Uji Kehamilan, Golongan

Darah dan Rhesus

Bella Eka Pratiwi
Christoporus Okista Ardi
Dian Puspita Sari Kismadayanti
Divika Normalita Sari
 CHEMIDEX DIRECT
Tes Lateks Direk cara slide untuk uji kehamilan
Monoklonal -HCG

TUJUAN PENGGUNAAN
Uji slide langsung untuk mendeteksi -HCG manusia (Beta-Monoklonal)
secara kualitatif dalam urin.
 PENDAHULUAN
Human Chorionic Gonadotropin (HCG) adalah hormon glikoprotein yang
disekresi oleh plasenta yang berkembang tak lama setelah pembuahan.
Pada kehamilan normal, HCG dapat dideteksi dalam serum sesaat setelah 7
hari kehamilan, dan meningkat dua kali lipat setiap 1.3 sampai 2 hari. Pada
saat pertama periode menstruasi normal terakhir terlewati, konsentrasi
HCG adalah sekitar 100 mIU/ml dan puncaknya 100.000-200.000 mlU/ml
terlihat pada akhir trimester pertama. Kemunculan HCG sesaat setelah
pembuahan dan kenaikan konsentrasi berikutnya selama pertumbuhan
awal gestasi menjadikannya sebuah penanda yang sangat baik untuk deteksi
awal kehamilan.
Peningkatan kadar serum HCG sebanding dengan yang diamati
pada awal kehamilan juga dapat dikaitkan dengan tropoblas atau
non-tropoblastik neoplasma seperti misalnya mola hidatidosa,
koriokarsinoma; Oleh karena itu, kemungkinan terhadap
penyakit tersebut harus disingkirkan sebelum hasil positif HCG
dianggap diagnostik untuk kehamilan.

Uji Kehamilan Langsung merupakan tes aglutinasi lateks yang

cepat untuk mendeteksi HCG pada tingkat 0,3 IU/ml atau lebih
tinggi. Tes menggunakan antibodi monoklonal yang muncul
terhadap HCG. Spesimen yang positif akan menghasilkan
aglutinasi dari reagen lateks dalam waktu 2 menit.
PRINSIP

Uji Kehamilan Langsung didasarkan pada reaksi aglutinasi

lateks cepat antara antibodi yang dilapisi partikel lateks dan
molekul HCG. Partikel lateks yang dilapisi dengan antibodi
muncul terhadap spesimen urin membentuk kompleks
dengan antibodi dilapisi partikel lateks dan menghasilkan
aglutinasi pada saat pencampuran.
REAGEN DAN BAHAN YANG DISEDIAKAN

1. Reagen lateks: suspensi HCG monoklonal dilapisi

lateks, mengandung 0,1% natrium azida.
2. Pipet tetes.
3. Glass Slide/lempeng.
TINDAKAN PENCEGAHAN

1. HANYA DIGUNAKAN UNTUK DIAGNOSA IN VITRO.

2. Jangan menggunakan komponen kit setelah tanggal
kadaluwarsa.
3. Reagen harus disimpan dalam 2 - 8 C saat tidak
digunakan. Jangan membekukan reagen.
4. Sampel pasien harus ditangani dengan cara yang sama
seperti bahan biologis berpotensi infektif/infeksius
PENYIMPANAN DAN STABILITAS

Simpan reagen pada 2-8C. Reagen stabil sampai tanggal

kadaluarsa yang tertera pada label. Perangkat reagen dapat
disimpan pada suhu ruang (di bawah 15C) selama dua
bulan. Setelah dua bulan, semua reagen dianggap
kadaluarsa walaupun berbeda dengan tanggal kadaluarsa.
PENGUMPULAN SPESIMEN
Urin sampel harus dikumpulkan di wadah plastik atau gelas yang
bersih, kering tanpa pengawet. Urin sewaktu dapat digunakan.
Namun, urin pagi pertama umumnya mengandung HCG dengan
konsentrasi tertinggi. Spesimen urin dapat didinginkan (2-8C) dan
dapat disimpan hingga 72 jam sebelum pengujian. Jika sampel
didinginkan, sampel harus diseimbangkan ke suhu ruang sebelum
melakukan pengujian. Sampel urin yang terdapat presipitat harus
disaring, disentrifugasi, atau dibiarkan mengendap dan didapatkan
alikuot yang jernih untuk pengujian.
PROSEDUR PENGUJIAN

1. Teteskan satu tetes spesimen urin ke dalam lingkaran yang ada

pada slide.
2. Goyang dan homogenkan suspensi lateks. Teteskan satu tetes
suspensi ke dalam urin.
3. Aduk dengan batang pengaduk hingga campuran menyebar
sepenuhnya ke seluruh lingkaran.
4. Goyangkan slide secara perlahan selama dua menit untuk melihat
aglutinasi. Pengelihatan di bawah sinar langsung membantu dalam
pengelihatan aglutinasi. Campuran yang kering dapat memberikan
hasil yang salah. Jangan menginterpretasi hasil setelah tiga menit.
INTERPRETASI HASIL

1.Positif : Munculnya aglutinasi dalam dua menit.

2.Negatif : Tidak ada aglutinasi dalam dua menit.
BATASAN PROSEDUR
1. Hanya untuk spesimen urine; Uji langsung kehamilan tidak diperuntukkan
untuk pemeriksaan sampel serum.
2. Kadar HCG harus lebih dari 0.3 IU/ml agar hasil positif. Kadar HCG kurang
dari 0.3 IU/ml akan memberikan hasil negatif.
3. Sejumlah kondisi selain kehamilan termasuk penyakit tropoblastik dan
neoplasma non-tropoblastik tertentu menyebabkan meningkatnya HCG.
Diagnosis ini harus dipertimbangkan jika telah sesuai dengan bukti klinis.
4. Seperti dengan semua tes diagnostik, menegakkan diagnosis definitif
tidak boleh dilakukan berdasarkan hasil tes tunggal, tetapi harus dibuat
berdasarkan dokter setelah semua hasil klinis dan laboratorium
dievaluasi.
KONTROL KUALITAS
Sangat direkomendasikan jika kontrol positif dan negatif disertakan di
setiap rangkaian tes.

NILAI EKSPETASI
Pria yang sehat dan wanita yang sedang tidak hamil tidak memiliki
HCG yang terdeteksi oleh Uji Kehamilan, kadar HCG 0.3 IU/ml dapat
dicapai sesaat setelah beberapa hari melewati periode menstruasi
terakhir kemudian menurun ke nilai yang lebih rendah selama sisa
kehamilan. Setelah persalinan, kadar hCG berkurang dengan cepat dan
biasanya kembali normal dalam beberapa hari setelah persalinan.
KARAKTERISTIK PERFORMA

A. Sensitivitas : Sensitivitas analisis Uji Langsung Kehamilan telah diatur pada 0.3
IU/ml HCG.
B. Spesifitas : Penambahan 600 mIU/mL LH, 1,000 mIU/mL FSH dan 1,000 mIU/mL
TSH tidak berefek (reaktifitas silang) kepada hasil tes spesimen positif maupun
negatif.
C. Perbandingan : Korelasi dengan uji kualitatif aglutinasi didapat berdasarkan 95
urin yang dipilih secara acak dianalisa dengan prosedur pengujian aglutinasi
lateks langsung dan didapatkan memiliki kesejajaran dengan metode lateks yang
tersedia secara komersial. Pasien tersebut, 95 orang menunjukkan kesepakatan
(65 negatif dan 30 positif untuk 100% korelasi). Sampel yang terpilih kemudian
diuji lebih jauh dengan metode RIA kuantitatif. Hasilnya mengindikasikan bahwa
sampel yang memiliki hCG kurang dari 200 mIU/mL menunjukkan tidak adanya
aglutinasi sedangkan sampel yang memiliki hCG lebih dari 500 mIU/mL
menujukkan adanya aglutinasi.
D. Uji Interferensi :
Zat berikut ditambahkan ke dalam sampel urin bebas hCG dan
dibubuhi 1.0 IU/mL hCG.
Tidak ada konsentrasi zat yang di uji ikut tercampur dalam uji ini.

Asetaminofen 20 mg/dL
Asam asetilsalisilat 20 mg/dL
Asam askorbat 20 mg/dL
Glukosa 2 g/dL
Kafein 20 mg/dL
FERTITEXmono

Kehamilan langsung Uji Lateks

Uji monoklonal Lateks aglutinasi Slide (Metode Langsung)
untuk Kualitatif Determinationof Human Chorionic
Gonadotropin (hCG) dalam Non-dilusian Urine (ND)
Metode
FERTITEXmono adalah tes kualitatif untuk deteksi dini human chorionic
gonadotropin (hCG) dalam urin.
HCG ada dalam sampel ND-urin bereaksi secara imunologi dengan
monoklonal antibodi anti-hCG terikat partikel lateks. Reaksi itu
ditunjukkan dengan aglutinasi jelas terlihat dari partikel lateks dalam
sel uji slide kaca yang digunakan.
Hasil aglutinasi: hCG positif
Tidak ada hasil Aglutinasi:-hCG negatif
Kepekaan

FERTITEXmono distandarisasi WHO, untuk hCG, untuk

mendeteksi konsentrasi khusus hCG dalam urin dari 200 IU /
l atau lebih tinggi.
Dalam banyak kasus kehamilan reaksi positif karena itu
mungkin sudah 2 hari setelah masa berhentinya menstruasi.
Pada tes pertama membuktikan negatif dianjurkan untuk
mengulanginya beberapa hari kemudian dengan urin pagi
pertama.
Isi
LR 100 Lateks Reagen (topi putih)
Suspensi partikel polystyrene lateks, dilapisi dengan
monoklonal antibodi anti-hCG (tikus)
PC 1.0 ml Kontrol Urine Positif (cap merah)
Siap-untuk-menggunakan kontrol yang mengandung
konsentrasi hCG yang cukup untuk menghasilkan aglutinasi
yang berbeda
NC 1.0 ml Kontrol Urine Negatif (cap hijau)
Siap-untuk-menggunakan kontrol, non-reaktif terhadap LR
1 Kaca Slide dengan 6 sel uji
100 Pippets Urine pakai / pengaduk
LR PC dan NC mengandung 0,095% natrium azida
Stabilitas
LR PC dan NC stabil sampai dengan tanggal
kadaluwarsa bila disimpan pada 2 ... 8 O C.
Jangan dibekukan!
Contoh

Untuk urin segar apapun dapat digunakan, namun urin pagi pertama
umumnya mengandung konsentrasi tertinggi hCG dan itulah yang
paling cocok.
Mengumpulkan urin dalam wadah bersih, bebas detergen dan gelas
kering atau wadah plastik tanpa bahan pengawet.
Tes harus dilakukan sesegera mungkin, sebaiknya dalam waktu 24 jam
setelah pengumpulan. Untuk analisis spesimen urin dapat disimpan
pada 2 ... 8 o C sampai 72 jam.
Untuk mencapai hasil yang optimal, semua sampel, terutama urin
keruh, harus disentrifugasi sebelum digunakan.
Gunakan hanya urine, tidak ada serum!
Catatan Penting
PC dan NC yang akan digunakan dengan masing-masing
seri untuk perbandingan dengan spesimen yang tidak
diketahui untuk membedakan mungkin gumpalan reagen
lateks dari aglutinasi nyata.
Gunakan hanya slide kaca disertakan
dengan kit.
Ini harus bersih dan kering. Setelah digunakan cucilah
dengan benar dengan air hangat dan keringkan dengan kain
lembut atau tisu kertas. Jangan gunakan deterjen, sabun
atau pelarut organic.
Pipet urin disediakan dengan test kit digunakan juga sebagai
tongkat pencampuran untuk sampel atau kontrol campuran
LR pada slide.
Gunakan pipet secara terpisah / pengaduk
Skema Pipetting
Bawa LR, PC, NC dan sampel urine untuk suhu kamar.
Campur LR hati-hati sebelum menggunakan untuk menangguhkan partikel lateks
sepenuhnya.
Pipet / drop ke sel terpisah dari slide:
Sampel urin (tahan pipet vertikal!) 1 tetes
PC 1 tetes
NC 1 tetes

LR ke semua sampel, PC dan NC 1 tetes, masing-masing

Campur selama kurang lebih 5 detik dan menyebar cairan di seluruh area sel
tertentu menggunakan pipet yang sesuai / pencampuran tongkat.
Miringkan slide bolak-balik selama 2 menit sehingga campuran reaksi berputar dengan
lambat dalam sel, atau menempatkan slide pada rotator otomatis pada 100 rpm

Pada akhir 2 menit membaca hasil di bawah cahaya buatan terang

Interpretasi Hasil

Aglutinasi dalam waktu 2 menit (hCG positif),

tidak ada aglutinasi dalam waktu 2 menit (hCG
negative)
Catatan Diagnostik

Sejumlah kondisi selain kehamilan, termasuk mola

hidatidosa, chorion-epithelioma dan neoplasma non-
trofoblas tertentu, menyebabkan peningkatan kadar hCG.
Dalam kasus extra-uterus kehamilan, toksemia, kematian
janin atau terancam aborsi, pengeluaran hCG sering
menurun.
Diagnosa ini harus dipertimbangkan jika sesuai dengan bukti
klinis.
Jika spesimen urine terlalu encer, misalnya karena asupan cairan tinggi
diuretik, tingkat hCG artifisial menurun dan mungkin tidak terdeteksi.
Jika kehamilan masih dicurigai, tes harus diulang dengan urin pagi
pertama pada hari kemudian.
Jika hasil yang tidak jelas atau reaksi positif kurang dipercaya,
rekomendasikan untuk dikerjakan tes hCG 1-langkah (REF 68902,
68932, 68004) dengan tinggi sensitivityof 25 IU / l.
Seperti semua tes kehamilan, diagnosis akhir tidak boleh dilakukan
pada hasil tes tunggal, tetapi harus didasarkan pada korelasi dari hasil
tes dengan tanda-tanda klinis typicial dan gejala.
Semua reagen mengandung sodium azide: Jangan menelan. Hindari
kontak dengan kulit dan selaput lendir.
 Anti-A, Anti-B, Anti-AB

RINGKASAN pada 1900, Landsteiner menemukan serum beberapa

orang yang akan menggumpalkan sel darah merah lainnya. 4 macam
fenotip yang sah diakui: O, A, B, AB. Bagian dari A dan B yang telah
diidentifikasi.
Kel. depan Kel. terbalik Fenotip Kaukasia
ABO %
A B AB A1 A2 B O

+ 0 + 0 0 + 0 A 42

0 + + + + 0 0 B 10

0 0 0 + + + 0 O 44

+ + + 0 0 0 0 AB
PRINSIP

reagen akan langsung menyebabkan aglutinasi

(penggumpalan) dari uji sel darah merah yang membawa
kecocokan ABO antigen. Tidak adanya aglutinasi
menunjukkan bahwa ABO antigen tidak sesuai (lihat
Keterbatasan).
REAGEN
monoklonal IgM golongan darah reagen ABO mengandung antibodi
monoklonal diencerkan dalam buffer fosfat yang mengandung klorida
aodium, EDTA setiap reagen disuplai pada pengenceran optimal untuk
digunakam dalam semua teknik yang dianjurkan dibawah tanpa perlu
pengenceran lanjut/penambahan. Untuk banyak nomor referensi dan
tanggal kadaluarsa lihat Label Botol.
Produk Sel/Clone Warna Pewarna yang
Dipakai
Anti-A 9113D10 Biru Patent Blue

Anti-B 9621A8 Kuning Tetrazine

Anti-A,B 15D12+9113D10 Tidak Tidak Ada

berwarna
PENYIMPANAN

jangan dibekukan. Botol regen harus disimpan pada 2-

8oC pada penerimaan. Penyimpanan berkepanjangan
pada suhu diatas rata-rata dapat membuat hilangnya
reaktivitas reagen dengan cepat.
PENGUMPULAN SAMPEL DAN
PERSIAPAN
Sampel darah diambil dengan atau tanpa antikoagulan dapat
digunakan untuk antigen mengetik. Jika pengujian tertunda
spesimen pada 2-8C. EDTA dan sampel sitrat harus diketik
dalam waktu 48 jam. Sampel dikumpulkan ke ACD, CPD atau
CPDA-1 dapat diuji hingga 35 hari dari tanggal penarikan. Semua
sampel darah harus dicuci setidaknya dua kali dengan PBS
sebelum diuji. Sampel darah yang lisis dapat memberikan hasil
PENCEGAHAN
1. Reagen dimaksudkan untuk digunakan diagnostik in vitro saja.
2. Jika botol reagen rusak atau bocor, segera buang isinya.
3. Jangan menggunakan reagen melewati tanggal kedaluwarsa (lihat Vial
Label).
4. Jangan menggunakan reagen jika ada endapan.
5. Pakaian pelindung harus dipakai saat menangani reagen, seperti sarung
tangan sekali pakai dan jas laboratorium.
6. Reagen telah disaring melalui 0,2 m kapsul untuk mengurangi bio-
beban. Setelah botol dibuka isi harus tetap layak sampai tanggal
kadaluwarsa selama tidak ada kekeruhan, yang dapat menunjukkan reagen
rusakan atau kontaminasi.
7. Reagen mengandung <0,1% natrium azida. Sodium azide mungkin
beracun jika tertelan dan dapat bereaksi dengan timbal dan tembaga pipa
untuk membentuk azides logam peledak. Siram pembuangan dengan
volume air yang besar.
8. Tidak ada tes yang dikenal dapat menjamin bahwa produk-produk yang
berasal dari sumber daya manusia atau hewan bebas dari agen
infeksi. Perawatan harus diambil dalam pembuangan tiap botol dan isinya.
PELEPASAN REAGEN DAN MENANGANI
TUMPAHAN

untuk informasi tentang pembuangan reagen dan

dekontaminasi dari tumpahan lihat Material Safety
Data Sheets, tersedia di permintaan.
PENCEGAHAN ANALITIS

1. Disarankan kontrol positif dan kontrol negatif diuji secara paralel

dengan setiap bagian tes. Tes harus dianggap tidak sah jika kontrol
tidak menunjukkan hasil yang diharapkan.
2. Ketika mengetik sel darah merah dari seorang pasien penting
bahwa reagen kontrol negatif disertakan sejak makromolekul yang
potensiator di reagen dapat menyebabkan reaksi positif palsu
dengan sel IgG dilapisi.
3. Spesimen darah yang lemah A atau B subkelompok (misalnya Ax)
dapat memberikan naik ke reaksi negatif atau lemah palsu saat diuji
menggunakan slide, piring microtitre atau kartu gel. Dianjurkan
untuk tes ulang subkelompok lemah menggunakan teknik tabung.
4. Individu yang lebih tua dari enam bulan harus memiliki darah
ABO mereka. Hasil pengelompokan dikonfirmasi dengan
menguji serum atau plasma terhadap kelompok yang dikenal
A1 dan B sel sebelum darah ABO mereka dapat dikonfirmasi.

5. Direkomendasikan teknik satu volume sekitar 45 uL ketika

menggunakan pipet botol yang disediakan.

6. Penggunaan reagen dan interpretasi hasil harus dilakukan

oleh tenaga terlatih dan berkualitas sesuai dengan persyaratan
dari negara mana reagen yang digunakan.

7. Pengguna harus menentukan kesesuaian reagen untuk

digunakan dalam teknik lainnya.
REAGENTS DAN BAHAN DIBUTUHKAN
Aplikator tongkat
Pembaca plat otomatis.
Kaca mikroskop slide.
Tabung kaca (10 x 75 atau 12 x 75 mm)
Lempeng centrifuge
Fosfat Buffered Saline (PBS): NaCl 0,9%, pH 7,0 0,2 pada suhu 22
derajat celcius 1C
Piring pengocok
Positif (idealnya kelompok A2B) dan negatif (kelompok O)
mengontrol sel merah
Uji tabung centrifuge
Centrifuge volumetrik
Divalidasi "U" dengan baik microplates
TEKNIK YANG DISARANKAN
A.TEKNIK TABUNG

1. Siapkan suspensi 2-3% dari uji sel darah merah dicuci di PBS.
2. Tempatkan dalam tabung reaksi berlabel: 1 volume Anti-ABO
reagen dan 1 volume suspensi tes sel darah merah.
3. Aduk rata dan teteskan pada suhu kamar selama 1 menit.
4. Centrifuge semua tabung selama 10 detik pada 1000 RCF atau
waktu alternatif yang disesuaikan.
5. Disuspensi tombol sel darah merah dengan hati-hati dan baca
makroskopik untuk aglutinasi.
6. Setiap tabung, yang menunjukkan hasil negatif atau hasil
dipertanyakan, harus diinkubasi selama 15 menit pada suhu kamar.
7. Setelah inkubasi, ulangi langkah 4 dan 5.
B. Teknik Lempeng, menggunakan sumur U

0. siapkan 2-3% suspensi eritrosit uji dicuci di PBS.

1. tempat di telah sesuai baik: 1 Volume Plasmatec Anti-ABO reagen
dan 1 tes Volume suspensi sel darah merah.
2. mix secara menyeluruh, sebaiknya menggunakan shaker lempeng,
merawat untuk menghindari kontaminasi silang baik.
3. menetaskan pada suhu kamar selama 15 menit (tergantung pada
pengguna waktu)
4. centrifuge yang micoplate selama 1 menit pada 140 RCF atau untuk
waktu yang alternatif yang sesuai dan kekuatan
5. resuspend tombol sel menggunakan agitasi dikendalikan dengan
hati-hati pada shaker lempeng
6. membaca makroskopik atau dengan pembaca otomatis divalidasi
7. reaksi lemah harus diulang dengan teknik tabung
C. Teknik Geser

1. menyiapkan suspensi 35-45% dari sel darah merah uji serum,

plasma atau pbs
2. Tempat pada slide kaca berlabel: 1 Volume Plasmatec Anti-ABO
reagen Dan 1 tes Volume suspensi sel Darah Merah.
3. menggunakan aplikator tongkat bersih, campuran reagen dan sel-
sel di area seluas sekitar 20 x 40 mm
4. perlahan miringkan slide bolak-balik selama 30 detik, dengan
sesekali pencampuran lebih lanjut selama periode 2 menit,
mempertahankan slide pada suhu kamar.
5. baca makroskopik setelah 2 menit selama cahaya menyebar dan
jangan kesalahan helai fibrin sebagai aglutinasi
6. reaksi yang lemah harus diulang dengan teknik tabung
INTERPRETASI HASIL UJI
1. positif: aglutinasi dari sel-sel merah uji merupakan hasil tes positif dan
dalam keterbatasan diterima dari prosedur tes, menunjukkan adanya
antigen telah sesuai ABO pada sel darah merah uji

2. negatif: tidak ada aglutinasi dari sel-sel merah uji merupakan hasil negatif
dan dalam keterbatasan diterima dari prosedur tes, menunjukkan tidak
adanya antigen telah sesuai ABO pada sel darah merah tes.

3. perbedaan: jika hasil yang diperoleh dengan kelompok terbalik jangan

berkorelasi dengan kelompok maju, penyelidikan lebih lanjut diperlukan

4. hasil tes dari sel-sel yang agglutinated menggunakan reagen kontrol

negatif harus dikeluarkan, sebagai aglutinasi yang paling mungkin
disebabkan oleh effectbof yang yang potensiator makromolekul di reagen
pada sel-sel peka
STABILITAS REAKSI
1. membaca semua tabung dan lempeng tes langsung
setelah sentrifugasi.

2. tes slie harus ditafsirkan dalam waktu dua menit untuk

memastikan kekhususan dan untuk menghindari
kemungkinan hasil negatif mungkin salah
diinterpretasikan sebagai posotive toreagent karena.

3. harus hati-hati dalam menafsirkan hasil pengujian yang

dilakukan pada suhu lain yang mereka dianjurkan.
KETERBATASAN
1. ABO antigen tidak sepenuhnya dikembangkan pada saat lahir dan reaksi sehingga
lemah karena itu dapat terjadi dengan spesimen kabel atau neonatal
2. bila menggunakan Plasmatec monoklonal Anti-A, B, soecimens darah lemah A
atau B subkelompok (misalnya Ax) dapat menimbulkan reaksi negatif atau lemah
palsu saat diuji menggunakan slide, paltes microtiter atau kartu gel. disarankan
untuk tes ulang subkelompok lemah menggunakan teknik tabung.
3. Plasmatec monoklonal Anti-A atau anti-B tidak divalidasi untuk mendeteksi Ax
dan A3 atau Bx sebuah B3 antigen resp dan dengan demikian kami tidak
mengklaim reaktivitas dari monoklonal Anti-A atau anti-B reagen hatinya tidak ini
lemah A dan B sub -groups.
4. darah tersimpan dapat memberikan reaksi lebih lemah dari darah segar.
5. Hasil postive atau salah False negative dapat terjadi karena:
?? kontaminasi bahan uji
?? Penyimpanan yang tidak benar, cincentration sel, waktu inkubasi atau suhu
?? sentrifugasi yang tidak tepat atau berlebihan
?? penyimpangan dari teknik direkomendasikan
?? sampel kabel cintaminated dengan jeli Wharton
KARAKTERISTIK KINERJA TERTENTU
1. reagen telah ditandai dengan semua prosedur yang disebutkan dalam Teknik
Direkomendasikan.
2. rilis tp sebelumnya, masing-masing banyak Plasmatec monoklonal Anti-A, Anti-B,
dan ANnti-A, B diuji oleh Teknik Direkomendasikan hatinya tidak panel antigen-
cocok reaktivitas.
3. Kekhususan antibodi monoklonal sumber ditunjukkan menggunakan panel sel
antigen-negatif.
4. potensi reagen telah diuji terhadap resiko standar acuan potensi minimum
berikut diperoleh frrom Nasional Instituteof Biologi Standar dan Kontrol (NIBSC):
?? Anti-A referensi standar 88/724
5. Plasmatec Anti-B tidak bereaksi dengan "Acquired-B" sel darah merah.
6. Reagen Plasmatec monoklonal ABO tidak mendeteksi antigen crypt seperti T, Tn
atau Cad.
7. Quality Control reagen dilakukan dengan menggunakan sel darah merah yang
telah dicuci dua kali dengan PBS sebelum digunakan.
8. reagen sesuai dengan rekomendasi yang terdapat dalam edisi terbaru dari
Guidlines Inggris Pelayanan Transfusi Darah.
SANGKALAN

1. Pengguna bertanggung jawab atas kinerja reagen dengan metode

apapun selain yang disebutkan dalam Teknik Direkomendasikan.

2. Setiap devaiations dari Teknik Direkomendasikan harus divalidasi

sebelum digunakan
Anti-D Monoklonal
RINGKASAN

golongan darah resus ditemukan pada tahun 1940. Rh D negatif. Antigen

D adalah antigen sel darah merah non-ABO yang paling signifikan secara
klinis dan telah terlibat dalam menyebabkan hemolitik Transfusi Reaksi
hemolitik dan Penyakit dari baru lahir.

Afro-Amerika
Anti D Fenotip Kaukasian %
%
+ Rh D + ve 85 72

0 Rh D ve 5 26
Prinsip
Reagen akan menyebabkan aglutinasi langsung (penggumpalan) dari uji sel
darah merah yang membawa antigen D. Umumnya tidak ada aglutinasi yang
menunjukkan adanya antigen D (lihat REAGENTS Plasmatec monoklonal IgM
Anti-D Clone 1 pengelompokan darah reagen adalah reagen protein rendah
yang mengandung monoklonal IgM antibodi manusia diencerkan dengan
natrium klorida (0,9 g%), albumin bovine (3 g %) dan potensiator
makromolekul.
Ketika mengetik sampel pasien, masing-masing reagen akan langsung
menggumpalkan Rh D sel positif, termasuk mayoritas varian (proporsi
tinggi lemah D (Du) fenotipe ketika menggunakan teknik yang
disarankan. Setiap reagen disuplai pada pengenceran optimal untuk
digunakan pada sampel pasien dengan semua teknik yang disarankan
tercantum di bawah tanpa perlu pengenceran lebih lanjut atau
tambahan. Untuk nomor referensi banyak dan tanggal kadaluwarsa
melihat Label Vial.

Produk Garis sel/klon

Anti D klon 1 RUM!

EKSPRESI MELEMAH DARI RhD ANTIGEN

Istilah kolektif Du secara luas digunakan untuk menggambarkan sel

darah merah yang memiliki ekspresi yang lebih lemah dari antigen D
dari biasanya. Istilah lemah D menunjukkan individu dengan
berkurangnya jumlah situs D antigen lengkap per sel darah merah.
Istilah D parsial menunjukkan individu dengan hilang epitop antigen D.
Sel DVI adalah kategori D parsial yang merindukan epitop paling D.
Kedua Clone 1 dan 2 Clone reagen akan mendeteksi sebagian contoh
dari sel darah merah D parsial dan lemah oleh aglutinasi langsung, tapi
tidak akan mendeteksi sel DVI.
PENYIMPANAN
Jangan dibekukan. Botol reagen harus disimpan di 2-8C
pada tanda terima. Penyimpanan lama pada suhu di luar
kisaran ini dapat mengakibatkan hilangnya percepatan
reaktivitas reagen.
PERSIAPAN DAN PENGUMPULAN
SAMPEL
Sampel darah diambil dengan atau tanpa antikoagulan dapat
digunakan untuk membedakan antigen. Jika pengujian tertunda
kemudian simpan spesimen pada suhu 2-8C. EDTA dan sitrat sampel
harus dibaca dalam waktu 48 jam. Sampel dikumpulkan ke dalam ACD,
CPD atau CPDA-1 dapat diuji hingga 35 hari dari tanggal penarikan.
Semua sampel darah harus dicuci setidaknya dua kali dengan PBS
sebelum diuji. Sampel yang menunjukkan bukti lisis dapat
memberikan hasil yang tidak dapat diandalkan.
PENCEGAHAN

1. Reagen dimaksudkan untuk diagnostik in vitro saja.

2. Jika botol reagen retak atau bocor, pindahkan isinya segera.
3. Jangan menggunakan reagen melewati tanggal kedaluwarsa (lihat
Vial Label).
4. Jangan menggunakan reagen jika ada endapan.
5. Pakaian pelindung harus dipakai saat menangani reagen, seperti
handscoon dan jas lab.
6. reagen telah disaring melalui kapsul 0,2 m untuk mengurangi bio-
beban. Setelah botol dibuka isi harus tetap layak sampai tanggal
berakhirnya selama tidak ada tanda kekeruhan, yang dapat
mengindikasikan kerusakan reagen atau kontaminasi.
7. reagen mengandung <0,1% natrium azida. Natrium azida mungkin
beracun jika tertelan dan dapat bereaksi dengan timbal dan tembaga
pipa untuk membentuk azides logam peledak. Pada pembuangan
siram dengan volume air yang banyak.
8. Bahan yang digunakan untuk menghasilkan produk yang diuji pada
sumber dan ditemukan untuk menjadi negatif untuk HIV 1 + 2 dan
antibodi HCV dan HBsAg menggunakan persetujuan tes mikrobiologi.
9. pengujian Tidak dapat diketahui dan dapat menjamin bahwa produk
yang berasal dari sumber manusia atau hewan bebas dari agen infeksi.
Perawatan harus diambil dalam penggunaan dan pembuangan setiap
botol dan isinya.
PEMBUANGAN REAGEN DAN
MENANGANI TUMPAHAN
Untuk informasi tentang pembuangan reagen dan
dekontaminasi dari situs tumpahan lihat Material
Safety Data Sheets, tersedia berdasarkan
permintaan.
KONTROL DAN SARAN

1. Dianjurkan kontrol positif (idealnya sel R1r), kontrol negatif (idealnya sel rr) dan
reagen kontrol negatif diuji secara paralel dengan setiap kumpulan tes. Tes dianggap
tidak sah jika kontrol tidak menunjukkan hasil yang diharapkan.
2. Ketika membedakan sel darah merah dari seorang pasien adalah penting bahwa
kontrol negatif reagen disertakan sejak potensiator makromolekul dalam reagen
dapat menyebabkan reaksi positif palsu dengan IgG dilapisi sel, misalnya dalam
kasus AIHA atau HDN.
3. Lemah dan parsial varian D antigen yang buruk terdeteksi oleh teknik kartu gel,
piring microtitre dan slide. Disarankan agar lemah dan parsial varian D diuji
menggunakan teknik uji tabung.
4. Dalam Teknik Direkomendasikan satu volume sekitar 40 ketika menggunakan
pipet botol disediakan.
5. Penggunaan reagen dan interpretasi hasil harus dilakukan oleh tenaga terlatih dan
berkualitas sesuai dengan persyaratan negara mana reagen yang digunakan.
6. Pengguna harus menentukan kesesuaian reagen untuk digunakan dalam teknik
lainnya.
REAGENTS DAN BAHAN
DIBUTUHKAN
?? tongkat Aplikator. Pembaca plat otomatis.

?? Kaca mikroskop slide. Tabung kaca (10 x 75 mm atau 12 x 75

mm).

?? Lempeng centrifuge. Piring pengocok

?? phosphate buffered saline (PBS) : NaCl 0.9% pH 7.0 0.2 at 22C

1C. Kontrol sel darah merah positif (idealnya R1r) dan negatif (rr).

?? tabung centrifuge. memvalidasi U mikroplat dengan baik.

?? pipet volume.
TEKNIK TEKNIK YANG DISARANKAN
A.Teknik Tabung
1. Siapkan 2-3 % suspense dari sel merah yang telah dicuci dalam PBS.
2.Tempatkan pada tabung yang telah diberi label : 1 volume dari reagen
anti-D plasma dan 1 volume dari suspense sel darah merah.
3. Campur dengan cermat lalu sentrifugasi semua tabung selama 20 menit
pada 1000 rcf
atau dengan waktu dan kekuatan sentrifugasi yang sesuai.
4. Perlahan lahan biarkan sel merah mengambang dan baca secara
mikriskopis untuk penggumpalan.
5. Beberapa tabung akan memperlihatkan hasil negative atau hasil yang
meragukan ( dapat terjadi pada sampel D yang lemah ), dapat diinkubasi
selama 5 menit pada temperature ruangan.
6. Inkubasi berikutnya, ulangi langkah ke 3 dan ke 4
B. Teknik Mikropelat

1. Siapkan 2-3 % suspense dari sel darah merah bersih dalam PBS.
2. Tempatkan pada well yang sesuai : 1 volume dari reagen anti-D plasma
dan 1 volume dari suspensi sel darah merah.
3. Campur dengan cermat, lebih baik menggunakan alat penggoyang
mikropelat, perhatikan untuk menghindari kontaminasi silang antar well.
4. Inkubasi pada temperature ruangan selama 15 menit ( waktu tergantung
dari pengguna).
5. Sentrifugasi mikropelatnya selama 1 menit pada 140 rcf atau untuk waktu
dan kekuatan sentrifugasi yang sesuai.
6. Biarkan sel merah mengambang dengan menggunakan agitasi yang
dikontrol dengan hati-hati pada penggetar mikropelat.
7. Baca secara makroskopik atau dengan pembaca otomatis yang tervalidasi.
8. Beberapa reaksi lemah akan diulangi pada teknik tabung.
C. Teknik Slide
1. Siapkan 35-45% suspensisel darah merah bersih pada serum, plasma atau
PBS.
2. Tempatkan pada slide kaca yang telah diberi label : 1 volume dari reagen
anti-D plasma dan 1 volume dari suspense sel darah merah.
3. Dengan menggunakan stik aplikator bersih, campur reagen dan sel pada
seluruh wilayah sekitar 20 x 40 mm.
4. Miringkan perlahan slidenya maju dan mundur selama 30 detik, sesekali
percepat pencampuran pada periode 2 menit, pertahankan slide pada
suhu ruangan.
5. Baca secara maksroskopik setelah 2 menit selama ada cahaya difusi dan
jangan sampai salah terhadap helaian fibrin sebagai aglutinasi.
6. Beberapa reaksi lemah akan diulangi dengan teknik tabung.
INTERPRETASI HASIL TES

1. Positif : Aglutinasi dari tes sel darah merah merupakan hasil positif
dan dalam batasan yang diterima pada prosedur tes,
mengindikasikan keberadaan antigen D pada tes sel darah
merah.
2. Negatif: Tidak adanya aglutinasi dari tes sel darah merah
merupakan hasil negative dan dalam batasan yang dapat
diterima pada prosedur tes, mengindikasikan tidak adanya
antigen D pada tes sel darah merah.
3. Hasil tes dari sel sel yang teraglutinasi menggunakan reagen
negatif control akan dikeluarkan, aglutinasi kemungkinan besar
disebabkan oleh pengaruh makromolekul potensial dalam reagen
pada sel yang sensitive.
STABILITAS REAKSI

1. Baca semua test tabung dan mikropelat berurutan setelah

sentrifugasi.
2. Tes slide akan diinterpretasikan dalam 2 menit untuk memastikan
spesifik atau tidaknya dan untuk menghindari kemungkinan hasil
negatif yang diinterpretasikan dengan tidak benar sebagai keadaan
positif yang sebenarnya pada reagen.
3. Perbaikan akan di diuji dalam interpretasi hasil dari tes yang
dilakukan pada temperature lain.
BATASAN
1. Plasma anti-D tidak cocok untuk digunakan dengan enzim sel, sel akan
mengendap pada LISS untuk digunakan pada antiglobulin tidak langsung (IAT).
2. Darah hasil simpanan akan memberikan reaksi yang lebih lemah ibandingkan
darah yang masih segar.
3. Aglutinasi positif palsu dapat dilihat saat ada makromolekul potensiator pada
reagen saat pengetesan IgG sel , seperti AIHA, HDN.
4. Positif palsu atau negatif palsu dapat juga terjadi saat keadaan :
?? Kontaminasi dari bahan uji
?? Penyimpanan yang tidak sesuai, konsentrasi sel, waktu inkubasi dan
temperatur.
?? Ketidaksesuaian atau kelebihan sentrifugasi.
?? Kesalahan pada teknik yang dianjurkan.
KARAKTERISTIK SPESIFIKASI KERJA
1. Reagen yang telah dikarakterisasi pada semua prosedur yang disebutkan pada Teknik
Rekomendasi.
2. Utamakan untuk membebaskan masing masing plasma monokional anti-D hasil cloning
1 dan Anti-D hasil cloning 2 yang diuji pada teknik rekomendasi berlawanan dengan
lembaran dari reaktifitas antigen yang sesuai.
3. Pengelompokan reagen Anti-D untuk pengelompokan pasien D tidak harus bereaksi
dengan sel DVI menggunakan metode yang dianjurkan.Mengikuti uji hasil negative
menggunakan prosedur antiglobulin tidak dianjurkan.
4. Kespesifikan sumber antibodi monoklonal ditampilkan menggunakan lembar sel antigen
negative.
5. Potensi reagen telah diujikan berlawanan dengan potensi minimum pada standar
referensi yang didapatkan dari National Institute of Biological Standards and Control (
NIBSC) : ?? Referensi Anti-D 91/592.
6. Kontrol Kualitas reagen dilakukan dengan menggunakan sel merah yang telah dicuci dua
kali oleh PBS lebih dulu untuk digunakan.
7. Kepatuhan reagen dengan rekomendasi terkandung pada emisi terakhir dari petunjuk UK
Blood Transfusion Service
DISCLAIMER

1. Pengguna bertanggungawab terhadap perlakuan reagen

oleh beberapa metode selain yang disebutkan pada
teknik rekomendasi.
2. Beberapa penyimpangan dari teknik rekomendasi harus
divalidasi lebih dulu untuk digunakan.