Pengaruh Peralatan Pengolahan

Dalam studi stabilitas rekombinan manusiawi antibodi monoklonal HER2, rhuMAb HER2,
dalam cairan formu-lations, Lam et al. menemukan bahwa mengganti pengisi stainless steel
dengan pengisi baja nonstainless mengurangi antibodi teroksidasi. Sebagai tambahan, protein
telah terbukti memfasilitasi korosi logam.

Pengaruh Kontainer Produk

McCormick et al. melaporkan bahwa Tween 80, untuk menggantikan albumin manusia di asli
rumus-tion, berinteraksi dengan sumbat karet dilapisi dalam jarum suntik sekali pakai. Respon
imun secara signifikan diminimalkan kemudian beralih ke sumbat karet PTFE berlapis.
Headspace oksigen dapat mempercepat oksidasi antibodi dan repla-semen dengan gas inert bisa
meminimalkan reaksi seperti itu.

Studi Stabilitas dipercepat

Perkiraan suhu kamar atau stabilitas 58C berdasarkan studi stabilitas dipercepat untuk antibodi,
seperti protein lain, mungkin atau tidak mungkin atau akurat. Kemampuan ini disebabkan oleh
adanya jalur degradasi kompleks yang mungkin memiliki tingkat yang berbeda dari
ketergantungan suhu. Kroon et al. menemukan bahwa dibandingkan dengan jalur degradasi lain
dari antibodi monoklonal, OKT3 (IgG2a), Asn deamidasi itu preferentially dipercepat dengan
meningkatnya suhu. Di sisi lain, Poborji et al. menemukan bahwa hilangnya antibodi chimeric
monomer (L6) pada pH 7,2 yang diikuti perilaku Arrhenius pada kisaran suhu 30-508C dan
ekstrapolasi dari suhu tinggi Data SEC untuk 2-88C pada pH 7 dan 5.5 mengakibatkan perkiraan
stabilitas sebanding dengan data real-time tersedia.

lyophilized Formulasi
Persiapan formulasi protein liofilisasi telah ditinjau secara luas. Seperti kebanyakan protein,
beberapa antibodi tidak cukup dalam bentuk cair dan bentuk sediaan terliofilisasi yang stabil
harus dipertimbangkan.

Amorf Versus Crystalline Negara

Telah dipercaya bahwa protein lebih stabil dalam keadaan amorf. Hal ini terutama karena protein
membutuhkan eksipien lain untuk menggantikan molekul air dari H-obligasi yang diperlukan
sebagai molekul air dikeluarkan selama pengeringan dan matriks kristal tidak memberikan intim
H-ikatan antara eksipien dan protein Dalam laporan terbaru, Shenoy et al. dibandingkan
stabilitas dua protein. Model, glukosa oksidase (GO) dan lipase, dan menunjukkan bahwa
formulasi kristal kering secara signifikan lebih stabil daripada rekan-rekan amorf mereka
dipantau dengan kromatografi ukuran-eksklusi.

Pengaruh Formulasi eksipien

Jika antibodi tidak cukup stabil dengan adanya bulking agent selama liofilisasi atau
penyimpanan, penstabil disertakan. Agen bulking umum digunakan termasuk mannitol dan
glisin. Meskipun manitol bisa menstabilkan antibodi seperti dalam kasus untuk konjugat
antibodi-vinca monoklonal dalam larutan PBS pada pH 7,4 pada liofilisasi banyak studi
menunjukkan bahwa mannitol tidak efektif menstabilkan atau bahkan mendestabilkan
Antibomat. Di sisi lain, bila digunakan dalam kombinasi dengan sukrosa atau trehalosa, tingkat
yang sama stabilisasi dengan yang untuk gula saja dapat dicapai. Disakarida / manitol
menghambat antibodi ini selama penyimpanan untuk tingkat yang lebih besar daripada formulasi
lyoprotectant saja.
Gula adalah agen stabilisasi yang paling umum digunakan dalam formulasi terliofilisasi. Di
antaranya, dua gula nonreducing, sukrosa dan trehalosa. Sukrosa lebih efektif dalam melindungi
IgG1 lyophilized terhadap agregasi selama penyimpanan pada 408C pada gula: rasio berat
protein dari 1: 1 (Chang et al 2005b.). Dalam studi lain, sukrosa 5% gagal untuk menawarkan
perlindungan apapun untuk mouse liofilisasi monoklonal antibodi (MN12) (IgG2a (k)) selama
penyimpanan di 568C selama 18 hari. Sekali lagi, seperti yang disebutkan di bagian formulasi
cair, bahkan stabilisator digunakan paling sering mungkin tidak menstabilkan semua antibodi
dalam keadaan padat dan antibodi perlu diperlakukan sebagai individu molekul yang berbeda.

Ketika gula digunakan sebagai menstabilkan agen (lyoprotectants), jumlah yang cukup harus
digunakan untuk mencapai efek yang signifikan tergantung pada konsentrasi protein. Ia telah
mengemukakan bahwa lyoprotectant molar: rasio protein dari 300: 1 atau lebih besar harus
digunakan. Memang, data literatur yang tersedia menunjukkan rasio yang lebih tinggi dari 300
yang dibutuhkan untuk stabilisasi yang lebih baik. Demikian pula, Andya et al. menunjukkan
bahwa penggunaan sukrosa atau trehalosa menghambat agregasi dari antibodi liofilisasi selama
penyimpanan pada 308C untuk tingkat maksimum ketika sukrosa / trehalosa. Dalam laporan
terbaru, ditemukan bahwa setidaknya perbandingan berat 2: 1 (rasio molar dari sekitar 800)
diperlukan untuk mencapai perlindungan yang maksimal dari sukrosa liofilisasi: formulasi IgG1
terhadap kedua agregasi dan kimia degradasi selama penyimpanan pada 408C (Chang et al.
2005a).
Eksipien formulasi lain juga digunakan dan beberapa ini efektif dalam menstabilkan antibodi
tertentu. Sebuah studi baru-baru ini menunjukkan bahwa penambahan sorbitol untuk formulasi
sukrosa atau trehalosa mengakibatkan peningkatan lebih lanjut stabilitas penyimpanan dari IgG1
antibodi liofilisasi (Chang et al. 2005b). Glukosa ini terbukti menghambat gamma fragmentasi
iradiasi-diinduksi antibodi monoklonal manusiawi.

Pengaruh Formulasi pH dan Buffering Agen

PH formulasi cair dapat memiliki efek potensial pada stabilitas formulasi liofilisasi, meskipun
solid-state pH tidak dapat didefinisikan dengan baik. Dalam evaluasi stabilitas monoklonal
konjugat antibodi-tapak dara liofilisasi, agregasi tampaknya menjadi lebih rendah pada pH netral
7,1 dari pada baik pH 8,5 atau 6,1 ketika formulasi terliofilisasi disimpan pada 258C. Dalam
mengatur pH formulasi, penggunaan agen penyangga memiliki efek pada stabilitas antibodi baik
selama liofilisasi dan penyimpanan produk terliofilisasi. Sebagai contoh, dalam studi stabilitas
anti-IL8 mono-klonal antibodi manusia (ABX-IL8; IgG2), Chen et al. menunjukkan bahwa
penambahan histidin menghambat pembentukan spesies HMW pada liofilisasi dan selama
penyimpanan pada 378C dengan cara yang tergantung konsentrasi. Di antara beberapa eksipien
termasuk Nya, Gly, manitol, Glu, dan polysor-bate 20. Nya adalah yang paling penting dalam
melindungi stabilitas solid-state antibodi (meminimalkan aggre-gation). Dalam sebuah studi
yang berbeda, tingkat agregasi dari liofilisasi anti-IgE pada 58C pada 5 mg / mL dalam 10
penyangga mM dipengaruhi baik oleh pH dan buffer dalam urutan sebagai berikut: Na fosfat, pH
7> K Fosfat, pH 7 > Na suksinat, pH 6 atau 5 > Histidin, pH 7. Perlu dicatat bahwa beberapa
agen penyangga dapat menyebabkan perubahan pH yang signifikan karena kristalisasi selektif
selama liofilisasi, seperti natrium fosfat. agen penyangga tersebut harus dihindari dalam
mempersiapkan formulasi antibodi pH-sensitif.
PengaruhFormulasieksipien
Formulasieksipienefektifumumnyadalammelindungistabilitasfisikantibodi.Di antaraeksipienini,
gula yang paling seringdigunakan.Berbagaigula, sepertisukrosa, trehalosa, glukosa,
telahterbuktimengurangipembekuan / agregasi thaw-diinduksidarirhuMAb anti-CD20,55antibodi
chimeric (L6),41 manusia anti-IL8 antibodimonoklonal (ABX- IL8; IgG2),21 dansatu-rantai
antigen-binding CC49 protein / 218 sFv (27kDa).
Formulasidapatmenghambatdegradasikimiaantibodi.Mengganti 0,14 M NaCldengan 8%
trehalosaatau 4% manitoldalamrhuMAb anti-CD20 meningkatkanstabilitaskimia yang
diukurdengan IEX selamapenyimpanan di 408C.55
efeksepertiitukemungkinanakibatdaristabilisasikonformasiantibodi.
Beberapaeksipiendapatmelindungiantiboditerhadapoksidasi.MenggantiNaCldengan 4%
manitoldan 1% benzyl alcohol dilindungirekombinanmanusiawiantibodimonoklonal HER2,
rhuMAbHER2, terhadapoksidasi (terutama Bertemu-255) pada 30 atau 408C.
PengaruhShaking
Sebuahgetarandapatmengubahsifatantibodi.Ditemukanbahwagemetarproduk murine
antibodybaseddisebabkancurahhujanantibodidanbentukendapan yang berbedatergantungpada
volume mengisi.Dalamevaluasiefekgetarpadaaktivitas antigen
mengikatfragmenantibodiscFvrekombinandalamlarutanpenyangga, Harrison et al.45
menemukanbahwaaktivitasmengikatmembusukpadakonstantingkat rata-rata 0,83 / jam
padagesersekitar 20.000 / s.
PengaruhPengawet
Kompatibilitastergantungbaikpadaantibodidanpengawet.Dalamevaluasiefekdaribeberapabahanpe
ngawet, termasukbenzilalkohol, chlorobutanol, Methylparaben, propylparaben, fenol, dan m-
kresol, padastabilitasantibodimonoklonalmanusiawi, Gupta
danKaishevamenemukanbahwaantibodypaling stabildiberiMethylparabenpropilparaben,
kompatibeldenganbenzilalkoholdanchlorobutanolpadakonsentrasirendah,
dantidakkompatibeldenganfenoldan m-kresol, yang diukurdenganberbagaites, termasuk SEC-
HPLC, DSC, hamburancahaya, UV, ANMD
ujipotensi.Isupentinglainnyadalamperumusanantibodiadalahpilihan yang
tepatperalatanpengolahan /kontainer.
PengaruhKontainerProduk
McCormick et al. melaporkanbahwa Tween 80, dimaksudkanuntukmenggantikan albumin
manusiadalamperumusanasli,
berinteraksidengansumbatkaretdilapisidalamsekalipakaijarumsuntikEprex.Responimunsecarasig
nifikandiminimalkankemudiandenganberalihkesumbatkaret PTFE berlapis.Selainitu, headspace
oksigendapatmempercepatoksidasiantibodidanpenggantiandengan gas inert
bisameminimalkanreaksisepertiitu.