Laporan - Akhir - Bakteriologi - Salinan - Hani - Salinan (1) Salinan

LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM
PENGANTAR BAKTERIOLOGI TUMBUHAN
OLEH
NAMA : Haniya Audry Devani

NIM : 2210253007
KELAS : Proteksi C
DOSEN 1. Dr. Haliatur Rahma, S. Si., MP
PENJAB : 2. Dr. Zurai Resti, SP. MP,
ASISTEN : 1. Fimetha Riva Kurniati
PRAKTIKUM (2010251001)
2. Lucky Fhigo Raffi
(2010252006)
DEPARTEMEN PROTEKSI TANAMAN

FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS ANDALAS
PADANG
2023
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas segala rahmat dan
hidayah- Nya sehingga kami dapat menyelesaikan Laporan Pengantar
Bakteriologi Tumbuhan. Laporan ini juga sebagai salah satu syarat dalam Ujian
Akhir Pratikum
Laporan ini saya buat berdasarkan apa yang telah kami terima dan juga
kami kutip dari berbagai sumber baik dari buku maupun media elektronik.
Semoga isi dari Laporan ini dapat berguna bagi kita dan dapat menambah
wawasan serta pengetahuan kita.
Karena keterbatasan pengetahuan dan pengalaman penulis menyadari
masih banyak kekurangan dalam Laporan ini. Oleh karena itu, kami sangat
mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari pembaca demi
kesempurnaan laporan ini.
Padang, 1 Desember 2023
H.A.D
ii
DAFTAR ISI
HALAMAN
KATA PENGANTAR............................................................................................ii
DAFTAR ISI.........................................................................................................iii
DAFTAR TABEL................................................................................................vii
MATERI I PENGENALAN ALAT DAN BAHAN STERILISASI..................1
BAB I PENDAHULUAN...................................................................................2
A. Latar belakang...........................................................................................2
B. Tujuan........................................................................................................4
C. Manfaat......................................................................................................4
BAB II TINJAUAN PUSTALA........................................................................5
A. Alat dan Bahan..........................................................................................5
B. Sterilisasi...................................................................................................6
BAB III METODOLOGI..................................................................................9
A. Waktu dan Tempat....................................................................................9
B. Alat dan Bahan..........................................................................................9
C. Prosedur Kerja...........................................................................................9
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN..........................................................10
A. Hasil.........................................................................................................10
B. Pembahasan.............................................................................................12
BAB V PENUTUP............................................................................................14
A. Kesimpulan..............................................................................................14
B. Saran........................................................................................................14
DAFTAR PUSTAKA.......................................................................................15
MATERI II ISOLAT BAKTERI........................................................................16
BAB I PENDAHULUAN.................................................................................17
A. Latar belakang.........................................................................................17
B. Tujuan......................................................................................................19
C. Manfaat....................................................................................................19
BAB II TINJAUAN PUSTAKA......................................................................20
A. Isolasi bakteri..........................................................................................20
BAB III METODOLOGI................................................................................24
A. Waktu dan Tempat..................................................................................24
B. Alat dan Bahan........................................................................................24
iii
C. Prosedur Kerja.........................................................................................24
A. Hasil.........................................................................................................26
B. Pembahasan.............................................................................................26
BAB V PENUTUP............................................................................................30
A. Kesimpulan..............................................................................................30
B. Saran........................................................................................................30
DAFTAR PUSTAKA.......................................................................................31
MATERI III UJI GRAM NEGATIF DAN POSITIF.......................................32
C. Latar belakang.........................................................................................33
B. Tujuan......................................................................................................35
C. Manfaat....................................................................................................35
A. Uji gram positif dan gram negatif...........................................................36
A. Waktu dan tempat....................................................................................38
B. Bahan Praktikum.....................................................................................38
C. Prosedur Praktikum.................................................................................38
A. Hasil.........................................................................................................39
B. Pembahasan.............................................................................................39
BAB V PENUTUP............................................................................................43
A. Kesimpulan..............................................................................................43
B. Saran........................................................................................................43
DAFTAR PUSTAKA.......................................................................................44
MATERI IV UJI HIPERSENSITIF..................................................................45
A. Latar belakang.........................................................................................46
B. Tujuan......................................................................................................47
C. Manfaat....................................................................................................48
A. Uji hipersensitif.......................................................................................49
B. Alat dan Bahan........................................................................................52
iv
A. Hasil.........................................................................................................53
B. Pembahasan.............................................................................................53
BAB V PENUTUP............................................................................................57
A. Kesimpulan..............................................................................................57
B. Saran........................................................................................................57
DAFTAR PUSTAKA.......................................................................................58
MATERI V UJI PATOGENESITAS.................................................................60
A. Latar belakang.........................................................................................61
B. Tujuan......................................................................................................63
C. Manfaat....................................................................................................63
A. Uji patogenisitas......................................................................................64
B. Alat dan bahan.........................................................................................66
A. Hasil.........................................................................................................67
B. Pembahasan.............................................................................................67
BAB V PENUTUP............................................................................................69
A. Kesimpulan..............................................................................................69
B. Saran........................................................................................................69
DAFTAR PUSTAKA.......................................................................................70
MATERI VI UJI PGPR......................................................................................71
A. Latar belakang.........................................................................................72
B. Tujuan......................................................................................................73
C. Manfaat....................................................................................................73
A. Uji PGPR.................................................................................................74
B. Alat dan bahan.........................................................................................76
v
A. Hasil.........................................................................................................77
B. Pembahasan.............................................................................................78
BAB V PENUTUP............................................................................................81
A. Kesimpulan..............................................................................................81
B. Saran........................................................................................................81
DAFTAR PUSTAKA.......................................................................................82
MATERI VII UJI ANTIBIOSIS........................................................................83
A. Latar belakang.........................................................................................84
B. Tujuan......................................................................................................86
C. Manfaat....................................................................................................86
A. Uji antibiosis............................................................................................87
A. Waktu dan Tempat..................................................................................90
B. Bahan Praktikum.....................................................................................90
A. Hasil.........................................................................................................91
B. Pembahasan.............................................................................................91
BAB V PENUTUP............................................................................................95
A. Kesimpulan..............................................................................................95
B. Saran........................................................................................................95
DAFTAR PUSTAKA.......................................................................................96
vi
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Pengenalan alat..................................................................................................10
Tabel 2. Pengenalan media..............................................................................................12
Tabel 3. Sterilisasi.............................................................................................................12
Tabel 4. Isolasi Bakteri....................................................................................................26
Tabel 5. Uji Gram Negatif Dan Positif.............................................................................39
Tabel 6. Uji Hipersensitif.................................................................................................53
Tabel 7. Uji Patogenesitas................................................................................................67
Tabel 8. Uji Patogenesitas Pada Bibit Cabai....................................................................77
Tabel 9. Uji Patogenesitas Pada Benih Tomat..................................................................77
Tabel 10. Uji Antibiosis...................................................................................................91
vii
MATERI I
PENGENALAN ALAT DAN BAHAN STERILISASI
viii
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar belakang
Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari organisme yang berukuran
sangat kecil sehingga tidak dapat dilihat dengan mata telanjang melainkan harus
menggunakan bantuan mikroskop. Organisme yang sangat kecil ini disebut
sebagai mikroorganisme, atau sering disebut mikroba ataupun jasad renik. Saat
ini, mikrobiologi sangat berkembang luas pada berbagai bidang ilmu
pengetahuan, misalnya pertanian, industri, kesehatan, lingkungan hidup, bidang
pangan, bahkan bidang antariksa. Mikrobiologi Pertanian merupakan
penggunaan Mikrobiologi untuk tujuan memecahkan masalah-masalah praktis di
bidang pertanian. Dengan demikian dapat dirumuskan tugas dari Mikrobiologi
Pertanian adalah mempelajari dan memanfaatkan mikrobia sebaik mungkin guna
meningkatkan produksi pertanian baik kuantitas maupun kualitas dan menekan
kemungkinan kehilangan produksi karena berbagai sebab (Waluyo, 2013).
Sekarang ini, dengan berkembangannya ilmu pengetahuan, makasemakin
tinggi pula rasa ingin tahu seseorang terhadap apa yang terdapat di alamsampai
pada mikroorganisme yang tidak dapat di lihat dengan mata telanjang. Dari hal
inilah muncul ilmu pengetahuan yang mempelajari tentang mikroorganisme
tersebut yang disebut dengan mikrobiologi. Dalam bidang penelitian
mikroorganisme ini, tentunya menggunakan teknik atau cara-cara khusus untuk
mempelajarinya serta untuk bekerja pada skala laboratorium untuk meneliti
mikroorganisme ini baik sifat dan karakteristiknya, dan diperlukan pula
pengenalan akan alat-alat laboratorium serta teknik atau cara penggunaan alat-
alat yang berhubungan dengan penelitian tersebut (Waluyo, 2013).
Alat-alat yang digunakan dalam praktikum mikrobiologi juga harusdalam
keadaan steril. Sterilisasi dalam mikrobiologi adalah suatu proses untuk
mematikan semua organisme yang terdapat pada atau di dalam suatu benda.
Ketika untuk pertama kalinya melakukan pemindahan biakan bakteri secara
aseptik, sesungguhnya hal itu telah menggunakan salah satu cara sterilisasi, yaitu
pembakaran. Namun, kebanyakan peralatan dan media yang umum dipakai
ix
didalam pekerjaan mikrobiologi akan menjadi rusak bila dibakar. Untungnya
tersedia berbagai metode lain yang efektif (Waluyo, 2013).
Media merupakan suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang
digunakan sebagai penumbuh mikroorganisme baik dalam mengkultur bakteri,
jamur, dan mikroorganisme lain. Suatu media dapat menumbuhkan
mikroorganisme dengan baik bila memenuhi persyaratan antara lain kelembapan
yang cukup, pH yang sesuai, kadar oksigen baik, media steril dan media harus
mengandung semua nutrisi yang mudah digunakan mikoorganisme (Waluyo,
2013).
Sterilisasi merupakan tahapan penting yang wajib dilakukan dalam
produksi obat obatan dalam bidang kefarmasian. Bahan dan alat yang digunakan
pada produksi obat-obatan harus dalam keadaan steril, dimana bisa dijelaskan
bahwa sterilisasi adalah proses penghilangan atau membunuh mikroorganisme
(protozoa, fungi, bakteri, mycoplasma, virus) dalam benda/peralatan untuk
menjaga peralatan dilaboratorium tetap bersih/steril, serta mencegah terjadinya
kontaminasi (Istini, 2020).
Sediaan steril memiliki beberapa sifat bentuk takaran yang unik, seperti
bebas dari mikroorganisme, pirogen dan bebas dari partikulat serta memiliki
standar yang sangat tinggi dalam hal kemurnian dan kualitas. Tujuan utama
pembuatan sediaan steril adalah mutlak tidak adanya kontaminasi mikroba.
Kontaminasi dapat berasal dari beberapa penyebab yaitu sterilisasi media yang
kurang sempurna, lingkungan kerja dan pelaksanaan cara kerja saat penanaman,
eksplan, molekul-molekul atau benda-benda asing berukuran kecil yang jatuh
atau masuk ke dalam botol kultur setelah penanaman dan ketika diletakkan di
ruangan (Syah, 2016).
Sterilisasi dapat dilakukan dengan metode panas basah atau panas kering,
radiasi, gas etilen oksida dan dengan filtrasi menggunakan proses pengisian ke
wadah akhir yang aseptik (Syah, 2016).
Sterilisasi dapat berjalan baik bila seorang praktikan sebelumnya telah
dibekali dengan pengetahuan mengenai pengenalan alat sehingga pada uji coba.
ini tujuan sterilisasi dapat tercapai dimana peralatan serta bahan yang
x
disterilisasi tersebut tidak rusak dan juga dapat dengan tepat mengambil
keputusan metode sterilisasi yang akan dipakai (Syah, 2016).
B. Tujuan
Adapun tujuan dari praktikum ini yaitu untuk mengetahui apa saja alat – alat
laboratorium, alat alat sterilisasi dan untuk mengetahui cara pembutan media.
C. Manfaat
Adapun manfaat dari praktikum ini adalah kita dapat mengetahui apa – apa
saja yang termasuk dalam alat – alat laboratorium , sterilisasi dan cara pembuatan
suatu media.
xi
BAB II. TINJAUAN PUSTALA
A. Alat dan Bahan

Alat-alat laboratorium mikrobiologi seperti lemari pengeram (inkubator),
autoklaf, rak dan tabung reaksi, beker glass, pipet hisap, pipet ukur, pinset, cawan
petri, lidi kapas steril, lampu spritus, ose. Pengujian total mikroba dilakukan
dengan menggunakan metode cawan. Metode hitungan cawan palig banyak
digunakan untuk menghitung jumlah mikroba pada bahan pangan. Medium yang
digunakan antara lain, medium plate count agar (PCA), tabung reaksi, cawan
petri, pipet, inkubator (Juwitasari, 2018).
Pembakar Bunsen, untuk mensterilkan peralatan seperti ose, jarum, dan
spatula dengan cara membakar ujung peralatan tersebut di atas api bunsen sampai
berpijar. Oven, untuk mensterilkan cawan petri dan pipet volume. Penggunaan
alat ini dengan memasukkan alat-alat tersebut kedalam oven dan dipanaskan
dengan suhu 160 - 170oC selama 1-2 jam. Autoklave, untuk mensterilkan tabung
reaksi bertutup dan erlenmeyer. Penggunaan alat ini dengan memasukkan alat-alat
tersebut kedalam autoklave yang ditutup dengan rapat dan nyalakan autoklave
dengan temperature 121℃ dan tekanan antara 15-17,5 psi (pound per square inci)
atau 1 atm selama 1 jam (Khaeruni, 2017)
Autoklaf atau dikenal dengan metode sterilisasi panas basah biasanya
sterilisasi yang menggunakan bantuan alat autoklaf dengan tekanan bersaturasi.
Berikut ini merupakan siklus (cycle) yang akan menjamin proses sterilisasi di
dalam autoklaf menjadi efektif: 3 menit pada suhu 134oC ; 10 menit pada suhu
126oC ; 15 menit pada suhu 121oC ; 25 menit pada suhu 115oC ( Zahid, 2010).
Batang pengaduk Berfungsi untuk Mengaduk larutan dan memindahkan
laruan dari wadah ke wadah lainnya (Wardiyah,2016). Prinsip kerja Penggunaan
batang pengaduk saat memindahkan cairan dimaksudkan agar cairan tidak
memercik (Machmud, 2015).
Cawan petri untuk Cawan dangkal transparan yang digunakan untuk media
penumbuhan sel yang dapat dikultur (Dubey,2019). Prinsip kerjanya Cawan petri
memiliki permukaan yang luas, sehingga dapat mempercepat penguapan jika tidak
xii
ditutup (Machmud, 2015). Corong untuk Memindah larutan ke wadah yang
mempunyai dimensi pemasukkan sampel bahan lebih kecil (Wardiyah,2016).
Corong merupakan alatberbentuk kerucut dan terdapat bagian seperti tabung
yang sempit (Wardiyah,2016). Cover glass untuk Menutup objek yang terdapat
pada objek glass (Raudah, 2017). Terbuat dari gelas yang lebih tipis dari objek
glass (Raudah, 2017).
Erlenmeyer Digunakan untuk larutan yang dititrasi dalam Analisa volumeteri
(Wardiyah,2016). Fungsi lainnya adalah menjadi wadah bahan kimia cair.
Lehernya yang sempit memambahkan keuntungan dari labu Erlenmeyer untuk
mengurapi penguapan zat cair ketika pemanasan dan menghindari tumpahnya
cairan saat proses pengadukan (Wardiyah,2016).
Gelas beaker Berfungsi sebagai penampung (Manasikana, 2012). Menjadi
wadah larutan yang masih memerlukan pekerjaan lain, tempat melarutkan zat,
tempat memanaskan, menguapkan larutan/air untuk bejana titrasi dengan
menggunakan bantuan pengaduk dan sebagainya (Manasikana, 2012).
Gelas ukur untuk Mengukur cairan dengan skala tertentu (Dubey, 2019).
Penggunaan gelas ukur sebagai alat pengukuran dipakai ketika keakurasian tinggi
saat mengukur volume tidak terlalu diperhatikan Jarum ose untuk Memindahkan
mikroba dari satu medium ke medium lainnya / melakukan pengamatan
(Juwitasari, 2018). Ose disentuhkan pada bagian mikrobia kemudian
menggosokkan pada kaca preparat untuk diamati atau dipindahkan ke medium
lainnya (Juwitasari, 2018). Labu ukur Untuk pengenceran yang lebih presisi
(Wardiyah, 2016).
Labu ukur bisa digunakan untuk menyisakan larutan kimia analitik dengan
konsentrasi dan jumlah yang berakurasi tinggi. Keakuratan yang tinggi ini
dikarenakan oleh bagian lehernya yang terdapat sebuah lingkaran gradasi
(Kartikorini et al,2018). Objek glass untuk Menyangga objek untuk diteliti pada
bawah mikroskop (Michael, 2010). Terbuat dari gelas tipis. Objek diletakkan di
atas gelas ini, lalu ditutup oleh cover glass (Wardiyah, 2016).
B. Sterilisasi
Sterilisasi adalah proses yang dirancang untuk menciptakan keadaan steril.
Secara tradisional keadaan steril adalah kondisi mutlak yang tercipta sebagai
xiii
akibat penghacuran dan penghilangan semua mikroorganisme hidup. Konsep ini
menyatakan bahwa steril adalah istilah yang mempunyai konotasi relatif dan
kemungkinan menciptakan kondisi mutlak bebas dari mikroorganisme hanya
dapat diduga atas dasar proyeksi kinetis angka kematian mikroorganisme
(Suardani, 2014).
Sterilisasi menunjukkan kondisi yang memungkinkan terciptanya
kebebasan penuh dari mikroorganisme dengan keterbatasan tertentu. sedangkan
aseptis menunjukkan proses atau kondisi terkendali di mana tingkat kontaminasi
mikroba dikurangi sampai suatu tingkat tertentu dimana mikroorganisme dapat
ditiadakan pada suatu produk (Suardani, 2014)
Metode sterilisasi dapat digolongkan menjadi dua, yaitu metode sterilisasi
dengan cara panas dan sterilisasi dengan cara dingin. Metode sterilisasi dengan
cara panas dibagi menjadi sterilisasi panas kering (menggunakan oven pada suhu
160-1800C selama 30-240 menit), dan sterilisasi panas basah (menggunakan
autoklaf dengan suhu 1210C dengan tekanan 15 psi, selama 15 menit). Metode
sterilisasi dengan cara dingin dapat dibagi menjadi dua, yaitu teknik
removal/penghilangan bakteri, dan teknik membunuh bakteri. Teknik removal
dapat menggunakan metode filtrasi dengan membran filter berpori 0,22µm.
Teknik membunuh bakteri dapat menggunakan radiasi (radiasi sinar gama
menggunakan isotop radioaktif Cobalt 60) dan gas etilen oksida (dengan dosis 25
KGy). Metode lain untuk membunuh bakteri dengan menggunakan cairan kimia
seperti formaldehida, tidak dapat digunakan karena memiliki efek toksik terhadap
bahan yang disterilkan (Mitra Prima, 2012)
Titik kritis sterilisasi, selain melakukan prosedur sterilisasi dengan benar,
juga memilih metode sterilisasi yang tepat berdasarkan sifat fisika kimia bahan
aktif, terutama stabilitas alat/bahan terhadap panas. Alat yang tahan. akan
pemanasan, misalnya: beaker glass, gelas kimia, erlenmeyer, batang pengaduk,
batang pipet, dapat dilakuakn sterilisasi menggunakan cara panas, baik panas
basah (autoklaf) ataupun panas kering (oven). Alat yang tidak tahan panas,
misalnya tutup pipet, wadah sediaan yang terbuat dari plastik tidak tahan panas,
dapat disterilkan dengan menggunakan cara dingin, misalnya dengan dialiri gas
etilen oksida atau disterilkan dengan cara radiasi. Apabila tidak memungkinkan
xiv
dilakukan sterilisasi dengan cara tersebut, maka dilakukan desinfeksi dengan cara
merendam alat tersebut dalam alkohol 70% selama 24 jam (hal ini belum
menjamin sterilitas alat) (Mitra Prima, 2012)
Untuk sterilisasi bahan, selain memperhatikan stabilitas bahan terhadap
panas, perlu kita perhatikan bentuk bahan. Untuk bahan dengan bentuk serbuk,
semisolida, liquid berbasis non air (misalnya cairan berminyak) yang stabil
terhadap pemanasan, maka pilihan metode utama untuk sterilisasi adalah
menggunakan panas kering (oven). Bila bentuk bahan yang akan disterilisasi
adalah likuida berbasis air, maka pilihan utama sterilisasinya adalah menggunakan
panas basah (autoklaf) (Mitra Prima, 2012)
Bila bahan yang akan disterilisasi adalah cairan dengan pembawa air,
maka metode ke-1 bahan dapat disterilisasi dengan menggunakan autoklaf,
dengan suhu 1210C selama 15 menit, maka dipilih metode sterilisasi cara panas
kering menggunakan autoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit. Bila tidak, maka
metode ke-2 perlu kita pastikan, apakah bahan tersebut dapat tetap disterilkan
dengan autoklaf, akan tetapi kita hitung terlebih dahulu nilai F0. Untuk
memperoleh nilai FO maka kita perlu mengetahui jumlah mikroba yang ada pada
sediaan, kemudian resistensi mikroba yang ada pada bahan. Dengan mengetahui
keduanya, kita melakukan sterilisasi menggunakan autoklaf dengan metode
bioburden, yaitu berdasarkan jumlah dan resistensi bakteri yang terdapat dalam
sediaan sebelum dilakukan sterilisasi (Mitra Prima, 2012)
Apabila metode ke-2 tidak dapat dilakukan, karena bahan tidak stabil
terhadap panas, maka metode sterilisasi yang dipilih adalah filtrasi, yaitu proses
menghilangkan bakteri dengan cara menyaring menggunakan membran filter
berukuran 0,22 µm. Biasanya sebelum menggunakan filter dengan ukuran
tersebut, terlebih dahulu disaring menggunakan membran filter berukuran 0,45
µm. Apabila cara ke-3 tidak dapat dilakukan, maka proses pembuatan dilakukan
dengan metode aseptik, tanpa dilakukan sterilisasi akhir (Mitra Prima, 2012)
xv
BAB III. METODOLOGI PRATIKUM
A. Waktu dan Tempat

Praktikum pengantar bakteriologi Tumbuhan ini dilaksanakan pada
tanggal 21 September 2023, di Laboratorium Mikrobiologi Departemen Proteksi
Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Andalas.
B. Alat dan Bahan
Adapun alat yang digunakan pada praktikum ini yaitu autoklaf, erlenmeyer,
spatula, neraca analitik, magnet stirrer, hot plate, gelas ukur, mikropipet, lampu
spritus, timbangan digital, tabung reaksi, vortex mixer, petridish, laminar air flow,
jarum ose, objek glass, cover glass, mikroskop, pipet tetes, jarum suntik, gunting.
Adapun bahan yang digunakan pada praktikum pengenalan alat, bahan dan
sterilisasi yaitu akuades 270 ml, nutrient agar (NA) 5,4 gram, air
C. Prosedur Kerja
pembuatan NA yaitu digunakan NA Instan sebanyak 7 gram, ditimbang
dengan menggunakan timbangan analitik lalu dimasukkan ke dalam botol schott,
dimasukkan aquades 250 ml, di homogenkan kedua bahan tersebut, lalu ditutup
botol dengan menggunakan aluminium foil. Jika kedua media sudah selesai
masukkan botol media tersebut ke dalam autoklaf dan ditunggu hingga autoklaf
berbunyi 3x atau kurang lebih 15 menit dengan suhu 121oC.
xvi
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
Tabel 1. Pengenalan alat
No Gambar Keterangan
1 Pipet tetes berfungsi untuk
memindahkan larutan dari suatu
wadah ke wadah lain dengan jumlah
yang sangat sedikit
2 Cawan petri berfungsi sebagai

tempat membiakan mikroorganisme
3 Autoklaf digunakan untuk

mensterilkan benda dengan cara uap
bersuhu dan bertekanan tinggi
dengan suhu (121oC) selama 15
menit
4 Neraca analitik digunakan untuk

menimbang masa kecil dalam
rentang miligram
xvii
5 Botol scoot berfungsi untuk
meletakan media yang sudah
dihomogenkan
6 Gelas ukur bergungsi sebagai alat

ukur volume, bahan cair dan
ketelitian rendah
7 Gelas piala berfungsi sebagai tempat

mereaksikan bahan dan tempat
menampung bahan kimia berupa
larutan padatan
8 Mikroskop berfungsi sebagai

mengamati objek yang sangat kecil
sehingga tidak bisa dilihat dengan
mata telanjang
9 Erlenmeyer berfungsi untuk

melakukan pencampuran bahan
bahan analisa dan juga sebagai
tempat melakukan titrasi bahan
xviii
10 Spatula berfungsi sebagai membantu
proses pengambilan media yang
berupa tepung, , kering.
Tabel 2. Pengenalan media

1
Nutrient agar (NA)
Tabel 3. Sterilisasi
1
Sterilisasi basah dengan cara uap
B. Pembahasan
Pada pratikum bakteriologi dengan judul pengenalan alat , bahan dan juga
sterilisasi ini dilakukan pengenalan alat-alat laboratorium yang akan
memungkinkan untuk mendukung kegiatan pratikum berlangsung. Pengenalan
alat ini berguna bagi pratikan sebelum melakukan kegiatan pratikum selanjutnya
xix
yang lebih teliti. Hal ini bertujuan utnuk menghindari penyalahgunaan alat yang
berakibat fatal. Dan dengan adanya pengenalan alat ini pratikan lebih mengerti
dan lebih berhat-hati dalam penggunaan alat-alat laboratorium agar pratikum
berjalan dengan lancar.
Nutrient Agar (NA) juga dibuat dilab, namun menggunakan bahan instan.
Penggunaan NA instan dikarenakan bahan yang terkandung didalam medium
ialah beef ekstrak, pepton, dan agar murni. Walaupun menggunakan bahan instan,
nutrisi yang terkandung didalam bahan ini cukup kompleks dan mampu membuat
mikroba tumbuh.
Tahap akhir dari pembuatan media yaitu sterilisasi menggunakan autoclaf.
Autoclaf ialah alat sterilisasi basah dengan metode uap dan digunakan selam 15
menit atau 3x bunyi dengan suhu 121oC. Pada pembuatan medium NA, larutan
diukur pH nya menggunakan kertas lakmus. Derajat keasaman (pH) merupakan
salah satu faktor penting dalam pertumbuhan bakteri, hal ini mempengaruhi tinggi
rendahnya densitas bakteri yang dihasilkan. Nilai pH minimum dan maksimum
untuk pertumbuhan bakteri pada umumnya yaitu 4-9, namun pH yang paling
optimal berkisar antara 6,5-7,5.
Media yang digunakan dalam pertumbuhan bakteri adalah Nutrient Agar
(NA) instant. Yang dimana media ini sudah memiliki bahan-bahan pendukung
dalam pertumbuhan mikroba sehingga pada saat pembuatan media, kita hanya
menghomogenkan bubuk media NA instant tersebut dengan aquadeset steril.
Setelah itu, media tersebut dilakukan sterilisasi.
Menurut Suardani (2014) sterilisasi merupakan kegiatan yang dilakukan
untuk mematikan mikroorganisme sebelum dan sesudah digunakannya alat dana
bahan. Sterilisasi ini terbagi menjadi 4 yaitu sterilisasi mekanik, fisik, sinar UV,
dan kimiawi. Sterilisasi mekanik berupa filtrasi yang biasanya menggunakan
larutan enzim antibiotik atau bahan-bahan yang tidak toleran terhadap panas.
Sterilisasi secara fisik, biasanya menggunakan penyinaran,penggunaan autoclaf
yang membutuhkan uap dan tekanan dalam melakukan sterilisasi. Sterilisasi
dengan sinar UV, memanfaatkan sinar dengan gelombang tertentu yang dapat
mematikan kuman atau virus. Sterilisasi kimiawi merupakan sterilisasi yang
dibantu dengan bahan kimia, seperti penggunaan alkohol 70% atau alkohol 90%.
xx
Media merupakan bahan yang digunakan untuk pertumbuhan
mikroorganisme. Media tersebut harus mengandung semua zat hara yang
dibutuhkan oleh mikroorganisme seperti nutrisi, tekanan osmosis, tegangan
permukaan, dan pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroba yang akan
ditumbuhkan. Sebelum pengembangbiakan mikroba dilakukan harus dipastikan
terlebih dahulu bahan dan alat digunakan tersebut telah dilakukan sterilisasi. Hal
ini bertujuan untuk menghindari kontaminasi dari mikroba yang tidak diinginkan.
xxi
BAB V. PENUTUP
A. Kesimpulan
Adapun kesimpulan pada pratikum ini adalah media Na imedium umum
yang sering digunakan dilaboratorium karena ekonomis dan mudah didapat.
Medium NA sangat cocok untuk pertumbuhan bakteri karena memiliki pH netral.
B. Saran
Adapun saran pada pratikum adalah semua pratikan menguasai materi
percobaan, cermat, teliti, dan memerhatikan asisten saat melakukan uji. Dalam
melakukan pratikum, pratikan diwajibkan menggunakan jas labaor sebelum
memasuki ruangan labor.
xxii
DAFTAR PUSTAKA
Juvitasari, P. M., Melati, H. A., & Lestari, I. (2018). Deskripsi Pengetahuan Alat
Praktikum Kimia Dan Kemampuan Psikomotorik Siswa Man 1 Pontianak.
J. Pendidikan Dan Pembelajaran Khatulistiwa, 7(7), 1–13
Khaeruni, Andi, dan Vit Neru Satrah. 2017. Penuntun Praktikum Mikrobiologi
Pangan. Universitas Halu Oleo. Kendari.
Machmud, M. 2015. Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan Mikroba. Balai
Penelitian Bioteknologi Tanaman Pangan. Bogor.
Manasikana, O. A,. Ashadi dan Haryono, 2012, Pembelajaran IPA Melalui
Metode Inkuiri Terbimbing Dan Proyek Ditinjau Dari Kreativitas Dan
Kemampuan Menggunakan Alat Laboratorium. Jurnal Inkuiri. No. 1 Hal.
28-29.
Raudah, dkk. 2017. Efektivitas Sterilisasi Metode Panas Kering Pada Alat Medis
Ruang Perawatan Luka Rumah Sakit Sr. H Soemarno Sasroatmodjo Kuda
Kapuas. Banjar Baru: Jurnal Kesehatan Lingkungan. Vol 14. No. 1: 425-
430.
Rukmana,2013. Alat Laboratorium Mikrobiologi. Universitas Tadulako.Palu.
Suardani, dkk. 2014. Identifikasi E Colli 0157:H7 dari Feses Ayam dan Uji Profil
Hemolisisinya Pada Media Agar Darah. Jurnal Kedokteran Hewan. Vol 8.
No. 1.
Suhardi, S.H., Koesnandar, D. K. Indriani, H. Arnaldo, 2015. Biosafety: Pedoman
Keselamatan Kerja di Laboratorium Mikrobiologi dan Rumah sakit. PT.
Multazam
Mitra Prima. Syukri, S. 2012. Kimia Dasar. ITB. Bandung. Tandra. 2013. Analisis
Mikrobiologi di Laboratorium. Jakarta: Pustaka Harapan
Wardiyah (2016). Praktikum Kimia Dasar. Jakarta Selatan: KEMENKES RI.
Waluyo, L. 2013. Sterilisasi. UMM Press : Malang
xxiii
MATERI II
ISOLAT BAKTERI
xxiv
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar belakang
Selama mempelajari mikroba, kita tahu satu hal bahwa ukuran
mikroorganisme atau mikroba sangat kecil, oleh karena itu informasi yang dapat
diperoleh tentang sifat-sifatnya dari pemeriksaan terhadap individu itu terbatas.
Pengamatan sifat-sifat seperti bentuk, susunan, permukaan, pengkilatan dan
sebagainya dapat dilakukan dengan pandangan biasa tanpa menggunakkan
mikroskop, pengamatan ini disebut pengamatan makroskopi. Supaya sifat-sifat
tersebut tampak jelas, bakteri perlu dibiakkan pada medium padat yaitu dengan
cara isolasi bakteri. Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di
alam dan menumbuhkannya dalam suatu medium buatan (Hidayat, 2018)
Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan
mikroba lainnya yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. Cara
isolasi bakteri dilakukan dengan metode tuang (pour plate), metode goresan
(streak plate), metode miring (slant culture), dan metode tegak (stab culture)
(Marwani, 2015).
Praktikum kali ini kami semua menggunakan medium NA (Nutrien Agar).
Dimana medium ini berfungsi sebagai tempat mikroba itu tumbuh.
Mikroorganisme yang dibiakkan di laboratorium pada medium yang terdiri dari
bahan nutrient. Biasanya pemilihan medium yang dipakai bergantung kepada
banyak faktor seperti seperti apa jenis mikroorganisme yang akan ditumbuhkan.
Perbenihan untuk pertumbuhan bakteri agar dapat tetap dipertahankan harus
mengandung semua zat makanan yang diperlukan oleh organisme tersebut. Faktor
lain seperti PH, suhu, dan pendinginan harus dikendalikan dengan baik (Marwani,
2015).
Mikroorganisme pada suatu lingkungan alami merupakan populasi
campuran dari berbagai jenis, baik mikroorganisme pada tanah, air, udara,
makanan, maupun yang terdapat pada tubuh hewan maupun tumbuhan.
Pemisahan suatu bakteri diperlukan untuk mengetahui suatu jenis, mempelajari
kultural, morfologi, fisiologi, dan karakteristik. Teknik pemisahan tersebut
disebut isolasi yang disertai dengan pemurnian. Pengertian isolasi bakteri yaitu
xxv
suatu proses mengambil bakteri dari medium atau dari lingkungan asalnya lalu
menumbuhkannya di medium buatan sehingga diperoleh biakan yang murni
(Sabbathini et, al 2017). Isolasi merupakan teknik memperoleh kultur murni
dengan cara memisahkan satu jenis sel mikroba dari campuran mikroba lainnya.
Tujuan isolasi dalam penelitian ini adalah untuk memperoleh sebuah kultur murni
(Kusumaningrum, 2015,).
Isolasi merupakan suatu cara untuk memisahkan mikroba dalam hal ini
bakteri dari sampel atau alam dan menumbuhkannya dalam media kultur secara in
vitro sehingga diperoleh biakan murni. Adapun faktor-faktor yang mempengaruhi
hasil kultur mikroba adalah jenis media kultur, sifat mikroba dan metode atau
teknik laboratorium (Kambey, 2016). Medium pertumbuhan dapat berbentuk cair,
padat atau semisolid. Pertumbuhan bakteri pada media cair ditandai dengan
kekeruhan media, sedang pada media padat ditandau dengan terbentuknya koloni.
Medua semisolis umumnya dipergunakan untuk melihat motilitas bakteri. Media
pertumbuhan mikroba diperkaya dengan asam amino, vitamin, sumber karbon dan
sumber nitrogen (Marwani, 2015).
Media kompleks merupakan media yang mengandung seluruh komponen-
komponen yang dibutuhkan oleh mikroorganisme dan komponennya tidak
diketahui dengan pasti. Media ini umumnya kaya akan nutrisi sehingga membantu
pertumbuhan mikroorganisme yang kita inginkan. Beberapa ekstrak seperti
ekstrak daging, khamir, tanah, dan daun tersebut sering digunakan untuk isoasi
atau menumbuhkan mikroorganisme tertentu (Hidayat, 2018)
Mikroorganisme memegang peranan penting di lingkungan sebagai
pengurai bahan limbah organik menjadi unsur (N, P, K, Ca, Mg, dan lain-lain)
yang dikembalikan ke dalam tanah dan atmosfer (CH4 atau CO2).
Mikroorganisme secara alami memiliki kemampuan untuk mengubah limbah
organik menjadi materi yang bernilai contohnya sebagai nutrisi baik makro
maupun mikro pada tanaman dan mereduksi rasio C:N untuk mendukung
produktivitas tanah. Mikroorganisme tersebut juga berperan penting dalam aliran
nutrisi sehingga sistem ekologi tetap seimbang. Bakteri sebagai perombak bahan
organik mampu mempercepat proses degradasi bahan organik sehingga disebut
juga aktivator biologis. Bahan organik yang terkandung dalam limbah organik
xxvi
yang berada di tanah tempat pembuangan sampah perkotaan akan digunakan
sebagai sumber energi dan sumber karbon oleh bakteri (Saha dan Santra, 2014).
B. Tujuan
Adapun tujuan dari praktikum isolasi bakteri ini adalah untuk mengetahui
bagaimana cara isolasi bakteri dan mengetahui hasil akhir dari isolasi bakteri
tersebut.
C. Manfaat
Adapun manfaat dari praktikum ini adalah Mengetahui bagaimana cara
membuat isolasi bakteri.
xxvii
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA
A. Isolasi bakteri
Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di alam dan
menumbuhkannya dalam suatu medium buatan. Prinsip dari isolasi mikroba
adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari
campuran bermacam-macam mikroba. Hal ini dapat dilakukan dengan
menumbuhkannya dalam media padat sel-sel mikroba akan membentuk suatu
koloni sel yang tetap pada tempatnya. Isolasi bakteri atau biakan yang terdiri dari
satu jenis mikroorganisme (bakteri) dikenal sebagai biakan murni atau biakan
aksenik. Biakan yang berisi lebih dari satu macam mikroorganisme (bakteri)
dikenal sebagai biakan campuran, jika hanya terdiri dari dua jenis
mikroorganisme, yang dengan sengaja dipelihara satu sama lain dalam asosiasi,
dikenal sebagai biakan dua-jenis (Buckle, 2018)
Persyaratan utama bagi isolasi dan kultivasi fage adalah harus adanya
kondisi optimum untuk pertumbuhan organisme inangnya. Sumber bakteriofage
yang paling baik dan paling utama adalah habitat inang. Sebagai contoh fage koli
yang di jumpai di dalam pencernaan dapat diisolasi dari limbah atau pupuk
kandang. Hal ini dilakukan dengan sentifugasi atau filtrasi bahan sumbrnya dan
penambahan kloroform untuk membunuh sel-sel bakterinya (Adams, 2000).
Ada beberapa cara yang digunakan untuk bakteri, fungi, dan khamir
dengan metode garis, metode tuang, metode sebar, metode penuangan, serta
micromanipulator. Dua diantaranya yang paling sering banyak digunakan adalah
teknik cawan tuang dan cawan gores. Kedua metode ini didasarkan pada prinsip
yang sama yaitu mengencerkan organisme sedemikian rupa sehingga individu
species dapat dipisahkan (John Wiley, 2015)
Mikroorganisme dibiakkan di laboratorium pada medium yang terdiri dari
bahan nutrient. Biasanya pemilihan medium yang dipakai bergantung kepada
banyak faktor seperti seperti apa jenis mikroorganisme yang akan ditumbuhkan.
Perbenihan untuk pertumbuhan bakteri agar dapat tetap dipertahankan harus
mengandung semua zat makanan yang diperlukan oleh organisme tersebut. Faktor
xxviii
lain seperti PH, suhu, dan pendinginan harus dikendalikan dengan baik (Buckle,
2018)
Selain untuk tujuan diatas medium juga memiliki fungsi lain, seperti
tempat untuk mengisolasi, seleksi, evaluasi dan diferensiasi biakan yang
didapatkan. Agar tiap-tiap medium memilki karakteristik yang sesuai dengan
tujuan sehingga seringkali digunakan beberapa jenis zat tertentu yang mempunyai
pengaruh terhadap pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroba (Hidayat et.al
2018). Beberapa indikasi pembiakan pada laboratorium mikrobiologi meliputi:
Pengasingan (isolasi) mikroba pada biakan bakteri, menunjukan sifat khas
mikroba, untuk menentukan jenis mikroba yang diisolasi dengan cara-cara
tertentu, untuk mendapatkan bahan biakan yang cukup untuk membuat antigen
dan percobaan serologi lainnya, menentukan kepekaan kuman terhadap
antibiotik, menghitung jumlah kuman, mempertahankan biakan mikroba
(Sabbathini, 2017).
Mikroorganisme tidak memerlukan banyak ruangan untuk
perkembangannya, sebab itu media buatan (agar) dapat dimasukkan ke dalam
sebuah tabung percobaan labu atau cawan Petri. Pada permulaannya tabung atau
cawan Petri harus dalam keadaan steril lalu setelah itu dimasukkan mikrobia yang
diinginkan, tabung atau cawan harus dilindungi terhadap kontaminasi dari luar.
Sumber utama pencemaran dari luar adalah udara, yang banyak mengandung
mikroorganisme yang berterbangan. Bentuk cawan petri, dengan tutup yang saling
menyelubungi, dirancang untuk mencegah pencemaran udara. Pencemaran tabung
atau labu dihindari dengan cara menyumbat mulutnya dengan penutup yang
cocok, biasanya dengan kapas (Suriawiria, 2014).
Permukaan luar cawan biakan yang menjadi sasaran pencemaran, dan
bagian dalam labu atau tabung akan tercemar bila dibuka untuk memasukkan atau
mengeluarkan bahan. Bahaya ini dapat dihindari dengan cara membakar bibir atau
pinggiran cawan, tabung atau labu dalam api, segera setelah penutup dibuka dan
dibakar sekali lagi pada waktu akan ditutup (Suriawiria, 2014).
Pentingnya mengisolasi suatu mikroba dari lingkungan, seperti pada
makanan (substrat padat), minuman (substrat cair), dan pada diri sendiri
dikarenakan banyaknya mikroba yang sulit untuk diamati atau dibedakan secara
xxix
langsung menggunakan panca indera. Sehingga dengan isolasi akan
mempermudah untuk melihat dan mengamati bentuk-bentuk pertumbuhan
mikroba pada beberapa medium serta dapat melihat morfologi dari mikroba
tersebut. Selain teknik pertumbuhan mikroba, dikenal juga teknik isolasi mikroba
yaitu inokulasi yang merupakan suatu teknik pemindahan suatu biakan tertentu
dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tujuan mendapatkan biakan
murni tanpa adanya kontaminasi dari mikroba yang tidak diinginkan. Sebelum
diinokulasi tangan dan tempat kerja disemprot dengan alkohol dengan
menggunakan metode aseptik, jarum inokulasi disterilkan dengan membakarnya,
dengan api sampai jarum tersebut pijar (Ghoni, 2013).
Tujuan dari pemindahan biakan, untuk menguasai teknik pemindahan
biakan bakteri dari satu wadah ke wadah lainnya, secara aseptik sehingga hanya
biakan murni yang diharapkan yang akan tumbuh. Teknik aseptik adalah teknik
yang digunakan dalam pencegahan kontaminasi media kultur steril. Hal ini sangat
penting dalam tahap awal isolasi mikroba terutama yang berasal dari stok kultul
(bukan dari substrat). Kegagalan dalam hal pemindahan biakan dapat
menyebabkan kontaminasi dari pertumbuhan mikroba yang tidak diharapkan
(Dwyana, 2012).
Pemindahan biakan mikroorganisme dapat ditumbuhkan dalam biakan cair
atau padat. Kekeruhan pada medium cair menunjukkan terjadinya pertumbuhan
mikroorganisme. Bila mikroorganisme menumpuk pada dasar tabung maka akan
membentuk sedimen, sedangkan pada permukaan medium pertumbuhannya
terlihat sebagai pelikel (Kambey, 2016).
Pertumbuhan mikroorganisme dalam medium cair, seringkali
menggambarkan aktivitas metabolismenya. Mikroba aerob obligat berkembang
biak pada lapisan permukaan karena pada bagian ini kandungan oksigen tinggi.
Selain dalam media cair, mikroorganisme juga memperlihatkan pertumbuhan
dengan ciri tertentu dalam biakan padat seperti agar miring atau lempengan agar.
Agar miring lazimnya digunakan untuk menyimpan biakan murni sedangkan agar
lempengan lazimnya digunakan untuk memurnikan mikroorganisme (Kambey,
2016).
xxx
Biakan murni diperlukan dalam berbagai metode mikrobiologis, antara
lain digunakan dalam mengidentifikasi mikroba. Untuk mengamati ciri -ciri
kultural morfologi, fisiologi dan serologi dibutuhkan mikroba yang berasal dari
satu spesies. Hal ini sangat penting dalam tahap awal pekerjaan isolasi mikroba
terutama yang berasal dari stok kultur (bukan dari substrat). Kegagalan dalam hal
pemindahan biakan dapat menyebabkan kontaminasi dari pertumbuhan mikroba
yang tidak diharapkan (Dwyana, 2012).
xxxi
A. Waktu dan Tempat

Praktikum Pengantar Bakteriologi Tumbuhan ini dilaksanakan pada
tanggal 21 September 2023, di Laboratorium Mikrobiologi Departemen Proteksi
Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Andalas.
B. Alat dan Bahan
Adapun alat yang digunakan pada praktikum ini yaitu Bunsen, cawan petri,
mikropipet, gelas piala, mortar, vortex dan tabung reaksi, autoklaf, spatula, neraca
analitik, gelas ukur, lampu spritus, petridish, laminar air flow, jarum ose,
Adapun bahan yang digunakan pada praktikum yaitu aquades, bayclin, daun
padi yang terserang Xanthomonas oryzae pv oryzae, dan tanah perakaran tanaman
cabai.
C. Prosedur Kerja
Prosedur kerja yang dilakukan pada pratikum isolasi dan pemurnian
bakteri yaitu Untuk cara kerja isolasi dimasukkan alkohol 70% dan NAOCL ke
dalam cawan petri, lalu dipotong daun tanaman padi yang terserang gejala dan
direndam dalam alkohol 60 detik, NAOCL 30 detik, dan alkohol 60 detik,
selanjutnya dikering anginkan menggunakan tisu beberapa menit. Dimasukkan
daun ke dalam mortal dan dimasukkan aquades steril ke dalam mortal, lalu daun
digerus hingga hancur dan diambil isolat cair, selanjutnya dimasukkan ke dalam
botol scoot. Kemudian ambil isolat cair menggunakan mikropipet sebanyak 0,1 ml
dan diletakkan ke dalam cawan petri, lalu diratakan hingga larutan kering, ditutup
cawan petri menggunakan plastik wrap, dan diinkubasi
Cara kerja pemurnian perakaran tanah tanaman cabai, ditimbang tanah
sebanyak 1 gram, dimasukkan ke dalam testup, ditambahkan aquades 9 ml, dan
dihomogenkan campuran tersebut dengan menggunakan vortex, selanjutnya
diambil larutan dengan menggunakan mikropipet sebanyak 1 ml dan dimasukkan
ke dalam testup untuk mendapatkan pemurnian 10 -2, selanjutnya di vortex larutan
selama beberapa menit dan diambil larutan tersebut dengan menggunakan
mikropipet sebanyak 1ml, dimasukkan ke dalam tekstur untuk mendapatkan hasil
pemurnian 10-3, dilakukan hal yang sama hingga pemurnian 10-6 atau 10-7. Jika
xxxii
telah selesai diambil cawan petri yang sebelumnya sudah disterilisasi dengan
menggunakan bunsen dan diambil hasil pemurnian menggunakan mikropipet
sebanyak 0,1 ml dan diletakkan ke dalam cawan petri, lalu diratakan hingga
larutan kering, ditutup cawan petri menggunakan plastik wrap, dan diinkubasi.
xxxiii
A. Hasil
Tabel 4. Isolasi Bakteri
1
Bakteri patogen hayati
Depan Belakang
3
Bakteri patogen
Depan Belakang
B. Pembahasan
Pada pratikum bakteriologi dengan judul isolat bakteri yaitu menggunakan
perakaran tanaman cabai dan daun padi yang terserang Xanthomonas oryzae pv
oryzae. Teknik dari isolasi mikroba ada beberapa metode yaitu dengan metode
gores, metode tuang, metode sebar, metode pengenceran. Metode-metode ini
berdasarkan pada prinsip yang sama yaitu dengan mengencerkan organisme
sedemikian sehingga tiap individu spesies dapat dipisahkan dengan lainnya.
Populasi mikroba di lingkungan sekitar sangat beranekaragam sehingga dalam
mengisolasi diperlukan beberapa tahap penanaman sehingga berhasil diperoleh
koloni tunggal. Pada praktikum isolasi bakteri kali ini, kami menggunakan dua
jenis sampel yaitu daun tanaman padi yang terserang penyakit dan tanah dari
perakaran cabe yang terserang penyakit.
Menurut Buckle (2018) solasi mikroba ialah memisahkan atau
memindahkan mikroba tertentu dari lingkungan alamiahnya dan
menumbuhkannya pada media buatan sehingga diperoleh kultur murni. Kultur
murni adalah kultur yang sel-sel mikrobanya berasal dari pembelahan dari satu sel
tunggal. Kultur murni sangat berguna di dalam mikrobiologi yaitu untuk
xxxiv
menelaah dan mengidentifikasi mikroorganisme dan menumbuhkannya sebagai
biakan murni dalam media buatan
Dalam mengisolasi bakteri ini dilakukan metoden pengenceran bertingkat.
Hal ini bertujuan untuk memperkecil atau mengungi jumlah mikroba yang
tersuspensi dalam cairan tersbut. Penentuan besar atau banyaknya tingkat
pengenceran tergantung pada perkiraan jumlah mikroba dalam sampel. Biasanya,
pengenceran ini dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan atau 7 kali pengulangan.
Pengenceran ini menggunakan perbandingan 1:9 untuk sampel dan pengenceran
pertama dan dilakukan selanjutnya. Maka didapatkan media pengenceran 10ˉ⁶
ataupun 10ˉ⁷.
Setelah dilakukan penanaman bakteri ke media maka dilakukan inkubasi
1x24 jam. Biasanya bakteri sudah mulai tumbuh pada masa inkubasi tersebut.
Setelah masa diinkubasi, harus diperhatikan pertumbuhan bakterinya agar tidak
terjadi kontaminasi dengan mikroba lain. seperti yang dapat dilihat pada hasil,
didapatkan jumlah koloni pada media tumbuh dan bertambahn banyak. Hal ini
disebabkan karena bakteri yang ditumbuhkan pada media tumbuh sesuai dengan
karakteristik nutrisi, pH, dan lingkungan yang dibutuhkan oleh bakteri tersebut
sehingga bakteri tdapat tumbuh dengan baik.
Isolasi bakteri adalah proses mengambil bakteri dari medium atau
lingkungan asalnya lalu menumbuhkannya di medium bauatan sehingga diperoleh
biakan yang murni. Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis
mikroba dengan mikroba lain yang berasal dari campuran bermacam-macam
mikroba. Hal ini dapat dilakukan dengan menumbuhkannya dalam media padat,
sel-sel mikroba akan membentuk koloni sel yang tetap pada tempatnya.
Untuk mengidentifikasi mikroorganisme dilakukan dengan
membandingkan ciri-ciri satuan yang ada yang belum diketahui dengan
satuansatuan yang sudah dikenal. Identifikasi suatu biakan murni bakteri yang
diperoleh dari hasil isolasi dapat dilakukan melalui pengamatan ciri-ciri morfologi
koloni serta pengujian fisiologi dan biokimianya. Bakteri dapat diidentifikasi
dengan mengetahui reaksi biokimia tersebut. Sifat metabolisme dalam reaksi ujia
biokima dapat dilihat dari interaksi metabolit-metabolit yang dihasilkan dengan
reagen kimia yang digunakan.
xxxv
Kontaminasi yang terjadi pada pratikum isolasi bakteri ini dapat dilakukan
kultur murni apabila hal ini terjadi karena bahan ataupun alat yang digunakan
tidak steril. Oleh karena itu, sebelum digunakan bahan sebagai sampel dapat
dilakukan sterilisasi permukaan. Sterilisasi permukaan ini dapat dilakukan dengan
menggunakan alkohol 70% dan bayclin yang mengandung NaOCl. Sterilisasi
permukaan ini sangat penting dalam melakukan isolasi bakteri apabila
pengerjaanya sesuai dan waktu perendamannya tepat sehingga tidak ada
kontaminasi mikroba yang terdapat pada permukaan tanaman sampel. Populasi
bakteri dapat diisolasi menjadi biakkan atau kultur murni, yang terdiri dari sepsis,
yaitu kondisi yang dimana terkontaminasi koleh mikroorganisme yang lain dan
yang keberadaanyan tersebut tidak diinginkan. Teknik aseptik ini sangat penting
dalam pengerjaan khususnya dibidang bakteri ini. Selain melindungi labor, juga
dapat menghin dari kontaminasi mikroba lain.
Natrium hipoklorit (NaOCI) atau kalsium hipoklorit atau biasa dikenal
sebagai bayclin merupakan bahan sterilant atau disinfektan yang sering digunakan
untuk sterilisasi permukaan. Beberapa hasil penelitian melaporkan bahwa
sterilisasi dapat menggunakan larutan disinfektan seperti alcohol 70% dan bayclin
yang mengandung NaOCl . Prosedur sterilisasi permukaan merupakan tahap yang
sangat penting dalam pengerjaan isolasi mikroba khususnya bakteri, namun
dengan cara dan waktu perendaman yang tepat sehingga tidak ada kontaminasi
mikroba yang terdapat pada permukaan tanaman sampel.
Dalam mengisolasi mikroba terdapat beberapa faktor yang dapat
mempengaruhi jumlah isolate dari mikroorganisme yaitu, jenis dan kondisi
medium, dimana medium yang akan digunakan harus mengandung nutrisi yang
cukup untuk memenuhi kebutuhan mikroba. Ada beberapa mikroba seperti bakteri
yang kurang efektif tumbuh dalam media pertumbuhan yang umum seperti NA.
Kondisi dalam menginkubasi juga merupakan faktor penting. Kondisi ekstrem
dapat menyebabkan mikroba tidak mampu bertahan hidup.
Langkah dalam mengisolasi harus dilakukan pengenceran terlebih dahulu.
Pengenceran adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari substratnya ke
dalam air sehingga lebih mudah penanganannya. Tujuan pengenceran yaitu untuk
xxxvi
mengurangi kepadatan bakteri yang ditanam. Pengenceran bertingkat yaitu
memperkecil atau mengurangi jumlah mikroba yang tersuspensi dalam cairan.
Mikroorganisme tidak memerlukan banyak ruangan untuk
perkembangannya sebab itu diperlukan media buatan untuk dilakukannya
pertumbuhan dan perkembangan dalm suatu ruang yaitu cawan petri. Cawan petri
yang digunakan harus dalam keadaan steril tanpa adanya mikroorganisme lain
yang hidup dan setelah itu dimasukkan mikroba yang ingin diidentifikasi. Bentuk
cawan petri dengan tutup yang saling menyelubungi, bertujuan untuk mencegah
terjadinya pencemaran udara. Karena di udara terdapat banyak mikroba yang
berterbangan dan apabila mengenai isolat yang diisolasi maka akan terjadi
kontaminasi.
Bentuk bakteri yang telah didapt dari hasil isolasi yang tersedia adalah
berbentuk lapisan pada atas permukaan media dan menyebar diatas permukaan
media. Bentuk dan struktur mikroskopis dari bakteri yang terdapat pada media itu
tidak dapat diketahui dikarenakan tidak dilakukannya pengamatan dengan
menggunakan mikroskop dan hanya terlihat struktur dan bentuk optik kasarnya
yang terlihat dengan mata telanjang. Dan terlihat pada permukaan media lapisan
berwarna putih.
Sebenarnya isolasi bakteri ini juga bertujuan dalam mengidentufikasi
bakteri. Proses identifikasi bakteri secara konvensional berdasarkan karakter
fenotip bakteri seperti pewarnaan gram, morfolgi koloni, dan aktivitas enzim
seringkali tidak berifat statis dan dapat berubah seiring dengan adanya evolusi.
Kesalahan identifikasi seringkali terjadi karena terdapatnya karakteristik bakteri
yang berbda atau yang tidak biasa. Sehingga dibutuhkan isolasi bakteri ini untuk
membantu mengklasifikasi bakteri tersebut secara langsung.
Bakteri dapat di identifikasi dengan mengetahui rekasi biokimia tersebut.
Dengan melakukan enanaman pada media, akan diketahui sifat suatu koloni
bakteri tersebut. Uji biokimia dilakukan untuk mengetahui karakteristik dan
spesifik dari bakteri dengan melihat aktifitas enzim yang dihasilkan, sehingga
mudah diidentifikasi. Dalam mengidentifikasi suatu bakteri dapat dilakukan
dengan mengamti bentuk makroskopis dan mikroskopis. Benntuk makroskopis
dapat diamati melalui bentuk koloni, tepi koloni, warna koloni dan elevasi koloni.
xxxvii
BAB V. PENUTUP
A. Kesimpulan
Isolasi bertujuan untuk memisahkan patogen atau jasad renik dari
lingkungannya untuk mendaptkan biakan murninya. Dengan menggunakan
menggerus daun yang bergejala lalu disebarkan dengan teknik penyebaran dengan
gores langsung. Pemurnian dilakukan dengan metode pengenceran seri atau
bertingkat. Tujuannya untuk menumbuhkan koloni bakteri pada media yang
terbatas tidak mungkin dilakukan penghitungan bakteri yang berjumlah puluhan
ribu.
B. Saran
xxxviii
DAFTAR PUSTAKA
Hidayat, Nur, dkk. (2018). Mikroorganisme dan Pemanfaatannya. Malang: UB

Press
Kusumaningrum,. Yusmarini., Ali, Akhyar. (2015). Isolasi Dan Identifikasi
Bakteri Asam Laktat Amilolitik Dari Industri Pengolahan Pati Sagu. Jom
Faperta. 2:1, 11-19.
Marwani, Sri. (2015). Dasar-dasar Mikrobiologi Veteriner. Malang: UB Press
Sabbathini, G.C., Pujiyanto, S., Wijanarka., Lisdiyanti, P. (2017). Isolasi Dan
Identifikasi Bakteri Genus Sphingomonas Dari Daun Padi (Oryza Sativa)
Di Area Persawahan Cibinong. Jurnal Biologi. 6:1, 59-64
Kambey, Debora., Fatimawali., Manampiring, Aaltje, E. (2016). Isolasi bakteri
resisten merkuri dalam urin pasien dengan tumpatan amalgam di
Puskesmas Bahu Manado. Jurnal e Biomedik (eBm). 4:2, 20-29.
Dwyana. 2012. Mikrobiologi Dasar. Makassar: Universitas Hasanuddin.
Ghoni. 2013. Mikrobiologi Dasar. Jakarta: Papas Sinar Sinanti.
Buckle. 2018. Mikrobiologi Terapan. Universitas Gajah Mada: Yogyakarta
Biology 3rd Edition.
John Wiley and Sons. Sussex, England. Plezar. 2015. Dasar-Dasar Mikrobiologi.
Jakarta: UI Press
Suriawiria, U. 2014. Mikrobiologi Dasar. Papas Sinar Sinanti, Jakarta
xxxix
MATERI III
UJI GRAM NEGATIF DAN POSITIF
xl
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar belakang
Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur dan
sifat-sifatyang khas, begitu pula dengan bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak
berwarna dankontras dengan air, dimana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan.
Salah satu cara untuk mengamati bentuk sel bakteri sehingga mudah untuk
diidentifikasi ialah dengan metode pengecatan atau pewarnaan. Hal tersebut juga
berfungsi untuk mengetahui sifat fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding
sel bakteri melalui serangkaian pewarnaan. Prinsip pewarnaan gram didasarkan
pada perbedaan struktur dinding sel bakteri,sehingga menyebabkan perbedaan
reaksi dengan permeabilitas zat warna dan penambahan larutan pencuci (Fitri dan
Yekky, 2011).
Mikroorganisme sulit dilihat dengan mikroskop cahaya, karena tidak
mengadsorpsiataupun membiaskan cahaya. Alasan inilah yang menyebabkan zat
warna digunakanuntuk mewarnai mikroorganisme ataupun latar belakangnya. Zat
warna mengadsorpsidan membiaskan cahaya sehingga kontras mikroorganisme
disekelilingya ditingkatkan.Penggunaan zat warna memungkinkan pengamatan
struktur sel seperti spora dan bahaninfeksi yang mengandung zat pati dan granula
fosfat. Pewarnaan yang digunakan untuk melihat salah satu struktur sel disebut
pewarnaan khusus. Sedangkan pewarnaan yangdigunakan untuk memilahkan
mikroorganisme disebut pewarnaan diferensial yangmemilahkan bakteri menjadi
kelompok gram positif dan gram negatif. Pewarnaandiferensial lainnya ialah
pewarnaan ziehl neelsen yang memilihkan bakterinya menjadi kelompok-
kelompok tahan asam dan tidak tahan asam (Purwani at al., 2019).
Bakteri adalah salah satu golongan organisme prokariotik (tidak memiliki
selubung inti). Bakteri sebagai makhluk hidup tentu memiliki informasi genetik
berupa DNA, tapi tidak terlokalisasi dalam tempat khusus ( nukleus ) dan tidak
ada membran inti. Bentuk DNA bakteri adalah sirkuler, panjang dan biasa disebut
nukleoi.Pada DNA bakteri tidak mempunyai intron dan hanya tersusun atas akson
saja. Bakteri juga memiliki DNA ekstrakromosomal yang tergabung menjadi
plasmid yang berbentuk kecil dan sirkuler (Jawetz, 2013) .Bakteri yang
xli
keberadaanya banyak sekali ini, memungkinkan untuk menjadi salah satu
penyebab penyakit pada manusia (Radji, 2016).
Melihat dan mengamati bakteri dalam kedaan hidup sangat sulit, karena
selain bakteri itu tidak berwarna juga transparan dan sangat kecil. Untuk
mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri.
Ini merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitian-penelitian. Hal
itu untuk mempermudah proses identifikasi bakteri. Bakteri juga dapat dibedakan
melalui teknik pewarnaan gram. Teknik pewarnaan gram tersebut dapat
menghasilkan warna merah dan ungu. Bakteri gram negatif ditandai dengan
pewarnaan ungu sedangkan yang positif berwarna merah. Hal ini bertujuan untuk
memberikan warna pada bakteri pada akhirnya dapat diidentifikasi dengan mudah
(Fitri dan Yekky, 2011).
Respon hambatan mikroba gram positif lebih kuat dibandingkan mikroba
gram negatif. Hal ini disebabkan oleh perbedaan komponen penyusun dinding sel
antara mikroba gram positif dan gram negative. Dinding sel mikroba gram positif
banyak mengandung teikoronat serta molekul polisakarida. Komponen kimia ini
melindungi sel dari kegiatan lisis enzim, sedangkan zat – zat lain menentukkan
reaksi sel pada pengecatan gram dan ada pula yang menarik dan mengikat
bakteriofage (Purwani at al., 2019).
Pewarnaan Gram dilakukan untuk mengelompokkan bakteri menjadi 2
yaitu bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif. Pada pewarnaan Gramini,
reagen yang digunakan ada 4 jenis, yaitu kristal violet, iodine, alkohol
dansafranin. Bakteri Gram positif akan mempertahankan warna ungu dari
kristalviolet sehingga ketika diamati mikroskop akan menunjukkan warna
ungusedangkan bakteri Gram negatif tidak dapat mempertahankan warna
ungudari kristal violet tetapi zat warna safranin dapat terserap pada dinding
selsehingga akan memperlihatkan warna merah. (Pratita, 2012).
Pewarnaan Gram digunakan untuk mengetahui morfologi sel bakteri serta
untuk membedakan bakteri gram positif dan gram negatif. Perbedaan warna pada
bakteri gram positif dan gram negatif menunjukkan bahwa adanya perbedaan
struktur dinding sel antara kedua jenis bakteri tersebut. Bakteri gram positif
memiliki struktur dinding sel dengan kandungan peptidoglikan yang tebal
xlii
sedangkan bakteri gram negatif memiliki sturktur dinding sel dengan kandungan
lipid yang tinggi (Fitri, 2011).
B. Tujuan
Adapun tujuan dari praktikum kali ini yaitu untuk mengetahui uji gram
pada bakteriologi, apakah suatu bakteri tersebut termasuk gram positif atau
negatif.
C. Manfaat
Adapun manfaat yang didapatkan dari praktikum ini adalah mengetahui
bagaimana cara kerja dari uji gram bakteri, apakah suatu bakteri tersebut termasuk
gram positif atau negatif
xliii
A. Uji gram positif dan gram negatif

Pewarnaan Gram dilakukan untuk mengelompokkan bakteri menjadi 2
yaitu bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif. Pada pewarnaan Gram ini,
reagen yang digunakan ada 4 jenis, yaitu kristal violet, iodine, alkohol dan
safranin. Bakteri Gram positif akan mempertahankan warna ungu dari kristal
violet sehingga ketika diamati mikroskop akan menunjukkan warna ungu
sedangkan bakteri Gram negatif tidak dapat mempertahankan warna ungu dari
kristal violet tetapi zat warna safranin dapat terserap pada dinding sel sehingga
akan memperlihatkan warna merah. (Pratita, 2012).
Kelompok bakteri gram negatif ditandai dengan sel bakteri yang berwarna
merah saat pengamatan secara mikroskopik. Warna merah tersebut disebabkan
karena hilangnya pewarna kristal violet pada waktu dekolorisasi dengan alkohol
kemudian sel bakteri menyerap pewarna merah yaitu safranin.
untuk membedakan bakteri gram positif dan gram negatif. Perbedaan warna pada
bakteri gram positif dan gram negatif menunjukkan bahwa adanya perbedaan
struktur dinding sel antara kedua jenis bakteri tersebut. Bakteri gram positif
lipid yang tinggi (Fitri, 2011).
Pengecatan gram dilakukan pada kultur bakteri umur 24 jam yang
ditumbuhkan pada medium padat. Bakteri gram positif akan memberikan warna
ungu ketika diberi cat gram. Warna ungu tersebut terjadi karena dinding sel
bakteri mengikat cat Kristal violet yang diperkuat oleh iodine dan Kristal violet
tersebut tidak akan hilang pada waktu diberi cat peluntur sehingga tidak
terpengaruh pada saat diberi cat penutup yang berwarna merah (Romadhon,
2012).
Pewarnaan dilakukan dengan membuat bekasan isolate digelas obyek,
kemudian diwarnai dengan larutan Kristal violet dan yodium secara bergantian
selama beberapa menit dan dicuci dengan aquadest, selanjutnya dicuci dengan
xliv
alkohol dan ditetesi dengan larutan cat penutup safranin. Pengamatan dilakukan
dengan menggunakan mikroskop, bakteri gram positif akan nampak berwarna
ungu, sedangkan gram negatif berwarna merah (Purwohadisantoso, 2019).
Salah satu teknik pewarnaan bakteri yang sering digunakan dalam
identifikasi jenis bakteri adalah pewarnaan gram. Pewarnaan gram merupakan
teknik pewarnaan yang memiliki tujuan untuk identifikasi bakteri melalui
perbedaan gram positif dan gram negatif yang dihasilkan melalui pewarnaan
dengan zat pewarna kristal violet dan safranin. Prinsip dari teknik pewarnaan ini
yaitu didasarkan pada ikatan ion antara komponen seluler bakteri dengan senyawa
aktif yang terdapat did alam zat pewarna, atau yang biasa disebut kromagen.
Pewarnaan gram membantu mempermudah pengamatan struktur dalam bakteri
misalnya dinding sel, memperjelas ukuran sel bakteri dan mengetahui sifat fisika
kimia bakteri. Bakteri dalam pewarnaan gram dibedakan menjadi gram positif dan
gram negatif (Purwani at al., 2019).
Dinding sel bakteri memiliki peran utama dalam pewarnaan gram. Dinding
sel merupakan salah satu bagian dari sel bakteri yang memiliki fungsi untuk
memberi bentuk sel dan sebagai dukungan structural. Gram positif mempunyai
peptidoglikan lebih banyak pada dinding selnya sehingga dapat mempertahankan
zat pewarna kristal violet namun tidak maksimal menyerap pewarna safranin. Hal
ini menyebabkan bakteri gram positif terlihat berwarna ungu kontras ketika
diamati di bawah mikroskop cahaya. Sedangkan bakteri gram negatif, dinding
selnya memiliki peptidoglikan yang lebih tipis yaitu hanya berkisar antara 10-15
nm namun memiliki kandungan lemak yang lebih besar (11-24%). Dinding sel
bakteri gram negatif tidak mampu menyerap atau mempertahankan zat warna
kristal violet lebih banyak sehingga zat pewarna ini mudah luntur ketika
pencucian dengan alcohol 96%, sebaliknya jenis bakteri ini mampu menyerap zat
warna safranin dengan maksimal sehinnga akan terlihat berwarna merah kontras
ketika diamati di bawah mikroskop cahaya (Pratita, 2012).
Bakteri gram negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna
ungu pada metode pewarnaan gram. Bakteri gram positif akan mempertahankan
zat warna ungu setelah dicuci dengan alkohol, sementara bakteri gram negatif
tidak (Yuka, 2013).
xlv
A. Waktu dan tempat

Praktikum Pengantar Bakteriologi Tumbuhan dilaksanakan pada hari
Kamis tanggal 05 oktober 2023 dari pukul 11.10 – 12.50 WIB, dilakukan di
Laboratorium Mikrobiologi Depaeremen Proteksi Tanaman Fakultas Pertanian
Universitas Andalas Padang.
B. Bahan Praktikum
Adapun alat yang digunakan pada praktikum kali ini adalah kaca preparat,
jarum ose, dan Bunsen.
Adapun bahan yang digunakan pada praktikum kali ini adalah isolat
bakteri Burkolderia, isolat bakteri Acidovora, isolat bakteri Xanthomonas sp
alcohol, dan larutan KOH
C. Prosedur Praktikum
Adapun Langkah kerja yang digunakan pada praktikum kali ini adalah
bersihkan atau sterilkan kaca preparate terlebih dahuku menggunakan alcohol,
setelah itu ambil larutan KOH dan letakkan satu tetes KOH diatas preparate.
Ambil isolat bakteri Burkholderia sp menggunakan jarum ose diatas Bunsen dan
letakkan diatas preparate yang sudah ada KOH, dicampurkan lalu jarum ose
diangkat. Perhatikan apakah ada lendir atau tidak. Lakukan cara yang sama pada
isolate bakteri Acidovora dan isolat Xanthomonas sp.
xlvi
A. Hasil
Tabel 5. Uji Gram Negatif Dan Positif
Uji gram negativ pada bakteri

1
Acidovorax sp
Uji gram positif pada bakteri

2
Xanthomonas sp
Uji gram negativ pada bakteri

3
Burkholderia sp
B. Pembahasan
Pada pratikum bakteriologi kali ini kita melakukan uji gram positif dan uji
gram negatif, dimana kita menggunakan bakteri Acidovorax sp, bakteri
Burkholderia sp dan xanthomonas sp
Pada bakteri Acidovorax sp dan Burkholderia sp merupakan uji gram
negatif dikarenakan pada saat melakukan pengujian pada bakteri tersebut
mengeluarkan lendir. Bakteri gram negatif adalah bakteri yang tidak
mempertahankan zat warna ungu pada metode pewarnaan gram. Maka pada warna
saat pengijian bakteri Acidovorax sp dan Burkholderia sp yaitu ungu keputihan
dan kuning keputihan
xlvii
Pada bakteri Xanthomonas sp merupakan uji gram positif dikarenakan
pada saat pengujian tidak mengeluarkan lendir. Gram positif mempunyai
zat pewarna kristal violet namun tidak maksimal menyerap pewarna safranin.
Maka bakteri gram positif terlihat berwarna ungu.
Menurut Fitri (2011) terbentukanya lendir atau tidaknya, ditentukan pecah
atau tidaknya dinding sel bakteri akibat berada dalam larutan alkali tinggi ketika
diberikan KOH 3%. Hal ini menyatakan bahwa reaksi gram dapat dikonfirmasi
dengan uji kelarutan kalium hidroksida (kori). Dengam mengambil satu ose penuh
kultur bakteri yang sedang tumbuh akti dan dicampurkan dengan setetes larutan
KOH 3% diatas kaca objek yang bersih kemudian dilakukan pengadukan hingga
diperoleh suspensi yang rata. Jika pada jarum ose diangkat dan tampak benang
lendir, maka bakteri tersebut adalah gram segatif sedangkan apabila jarum ose
ketika diangkat tidak terdapat lendir, maka bakteri tersebut adalah gram positif.
Bakteri gram negatif terbentuk lendir karena memiliki dinding sel yang
tebal dan lapisan petidoglikan yang tipis. Sementara itu, bakteri gram positif tidak
terbentuk lendir, karena dinding sel bakteri memiliki lapisan peptidoglikan yang
tebal. Sehingga, saat dicampurkan dengan KOH 3% seperti tidak terjadi reaksi
apapun.
Berdasarkan praktikum pengujian gram, maka dapat diketahui bahwa
penentuan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif dapat dilakukan dengan
pengecatan dan pengujian dengan larutan KOH. Pengujian dengan pengecatan
gram ini dapat diketahui perbedaan yang mendasar antara bakteri gram positif dan
gram negatif yaitu dari warnanya yang apabila berwarna ungu maka menunjukkan
bakteri gram positif. Bakteri gram positif adalah bakteri yang mempertahankan zat
warna kristal violet sewaktu proses pewarnaan gram sehingga akan berwarna biru
atau ungu di bawah mikroskop. Sedangkan, jika berwarna merah, kuning atau
jingga maka menunjukkan bakteri gram negatif. Bakteri gram negatif adalah
bakteri yang dinding selnya menyerap warna merah dan memiliki lapisan
peptidoglikan yang tipis. Lapisan peptidoglikan pada bakteri gram negatif terletak
di ruang periplasmic antara membrane plasma dengan membrane luar. Cara lain
yang dapat dilakukan yaitu dengan pengujian KOH yang apabila terbentuk lendir,
xlviii
maka menunjukkan bahwa bakteri tersebut adalah bakteri gram negatif,
sedangkan apabila tidak terbentuk lendir maka bakteri tersebut tergolong dalam
bakteri gram positif.
Uji kelarutan kalium hidroksida merupakan salah satu cara untuk
mereaksikan gram bakteri. Tujuan dari uji KOH 3% adalah untuk mengetahui
jenis gram yaitu dengan parameter pengamatan berdasarkan kategori jenis gram
mikroorganisme dimana kategori bakteri gram negatif diperoleh apabila
menghasilkan lendir (reaksi positif) dan kategori bakteri gram positif apabila tidak
menghasilkan lendir (rekasi negatif)
Uji pewarnaan bakteri yang menggunakan pewarnaan gram yang
dilakukan dengan menggunakan specimen yang didapat dari rektal, feses, atau
muntahan yang dikeluarkan oleh hewan atau ternak yang terserang infeksi dari
suatu bakteri. Pewarnaan diferensial yang sangat berguna dan paling banyak
digunakan dalam laboratorium mikrobiologi, karena merupakan tahapan penting
dalam langkah awal identifikasi. Pewarnaan ini didasarkan pada tebal atau
tipisnya lapisan peptidoglikan di dinding sel dan banyak sedikitnya lapisan lemak
pada membran sel bakteri. Perbedaan pewarnaan memerlukan penggunaan paling
sedikit 3 reagen kimia. Reagen pertama disebut reagen primer yang berfungsi
untuk mewarnai seluruh sel untuk membuat warna kontras. Reagen kedua yang
digunakan adalah agen pewarnaan kembali. Reagen terakhir counterstain,
mempunyai warna kontras dengan pewarna primer. Bila pewarna primer
berpindah, komponen sel diwarnai kembali akan menerima warna kontras dari
counterstain. Dengan cara ini tipe sel atau struktur dapat dibedakan satu sama lain
dengan dasar pewarnaan yang ditahan.
untuk membedakan bakteri gram positif dan gram negatif. Bakteri gram positif
lipid yang tinggi. Pengecatan gram dilakukan pada kultur bakteri umur 24 jam
yang ditumbuhkan pada medium padat. Bakteri gram positif akan memberikan
warna ungu ketika diberi cat gram. Warna ungu tersebut terjadi karena dinding sel
bakteri mengikat cat Kristal violet yang diperkuat oleh iodine dan Kristal violet
xlix
tersebut tidak akan hilang pada waktu diberi cat peluntur sehingga tidak
terpengaruh pada saat diberi cat penutup yang berwarna merah
Prinsip pewarnaan gram didasarkan pada perbedaan struktur dinding sel
bakteri sehingga menyebabkan perbedaan reaksi dengan permeabilitas zat warna
dan penambahan larutan pencuci. Kristal violet atau ungu gentian adalah pewarna
triarylmethane. Pewarna ini digunakan sebagai histologist noda dalam metode
gram klasifikasi bakteri. Sedangkan pemberion iodium bertujuan untuk
memperkuat warna pada bakteri. Alkohol berfungsi sebagai pemucat atau peluntur
warna pada bakteri. Safranin adalah noda biologis yang digunakan dalam
histologi dan sitologi. Safranin digunakan sebagai conterstain dalam beberapa
protocol pewarnaan, pada bakteri di preparate jika menunjukkan warna ungu
berrati adalah baketri gram positif dikarenakan bakteri tersebut mengandung
banyak lipid sehingga mudah berikatan dengan safranin.
Oleh sebab itu dalam mengamati morfologi bakteri dapat dilakukan
dengan cara uji larutan KOH yang lebih simple agar proses mengamati tidak rumit
dan lama, sehingga dapat diperoleh uji larutan KOH yang jelas dan bakteri yang
diamati menampakkan bentuknya apakah bakteri tersebut berbentuk kokus, basil,
ataupun bentuk yang lainnya.
Dinding sel bakteri memiliki peran utama dalam pewarnaan gram. Dinding
sel merupakan salah satu bagian dari sel bakteri yang memiliki fungsi untuk
memberi bentuk sel dan sebagai dukungan structural. Gram positif mempunyai
zat pewarna kristal violet namun tidak maksimal menyerap pewarna safranin. Hal
ini menyebabkan bakteri gram positif terlihat berwarna ungu kontras ketika
diamati di bawah mikroskop cahaya. Sedangkan bakteri gram negatif, dinding
selnya memiliki peptidoglikan yang lebih tipis yaitu hanya berkisar antara 10-15
nm namun memiliki kandungan lemak yang lebih besar (11-24%). Dinding sel
bakteri gram negatif tidak mampu menyerap atau mempertahankan zat warna
kristal violet lebih banyak sehingga zat pewarna ini mudah luntur ketika
pencucian dengan alkohol 96%, sebaliknya jenis bakteri ini mampu menyerap zat
warna safranin dengan maksimal sehinnga akan terlihat berwarna merah kontras
ketika diamati di bawah mikroskop cahaya
l
BAB V. PENUTUP
A. Kesimpulan
Pewarnaan gram dan uji gram digunakan untuk mengidentifikasi bakteri.
uji gram menggunakan KOH 3% yang dihomogenkan dengan biakan bakteri. Jika
terdapat tidak terdapat lendir berarti dinding sel yang tersusun dari lapisan
peptidoglikan yang lebih tebal dan menandakan bakteri Gram Positif. Namun,
apabila terdapat lendir berarti memiliki lapisan peptidoglikan yang lebih tipis dan
mempunyai struktur lipopolisakarida yang tebal dan menandakan bakteri Gram
Negatif.
B. Saran
li
DAFTAR PUSTAKA
Dwidjoseputro, D. 2018 Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.

Fitri, L., Yekki Y., 2011, Isolasi Dan Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri
Kitinolitik, Jurnal Ilmiah Pendidikan Biologi, Vol. 3 , No. 2.
Pratita, Maria Yuli E., Surya Rosa P., 2012 , Isolasi dan Identifikasi Bakteri
Termofilik Dari Sumber Mata Air Panas Di Songgoriti Setelah Dua Hari
Inkubasi, Jurnal Teknik Pomits, Vol. 1, No. 1.
Purwani, Eni, Setyo Wulang N. H., Rusdin R., 2009, Respon Hambatan Bakteri
Gram Positif Dan Negatif Pada Ikan Nila Yang Diaktifkan Dengan
Ekstrak Jahe, Jurnal Kesehatan, Vol. 2, No. 1.
Purwohadisantoso, Kristian, Elok Z., Ella S., 2019, Isolasi Bakteri Asam Laktat
Dari Sayur Kubis Yang Memiliki Kemampuan Penghambatan Bakteri
Patogen, Jurnal Teknologi Pertanian, Vol. 10, No. 1.
Romadhon, Subagiyo, Sebastian M., 2012, Isolasi dan Karaterisasi Bakteri Asam
Laktat dari Usus Udang Penghasil Bakteriosin Sebagai Agen Antibakteria
Produk – Produk Hasil Perikanan, Jurnal Saintek Perikanan, Vol. 8, No. 1
Radji, M., 2016, Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan
Kedokteran, 107, 118, 201-207, 295, Jakarta, Buku Kedokteran EGC.
Yuka, R. A., Agus, S., S. (2013) ‘Identifikasi Bakteri Bioremediasi Pendegradasi
Total Ammonia Nitrogen (Tan)’, Jurnal Kelautan: Indonesian Journal of
Marine Science and Technology, 14(1), pp. 20–29.
lii
MATERI IV
UJI HIPERSENSITIF
liii
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar belakang
Salah satu dari mikroorganisme yang termasuk patogen adalah bakteri.
Bakteri merupakan penyebab penyakit yang cukup sering terjadi pada tanaman.
Karena banyaknya manusia yang mengabaikan gejala pada penyakit tersebut
karena terkadang gejala awal yang diberikan ada gelaja awal yang biasa saja.
Maka dari itu diperlukannya uji hipersesitifitas pada suatu bakteri agar dapat
diketahui apakah bakteri tersebut adalah bakteri patogen atau bakteri bukan
patogen seperti bakteri saprofit (Fahy dan Lloyd 2015).
Bakteri patogen tanaman punya kemampuan menginduksi hipersensitivitas
pada tanaman bukan inang. Kapasitas menginduksi hipersensitivitas dari bakteri
merupakan prediket patogenisitas dan digunakan dalam kriteria diagnosa penyakit
yang disebabkan bakteri. Hipersensitivitas adalah kemampuan bakteri dalam
menimbulkan reaksi pada tanaman bukan inang (contohnya tembakau) seperti
nekrosis (Fahy dan Lloyd 2015).
Pengujian keamanan pupuk hayati dilakukan melalui uji hipersensitivitas
pada tanaman tembakau yang diinokulasi mikrob yang digunakan dalam
formulasi pupuk hayati. Reaksi hipersensitif yang menandakan mikrob pada
pupuk hayati bersifat patogen dicirikan oleh timbulnya gejala bercak nekrosis
pada daun tembakau, yaitu perubahan warna jaringan daun yang diinokulasi
mikrob uji dari hijau berubah menjadi cokelat yang diikuti dengan mengeringnya
jaringan tersebut (Fahy dan Lloyd 2015).
Uji hipersensitivitas bertujuan untuk menjamin bahwa mikrob dalam
formula pupuk hayati tidak bersifat patogen bagi tanaman. Reaksi hipersensitif
telah banyak digunakan untuk mendeteksi apakah isolat mikrob merupakan
patogen atau nonpatogen bagi tanaman. Uji Reaksi Hipersensitif. Uji reaksi
hipersensitif dilakukan dengan menginjeksikan suspensi sel bakteri pada ruang
antar sel daun bunga pukul 4 (Mirabilis jalapa) menggunakan alat suntik tanpa
jarum hingga membentuk lapisan kebasahbasahan (water soaked) dan nekrotik.
Pengamatan perkembangan gejala nekrotik antara 24 – 72 jam setelah injeksi
(Fahy dan Lloyd 2015).
liv
Indonesia merupakan Negara yang terkenal dengan keanekaragaman
tanaman. Hal ini didukung oleh keadaan geografis Indonesia yang beriklim tropis
dengan curah hujan rata-rata tinggi. Sumber daya alam yang dimiliki telah
memberikan manfaat dalam kehidupan sehari-hari disamping sebagai bahan
makanan dan bahan bangunan begitu juga dimanfaatkan sebagai obat tradisional.
Salah satu tanaman obat yang dapat dimanfaatkan sebagai obat yaitu daun bunga
pukul empat (Mirabilis jalapa L.). Mirabilis jalapa L. (bunga pukul empat)
merupakan tanaman hias yang mudah tumbuh di halaman rumah tanpa banyak
perawatan. Tanaman ini mudah tumbuh di tanah yang mengandung cukup unsur
hara dan terlindung dari sinar matahari. Meskipun demikian tanaman ini sering
dijumpai tumbuh pada lahan kering dan terkena sinar matahari langsung.
Tanaman ini dibudidayakan karena keindahan warna dan ornamentasi bunganya.
Tanaman ini juga memiliki khasiat obat, meskipun masih jarang penggunaanya
(Schaad et al, 2019).
Selain tanaman pukul empat, tanaman tembakau juga bisa dilakukan
percobaan uji hipersensitif. Uji hipersensitif dilakukan pada tanaman tembakau
karena tanaman tembakau mampu mengalokasikan serangan bakteri patogen
sebagai respon ketahanan tanaman tembakau terhadap penyakit (Schaad et al,
2019).
Tembakau adalah kelompok tumbuhan dari genus Nicotiana yang daunnya
bisa digunakan sebagai bahan baku dalam kegiatan merokok. Tembakau adalah
produk pertanian semusim yang bukan termasuk komoditas pangan, melainkan
komoditas perkebunan. Tumbuhan tembakau merupakan tumbuhan semusim,
meskipun Nivtonia var fruticosa merupakan tumbuhan tahunan. Tinggi dari
tembakau memiliki variasi tergantung spesies dan tempat tumbuhnya dengan
varietas tertinggi mencapai 12 kaki. Musim kemarau menjadi waktu untuk
melakukan panen dan pematangan daun agar didadapatkan keadaan daun dalam
kualitas baik. Karena ketika keadaan hujan berlebihan, maka daun yang dipanen
akan memiliki bentuk daun yang tipis dan ringan (Schaad et al, 2019).
B. Tujuan
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui apakah
tanaman bunga pukul empat menimbulkan gejala atau tidak menimbulkan gejala.
lv
C. Manfaat
Adapun manfaat yang didapatkan adalah bisa melihat dan mendapatkan
pengetahuan tentang bunga pukul empat bisa menimbulkan gejala atau tidak
adanya gejala.
lvi
A. Uji hipersensitif
Uji hipersensitivitas merupakan salah satu uji penting untuk memisahkan
bakteri patogen dari safrofit dengan protokol standar menggunakan tanaman
tembakau atau bunga Pukul Empat (arriani et.al., 2020). Dalam pengujian ini, uji
hipersensitivitas dilakukan pada daun tanaman tembakau umur 4 minggu.
Suspensi bakteri berumur 24 jam pada media NA dengan kepadatan 109 CFU/ml
diinokulasikan pada bagian bawah daun tembakau. Sebagai kontrol negatif adalah
daun tembakau yang diinokulasikan dengan aquades steril. Gejala hipersensitif
berupa adanya klorosis atau nekrosis pada daun tembakau yang diamati 24–72
jam setelah perlakuan (Fahy & Persley,2015).
Uji hipersensitif merupakan bentuk pertahanan dari tanaman inang yang
berkembang secara cepat dalam menghadapi patogen yang tidak kompatibel
dengan tanaman inang sehingga mengakibatkan kematian sel. Reaksi hipersensitif
hanya terjadi pada perpaduan yang tidak sesuai antara tanaman inang dan patogen.
(Permatasi, et al., 2019)
Uji hipersensitif dilakukan untuk mengetahui apakah bakteri yang
digunakan merupakan bakteri yang bersifat patogenik atau non patogenik. Jika
bakteri bersifat patogen maka perlu dikendali. Namun apabila, non patogenik
maka bakteri tersebut dapat dijadikan sebagai agen pengedali hayati. (Kurniawan,
F. B., & Indra, T. S. 2020)
Pengujian suatu bakteri dalam melakukan hipersensitif merupakan salah
satu kajian ilmu di bidang mikrobiologi. Uji hipersensitif dilakukan untuk
menguji kemampuan isolat bakteri menimbulkan reaksi hipersensitif pada daun
tanama. Tanaman yang bisa dijadikan sebagai uji ini ialah tanaman yang memiliki
kemampuan proses infeksi yang cepat Maksudnya tanaman yang memiliki
fisiologi yang cocok untuk proses infeksi patogen. Tanaman tersebut ialah daun
tanaman tembakau dan daun tanaman pukul empat sore. (Refika Aditama.
Permatasi, et al, 2013).
lvii
Untuk mengetahui apakah bakteri tersebut patogenik atau non patogenik
dapat dilihat dari bagian tanaman yang setelah disuntikkan bakteri apakah
menunjukkan nekrosis. Bakteri yang tidak menunjukkan adanya nekrosis
menunjukkan bahwa bakteri bereaksi negatif hipersensitif dan bakteri bersifat non
patogen yang artinya bisa digunakan sebagai agen pengendalian hayati. Dalam uji
hipersensitif dapat diketahui hasil pada tanaman selama 2 hari. (Ibnu Fajar, Ima
Yudha Perwira, Indonesia Made Ernawati. 2022).
Hasil yang ditimbulkan pada uji hipersensitif yaitu hasil positif atau
negatif. Jika uji hipersensitif positif maka daun tersebut menimbulkan gejala yang
berupa nekrosis pada bagian yang diinfiltrasi dengan suspensi bakteri. Selanjutnya
apakah inokulasi pada tanaman tembakau menimbulkan malformasi atau gejala
penyakit baik pada bagian yang dinokulasi maupun pada bagian tanaman yang
lain. Jika terjadi malformasi atau gejala penyakit maka maka bakteri tersebut
adalah patogen. Namun apabila tidak mengalami nekrosis dan tidak menimbulkan
gejala malformasi atau gejala lainnya pada daun berarti uji hipersensitif ialah
negatif. Pengujian ini bertujuan untuk mengetahui apakah isolat bakteri yang
ditemukan merupakan bakteri patogen tanaman atau bukan (Utari, L. K,. Riyanti,
Rr. dan Santosa, P. E. 2016).
F. B., & Indra, T. S. 2020) Uji hipersensitif merupakan bentuk pertahanan dari
tanaman inang yang berkembang secara cepat dalam menghadapi patogen yang
tidak kompatibel dengan tanaman inang sehingga mengakibatkan kematian sel.
Reaksi hipersensitif hanya terjadi pada perpaduan yang tidak sesuai antara
tanaman inang dan patogen. (Permatasi, et al., 2019)
F. B., & Indra, T. S. 2020) .
lviii
Bakteri patogen dapat menyebabkan berbagai macam penyakit pada
tanaman inang, karena bakteri patogen yang hidup pada jaringan tanaman dapat
mengakibatkan perubahan morfologi dan terganggunya fungsi suatu jaringan
tanaman (Afifah et al., 2017). Pada umumnya bakteri patogen tanaman tidak
langsung masuk ke dalam sel tanaman, namun dengan memperbanyak diri pada
ruang antar sel. Bakteri patogen dapat masuk melalui lubang alami pada tanaman,
yaitu pada stomata, lentisel, hidatoda, dan luka pada jaringan. Bakteri patogen
dapat mengekskresikan racun, fitohormon, enzim ekstraseluler, dan polisakarida
ekstraseluler (Astuti, 2013).
Tanaman tembakau dijadikan sebagai tanaman indikator untuk mengetahui
keamanan bakteri terhadap tanaman karena dapat memberi respons sangat cepat
terhadap bakteri patogen yang berada di dalam jaringan daun. Respons tersebut
adalah reaksi hipersensitif berupa gejala nekrosis yaitu kematian sel-sel jaringan
tanaman yang merupakan cara tanaman tembakau menghambat bakteri patogen
agar tidak menyebar ke seluruh jaringan Reaksi hipersensitif ditandai dengan
terjadinya pengeringan dan kematian sel inang di sekitar tempat invasi,
(Arwiyanto et al., 2017).
Uji hipersensitivitas sangat perlu dilakukan dalam formulasi pupuk hayati
sebagai jaminan bahwa mikrob dalam pupuk hayati bukan merupakan patogen
bagi tanaman Kementerian Pertanian melalui Keputusan Menteri Pertanian No.
261/2019 mengatur persyaratan teknis minimal pupuk hayati yang beredar di
Indonesia (Husen, 2013).
Uji hipersensitivitas sebaiknya dilakukan seawal mungkin terhadap isolat-
isolat mikrob terpilih pada saat praformulasi pupuk hayati. Hal tersebut untuk
menghindari sumber daya yang terbuang percuma jika isolat mikrob terpilih yang
langsung dilakukan karakterisasi morfologi dan fisiologi, formulasi pupuk hayati,
bahkan hingga sampai pada proses uji mutu dan uji efektivitas untuk memastikan
secara akurat isolat-isolat mikrob dalam pupuk hayati bersifat nonpatogen bagi
tanaman. Selain itu, aplikasi pupuk hayati dapat memberikan pengaruh positif
terhadap tanaman yang diinokulasi jika dalam formulasinya menggunakan isolat
mikrob terpilih yang tidak bersifat patogen bagi tanaman (Arwiyanto et al., 2017).
lix
A. Waktu dan tempat

Kamis tanggal 12 Oktober 2023 dari pukul 11.10 – 12.50 WIB, dilakukan di
Laboratorium Mikrobiologi, Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan, Fakultas
Pertanian, Universitas Andalas, Padang.
B. Alat dan Bahan
Adapun alat praktikum yang digunakan adalah Bunsen, jarum suntik, dan
preparate.
Adapun bahan praktikum yang digunakan adalah larutan KOH, isolate
bakteri, daun bunga pukul empat dan suspensi bakteri.
Adapun prosedur yang digunakan pada praktikum ini adalah larutan KOH
diteteskan pada preparate lalu diambil isolate bakteri dengan jarum ose yang
sudah dipanaskan diatas bunse, letakkan isolate tersebut diatas preparate yang
sudah ada KOH lalu diinfiltrasi sampai jenuh. Hasil infiltrasi tersebut diambil
dengan jarum suntik didekat Bunsen. Suspensi bakteri diambil menggunakan
jarum suntik. Suspensi disuntikkan kedaun bunga pukul empat dan hasil diamati
setelah 1 x 24 jam dan 2 x 24 jam. Hasil uji breaksi diletakkan diluar ruangan.
lx
A. Hasil
Tabel 6. Uji Hipersensitif
1
Pengamatan pada 2x24 jam
B. Pembahasan
Pada pratikum bakteriologi ini melakukan uji hipersensitif, pada uji
hipersensitif dilakukan untuk mengetahui apakah bakteri yang digunakan
merupakan bakteri yang bersifat patogen atau non patogen. Jika bakteri bersifat
patogen maka perlu dikendali. Hasil yang ditimbulkan pada uji hipersensitif yaitu
hasil positif atau negatif. Jika uji hipersensitif positif maka daun tersebut
menimbulkan gejala yang berupa nekrosis pada bagian yang diinfiltrasi dengan
suspensi bakteri. Namun apabila tidak mengalami nekrosis dan tidak
menimbulkan gejala pada daun berarti uji hipersensitif ialah negatif.
Selama ini pengendalian pada hama dan penyakit tanaman yang dilakukan
hanya mengarah pada teknik budidaya dan penggunaan bahan kimia saja, namun
hasil yang diperoleh masih kurang maksimal. Sehingga diperlukan suatu cara
lxi
pengendalian yang lebih aman, efektif dan efisien untuk melindungi tanaman.
Penggunaan antibakteri dari ekstrak tanaman bisa menjadi altrnatif dalam
pengendalian yang lebih aman, efektif dan efisien. Pengujian keamanan pupuk
hayati menggunakan mikroorganisme dapat dilakukan melalui uji hipersensitivitas
pada tanaman tembakau yang diinokulasi mikroba yang digunakan dalam
formulasi pupuk hayati. Reaksi hipersensitif yang menandakan mikroba pada
pupuk hayati bersifat patogen dapat dicirikan oleh timbulnya gejala bercak
nekrosis pada daun tembakau, yaitu perubahan warna jaringan daun yang
diinokulasi mikroba uji dari yang berwarna hijau berubah menjadi cokelat yang
diikuti dengan mengeringnya jaringan tersebut. Uji hipersensitif bertujuan untuk
menjamin bahwa mikroba dalam formula pupuk hayati tersebut tidak bersifat
patogen bagi tanaman.
Uji hipersensitif adalah uji yang dilakukan untuk mengetahui sifat
patogenik mikroorganisme pada tanaman yang bukan inang. Yang diapat
dilakukan pada tanaman tembakau, dan bunga pukul empat. Pada praktikum
dilakukan percobaan uji hipersensitif pada tanaman pukul empat dan didapatkan
hasil bahwa pada pada tanaman tembakau tersebut tidak ada munculnya gejala.
Pada pratikum ini menggunakan isolat bakteri Actino bacteria dengan
menggunakan tanaman pukul empat Mirabilis jalapa. Pada pengujian ini dapat
dilihat pada hasil, pada hari pertama setelah di suntikkan, pada daun terdapat
gejala pada bagian yang diinokulasikan bakteri. Pada hari kedua gejala melebar
dan daun mulai lepas dari batangnya. Dan pada hari ketiga, daun mulai
mengering.
Bunga pukul empat atau Mirabilis jalapa juga sering digunakan sebagai
indikator dalam pengujian hiprsensitif, bunga pukul empat ini mengandung
senyawa-senyawa seperti alkaloid, flavonoid, dan tanin. Senyawa yang terdapat
tanaman ini dapat memicu respons kekebalan pada beberapa organisme hidup.
Sebagai contoh, alkaloid yang terkandung dalam bunga pukul empat dapat
memainkan peran penting dalam memicu respons kekebalan. Dlavonoid dan tanin
juga dapat berkontribusi pada interaksi anatar tanaman dan organisme lain,
sehingga mempengaruhi respons kekebalan. Namun, perlu dicatat bahwa
spesifikasinya dapat bervariasi tergantung dari jenis da varietas bunga pukul
lxii
empat yang digunakan, serta bagaimana kondisi pertumbuhannya. Di dalam
konteks uji hipersensitifitas penggunaan bunga pukul empat bisa membeerikan
wadah untuk memahami reaksi kekebalan terhadap zat tertenyu atau patogen.
Tanaman ini sering digunakan dalam percobaan untuk meneliti respons imun dan
mekanisme pertahananan pada tingkat sel terhadap ancama lingkungan tertentu.
Penggunaan bakteri endofit pada akar tanaman merupakan Upaya untuk
mendapatkan isolate bakteri non patogen. Bakteri endofit dapat hidup dan
berasosiasi dengan jaringan tanaman tanpa menimbulkan kerugian pada tanaman.
Bakteri endofit memiliki sifat antagonis terhadap patogen tanaman dengan
mekanisme antibiosis, kompetisi, dan lisis. Bakteri endofit dapat menghasilkan
metabolit sekunder sehingga dapat mengendalika patogen tanaman.
Genus dari Actinobacteria yang melibatkan berbagai bakteri dengan
ciriciri morfologi dan genetic tertentu, dan sering digunakan sebagai agens hayati
atau organisme yang memiliki manfaat ekologis atau aplikatif dalam berbagai hal.
Beberapa peran penting dari Actinobacteria sebagai agens hayati yaitu, pengendali
organisme patogen tanaman. Bererapa spesies Actinobacteria dapat berperan
sebagai agens hayati dalam melawan patogen tanaman, contohnya Streptomyces
spp. memiliki kemampuan untuk menghasilkan senyawa antibakteri dan antifungi
yang dapat mengendalikan penyakit tanaman. Yang kedua dapat menjadi sumber
produksi antibiotik, sejumlah besar antibiotik yang digunakan dalam pengobatan
manusia dan hewan yang diproduksi dari Streptomyces. Contoh antibiotic
termasuk streptomisin, tetracycline, dan sritromisin. Yang ketiga dapat berperan
dalam proses dekomposisi bahan organik di tanah serta membantu dalam siklus
nutrient dan menjaga keseimbangan ekosistem tanah. Actinobacteria juga dapat
digunakan dalam proses bioremidiasi untuk membersihkan lingkungan dari
polutan dan senyawa toksik, karena beberapa spesiesnya memiliki kemampuan
mendegradasi senyawa kimia berbahaya. Bakteri ini juga dapat menghasilkan
enzim seperti enzim amilase, protease, dan lipase yang digunakan dalam berbagai
proses industri.
Uji hipersensitif dilakukan untuk membuktikan apakah benar isolat bakteri
adalah spesifik bakteri patogen pada tanaman. Gejala hipersensitif ditunjkkan
dengan adanya nekrosis atau mengeringnya bagian daun tembakau yang
lxiii
diinfiltrasikan suspensi bakteri. Uji hipersensitif dilakukan pada tanaman
tembakau karena, tanaman tembakau mampu mengalokasikan serangan patogen
sebagai respon ketahanan tanaman tembakau terhadap penyakit. Uji hipersensitif
merupakan salah satu uji penting untuk memisahkan bakteri patogen dari safrfit
dengan protok standar menggunakan tanaman tembakau atau bunga pukul empat.
Pengujian keamanan bakteri dilakukan melalui uji hipersensitif pada
tanaman tembakau yang diinokulasikan mikroba yang digunakan. Reaksi
hipersensitif yang menandakan mikroba bersifat patogen dicirikan oleh timbulnya
gejala bercak nekrosis pada daun tembakau, yaitu perubahan warna jaringan daun
yang diinokulasikan mikroba uji dari hijau berubah menjadi cokelat yang diikuti
dengan mengeringnya jaringan. Reaksi hipersensitif telah banyak digunakan
untuk mendeteksi apakah isolat mikroba yang digunakan merupakan patogen atau
non patogen bagi tanaman.
Uji hipersensitif merupakan upaya tanaman dalam mengatasi serangana
bakteri yang berpotensi menyebabkan peyakit dengan cara mealokasikan bakteri
tersebut. Reaksi hipersensitif sendiri muncu pada 1-4 hari setelah diinokulasikan.
hayati untuk mengendalikan penyakit tanaman. Reaksi hipersensitif merupakan
program kematian sel yang sangat cepat dan terlokalisasi. Membran seluler pada
tanaman yang megalami kontak dengan bakteri patogen akan hancur, mengalami
penegeringan dan nekrosis. Respon tersebut menunjukkan bahwa bakteri yang
kontak dengan daun tanaman memiliki potensi sebagai patogen tanaman. Isolat
yang menunjukkan reaksi positif berpotensi sebagai patogen pada tanaman.
Gejala nekrotik merupakan gejala dan tanda yang terjadi karena adanya
kerusakan pada sela tau bagian sel bahkan sampai dengan kematian pada sel
tanaman. Gejala nekrotik pada tanaman dapat bervariasi tergantung pada jenis
tanaman, penyebab nekrosis, dan lokasi terjadinya kerusakan. Beberapa gejala
umum nekrosis pada tanaman meliputi: Perubahan warna daun. Daun yang
mengalami nekrosis mungkin mengalami perubahan warna, seperti menjadi
coklat, hitam, atau keabu-abuan. Pembusukan daun atau bagian tanaman lainnya,
Bagian tanaman yang terkena nekrosis dapat mengalami pembusukan, yang dapat
terlihat sebagai daun yang berubah menjadi lembek atau layu. Kerusakan pada
batang dan akar.
lxiv
BAB V. PENUTUP
A. Kesimpulan
Dari pratikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa isolat bakteri
yang digunakan dapat menimbulkan gejala terhadap tanaman tembakau, yag
dimana setiap dilakukan pengamatan terjadi perkembangan gejala dan berakhir
daun tembakau tersebut mengering.
B. Saran
lxv
DAFTAR PUSTAKA
Afifah Z, 2017. Uji Antagonis Mikroba Endofit Trichoderma Sp. dan Bacillus
cereus terhadap Patogen Colletotrichum Capsici Penyebab Penyakit
Antraknosa pada Cabai Rawit (Capsicum frustescens). Doctoral
Dissertation. Malang: Universitas Islam Negeri Maulana Malik
Ibrahim.
Arriani IF, Abadi AL dan Aini LQ, 2020. Karakterisasi Bakteri Patogen
Penyebab Layu pada Tanaman Bawang Merah (Allium ascalonicum
L.). VIABEL: Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Pertanian; 14(1): 69-75.
Astuti, Dian Tri. 2013.Identifikasi Patogen Erwinia carotovora. Makassar:
Universitas Hassanudin Press.
Arwiyanto T, Nurcahyanti SD, Indradewa D & Widada J. 2017. Grafting local
commercial tomato cultivar with H7996 and Eg 203 to suppress bacterial
wilt (Ralstonia solanacearum) in Indonesia. Proc.IVth IS on Tomato
Disease. Acta Horticulturae. 1069: 173-178.
Fahy, PC, and GJ Persley. 2015. Plant Bacterial Diseases. A Diagnostic Guide.
Academic Press. Sydney.
Fajar ibnu, Ima Yudha Perwira, Indonesia Made Ernawati. 2022. Pengaruh
Derajat Keasaman (pH) terhadap Pertumbuhan Bakteri Toleran Kromium
Heksavalen dari Sedimen Mangrove di Muara Tukad Mati, Bali Fakultas
Kelautan dan Perikanan, Universitas Udayana,. Bali-Indonesia
Husen, E. 2013. Kajian Sistem Kendali Mutu Pupuk Hayati Pra-Komersialisasi.
Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Sumber Daya Lahan Pertanian.
Bogor.
Kurniawan, F. B., & Indra, T. S. 2020. Praktikum Bakteriologi Klinik. Indonesia:
EGC
Permatasi, et al., 2019. Uji Pembuatan Marning Jagung dengan Menggunakan
Autoclave. Jurnal Keteknikan Pertanian Tropis dan Biosistem. Vol. I.
Indonesia.1 Laboratorium
lxvi
Refika Aditama.Permatasi, et al, 2013. Uji Pembuatan Marning Jagung dengan
Menggunakan Autoclave. Jurnal Keteknikan Pertanian Tropis dan
Biosistem. Vol. I. Indonesia.1
Refika Aditama.Permatasi, et al, 2013. Uji Pembuatan Marning Jagung dengan
Menggunakan Autoclave. Jurnal Keteknikan Pertanian Tropis dan
Biosistem. Vol. I. Indonesia.1
Schaad, N.W., J.B. Jones., dan W. Chun. 2019. Laboratory Guide for
Identification of Plant Phatogenic Bacteria 3rd Edition. American
Phytopathological Society Press. 373 pp.
Utari, L. K,. Riyanti, Rr. dan Santosa, P. E. 2016. Status Mikrobilogis Daging
Broiler Di Pasar Tradisional Kabupaten Pringsewu. Jurnal Ilmiah
Peternakan Terpadu Vol $ (1): Lampung
lxvii
MATERI V
UJI PATOGENESITAS
lxviii
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar belakang
Salah satu faktor yang dapat menyebabkan timbulnya penyakit pada
tanaman adalah adanya kontaminasi terhadap mikroorganisme. Mikroorganisme
utama dapat menyebabkan penyakit adalah bakteri. Walaupun bakteri dapat
menimbulkan penyakit namun ada juga bakteri yang menguntungkan hagi
manusia. Adanya ilmu pengetahuan tentang adanya suatu bakteri yang dapat
menyebabkan penyakit pada tanaman, menyebabkan para peneliti mencoba
membiakan bakteri tersebut dalam sebuah media. Dalam membuktikan penyehab
suatu penyakit, diperlukan metode pembuktian, karena diagnosis penyakit
tanaman berdasarkan gejala saja belum menadai atau tidak cukup. Salah satu
metode yang dapat dilakukan adalah metode postulat koch. Diagnosis penyakit
yang benar diperlukan untuk merekomendasikan cara pengendalian yang tepat dan
juga diperlukan daları saatu survet penyakit tanaman (Schaad 2013)
Penyakit tumbuhan adalah salah satu permasalahan petani yang banyak
menjadi progress pemikiran utamanya oleh kalangan ahli. Dalam kepentingan
pengandaliannya, sudah semestinya harus mengetahui terlebih dahulu penyebab
dari penyakit yang menyerang suatu tanaman. Proses identifikasi perlu dilakukan
untuk mengetahui secara pasti karakteristik dari suatu pathogen sehingga dapat
mempermudah pengambilan keputusan untuk pengendaliannya. Mikroba yang
ditemukan di suatu lingkungan ditemukan dalam populası campuran, sarigat
jarang sekali yang ditemukan sebagai satu spesies tanggal. Penelitian mengetuai
mikroorganisme biasanya memerlukan teknik untuk memisahkan populasi
campuran pada permulaanya, atau biakan campuran, menjadi spesies spesies vang
berbeda-beda sebagai hiakan murni. Biakan murni terdiri dari suatu populasi sel
yang berasal dari satu sel induk (Schaad 2013)
Gejala ialah perubahan yang ditunjukkan oleh tanaman itu sendiri akibat
serangan penyakit dan secara garis besar gejala-gejala ini dibagi menjadi tiga
macam: Gejala hipoplastis ialah gejala yang disebabkan oleh terhambatnya
pertumbuhan hingga terhentinya pertumbuhan pada suatu sel. Gejala nekrotis
ialah suatu gejala yang disebabkan oleh adanya kerusakan sel atau matinya sel itu.
lxix
Gejala hiperplastis ialah gejala yang disebabkan oleh adanya pertumbuhan sel
yang berlebih-lebihan. (Tim dosen jurusan HPT, 2013).
Tanda ialah semua pengenal dari penyakit selain reaksi tumbuhan inang
(selain gejala), yaitu kenampakan makroskopis dari patogen atau organnya,
misalnya bentuk tubuh buah parasit, miselium, warna spora, blendok, lendir, dan
sebagainya. Tanda dari penyakit yang disebabkan oleh bakteri ialah massa bakteri
yang keluar dari bagian tanaman yang sakit (Tim dosen jurusan HPT, 2013).
Isolat bakteri yang menunjukkan reaksi hipersensitif diambil 20 nomor
isolat untuk diuji patogenisitasnya pada bibit yang berumur 1 bulan. Inokulasi
bakteri dilakukan dengan memasukkan suspensi bakteri dengan kepekatan
populasi bakteri 108 sel/ml dengan menggunakan jarum inokulasi pada pangkal
batang bibit yang digunakan. Perkembangan gejala penyakit diamati selama dua
minggu kemudian dicatat waktu munculnya gejala penyakit. Isolat bakteri yang
paling virulen ditentukan berdasarkan kecepatannya dalam menimbulkan gejala
penyakit. Uji patogenisitas dinyatakan positif jika diperoleh koloni bakteri yang
serupa dengan bakteri yang diinokulasikan dan dinyatakan negatif jika koloni
yang diperoleh tidak serupa dengan bakteri yang diinokulasikan (sinaga, 2012).
Uji patogenesitas merupakan pengujian pembuktian apakah suatu bakteri
hasil isolasi termasuk patogen atau bukan. Uji ini merupakan bagiandari postulat
koch yang dapat membedakan bakteri patogen tanamandengan bakteri saprofit
sekunder. Pada uji patogenesitas tanman inang harus dalam keadaan sehat tidak
sedang sakit atau terkena penyakit lain. Hal ini di maksudkan agar uji
patogenesitas berhasil dan mencegah kesalahan praduga terhadap penyakityang
timbul. Metode untuk uji patogenesitas dilakukan dengan berbagaicara
diantaranya dengan cara menyiram saja tanpa dilukai, dilukai kemudian
(Narayanasamy, 2011)
Dalam praktikum bakteriologi pertanian ini dilakukan beberapa kegiatan
dimulai dari pegenalan gejala dan tanda panyakit. lasi pathogen, purifikası
pathogen sampai dengan pengujian dan identifikasi pathogen. Diharapkan mampu
memberikan keahlian dan pengalaman tambahan bagi praktikan sehingga
bermanfaat dalam peranannya sebagai ahli bidang penyakit tanaman (Pelczar, MJ
dan E. C. S, Chan. 2018).
lxx
B. Tujuan
Adapun tujuan dari pratikum ini yaitu untuk mengetahui cara uji
patogenesitas
C. Manfaat
Adapun manfaat yang didapatkan dari pratikum ini yaitu mengetahui uji
patogenesitas pada bakteri
lxxi
A. Uji patogenisitas
Uji patogenisitas adalah pengujian yang dilakukan untuk membuktikan
apakah suatu isolat bakteri termasuk dalam patogen tanaman dan mampu
menimbulkan penyakit pada tanaman inangnya. Uji patogenisitas dilakukan
dengan cara menginokulasikan bakteri patogen pada tanaman inang bakteri
tersebut. Mikroorganisme patogenik adalah mikroorganisme yang dapat
menyebabkan penyakit pada inangnya.(Afifah et al, 2017). Uji patogenisitas
dilakukan untuk membuktikan bahwa isolat jamur dari bagian tanaman bergejala
penyakit yang telah dimurnikan merupakan jamur penyebab penyakit layu pucuk
pada tanaman Adenium. Uji patogenisitas menunjukkan isolat jamur berwarna
putih sebalik merah muda, memperlihatkan gejala kelayuan pada 20 hari setelah
inokulasi. dari kuning, coklat hingga hitam (sinaga, 2012).
Uji patogenisitas merupakan uji yang memakai teknik isolasi kultur cair.
Uji patogenisitas dilakukan untuk menguji sebesar apa patogenisitas atau
kemampuan menimbulkan gejala penyakit dari bakteri dengan menginokulasi
suspensi bakteri 10 sel/ml yang diduga patogen pada tanaman inang (Nurrizqi
Oktavia, Sri Pujiyanto. 2018). Uji patogenisitas dinyatakan positif jika diperoleh
koloni bakteri yang serupa dengan bakteri yang diinokulasikan pada daun padi
dan dinyatakan negatif jika koloni yang diperoleh tidak serupa dengan bakteri
yang diinokulasikan. Tujuan patogenisitas adalah kemampuan bakteri isolat dalam
menimbulkan gejala yang sama dengan gejala penyakit yang ditemukan
sebelumnya. Patogenisitas adalah kemampuan isolat menghasilkan koloni bakteri
yang serupa dengan bakteri yang diinokulasikan pada tanaman inang terinfeksi
sebelumnya. (Pelczar, MJ dan E. C. S, Chan. 2018).
Uji patogenisitas adalah pengujian yang digunakan untuk mengetahui
kemampuan patogen dalam menimbulkan penyakit. Hasil uji patogenisitas
cendawan Colletotrichum sp (Shobah 2014) Pada tahap ini dilakukan uji
patogenisitas pada tanaman cengkeh yang berumur 4 bulan, awal gejala penyakit
tersebut muncul pada hari ke 25 setelah dilakukan inokulasi dan daun berguguran
secara keseluruhan dan tidak ada lagi yang tersisa setelah hari ke 59 pengujian
lxxii
patogenisitas pada bakteri terhadap inang tanaman memiliki gejala yang sama
dengan (Schaad 2013), yaitu gejala yang ditimbulkan ditandai dengan
menguningnya daun yang kemudian berguguran, ranting-ranting dan cabang mati
diikuti layu mendadak. Gugurnya daun dapat berlangsung beberapa minggu
sampai beberapa bulan. Tahap keempat, reisolasi yaitu melakukan isolasi kembali
pada tanaman yang sudah diinokulasi untuk mendapatkan biakan patogen yang
sama dengan tahap awal isolasi (Schaad 2013)
Uji patogenisitas dilakukan untuk membuktikan bahwa isolat bakteri dari
bagian tanaman bergejala penyakit yang telah dimurnikan merupakan bakteri
penyebab penyakit pada tanaman cabai. Uji patogenisitas menunjukkan isolat
bakteri berwarna putih sebalik merah muda, memperlihatkan gejala kelayuan pada
20 hari setelah inokulasi (Waluyo, 2018). Uji patogenesitas dinyatakan posistif
jika diperoleh koloni bakteri yang serupa dengan bakteri yang diinokulasikan dan
dinyatakan negative jika koloni yang diperoleh tidak serupa dengan bakteri yang
diinokulasikan (Irawan, 2015).
Uji reaksi patogenesis adalah pengujian terhadap patogen tanaman yang
dilakukan untuk membuktikkan bahwa sebuah identifikasi yangdilakukan
dengan menginokulasikan ulang bakteri patogen pada tanaman inang yang
terserang dengan jenis kultivar yang sama (Amrulloh et.al 2021).
Patogenisitas bakteri merupakan kemampuan suatu bakteri patogen dalam
menimbulkan penyakit. Menurut Russo et. al, (2018) menyatakan bahwa
patogenisitas setiap agen patogen juga sangat berkaitan dengan kemampuannya
dalam memproduksi enzim, toksin dan dalam mengatasi sistem kekebalan
inangnya (Amrulloh et.al 2021).
Uji patogenitas (Pustulate Koch) dilakukan menggunakan metode
pelukaan berdasarkan Herman et al., (2011) dengan modifikasi. Bakteri patogen
masuk ke dalam tanaman melalui luka pada akar, luka pada batang maupun
stomata yang menjadi lubang masuk. Kemudian patogen menuju ke sistem
pembuluh tanaman. Xilem akan dikolonisasi oleh patogen setelah mencapai pada
sistem pembuluh. Patogen akan bereproduksi sangat cepat sehingga memblok
saluran xilem. Hal tersebut menyebabkan tanaman sulit menyalurkan air dan
nutrisi sehingga tanaman menjadi layu (Narayanasamy, 2011)
lxxiii
A. Waktu dan tempat

Kamis tanggal 02 November 2023 dari pukul 11.10 – 12.50 WIB, dilakukan di
B. Alat dan bahan
Adapun alat yang digunakan pada pratikum kali ini adalah Bunsen, jarum
ose, testub dan suntik.
Adapun bahan yang digunakan pada praktikum kali ini adalah aquades
9ml, isolate bakteri Bassilus spp dan tanaman cabai.
Adapun prosedur dari praktikum kali ini adalah yang pertama siapkan isolate
bakteri yang digunakan untuk uji patogenesitas. Setelah itu bakteri digores
menggunakan jarum ose hingga bakterinya hilang. Bakteri tadi selanjutnya
dipindahkan kedalam testub lalu dihomogenkan. Bakteri diambil menggunakan
jarum suntik lalu diaplikasikan ke batang tanaman cabai.
lxxiv
A. Hasil
Tabel 7. Uji Patogenesitas
Isolat bakteri yang disuntikkan ke

1
tanaman cabai.
B. Pembahasan
Pada praktikum mengenai uji patogenesitas yang dimana isolat bakteri
yang kemudian disuntikkan ke batang tanaman cabai, kemudian diamati dalam
waktu tertentu. Untuk mengetahui suatu mikroorganisme tertentu dapat
menyebabkan penyakit pada tanaman inang dilakukan uji patogenesitas.
Bakteri patogen masuk ke dalam tanaman melalui luka pada akar, luka
pada batang maupun stomata yang menjadi lubang masuk. Kemudian patogen
menuju ke sistem pembuluh tanaman. Xilem akan dikolonisasi oleh patogen
setelah mencapai pada sistem pembuluh. Patogen akan bereproduksi sangat cepat
sehingga memblok saluran xilem. Hal tersebut menyebabkan tanaman sulit
menyalurkan air dan nutrisi sehingga tanaman menjadi layu.
Tanaman yang bergejala layu bakteri kemudian diinokulasi kembali
dengan cara mengambil bagian batang yang terinfeksi. Kemudian batang tersebut
dimasukkan ke dalam wadah yang berisi aquadest dan setelah sekitar 10 menit
benang-benang putih halus akan keluar dari bagian batang tersebut.
Benangbenang putih tersebut merupakan massa bakteri yang biasa disebut oose.
Oose inilah yang membedakan tanaman yang terinfeksi layu bakteri dengan layu
akibat cendawan maupun layu akibat gangguan fisiologis.
Pengujian hipersensitif bakteri endofit dilakukan untuk mengetahui
patogenesitas bakteri endofit dengan menggunakan daun tembakau sehat.
Suspensi bakteri endofit disuntikkan pada bagian bawah tulang daun tembakau
lxxv
masing-masing sebanyak 2 ml dengan tiga kali ulangan untuk setiap bakteri
endofit. Kemudian diinkubasi selama 24 jam sampai 48 jam dan dilakukan
pengamatan terhadap perubahan yang terjadi pada daun tembakau. Bakteri yang
menunjukkan reaksi negatif yaitu tidak timbul gejala nekrosis dapat digunakan
untuk pengujian selanjutnya.
Pada praktikum kali ini, tidak didapatkan hasil dari penyuntikan bakteri
ke tanaman cabai, karena pada saat proses penyuntikan bakteri tersebut
disuntukkan pada tanaman yang sudah mati atau tidak dapat tumbuh lagi.
Bakteri yang disuntikan pada tanaman cabai merupakan bakteri Bacillus
sp. Bakteri ini termasuk bakteri gram positif, yakni katalase positif yang umum
ditemukan di tanah, air, udara dan materi tumbuhan yang terdekomposisi (debu).
Bacillus sp. bersifat aerobik oleh karena itu dalam proses fermentasi harus
diperhatikan dengan baik. Bakteri ini mampu membentuk endospora ketika
kondisi lingkungan yang tertekan. Spora ini dapat bertahan 60 tahun atau lebih
pada kondisi lingkungan ekstrim.
Bakteri ini diketahui mampu menghasilkan enzim selulase bila
ditempatkan dalam lingkungan yang terdapat selulosa. Secara umum ada 4
kelompok pembagian mikroorganisme berdasarkan suhu lingkungan tempatnya
hidup yaitu psikorofil, mesofil, termofil dan hipertermofil. Psikrofil adalah
kelompok mikroba yang dapat tumbuh pada suhu 0 deg C - 25 deg * C Mesofil
adalah kelompok mikroba yang pada umumnya mempunyai suhu berkisar antara
20 C- 50C.
Uji patogenisitas adalah pengujian yang digunakan untuk mengetahui
kemampuan patogen dalam menimbulkan penyakit. Hasil uji patogenisitas
cendawan Colletotrichum sp (Shobah 2014) Pada tahap ini dilakukan uji
patogenisitas pada tanaman cengkeh yang berumur 4 bulan, awal gejala penyakit
tersebut muncul pada hari ke 25 setelah dilakukan inokulasi dan daun berguguran
secara keseluruhan dan tidak ada lagi yang tersisa setelah hari ke 59 pengujian
patogenisitas pada bakteri terhadap inang tanaman memiliki gejala yang sama
dengan (Schaad 2013), yaitu gejala yang ditimbulkan ditandai dengan
menguningnya daun yang kemudian berguguran, ranting-ranting dan cabang mati
diikuti layu mendadak. (Schaad 2013).
lxxvi
BAB V. PENUTUP
A. Kesimpulan
Adapun kesimpulan yang dapat diambil dari praktikum tentang uji
patogenesitas adalah bahwa uji patogenesitas digunakan untuk membuktikan
apakah suatu isolat yang telah kita biakkan merupakan bakteri yang ingin kita
tumbuhkan.
B. Saran
lxxvii
DAFTAR PUSTAKA
Afifah, YM., 2017. Potensi Antioksidan Dan Antifungi Ekstrak Etanol Kombinasi
Acorus calamus (L.), Curcuma mangga VAL., dan Allium sativum
(LINN.) Secara In Vitro. Skripsi Jurusan Biologi.Universitas Islam Negeri
Maulana Malik Ibrahim. Malang
Amrulloh, M. K., Hardian S. A., dan Wiwiek S. W. 2021. Karakterisasi fisiologis
dan biokimia penyebab penyakit bakteri pembuluh kayu pada tanaman
cengkeh (Syzygium aromaticum L.) di PT Tirta Harapan. Jurnal Proteksi
Tanaman Tropis, 2(1): 1 – 7.
Herman M, dan Pranowo D, 2013. Pengaruh Mikroba Pelarut Fosfat
Terhadap Pertumbuhan Dan Serapan Hara P Benih Kakao
(Theobroma Cacao L.). Buletin Ristri 4 (2): 129-138.
Irawan A, Anggraeni I, Christia M. 2015. Identifikasi penyebab penyakit bercak
daun pada bibit cempaka (Magnolia elegans (Blume.) H. Keng) dan teknik
pengendaliannya. Wasian. 2(2):87-94.
Narayanasamy. P. 2011. Plant pathogen detection and diseases diagnosis.
Nurrizqi Oktavia, Sri Pujiyanto. 2018. Isolasi dan Uji Antagonisme Bakteri
Endofit Tapak Dara (Catharanthus Roseus, L.) terhadap Bakteri
Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Semarang : Universitas
Diponegoro Press
Sastrahidayat, IR. 2011. Rekayasa Pupuk Hayati Mikoriza dalam Meningkatkan
Produksi Pertanian. Malang (ID) : UB Press. 100 hal
Schaad, N.W. J.B. Jones, and W. Chun. 2016 Laboratory Guide for Identification
of Plant Pathogen Bacteria. Third Edition. APS Press. St. Paul
Sinaga. 2012. Pengaruh Frekuensi Pemberian Dan Dosis Pemupukan Npk Mutiara
Terhadap Pertumbuhan Bibit Kelapa Sawit ((Eleasis guineensis Jacg) Di
Pembibitan Awal (Pre Nursery). Biro Administrasi Akademik. Hal 1-13.
Waluyo, L, 2018. Teknik Metode Dasar Mikrobiologi. Universitas
Muhamadiyah Malang: Press, Malang.
lxxviii
MATERI VI
UJI PGPR
lxxix
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar belakang
Cabai (Capsicum sp.) merupakan salah satu komoditas yang banyak
dibutuhkan dalam kehidupan sehari- hari dan volume kebutuhannya terus
meningkat seiring dengan pertambahan penduduk dan kemajuan teknologi.
Produksi nasional cabai pada tahun 2009 sebesar 1.378.727 ton, tahun 2010
sebesar 1.328.864 ton, dan tahun 2011 sebesar 1.440.214 ton (Munees &
Mulugeta, 2014).
Tomat merupakan tanaman dari family Solanaceae (terung-terungan) yang
memiliki bunga seperti terompet dengan warna, bentuk, rasa dan tektur buah yang
beragam. Bentuk buah beragam ada yang bulat, keriting, higga seperti bola lampu.
Warna buah masak bervariasi dari berwarna kuning, orange, sampai merah,
tergantung dari pigmen yang dominan dan rasanya pun bervariasi dari asam
hingga manis. Buah tomat tersusun dalam tandan-tandan dan keseluruhan
buahnya tersusun atas daging dan banyak mengandung air (Munees & Mulugeta,
2014).
Tomat sangat bermanfaat bagi tubuh karena mengandung vitamin dan
mineral yang diperlukan untuk pertumbuhan dan kesehatan. Buah tomat
mengandung karbohidrat, protein, lemak, dan kalori. Buah tomat juga dapat
bermanfaat untuk pembentukan tulang dan gigi (zat kapur dan fosfor), sedangan
zat besi (Fe) yang terkandung dalam buah tomat berfugsi untuk pembentukan sel
darah dan hemoglobin. Selain itu, buah tomat mengandung zat potassium ya Plant
Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) atau rizobakteri pemacu tumbuh
tanaman (RPTT) mulai diteliti dan digunakan namun masih terbatas, sementara
ketersediaannya di alam melimpah. PGPR adalah kelompok bakteri
menguntungkan yang agresif menkolonisasi rizofir (Salli.M,K.,dkk. 2017).
Sebagai kumpulan bakteri tanah, PGPR mempengaruhi tanaman secara langsung
melalui kemampuannya menyediakan dan memobilisasi atau memfasilitasi
penyerapan berbagai unsur hara dalam tanah serta mensintesis dan mengubah
konsentrasi fithothormon pemacu tumbuh tanaman sehingga memiliki ketahanan
terhadap (Gandanegara, 2017)
lxxx
serangan penyebab penyakit. Sedangkan secara tidak langsung berkaitan
dengan kemampuannya menekan aktivitas pathogen dengan menghasilkan
berbagai senyawa atau metabolit seperti antibiotik bagi penyebab penyakit
terutama pathogen tular tanah (Glick, 2015).
Penggunaan PGPR dapat menekan ketergantungan petani atas kualitas
peroduk akibat penggunaan pestisida yang meninggalkan residu. Khususnya bagi
tanaman tomat yang dikonsumsi secara segar maupun dalam bentuk olahan.
Untuk memaksimalkan penggunaan PGPR pada tanaman tomat diperlukan
konsentrasi yang tepat. Menurut Anisa (2019) pemberian konsentrasi PGPR 5 ml/l
yang diaplikasikan setiap 2 minggu sekali memberikan pengaruh nyata terhadap
variabel saat muncul krop bunga, bobot segar berangkasan luas daun, bobot segar
akar dan bobot bunga. Menurut Iswati (2012) pengapliksian dosis PGPR 7 ml
memberikan pertumbuhan terbaik yang berpengaruh nyata terhadap variabel
jumlah daun dan jumlah akar. Dinas Pertanian dan Pangan Kota Magelang (2017)
mengatakan pengaplikasian PGPR untuk jenis tanaman cabai, terung, tomat, dll,
dianjurkan pada konsentrasi 5 ml/l yang disiramkan 1-2 gelas didaerah perakaran
tanaman (Glick, 2015).
Namun, pengaplikasian PGPR tersebut akan berdeda pada tempat dan
wilayah yang berbeda yang dimana memiliki kondisi yang berbeda pula. Oleh
karena itu, penelitian dilakukan untuk mendapatkan konsentrasi yang tepat untuk
pengaplikasin PGPR pada tanaman tomat agar mendapat pertumbuhan dan hasil
yang optimal.ng sangat bermanfaat untuk menurunkan gejala tekanan darah tinggi
(Glick, 2015).
B. Tujuan
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui bagaiman cara
prosedur PGPR atau pengaplikasian PGPR pada tanaman
C. Manfaat
Adapun manfaat yang didapatkan adalah mengetahui pengaplikasian
PGPR pada tanaman.
lxxxi
A. Uji PGPR
PGPR adalah kelompok bakteri menguntungkan yang mengkolonisasi
rizosfir (lapisan tanah tipis antara 1-2 mm di sekitar zona perakaran).Aktivitas
PGPR berpengaruh secara positif bagi pertumbuhan tanaman, baik secara
langsung maupun secara tidak langsung. Berdasarkan definisi, rizobakteri adalah
kelompok bakteri yang memiliki kemampuan mengikat atau memfiksasi nitrogen
bebas dari alam. Berbagai jenis bakteri telah diidentifikasi sebagai PGPR.
Sebagian besar berasal dari kelompok gram-negatif dengan jumlah strain paling
banyak dari genus Pseudomonas dan beberapa dari genus Serratia. Selain kedua
genus tersebut, dilaporkan antara lain dari genus Azotobacter, Azospirillum,
Acetobacter, Burkholderia, dan Bacillus (Glick, 2015).
Pengaruh PGPR secara langsung adalah menyediakan dan memobilisasi
penyerapan berbagai unsur hara dalam tanah. Selain itu juga berperan dalam
sintesis dan pengontrolan konsentrasi berbagai hormon pemacu pertumbuhan
tanaman. Secara tidak langsung, PGPR berperan melindungi tanaman dengan cara
menghambat aktivitas pathogen. Selain itu juga dapat memperbaiki struktur tanah
serta mengikat logam berat yang berada terdapat di dalam tanah (Munees &
Mulugeta, 2014).
Efek PGPR pada tanaman yang diinokulasi dikelompokkan menjadi dua,
yaitu mendukung pertumbuhan tanaman dan pengendali secara biologis
(biokontrol). Meskipun secara konseptual kedua efek ini sangat berbeda, dalam
prakteknya sangat sulit bahkan hampir tidak mungkin untuk menentukan
perbedaan dan batas antara keduanya. Growth promotion yang terjadi pada
kondisi tanah lapang berkaitan dengan reduksi populasi rizoplan asli, yaitu fungi
dan bakteri (Gandanegara, 2017)
Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) merupakan miroba tanah
yang terdapat pada akar tanaman yang dapat meningkatkan pertumbuhan tanaman
dan perlindungan terhadap patogen tertentu (Dewi dkk, 2015). Panjang akar
merupakan hasil perpanjangan sel-sel di belakang meristem ujung. Perbedaan
dalam pola perkembangan perakaran, sangat dipengaruhi oleh lingkungan tanah
lxxxii
baik secara langsung maupun tidak langsung. Faktor-faktor di atas tanah yang
mempengaruhi pertumbuhan tajuk, terutama transport karbohidrat ke akar,
memberikan pengaruh yang besar terhadap pertumbuhan akar, seperti juga faktor-
faktor rizosfer yaitu kelembaban, temperatur, kandungan nutrisi, bahan-bahan
toksin, kekuatan agregat dan agen biologis. (Salamiah dan wahdah, 2015).
Menurut Vacheron et al., (2013), PGPR juga berperan sebagai biofertilizer
karena dapat memicu pertumbuhan tanaman dengan cara memfiksasi nitrogen.
menyediakan fosfat terlarut, hingga menghasilkan fitohermon. Marom et al (2017)
menyatakan bahwa PGPR berfungsi untuk meningkatkan pertumbuhan tanaman
yaitu sebagai perangsang pertumbuhan dengan mensintesis dan mengatur
konsentrasi berbagai zat pengatur tumbuh seperti asam îndol asetat, etilen,
giberellin dan sitokinin, sebagai penyedia hara dengan mengikat N di udara secara
simbiosis dan melarutkan hara P dalam tansah seran sebagai pengendali patogen
tanah dengan cara menghasilkan berbagai metabolit anti patogen seperti
siderophore, sianida, kitinase, B1,3-glukanase dan antibiotik. (Hassan, 2015)
Pemberian PGPR dapat meningkatkan tinggi tanaman cabai dikarenakan
kemampuan PGPR. Menghasilkan Fitohormon membuat tanaman dapat
menambah luas permukaan akar-akar halus dan meningkatkan ketersediaan nutrisi
di dalam tanah. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan PGPR dapat
meningkatkan pertumbuhan akar tanaman cabai dibandingkan dengan perlakuan
kontrol (Etesami, 2018).
Rhizobakteria pemacu tumbuh tanaman yang lebih popular disebut Plant
Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) merupakan kelompok bakteri
menguntungkan yang secara aktif mengkolonisasi Rizosfir. PGPR berperan
penting dalam meningkatkan pertumbuhan tanaman seperti tinggi tanaman dan
jumlah daun, hasil panen dan kesuburan lahan. Promoting Rhizobakteri adalah
sejenis bakteri yang hidup di sekitar perakaran tanaman. Bakteri tersebut hidupnya
secara berkoloni menyelimuti akar tanaman. Bagi tanaman keberadaan
mikroorganisme ini akan sangat baik. Bakteri ini memberi keuntungan dalam
proses fisiologi tanaman dan pertumbuhannya.Akar adalah sumber kehidupan,
disana terjadi pertukaran udara, unsur hara, dekomposisi (Wahyudi, 2019).
lxxxiii
A. Waktu dan tempat

Kamis tanggal 09 Oktober 2023 dari pukul 11.10 – 12.50 WIB, dilakukan di
B. Alat dan bahan
Adapun alat praktikum yang digunakan adalah mikropipet, shaker, pinset,

botol schott, autoklaf dan cawan petri.
Adapun bahan praktikum yang digunakan adalah bibit cabai, benih tomat,
tanah, air, polybag, bakteri Bacillus sp dan air kelapa
Adapun cara kerja dari praktikum kali ini adalah disiapkan alat dan bahan,
kemudian diambil bakteri Bacillus sp. Dengan menggunakan mikropipet.
Kemudian campurkan ke air kelapa yang telah dingin setelah dimasukkan ke
autoklaf tadi. Kemudian dishake kurang lebih 10 menit. Selanjutnya disiapkan
tanaman atau bibit cabe yang mau ditanam yaitu 3 bibit tanaman cabai.
Dimasukkan bibit cabai ke dalam larutan yang telah dishake tadi hingga lebih
kurang 15 menit, 3 bibit (perlakuan PGPR). Pada benih tomat, rendam benih
tomat tadi selama 15 menit perlakuan PGPR). Disiapkan polybag tanah,
kemudian masukkan ke dalam polybag secukupnya. Pada perlakuan PGPR
ditanam 3 bibit cabai dengan polybag yang berbeda. Pada control, bibit cabai
ditanamn 3 bibit pada satu polybag yang sama. Selanjutnya tanam bibit tomat.
Pada benih tomat ada 4 polibag, 2 polibag dengan perlakuan control dan 2 polibag
dengan perlakuan PGPR.
lxxxiv
A. Hasil
Tabel 8. Uji Patogenesitas Pada Bibit Cabai
Jumlah Daun
Tanaman Keterangan
PM-1 KM-1 PM-2 KM-2 PM-3 KM-3
1 6 8 5 6 10 11 P (Perlakuan)
2 6 6 9 6 12 10 K (Kontrol)
M
3 6 6 9 6 15 11
(Minggu ke-)
Tinggi Batang
Tanaman Keterangan
7,5 8,5
1 4 cm 6 cm 9 cm 15 cm P (Perlakuan)
cm cm
7,2
2 7 cm 10 cm 8 cm 13 cm 11 cm K (Kontrol)
cm
8,5 M
3 6 cm 5 cm 8 cm 22 cm 12 cm
cm (Minggu ke-)
Tabel 9. Uji Patogenesitas Pada Benih Tomat
Jumlah Daun
Tanaman Keterangan
1 2 0 3 0 5 0 P (Perlakuan)
2 2 0 4 0 6 5 K (Kontrol)
M
3 2 0 3 0 6 0
(Minggu ke-)
lxxxv
Tinggi Batang
Tanaman Keterangan
3,4
1 0 7 cm 0 10 cm 0 P (Perlakuan)
cm
3,4 5,4
2 0 0 13 cm 12 cm K (Kontrol)
cm cm
1,5 M (Minggu
3 0 6 cm 0 12 cm 0
cm ke-)
B. Pembahasan
Praktikum ini menggunakan bakteri Bacillus sp. untuk mengevaluasi
pengaruhnya terhadap pertumbuhan tanaman tomat dan cabai. Bahan dan alat
yang digunakan meliputi benih tomat, bibit cabai, bakteri Bacillus sp., media
tanam, gelas plastik, saringan plastik, kertas label, dan alat tulis.
Prosedur percobaan dilakukan dengan menanam benih tomat dan bibit
cabai pada media tanam yang telah disiapkan. Bakteri Bacillus sp. diinokulasikan
ke dalam media tanam. Tanaman tomat dan cabai yang telah diinokulasikan
dengan bakteri Bacillus sp. dikelompokkan sebagai perlakuan, sedangkan
tanaman tomat dan cabai yang tidak diinokulasikan dengan bakteri Bacillus sp.
Dikelompokkan sebagai kontrol. Kedua kelompok tanaman diamati
pertumbuhannya selama 2 minggu.
Hasil percobaan menunjukkan bahwa tanaman cabai yang mendapatkan
perlakuan dengan bakteri Bacillus sp. memiliki pertumbuhan yang lebih cepat dan
memiliki kualitas yang lebih bagus dibandingkan tanaman cabai kontrol. Tanaman
cabai perlakuan memiliki tinggi batang yang lebih tinggi, jumlah daun yang lebih
banyak, dan ukuran buah yang lebih besar dibandingkan tanaman cabai kontrol.
Pada tanaman tomat, tanaman yang mendapatkan perlakuan dengan
bakteri Bacillus sp. juga memiliki pertumbuhan yang lebih cepat dibandingkan
tanaman tomat kontrol. Namun, pada minggu ke-2 pengamatan, tanaman tomat
kontrol tidak tumbuh karena tidak mendapatkan perawatan, sehingga tidak ada
pembanding untuk perlakuan.
Perbedaan pertumbuhan antara tanaman cabai perlakuan dan kontrol
menunjukkan bahwa bakteri Bacillus sp. memiliki pengaruh positif terhadap
lxxxvi
pertumbuhan tanaman cabai. Hal ini kemungkinan disebabkan karena bakteri
Bacillus sp. bersifat antagonis terhadap patogen yang dapat menyebabkan
penyakit tanaman. Bakteri Bacillus sp. juga dapat meningkatkan ketersediaan
nutrisi dan hormon tanaman.
Perbedaan pertumbuhan antara tanaman tomat perlakuan dan kontrol juga
menunjukkan bahwa bakteri Bacillus sp. memiliki pengaruh positif terhadap
pertumbuhan tanaman tomat. Hal ini kemungkinan disebabkan karena bakteri
Bacillus sp. dapat meningkatkan ketersediaan nutrisi dan hormon tanaman.
Kesimpulan dari percobaan ini adalah bakteri Bacillus sp. memiliki
pengaruh positif terhadap pertumbuhan tanaman tomat dan cabai. Tanaman cabai
lebih responsif terhadap perlakuan dengan bakteri Bacillus sp. dibandingkan
tanaman tomat.
Aplikasi PGPR dapat dilakukan melalui pelapisan benih dan perendaman
benih dalam suspensi. Bakteri PGPR merupakan bakteri tanah yang masa
hidupnya tidak panjang karena ituperlu mengembalikan populasinya setiap akan
menebar benih, media perkecambahan yang digunakan harus memiliki
kemampuan untuk menahan air, bersih dan bebas dari benih lain, cendawan,
bakteri atau zat beracun yang dapat mempengaruhi perkecambahan benih dan
pertumbuhan kecambah, untuk media tanah dan pasir harus dalam keadaan yang
cukup seragam dan sebelum digunakan perlu dicuci dan disterilisas
PGPR dapat meningkatkan kualitas pertumbuhan tanaman melalui
produksi hormon pertumbuhan dengan kemampuan fiksasi N untuk peningkatan
penyediaan N tanah, penghasil osmolit sebagai osmoprotektan pada kondisi
cekaman kekeringan dan penghasl senyawa tertentu yang dapat membunuh
patogen tanaman. Selain sebagai penyedia unsur hara, sebagai biofertilizer, hingga
pengendali OPT tular tanah. Begitu kompleknya manfaat dari PGPR bagi
pertumbuhan tumbuhan.
Beberapa hal yang perlu menjadi perhatian dalam eksplorasi PGPR,
menetukan mikroba-mikroba apa yang akan digunakan sebagai bahan aktif
biofertilizeer. Pilihan yang bisa digunakan adalah mikroba penambat N, mikroba
pelarut P, mikoriza atau PGPR. Berambisi untuk menggunakan semua kelompok
mikroba, boleh. Namun beberapa peniliti hanya fokus pada 1-2 mikroba saja.
lxxxvii
Efek PGPR pada tanaman yang diinokulasikan dikelompokkan menjadi
dua, yaitu mendukung pertumbuhan tanaman dan pengendali secara biologis.
Meskipun secara konseptual, kedua efek ini sangat berbeda dalam prakteknya
sangat sulit bahkan hampir tidak mungkin untuk menentukan perbedaan dan batas
anatara keduanya. Biokontrol pada beberapa kasus diperkirakan muncul akibat
dari penyakit yang terbebaskan. Akar menunjukkan pemanajngan atau
percabangan yang berlebih akibat perlakuan PGPR, dapat meloloskan infeksi dari
patogen asal tanah yang lebih mudah menginfeksi benih muda.
PGPR sebagai altermatif teknologi ramah lingkunagn di lapangan, hal ini
dilihat dari banyakanya petani dalam mengamankan produksi pertanian akaibat
serangan OPT menggunakan pestisida yang berlebihan. Sehingga menimbulkan
dampak negatif yang tidak diinginkan. Seperti terjadinya ledakan hama,
timbulnya hama sekunder, mainya musuh alami, ruskanya lingkungan sekitar,
hingga penolakan pasar akibata produk mengadnung residu pestisida. PGPR
sebagai sekumpulan bakteri di dalam tanah yang dapat mempengaruhi tanaman
secara langsung dalam kemampuannya dapat menyediakan atau memfasilitasi
berbagai penyerapan unsur ara dalam tanah sehingga dapat bertahan terhadap
serangan penyakit. Sedangkan secara tidak langsung kemampuan PGPR dapat
menekan aktivitas patogen dengan menghasilkan berbagi senyawa seperti
antibiotik bagi penyebab penyakit terutama patogen tular tanah.
Penggunaan PGPR dapat memberikan alternatif dalam menggantikan
pupuk kimia, pestisida dan zat pemacu pertumbuhan, isolat PGPR dapat
meningkatkan pertumbuhan, tinggi, hasil panen dan panjang akar tanaman yang
signifikan. Pengendalian oleh PGPR dapat meningkatkan produksi tanaman dan
menjadi tileran terhadap nematoda dan penyakit lain beberapa minggu setelah
ditanam. Mekanisme PGPR belum sepenuhnya dipahami. Hal ini terkait dengan
kompleksitas peran PGPR bagi pertumbuhan tanaman dan berahamnya kondisi
fisik, kimia dan biologi dilingkungan rizosfer. Namun diyakini bahwa proses
pemacuan tumbuh tanaman di mulai dari keberhasilan PGPR dalam
mengkolonisasi rizosfer.
BAB V. PENUTUP
lxxxviii
A. Kesimpulan
Dari hasil pratikum, dapat disimpulkan bahwa hasil yang terdapat pada
pengaplikasian PGPR sangat membanntu dalam pertumbuhan tanaman terutama
pada bibit dan benih. PGPR mampu memberi perlindungan terhadap tumbuhan
dan membantu laju pertumbuhan tanaman.
B. Saran
lxxxix
DAFTAR PUSTAKA
Dewi, K. T., E., K, Arum, H. Imaduddin, Dan S. Antonius. 2015. Karakterisasi

Mikroba Perakaran (PGPR) Agen Penting Pendukung Pupuk Organik
Hayati. Pros Sem Nas Masy Biodiv Indone, 2(1): 289-295.
Etesami, H., & Maheshwari, D. K. (2018). Use of plant growth promoting
rhizobacteria (PGPRs) with multiple plant growth promoting traits in
stress agriculture: Action mechanisms and future prospects.
Ecotoxicology and Environmental Safety, 156 (October 2017), 225– 246.
Hassan, T.U dan A. Bano.2015. The Stimulatory Effects Of L-Trytophan And
Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) On Soil Health And
Physiology Of Wheat. Soil Science And Plant Nutrition, 15(1): 190-201.
Gandanegara, S. 2017. Azora pupuk hayati untuk tanaman jagung dan sayur.
Pusat aplikasi teknologi isotop dan radiasi. BATAN.
Glick, B.R. 2015. The enhancement of plant growth by free-living bacteria. Can.
J. Microbiol. 4: 109-117.
Melissa, S. 2014. Respon Pertumbuhan Dan Produksi Tanaman Cabai Merah
(Capsicum annum L.) Terhadap Pemberian Pgpr (Plant Growth
Promoting Rhizobakteri) Dari Akar Bambu Dan Urine Kelinci
Mulugeta, K. 2014. Mechanism and applications of plant groeth promoting
rhizobacteria. Journal of King Saud University-Science 26 (1): 1-20.
Salamiah Dan R. Whidah.2015. Pemanfaatan Plant Growth Promoting
Rhizobacteria (PGPR) Dalam Pengendalian Penyakit Tungro Pada Padi
Lokal Kalimantan Selatan. Pros Sem Nas Masy Indon, 6(1): 1448-1456.
Wahyudi, A.T. 2019. Rhizobacteria Pemacu Pertumbuhan Tanaman :Prospeknya
sebagai Agen Biostimulator & Biokontrol. Nano Indonesia.
xc
MATERI VII
UJI ANTIBIOSIS
xci
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar belakang
Bakteri merupakan organisme yang memiliki dinding sel. Oleh karena itu,
jika dikaji dari struktur selnya (kandungan dinding sel), maka bakteri
dikelompokkan ke dalam tumbuhan. Jika dikaji dari kemampuan beberapa sel
bakteri yang bergerak pindah tempat, maka bakteri dikelompokkan ke dalam
hewan. Namun demikian, dalam klasifikasi makhluk hidup dengan sistem 5 (lima)
dunia bakteri dikelompokkan ke dalam dunia monera. (Rasyidia, L., A.W and
C.Riskie. 2016).
Bakteriologi mencakup tentang sel bakteri, pengendalian bakteri, peranan
bakteri. Pembahasan berbagai aspek dalam ruang lingkup bakteriologi, diarahkan
pada memahami sel bakteri yang mencakup bentuk dan struktur halus
(ultrastructure) sel bakteri, nutrisi dan kultivasi bakteri, identifikasi dan
klasifikasi, reproduksi dan pertumbuhan sel bakteri, genetika bakteri. (Ratna, S.
2014).
Faktor yang dapat menyebabkan timbulnya penyakit pada tanaman salah
satunya disebabkan oleh kontaminasi terhadap mikroorganisme. Salah satu
mikroorganisme utama yang dapat menyebabkan penyakit adalah bakteri.
Walaupun bakteri dapat menimbulkan penyakit, namun ada juga bakteri yang
menguntungkan bagi manusia sendiri. Adanya ilmu pengetahuan tentang adanya
suatu bakteri, dapat menyebabkan penyakit pada tanaman dapat diteliti oleh para
peneliti. (Febrita, E., Darmawati., dan Astuti, J. 2015.)
Sehingga mereka mengembangbiakan bakteri tersebut dalam sebuah
media, untuk membuktikan penyebab suatu penyakit. Untuk membuktikan adanya
diagnosa penyakit, diperlukan metode pembuktian. Karena diagnosa penyakit
tanaman berdasarkan gejala saja belum memadai atau tidak cukup. (Ratna, S.
2014).
Diperlukan beberapa metode atau pengujian terhadap diagnosa penyakit
tanaman yang disebabkan oleh bakteri tersebut. Pengujian didasarkan pada gejala
dan tanda penyakit pada tanaman tersebut dan untuk menentukan penyebabnya
maka dilakukan beberapa tahapan. Tahap-tahap inilah yang akan membantu
xcii
apakah bakteri bisa dimasukan sebagai patogen pada tanaman atau agens hayati
terhadap tanaman. Pengujian mulai dari sterilisasi dan pembuatan media selektif,
isolasi bakteri patogen, identifikasi bakteri patogen, perbanyakan bakteri,
inokulasi bakteri patogen, uji hipersensitif, dan uji patogenisitas. (Arianda, D.
2016).
Bakteri rizosfer memiliki berbagai peran seperti menyediakan nutrisi bagi
tanaman, melindungi tanaman dari infeksi bakteri patogen (terutama di daerah
perakaran) menghasilkan hormon pertumbuhan, seperti indol acetic acid, pelarut
fosfat, pengikat nitrogen, dan lain-lain. Selain itu, bakteri rizosfer dapat
memengaruhi ketersediaan dan siklus nutrisi tanaman dengan menjaga kestabilan
tekstur tanah (Arianda, D. 2016).
Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) adalah rhizobakteria yang
berpengaruh meningkatkan pertumbuhan tanaman inangnya melalui mekanisme
secara langsung maupun tidak langsung Plant Growth Promoting Rhizobacteria
(PGPR) adalah bakteri yang hidup di daerah rhizosfer tanaman dan dapat memacu
pertumbuhan tanaman. Peran PGPR antara lain sebagai perangsang pertumbuhan
(biostimulan), penyedia hara (biofertilizer) dan pengendali patogen (bioprotektan)
(Ratna, S. 2014).
Menurut Khalimi dan Wirya (2010) mekanisme PGPR dalam memacu
pertumbuhan yaitu: (a) mampu menghasilkan atau mengubah konsentrasi
fitohormon asam indolasetat (IAA), asam giberalat, sitokinin, dan etilen atau
prekursornya (1-aminosiklopropena; ACC diaminase) di dalam tanaman, (b)
antagonisme terhadap mikroba fitopatogen melalui produksi siderofor, glukanase,
kitinase, selulase, antibiotika, dan sianida. Indole-3-Acetic Acid (IAA) merupakan
salah satu hormon pertumbuhan yang berperan untuk memacu pertumbuhan
sepanjang sumbu longitudinal. Hal spesifik yang terlihat berupa peningkatan
pembesaran sel yang berlangsung ke segala arah secara isodiametrik, auksin juga
berperan dalam pembelahan dan pembentangan sel (Arianda, D. 2016).
fitohormon dapat dibagi menjadi 6 kelompok yaitu auksin, sitokinin,
etilen, giberelin, brasinosteroid dan asam absisat. Fitohormon auksin berfungsi
merangsang pertumbuhan akar, mengatur pembesaran sel dan memicu
xciii
pemanjangan sel tanaman, da juga bermanfaat untuk meningkatkan dominansi
apikal dan diferensiasi xylem (Arianda, D. 2016).
B. Tujuan
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui bagaimana
prosedur uji antibiosis pada bakteri PGPR serta mengamati zona bening pada
isolat bakteri tersebut.
C. Manfaat
Adapun manfaat yang didapatkan adalah bisa melihat dan mendapatkan
pengetahuan tentang cara kerja uji antibiosis pada bakteri PGPR dan mengetahui
zona bening pada isolat bakteri.
xciv
A. Uji antibiosis
Antibiosis adalah peristiwa yang menyebabkan tertekannya aktivitas suatu
mikroorganisme jika dua mikroorganisme atau lebih berada pada tempat yang
berdekatan. Uji antibiosis merupakan uji yang digunakan membuktikan bahwa
mikroorganisme yang bersifat antibiosis dapat menghambat aktivitas
mikrooganisme lain yang berada ditempat yang berdekatan. Mikroorganisme yang
bersifat antibiosis ini memiliki pertumbuhan yang cepat sehingga dapat menutupi
mikroorganisme yang berdekatan dengannya (lestari, 2017). Uji antagonis yang
diperlukan untuk melihat adanya interaksi antar mikroorganisme yang meliputi
berkolonisasi, beradaptasi di lingkungan, dan mendapatkan nutrisi. Interaksi
mikroorganisme dapat bersifat menguntungkan atau merugikan. Patogen dan
antagonis merupakan persaingan akan sumber nutrisi di dalam lingkungan tanah
merupakan hal yang penting bagi beberapa mikroba khusus untuk meningkatkan
jumlah, sehingga menurunkan jumlah atau keaktifan mikroorganisme lain.
Penggunaan mikroba konsorsia dapat meningkatkan kualitas pupuk hayati.
Konsorsium mikroba sebagai inokulan dapat memberikan efek lebih baik pada
tanaman karena tipetipe mikroorganisme yang berbeda dapat berinteraksi secara
antagonis untuk memberikan nutrisi, menghilangkan produk inhibitor dan
menstimulasi bakteri satu sama lain (Soesanto, 2018).
Pengendalian hayati menggunakan agen antagonis dengan satu kali
pemakaian dapat menekan pertumbuhan dan perkembangan patogen untuk jangka
waktu yang relatif panjang tanpa menimbulkan pencemaran lingkungan (Achmad
et,al., 2019) Introduksi antagonis untuk pengendalian hayati, suatu patogen
tanaman dari daerah atau negara lain harus dipastikan bahwa antagonis yang
diintroduksi mempunyai kemampuan beradaptasi dan berkembang dengan baik.
Sebagai langkah awal, maka dilakukan dalam skala laboratorium dengan uji in
vitro. Hal ini bertujuan untuk mengevaluasi kemampuan antagonis dalam ruang
lingkup yang lebih sempit serta keadaan lingkungan yang terkendali (Suniti,
2015)
xcv
Trichoderma sp. adalah jamur saprofit tanah yang secara alami dapat
dimanfaatkan sebagai agens hayati, karena memiliki sifat antagonisme terhadap
patogen berupa kompetisi ruang dan nutrisi, mikoparasit dan antibiosis. Selain itu
jamur Trichoderma sp. juga memiliki beberapa kelebihan seperti mudah diisolasi,
daya adaptasi luas, mudah ditemukan pada areal pertanaman, dapat tumbuh
dengan cepat pada berbagai substrat, memiliki kisaran mikroparasitisme yang luas
dan tidak bersifat patogen pada tanaman. Beberapa hasil penelitian melaporkan
bahwa. (Purwantisari et,al., 2019). Trichoderma sp. efektif dalam pengendalian
jamur penyakit yang berasal dari tanah / biji pada beberapa tanaman panen.
Mekanisme utama yang terlibat dalam aktivitas biokontrol di Trichoderma sp.
dilaporkan sebagai kompetisi untuk ruang dan nutrisi, produksi difusif dan atau
volatil dan tidak mudah menguap antibiotik dan enzim hidrolitik yang sebagian
menurunkan dinding sel patogen dan menyebabkan parasitisasi (Saputra et.al
2015)
Melihat kemampuan antagonis yang baik dalam penggunaannya secara
tunggal, maka pemanfaatan kombinasi bakteri ataupun cendawan pengendali
hayati diharapkan dapat menambah keberhasilan pengendalian. Beberapa
penelitian melaporkan pemanfaatan kombinasi antagonis yang berhasil untuk
mengendalikan penyakit tanaman. Kombinasi Bacillus pumilus INR7, B. Substilis
GB03 dan Curtobacterium flaccumfaciens MEI dapat meningkatkan kemampuan
pengendaliannya terhadap banyak patogen pada mentimun (Benhamou dan
Kloepper, 2017). Terbentuknya zona hambat menandakan bahwa bakteri
antagonis tersebut menghasilkan antibiotik. Dengan adanya dugaan bahwa bakteri
antagonis menghasilkan antibiotik maka mekanisme terpenting dari kerja
antibiotik terhadap sel bakteri adalah menghambat sintesa protein dan asam
nukleat oleh bakteri proteolitik, selain mekanisme tersebut aktivitas antibiotik
juga meliputi perusakan dan penghambatan pembentukan dinding sel (Nuti &
Giovanneti, 2015).
Uji antibiosis biasanya dilakukan dengan metode dual cultur atau biakan
ganda, yang menumbuhkan dua organisme yang berbeda dalam satu biakan
menggunakan medium pertumbuhan. Medium spesisfik dari Ralstonia syzygii
ialah TZC, medium spesifik yang digunakan bertujuan untuk menumbuhkan
xcvi
koloni bakteri khas dari Ralstonia syzygii. Media spesifik akan membuat koloni
bakteri berwarna merah keunguan dan memunculkan sifat khas dari bakteri
tersebut yaitu warna pada permukaan atas dan bawah berbeda. Namun jika
menggunkan medium umum seperti NA Ralstonia syzygii dapat tumbuh, akan
tetapi sifat khas dari koloni tidak muncul dikarenakan warna koloni akan berubah
menjadi warna cream. (Kurniawati, 2012)
Bakteri antagonis digunakan yaitu Actino bacteria. Actino bacteria ialah
peralihan dari jamur ke bakteri yang mana hifanya seperti jamur dan bereproduksi
seperti bakteri yaitu membelah diri. Medium pertumbuhan untuk aktinobakteri
ialah ISP2. Saat melakukan suspensi dengan menggunakan Actino bacteria ini
dapat digunakan dengan mengambil secra lagsung koloni tersebut. Namun, hifa
yang dimiliki oleh bakteri ini sangat kecil membuat hifa akan berterbangan dan
proses uji tidak maksimal. Sehingga suspensi Actino bacteria menggunakan
metode cair untuk mendapatkan hasil yang maksimal. (Jayanti, U. 2014)
Pengendalian menggunakan agnes hayati dapat mengendalikan patogen
sehingga megurangi penggunaan fungisida sintetis. Pengendalian hayati ini
banyak dikaji karena prinsip pengendaliannya mengarah kepada menjaga
keseimbangan lingkungan sehingga dapat menciptakan pertanian yang
berkelnajutan (Munif et al, 2012). Pengendalian hayati mengacu pada
pemanfaatan secara sengaja organisme local atau yang diintroduksi untuk
menekan populasi atau aktivitas patogen tumbuhan. Salah satu hal yang penting
dalam praktik pengendalian hayati ialah memanipulasi lingkungan sehingga
mampu meningkatkan aktivitas agens hayati yang secara tidak lansung dapat
menekan patogen. Pengendalian ini memanfaatkan mikroorganisme antagonis
melalui mekanisme antibiosis, kompetisi, hiperparasitisme, dan induksi resistensi
tanaman inang (Suryanto et al, 2010).
Hasil pengujian antagonisme apabila hasil positif akan terlihat adanya
zona bening pada sekitar kertas cakram yangdigunakan. Zona bening akan muncul
dikarenakan bentuk dari metabolisme dari Actino bacteria yang mampu
mengeluarkan senyawa seperti antibiotik, sehingga menekan pertumbuhan
patogen dan membuat patogen tidak mampu menyerang atau merebut makanan di
sekitar dari Actino bacteria (Utami, 2011)
xcvii
A. Waktu dan Tempat

Kamis tanggal 23 November 2023 dari pukul 11.10 – 12.50 WIB, dilakukan di
B. Bahan Praktikum
Adapun alat praktikum yang digunakan adalah cawan petri, vortex, jarum
ose tabung reaksi dan Bunsen.
Adapun bahan yang digunakan pada praktikum kali ini adalah isolate
bakteri Rizobakteri dan Ralstonia syzygii subsp. Indonesiensis, kertas cakram,
aquades steril dan kristal
Adapun prosedur dari praktikum kali ini adalah pada suspense bakteri
dimasukkan 5 kertas cakram Masukkan aquades steril ke isolate Ralstonia syzigii
lalu digerus dan dimasukkan kedalam tabung reaksi sebanyak 1ml dan divortex.
Setelah itu, tuangkan ke cawan petri yang sudah ada media NA dan diratakan
dengan segitiga prata atau kristal. Kristla dikeluarkan dengan jarum ose. Pada
waktu yang sama, kertas cakram di masukkan kedalam suspense Rizobakter dan
ditunggu selama 5menit dan diambil kertas cakram tersebut lalu letakkan kedalam
media NA yang berisi aquades dan Ralstonia tadi.
Pada uji control, cara kerjanya yaitu sama dengan cara kerja pada uji
antibiosis, dimana aquades dituangkan ke petri yang sudah ada isolate Ralstonia
lalu diratakan menggunakan kristal. Setelah itu, masukkan kertas cakram yang
sudah didiamkan ke dalam cawan petri tadi lalu diamati atau diinokulasi selama 3
x 24 jam.
xcviii
A. Hasil
Tabel 10. Uji Antibiosis
Perlakuan menggunakan isolat
bakteri Rizobacteri dan
Ralstonia syzygii subs.
1 Indonesiensis
Perlakuan menggunakan
Ralstonia syzygii subs.
Indonesiensis dan aquades
2
B. Pembahasan
Pada praktikum ini, terlihat adanya zona bersih pada cawan petri yang
berisi dua jenis mikroba. Zona bersih ini terbentuk karena adanya interaksi
antibiosis, yaitu hubungan asosial antara dua spesies mikroba. Dalam interaksi ini,
satu spesies menghasilkan senyawa kimia yang dapat menghambat pertumbuhan
spesies lain. Senyawa kimia ini dapat berupa sekret atau metabolit sekunder.
Bentuk lain dari interaksi antagonis di alam antara lain kompetisi,
parasitisme, predasi, dan amensalisme. Interaksi ini muncul karena adanya
beberapa jenis mikroorganisme yang menempati ruang dan waktu yang sama,
sehingga mereka harus bersaing untuk mendapatkan nutrisi. Akibatnya, beberapa
mikroorganisme dapat tumbuh dengan optimal, sementara yang lainnya tertekan
pertumbuhannya.
xcix
Pada praktikum antibiosis antar bakteri ini, terlihat adanya zona hambat.
Zona hambat ini membuktikan bahwa salah satu bakteri bersifat antagonis, yaitu
menghasilkan zat kimia yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri lain.
Sedangkan bakteri yang tidak terdapat zona hambat membuktikan bahwa bakteri
tersebut dapat hidup bersama. Hubungan ini biasanya terjadi ketika dua jenis
bakteri yang sama diinkubasi dalam tempat yang sama.
Antibiosis adalah interaksi biologis antara dua atau lebih organisme yang
merugikan, setidaknya salah satu dari organisme. Interaksi ini dapat berupa
hubungan antagonistik antara organisme dan zat metabolik yang dihasilkan oleh
organisme lain. Contohnya adalah zat toksik yang dikeluarkan mikroba sehingga
dapat membunuh atau menghambat pertumbuhan mikroba lain. Zat ini juga bisa
disebut zat kemoterapik.
Antibiosis adalah peristiwa yang menyebabkan tertekannya aktivitas suatu
mikroorganisme jika dua mikroorganisme atau lebih berada pada tempat yang
berdekatan. Uji antibiosis merupakan uji yang digunakan membuktikan bahwa
mikroorganisme yang bersifat antibiosis dapat menghambat aktivitas
mikrooganisme lain yang berada ditempat yang berdekatan. Mikroorganisme yang
bersifat antibiosis ini memiliki pertumbuhan yang cepat sehingga dapat menutupi
mikroorganisme yang berdekatan dengannya.
Resistensi merupakan suatu keadaan dimana antibiotik yang biasa
digunakan untuk mengobati infeksi bakteri tidak lagi bersifat efektif mengobati.
Bakteri telah dapat membentuk daya tahan klinis (resisten) terhadap antibiotik.
Hal ini terjadi akibat penggunaan antibiotik yang tidak tepat dan berulang.
Ketersediaan antibiotik yang tidak dipahami secara jelas takarannya oleh para
klinisi dalam menghadapi suatu kasus juga berperan dalam peningkatan resistensi.
Bahkan berbagai studi terkait antibiotik menemukan bahwa sekitar 40-62%
antibiotik digunakan secara tidak tepat bahkan untuk jenis penyakit yang
sebenarnya tidak memerluk an antibiotik. Resistensi antibiotik adalah suatu
permasalahan yang sudah mendunia yang masih sulit untuk dipecahkan.
Uji antagonis yang diperlukan untuk melihat adanya interaksi antar
mikroorganisme yang meliputi berkolonisasi, beradaptasi di lingkungan, dan
mendapatkan nutrisi. Interaksi mikroorganisme dapat bersifat menguntungkan
c
atau merugikan. Patogen dan antagonis merupakan persaingan akan sumber
nutrisi di dalam lingkungan tanah merupakan hal yang penting bagi beberapa
mikroba khusus untuk meningkatkan jumlah, sehingga menurunkan jumlah atau
keaktifan mikroorganisme lain. Penggunaan mikroba konsorsia dapat
meningkatkan kualitas pupuk hayati. Konsorsium mikroba sebagai inokulan dapat
memberikan efek lebih baik pada tanaman karena tipe-tipe mikroorganisme yang
berbeda dapat berinteraksi secara antagonis untuk memberikan nutrisi,
menghilangkan produk inhibitor dan menstimulasi bakteri satu sama lain
Antibiosis adalah mekanisme antagonism yang melibatkan hasil metabolit
penyebab lisis, enzim, senyawa folatil dan non-folatil atau toksin yang dihasilkan
oleh suatu mikroorganisme. Uji ini dilakukan untuk memilih beberapa isolat
bakteri sebagai kandidat agens antagonis yang berpotensi menekan penyakit.
Isolat bakteri yang mempunyai kemampuan untuk menghambat pertumbuhan
patogen ditandai dengan adanya zona bening. Kriteria keefektifan hasil uji
antagonisme secara invitro dalam screening ini dilihat dari terbentuk atau tidaknya
zona hambatan, yaitu zona bening di antara patogen dan calon agens antagonis.
Pada daerah perakaran atau lingkungan rizosfer ketersediaan nutrisi
tanaman dipengaruhi oleh adanya mikroba di dalamnya. Beberapa mikroba
rizosfer dapat memberikan efek menguntungkan bagi pertumbuhan tanaman.
Tanaman menarik mikroba dari daerah rizosfer dengan cara mengeluarkan
eksudat akar yang berperan sebagai sumber nutrisi bagi mikroba, sedangkan
mikroba mengeluarkan senyawa metabolit yang digunakan oleh tanaman untuk
tumbuh dan berkembang. Rizobakteri pemacu pertumbuhan tanaman atau disebut
dengan Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) adalah sekelompok
bakteri yang mengkolonisasi daerah perakaran tanaman dan menguntungkan bagi
tanaman. Peran dari Plant Growth Promoting Rhizobateria (PGPR) pada tanaman
antara lain sebagai pemacu pertumbuhan (biostimulan), penyedia hara tanaman
(biofertilizer) dan pengendali pathogen (bioprotektan). Manfaat PGPR untuk
tanaman dapat terjadi secara langsung maupun tidak langsung. Manfaat PGPR
yang terjadi secara langsung yaitu mampu memproduksi hormon pertumbuhan,
meningkatkan fiksasi nitrogen, meningkatkan persediaan nutrisi seperti serta
kolonisasi akar. Sedangkan manfaat yang terjadi secara tidak langsung yaitu
ci
seperti mengurangi keparahan penyakit dengan cara memproduksi senyawa
antibiosis, produksi siderofor, antibiotic.
Aplikasi PGPR pada tanaman dapat dilakukan dengan cara perendaman
bibit dan penyiraman. Perendaman bibit ataupun biji dengan PGPR bertujuan agar
memperpendek masa dormansi benih, sehingga benih langsung dapat
berkecambah dan mampu mencegah benih terinfeksi dari hama dan patogen
penyebab penyakit. Sedangkan perlakuan prnyiraman PGPR berfungsi sebagai
perlakuan susulan untuk menambah bakteri yang ada pada daerah rizosfer
sehingga populasi pada daerah rizosfer dapat membantu melakukan penyerapan
unsur hara yang berguna bagi ketahan tanaman dari serangan patogen
Pada hasil yang didapatkan terlihat bahwa media pada isolate yang diberi
perlakuan dengan bakteri rhizobakteri terlihat bahwa pertumbuhan dari isolate nya
lebih cepat dan meluas, juga terdapat zona pembatas bening yang menandakan
bahwa mikroba tersebut bersifat antibiosis dengan cara mengeluarkan senyawa
yang tampak seperti batas bening di sekitar koloninya. Sedangkan pada media
yang menjadi kontrol tidak terdapat adanya zona pembatas di sekitar media nya.
Penggunaan bakteri PGPR dalam mengendalikan patogen merupakan
salah satu Upaya dalam mengurangi penggunaan pestisida kimia, karena bakteri
PGPR merupakan bakteri yang berada di daerah rhizosfir atau daerah sekitar
perakaran yang sangat bermanfaat baik itu bagi pertumbuhan tanaman maupun
untuk mengendalikan patogen penyebab penyakit tanaman. Bakteri rhizosfer
dalam mengendalikan patogen dapat menghasilkan senyawa antimikroba seperti
antibiotik, siderofor untuk melemahkan pergerakan dari patogen, dan merusak
struktur sel sehingga patogen tidak mampu menginvasi tanaman karena sudah
dikalahkan oleh bakteri rhizosfer.
Bakteri PGPR juga dapat merangsang respons kekebalan tanaman,
meningkatkan fitohormon, dan mengaktivasi jalur pertahanan dari tanaman. Hal
ini dapat membuat tanaman lebih tahan terhadap serangan patogen. PGPR juga
memiliki kompetisi atau daya saing terhadap sumber daya yang dibutuhkan
dengan patogen. Dengan membatasi sumber daya dari patogen maka PGPR dapat
membantu dalam mengurangi potensi infeksi.
cii
BAB V. PENUTUP
A. Kesimpulan
Uji antagonisme menggunakan dua medium pertumbuhan. Tujuannya
agar masing-masing mikroba dapat tumbuh dengan sifat khusunya. Ralstonia
syzygii memiliki medium TZC dengan ciri khas warna permukaan atas dan bawah
berbeda dan warna koloni merah keunguan. Sedangkan aktinobakteri dengan
medium ISP2 dan termasuk mikroba peralihan dari jamur ke bakteri. karena
memiliki hifa seperti jamur dan mengalami reproduksi seperti bakteri dengan
membelah diri.
B. Saran
ciii
DAFTAR PUSTAKA
Benhamou, N., Kloepper J. W., and Tuzun S. 2017. Induction of Resistance

Agains Fusarium wilt of Tomato by Combination of Chitosan with an
Endophytic Bacterial Strain: Ultrastructure and Cytochemistry of the
Jayanti, U., Dasir, & Idealistuti. (2014). Kajian Penggunaan Tepung Tapioka dari
Berbagai Varietas Ubi Kayu (Manihot esculenta Crantz.) dan Jenis Ikan
Terhadap Sifat Sensoris pempek. 59–62
Kurniawati, D.H. 2012. Seleksi, Karakterisasi, Dan Identifikasi Isolat Bakteri
Termofilik Pasca Erupsi Merapi Sebagai Penghasil Enzim Protease .
[Skripsi]. Yogyakarta. Program Biologi Jurusan Pendidikan Biologi.
Universitas Negeri Yogyakarta.
Lestari, P. B.. Hartati, T. W. 2017. Mikrobiologi Berbasis Inkuiry. Penerbit
Gunung Samudera [Grup Penerbit PT Book Mart Indonesia].
Munif A, Wiyono S, Suwarno. 2012. Isolasi bakteri endofit asal padi gogo dan
potensinya sebagai agens biokontrol dan pemacu pertumbuhan. J Fitopatol
indones. 8(3):57–64.
Nuti, M. & Giovannetti, G., 2015. Bordeline Products and Between Bio-
fertilizers/Bioeffectors and Plant Protectants:
Purwantisari, S., dan Hastuti, R.B. 2019. Isolasi dan Identifikasi Jamur Indigenous
rhizosfer Tanaman Kentang dari Lahan Pertanian Kentang Organik di
Desa Pakis. Laboratorium Mikrobiologi Jurusan Biologi FMIPA Undip.
Magelang.
Saputra, R., Triwidodo A., Arif W. Uji aktivitas antagonistik beberapa isolat
Bacillus spp. Terhadap penyakit layu bakteri (Ralstonia solanacearum)
pada beberapa Varietas tomat dan identifikasinya. PROS SEM NAS
MASY BIODIV INDON. Volume 1, Nomor 5, Agustus 2015.
Suniti, Wayan. 2015. Potensi Bakteri Endofit dari Batang Panili Sehat sebagai
Agen Pengendali Hayati Fusarium oxysforum f.sp. vanillae Penyebab
Busuk Batang Panili. AGROTROP. 5 (1): 64-70.
Suryanto D, Patonah S, Munir E. 2010. Control of fusarium wilt of chili with
chitinolytic bacteria. HAYATI J Biosci. 17(1):5–8.
civ
Sutanto. 2012. Penerapan Pertanian Organik. Penerbit Kanisius : Jakarta.
Utami E R. 2011. Antibiotik, Resistensi, Dan Rasionalitas Terapi. Jurnal
ElHayah. Vol 1 : 191-198.
cv

Laporan - Akhir - Bakteriologi - Salinan - Hani - Salinan (1) Salinan

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Laporan - Akhir - Bakteriologi - Salinan - Hani - Salinan (1) Salinan

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM

PENGANTAR BAKTERIOLOGI TUMBUHAN

NAMA : Haniya Audry Devani

DEPARTEMEN PROTEKSI TANAMAN

Padang, 1 Desember 2023

A. Alat dan Bahan

A. Waktu dan Tempat

2 Cawan petri berfungsi sebagai

3 Autoklaf digunakan untuk

4 Neraca analitik digunakan untuk

6 Gelas ukur bergungsi sebagai alat

7 Gelas piala berfungsi sebagai tempat

8 Mikroskop berfungsi sebagai

9 Erlenmeyer berfungsi untuk

Tabel 2. Pengenalan media

Nutrient agar (NA)

Sterilisasi basah dengan cara uap

A. Waktu dan Tempat

Bakteri patogen hayati

Hidayat, Nur, dkk. (2018). Mikroorganisme dan Pemanfaatannya. Malang: UB

A. Uji gram positif dan gram negatif

A. Waktu dan tempat

Uji gram negativ pada bakteri

Uji gram positif pada bakteri

Uji gram negativ pada bakteri

Dwidjoseputro, D. 2018 Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.

A. Waktu dan tempat

Pengamatan pada 2x24 jam

Pengamatan pada 3x24 jam

Pengamatan pada 4x24 jam

A. Waktu dan tempat

Isolat bakteri yang disuntikkan ke

A. Waktu dan tempat

Praktikum Pengantar Bakteriologi Tumbuhan dilaksanakan pada hari

B. Alat dan bahan

Adapun alat praktikum yang digunakan adalah mikropipet, shaker, pinset,

Tabel 9. Uji Patogenesitas Pada Benih Tomat

Dewi, K. T., E., K, Arum, H. Imaduddin, Dan S. Antonius. 2015. Karakterisasi

A. Waktu dan Tempat

Benhamou, N., Kloepper J. W., and Tuzun S. 2017. Induction of Resistance

Anda mungkin juga menyukai