Analisis Lipid . . .

PENDAHULUAN

ANA LI SI S H A SI L P E RTAN IA N
Lipid

Definition:

Komponen organik yang tidak larut air?,

Mono dan digliserida - Larut pelarut polar dan non polar,

LIPID AN ALY SI S

C2-C4 - Larut dalam air.

US FDA - komponen organik yang tersusun asam lemak
C2-C24, ditung sebagai trigliserida.
Lipid

Classification:

Lipid sederhana (Simple lipid),

Lipid komplek (Compound lipid),
Lipid Turunan (Derivate lipid).
Jurusan Teknologi Hasil Pertanian
Fakultas Pertanian Universitas Lampung

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

2
Analisis Lipid . . .

Analisis Lipid: Pendahuluan . . .

Importance

of Lipid Analysis:

METODE ANALISIS

Akurasi pelabelan kemasan.

A. Metode Ekstraksi Pelarut:

Pemenuhan standar identitas.

1. Metode Ekstraksi Kontinyu (Goldfish Method).

2. Metode Ekstraksi Semi Kontinyu (Soxhlet Method).
3. Metode Ekstraksi Diskontinyu (Mononnier Method)

Memastikan produk memenuhi standar perusahaan.

Catatan: Analisis kadar lemak/minyak yang tidak tepat
menghasilkan produk yang sesuai dengan standar dan
menyebabkan kerugian yang besar
General

D. Metode Ekstraksi Tanpa Pelarut:

1. Babcock Method.
2. Gerber Method.

Considerations:

Minyak/lemak tidak larut dalam air, pemilihan pelarut

sangat penting.

C. Metode Instrumen:
1.
2.
3.
4.

Glycolipid larut dalam alkohol (polar), trigliserida larut

dalam heksan dan P. eter (non polar). Pemilihan pelarut
disesuaikan dengan jenis lipid dominan.
Jurusan Teknologi Hasil Pertanian
Fakultas Pertanian Universitas Lampung

Gas Chromatography Method.

Infra Red Method.
Specific Gravity Method.
Nuclear Magnetic Resonance (NMR) Method.
Jurusan Teknologi Hasil Pertanian
Fakultas Pertanian Universitas Lampung

Analisis Lipid : Ekstraksi pelarut . . .

Analisis Lipid: Metode . . .

A. M E T O D E EK ST RA KS I P E LA R U T

Ekstraksi dengan pelarut organik atau dengan hidrolisis

asam/basa.

Harus mempunyai solvent power yang tinggi terhadap

lipid.

Bergantung pada persiapan sampel dan jenis pelarut yang

digunakan.
Persiapan

Pemilihan Pelarut:

Titik didih rendah, tidak meninggalkan residu, tidak

mudah terbakar, dan tidak beracun.

Sampel:

Etil eter, petrolium eter, heksana, dan pentana.

Mempengaruhi validitas pengujian.

Disesuaikan dengan jenis sampel.

Kombinasi 2 atau 3 jenis pelarut digunakan untuk

ekstraksi.

Tahapan persiapan sampel:

Pelarut dalam kondisi mur i dan bebas peroksida.

Rasio pelarut dan bahan terlarut penting,
memaksimalkan ekstraksi.

a. Pengeringan.
b. Pengecilan ukuran.
c. Hidrolisis

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

Analisis Lipid : Ekstraksi pelarut . . .

Analisis Lipid : Ekstraksi pelarut . . .

1. Metode Ekstraksi Kontinyu (Goldfish Method)

Pemilihan Pelarut:

Sampel diletakan dalam timbel keramik.

Harus mempunyai solvent power yang tinggi terhadap

lipid.

Pelarut secara kontinyu mengekstrak sampel di tibel

keramik yang ditempatkan dalam gelas beaker (beaker
extraction).

Titik didih rendah, tidak meninggalkan residu, tidak

mudah terbakar, dan tidak beracun.

Setelah waktu ekstraksi selesai (4 jam), timbel

dikeluarkan dari beaker, beaker dikeringkan hingga
konstan.

Etil eter, petrolium eter, heksana, dan pentana.

Kombinasi 2 atau 3 jenis pelarut digunakan untuk
ekstraksi.

Kadar lemak ditentukan dengan menghitung perubahan

berat sampel.

Pelarut dalam kondisi mur i dan bebas peroksida.

Keuntungan: cepat dan lebih efisien.

Rasio pelarut dan bahan terlarut penting,

memaksimalkan ekstraksi.

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

Kerugian: dapat menyebabkan channeling,

mengebabkan esktraksi tidak sempurna.
Jurusan Teknologi Hasil Pertanian
Fakultas Pertanian Universitas Lampung

Analisis Lipid . . .

Analisis Minyak/Lemak: Metode Analisis . . .

Goldfish Fat Extractor

2. Metode Ekstraksi Semi Kontinyu (Soxhlet

Method)
Pelarut terkumpul pada ruang ekstraksi selama 5-10
menit, merendam sampel, kemudian masuk kembali ke
dalam labu didih dengan membawa ekstrak.
Memerlukan waktu lebih lama dibandingkan dengan
sistem kontinyu.
Digunakan untuk analisis:
a. Lemak sereal (AOAC No. 920.39C).
b. Lemak daging (AOAC No. 960.39).

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

10

123

Analisis Lipid . . .

Analisis Lipid . . .

Soxhlet Fat Extractor

3. Metode Ekstraksi Diskontinyu

action

Terdiri dari:

920.39C for
at Fat) (8) is
tion method

a. Mojonnier Method
b. Chloroform-Methanol Method.

a. Mojonnier Method:

the solvent
10 min and
hen siphons
measured by
t of the fat

Lemak diekstraksi dengan campuran pelarut etil eter

dan petroleum eter dalam Labu Mojonnier.

ffect of the
. However,
continuous
d and autoailable (e.g.,
Prairie, MN)
cations.

Roise-Gottlieb Method (AOAC No. 905.02).

2 O,

dry the
der pressure

10

Dapat digunakan untuk sampel padat dan cair.

Labu Mojonnier digunakan juga untuk hidrolisis (basa
atau asam), terhadap sampel, sebelum diekstrak.

8-2

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

Soxhlet extraction apparatus.

figure

8.3.4.4 Calculation

11

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

11

12

12

Analisis Lipid . . .

Analisis Lipid . . .

Mojonnier Flask

Mojonnier Method . . .
Terutama untuk anlisis kadar lemak pada dairy food
(AOAC No. 989.05).
Digunakan juga untuk analisis kadar lemak pada tepung
(AOAC No. 922.06) dan pakan ternak (AOAC No. 954.02).
Sebelum ekstraksi, dilakukan hidrolisis (asam/HCl).
Prosedur: 10g sampel, masukan dalam labu,
tambahkan 1,5-2,0 ml NH4OH, kocok, tambahkan 10ml
etanol 95%, kocok, tambahkan 25ml etil eter, kocok,
tambahkan 25ml petroleum eter, kocok, sentrifius,
pidahkan larutan. lakukan tiga kali. larutan yang
mengandung lemak dikeringkan dengan oven.

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

13

13

14

14

Analisis Lipid . . .

Analisis Lipid . . .

b. Chloroform-Methanol Method:

B . M ET O D E E K ST R A K S I TA N PA P E L A R UT

Methanol untuk melarutkan komponen polar, sedangkan

Chloroform untuk melarutkan lemak.

1. Babcock Method

Kemudian ditambahkan 0,88% KCl, untuk memisahkan

fase polar dan non polar.

AOAC No. 989.04 dan 989.10 (dairy products), AOAC No.

964.12 (seafood), dan AOAC No. 932.11 (flavor extract).

Digunakan untuk ektraksi bahan rendah lemak.

H2SO4 pekat ditambahkan pada sampel (dairy products),

dalam botol Babcock.

Prosedur:

Asam menguraikan protein, menghasilkan panas,

melepaskan lemak.

1 g sampel ditambahkan 10 ml methanol, homogenize

1min, tambah 20 ml chloroform, homogenize 1min,
saring, cairan ditambah 0.88% HCl.

Lemak dipisahkan dengan penambahan air panas dan

sentrifugasi.

Tebentuk 2 fase, dipisahkan. Fase chloroform

(mengandung lemak) di tambah aquadest (pencucian),
pisahkan, tambahkan NaSO4, kemudian dikeringkan
hingga konstan.
Jurusan Teknologi Hasil Pertanian
Fakultas Pertanian Universitas Lampung

15

Volume lemak dapat diketahui langsung pada botol

Babcock.
Jurusan Teknologi Hasil Pertanian
Fakultas Pertanian Universitas Lampung

15

16

16

130

Analisis Lipid: Tanpa pelarut . . .

Babcock Bottles

Part II Compositional Analysis of Foods

Babcock Centrifuge
4. Tighten the stopper and mix by shaking the
bottle.
5. Centrifuge the bottle for 4 min.
6. Place the bottle in a water bath at 6063 C for
5 min and then read the fat content from the
graduations on the bottle neck.

Analisis Lipid: Tanpa pelarut . . .

2. Gerber Method
Metode anlisis lemak untuk dairy products, dengan
menggunakn pelarut Asam Sulfat dan Amyl Alcohol.
Menggunakan Gerber Bottle.

8.4.2.3 Applications
The Gerber method is comparable to the Babcock
method but is simpler and faster and has wider application to a variety of dairy products (14). The isoamyl
alcohol generally prevents the charring of sugar found
with the regular Babcock method. This test is more
popular in Europe than in America.

8.5 INSTRUMENTAL METHODS

Instrumental methods offer numerous attractive features compared with the previously described extrac8-6
tion methods. In general, they are rapid, nondeJurusan Teknologi Hasil Pertanian
figure
17
structive,Fakultas
and
require
minimal
preparation
Pertanian
Universitas
Lampungsample
and chemical consumption. However, the equipment
can be expensive and measurements often require the
17
establishment of calibration curves specific to vari8.4.1.3 Applications
ous compositions. Despite these drawbacks, several of
The Analisis
Babcock
method,
which .is. . a common official
Lipid:
Tanpa pelarut
the following instrumental methods are very widely
method for the determination of fat in milk, takes
used in quality control as well as research and prodGerber
Bottles
about 45 min and duplicate tests should agree within
uct development applications. The following section
0.1%. The Babcock method does not determine the
describes several of these instrumental methods.
phospholipids in the milk products. It is not applicable
to products containing chocolate or added sugar with8.5.1 Infrared Method
out modification because of charring of chocolate and
sugars by sulfuric acid. A modified Babcock method
The infrared (IR) method is based on absorption of IR
is used to determine essential oil in flavor extracts
energy by fat at a wavelength of 5.73 m. The more
(AOAC Method 932.11) and fat in seafood (AOAC
the energy absorption at 5.73 m, the higher is the
Method 964.12).
fat content of the sample (15). Mid-IR spectroscopy is

As. Sulfat untuk mennguraikan protein dan kabohidrat,

mengeluarkan panas, dan melepaskan lemak.
Amyl Alcohol mencegah pengarangan gula (laktosa).
Banyak digunakan di Eropa.
Volume lemak dapat diketahui langsung, seperti pada
metode Babcock.

Babcock milk test bottles for milk (a), cream

(b), and cheese (Paley bottle) (c) testing. (Courtesy of Kimble Glass Co., Vineland, NJ.)

8.4.2 Gerber Method for Milk Fat

8.4.2.1 Principle
The principle of the Gerber method is similar to that of
the Babcock method, but it uses sulfuric acid and amyl
alcohol. The sulfuric acid digests proteins and carbohydrates, releases fat, and maintains the fat in a liquid
state by generating heat.

8.4.2.2 Procedure
1. Transfer 10 ml of H2 SO4 at 1521 C into a
Gerber milk bottle.
2. Accurately measure milk sample (11 ml) into
the Gerber bottle, using a Gerber pipette.
3. Add 1 ml of isoamyl alcohol to the bottle. 19

used in Infrared Milk Analyzers to determine milk fat

content (AOAC Method 972.16). Near-infrared (NIR)
spectroscopy has been used to measure the fat content
of commodities such as meats, cereals, and oilseeds
in the laboratory and is being adapted for on-line
measurement. See Chap. 23 for a discussion of IR
spectroscopy.

8.5.2 Specific Gravity (Foss-Let Method)

Fat content by the Foss-Let method (Foss North America, Eden Prairie, MN) is determined as a function
of the specific gravity of a sample solvent extract.
A sample ofJurusan
known
weight
is extracted for 1.52 min
Teknologi
Hasil Pertanian
19
Fakultas Pertanian Universitas Lampung
in a vibration-reaction
chamber with perchloroethylene. The extract is filtered, and using a thermostatically controlled device with digital readout, its specific

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

18

18
Analisis Lipid . . .

C . M E T O D E I N ST R UM E N TA SI
1. Infrared Method
Didasarkan peda penyerapan energi infra merah
(panjang gelombang 5,73 um) oleh lemak.
Semakin besar absorban (serapan sinar infra merah),
semakin tinggi konsentrasi lemak dalam sampel.
Menggunakan alat: Specteometer Infra Merah.
Mid-IR untuk susu (AOAC No. 972.16).
Near-IR untuk sereal, daging, dan bi-bian.

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

20

20

Analisis Lipid : Instrumentasi . . .

Analisis Lipid : Instrumentasi . . .

2. Specific Grafity Method

4. Gas Chromatography Method

Didasarkan pada specific gravity larutan yang

mengandung lemak terekstrak.
Sampel diekstrak dengan Perchloroethylene, disaring,
larutan ditimbang.

Digunakan untuk menentukan jenis trigliserida dan asam

lemak dalam lemak.

Berat lemat diketahui dengan membandingkan tabel

atau grafik.

Pemisahan jenis trigliserida dan asam lemak didasarkan

pada beda afinitas pada kolor kromatografy.
Total lemak merupakan jumlah dari semua asam lemak
yang terdapat dalam bahan.

3. NMR Method
Didasarkan pada kurva titik leleh lemak yang dikandung
dalam bahan.

Untuk mengetahui jenis asam lemak, diperlukan standar

asam lemak.

Sangat cepat dan akurat, sangat mahal.

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

21

21
Analisis Lipid . . .
128

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

22

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

24

22
Analisis Lipid . . .

Part II Compositional Analysis of Foods

Chromatogram fatty acid analysis by GC

Auto-Scaled Chromatogram

60.00

Tetracosanoic

7,10,13,16,19cDocosapentaenoic

5,8,11,14,17c Eicosapentaenoic
Docosanoic

13c-Docosenoic
11c,14c,17c-Eicosatrienoic
5,8,11,14c-Eicosatetraenoic

9c, 12c Octadecadienoic

Eicosanoic

6,9,12,15c Octadecatetraenoic
11c, 14c-Eicosadienoic

9t-Octadecenoic

9t-Hexadecenoic
9c-Hexadecenoic

10c-Heptadecenoic

15.00

10c-Pentadecenoic

20.00

Heptadecanoic

Tetradecanoic

Decanoic
Internal Standard
Dodecanoic

Pentadecanoic
9c-Tetradecenoic

25.00

Tetranoic
Hexanoic
Octanoic

30.00

Tridecanoic

pA

35.00

9t,12t Octadecadienoic

Octadecanoic

40.00

6c,9c,12c Octadecatrienoic
11c-Eicosenoic
9c,12c,15c-Octadecatrienoic

9c-Octadecenoic

45.00

15c-Tetracosenoic

50.00

4,7,10,13,16,19Docosahexaenoic

Hexadecanoic

55.00

10.00

8.00

10.00

12.00

14.00

16.00

18.00

20.00

22.00

24.00

26.00

Minutes

8-5

Example of chromatogram from gas chromatography analysis.

figure

23

8-4
table

Fatty Acid Conversion Table

28.00

30.00

32.00

34.00

36.00

38.00

Jurusan Teknologi Hasil Pertanian

Fakultas Pertanian Universitas Lampung

23

24