11/11/2015

PEMERIKSAAN MIKROBIOLOGIS
PADA MAKANAN & MINUMAN

TEKNIK SAMPLING FAKTOR

BIOLOGI (BAKTERI)
Kusuma S. Lestari, dr., M.KM.
Departemen Kesehatan Lingkungan
Fakultas Kesehatan Masyarakat
Universitas Airlangga

PEMERIKSAAN MIKROBIOLOGIS
PADA MAKANAN & MINUMAN
Suhu udara ttropis dan kelembapan tinggi,
makanan yang tidak disajikan dalam keadaan
panas atau dingin menjadi media yang baik
bagi pertumbuhan mikroorganisme
Makanan dan minuman yang diperiksa
bakteriologisnya adalah yang vulnerable
(rawan), yaitu yang telah dimasak beberapa
jam sebelumnya dan disajikan tanpa
pemanasan selama berjam jam berikutnya

Makanan dan minuman termasuk media

lingkungan yang dapat mengandung
berbagai polutan dan kontaminan
Selain kontaminan kimiawi, makanan dan
minuman berpotensi mengandung
mikroorganisme patogen

PENYIAPAN MEDIA
Menggunakan metode Total Plate Count
14 buah tabung reaksi
Pipet isap (volumetrik) 10 ml
Peralatan glassware lain
Akuades
Eosin methylene blue lactose agar (EMBA)

PENYIAPAN MEDIA

PENYIAPAN MEDIA

Siapkan 4 tabung reaksi masing masing

berisi 9 ml akuades, 4 tabung reaksi lagi
masing masing berisi 9,9 ml akuades,
sebuah erlenmeyer berisi 45 ml akuades,
lalu tutup rapat dengan sumbat yang
disediakan
Sterilkan semua peralatan tersebut dalam
autoklaf pada suhu 121C selama 15 menit

Timbang medium EMBA sebanyak yang

dibutuhkan, larutkan dengan akuades lalu
tuangkan masing masing 10 ml medium
ini ke dalam 6 tabung reaksi. Tutup rapat
rapat dengan sumbat yang disediakan dan
sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121C
selama 15 menit

11/11/2015

TEKNIK PENGAMBILAN SAMPEL

Pengukuran mikrobiolgis adalah suatu
pekerjaan aseptis
Bahan dan alat : larutan alkohol 70%,
kertas tisu, pembakar spiritus dan korek
api, label untuk wadah sampel dan alat
tulis, wadah sampel yang steril (kantong
plastik ber-sealed)

PENANAMAN SAMPEL
PADA MEDIUM EMBA
Alat dan bahan :
Mortar dan penumbuknya
Timbangan analitis
Spatula logam
Pembakar spiritus dan korek api
Pipet isap volumetrik 1 ml
6 cawan petri steril
Akuades dan medium EMBA steril
Label dan alat tulis
Inkubator

PENANAMAN SAMPEL
PADA MEDIUM EMBA
Kemudian dari pengenceran 104 pipet 0,1 ml dan
masukkan ke dalam 9,9 ml akuades steril untuk
memperoleh pengenceran 105 .
3. Dari pengenceran 103 , 104 , dan 105 itu
pipet masing masing 1,0 ml dan masukkan ke
dalam tabung reaksi yang berisi medium agar.
Sebelumnya medium ini harus dicairkan dan
didinginkan hingga suhu 35 - 40C

TEKNIK PENGAMBILAN SAMPEL

Aduklah makanan hingga merata (kuah, bumbu, dsb),
lalu sisihkan sedikit di tepi piring
Buka tutup wadah sampel sedikit lalu pegang dengan
tangan kiri
Lewatkan mulut wadah sampel yang telah terbuka ini
di atas api spiritus. Wadah sampel jangan sampai
terbakar
Segera masukkan dua sendok makan ke dalam wadah
sampel, lewatkan kembali mulut wadah sampel di atas
nyala api spiritus lalu segera tutup rapat
Labeli wadah sampel dengan jelas memakai tinta tahan
air

PENANAMAN SAMPEL
PADA MEDIUM EMBA
1. Timbang 5 gram sampel makanan dan tumbuk
dalam mortar secara aseptis. Campurkan hasil
tumbukan dengan 45 ml akuades steril, lalu
diamkan selama 10 menit. Campuran ini
menghasilkan pengenceran 101
2. Dengan pipet isap volumetrik steril ambil 0,1 ml
filtrat dari campuran (1), lalu masukkan ke dalam
9,9 ml akuades steril untuk mendapatkan
pengenceran 103 Dari pengenceran 103 ini, pipet
1 ml dan masukkan ke dalam 9 ml akuades steril
untuk menghasilkan pengenceran 104

PENANAMAN SAMPEL
PADA MEDIUM EMBA
4. Tuang medium yang berisi pengenceran ke dalam
cawan petri steril, ratakan dengan cara memutar
cawan membentuk angka 8. Diamkan hingga
membeku, lalu masukkan ke dalam inkubator
bersuhu 45C. Inkubasikan cawan - cawan ini
selama 24 jam
5. Setelah diinkubasi selama 24 jam, amati cawan
cawan terpilih. Pilih cawan yang berisi 20 200
koloni, lalu hitung koloni berwarna biru-hijau
metalik. Catat jumlah koloni ini untuk setiap
pengenceran sampel. Hitung jumlah e-coli yang
terdapat pada setiap gram sampel makanan

11/11/2015