O.O., Ndakidemi, P.A., Snyman, R.G., dan
Odendaal, J.P., 2010. Chemical, Biological and
Physiological Indicators of Metal Pollution in
Wetlands. Scientific Res. & Essays, 5(15):1938-
1949.
Bielmyer, G.K., Brix, K.V., Capo, T.R. dan Grosell.
G., 2005. The Effects of Metals on Embryo-
larval and Adult Life Stages of The Sea Urchin,
Deadema antillarum. Aquatic Toxicol. 74:254-
263.
Caspani, M.L., Savioli, M., Crotti, S., Buzzone, P.,
dan Gattmoni, L., 2004. Heat Stress:
Characteristics, Pathophysiology And Avoidable
Mistakes. Minerva Anastesiol., 70: 617-624.
Dailianis, S., dan Kaloyianni, M., 2004. Cadmium
Induces both Pyruvate Kinase and Na+/H+
Exchanger Activity Through Protein Kinase C
Mediated Signal Transduction, in Isolated
Digestive Gland Cellss of Mytilus
galloprovincialis (L.). J. Exp. Biol., 207:1665-
1674.
Danis, B., Cotret, O., Teyssié, J.L., Bustamante, P.,
Fowler, S.W., dan Warnau, M., 2005.
Bioaccumulation of PCBs in The Sea Urchin
Paracentrotus lividus: Seawater and Food
Exposures to a 14C-radiolabelled Congener
(PCB#153). Environ. Pollut. 135(1):11-16.
Dwipoyono, B., 2007. Aktivitas Caspase 3 sebagai
Indikator Apoptosis Pada Sel Kanker Ovarium.
Indo. J. Cancer, 2:63-72.
El-Maraghy, S.A., Gad, M.Z., Fahim, A.T., dan
Hamdy, M.A., 2001. Effect of Cadmium and
Aluminum Intake on The Antioxidant Status and
Vol. 21, No.1
Lipid Peroxidation in Rat Tissues. J. Biochem.
Mol. Toxicol. 15:207–221.
Faix, S., Faixova, Z., Boldizarova, K., dan Javorsky,
P., 2005. The Effect of Long-Term High Heavy
Metal Intake on Lipid Peroxidation of
Gastrointestinal Tissue in Sheep. Vet. Med-
Czech, 50(9):401-405.
Flammang, P., Warnau, M., Temara, A., Lane,
D.J.W., dan Jangoux, M., 1997. Heavy Metals in
Deadema setosum (Echinodermata Echinoidea)
from Singapore Coral Reefs. J. Sea Res. 38:35-
45.
Hall, J.L., 2002.Cellular Mechanisms for Heavy
Metal Detoxification and Tolerance. J. Exp.
Botany, 53(366):1-11.
Hall, J.L dan Lorraine, E.W., 2003. Transition Metal
Transporters in Plants. J. Exp. Botany,
54(393):2601-2613.
Huang, K.L., Wu, C.P., Chen, Y.L., Kang, B.H., dan
Lin, Y.C., 2003. Heat Stress Attenuates Air
Bubble-Induced Acute Lung Injury: A Novel
Mechanism of Diving Acclimatization. J. Appl
Physiol. 94:1485-1490.
Kamrin, M.A., 2004. Biomonitoring Basics. A Report
from biomonitoringinfo.org. Environmental
Health Research Foundation.
Katschinski, D.M., 2004. On Heat and Cells and
Proteins. News Physiol. Sci. 19: 11-15.
Nagata, S., 1997. Apoptosis by Death Factor. Cell,
88:355-365.
Nordic, N., 2003. Cadmium Review. Denmark:
Prepared by COWI A/S on behalf of the Nordic
Council of Ministers.
Pal, M., Horvarth, E., Janda, T., Paldi, E., dan Szalai,
G., 2006. Physiological Changes and Defense
Mechanisme Induced by Cadmium Stress in
Maize. J. Plant. Nutr. Soil Sci. 159:230-246.
Roccheri, M.C., Agnello, M., Bonaventura, R., dan
Matranga, V., 2004. Cadmiun Induces The
Expression of Specific Stress Proteins in Sea
Urchin Embryos. Elsevier. (online).
www.elsevier.com. Diakses 4 September 2010.
Rumahlatu, D., 2011. Konsentrasi Logam Berat
Kadmium Pada Air, Sedimen, dan Deadema
setosum (Echinodermata; Echinoidea) di
Perairan Pulau Ambon. Ilmu Kelautan-Indo. J.
Marine Sci. 16(2):78-85.
Rainbow, P.S., Wolowicz, M., Fialkowski, W.,
Smith, B.D., dan Sokolowski, A., 2000.
Biomonitoring of Trace Metals in The Gulf of
Gdansk, Using Mussels (Mytilus trossulus) and
Maret 2014 RUMAHLATU, D.: EFEK PERILAKU LOGAM BERAT
Barnacles (Balanus improvisus). Water Res.,
34:1823-1829.
Russo, R., Bonaventura, R., Zito, F., Schroder, H.,
Muller, I., Muller, W.E.G., dan Matranga, V.,
2003. Stress to Cadmium Monitored by
Metallothionein Gene Induction in Paracentrotus
Lividus Embryos. Cell Stress & Chaperones,
8(3):232-231.
Saputra, D., Astuti, E.R., dan Budhy, T.I., 2012.
Apoptosis and Necrotic Oral Mucosa Cell
Induced by Conventional Dental X-Ray
Radiation. Dental Journal, 3(1):36-40.
Schoettger, R.A., 1996. Problems of Aquatic
Toxicology, Biotesting and Water Quality
Management. Proceedings of USA-Rusia
Symposium, Borok, Jaroslavl Oblast, Juli 21-23
1996. Published by Ecosytems Research
Division Athens.
Slee, E.A., Harte, M.T., Kluck, R.M., Wolf, B.B.,
Casiano, C.A., Newmeyer, D.D., Wang, H.G.,
Reed, J.C., Nicholson, D.W., Alnemri, E.S.,
Green D.R., dan Martin, S.J., 1999. Ordering the
Cytochrome Cinitiated Caspase Cascade:
Hierarchical Activation of Caspase-2, -3, -6, -7,
-8, and -10 in A Caspase-9-Dependent Manner.
J. Cell Biol. 144:281-292.
Smiri, M., Chaoui, A., dan Ferjani, E.E., 2010.
Interaction between Heavy Metals and Thiol-
Linked Redox Reactions in Germination.
Pakistan J. Biol. Sci., 13(18):877-883.
Soualili, D., Dubois, P., Gosselin, P., Pernet, P., dan
Guillou, M. 2007. Assessment of Seawater
Pollution by Heavy Metals in the
Neighbourhood of Algiers: Use of Sea Urchin,
Paracentrotus lividus, as Bioindicator. Email:
49
mgluillou@univ-brest.fr. Diakses 8 September
2010.
Temara, A., Skei, J.M., Gillan, D., Warnau, M.,
Jangoux, M., dan Dubois, P., 1998. Validation
of the Asteroid Asterias rubens (Echinodermata)
as A Bioindicator of Spatial and Temporean
Trends of Pb, Cd, and Zn Contamination in the
Field. Marine Environ. Res., 45(4/5):341-356.
Tosepu, R., 2012, Laju Penurunan Logam Berat
Plumbum (Pb) dan Cadmium (Cd) oleh
Eichornia crassipes dan Cyperus papyrus. Jurnal
Manusia dan Lingkungan, 19(1):37-45.
Warnau, M., Ledent, G., Temara, A., Bouquegneau,
J.M., Jangoux, M., dan Dubois, P., 1995. Heavy
Metals in Posidonia oceanic and Paracentrotus
lividus from Seagrass Beds of Northwestern
Mediterranean. Sci. Total Environ., 171:95-99.
Wlostowski, T., Krasowska A., dan Bonda E., 2003.
An Ironrich Diet Protects The Liver and
Kidneys Against Cadmium-Induced Injury in
The Bank Vole (Clethrionomys glareolus).
Ecotoxicol. & Environ. Safety, 54:194-198.
Zhang, X., Chen, J., Graham, S.H., Du, L.,
Kochanek, P.M., Draviam, R., Guo, F.,
Nathaniel, P.D., Szabo, C., dan Watkins, S.C.,
2002. Intranuclear Localization of Apoptosis-
Inducing Factor (AIF) and Large Scale DNA
Fragmentation after Traumatic Brain Injury in
Rats and in Neuronal Cultures Exposed to
Peroxynitrite. J. Neurochem., 82:181-191.
Zhou, Q., Zhang, J., Fu, J., Shi, J., dan Jiang, G.
2008. Biomonitoring: An Appealing Tool for
Assessment of Metal Pollution in The Aquatic
Ecosystem. Anal. Chim. Acta, 606:135–150.