Metformin Sebagai Pencegahan

Dan Pengobatan Untuk

Preeklamsia:
Efek Pada Sekresi Tirosin Kinase
1 Mirip fms Dan Sekresi
Endoglin Dan Disfungsi Endotel
Oleh:
Irma Pretty M. L. Tobing
010 084 0150

PEMBIMBING:
dr. Jefferson Munthe, Sp.OG, M.Kes
dr. Ivolay

ABSTRAK

TUJUAN
PENELITIA
N

STUDI DESAIN
Peneliti melakukan eksperimen fungsional (in vitro dan ex
vivo) menggunakan jaringan utama manusia untuk
memeriksa efek metformin pada sekresi tirosin kinase 1
mirip fms dan sekresi endoglin dari plasenta, sel endotel,
dan eksplan vili plasenta.
Menggunakan suksinat, substrat mitokondria kompleks II,
untuk memeriksa apakah efek metformin pada sekresi
tirosin kinase 1 mirip fms dan sekresi endoglin dimediasi
melalui mitokondria.
Peneliti mengisolasi mitokondria dari plasenta preeklamsi
prematur dan subjek kontrol yang sedang hamil yang sesuai
dan diukur aktivitas rantai transport electron mitokondria
menggunakan tes spektrofotometri kinetik.

STUDI DESAIN
Sel endotel atau seluruh pembuluh darah ibu
diinkubasi dengan metformin untuk menentukan
apakah pemberian metformin itu menyelamatkan
proses disfungsi endotel yang diinduksi oleh salah
satu factor nekrosis tumor- (sel endotel) atau
eksplan vili plasenta media yang dikondisikan
(seluruh pembuluh darah).
Peneliti juga meneliti efek metformin pada
angiogenesis pada eksplan pembuluh darah omentum
ibu.

HASIL

HASIL
Aktivitas rantai transpor elektron mitokondria dalam
plasenta preeklampsia prematur meningkat dibandingkan
dengan subyek kontrol yang sedang hamil sesuai.
Metformin meningkatkan gambaran disfungsi endotel yang
relevan dengan preeklamsia.
Obat ini mengurangi ekspresi sel RNA endotel sel
vaskular molekul adhesi 1 yang diinduksi oleh faktor
nekrosis tumor
Media plasenta yang dikondisikan mengganggu
vasodilatasi yang diinduksi bradikinin
Metformin juga meningkatkan seluruh angiogenesis
pembuluh darah yang diganggu oleh tirosin kinase 1 mirip
fms.

KESIMPULAN

PILIHAN EDITOR

 Preeklamsia merupakan komplikasi kehamilan serius

yang secara global bertanggung jawab untuk > 100 ibu
dan 400 kematian perinatal setiap hari.
Sebuah langkah penting dalam kondisi patofisiologis
mungkin adalah iskemia/hipoksia plasenta ke
pelepasan tirosine kinase 1 mirip fms (sFlt-1) dan
Endoglin (sENG) ke dalam sirkulasi ibu disfungsi
endotel cedera organ multisistem.
Terdapat ketertarikan dalam penggunaan obat yang
menghambat hipoksia yang diinduksi faktor 1 (HIF1)
untuk mengobati preeklampsia.
HIF1 diregulasi dengan iskemia/hipoksia dan
memfasilitasi sekresi sFlt-1.
Obat yang menghalangi aktivitas HIF1a dapat
menurunkan sekresi sFlt-1.

 Metformin telah ditunjukkan menghambat HIF1

dengan menghalangi I kompleks dari rantai
transpor elektron mitokondria mengurangi
sekresi sFlt-1 pada wanita dengan preeklamsia.
Metformin telah dikaitkan dengan kemampuannya
untuk mengurangi sel vaskular molekul adhesi 1
(VCAM-1) molekul yang diekspresikan pada
permukaan luminal pembuluh darah pada proses
peradangan dan meningkat pada preeklampsia.
Metformin juga telah dilaporkan menginduksi
vasodilatasi pembuluh darah tikus yang mengalami
diabetes.

Tujuan

BAHAN DAN
METODE

Populasi pasien
Peneliti melakukan eksperimen fungsional
memberikan metformin pada jaringan manusia
dan menilai dampaknya pada sekresi sFlt-1
dan sENG, fungsi rantai transpor elektron
mitokondria, dan disfungsi endotel menguji
jaringan dari plasenta dan pembuluh darah.
Peneliti mengisolasi sel endothelial vena
umbilikalis manusia (HUVECs) dan sel primer
vili sitotrofoblas dari plasenta dan tali pusat
yang telah dikumpulkan dari pasien pada
waktu penelitian.

 Peneliti juga mengumpulkan eksplan vili

plasenta dari pasien preeklamsia dengan onset
proteinuria awal yang berat
Spesimen biopsy plasenta diambil dari 4
daerah plasenta secara acak seperti yang
direkomendasikan oleh konsorsium Co-Lab.
Ada hipertensi dan proteinuria (> 300 mg
protein dalam koleksi urin 24 jam) dalam
semua kasus.

 Untuk menilai aktivitas rantai transpor elektron

mitokondria, peneliti memperoleh spesimen
biopsi plasenta dari :

 Semua perempuan yang didiagnosis dengan preeklamsia

memiliki proteinuria.

Semua sampel plasenta dikumpulkan dari perempuan yang

menjalani persalinan sesarea.

Peneliti juga mengumpulkan jaringan omentum dari pasien

yang menjalani persalinan matur dengan SC elektif dan
diseksi arteri omentum

Arteri omentum ini digunakan untuk menilai efek metformin

pada vasodilatasi (melalui tekanan myography) dan
angiogenesis (tes ekspan arteri omentum)

Percobaan in vitro yang menilai metformin dan inhibitor aktivitas rantai transpor

elektron mitokondria dan dampaknya pada produksi sFlt-1 dan sENG dan disfungsi
endotel

 Disfungsi endotel diinduksi pada :

Metformin diberikan secara bersamaan pada HUVECs sebanyak 0,

1, 2, atau 5 mmol/L selama 24 jam, pada keseluruhan arteri

omentum sebanyak 0 dan 5 mmol/L selama 3 jam, dan eksplan

arteri omentum sebanyak 1 mmol/L selama 120 jam.

Pengukuran sFlt-1, sENG, dan VCAM-1, sFlt-1 e15a dan i13

Media yang dikondisikan dikumpulkan, dan RNA diekstraksi dengan peralatan
RNeasy dari percobaan fungsional dan tes disfungsi endotel HUVEC.

Tes Enzyme-Linked Immunosorbent untuk sFlt-1 dan sENG dilakukan dengan

peralatan DuoSet VEGF R1/Flt-1 dan peralatan ELISA DuoSet Endoglin
Manusia CD/105

RNA diukur dengan spektofotometer NanoDrop ND 1000

RNA (0,2 g) dikonversi menjadi DNA komplementer dengan penggunaan
peralatan pengembali transcriptase cDNA berkapasitas tinggi dari Applied
Biosystems

Tes ekspresi gen sybr untuk sFlt-1 E15a dan sFlt-1 i13 dilakukan, dan tes
ekspresi gen taqman digunakan untuk VCAM-1.

Penilaian efek metformin pada

vasodilatasi keseluruhan arteri omentum

Perlakuan pada keseluruhan

arteri omentum meningkatkan

tekanan pada miograf organ.

Dosis tambahan 0,01 nmol/L

untuk 1 mol/L bradikinin
diberikan, dan vasodilatasi

dinilai dengan mikroskop video

Penilaian efek metformin pada

angiogenesis dengan penggunaan eksplan

arteri omentum

Eksplan arteri omentum

(cincin 0,5-mm) diwarnai

dengan Calcein AM dan
diperiksa pada 40x
perbesaran dengan

mikroskop EVOS FL

Analisis statistik
Teknik rangkap tiga dilakukan untuk setiap percobaan, dengan
minimal 3 replikasi biologis untuk setiap studi in vitro

Ketika 2 kelompok dianalisis uji t (parametrik) atau tes

Mann-Whitney (data nonparametrik) digunakan.

Ketika 3 kelompok dibandingkan analisis uji varian 1-cara

(parametrik) atau tes Kruskal-Wallis (non-parametrik) digunakan.
Analisis statistik dilakukan dengan GraphPad Prism 6 software
Semua data dinyatakan sebagai rata-rata SEM; nilai
probabilitas <0,05 dianggap signifikan.

HASIL

KOMENTAR

Temuan utama dari penelitian ini

Metformin memiliki potensi untuk mencegah atau mengobati

preeklampsia.

Sekresi sFlt-1 diatur melalui rantai transpor elektron

mitokondria; metformin mungkin memblokir jalur ini

Sekresi sFlt-1 diatur melalui rantai transpor elektron

mitokondria.
Menggunakan 2 inhibitor, peneliti menunjukkan bahwa
menghalangi kompleks I atau III secara signifikan
menurunkan sekresi sFlt-1.
Kami telah menghasilkan bukti yang menunjukkan bahwa
metformin menghambat sekresi sFlt-1 dan sENG dengan
menghambat kompleks I dari rantai transpor elektron
mitokondria.
Pemberian suksinat menyelamatkan pengurangan sekresi
sFlt-1 yang diinduksi metformin tapi tidak berpengaruh pada
sekresi sFlt-1 sekresi bila diberikan sendiri.

 Pertimbangan lain adalah apakah metformin

dapat menghambat sinsialisasi untuk
mengurangi sekresi sFlt-1.
Peneliti tidak percaya hal tersebut mungkin
terjadi dengan alasan berikut:

1. Metformin memiliki efek yang sama pada sekresi sFlt-1

dari sel endotel, yang tidak menyatu;
2. Peneliti mengamati penurunan sekresi sFlt-1 dari
eksplan vili plasenta yang utuh,
3. Ada penurunan mRNA sFlt-1 dari trofoblas utama yang
menunjukkan efek langsung pada peralatan transkripsi
sel.

Aktivitas rantai transport electron mitokondria

meningkat pada plasenta preeklampsia prematur

Peneliti menemukan adanya peningkatan aktivitas pada semua

kompleks rantai transpor elektron dalam plasenta preeklampsia
prematur
Studi ini adalah yang pertama memeriksa preeklamsia prematur
secara khusus, dan dengan sampel penelitian kohort yang jauh
lebih besar
Mengingat bahwa data menunjukkan bahwa plasenta preeklampsia
telah meningkatkan aktivitas rantai transpor electron
peningkatan aktivitas rantai transpor elektron mitokondria pada
preeklampsia mungkin memiliki peran dalam peningkatan sekresi
sFlt-1 dan sENG
Implikasi terapi temuan ini skrining inhibitor rantai transport
electron mitokondria lainnya mungkin mengidentifikasi calon
terapi baru untuk preeklamsia.

Metformin menyelamatkan disfungsi endotel dan

gangguan vasodilatasi khusus untuk preeklamsia

Metformin meningkatkan angiogenesis

Metformin memiliki potensi untuk mencegah dan

mengobati preeklampsia

Metformin aman pada kehamilan dan saat ini digunakan untuk mengobati
diabetes mellitus gestasional.

Uji coba secara acak yang membandingkan metformin dan insulin untuk

mengobati diabetes gestasional mellitus menunjukkan penurunan yang tidak

signifikan dalam kejadian hipertensi gestasional dan preeklampsia di antara
mereka yang diobati dengan metformin.

Sebuah uji coba secara acak yang menilai efek metformin pada

pengurangan morbiditas perinatal pada wanita obesitas tidak mengidentifikasi

perbedaan dalam risiko preeklamsia.

Mengingat temuan kami mengenai adanya penurunan sekresi sFlt-1 dan

sENG plasenta dan disfungsi endotel yang membaik metformin mungkin

dapat mengurangi aspek plasenta dan pembuluh darah ibu dari preeklamsi.

KESIMPULAN

 Peneliti telah melakukan studi praklinis menggunakan jaringan

utama manusia untuk menunjukkan bahwa aktivitas rantai
transport electron mitokondria diregulasi dalam plasenta
preeklampsia premature dan bahwa rantai transport electron
mitokondria mengatur sel vili sitotrofoblas dan sekresi sel
endotel sFlt-1 dan sENG.
Metformin menurunkan sekresi sFlt-1 dan sENg dengan
menghambat kompleks 1 mitokondria
Metformin mengurangi fitur kunci dari disfungsi endotel yang
spesifik untuk preeklamsia dan meningkatkan angiogenesis.

Metformin mungkin pencegahan baru atau menjadi

terapi untuk preeklamsia dan memiliki potensi untuk
mengurangi beban penyakit ini akan adanya
komplikasi pada kehamilan yang besar.