PANDUAN PRAKTIKUM

PEMERIKSAAN KADAR GLUKOSA

BAGIAN BIOLOGI KEDOKTERAN DAN BIOKIMIA

FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS DIPONEGORO
2024
Pendahuluan

Glukosa adalah gula monosakarida yang diperoleh tubuh kita dari makanan dan digunakan
sebagai sumber energi utama kita. Bentuk molekul dasar glukosa adalah C6H12O6. Glukosa
memasuki tubuh kita dalam beberapa bentuk berbeda seperti: fruktosa dan galaktosa (gambar
1), yang merupakan monosakarida dan isomer glukosa. Monosakarida ini dapat bergabung
membentuk disakarida seperti laktosa dan sukrosa. Polimer glukosa yang lebih besar adalah
bentuk polisakarida glukosa yang meliputi: pati, glikogen, dan selulosa. Tubuh kita harus
memecah gula kompleks menjadi glukosa, fruktosa, dan galaktosa untuk penyerapan dan
metabolisme.

Gambar 1. Monosakarida

Konsentrasi glukosa dalam darah (Glukosa plasma) diatur oleh interaksi yang kompleks dari
berbagai jalur, yang dimodulasi oleh beberapa hormon. Glikogenesis adalah pengubahan glukosa
menjadi glikogen. Proses sebaliknya yang melibatkan pemecahan glikogen menjadi glukosa dan
produk antara lainnya disebut glikogenolisis. Pembentukan glukosa dari sumber non-
karbohidrat, seperti asam amino, gliserol, atau laktat, disebut glukoneogenesis. Konversi glukosa
atau heksosa lain menjadi laktat atau piruvat disebut glikolisis. Oksidasi lebih lanjut menjadi
karbon dioksida dan air terjadi melalui siklus Krebs (asam sitrat) dan rantai transpor elektron
mitokondria digabungkan dengan fosforilasi oksidatif, menghasilkan energi dalam bentuk
adenosin trifosfat (ATP).

Glukosa plasma dapat diukur dalam beberapa cara berbeda, dan pengukurannya paling penting
untuk skrining, diagnosis, dan pemantauan diabetes dan disregulasi metabolik yang muncul
dalam kondisi seperti sindrom metabolik. Kondisi ini mengakibatkan hiperglikemia patologis
atau kadar glukosa yang tinggi. Data terbaru yang dikeluarkan oleh Pusat Pengendalian dan
Pencegahan Penyakit menunjukkan bahwa hampir 37,3 juta orang Amerika menderita diabetes
dan hampir 96 juta orang berusia 18 tahun atau lebih memiliki pradiabetes (38,0% dari populasi
dewasa AS). Sekitar 90% hingga 95% dari semua kasus diabetes di AS adalah tipe 2. Diabetes tipe
2 diperkirakan tidak terdiagnosis pada setidaknya 30% populasi AS. Oleh karena itu, pemantauan
glukosa plasma yang memadai pada individu berisiko tinggi atau pra-diabetes dapat membantu
memandu intervensi gaya hidup yang secara efektif mengurangi risiko menjadi diabetes.
Transporter glukosa

Penyerapan glukosa ke dalam sel tergantung pada transporter tertentu. Beberapa memerlukan
natrium (Na+) sebagai co-transporter sementara yang lain tidak. Transpor glukosa yang
bergantung pada Na+ menggunakan pompa Na+/K+ ATP-ase untuk menghasilkan gradien
potensial negatif yang mendorong transpor pasif Na+ ke dalam sel. Gradien ini juga
memungkinkan molekul lain, seperti glukosa, untuk diangkut ke dalam sel melawan gradien
konsentrasinya. Secara khusus, glukosa dalam lumen usus dan tubulus ginjal diserap melalui
kotransporter natrium-glukosa (Sodium-Glucose co-transporter/SGLT). Ekspresi transporter ini
dapat berubah tergantung pada kebutuhan glukosa tubuh.

Gambar 2. Transpor glukosa yang bergantung pada Na+

Begitu glukosa memasuki sel-sel ini, transporter glukosa bebas Na+ membawa glukosa ke dalam
darah. Transpor glukosa independen Na+ mengacu pada transporter khusus yang bervariasi
dalam jenis tergantung pada jaringan tertentu. Pengangkut glukosa tipe 1 (GLUT1) ditemukan
dalam sel darah merah dan otak dan tidak diatur oleh insulin. GLUT2 ada di epitel usus, hati,
ginjal, dan terutama pankreas. Transporter ini diatur oleh hormon yang berbeda untuk
mengontrol kadar glukosa plasma sesuai kebutuhan.
Tabel 1. Transporter glukosa

Homeostasis glukosa

Homeostasis glukosa dalam plasma bergantung pada keseimbangan hormon glukagon dan
insulin. Kedua hormon dilepaskan dari pankreas (insulin dari sel beta yang ditemukan di pulau
langerhans dan glukagon dari sel alfa) sebagai respons terhadap kadar glukosa plasma.
Menanggapi kadar glukosa yang tinggi, insulin meningkatkan pengambilan glukosa ke dalam sel
yang memiliki transporter glukosa tipe 4 (GLUT4), ditemukan di jaringan adiposa, dan otot
rangka dan jantung.

Insulin memberikan efeknya melalui pengikatan pada reseptor insulin, yang memiliki aktivitas
tirosin kinase dan aktivasi serangkaian peristiwa hilir yang dimulai dengan substrat insulin-1 (IRS-
1) yang berpuncak pada peningkatan ekspresi GLUT4. Selain itu, insulin dapat menurunkan
regulasi reseptornya sendiri, yang dapat berkontribusi pada patofisiologi resistensi insulin
(reseptor dan pasca-reseptor cacat) dalam disregulasi metabolik obesitas dan diabetes. Secara
khusus, reseptor insulin ditemukan menurun pada obesitas dan meningkat pada kelaparan.
Tindakan lain insulin untuk memodulasi konsentrasi glukosa darah termasuk merangsang
glikogenesis di hati dan jaringan otot dan deposisi lemak dan menghambat glikogenolisis dan
glukoneogenesis.

Organ target utama untuk glukagon adalah hati, yang berikatan dengan reseptor berpasangan
protein G spesifik (G-protein coupled receptor/GPCR), diekspresikan secara melimpah di hati dan
ginjal, dan pada tingkat yang lebih rendah di jaringan lain, termasuk jantung, adiposa, pankreas,
dan otak. Glukagon merangsang produksi glukosa di hati terutama melalui glikogenolisis.
Glukoneogenesis juga diaktifkan, dan glikogenesis dihambat. Sekresi glukagon diatur terutama
oleh konsentrasi glukosa plasma, dengan glukosa plasma rendah dan tinggi masing-masing
sebagai stimulasi dan penghambatan. Diabetes melitus yang berlangsung lama merusak respon
glukagon terhadap hipoglikemia, mengakibatkan peningkatan kejadian episode hipoglikemik.
Stres, olahraga, dan asam amino menginduksi pelepasan glukagon.
Insulin menghambat pelepasan glukagon dari pankreas dan menurunkan ekspresi gen glukagon,
sehingga melemahkan biosintesisnya. Peningkatan konsentrasi glukagon, akibat defisiensi
insulin, diyakini berkontribusi terhadap hiperglikemia dan ketosis pada diabetes. Selain efeknya
pada glikemia, glukagon secara langsung mengatur trigliserida, asam lemak bebas, dan
metabolisme empedu. Misalnya, meningkatkan oksidasi asam lemak dan ketogenesis di hati.

Tabel 2. Respon jaringan terhadap insulin dan glukagon

Kadar glukosa plasma mengalami pengaturan melalui beberapa jalur utama: glikolisis,
glukoneogenesis, dan glikogenesis/glikogenolisis. Insulin dapat mempengaruhi glikolisis dan
glukoneogenesis melalui defosforilasi enzim fosfofruktokinase-2 (PFK-2), yang meningkatkan
kadar fruktosa 2,6-bifosfat (F-2,6-BP). Molekul ini secara langsung meningkatkan aktivitas enzim
PFK-1, yang mengubah fruktosa-6-fosfat menjadi fruktosa 1, 6-bifosfat dan mengikat glukosa ke
jalur glikolisis, dan mengarahkannya menjauh dari glukoneogenesis. Sebaliknya, glukagon juga
mempengaruhi glikolisis dan glukoneogenesis melalui fosforilasi fruktosa 2,6-bifosfatase, yang
menurunkan kadar F-2,6-BP dan selanjutnya, aktivitas PFK-1. Aktivitas ini mengalihkan glukosa
dari glikolisis dan menuju glukoneogenesis dan glikogenolisis.

Hormon lain yang memengaruhi homeostasis glukosa termasuk inkretin seperti glucagon-like
peptide-1 (GLP-1) dan peptida insulinotropik (GIP) yang bergantung pada glukosa. Incretin
mempotensiasi pelepasan insulin sebagai respons terhadap glukosa oral. Hormon lain yang
mempengaruhi metabolisme glukosa meliputi amylin pankreas, glukokortikoid (meningkatkan
resistensi insulin dan glukoneogenesis), hormon tiroid (mempromosikan penyerapan glukosa,
glikogenolisis, glukoneogenesis), hormon pertumbuhan (menghambat penyerapan glukosa ke
dalam sel), dan epinefrin.

Epinefrin (juga disebut adrenalin), katekolamin yang disekresikan oleh medula adrenal,
merangsang produksi glukosa (glikogenolisis) dan menurunkan penggunaan glukosa, sehingga
meningkatkan konsentrasi glukosa darah. Ini juga merangsang sekresi glukagon dan
menghambat sekresi insulin oleh pankreas. Epinefrin tampaknya memiliki peran kunci dalam
pengaturan balik glukosa ketika sekresi glukagon terganggu (misalnya pada diabetes melitus tipe
1). Stres fisik atau emosional meningkatkan produksi epinefrin, melepaskan glukosa untuk energi.
Tumor medula adrenal, yang dikenal sebagai pheochromocytoma, mengeluarkan epinefrin atau
norepinefrin berlebih dan menghasilkan hiperglikemia sedang selama simpanan glikogen
tersedia di hati.

Diabetes Melitus

Diabetes melitus mengacu pada gangguan dalam mengatur kadar glukosa darah dan
berhubungan dengan faktor genetik dan gaya hidup, seperti riwayat keluarga, ras, obesitas, dan
pola makan. Kadar glukosa darah yang tinggi mencirikan kelainan akibat resistensi insulin dan
defisiensi insulin akhir. Diabetes paling sering terjadi dalam dua tipe utama: tipe 1 atau tipe 2.
Tipe 1 terjadi pada pasien yang lebih muda karena patologi autoimun di mana sistem kekebalan
tubuh menyerang sel beta pankreas, mengakibatkan hilangnya insulin. Proses autoimun yang
mengarah ke diabetes tipe 1 dimulai berbulan-bulan atau bertahun-tahun sebelum presentasi
klinis, dan pengurangan 80% hingga 90% dalam volume sel β diperlukan untuk menginduksi
diabetes tipe 1 simtomatik. Tingkat penghancuran sel islet bervariasi dan biasanya lebih cepat
pada anak-anak dibandingkan pada orang dewasa.

Diabetes tipe 2 terjadi pada sebagian besar pasien dengan penambahan berat badan. Jenis ini
lebih kuat terkait dengan obesitas, disregulasi metabolik progresif, dan resistensi insulin. Tubuh
memproduksi insulin pada diabetes tipe 2, tetapi sel-selnya kurang sensitif terhadap insulin;
karenanya, tingkat insulin yang lebih tinggi diperlukan untuk merangsang sel mengambil glukosa.
Sindrom resistensi insulin (juga dikenal sebagai sindrom X atau sindrom metabolik) adalah
konstelasi terkait temuan klinis dan laboratorium, yang terdiri dari resistensi insulin,
hiperinsulinemia, obesitas, dislipidemia (trigliserida tinggi dan kolesterol low-density lipoprotein
[HDL] rendah), dan hipertensi. Individu dengan sindrom ini berada pada peningkatan risiko
penyakit kardiovaskular.

Pada diabetes, glukosa tetap tinggi di luar sel yang mengakibatkan sel kelaparan meskipun kadar
glukosa dalam plasma tinggi. Sel beralih ke katabolisme protein dan asam lemak, yang dapat
mengakibatkan peningkatan urea dan keton. Ketika kadar glukosa tetap tinggi dalam plasma, itu
dapat menyebabkan kerusakan osmotik pada saraf yang mengakibatkan neuropati perifer,
mengurangi penyembuhan luka, dan meningkatkan peradangan melalui reaksi yang menciptakan
stres oksidatif dan peradangan dan membentuk produk glikasi lanjutan (advanced glycation
products/AGEs) yang menyebabkan terjadinya komplikasi mikro dan makro-vaskular. Presentasi
klinis diabetes meliputi polidipsia, poliuria, dan penurunan berat badan dengan polifagia. Oleh
karena itu, peningkatan kadar glukosa plasma dapat menyebabkan kerusakan organ ireversibel
dari waktu ke waktu, dan kontrol kadar glukosa sangat penting untuk mencegah kondisi ini.
Tabel 3. Kadar tes laboratorium darah untuk diagnosis diabetes (Perkeni, 2021)

Glukosa darah puasa (mg/dL) Glukosa plasma 2 jam setelah TTGO

(mg/dL)
Diabetes ≥ 126 ≥ 200
Pre-Diabetes 100 – 125 140 – 199
Normal 70 - 99 70 - 139

Glukosa Urin

Glikosuria adalah istilah yang mendefinisikan adanya gula pereduksi dalam urin, seperti glukosa,
galaktosa, laktosa, fruktosa, dll. Glukosuria berkonotasi dengan adanya glukosa dalam urin dan
merupakan jenis glikosuria yang paling sering ditemukan. Sejumlah kecil glukosa yang ada dalam
urin dianggap normal, tetapi istilah glukosuria biasanya mengacu pada kondisi patologis di mana
jumlah glukosa urin lebih dari 25 mg/dl dalam sampel urin segar sewaktu.

Normalnya, tubulus ginjal akan menyerap kembali hampir semua (meninggalkan kurang dari 25
mg/dl glukosa urine) glukosa yang terdapat dalam filtrat glomerulus normal. Ketika glukosa yang
difiltrasi oleh glomerulus melebihi kapasitas tubulus ginjal untuk menyerapnya (>180 mg/dL),
terjadi kehilangan keseimbangan. Hal ini dapat terjadi karena peningkatan glukosa plasma
seperti pada diabetes mellitus atau ketika kemampuan tubulus untuk menyerap glukosa
terganggu, misalnya sindrom Fanconi dengan gangguan penyerapan fosfat, asam amino, atau
glukosuria terisolasi sebagai kelainan bawaan yang disebut Familial Renal glucosuria.
PERCOBAAN I
Pemeriksaan Kadar Glukosa Secara Kualitatif (Menggunakan reagen Benedict)

Dasar
Larutan tembaga alkalis akan direduksi oleh gula yang mempunyai gugus aldehida atau keton
bebas dengan membentuk kuprooksida yang berwarna. Larutan Benedict berisi kuprisulfat,
natrium karbonat dan natrium sitrat.

Alat
1. 5 buah tabung reaksi
2. Pipet
3. Lampu spiritus
4. Penjepit

Bahan
1. Larutan glukosa 0,1 M
2. Larutan Benedict

Cara Kerja
1. Membuat larutan glukosa 0,1M; 0,05M; 0,02M; 0,01M; 0,001M.
2. Masukkan 2,5 ml larutan Benedict ke dalam masing-masing tabung reaksi (5 tabung)
3. Teteskan 4 tetes larutan glukosa yang sudah dibuat tadi ke dalam masing-masing tabung
reaksi.
4. Panaskan 3–5 menit dan dibiarkan dingin.
5. Perhatikan perubahan warna dan endapan yang terjadi.
PERCOBAAN II
Pemeriksaan Kadar Glukosa Darah Secara Kuantitatif (Glucose Liquicolor/Metode GOD)

Prinsip Pemeriksaan
Kadar glukosa ditentukan setelah terjadinya oksidasi enzimatik dengan adanya glucose oxidase
(GOD) yang menghasilkan hidrogen peroksida. Kemudian hidrogen peroksida yang terbentuk
bereaksi dengan phenol serta 4-aminoantipyrine dengan adanya peroksidase (POD) menjadi zat
warna quinoneimine berwarna merah violet sebagai indikator.

GOD
Glucose + O2 + H2O gluconic acid + H2O2

POD
2H2O2 + 4-aminoantipyrine + phenol quinoneimine + 4H2O

Alat
1. Spuit 3 mL
2. Tabung EDTA
3. Tabung Eppendorf 2 mL
4. Cuvet 1,5 mL
5. Sentrifuge
6. Mini-sentrifuge
7. Spektrofotometer
8. Mikropipet
9. Inkubator

Bahan
1. Reagen Glucose liquicolor yang berisi:
 Phosphate buffer (pH 7.5)
 4- aminoantipyrine
 Phenol
 Glucose oxidase
 Peroxidase
 Mutarotase
 Sodium azide
2. Larutan standar berupa glukosa dengan konsentrasi 100 mg/dl atau 5.55 mmol/l
Cara Kerja
1. Ambil darah vena, masukkan dalam tabung EDTA, pusingkan dengan kecepatan 3500 rpm
selama 15 menit  sampel plasma darah siap untuk digunakan.
2. Siapkan 3 buah tabung eppendorf, beri label dan isi dengan larutan dengan komponen
sebagai berikut:

Tabung I Tabung II Tabung III

Blangko Standard Sampel
Reagen 1500 l 1500 l 1500 l
Plasma darah – – 15 l
Larutan Standard – 15 l –
Catatan:
- Gunakan mikropipet dan tip yang sesuai untuk mengambil volume larutan yang
diinginkan.
- Apabila menggunakan mikropipet variabel, pastikan jumlah volume yang diinginkan
sudah di-setting dengan benar.
- Masukkan larutan dengan volume paling banyak (1500 l) terlebih dulu ke dalam
tabung.
- Pada saat mencampurkan volume larutan yang sedikit (15 l), pastikan ujung tip
masuk kedalam larutan pertama dan lakukan pembilasan beberapa kali.

3. Tutup tabung eppendorf dan homogenkan larutan dengan menggunakan mini-sentrifuge

selama 2-3 detik.
4. Inkubasi pada suhu 37oC selama 5 menit di dalam inkubator.
5. Homogenkan kembali larutan dengan menggunakan mini-sentrifuge selama 2-3 detik.
6. Pindahkan larutan yang sudah homogen ke dalam cuvet menggunakan mikropipet (beri
label kecil pada bagian paling atas cuvet  agar tidak mengganggu pemeriksaan).
7. Ukur absorbansi larutan pada tabung standard (d Astd) dan sampel (d Asp) terhadap
blanko reagen dengan menggunakan panjang gelombang dengan serapan maksimal
(sekitar 500 nm)

Penghitungan
C (mg/dl) = 100 x dAsp / dAstd
C (mmol/L) = 5.55 x dAsp / dAstd