IMPEDANCE &

FLOWCYTOMETRY

KELOMPOK 5

FRANS APANDI
JESSY FRANSISKA
SURYANI
LIA PUSVITA
SITI ELSA TRIHARDISA

IMPEDANCE &
FLOWCYTOMETRY
Nama asli aliran teknologi
berbasis fluoresensi
cytometry adalah
"cytophotometry pulsa"
(Jerman:
Impulszytophotometrie),
berdasarkan aplikasi paten
pertama pada aliran berbasis
fluoresensi cytometry. Di
Amerika Teknik Yayasan
Konferensi ke-5 pada
Automated Sitologi di
Pensacola (Florida) pada
tahun 1976 - delapan tahun
setelah pengenalan aliran
cytometer berbasis
fluoresensi pertama (1968) -
disepakati untuk umum
menggunakan nama
"cytometry aliran", sebuah
istilah yang dengan cepat
menjadi populer.

SEJARAH
Aliran berbasis impedansi pertama perangkat cytometry,
menggunakan prinsip Coulter , diungkapkan dalam US Patent
2656508 , yang dikeluarkan pada tahun 1953 , Wallace H. Coulter .
Mack Fulwyler adalah penemu cikal bakal aliran cytometers ini -
,,,Khususnya penyortir sel [ 1 ] Fulwyler mengembangkan ini pada
tahun 1965 dengan publikasi di bidang Ilmu [ 2 ] Aliran pertama
perangkat berbasis fluoresensi cytometry ( ICP 11 ) dikembangkan
di 1968 oleh Wolfgang Ghde dari Universitas Mnster ,
mengajukan paten pada 18 Desember 1968 [ 3 ] dan pertama kali
dikomersialisasikan pada 1968-1969 oleh pengembang Jerman dan
produsen Partec melalui Phywe AG di Gttingen . . Pada saat itu ,
metode penyerapan masih banyak disukai oleh para ilmuwan lain
atas metode fluoresensi [ 4 ] Segera setelah itu, aliran cytometry
instrumen dikembangkan , termasuk Cytofluorograph ( 1971) dari
Bio / Fisika Systems Inc (kemudian : Ortho Diagnostics ) , yang
PAS 8000 (1973) dari Partec , para FACS pertama ( pemilahan sel
fluoresensi - diaktifkan ) instrumen dari Becton Dickinson ( 1974),
ICP 22 ( 1975) dari Partec / Phywe dan epos dari Coulter ( 1977-
1978 ) .

Cytometers aliran modern mampu
menganalisis beberapa ribu partikel setiap
detik, dalam "real time," dan secara aktif dapat
memisahkan dan mengisolasi partikel yang
memiliki sifat-sifat tertentu. Sebuah cytometer
aliran mirip dengan mikroskop, bukan hanya
menghasilkan gambar sel, flow cytometry
menawarkan "high-throughput" (untuk
sejumlah besar sel) kuantifikasi otomatis
parameter set. Untuk menganalisis jaringan
yang solid.

Sebuah aliran cytometer memiliki
lima komponen utama:

sel aliran - aliran cairan (cairan selubung), yang membawa dan
meluruskan sel sehingga berkas tunggal melalui berkas cahaya.

sistem pengukuran - sering digunakan adalah pengukuran impedansi
(atau konduktivitas) dan sistem optik - lampu (merkuri, xenon); tinggi daya
laser berpendingin air (argon, kripton, pewarna laser); rendah daya laser
berpendingin udara ( argon (488 nm), merah-HeNe (633 nm), hijau-HeNe,
HECD (UV)); laser dioda (biru, hijau, merah, ungu) menghasilkan sinyal
cahaya

detektor dan Analog-to-Digital Converter (ADC) sistem - yang
menghasilkan FSC dan SSC serta sinyal fluoresensi dari cahaya menjadi
sinyal listrik yang dapat diproses oleh komputer
sistem amplifikasi - linear atau logaritmik

komputer untuk analisis sinyal.


AKUISISI
Proses pengumpulan data dari sampel menggunakan
aliran cytometer disebut ' akuisisi ' . Akuisisi dimediasi oleh
komputer secara fisik terhubung ke aliran cytometer , dan
perangkat lunak yang menangani antarmuka digital dengan
cytometer tersebut . Perangkat lunak ini mampu
menyesuaikan parameter ( yaitu tegangan , kompensasi , dll)
untuk sampel yang diuji , dan juga membantu dalam
menampilkan informasi sampel awal sementara memperoleh
data sampel untuk memastikan bahwa parameter diatur
dengan benar . Cytometers aliran awal adalah , pada
umumnya , peralatan eksperimen , tetapi kemajuan teknologi
telah memungkinkan aplikasi luas untuk digunakan dalam
berbagai keperluan baik klinis dan penelitian . Karena
perkembangan ini , pasar yang cukup besar untuk
instrumentasi , analisis perangkat lunak , serta reagen yang
digunakan dalam akuisisi seperti antibodi sebagai
fluorescently berlabel telah dikembangkan
Instrumen modern biasanya memiliki
beberapa laser dan detektor fluoresensi .
Rekor saat ini untuk instrumen komersial
adalah sepuluh laser [ 6 ] dan 18 detektor
fluoresensi . Peningkatan jumlah laser dan
detektor memungkinkan untuk pelabelan
antibodi ganda , dan lebih tepat dapat
mengidentifikasi populasi target dengan spidol
fenotipik mereka. Instrumen tertentu bahkan
dapat mengambil gambar digital dari sel
individu, yang memungkinkan untuk analisis
lokasi sinyal neon dalam atau pada
permukaan sel .

Data yang dihasilkan oleh
aliran-cytometers dapat diplot
dalam dimensi tunggal, untuk
menghasilkan histogram,
atau dalam dua dimensi dot
plot atau bahkan dalam tiga
dimensi. Daerah di plot ini
dapat dipisahkan secara
berurutan, berdasarkan
intensitas fluoresensi, dengan
menciptakan serangkaian
ekstraksi bagian, disebut
"gerbang." Protokol gating
spesifik ada untuk tujuan
diagnostik dan klinis terutama
dalam kaitannya dengan
hematologi.

Analisis komputerisasi
Kemajuan terbaru pada identifikasi populasi
otomatis menggunakan metode komputasi telah
menawarkan alternatif strategi gating tradisional.
Sistem identifikasi otomatis berpotensi membantu
temuan populasi langka dan tersembunyi. Metode
otomatis Perwakilan termasuk Flock [14] di Imunologi
database dan Analisis Portal (ImmPort), [15] FLAME
[16] di GenePattern dan flowClust, [17] [18] [19] di
Bioconductor. Upaya kolaboratif telah menghasilkan
sebuah proyek open disebut FlowCAP (Arus
cytometry: Penilaian Kritis Penduduk Identifikasi
Metode, [20]) untuk menyediakan cara yang obyektif
untuk membandingkan dan mengevaluasi aliran
cytometry metode pengelompokan data, dan juga
untuk membangun bimbingan tentang penggunaan
yang tepat dan penerapan metode ini.

Fluorescence-activated cell
sorting (FACS)

Fluoresensi-diaktifkan sel menyortir ( FACS ) adalah jenis
khusus dari aliran cytometry . Ini menyediakan metode untuk
menyortir campuran heterogen sel biologis menjadi dua atau lebih
kontainer , satu sel pada suatu waktu , berdasarkan hamburan
cahaya dan neon karakteristik khusus dari setiap sel . Ini adalah
instrumen ilmiah yang berguna , karena menyediakan cepat ,
objektif dan kuantitatif rekaman sinyal neon dari sel-sel individual
serta pemisahan fisik sel kepentingan tertentu . Akronim FACS
adalah merek dagang dan dimiliki oleh Becton , Dickinson dan
Perusahaan . [ 21 ] Di antara sebagian besar peneliti yang
menggunakan teknologi ini untuk menyortir atau analisis , istilah ini
telah menjadi generik dalam penggunaan umum , seperti xerox
atau tisu . penyortir sel pertama ditemukan oleh Mack Fulwyler
pada tahun 1965 , menggunakan prinsip Coulter , teknik yang relatif
sulit yang tidak lagi digunakan dalam instrumen modern. Teknik ini
dikembangkan oleh Len Herzenberg , yang bertanggung jawab
untuk coining istilah FACS . [ 22 ] Herzenberg memenangkan
Hadiah Kyoto pada tahun 2006 untuk bekerja dalam aliran
cytometry .

PARAMETER TERUKUR
digunakan untuk diagnosis
konfirmasi leukemia limfositik kronis
volume dan kompleksitas morfologi
sel
pigmen sel seperti klorofil atau
phycoerythrin
kandungan DNA Total ( analisis
siklus sel , kinetika sel, proliferasi ,
ploidi , aneuploidi , endoreduplication
, dll )
konten RNA Total
variasi jumlah salinan DNA ( by
Flow- FISH atau BAC -on - Beads
teknologi )
analisis kromosom dan pemilahan (
konstruksi pustaka , cat kromosom )
ekspresi protein dan lokalisasi
Protein modifikasi , phospho -
protein
produk transgenik in vivo ,
khususnya protein fluorescent hijau
atau terkait Fluorescent Protein
antigen permukaan sel ( Cluster
diferensiasi ( CD ) spidol )
antigen intraseluler ( berbagai
sitokin , mediator sekunder , dll )
antigen nuklir
aktivitas enzimatik
pH , kalsium terionisasi intraseluler ,
magnesium , potensial membran
fluiditas membran
apoptosis ( kuantifikasi ,
pengukuran degradasi DNA ,
potensial membran mitokondria ,
perubahan permeabilitas , aktivitas
caspase )
viabilitas sel
pemantauan
electropermeabilization sel
ledakan oksidatif
karakteristik resistensi multidrug (
MDR ) pada sel kanker
glutathione
berbagai kombinasi ( antigen DNA /
permukaan , dll )
kepatuhan sel ( misalnya kepatuhan
sel patogen - host)

APLIKASI
Teknologi ini memiliki aplikasi dalam sejumlah
bidang, termasuk biologi molekuler, patologi,
imunologi, biologi tanaman dan biologi kelautan. Ini
memiliki aplikasi yang luas dalam kedokteran
(khususnya dalam transplantasi, hematologi,
imunologi tumor dan kemoterapi, diagnosis prenatal,
genetika dan sperma menyortir pemilihan
pendahuluan untuk seks). Dalam biologi kelautan,
sifat autofluorescent plankton fotosintetik dapat
dimanfaatkan dengan sitometri untuk
mengkarakterisasi kelimpahan dan struktur
komunitas. Dalam rekayasa protein, flow cytometry
digunakan dalam hubungannya dengan layar ragi dan
bakteri display untuk mengidentifikasi varian protein
permukaan sel-ditampilkan dengan sifat yang
diinginkan.


TERIMA KASIH