UJI KETOKSIKAN (LC50) EKSTRAK ETANOL DAUN EKOR KUCING (Acalypha

hispida Burm.f.) TERHADAP LARVA Artemia salina Leach DENGAN METODE

BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)

TOXICITY TEST (LC50) OF ETHANOL EXTRACT OF EKOR KUCING LEAVES

(Acalypha hispida Burm.f.) AGAINST Artemia salina Leach LARVAE USING BRINE
SHRIMP LETHALITY TEST METHOD (BSLT)

Meri Ropiqa1
1
Mahasiswa Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas
Tanjungpura, Pontianak

ABSTRAK

Daun Ekor Kucing (Acalypha hispida Burm.f.) merupakan jenis tanaman hias yang
telah dikenal masyarakat untuk pengobatan, namun belum ada penelitian untuk meneliti
toksisitas akut daun ekor kucing. Tanaman ini mengandung senyawa alkaloid dan flavonoid.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi ketoksikan akut ekstrak etanol
daun ekor kucing (Acalypha hispida Burm.f.) terhadap larva Artemia salina Leach dengan
metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) yang ditunjukkan dengan nilai LC50. Penelitian
eksperimental ini menggunakan 300 ekor larva udang (Artemia salina Leach) yang dibagi
menjadi 5 kelompok kontrol negatif dan 5 kelompok seri konsentrasi ekstrak, masing-masing
terdiri dari 10 ekor larva dengan replikasi 3 kali untuk tiap kelompok perlakuan. Kelompok
perlakuan I (P1) diberi suspensi sediaan uji ekstrak etanol daun ekor kucing dengan
konsentrasi 100 ppm. Kelompok perlakuan II (P2), diberi suspensi sediaan uji dengan
konsentrasi 250 ppm. Kelompok perlakuan III (P3) diberi suspensi sediaan uji dengan
konsentrasi 500 ppm. Kelompok perlakuan IV (P4) diberi suspensi sediaan uji dengan
konsentrasi 750 ppm, sedangkan untuk kelompok perlakuan V (P5) diberikan konsentrasi
1000 ppm. Data kematian Artemia salina Leach dianalisis dengan analisis probit untuk
mengetahui nilai LC50. Hasil penelitian ini menunjukkan harga LC50 dari ekstrak etanol daun
ekor kucing adalah 220,005 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun ekor
kucing memiliki potensi toksisitas akut terhadap larva Artemia salina Leach menurut metode
BSLT yang ditunjukkan dengan harga LC50 < 1000 ppm.

Kata kunci: Uji Toksisitas Akut, Acalypha hispida Burm.f., Artemia salina Leach, BSLT,
LC50

ABSTRACT

Ekor kucing leaf is known as a decorative plant. That is commonly used by

community as a traditional herbs, unforrtunately there hasnt been any research yet to
measure the potency of acute toxicity. This plant contains alkaloid and flavonoid. The
purpose of this its research was to determine the potency of acute toxicity of ethanol extract
of ekor kucing leaves against larva of Artemia salina Leach by Brine Shrimp Lethality Test
method (BSLT) which is shown by LC50 value. This research was done by using 300 brine
shrimps (Artemia salina Leach) divided into 5 negative control groups and 5 treatment
groups, which contain 10 larvas each group with 3 times replication. Treatment group I (P1)is
a suspension which contain 100 ppm of ethanol extract of ekor kucing leaves, P2 group had
250 ppm consentration and P3 group had 500 ppm, P4 group had 750 ppm and P5 group had

1
1000 ppm consentration. The mortality of Artemia salina Leach was analyzed by probit
analysis to know LC50 value. The result shows that LC50 value of ethanol extracts of ekor
kucing leaves is 220,005 ppm. It means that ethanol extract of ekor kucing leaves had acute
toxicity potency against Artemia salina Leach larva according to BSLT method. It is
indicated by LC50 value < 1000 ppm.

Key words: Acute Toxicity Test, Acalypha hispida Burm.f., Artemia salina Leach, BSLT,
LC50

PENDAHULUAN

Dewasa ini, walaupun obat-obat
modern telah mendominasi pelayanan
kesehatan formal, penggunaan obat
tradisional tetap mendapat tempat yang
penting bahkan terus berkembang. Obat
tradisional tidak dapat dipisahkan dari
kehidupan kita karena sudah lekat dengan
budaya bangsa dan digunakan oleh segenap
lapisan masyarakat. Sesuai standar mutu dari
WHO, obat tradisional harus memenuhi
beberapa persyaratan meliputi kualitas,
keamanan, dan khasiat (Departemen
Kesehatan Republik Indonesia, 2002), untuk
memenuhi persyaratan tersebut diperlukan
upaya penegasan keamanan melalui uji
praklinik yang meliputi uji ketoksikan dan
aktivitas, yang jika syaratnya terpenuhi,
maka dapat berlanjut ketahap uji klinik
(Setyawati & Suyatna et al., 2007).
Ekor kucing merupakan tanaman
asli dari Hindia Barat. Umumnya, ditanaman
sebagai tanaman hias di halaman atau di
taman-taman. Ekor kucing telah dikenal oleh
masyarakat untuk pengobatan bercak putih
dikulit (vitiligo), batuk darah, sariawan,
disentri, dan mimisan (Dalimartha, 2007).
Bagian tanaman yang digunakan pada
penelitian ini adalah bagian daun ekor
kucing, karena pada umumnya masyarakat
banyak menggunakan daun dalam proses
pengobatan. Mengingat pemanfaatan daun
kesum berdasarkan pengalaman secara
turun-temurun, maka perlu didukung oleh
informasi ilmiah mengenai potensi toksisitas
akut.
Penelitian uji toksisitas akut ekstrak
etanol daun ekor kucing terhadap larva
Artemia salina Leach menggunakan metode
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Uji
toksisitas akut ekstrak etanol daun ekor
kucing ini dipilih mengingat masih
kurangnya informasi ilmiah mengenai
potensi toksisitas daun ekor kucing. Metode
BSLT dipilih karena metode ini sering
digunakan untuk praskrining terhadap
senyawa aktif yang terkandung dalam
ekstrak tumbuhan karena sederhana, cepat,
murah, mudah, dapat dipercaya, dan hasilnya
representatif (Meyer et al., 1982). Uji
toksisitas dengan menggunakan BSLT ini
dapat ditentukan dari jumlah kematian
Artemia salina Leach akibat pengaruh
ekstrak atau senyawa bahan alam. Hasil uji
dinyatakan sebagai LC50, dinyatakan bersifat
toksik/aktif terhadap Artemia salina Leach
bila ekstrak tumbuhan tersebut memiliki
LC50 < 1000 g/mL dan berpotensi
sitotoksik serta dapat dikembangkan sebagai
antikanker (Meyer et al., 1982). Jika hasil uji
BSLT menunjukkan bahwa ekstrak
tumbuhan bersifat toksik maka dapat
dikembangkan ke penelitian lebih lanjut
untuk mengisolasi senyawa sitotoksik
tumbuhan sebagai usaha pengembangan obat
alternatif antikanker. Jika hasil uji BSLT
menunjukkan bahwa ekstrak tumbuhan tidak
bersifat toksik maka dapat dikembangkan ke
penelitian lebih lanjut untuk meneliti khasiat-
khasiat lain dari ekstrak tersebut.
Skrining fitokimia terhadap fraksi
etanol daun ekor kucing menunjukkan
adanya senyawa-senyawa golongan
flavonoid dan alkaloid. Adanya kandungan
golongan senyawa flavonoid ditunjukkan
dengan hasil uji positif dengan pereaksi
shinoda test dan H2SO4, sedangkan adanya
senyawa golongan alkaloid ditunjukkan

2
dengan positifnya hasil uji dengan pereaksi
Wagner, Dragendorf dan Mayer.
Berdasarkan latar belakang di atas
dan karena belum adanya penelitian untuk
meneliti potensi toksisitas akut daun kesum
maka penelitian ini diusulkan dengan tujuan
untuk mengetahui potensi ketoksikan akut
METODOLOGI
Bahan
Bahan-bahan yang diperlukan dalam
penelitian ini adalah daun ekor kucing
(Acalypha hispida Burm.f), telur udang
Artemia salina Leach, etanol teknis (E.
Merck), etanol p.a. (E. Merck), kloroform
p.a. (E. Merck), amoniak p.a., H2SO4 2 M,
Alat
Alat-alat yang digunakan untuk
penelitian ini adalah kain hitam, sendok
tanduk, sendok stainlees, gegep kayu, neraca
analitik (Precisa XB 4200 C, Precisa XT
220 A), blender, toples, botol selai, botol
semprot, batang pengaduk, erlenmeyer
(Pyrex), gelas ukur (Pyrex), beaker glass
(Pyrex), pipet ukur (Pyrex), ball filler,
pipet mikro (Rainin pipet lite SL-100 dan
SL-1000), pipet tetes, tabung reaksi
(Pyrex), rak tabung reaksi, plat tetes, rotary
evaporator (Heidolph), corong gelas,
corong Buchner, corong pisah, saringan,
kertas saring Whatman, pompa vakum,
Cara Kerja
Determinasi Tanaman
Determinasi bertujuan untuk
menetapkan kebenaran yang berkaitan
dengan ciri-ciri morfologi secara
makroskopis tanaman daun ekor kucing
(Acalypha hispida Burm.f.) terhadap
Preparasi Sampel
Daun tanaman ekor kucing diambil di
jalan Adiwijaya Kelurahan Pulau Pedalaman
Mempawah Timur Kabupaten Pontianak,
ekstrak etanol daun ekor kucing (Acalypha
hispida Burm.f.) terhadap larva Artemia
salina Leach dengan metode Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT) yang ditunjukkan
dengan nilai LC50.
reagen mayer, reagen dragendorff (E.
Merck), HCl pekat p.a. (E. Merck), serbuk
logam Mg (Reidel de Haen), DMSO 1 %,
NaCl p.a., heksan p.a., etil asetat p.a,
akuades dan ragi (Fermipan).
cawan penguap, cawan porselin/crusibel,
oven (memmert), hot plate (Schott
Instruments), kaca arloji, hair dryer,
desikator, vortex (Maxi Mix II Barnstead
Thermolyne Type 37600 Mixer), mikroskop
(Zeiss Primo Star dilengkapi kamera dan
program Axio Cam), lup, labu takar/labu
ukur (Pyrex), aluminium foil, lakban hitam,
indikator pH, termometer, bejana/wadah
penetasan, vial, lampu pijar/neon 40-60 watt,
senter, plat KLT/lempeng silika gel 60 GF254
(E. Merck), chamber, pipa kapiler, alat
semprot, dan lampu UV 254 dan 366 nm.
kepustakaan. Identifikasi / determinasi
dilakukan di Herbarium Bogoriense, Balai
Penelitian dan Pengembangan Botani Pusat
Penelitian dan Pengembangan Biologi, LIPI
Bogor.
Kalimantan Barat. Penyiapan bahan ini
dilakukan dengan memisahkan daun dari
tangkainya, batang, dan akar lalu dibersihkan
3
dari sisa-sisa tanah dan kotoran kemudian
dicuci dengan air yang bersih dan mengalir.
Bagian tumbuhan yang diambil adalah daun.
Kemudian dikeringanginkan di bawah sinar
matahari secara tidak langsung yaitu dengan
Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Ekor
Kucing (Acalypha hispida Burm.f.) dengan
Cara Maserasi
Ekstraksi dilakukan secara maserasi.
Simplisia daun ekor kucing dengan derajat
halus yang cocok sebanyak 500 gram
dimasukkan ke dalam bejana kaca/toples,
kemudian dituangi dan direndam dengan 1,8-
2 L penyari etanol teknis, kemudian ditutup
dan dibiarkan/didiamkan selama 24 jam
sambil berkali-kali dikocok selama 6 jam
pertama, maserat ditampung pada botol kaca,
kemudian dimaserasi kembali hingga 3 hari
terlindung dari cahaya dan tetap dilakukan
pengadukan beberapa kali sehari. Setelah 3
hari sari diserkai, maserat dikumpul, ampas
diperas, disaring dengan corong Buchner dan
diambil filtratnya. Selanjutnya maserat yang
masih bercampur dengan pelarut dievaporasi
dengan rotary evaporator hingga didapatkan
ekstrak kental daun ekor kucing. Filtrat
Pembuatan Air Laut Buatan (ALB)
Siapkan air laut buatan dengan
melarutkan 15 gram NaCl dalam 1 liter
aqua (Harmita & Radji, 2008).
Penyiapan Kontrol
Kontrol negatif yang digunakan
untuk uji toksisitas pada larva udang Artemia
salina Leach yaitu dibuat dengan
dimasukkan pelarut (etanol p.a.) dan
dikeringkan, lalu untuk masing-masing vial
ditambahkan 1 mL air laut, 50 L dimetil
Uji Ketoksikan dengan Metode Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT)
Penetasan Telur Artemia salina Leach
ditutupi kain hitam lalu diblender, kemudian
disimpan dalam wadah tertutup. Serbuk daun
kering akan digunakan untuk membuat
ekstrak.
dituang dalam cawan penguap, kemudian
diuapkan lebih lanjut pada hot plate. Untuk
menghilangkan sisa pelarut etanol sisa residu
diletakkan 24 jam di desikator berisi
silika/pengering. Ekstrak kering kemudian
ditimbang dan dihitung kadar dalam persen
yang larut dalam etanol/dihitung
rendemennya yakni perbandingan antara
ekstrak yang diperoleh terhadap simplisia
awal. Ekstrak kering yang diperoleh
selanjutnya diuji fitokimia dengan uji reagen
(skrining fitokimia) dilanjutkan dengan uji
pemisahan dengan KLT berdasarkan
kandungan golongan senyawa yang positif
dari hasil uji reagen, kemudian diuji
toksisitasnya dengan mengunakan larva
udang Artemia salina Leach.
sulfoksida (DMSO) 1 % 50 L, 10 ekor
larva udang Artemia salina Leach dan 1 tetes
(50 L) larutan ragi ke dalam vial, kemudian
ditambahkan air laut buatan sampai
volumenya menjadi 5 mL.
4
 Telur udang ditetaskan 2 hari
sebelum dilakukan uji. Disiapkan bejana
untuk penetasan telur udang. Wadah yang
digunakan dibagi menjadi dua bagian, bagian
gelap dan terang kemudian ditambahkan air
laut buatan. Satu ruang dalam bejana tersebut
diberi penerangan dengan cahaya lampu
pijar/neon 40-60 watt untuk menghangatkan
suhu dalam penetasan agar suhu penetasan
25oC-31oC tetap terjaga dan merangsang
proses penetasan, sedangkan di ruang
sebelahnya diberi air laut buatan tanpa
penyinaran ditutup dengan aluminium foil
atau lakban hitam. Sebelum ditetaskan telur
Artemia salina Leach sebanyak 50-150 mg
terlebih dahulu dicuci yakni ditaburkan dan
direndam pada wadah berisi akuades selama
Persiapan Larutan Sampel yang Akan Diuji
Ekstrak yang akan diuji dibuat dalam
konsentrasi 0, 100, 250, 500, 750, 1000 ppm
dalam air laut buatan.
Prosedur Uji Toksisitas dengan Metode BSLT
Vial disediakan untuk tiap kelompok
sesuai peringkat konsentrasi dengan masing-
masing disediakan 5 vial dan direplikasi
sebanyak 3 kali. Pada uji toksisitas ini dibuat
larutan stok (induk) sebesar 1 % yaitu
sebanyak 50 mg sampel dilarutkan dalam 5
mL metanol p.a. Dari stok 1 % diambil
volume tertentu untuk membuat seri
konsentrasi sampel sebesar 100 g/mL, 250
g/mL, 500 g/mL, 750 g/mL, dan 1000
g/mL, kemudian vial yang berisi larutan uji
dikeringkan sampai semua pelarutnya
menguap selama beberapa hari pada suhu
kamar dalam desikator sehingga tidak berbau
pelarut dan dapat ditunjukkan dengan proses
pengeringan menghasilkan penimbangan
yang konstan dengan bobot tetap (Adfa,
2005), kemudian ditambahkan DMSO 1 %
1-3 tetes (50-150 L) termasuk vial kontrol
untuk melarutkan sampel kembali jika
diperlukan (Kadarisman, 2000; Sutisna, 2000
cit Atmoko & Maruf, 2009; Adfa, 2007).
1 jam, lalu ditiriskan sampai airnya tuntas,
kemudian telur ditempatkan / direndam pada
bagian gelap dari wadah berisi air laut buatan
sekitar 300 mL. Telur udang yang terendam
air laut buatan dibiarkan selama 2 x 24 jam
sampai menetas menjadi benur (nauplius)
yang matang dan siap digunakan dalam
percobaan. Telur akan menetas dalam waktu
18-48 jam dan akan bergerak secara alamiah
menuju daerah terang sehingga larva udang
terpisahkan dari bagian telur atau kulit telur.
Larva yang sehat bersifat fototropik dan siap
dijadikan hewan uji setelah berumur 48 jam.
Nauplius dipisahkan dari telurnya dengan
dipipet ke dalam beker/vial yang berisi air
laut buatan.
Selanjutnya vial yang telah diisi sampel
kemudian ditambah air laut buatan 1 mL dan
divortex sekitar 30 menit (Indiastuti, 2008),
kemudian 10 ekor larva udang Artemia
salina Leach yang berumur 48 jam
dimasukan dalam vial. Satu tetes ragi (0,6
mg/mL) dimasukkan ke dalam setiap vial
sebagai makanan Artemia (Harmita & Radji,
2008), lalu ditambahkan air laut buatan
sampai tanda batas volume 5 mL. Kontrol
negatif (blanko) dilakukan cara kerja yang
sama tanpa memasukan ekstrak daun ekor
kucing ke dalam vial. Vial-vial tersebut
diletakkan di bawah penerangan. Jumlah
Artemia salina Leach yang mati dalam tiap
vial selama 24 jam dihitung dengan cara
manual dan mikroskopik. Kriteria standar
untuk menilai kematian larva udang adalah
bila larva udang tidak menunjukkan
pergerakan selama beberapa detik observasi
(Astuti, 2006 cit Cahyadi, 2009). Cara
manual yaitu dengan mengamati larva di
5
dalam vial dengan bantuan lup, kemudian pada tiap konsentrasi dengan jumlah nauplii
diamati dalam kaca arloji dengan bantuan yang masih hidup. Sedangkan cara
cahaya. Jumlah nauplii yang mati dihitung mikroskopik adalah dilakukan pengamatan
dengan mengurangkan jumlah total nauplii di bawah mikroskop.

Analisis Toksisitas
Efek toksik diperoleh dari hasil perkalian rasio dengan 100%, yaitu
pengamatan dengan menghitung % kematian larva yang mati dibagi jumlah larva awal
(mortalitas) larva Artemia salina Leach pada dikali 100% untuk tiap replikasi. Lalu
tiap konsentrasi. Jumlah Artemia salina dibandingkan dengan kontrol dan dilakukan
Leach yang mati dalam tiap vial selama 24 analisis hasil sehingga diperoleh harga LC50.
jam dihitung. Persen kematian diperoleh dari
Jumlah larva mati
% kematian = X 100%
Jumlah larva total awal
Apabila pada kontrol ada yang mati, Abbott (Meyer et al., 1982; Harmita &
persen kematian ditetapkan dengan rumus Radji,2008).

Jumlah larva yang mati pada uji jumlah larva mati pada kontrol
% kematian= X 100%
Jumlah larva uji mula - mula pada larutanuji

Dari persen kematian, dicari probit. Metode analisis probit manual

angka/nilai probit tiap kelompok hewan uji
melalui tabel, menentukan log dosis tiap-tiap
kelompok kemudian dibuat grafik dengan
persamaan garis lurus hubungan antara nilai
probit vs log konsentrasi, y = bx + a. Dimana
y : angka probit dan x : log konsentrasi,
kemudian ditarik garis dari harga probit 5 (=
50% kematian) menuju sumbu X, didapatkan
log konsentrasi. Log konsentrasi
diantilogkan untuk mendapatkan harga LC50
atau LC50 dapat juga dihitung dari persamaan
garis lurus tersebut dengan memasukkan
nilai 5 (probit dari 50 % kematian hewan
coba) sebagai y sehingga dihasilkan x
sebagai nilai log konsentrasi. LC50 dihitung
dan diperoleh dari antilog nilai x tersebut
(Priyanto, 2009).
Metode analisis dilakukan dengan
metode manual dan metode program analisis
menggunakan tabel probit untuk menaksir
nilai probit dengan mengkonversi nilai
persen kematian nauplii pada tiap
konsentrasi ke nilai probit dalam tabel
dengan mata, lalu regresi dihitung dengan
cara manual menggunakan kalkulator,
kemudian sebagai pembanding nilai LC50
dihitung menggunakan program analisis
probit untuk memperkiraan regresi linear dan
mengkonversi persen respon kematian
keprobit secara otomatis, selanjutnya rata-
rata nilai LC50 yang diperoleh melalui
metode manual dan program analisis probit
dibandingkan apakah berbeda signifikan atau
tidak menggunakan uji dua sampel tidak
berhubungan/uji t (Independent Samples T
Test) program statistik SPSS 16 for windows.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini menggunakan sampel Kelurahan Pulau Pedalaman Mempawah

tanaman ekor kucing (Acalypha hispida Timur Kabupaten Pontianak, Kalimantan
Burm.f.) yang diambil di jalan Adiwijaya Barat. Bagian tumbuhan yang diambil adalah

6
daun. Tanaman yang dipergunakan terlebih
dahulu dideterminasi di Herbarium
Bogoriense, Balai Penelitian dan
Pengembangan Botani Pusat Penelitian dan
Pengembangan Biologi, LIPI Bogor. Hasil
determinasi yang diperoleh menyatakan
bahawa daun ekor kucing yang diuji pada
penelitian ini adalah Acalypha hispida
Burm.f.
Bagian tumbuhan yang digunakan
adalah daun. Daun ekor kucing yang
digunakan dalam penelitian ini adalah dalam
bentuk simplisia kering karena kadar air
yang lebih sedikit memudahkan cairan
pengekstrak masuk ke dalam sel dan menarik
zat aktif yang terkandung secara sempurna.
Simplisia kering yang berwarna hijau ini
dihaluskan menggunakan blender sehingga
diperoleh serbuk. Pembuatan serbuk dapat
mempermudah proses ekstraksi.
Ekstraksi yang digunakan yaitu
dengan ekstraksi maserasi. Serbuk kasar
simplisia kering daun ekor kucing sebanyak
500 gram diekstraksi dengan teknik maserasi
selama 3 hari menggunakan pelarut/penyari
etanol teknis dengan total pelarut 5 liter.
Selanjutnya rendaman tersebut disimpan
terlindung dari cahaya langsung untuk
mencegah reaksi yang dikatalis cahaya atau
perubahan warna. Ekstraksi dilakukan
selama 3 hari sampai diperoleh filtrat
berwarna pucat. Setelah waktu tersebut,
artinya keseimbangan antara bahan yang
diekstraksi pada bagian dalam sel dengan
yang masuk kedalam cairan telah tercapai
dan diharapkan dengan diperolehnya filtrat
yang warnanya pucat senyawa-senyawa
terekstrak secara maksimal. Pada proses
maserasi dilakukan pengadukan berulang
atau sesekali diaduk untuk memaksimalkan
penyarian, sehingga permukaan pelarut
masuk ke seluruh permukaan serbuk
simplisia. Pengadukan diperlukan untuk
meratakan konsentrasi larutan di luar serbuk
sampel sehingga tetap terjaga adanya derajat
perbedaan konsentrasi yang sekecil-kecilnya
antara larutan di dalam dan di luar sel.
Pengocokan atau pengadukan dilakukan
dengan harapan agar keseimbangan
konsentrasi bahan ekstraksi lebih cepat
dalam cairan. Keadaan diam selama maserasi
menyebabkan turunnya perpindahan bahan
aktif.
Setelah melalui proses maserasi
didapat hasil dari maserasi atau maserat yang
kemudian dilakukan pemekatan/evaporasi
dengan rotary evaporator untuk
menguapkan pelarut dan air yang masih
tersisa sehingga didapatkan ekstrak kental
dengan berat konstan. Ekstrak kering yang
diperoleh sebanyak 100,6208 gram yang
berwarna hijau tua, sehingga diperoleh
rendemen 20,124 % (b/b) dari berat sampel
segarnya.
Ekstrak daun ekor kucing
mengandung senyawa aktif dalam bentuk
metabolit sekunder yaitu flavonoid dan
alkaloid. Kandungan flavonoid dan alkaloid
ini diuji dengan skrining fitokimia
menggunakan reagen dan uji fitokimia
dengan KLT. Hasil identifikasi kandungan
senyawa aktif berdasarkan uji skrining
fitokimia dengan reagen dan KLT pada
ekstrak etanol daun ekor kucing,
menunjukkan adanya senyawa alkaloid dan
flavonoid.
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
merupakan uji pendahuluan / praskrining
aktivitas biologis yang sederhana untuk
menentukan toksisitas suatu senyawa atau
ekstrak secara akut dengan menggunakan
hewan coba larva udang (Artemia salina
nauplii). Uji toksisitas terhadap larva udang
Artemia salina Leach dengan metode BSLT
ini dapat digunakan sebagai uji
pendahuluan/praskrining pada penelitian
senyawa-senyawa yang mengarah pada uji
aktivitas sitotoksik. Korelasi antara uji
toksisitas akut ini dengan uji sitotoksik
adalah jika mortalitas terhadap Artemia
salina Leach yang ditimbulkan memiliki
harga LC50 < 1000 g/mL (ppm). Parameter
7
yang ditunjukkan untuk menunjukkan
adanya aktivitas biologi pada suatu senyawa
pada Artemia salina Leach adalah jumlah
kematian larva udang karena pengaruh
pemberian senyawa dengan dosis yang telah
ditentukan. Salah satu organisme yang
sangat sesuai sebagai hewan uji untuk
mengetahui bioaktivitas senyawa melalui uji
toksisitas adalah brine shrimp (udang laut)
dari jenis Artemia salina Leach. Uji ini
menggunakan larva udang laut atau nauplii.
Beberapa kelebihan dari uji bioaktivitas
dengan brine shrimp lethallity test (BSLT)
menggunakan larva udang Artemia salina
Leach adalah cepat waktu ujinya, mudah,
tidak memerlukan peralatan khusus,
sederhana (tanpa teknik aseptik), murah
(tidak perlu serum hewan), jumlah
organisme banyak, memenuhi kebutuhan
validasi statistik dengan sedikit sampel,
hasilnya representatif dan dapat dipercaya
(Meyer et al, 1982).
Larutan ekstrak etanol daun ekor
kucing dibuat dengan konsentrasi 100 ppm,
250 ppm, 500 ppm, 750 ppm, dan 1000 ppm
serta sebagai pengontrolnya yaitu 0 ppm
yaitu hanya pelarutnya tanpa penambahan
ekstrak. Larutan kontrol berfungsi untuk
menghilangkan pengaruh lain diluar ekstrak
uji yang dapat menyebabkan kematian
nauplius. Pada kontrol negatif hanya
digunakan pelarut metanol untuk melihat
pengaruh pelarut terhadap larva udang.
Larva udang tidak ada yang mati disebabkan
pelarut metanol telah diuapkan seluruhnya
sehingga dalam penelitian ini murni
pengaruh dari ekstrak tanpa dipengaruhi oleh
pelarut. Sepuluh larva udang Artemia salina
Leach digunakan sebagai hewan uji
toksisitas dalam setiap konsentrasi masing-
masing ekstrak. Perlakuan uji toksisitas ini
dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan /
replikasi (triplo) untuk mendapatkan
keakuratan data dan data yang didapat baik,
sehingga dapat dihitung secara statistik dari
data yang diperoleh. Jika dilakukan simplo
mungkin bisa terjadi kesalahan dan tidak ada
data lain yang dapat dipakai.
Larutan uji dibuat dari larutan
induk/stok 1% (10.000 ppm) dengan
memipet 50 L 125 L, 250 L, 375 L, dan
500 L ekstrak ke dalam botol vial.
Selanjutnya vial yang berisi larutan uji
dikeringkan sampai semua pelarutnya
menguap selama beberapa hari (1 pekan)
pada suhu kamar dalam desikator sehingga
tidak berbau pelarut dan dapat ditunjukkan
dengan proses pengeringan menghasilkan
penimbangan yang konstan dengan bobot
tetap agar kematian larva tidak dipengaruhi
oleh pelarutnya. Kontrol negatif dibuat
dengan cara yang sama, yaitu dengan
membuat larutan yang sama kecuali
penambahan ekstrak. Larutan kontrol terdiri
atas 5 mL air laut yang berisi pelarut
metanol, DMSO 1 % 50 L, 10 ekor larva
udang laut dan 1 tetes (50 L) larutan ragi ke
dalam vial. Setelah 24 jam, jumlah larva
udang yang mati untuk tiap-tiap konsentrasi
dihitung dan dicatat.
Pelarutan ekstrak dengan air laut
sering menimbulkan masalah karena adanya
perbedaan tingkat kepolaran, ekstrak sukar
larut dengan air laut sehingga digunakan
DMSO untuk membantu melarutkannya.
DMSO digunakan sebagai surfaktan karena
ekstrak tidak dapat larut dalam air laut.
Surfaktan merupakan senyawa yang
memiliki ujung hidrofilik dan hidrofobik
sehingga dapat melarutkan ekstrak dengan
air laut dengan cara menurunkan tegangan
permukaan. Penggunaan DMSO 1 %
sebanyak 1 tetes (50 L) berfungsi untuk
membantu kelarutan. Dimetilsulfoksida
(DMSO) merupakan cairan tak berwarna
yang memiliki rumus (CH3)2SO merupakan
pelarut yang dapat melarutkan senyawa polar
maupun non polar.
Pada prosedur uji toksisitas pada
penelitian ini digunakan air laut buatan
sebagai media uji. Penggunaan air laut
buatan ini untuk mengkondisikan bahwa air
8
laut yang digunakan tidak terkontaminasi
atau tercemar karena jika menggunakan air
laut asli dikhawatirkan terdapat cemaran atau
kontaminasi. Air laut yang digunakan adalah
air laut buatan yang dibuat dengan cara
melarutkan garam ke dalam air mineral. Air
laut buatan dibuat dengan melarutkan 15
gram garam tiap 1 L air. Air yang digunakan
untuk melarutkan garam adalah air mineral
Aqua. Air mineral digunakan karena setelah
dilakukan pra-pengujian pH air laut buatan
Tabel 1. Pengaruh Ekstrak Etanol Daun Ekor kucing (Acalypha hispida Burm.f.)
terhadap Kematian Larva Artemia salina Leach
Konsentrasi
Ekstrak
Kelompok
Etanol Daun
Perlakuan
Ekor Kucing
(ppm)
P1 100
P2 250
P3 500
P4 750
P5 1000
K 0
Metode BSLT dilakukan dengan cara
pemaparan larutan ekstrak senyawa yang
diuji kepada larva Artemia salina Leach.
Dengan kata lain, larutan ekstrak senyawa
tersebut harus larut sempurna dalam media
hidup larva Artemia salina Leach yaitu air
laut buatan, sehingga konsentrasi sampel
yang diperoleh menggambarkan konsentrasi
sampel yang sebenarnya.
Suatu senyawa dinyatakan
mempunyai potensi toksisitas akut jika
mempunyai harga LC50 kurang dari 1000
g/mL (ppm). LC50 (Lethal Concentration
50) merupakan konsentrasi zat yang
menyebabkan terjadinya kematian pada 50 %
hewan percobaan yaitu larva Artemia salina
mendekati pH yang baik untuk pertumbuhan
yakni sekitar pH 6-7 menggunakan indikator
pH.
Pada penelitian ini digunakan 300
ekor larva uji. Rata-rata kematian larva untuk
masing-masing kelompok perlakuan
diperoleh dengan menghitung total jumlah
kematian setiap kelompok perlakuan
sebanyak 3 replikasi dan kemudian
membaginya dengan jumlah replikasi.
Jumlah Kematian
Larva Artemia salina pada
Setiap Replikasi (Ekor)
RI RII RIII
3 3 4
4 5 5
7 7 6
8 9 8
9 9 8
0 0 0
Leach. Pengujian terhadap ekstrak metanol
daun ekor kucing (Acalypha hsipida Burm.f.)
menunjukkan harga LC50 sebesar 220,005
g/mL atau ppm. Berdasarkan nilai LC50
yang diperoleh dapat dikatakan ekstrak
metanol daun ekor kucing (Acalypha hispida
Burm.f.) pada percobaan ini bersifat toksik
terhadap Artemia salina Leach sehingga
memiliki potensi toksisitas akut menurut
metode BSLT yaitu pada perlakuan dengan
hewan coba larva Artemia salina Leach.
Penelitian Meyer (1982), melaporkan bahwa
suatu ekstrak menunjukkan aktivitas
ketoksikan dalam BSLT jika ekstrak dapat
menyebabkan kematian 50% hewan uji pada
konsentrasi kurang dari 1000 ppm. Nilai
9
LC50 dari ekstrak etanol yang lebih kecil dari
1000 ppm menunjukkan bahwa ekstrak
tersebut mempunyai potensi sitotoksik yang
dapat dikembangkan sebagai sebagai
antikanker. Uji toksisitas terhadap larva
udang Artemia salina Leach atau Brine
Shrimp Lethallity Test (BSLT) dapat
digunakan sebagai uji pendahuluan pada
penelitian yang mengarah pada uji sitotoksik
(Meyer et al, 1982).
Selain menentukan nilai LC50 dengan
metode manual, sebagai pembanding hasil
perhitungan maka LC50 juga ditentukan
Menggunakan program analisis probit SPSS
16 for windows. Hasil dari analisis probit
dengan menggunakan program probit
menunjukkan harga LC50 dari ekstrak
metanol daun ekor kucing adalah 222,862
ppm. Untuk mengetahui hubungan antara
nilai LC50 dengan metode manual dan
metode program analisis probit maka
dilakukan uji statistik. Uji normalitas dengan
metode Shapiro-Wilk disimpulkan bahwa
populasi data nilai LC50 metode manual dan
nilai LC50 metode program analisis probit
terdistribusi normal. Setelah uji normalitas
dan uji homogenitas kemudian selanjutnya
dilakukan pengujian statistik parametrik uji
dua sampel tidak berhubungan / uji t
(Independent Samples T Test). Uji t
dilakukan untuk mengetahui ada atau
tidaknya perbedaan rata-rata antara dua
kelompok sampel yang tidak berhubungan
yaitu apakah ada perbedaan nilai LC50 antara
metode manual dan program analisis probit.
Dari uji t menunjukkan bahwa tidak ada
perbedaan antara rata-rata nilai LC50 metode
manual dengan rata-rata nilai LC50 metode
program analisis probit. Berdasarkan hasil
perhitungan dengan metode manual dan
metode program analisis probit menunjukkan
hasil nilai LC50 rata-rata yang tidak berbeda
signifikan yakni 220,005 ppm dengan
metode manual dan 222,862 ppm dengan
program analisis probit, sehingga dapat
disimpulkan nilai LC50 yang diperoleh benar
setelah dihitung dengan 2 metode
penghitungan.
Pada penelitian ini didapatkan bahwa
ekstrak etanol daun ekor kucing mempunyai
potensi toksisitas akut. Hal tersebut berkaitan
dengan senyawa yang terdapat dalam daun
ekor kucing yaitu alkaloid dan flavonoid,
dimana pada kadar tertentu memiliki potensi
toksisitas akut serta dapat menyebabkan
kematian larva Artemia salina Leach.
Mekanisme kematian larva diperkirakan
berhubungan dengan fungsi senyawa
alkaloid dan flavonoid dalam daun ekor
kucing yang dapat menghambat daya makan
larva (antifeedant/pengelak makanan). Cara
kerja senyawa-senyawa tersebut adalah
dengan bertindak sebagai stomach poisoning
atau racun perut. Oleh karena itu, bila
senyawa-senyawa ini masuk ke dalam tubuh
larva, alat pencernaannya akan terganggu.
Selain itu, senyawa ini menghambat reseptor
perasa pada daerah mulut larva. Hal ini
mengakibatkan larva gagal mendapatkan
stimulus rasa sehingga tidak mampu
mengenali makanannya sehingga larva mati
kelaparan (Rita, dkk., 2008; Nguyen &
Widodo, 1999 cit Cahyadi, 2009).
Fase yang digunakan dalam
penelitian ini adalah fase nauplius karena
pada saat itu Artemia berada pada fase yang
paling aktif membelah secara mitosis yang
identik dengan sel kanker yang juga
membelah secara mitosis. Hal ini
menyebabkan uji BSLT ini sering digunakan
sebagai penelitian pendahuluan dari aktivitas
antikanker. Aktivitas sitotoksik adalah
aktivitas yang dapat menyebabkan kematian
pada sel (Rang et.al., 2003 cit Kresnamurti,
Tanpa tahun). Salah satu mekanisme kerja
obat antikanker juga bersifat sitotoksik yaitu
dengan cara menghambat pertumbuhan sel
yang akhirnya menyebabkan kematian pada
sel sedangkan mekanisme aktivitas sitotoksik
pada Artemia salina belum diketahui secara
pasti.
10
 Daya toksisitas suatu senyawa dapat
diketahui dengan menghitung jumlah
kematian larva Artemia salina dengan
parameter lethal concentration 50 (LC50).
Suatu ekstrak dinyatakan bersifat toksik
menurut metode BSLT ini jika memiliki
LC50 kurang dari 1000 g/mL (Meyer, et al.
1982). Hasil uji BSLT menunjukkan bahwa
ekstrak tumbuhan bersifat toksik maka dapat
dikembangkan ke penelitian lebih lanjut
untuk mengisolasi senyawa sitotoksik
tumbuhan sebagai usaha pengembangan obat
alternatif antikanker. Pengujian terhadap
ekstrak etanol daun ekor kucing
menunjukkan harga LC50 sebesar 220,005
g/mL atau ppm, sehingga dapat dikatakan
ekstrak etanol daun ekor kucing dalam
penelitian ini memiliki aktivitas sitotoksik
atau memliki potensi toksisitas terhadap
Artemia salina Leach menurut metode BSLT
karena memiliki LC50 kurang dari 1000 ppm
dan berkolerasi positif sebagai antikanker.
Sesuai penelitian terdahulu yang menyatakan
bahwa apabila suatu ekstrak tanaman bersifat
toksik menurut harga LC50 dengan metode
BSLT, maka tanaman tersebut dapat
dikembangkan sebagai obat anti kanker,
maka daun ekor kucing dapat dilanjutkan
penelitiannya sebagai obat antikanker di
masa yang akan datang. Kandungan senyawa
yang berpotensi dalam ektrak tanaman ini
dapat diketahui berdasarkan hasil uji
fitokimia/uji kandungan senyawa ekstrak.
Hasil uji kandungan senyawa ekstrak dengan
skrining fitokimia atau dengan reagen dan uji
fitokimia dengan KLT menunjukkan pada
ekstrak etanol daun ekor kucing terdapat
senyawa alkaloid dan flavonoid yang diduga
berpotensi sitotoksik namun perlu dilakukan
uji lebih lanjut.
KESIMPULAN
1. LC50 ekstrak etanol daun ekor kucing
(Acalypha hispida Burm.f.) adalah
220,005 ppm.
2. Ekstrak etanol daun ekor kucing
(Acalypha hsipida Burm.f.) memiliki
potensi toksisitas akut terhadap Artemia
salina Leach dengan menggunakan
metode Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT) karena dihasilkan nilai LC50
kurang dari 1.000 ppm.
SARAN
1. Replikasi sebaiknya dilakukan 5 kali
sebagai antisipasi jika terdapat data
pencilan (menyimpang).
2. Hasil uji pendahuluan dengan metode
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
menunjukkan ekstrak etanol daun ekor
kucing memiliki potensi toksisitas akut,
sehingga perlu dilakukan pengujian
bioaktivitas lebih lanjut terhadap tanaman
ini.
3. Perlu dilakukan penelitian lanjutan
mengenai profil metabolit sekunder yang
berpotensi toksik dengan mengisolasi dan
mengidentifikasi senyawa sitotoksik yang
terdapat dalam tanaman ekor kucing
sampai menentukan struktur
molekul/senyawa aktif, kemudian
dilakukan uji aktivitas antikanker serta
dilakukan standarisasi untuk
dikembangkan menjadi fitofarmaka
sebagai usaha pengembangan obat
alternatif antikanker.
DAFTAR PUSTAKA
Adfa, M., 2005, Survey Etnobotani, Studi
Senyawa Flavonoid dan Uji Brine
Shrimp Beberapa Tumbuhan Obat
Tradisional Suku Serawai di Propinsi
Bengkulu, Gradien 1 (1): 43, 45-46.
Atmoko, T & A. Maruf, 2009, Uji
Toksisitas dan Skrining Fitokimia
Ekstrak Tumbuhan Sumber Pakan
Orangutan Terhadap Larva Artemia
11
 salina L. Jurnal Penelitian Hutan dan
Konservasi Alam VI (1): 39.
Cahyadi, R., 2009, Uji Toksisitas Akut
Ekstrak Etanol Buah Pare
(Momordica charantia l.) Terhadap
Larva Artemia salina Leach dengan
Metode Brine Shrimp Lethality Test
(BST), [Skripsi], Semarang: Fakultas
Kedokteran, Universitas Diponegoro.
Dalimartha, Setiawan,2000,Atlas Tumbuhan
Obat Indonesia, Jilid kedua, Trubus
Agriwidya, Jakarta
Rita W.S., dkk., 2008. Isolasi dan
Identifikasi Senyawa yang Berpotensi
Sebagai Antitumor Pada Daging
Buah Pare (Momordica charantia
L.), Jurusan Kimia FMIPA
Universitas Udayana, Bukit
Jimbaran, Jurnal Kimia Vol. 2.
Setyawati, A., F.D. Suyatna, et al., 2007,
Pengantar Farmakologi: farmakologi
dan terapi, (Edisi V), Dalam
Ganiswara S.G., Setiabudi R.,
Elysabeth, (Editor), Jakarta: Gaya
Baru, hal: 1-24.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia,

2000, Parameter Standar Umum
Ekstrak Tumbuhan Obat, Jakarta:
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat
dan Makanan, hal: 1, 9-11, 13-17.

Harmita & M. Radji, 2008, Buku Ajar

Analisis Hayati, (Edisi III, Cetakan
I), Dalam Manurung J., (Editor),
Jakarta: EGC, hal: 42-43, 48, 76-78.

Kresnamurti, A & T. Budiati, Tanpa Tahun.

Perbandingan Uji Sitotoksik CNSL,
Asam Anakardat dan Kardol dengan
Metode Brine Shrimp Lethality Test,
Fakultas Farmasi Universitas
Arilangga Surabaya dan Fakultas
Farmasi Universitas Katolik Widya
Mandala Surabaya.

Meyer, B.N., et al., 1982, Brine Shrimp: A

Convenient General Bioassay for
Active Plant Constituents, Planta
Medica 45: 32-33.

Priyanto, 2009, Toksikologi: mekanisme,

terapi antidotum, dan penilaian
resiko, (Cetakan I), Dalam Sunaryo
H., (Editor), Jakarta: Lembaga Studi
dan Konsultasi Farmakologi, hal:
151-152, 157.

12