;UJI ENZIMATIS DAN BOKIMIA

NAMA
PENGUJIAN

FUNGSI

MEDIA

PEREAKSI
ATAU
INDIKATOR

HASIL PENGUJIAN
POSITIF

NEGATIF

Terbentuk
cincin merah
pada
permukaan
media

Tidak
mengalami
perubahan
warna

Media
berwarna
kuning

UJI IMVIC

Uji Indol

Uji Methyl
Red

Uji Voges
Proskauer

Uji
Penggunaa
n Sitrat

Mengidentifikasi
bakteri yang
mampu
mendegradasi
(menguraikan)
asam amino
triptofan secara
enzimatik yang
dimediasi oleh
enzim
tryptophanase
yang berfungsi
mengkataliskan
penguraian
gugus indol dari
triptofan
Mendeteksi
bakteri yang
memiliki
kemampuan
mengoksidasi
glukosa dan
menghasilkan
asam campuran
(metilen glikon)
dengan
konsentrasi
tinggi
Mendeteksi
bakteri yang
memiliki
kemampuan
membentuk
Acetyl methyl
carbinol
Mengidentifikasi
mikroorganisme
yang
menggunakan
sitrat sebagai
satu-satunya
sumber energy

SIM
Medium
atau
Tripton
Water

Pereaksi
Kovacs
atau Ehrlich

Nutrien
Broth

Metil Merah
(indicator)

Media
menjadi
berwarna
merah

Nutrien
Broth

KOH 40% &

-naphtol
5%

Media
menjadi
berwarna
merah muda

Tidak
mengalami
perubahan
warna

Brom
Thymol
Blue
(indicator)

Media
menjadi
berwarna
biru

Media akan
tetep
berwarna
hijau
kebiruan

Simmons
Citrat Agar

dan karbon
BONTREY PANJANG
Uji
Hidrolisa
Pati

Uji
Hidrolisa
Gelatin

Uji
Hidrolisa
Lemak

Uji
Hidrolisa
Urea

Triple
Sugar Ion
Agar (Tsia)

Uji
Oksidase

Mengetahui
terurai tidaknya
zat Pati menjadi
glukosa/maltose
dalam bakteri
Mengetahui
kemampuan
bakteri untuk
menguraikan
Gelatin menjadi
asam amino
Untuk
mengetahui
mampu atau
tidaknya
mikroorganisme
menghasilkan
lipase
Untuk
mengetahui
mikroorganisme
yang dapat
menghasilkan
urea
Melihat
kemampuan
mikroorganisme
dalam
memfermentasik
an gula juga
membedakan
anggota bakteri
Enterobacteriace
ae dan
kelompok lain
dari basil usus
Untuk
mengetahui
adanya oksidase
sitokrom pada
mikroorganisme

Lugol

Terlihat
daerah
bening
disekitar
koloni

Terlihat
perubahan
warna
menjadi
birukehitaman

Nutrien
Gelatin

Gelatin tetap
mencair
setelah
dimasukkan
kedalam
lemari es

Gelatin
tetap
kental,
tidak
mencair

Trybutirin
Agar atau
Spirit Blue
Agar

Reagen
Bacto
Lipase 3%

Terlihat
warna biru
disekitar
koloni

Tidak akan
terbentuk
warna biru

Media
berwarna
merah

Media akan
tetap
berwarna
kuning/tidak
berubah

Pada bagian
dasar media
berwarna
hitam

Tidak ada
pembentuk
an warna
hitam pada
dasar
media

Starch
Agar

Urea Broth

TSI Agar
(agar
miring)

TSA Plate

Phenol Red

Ferrosulfat

Campuran
-naphtol
1% dengan
dimetil-pfenilendiami
n oksalat
1% (1:1)
vol
/vol
(reagens

Terjadi
perubahan
warna
menjadi
warna hitam
pada koloni

Tidak
terjadi
perubahan
warna

oksidase)
Uji
Katalase

Uji Reduksi
Nitrat

Uji
Fermentasi
Karbohidra
t

Untuk
mengetahui
adanya enzim
katalase dalam
mikroorganisme
Untuk
mengetaui
mampu atau
tidaknya
mikroorganisme
mereduksi nitrat
menjadi nitrit
lalu menjadi
nitrogen
Untuk
mengetahui
suatu bakteri
yang mampu
memfermentasikan
karbohidrat

Kaldu
karbohidra
t

H202 3%

Terbentuk
gelembung
udara
disekitar
koloni

Kaldu
karbohidra
t / kaldu
nitrat NA

Asam
Sulfanilat &
Alpha
Nafthilamin

Terbentuk
warna merah
bata pada
media

Tidak
terbentuk
warna
merah bata

Terbentuk
gas pada
tabung
Durham,
media
menjadi
berwarna
kuning (AG:
Acid and
Gas)

Tidak
terjadi
perubahan
apapun
pada media
(tetap
berwarna
merah)

Kaldu
Karbohidra
Phenol
t (glukosa,
merah atau
maltosa,
Brom
laktosa,
Cressol Blue
sukrosa,
manitol)

Tidak
terbentuk
gelembung
udara

ALAT DAN BAHAN

Alat
1. Ose lurus (jarum
tusuk)
2. Ose siku
3. Cawann petri
4. Rak tebung reaksi
5. Tabung reaksi
6. Pembakar spirtus
7. Label
8. Incubator
9. Kertas pembungkus
tabung reaksi
10. Pipet tetes
11. Pipet ukur

Bahan
1.
2.
3.
4.
5.

Biakan bakter
Lactose Broth
Dextrose Broth
Sukrosa Broth
SIM medium/Tripton
water
6. Sim Medium/TSIA
7. TNB
8. MR-VP Broth
9. TSA Slant
10. TSA Plate
11. Nutrient Glatin
12. Starch Agar
13. Trybutirin Agar atau
Spirit Blue Agar
14. Urea Broth
15. Simmons Citrat Agar

Pereaksi

1. Brom Cresol Purple

2. Phenol merah
3. Reagent Kovacs ata
Ehrlich
4. Metal merah
5. KOH 40%
6. -naphtol 5%
7. Lugol
8. H2O2 3%
9. Campuran -naphto
1% dengan dimetilfenilediamin oksala
(1:1) vol/vol (Reagent
oksidase)
10. Reagen Bacto Lip
3%
11. BromThymol Blue
12. Asam Sulfanilat d
-nafthilamin

LANGKAH KERJA
1. Uji IMVIC
a. Sediakan biakan bakteri
b. Sebagian dari biakan tersebut diambil dengan ose lurus
(jarum tusuk)
c. Penanaman dilakukan mula mula pada air peptone
(untuk uji Indol), kemudian ke dalam tabung methyl red
broth, lalu ke dalam tabung VP broth, dan ke dalam
tabung citrate sama seperti menanam pada agar miring
d. Ose lurus bekas penanaman dipijarkan
e. Memberi identitas pada tabung
f. Menginkubasi media dalam incubator dengan suhu 37 C
selama 48 jam. Esoknya dibubuhkan reagen untuk
melihat hasilnya.
Hasil:
a. Kedalam medium air peptone (untuk melihat reaksi indol)
ditambahkan ml reagen, dibiarkan selama 5 menit. Bila
tidak terjadi perubahan warna, ditulis sebagai reaksi indol

b.

c.

d.

e.

negative (-). Bila terjadi warna merah atau kecoklatan

ditulis indol positif (+)
Kedalam medium methyl red ditambahkan 1-2 tetes
reagen MR (0,4% dalam alcohol 96%). Bila terjadi warna
merah disebut MR positif (+), sedangkan bila berwarna
kuning disebut MR negative (-)
Kedalam medium VP ditambahkan ml KOH 40% dan 5
tetes alpha nafthol (5% dalam alcohol 96%), kemudian
dipanaskan sebentar. Bila terjadi warna merah kecoklatan
yang berupa cincin dipermukaan tabung yang akhirnya
warna merah tersebut menjalar kebawah ditulis sebagai
VP positif (+), bila tidak ditambahkan terjadi perubahan
apa-apa ditulis VP negative (-)
Kedalam mediun citrate tidak ditambahkan reagen, sebab
kedlaam medium terdapat indicator bromthymol blue. Bila
perubahan warna yang terjadi menjadi biru tua cerah,
ditulis sebagai positif (+), bila tidak terjadi perubahan
warna, dan warna tetap hijau kebiruan dutulis citrate
negative (-)
Catatan: media sebelum ditanami harus berwarna jernih
dan medium citrate harus berwarna kehijauan dan tidak
terdapat adanya koloni. Media jangan smapai tertukar
satu sama lainnya, misalnya media untuk melihat indol
jangan tertukar dengan media untuk melihat reaksi
methyl red

2. Fermentasi karbohidrat
a. Sediakan biakan bakteri
b. Jarum ose dibakar sampai pijar,kemudian didinginkan
c. Dengan ose,diambil sampel bakteri pada biakan yang
telah disediakan
d. Bakteri yang terdapat pada ujung jarum ditanam pada
media gula-gula secara berurutan mulai dari medium
glukosa sampai medium terakhir.Setelah itu,jarum tusuk
dipijarkan kembali
e. Tabung diberi identitas
f. Media diinkubasi pada suhu 37C,hasilnya dibaca setelah
inkubasi 24 jam
Hasil:
a. Bila tidak terjadi perubahan warn apada medium (medium
tetap merah) artinya tidak terjadi pembentukan asam,
hasilnya harus ditulis negative atau (-)
b. Bila terjadi perubahan warna menjadi kuning hal ini
berarti terjadi pembentukan asam sebagai hasil

penguraian gula dalam medium, hasilnya harus ditulis

positif atau (+)
c. Bila terjadi perubahan warna menjadi kuning dan didalam
tabung durham terdapat gas, maka hasilnya ditulis
sebagai positif (+g). media sebelum ditanami harus
berwarna merah jernih (netral) dan tabung durham harus
terisi penuh dengan medium
3. Hidrolisis Pati
a. Beri label lempengan agar yang mengandung pati
b. Inokulasi lempengan dengan biakan yang disediakan
c. Inkubasikan pada suhu 37o selama 48 jam
d. Pengamatan terhadap hasil inkubasi dilakukan dengan
memberikan beberapa tetes larutan lugol keatas
permukaan lempengan.
4. Hidrolisis Gelatin
a. Tandai tabung nutrient gelatin dengan nama, tanggal dan
mikroorganisme yang akan diujikan
b. Media diinokulasi dengan cara menusukkan
mikroorganisme yang akan diujikan sedalam bagian
dari lapisan permukaan
c. Inkubasikan pada suhu 37C selama 24 jam
d. Pada hari kedua amati pertumbuhan dalam media gelatin,
kemudian masukkan tabung dalam lemari es selama 30
menit.
e. Amati pencairan gelatin setelah dikeluarkan dari lemari es
5. Hidrolisis Lemak
a. Beri lebel lempengan agar yang mengandung lemak
b. Inokulasi lempengan dengan biakan yang disediakan
c. Inkubasikan pada suhu 37C selama 24 jam
d. Periksa warna lempengan agar setelah diinkubasi
6. Hidrolisis Urea
a. Tandai tabung nutrient gelatin dengan nama, tanggal dan
mikroorganisme yang akan diuji
b. Inikulasi agar miring dengan mikroorganisme
c. Inkubasi pada suhu 37C selam 48 jam
d. Amati perubahan warna dari merah jingga menjadi merah
ungu

7. Uji H2S
a. Tabung dengan media SIM diinikulasikan dengan biakan
bakteri yang akan diuji, inokulasi dilakukan dengan ose
lurus
b. Media lalu diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37C,
amati pada dasar media jika ada endapan hitam berarti
positif
8. Uji Oksidase
a. Cawan petri yang berisi media TSA diinokulasikan dengan
bakteri yang akan diuji lalu diinkubasi selama 48 jam pada
suhu 37C
b. Indentifikasi hasil inkubasi dengan penamaan pereaksi
kovaks
c. Amati perubahan warna
9. Uji Katalase
a. Media TSA miring (agar miring) diinokulasii dengan biakan
bakteri, lalu diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37C
b. Indentifikasi dengan penambahan hydrogen peroksida,
amati pembentukan gelembung udara
10.

Uji Reduksi Nitrat

a. Media TNB diinokulasi dengan biakan bakteri, lalu diinkubasi
selam 48 jam pada suhu 37C
b. Tambahakan asam sulfanilat dan alpha naftilamin kedalam

media yang sudah diinkubasi, perubahan warna media

menjadi merah menandakan nitrat sudah direduksi
menjadi nitrit