MINIREVIEW

Struktur antibodi, Instabilitas (Ketidakstabilan), dan Formulasi

WEI WANG, SATISH SINGH, DAVID L. ZENG, KEVIN KING, SANDEEP NEMA
Pfizer, Inc., global Biologis, 700 Chesterfield Parkway Barat, Chesterfield, Missouri 63017

Menerima 14 Maret 2006; direvisi 17 Mei 2006; diterima Juni 4, 2006

Dipublikasikan secara online dalam Wiley InterScience (www.interscience.wiley.com). DOI 10,1002 / jps.20727

ABSTRAK: Jumlah antibodi monoklonal terapeutik dalam pembangunan telah meningkat pesat
selama beberapa tahun terakhir dan tren ini terus berlanjut. Saat ini ada lebih dari 23 antibodi
disetujui pada pasar AS dan diperkirakan 200 atau lebih dalam pengembangan. Meskipun antibodi
berbagi kesamaan struktural tertentu, pengembangan obat-obatan antibodi komersial belum
straightfor-bangsal karena perilaku solusi mereka yang unik dan agak tak terduga. Artikel ini
meninjau struktur dan fungsi antibodi dan mekanisme ketidakstabilan fisik dan kimia. Berbagai
aspek pengembangan formulasi telah diperiksa untuk mengidentifikasi atribut penting untuk
stabilisasi antibodi.2006 Wiley-Liss, Inc.

dan American Association Apoteker J Pharm Sci 96: 1-26, 2007

Kata kunci: bioteknologi; stabilisasi; formulasi protein; agregasi protein; pengeringan beku /
liofilisasi

PENGANTAR
terapi protein sedang memasuki era baru dengan
masuknya sejumlah besar obat-obatan antibodi.
Umumnya, obat protein yang efektif pada konsentrasi
rendah dengan efek samping yang kurang dibandingkan
dengan obat molekul kecil, meskipun, dalam kasus yang
jarang, pembentukan antibodi protein-induced bisa
1 pengiriman efisien entitas ini ke situs target, sehingga
serius. Oleh karena itu, kategori ini terapi mendapatkan
momentum yang luar biasa dan pengakuan luas baik di
perusahaan obat kecil dan besar. Di antara terapi obat
protein, antibodi memainkan peran utama dalam
kontrol-ling banyak jenis penyakit seperti kanker,
penyakit menular, alergi, penyakit autoimun, dan
peradangan. Sejak persetujuan dari produk -OKT-3
tahun 1986 antibodi monoklonal pertama (MAb), lebih
dari 23 MAb produk obat telah memasuki pasar (Tab.
1). Perkiraan jumlah antibodi dan turunannya antibodi
merupakan 20% dari produk biofarmasi
Korespondensi: Wei Wang (Telephone: (636) -247-2111;
Fax: (636) -247-5030; E-mail: wei.2.wang@pfizer.com)
Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 96, 1-26 (2007)
2006 Wiley-Liss, Inc dan American Association Apoteker
2
saat ini dalam pembangunan (sekitar 200). Pasar
antibodi terapi global yang diperkirakan mencapai $
3
16,7 miliar pada tahun 2008.
Ada beberapa alasan untuk meningkatnya popularitas
antibodi untuk komersial mengembangkan-ment.
Pertama, aksi mereka adalah tertentu, umumnya
menyebabkan efek samping yang lebih sedikit. Kedua,
antibodi bisa konjugasi entitas terapi lain untuk
mengurangi potensi efek samping. Misalnya, Mylotarg
merupakan agen kemoterapi disetujui terdiri dari
calicheamicin konjugasi huma-nized IgG4, yang
mengikat secara khusus untuk CD33 untuk pengobatan
CD33-positif leukemia myeloid akut. Contoh lain
adalah konjugasi barnase immunotoxic dengan rantai
ringan dari F11 antibodi monoklonal feritin anti-
manusia sebagai agen penargetan potensial untuk
4
kanker immuno-terapi. Ketiga, antibodi dapat konjugasi
radioisotop untuk tujuan diagnostik tertentu. Contohnya
termasuk CEA-Scan untuk mendeteksi kanker warna-
ectal dan ProstaScint untuk mendeteksi kanker prostat.
Terakhir, kemajuan teknologi telah membuat MAb
manusia yang lengkap tersedia, yang kurang
imunogenik.

JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007 1

JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007

2 WANG ET AL.
Tabel 1. Produk komersial Monoclonal Antibody
# Nama merk Molekul MAb Tahun Perusahaan Rute Indikasi MAb Conc

1 Avastin bevacizumab manusiawi 2004 Genetech infus IV metastasis 100 mg dan 5,8 mg / mL
IgG1, dan bisul kanker 400 mg / vial yg berdasar satu
149 kDa BioOncology usus besar atau (25 mg / mL) NaPhos H
dubur, larutan 1,2 mg / mL
mengikat VEGF NaPhos berbasa dua
anhidrat
(4 mL, 16 mL
isi vial)
2 Bexxar Tositumomab dan murine 2003 Corixa dan IV Infusion CD20 positif Kit: 14 mg / mL 10 mM fosfat
I-131Tositumab IgG2l GSK folikel solusi MAb (MAb vial)
nonHodgkins di 35 mg dan
limfoma 225 botol mg;
1,1 mg / mL
I131-MAb
larutan

3 Campath alemtuzumab manusiawi, 2001 Ilex Onkologi; infus IV kronis sel B 30 mg / 3 mL 3,5 mg / 3 mL
IgG1k, Millenium limfositik larutan NaPhos dibasic,
150 kDa dan Berlex leukemia, 0,6 mg / 3 mL
CD52-antigen KPhos monobasa
4 CEA-Scan Acrituomab; murine 1996 Immunomedics injeksi IV atau agen pencitraan 1,25 mg / vial 0,29 mg / vial
(Lyo) Tc-99 fab, infusi untuk kolorektal lyophilized stanno
50 kDa kanker MAb. khlorida,
menyusun kembali
w kalium natrium
1 mL Saline w tartrat
Tc99m tetrahidrat,
NaAcetate.3H
NaCl, glasial
asam asetat,
HCl
5 Erbitux cetuximab chimeric 2004 ImClone dan BMS infus IV pengobatan 100 mg MAb di 1,88 mg / mL
manusia/ EGFR- 50 mL; 2 mg / DibasicNaPhos
mouse mengekspresikan solusi mL 7H2HAI; 0,42 mg / mL
IgG1k, kolorektal MonobasicNaPhos H
152 kDa bisul kanker
6 Herceptin trastuzumab manusiawi 1998 Genetech infus IV metastasis 440 mg / vial, 9,9 mg / 20 ml
(Lyo) IgG1k payudara 21 mg / mL L-HistidineHCl,
kanker yang setelah 6,4 mg / 20 ml
tumor pemulihan L-Histidin
overexpress
protein HER2
7 Humira adalimumab Manusia 2002 CAT dan Abbott SC pasien RA 40 mg / 0,8 mL 0,69 mg / 0,8 mL
IgG1k, tidak merespon larutan Yg berdasar satu
148 kDa untuk DMARDs. (50 mg / mL) NaPhos 2H
blok 1,22 mg / 0,8 mL
TNF-alpha DibasicNaPhos 2H
0,24 mg / 0,8 mL
NaCitrate, 1,04 mg /
0,8 mL asam sitrat H
DOI 10,1002 / jps DOI 10 0,1002 /

8 Lucentis ranibizumab manusiawi 2006 Genentech intravitreal Umur-terkait 10 mg / mL larutan 10 mM HistidineHCl

IgG1k injeksi makula
pecahan degenerasi
(basah)
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
 9

10

11

12

13

14

15

16

dan berat
rantai
variabel
wilayah (Fab
domain),
145 kDa
(Lanjutan)
ANTIBODI FORMULASI
3
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007

4 WANG ET AL.
Tabel 1. (Lanjutan)
# Nama merk Molekul MAb Tahun Perusahaan Rute Indikasi MAb Conc Penyangga

17 Simulect Basiliximab Chimaric 1998 Novartis injeksi IV dan Pencegahan akut 10 mg dan 20 mg / 3,61 mg, 7,21 mg monobasa
vial, 4 mg / mL
(Lyo) IgG1k, infusi transplantasi ginjal pada KPhos; 0,50 mg, 0,99 mg
144 kDa penolakan, IL-2 pemulihan na2HPO
reseptor
antagonis

18 Synagis palivizumab manusiawi 1998 MedImmune injeksi IM replikasi Mencegah 50 mg dan 100 mg / 47 mM Histidin,
(Lyo) IgG1k, CDR Pernapasan yang vial, 100 mg / mL 3.0 mM Glycine
murine syncytial virus pada pemulihan
MAb 1129, (RSV)
148 kDa
19 Tysabri natalizumab Humainzed 2004 Biogen IDEC IV Infusion MS kambuh 300 mg / 15 mL 17,0 mg MonobasicNa
IgG4k larutan phos H
diBasicNaPhos 7H
untuk 15 mL
20 Verluma Nofetumomab murine Fab 1996 Boehringer injeksi IV agen pencitraan 10 mg / mL larutan Buffer fosfat saline
untuk kanker paru-
Ingelheim dan paru
DuPont Merck
21 Xolair omalizumab manusiawi Genentech w SC Asma, menghambat 202,5 mg / vial, 2,8 mg
Memberikan 150
(Lyo) IgG1k, Novartis pengikatan IgE ke mg / LHistidineHCl H
149 kDa dan Tanox reseptor IgE 1,2 mL pada mg LHistidine
FCeRI Pemulihan
dengan 1,4 mL
SWFI
22 Zenapax daclizumab manusiawi 1997 roche infus IV profilaksis 25 mg / 5 mL MAb 3,6 mg / mL MonobasicNa
IgG1, organ akut Larutan phos H
144 kDa penolakan di DibasicNaPhos 7H
pasien
menerima ginjal
transplantasi.
Menghambat IL-2
mengikat ke
Tac subunit
IL-2 reseptor
kompleks
23 Zevalin Ibritumomab- murine IgG1k- IDEC infus IV CD20 antigen. 3,2 mg / 2 mL
Tiuxetan tiourea (Kit dengan Larutan
kovalen Ytterium-90
linkage untuk menginduksi
Tiuxetan kerusakan sel oleh
emisi beta)
DOI 10,1002 / jps
 ANTIBODI FORMULASI 5

Pengembangan obat-obatan antibodi komersial,

bagaimanapun, tidak lurus ke depan. Hal ini karena
perilaku antibodi tampaknya bervariasi, meskipun
mereka memiliki struktur serupa. Dalam usaha untuk
mengatasi beberapa tantangan dalam mengembangkan
5
terapi antibodi, Harris et al. Ulasan formulasi skala
komersial dan karakterisasi antibodi rekombinan terapi.
Dalam review yang berbeda, produksi antibodi dan
2
pemurnian telah dibahas. Namun demikian,
ketidakstabilan keseluruhan dan stabilisasi calon obat
antibodi belum diperiksa dengan teliti di litera-
mendatang. Artikel ini, tidak dimaksudkan untuk
menjadi lengkap, bermaksud untuk meninjau struktur
dan fungsi antibodi, mendiskusikan ketidakstabilan
mereka, dan jumlah-Marize metode untuk
menstabilkan / merumuskan antibodi.

ANTIBODI STRUKTUR

Antibodi (imunoglobulin) kira-kira molekul berbentuk

Y atau kombinasi dari molekul tersebut (Gbr. 1).
struktur mereka dibagi menjadi dua wilayah-variabel
(V) wilayah (atas Y) mendefinisikan sifat antigen-
mengikat dan konstanta (C) wilayah (batang Y),
berinteraksi dengan sel-sel efektor dan molekul.
Imunoglobulin dapat dibagi menjadi lima kelas yang
berbeda IgA, IgD, IgE, IgM, dan IgG berdasarkan
wilayah C mereka, masing-masing design-yang ditunjuk
sebagai, d, e, m, dan g (lima kelas berat-rantai
6
utama). Kebanyakan IgG adalah monomer, tetapi IgA
Gambar 1. Linear (panel atas) dan sterik (panel bawah)
dan IgM adalah masing-masing, dimmer dan pentamers
struktur imunoglobulin (IgG).
dihubungkan oleh J rantai. IgG adalah yang paling
melimpah, banyak digunakan untuk tujuan terapeutik,
dan struktur mereka akan dibahas sebagai contoh menjadi beberapa subclass-IgG1, IgG2, IgG3, dan IgG4
antibodi secara rinci. (dalam urutan kelimpahan relatif dalam plasma
manusia), dengan rantai yang berbeda berat, bernama
g1, g2, g3, dan g4, masing-masing. Perbedaan struktural
antara subtipe ini adalah jumlah dan lokasi merantaikan
Struktur utama ikatan disulfida dan panjang wilayah engsel. Rantai
6
cahaya terdiri dari dua jenis-lambda (l) dan kappa (k).
Struktur IgG telah secara menyeluruh Ulasan. Fitur Pada tikus, rata-rata k rasio l adalah 20: 1, sedangkan itu
dari struktur primer antibodi meliputi rantai berat dan 6
ringan, glikosilasi, ikatan disulfida, dan heterogenitas. adalah 2: 1 pada manusia. Variabel (V) wilayah kedua
rantai mencakup sekitar 110 asam amino pertama,
membentuk (Fab) daerah antigen-mengikat, sedangkan
Chains berat dan ringan
urutan yang tersisa adalah konstan (C) daerah,
IgG mengandung dua identik berat (H, 50 kDa) dan dua membentuk Fc (fragmen dikristalisasi) daerah untuk
6
cahaya identik (L, 25 kDa) rantai (Gbr. 1). Oleh karena pengakuan efektor dan mengikat . Urutan N-terminal
itu, berat molekul total approxi--kira 150 kDa. Ada dari kedua rantai berat dan ringan sangat bervariasi
beberapa ikatan disulfida yang menghubungkan dua antara antibodi yang berbeda. Disarankan bahwa urutan
rantai berat, menghubungkan rantai berat dan ringan, dilestarikan di antibodi IgG1 manusia
dan berada di dalam rantai (juga lihat bagian
berikutnya). IgG selanjutnya dibagi

DOI 10,1002 / jps JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
6 WANG ET AL.
sekitar 95% dan sisanya 5% adalah variabel dan
5
menciptakan mereka spesifisitas antigen-binding.
Daerah V dibagi lagi menjadi tiga urutan
hypervariable (HV1, HV2, dan HV3) pada kedua H dan
rantai L. Dalam rantai ringan, ini kira-kira dari residu
6 atau baris sel myeloma dan mungkin berbeda dalam
28-35, 49-59, dan 92-103, masing-masing. daerah lain
adalah kerangka kerja daerah (FR1, FR2, FR3, dan
FR4). Daerah HV juga disebut saling melengkapi
menentukan daerah (CDR1, CDR2, dan CDR3).
Sementara daerah kerangka membentuk b-lembar,
urutan HV membentuk tiga loop di tepi luar b barel
(juga lihat Bagian 2.2).
Obligasi disulfida
Kebanyakan IgG memiliki empat merantaikan disulfida
bonds- dua menghubungkan dua rantai H di daerah
sendi dan dua lainnya yang menghubungkan dua rantai
6
L untuk rantai H. Pengecualian memang ada. Dua
ikatan disulfida ditemukan di IgG1 dan IgG4
menghubungkan dua rantai berat di daerah sendi tapi
7 dan umumnya lebih sensitif terhadap sebagian besar
empat di IgG2. Dalam IgG1 MAb, HC terkait dengan
LC antara Cys kelima (C217) dari HC dan C213 di LC.
Dalam IgG2 dan IgG4 MAbs, itu adalah Cys ketiga HC
7 untuk C1q, komponen pertama dari kaskade
(C123) yang menghubungkan ke LC. Sebuah ikatan
disulfida antara HC C128 dan C214 LC ditemukan
untuk mouse katalitik monoklonal anti-badan (IgG2a).
8 glikosilasi dapat mempengaruhi konformasi antibodi.
IgG memiliki empat ikatan disulfida intrachain,
bertempat tinggal di setiap domain dari H dan L rantai,
menstabilkan domain ini. Obligasi intrachain disul-fide
di VH dan VL diperlukan dalam antigen fungsional
9 memainkan peran penting dalam mengurangi
mengikat. Asli IgG MAbs tidak memiliki kelompok
7 antigenicity protein.
sulfhidril bebas. Namun, pemeriksaan rinci dari
kelompok sulfhidril bebas di MAbs rekombinan (satu
IgG1, dua IgG2, dan satu IgG4) menunjukkan adanya
sebagian kecil dari kelompok sulfhidril bebas (sekitar
0,02 mol per mol IgG2 atau IgG4 MAb dan 0,03 untuk
7
IgG1. Dalam kasus yang jarang terjadi, sebuah sistein
bebas ditemukan. Sebuah nondisulfide-terikat Cys pada
residu 105 ditemukan pada rantai berat dari antibodi
10
monoklonal tikus, OKT3 (IgG2a).
oligosakarida
Ada satu rantai oligosakarida di IgG. rantai gula
6 monoklonal (MAbs) karena perbedaan glikosilasi pat-
biantennary N-linked ini berada sebagian besar
pada dilestarikan Asn 297, yang dimakamkan antara
5,11
CH2 domain. Sebagai contoh,
oligosakarida berada pada Asn-297 CH2 domain dari
IgG1 chimeric dan molekul IgG3
12
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
tapi di Asn 299 di antibodi monoklonal, OKT3
10
(IgG2a). oligosakarida, sering microheter-ogeneous,
biasanya fucosylated di antibodi diproduksi di CHO
5
2,11
baris sel lainnya. Ada banyak
faktor yang menentukan sifat microheterogenity glycan
pada IgG. Ini termasuk garis sel, kondisi bioreaktor dan
sifat pengolahan hilir. Tambahan oligo-sakarida dapat
ditemukan dalam kasus yang jarang. Sebuah IgG
manusia yang dihasilkan oleh manusia-manusia-tikus
hetero-hibridoma berisi oligosakarida tambahan pada
13
Asn 75 di wilayah variabel rantai berat. Selain itu,
karbohidrat O-linked juga bisa ada di antibodi ini.
glikosilasi tepat sangat penting untuk fungsi yang
11
benar antibodi. Hal ini menunjukkan bahwa
penghapusan oligosakarida di IgG (IgG1 dan IgG3)
membuat mereka tidak efektif dalam mengikat C1q,
dalam mengikat ke FcgRI manusia dan mengaktifkan C;
protease dari yang sesuai tipe liar mereka IgG (satu
12
pengecualian). Hal ini karena situs mengikat IgG
11
komplemen, terlokalisir di CH2 domain. Selanjutnya,
12
Oligosakarida di daerah lain juga dapat memainkan
peran penting. Penghapusan oligosakarida di wilayah Fv
dari antibodi CBGA1 mengakibatkan penurunan
aktivitas antigen-mengikat dalam beberapa sistem
13
ELISA. Selain itu, oligosakarida ini mungkin
14
Komposisi gula oligosakarida yang juga penting
dalam fungsi antibodi. Telah terbukti bahwa fucose
rendah (FUC) konten di kompleks-jenis oligosakarida
dalam IgG1 chimeric manusiawi bertanggung jawab
untuk 50 kali lipat lebih tinggi antibodi-dependent
sitotoksisitas seluler (ADCC) dibandingkan dengan
15
rekan FUC tinggi.
keheterogenan
antibodi dimurnikan yang heterogen di struc-
mendatang. Hal ini berlaku untuk semua antibodi
dara-laut, ketidakstabilan selama produksi, dan
5
pengolahan terminal. Misalnya, lima isoform
dikenakan ditemukan di rekombinan manusiawi
monoclo-nal antibodi HER2 seperti yang ditemukan
oleh kapiler iso-listrik fokus (CIEF) dan natrium dodesil
16
sulfat-kapiler gel elektroforesis (SDS- CGE). Enam
band terpisah difokuskan di bawah
DOI 10,1002 / jps

IEF selama dua antibodi monoklonal tikus IgG2a (k)
17
dan IgG1 (k). Sebuah antibodi monoklonal yang
matang, OKT3 (IgG2a), berisi disiklisasi N-terminus
(asam pyroglutamic, 17 D) di kedua H dan L rantai,
diproses C-terminus (tidak ada Lys, 128 D) dari rantai
10
H, dan sejumlah kecil bentuk deamidated. Pengamatan
serupa juga dilaporkan untuk IgG1 huma-nized
18
(k). Dalam kasus yang jarang terjadi, gen cross-over
dapat menyebabkan pembentukan rantai berat yang
abnormal. Misalnya, dimurnikan monoklonal anti-IgE
antibodi mengandung sejumlah kecil dari rantai varian
H, yang memiliki 16 residu asam amino lebih sedikit
dari rantai H normal (posisi antara Arg108 dari rantai L
19
dan Ala124 dari rantai H).
Struktur sekunder dan Tingkat Tinggi
Fitur struktural dasar menengah dan tinggi-urutan IgG
6
telah ditinjau. Hanya sebagian kecil dari struktur tiga
20
dimensi IgG telah dipecahkan. Struktur sekunder
antibodi terbentuk sebagai rantai polipeptida
membentuk anti-paralel b-lembar. Jenis utama dari
struktur sekunder di IgG adalah ini b-lembar dan isinya
21
kira-kira 70% yang diukur dengan FTIR. Rantai
cahaya terdiri dari dua dan rantai berat berisi empat
6,20
domain, setiap asam amino sekitar 110 panjang.
Semua domain tersebut memiliki
mirip dilipat struktur-b barel, juga disebut
immunoglobulin kali lipat, yang distabilkan oleh ikatan
disulfida dan interaksi hidrofobik (pri-mary). Ini domain
individu (12 kDa dalam ukuran) berinteraksi satu sama
lain (VH dan VL; CH1 dan CL; dan antara dua CH3
domain kecuali yang mengandung karbohidrat CH2
domain) dan lipat menjadi tiga bentuk bulat sama besar
dihubungkan oleh sebuah daerah engsel fleksibel.
Ketiga bidang membentuk bentuk Y (kebanyakan) dan /
22
atau bentuk T.
Kurang bentuk globular dari IgG dipertahankan baik
oleh ikatan disulfida dan dengan ikatan non kovalen
yang kuat antara dua rantai berat dan antara masing-
23
masing pasangan berat-rantai / light-chain. Melalui
ikatan non kovalen, domain kurang stabil menjadi lebih
stabil, dan dengan demikian, seluruh molekul dapat
24
distabilkan. Sebuah studi rinci menunjukkan bahwa
interaksi antara dua domain CH3 didominasi oleh enam
residu kontak, lima dari residu ini (T366, L368, F405,
Y407, dan K409) membentuk patch di tengah
25
antarmuka. Ini ikatan non kovalen secara spasial
berorientasi meliputi variabel pertukaran domain
(switching VH dan VL; dalam keluar IgG; ioIgG)
26
menginduksi multimerization noncovalent.
DOI 10,1002 / jps
8 WANG ET AL.
ANTIBODI FORMULASI 7
Enam daerah hypervariable di CDR (L1, L2, L3, H1,
H2, dan H3) bentuk loop dari beberapa konformasi
main-chain yang diprediksi (atau bentuk kanonik),
kecuali H3 lingkaran, yang memiliki terlalu banyak
27,28
variasi konformasi untuk diprediksi akurat. Ada
sedikit perbedaan dalam komposisi lingkaran dan
20
bentuk antara dua jenis rantai ringan. Namun, tidak
ada perbedaan fungsional ditemukan pada antibodi
6
memiliki l atau rantai k.
Fungsi dasar Antibodi
6
Fungsi dasar antibodi telah ditinjau. Ada dua bidang
fungsional di IgG-V dan daerah C. Daerah V dari dua
rantai berat dan ringan menawarkan dua situs antigen-
binding identik. Pengikatan dua situs (bivalen) bisa
independen satu sama lain dan tampaknya tidak
29
tergantung pada daerah C. Yang tepat situs antigen-
binding adalah daerah CDR dengan partisipasi dari
30
daerah frame work. Mengikat antigen tampaknya
31,32
melalui mekanisme induksi-fit. diinduksi-fit
mekanisme memungkinkan multispecificity dan
polyreactivity. Ia telah mengemukakan bahwa sekitar 5-
10 residu biasanya memberikan kontribusi signifikan
terhadap energi ikat.
32
antibodi C daerah memiliki tiga fungsi efektor utama
(1) yang diakui oleh reseptor pada sel efektor imun,
memulai antibodi-dependent cytotoxicities sel (ADCC),
(2) yang mengikat untuk, membantu merekrut yang
diaktifkan fagosit, dan (3 ) diangkut ke berbagai
6
tempat, seperti air mata dan susu. Selain itu, C domain
23,29,33
juga memodulasi dalam stabilitas vivo. Itu
fungsi Fc dipengaruhi oleh struktur Fab. Variabel
pertukaran domain (switching VH dan VL; dalam keluar
IgG; ioIgG) dipengaruhi func- Fc terkait
tions seperti serum paruh dan mengikat protein G dan
26
FcgRI.
Daerah sendi memberikan fleksibilitas dalam
mengikat dan aktivasi fungsi efektor Fc antigen
26
bivalen. Dua antibodi IgG3 chimeric kurang engsel
genetik tetapi dengan residu Cys di daerah CH2
ditemukan kekurangan perakitan antar-molekul mereka,
dan kedua IgG3 DH þ Cys dan IgG3 DH þ 2Cys
kehilangan sangat kemampuan mereka untuk mengikat
FcgRI dan gagal untuk mengikat C1q dan mengaktifkan
kaskade komplemen.
34
Bentuk alternatif Antibodi
Selain antibodi spesifik spesies, bentuk antibodi lainnya
dihasilkan untuk memenuhi berbagai kebutuhan. Pada
awal perkembangan terapi antibodi, antibodi terbuat dari
murine
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
sumber. Namun, antibodi ini mudah menimbulkan
pembentukan antibodi anti-tikus manusia (HAMA).
Oleh karena itu, manusiawi chimeric Antibo-dies yang
dihasilkan. Chimeric monoklonal anti-badan (60-70%
manusia) yang dibuat mouse daerah variabel dan daerah
2 lyophilized. Keadaan glikosilasi dari antibodi dapat
konstan manusia. antibodi tersebut masih dapat
menginduksi pembentukan antibodi anti-chimeric
manusia (HACA). antibodi yang sangat manusiawi,
antibodi CDR-dicangkokkan, yang dibuat dengan
mengganti hanya CDR manusia dengan daerah CDR
2 41
tikus (90-95% manusia). Antibodi ini hampir sama
potensi immunogeni-kota sebagai antibodi benar-benar
manusia, yang mungkin terlarang pembentukan antibodi
anti-manusia manusia (HAHA).
bentuk-bentuk alternatif lain dari antibodi juga telah
dihasilkan dan bentuk-bentuk yang berbeda telah
35
ditinjau. Pengobatan dengan papain akan membelah
sisi N-terminal dari ikatan disulfida dan menghasilkan
0
dua fragmen Fab identik dan satu fragmen Fc. fab s 50
kDa (VH þ CH1) / (VL þ CL) Heterodimers dihubungkan
oleh ikatan disul-fide tunggal. Pengobatan dengan
pepsin memotong sisi C-terminal dari ikatan disulfida
0 dan
dan pro-duces F (ab) 2pecahan. Rantai H tersisa
6
dipotong menjadi beberapa fragmen kecil. Pembelahan
36
oleh papain terjadi di sisi C-terminal-Nya-H228 atau
37 0 708C,
Nya-H227. Pengurangan F (ab )2 akan menghasilkan
0 23
dua Fab .
Fv fragmen yang heterodimers noncovalent dari V H
dan VL. Stabilisasi fragmen oleh peptida linker fleksibel
hidrofilik menghasilkan rantai tunggal Fv
2
(scFvs). Fragmen tanpa domain konstan juga dapat
dibuat menjadi antibodi domain (oleskan). scFvs ini 25-
30 kDa variabel domain (VH þ VL) Dimer bergabung
dengan linker polipeptida minimal 12 residu. linker
pendek (5-10 residu) tidak mengizinkan pasangan dari
domain variabel tetapi memungkinkan hubungan
dengan scFv lain membentuk dimer bivalen (diabody)
38
(sekitar 60 kDa, atau trimer: triabody sekitar 90 kDa).
Dua diabodies dapat lebih dihubungkan bersama untuk
menghasilkan perlu bispesific tandem diabody
39
(tandab). molekul scFv disulfida bebas yang rela-
tively stabil dan berguna untuk intraseluler applica-tions
38
antibodi - '' intrabodies. '' Terkecil dari fragmen
antibodi adalah unit pengakuan minimal (MRU) yang
2
dapat diturunkan dari urutan peptida dari CDR tunggal.
ANTIBODI KETIDAKSTABILAN
Antibodi, seperti protein lainnya, rentan terhadap
berbagai path- fisik dan degradasi kimia
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
cara, meskipun antibodi, rata-rata, tampaknya lebih
stabil daripada protein lain. ketidakstabilan antibodi
dapat diamati di negara-negara cair, beku, dan
40
secara signifikan mempengaruhi tingkat degradasi.
Dalam banyak kasus, beberapa degradasi jalan-cara
dapat terjadi pada saat yang sama dan mekanisme
degradasi dapat berubah tergantung pada kondisi
stres. jalur degradasi ini dibagi menjadi ketidakstabilan
dua utama kategori-fisik dan kimia. Bagian ini akan
mengeksplorasi jalur degradasi kemungkinan antibodi
dan faktor-faktor yang mempengaruhi mereka.
Ketidakstabilan fisik
Antibodi dapat menunjukkan ketidakstabilan fisik
melalui dua utama jalur-denaturasi dan agregasi.
Denaturasi
Antibodi dapat mengubah sifat di bawah berbagai
kondisi. Kondisi ini termasuk perubahan suhu, geser,
berbagai langkah-langkah pengolahan.
Dibandingkan dengan protein lain, antibodi tampaknya
lebih tahan terhadap stres termal. Mereka mungkin
tidak meleleh sepenuhnya sampai suhu dinaikkan di atas
21,42,43
sementara sebagian besar mesofilik lainnya
44
protein tampaknya mencair di bawah 708C. Geser
dapat menyebabkan denaturasi antibodi. Misalnya,
aktivitas antigen mengikat fragmen antibodi scFv
rekombinan berkurang dengan laju yang konstan orde
pertama dari 0,83 / jam dalam larutan penyangga di
45
geser sekitar 20.000 / s.
Lyophilization dapat mengubah sifat protein untuk
luasan var-ious. Antibodi anti-idiotypic (MMA
383) dalam formulasi yang mengandung manitol,
kantung-charose, NaCl, dan fosfat ditemukan longgar
di vivo sifat imunogenik (hanya 10-20% dari tingkat
46
respons normal) pada liofilisasi. Sejak protein
menunjukkan tidak ada bukti degrada-tion setelah
liofilisasi, tidak ada perubahan dalam struktur sekunder
dengan CD (29% b-sheet, 14% a-helix, dan 57% ''
lainnya ''), hilangnya aktivitas disebabkan perubahan
konformasi. Memang, triptofan
sifat fluoresensi berbeda antara antibodi terliofilisasi
46
dan unlyophilized.
Pengumpulan
agregasi antibodi adalah manifes-tasi yang lebih umum
dari ketidakstabilan fisik. Agregasi antibodi yang
tergantung konsentrasi dianggap sebagai tantangan
terbesar untuk mengembangkan formulasi protein pada
47
konsentrasi yang lebih tinggi. Ini adalah
DOI 10,1002 / jps
karena agregat protein umumnya telah mengurangi
aktivitas dan lebih penting lagi, potensi imunogenisitas
yang lebih besar karena multi-plicity epitop dan / atau
14,48
perubahan konformasi. agregat Immunoglobulin
49
telah terbukti menyebabkan gagal ginjal yang serius
dan reaksi anafilaktoid seperti sakit kepala, demam, dan
50
menggigil. Oleh karena itu, tingkat agregat dalam
immunoglobulin intravena pro-saluran komersial
terbatas kurang dari 5% berdasarkan standar WHO.
Agregat dapat membentuk dengan mudah baik di
negara-negara cair dan padat di bawah berbagai kondisi
(Tab. 2). Karena agregasi protein sering konsekuensi
dari interaksi protein-protein, proses influ-enced oleh
laju difusi dan kendala geometris dari situs interaksi,
faktor-faktor seperti akan influ-ence secara signifikan
tingkat agregasi, termasuk perubahan konsentrasi
51
protein, viskositas, kekuatan ion, pH, dan suhu. con-
ditions lainnya juga dapat mempengaruhi agregasi
protein, termasuk gemetar, penyimpanan jangka
panjang, freeze-thaw proses, proses lyophilization, dll
Meningkatkan konsentrasi antibodi sering
meningkatkan kecenderungan agregasi protein. Hal ini
menunjukkan bahwa peningkatan konsentrasi IgG1 (di
10 asam sitrat mM, 100 mM NaCl pH 5,5) dari 2,7 mg /
mL untuk 50 mg / mL hampir linear meningkat Unit
52
Nephelometric (NU) 2-40. Sejak EP mendefinisikan
solusi yang jelas sebagai memiliki sama atau kurang
dari tiga NU, paling solusi antibodi dalam penelitian ini
adalah opalescent kecuali yang pada 5 mg / mL atau
kurang. Namun, seperti berat berat molekul rata-rata
ditemukan 0,9-1,3 kali diharapkan dari monomer
(sekitar 149 kDa), asosiasi protein-protein minimal (dan
52
mudah reversibel) disarankan. Gemetar dapat
mempercepat presipitasi antibodi dan bentuk endapan
mungkin tergantung pada volume sampel dalam sebuah
53
wadah. Tampaknya solusi protein menunjukkan
tegangan permukaan yang lebih rendah lebih suscep-
53
tible untuk denaturasi protein dan curah hujan.
pengobatan suhu rendah dapat menyebabkan aggre-
gation antibodi. The reversibel agregasi rendah tempera-
mendatang-induced (di bawah 378C) dari cryoglobulins
54
serum terkenal. IgM persiapan cryo-globulin manusia
mudah memicu atau gel pada suhu di bawah 10-128C
dan proses reversibel pada suhu yang lebih tinggi.
20
Dalam penelitian terbaru, agregasi dari IgG1 pada suhu
rendah di atas 18 mg / mL adalah reversibel yang diukur
52
dengan hamburan cahaya. Agregasi rendah suhu yang
diinduksi-of cryoglobulins kurang dipahami dan diduga
melibatkan situs dalam kedua Fab
JURNAL
20
dan Fc. Para penulis artikel ini percaya bahwa suhu
rendah mengurangi hidrofobik interaksi yang-tion, yang
merupakan kekuatan utama dalam protein folding.
Tanpa interaksi hidrofobik cukup pada suhu rendah,
daerah hidrofobik antibodi menjadi lebih terkena pelarut
dan menyebabkan peningkatan interaksi hidrofobik
antarmolekul, yang menyebabkan agregasi.
Sehubungan dekat dengan efek suhu rendah, proses
freeze-thaw sering menginduksi protein aggre-gation.
Namun, agregasi antibodi freeze-thaw-induced
tampaknya tidak menjadi masalah besar, sebagian
karena reversibilitas antibodi aggre-gerbang.
Membekukan-thawing dari (L6) solusi chimeric
antibodi pada pH 7,2 untuk sebanyak 35 kali
menyebabkan pembentukan dimer (tidak agregat yang
41
lebih besar). jumlah maksimum dimer (sekitar 20%)
diamati pada pH 6,5 dan minimum di bawah 5,5 atau di
atas 8,5 (kurang dari 2%). Agregasi beku-mencair-
diinduksi tampaknya reversibel setelah memperlakukan-
41
ment di 378C selama beberapa jam. Membekukan-
thawing dari rhuMAb anti-CD20 tiga kali (pembekuan
baik 20 atau 708C, pencairan ke 58C) tidak
menyebabkan perubahan signifikan dalam agregasi,
tidak ada kerugian yang signifikan dari monomer
55
dengan RP-HPLC atau SEC-HPLC. Di sisi lain,
Beatles terisolasi tampaknya lebih rentan terhadap
freeze-thaw-diinduksi agregasi relatif terhadap antibodi
56
full-length. Sebagai contoh, Lee menemukan bahwa
beku-thawing dari SCFv (MW 27.000 d) di 1.45 mg /
mL natrium fosfat buffered saline (PBS) pada pH 7,3
menjatuhkan konten% monomer (karena agregasi) dari
95% menjadi 84%, 59%, 44%, dan 37%, masing-masing
setelah 1-4 siklus.
Liofilisasi dapat menyebabkan antibodi aggrega-tion
ke tingkat variabel. Hal ini menunjukkan bahwa
lyophilization dari manusiawi mono-klonal antibodi
rekombinan (rhuMAb HER2), dengan tidak adanya
gula, menyebabkan sedikit peningkatan dalam agregat
57
(kurang dari 1,2%). Liofilisasi disebabkan agregasi
terdeteksi dari antibodi monoklonal manusia dalam PBS
58
atau garam fisiologis yang diukur dengan OD600, dan
agregasi mouse antibodi monoklonal (MN12) [IgG2a
(k)] dalam ketiadaan atau kehadiran dari 5% sukrosa,
dextran, atau hidroksipropil-beta-siklodekstrin (HP-b-
59
CD), yang diukur dengan pemeriksaan visual. Dalam
sebuah studi yang berbeda, lyophi-lization dari konjugat
antibodi-vinca monoklonal di PBS pada pH 7,4 yang
60
disebabkan 6,2% agregasi. Agregat liofilisasi-
diinduksi bisa non-
monomer kovalen terkait dan / atau bahkan disulfida-
61,62
linked.
agregasi antibodi dapat dengan mudah terjadi selama
penyimpanan dalam keadaan cair. Menyimpan dari anti-
IL8 antibodi monoklonal manusia sepenuhnya (ABX-
IL8; IgG2)
 Tabel 2. Ketidakstabilan dari Antibodi

Ketidakstabilan Antibodi Perumusan Kondisi

Denaturasi scFv 3 mg / mL di 10 mM Gemetar di mean
phosphate-buffered saline gradien kecepatan
mengandung 0,02% sodium azida Sekitar
20.000 / s
Pengumpulan tikus chimeric / 2 mg / mL dalam PBS pada pH 7,2 Aduk selama 48 jam
IgG1 manusia dengan Teflon bar
pada 600 RPM
Manusia Anti-IL-8 55 mg / mL, 5 mM Nya, pH 6 Freeze / mencair tiga
(IgG2) Waktu
(Kamar / 708C)
Anti-IL-8 (IgG2) 100 mg / mL, 200 mM Sukrosa, inkubasi pada
15 mM Arg, 15 mM Nya, pH 6 408C selama 6 bulan
rhuMAbE25 10 mg / mL dalam eksipien bebas spray drying
larutan Timah ¼ 1058C,
DOI 10,1002 / jps

Mengintip ¼ 50-
558C
MAb (ketik tidak ditentukan) MAb pada 40 mg / mL, 85 mM sukrosa, Liofilisasi
5 mM Nya pada pH 6, 0,01% Tween
20
Manusia Anti-IL-8 (IgG2) 50 mg / mL, 20 mM Gly, 4 mM Nya, Inkubasi
0,2% manitol, 16 mM Glu, bentuk terliofilisasi
0,03% Tween 20 pH 5,7 di 378C untuk
1 bulan
RhuMAb HER2 50 mg / mL dalam 100 mM trehalosa, Inkubasi
5 mM Nya pada pH 6,0 lyophilized
formulir di 408C
selama 23 bulan
deamidasi OKT3 (IgG2a) 1 mg / mL, PBS pada pH 7,0 þ Tween80 inkubasi pada
378C selama 2 bulan
0,5 mg / mL dalam 10 mM sitrat pada pH
LA298 (IgG1) 7 inkubasi pada
258C selama 6
minggu

isomerisasi MAb Diliofilisasi pada 40 mg / mL, 85 mM Inkubasi pada 58C

sukrosa, 5 mM Nya, 0,01% Tween
20, pH 6,0, mengandung 8,4%
embun
Oksidasi rhuMAb HER2 5 mg / mL, 147 mM NaCl, 0,01% 5, 30, dan 408C
polisorbat 20, 5 mM natrium untuk 2 minggu
asetat pada pH 5.0
10 WANG ET AL.

Antibodi, seperti protein lainnya, dapat dengan mudah

menyerap ke berbagai permukaan. Permukaan adsorpsi
dapat
dalam larutan air di 2-88C atau 258C menyebabkan
pembentukan tinggi berat molekul (HMW) spe-
21
ketidaksesuaian. Inkubasi dua antibodi monoklonal
tikus IgG2a (k) dan IgG1 (k) di 378C selama 32 hari
menyebabkan curah hujan di pH 3 dan 4 solusi untuk
17
kedua antibodi. Agregasi juga bisa terjadi ke konjugat
antibodi. Menyimpan monoklonal anti-body-tapak dara
alkaloid konjugat (murine IgG2a) dalam solusi
phosphate-buffered saline pada 58C antara pH 4,5 dan
7,4 untuk 1,5 bulan disebabkan curah hujan tanpa solusi
pH dan secara agregat
63
gation dipercepat pada 308C sepanjang rentang pH.
agregasi antibodi merupakan fenomena umum
selama penyimpanan dalam keadaan terliofilisasi.
Agregasi (OD350> 0,2) diamati dari Concentra-tion
tinggi, liofilisasi, antibodi monoklonal (ketik tidak
1
ditentukan) oleh SEC dalam kondisi dipercepat. Begitu
pula antibodi monoklonal chimeric lyophilized selama
64
penyimpanan di 58C (0,4% setelah 2 bulan). Dengan
tidak adanya gula, tingkat agregasi rhuMAb HER2
meningkat dari sekitar 1% untuk >10% setelah 3 bulan
di 408C dan tingkat agregasi
untuk formulasi ini adalah sekitar 0,2% per bulan pada
57
408C.
agregasi antibodi dapat mudah terjadi dalam bentuk
5
padat lainnya selama penyimpanan. Ditemukan bahwa
degradasi utama pada penyimpanan semprot-kering
anti-IgE (protein: manitol ¼ 80:20) adalah aggrega-tion,
dan jumlah agregat meningkat dengan meningkatnya
65
suhu dan kelembaban relatif (Maa et al., 1998a).
Sebanyak 52% agregat diamati oleh SEC-HPLC dari
semprot-kering anti-IgE (protein: manitol ¼ 80:20)
setelah 1 tahun pada 408C dan 38% RH (Maa et al.,
66
1998b).
agregasi antibodi biasanya dipercepat pada perlakuan
termal. Dalam studi chimeric (manusia / mouse)
antibodi monoklonal (BR96), Alexander dan Hughes
menunjukkan bahwa ther-mal perawatan di 608C untuk
67
166 h dihasilkan agregat noncovalently terkait. Dalam
mengeva-tion dari stabilitas relatif dari IgG2a murine
(k), IgG1 chimeric (k), trioma IgG1 (l), dan IgG1
murine (k), Hartmann et al. menunjukkan bahwa IgG2a
(k) dikumpulkan dan diendapkan setelah panas-ing di
558C selama 8 jam dan waktu paruh untuk hilangnya
monomer bagi mereka empat IgG adalah 1, 18.1, 3.4,
dan 8.2 jam dengan spesies agregat yang berbeda
68
(dimer, trimer ...) oleh SEC-HPLC.

permukaan adsorpsi
 ANTIBODI FORMULASI 11
secara signifikan mengurangi konsentrasi antibodi
dalam larutan. Misalnya, IgG1 tikus monoklonal telah
terbukti teradsorpsi pada permukaan botol kaca shake,
menyebabkan hilangnya protein dalam media kultur
69
tanaman. seperti kerugian diminimalkan dengan
melapisi pembuluh kaca atau dengan penambahan
Pluronic F127.
Ketidakstabilan kimia
Berbagai jalur degradasi kimia telah diamati. Ini urai
kimia mungkin atau mungkin tidak aktivitas protein
longgar tergantung pada situs perubahan. Untuk contoh,
deamidasi dari antibodi monoklonal, OKT3 (IgG2a)
yang diukur dengan perubahan pola IEF tidak
berkorelasi dengan hilangnya mengikat potensi antigen
(90% deamidasi dari Asn386 vs aktivitas 80% dalam uji
10
potensi). Sebagai perbandingan, aktivitas ringan rantai
de-amidated rekombinan manusiawi antibodi
monoklonal HER2 (rhuMAb HER2, Herceptin, tra-
stuzuMAb) di Asn30 (untuk aspartat) hanya 70% dari
spesies utama dan bahwa diisomerisasi (rantai berat)
37
asp102 yang spesies hanya 9-21% dari spesies utama.
Jalur degradasi kimia utama dalam antibodi termasuk
12 WANG ET AL.
dengan SDS-PAGE setelah penyimpanan formulasi
1 dengan SDS-PAGE.
terliofilisasi di 508C selama 6 bulan. Seperti disulfida-
linked dimer kovalen dan trimer juga diamati selama
penyimpanan semprot-kering anti-IgE manusiawi
71
antibodi monoklonal.
Nonreducible Cross-Linking
Nonreducible silang diamati dalam beberapa penelitian.
Inkubasi dari mono-klonal antibodi manusia (C23)
dalam larutan pada pH dasar di 378C selama 14 hari
mengakibatkan pembentukan band non-direduksi atas
72
rantai ringan pada pH 4 dan 10. Inkubasi dua antibodi-
IgG2a tikus monoklonal (k) dan IgG1 (k), antara pH 3,0
dan 10 di 378C selama 32 hari menyebabkan
pembentukan nonreducible 88 spesies kDa oleh SDS-
17
HALAMAN. Sebuah spesies dengan berat molekul
yang sama diamati setelah inkubasi antibodi
monoklonal lain, OKT3 (IgG2a), di 378C selama 2
10,73
bulan. Pemeriksaan lebih lanjut menunjukkan bahwa
spesies ini adalah produk silang dari H dan L rantai
antara L46-52 dan H99-121 daerah. Meskipun sifat
kimia yang tepat tidak ditentukan, langkah oksidatif
tampaknya
terlibat sebagai penghambatan oksidasi menunda
10,73
pembentukan spesies ini.
Sebuah penelitian baru menunjukkan bahwa
nonreducible obligasi tioeter dapat dibentuk antara
C223 dari rantai berat dan residu C-terminal Cys dari
cross-linking, deamidasi, isomerisasi, oksidasi, dan frag-
pemikiran.
Disulfida Pembentukan / Exchange
Disulfida pembentukan ikatan / tukar adalah mungkin
yang paling umum jalur silang, yang mengarah ke
agregasi kimia. Ini degradasi jalan-jalan dapat terjadi
dengan mudah dalam berbagai langkah-langkah
pengolahan. Misalnya, lyophilization dari mono-klonal
antibodi murine (IgG2a) tanpa aditif mengurangi jumlah
rata-rata kelompok SH per molekul 6,65-6,28,
70
menunjukkan disulfida forma-tion. Karena ion tiolat
sering spesies memulai untuk degradasi kimia ini,
meningkatkan pH formulasi biasanya menyebabkan
peningkatan pembentukan pembentukan disulfida. Ini
0
adalah kasus untuk antifebrin T2G1s Fab (IgG1 (k)),
mengandung gugus SH bebas, di mana percen-tage dari
dimer meningkat dengan meningkatnya pH 5,8-9,5.
61
Penyimpanan sering menyebabkan disulfida berbasis
aggrega-tion. Penyimpanan dari anti-body eksipien
bebas liofilisasi (IgG1, yang mengandung 12 intra dan 4
disulfida merantaikan) formulasi selama 1 tahun di
308C menghasilkan pembentukan dimer direduksi dan
62
trimer. Demikian pula, agregat tereduksi dari antibodi
monoklonal (ketik tidak ditentukan) yang terdeteksi
rantai cahaya dalam antibodi IgG1 manusiawi. produk
cross-linked ini memiliki berat molekul 75 kDa oleh MS
tetapi menunjukkan berat molekul jelas dari 92 kDa
74
Nonreducible produk cross-linked juga diamati
dalam bentuk sediaan solid. Inkubasi antibodi liofilisasi
tikus monoklonal [IgG2a (k)] tanpa lyoprotectant atau di
hadapan 5% sukrosa, dextran, atau hidroksipropil-beta-
cyclodex-trin (HP-b-CD) di 568C selama 18 hari
menyebabkan forma- tion dari 100-kDa band di bawah
59
kondisi dikurangi dengan SDS-PAGE.
deamidasi
deamidasi antibodi telah banyak dilaporkan dalam
literatur. jalur degradasi protein umum ini begitu umum
bahwa persiapan antibodi yang dimurnikan mungkin
berisi banyak bentuk deami-tanggal. Sebagai contoh,
beberapa bentuk deamidated rekombinan manusiawi
antibodi monoklonal HER2 (rhuMAb HER2, Herceptin,
tras-tuzuMAb) ditemukan oleh kation-exchange chro-
matography, termasuk (1) deamidated Asn30 (untuk
aspartat) pada satu rantai ringan, (2) deamidated

Asn30 (untuk aspartat) pada dua rantai ringan, dan (3)
deamidated Asn55 pada rantai berat (untuk iso-
37
aspartat). Satu-satunya konversi Asn30 ke aspartat
(tidak isoaspartate) menunjukkan bahwa mekanisme
deamidasi dalam kultur sel mungkin berbeda dari yang
selama penyimpanan.
Penyimpanan dapat dengan mudah menghasilkan
sejumlah besar produk deamidated. Inkubasi antibodi
monoklonal, OKT3 (IgG2a) dalam larutan PBS pada pH
7 yang mengandung Tween 80 pada 378C selama 2
bulan menyebabkan lebih dari 90% deamidasi di Asn
10
H386. Dengan memantau generasi amonia, Poborji et
41
al. Diperkirakan bahwa 4% dari jumlah total Asn dan
Gln residu dalam antibodi chimeric (L6) itu deamidated
setelah menyimpan solusi pada pH 7,2 pada 508C
selama 3 minggu.
Deamidasi juga terjadi pada keadaan padat. Dalam
evaluasi stabilitas penyimpanan model recombi-nant
manusiawi antibodi monoklonal (rhuMAb HER2),
Cleland et al. melaporkan bahwa inkubasi formulasi
kelembaban tinggi (8,4% kelembaban) selama 12 bulan
di 408C menghasilkan penurunan 19% di puncak utama
dengan IEX karena deamidasi.
57
Deamidasi protein berjalan sebagian besar melalui
menengah dari suksinimida di Asn (lebih mudah) dan
75,76
Gln (lihat ulasan ) .Ini tampaknya
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
dari isomerisasi langsung dari Asp tetapi juga, sebagian
besar, dari hidrolisis succinimide menengah.
Pembentukan pH tergantung dari succinimide antar-
menengahi dapat terjadi baik dari Asn deamidasi atau
36
Asp dehidrasi. Dalam kondisi netral dan basa, isoAsp
dan Asp produk terbentuk dalam suatu peptida berada di
rasio sekitar 3: 1.
79
Isomerisasi juga lazim dan sulit untuk mengontrol.
Sekali lagi, banyak protein dimurnikan con-tain
sejumlah besar produk diisomerisasi, baik dari
deamidasi atau isomerisasi langsung. Sebuah contoh
khas adalah rekombinan manusiawi antibodi
monoklonal HER2 (rhuMAb HER2, Her-ceptin,
37
trastuzumab). Selain itu, karena isomer-isasi terjadi
pada Asp H102 di daerah CDR, aktivitas spesies
37
diisomerisasi hanya 9-21% dari spesies utama.
Demikian pula, isomerisasi Asp L32 pada satu rantai
ringan di rekombinan monoklonal anti-IgE antibodi
0
(E25) mengurangi aktivitas mengikat relatif F (ab) 2
untuk 42% dan aktivitas bentuk diisomerisasi pada
36
kedua rantai (iso-Asp-iso-Asp) ke 15%.
Sejak pembentukan suksinimida intermedi-makan
tidak perlu partisipasi air, itu mudah dapat terjadi dalam
keadaan padat. Asp isomerisasi adalah salah satu jalur
degradasi utama untuk liofilisasi, antibodi monoklonal
(ketik tidak spesifik-fied), dan meningkat dengan
menjadi kasus untuk antibodi, meskipun mekanisme
alternatif dilaporkan, seperti deamidasi dari Asn30 pada
rantai cahaya rekombinan manusiawi antibodi
monoklonal HER2 (rhuMAb HER2, Herceptin,
37
trastuzumab). Sebuah metode telah dikembangkan
77
untuk mendeteksi pembentukan suksinimida.
Tingkat deamidasi melalui succinimidation protein
dapat dipengaruhi oleh berbagai faktor, seperti pH,
44
urutan, dan efek sterik (lihat review ). Sebuah laporan
terbaru menunjukkan pH-tergantung pada pe-dency kuat
deamidasi di Asn55 (pH 7> pH 6 > pH 5 > pH 4) dalam
IgG1 manusia sepenuhnya pada kisaran pH 4-7 selama
78
penyimpanan di 258C. Menggunakan peptida kecil
79
sebagai model, Tyler-Cross dan Schirch menemukan
bahwa deamidasi residu Asn tergantung pada residu
asam amino pada sisi karboksil dari Asn dalam larutan
netral dan basa. Meningkatkan ukuran dan bercabang
dari asam amino menurunkan tingkat deamidasi
sebanyak 70 kali lipat dibandingkan dengan urutan N-G
(tingkat terbesar deamidasi) tetapi di bawah kondisi
asam, asam amino hilang efek perlindungan mereka.
isomerisasi
Isomerisasi paling umum di antibodi adalah
pembentukan asam iso-aspartat, yang menghasilkan
tidak hanya
DOI 10,1002 / jps
meningkatnya penyimpanan tem-peratures baik di atas
1
dan di bawah nilai-nilai Tg mereka.
Seperti deamidasi, tingkat relatif isomer-isasi dapat
dipengaruhi kuat oleh efek sterik. Misalnya, rekombinan
monoklonal anti-IgE antibodi (E25) berisi dua urutan
Asp-Gly dalam CDR, tetapi hanya satu situs ditemukan
labil untuk isomerisasi (Asp L32). The reaktifan dari
satu residu Asp disarankan untuk menjadi karena ikatan
36
hidrogen.
Oksidasi
Residu teroksidasi dalam protein termasuk Met, Tyr,
Trp, Nya, dan Cys. Meskipun oksidasi tidak lazim
seperti deamidasi dan isomerisasi di antibodi, dapat
dengan mudah terjadi selama penyimpanan antibodi.
Sebagai contoh, rute utama dari degradasi antibodi
monoklonal, OKT3 (IgG2a), dalam larutan selama
penyimpanan di 58C adalah oksidasi dari nondisulfide
10
Cys dan beberapa residu Met. Oksidasi juga diamati
pada rhu-MAb anti-CD20 dalam larutan selama
penyimpanan pada 408C selama 2 bulan.
55
Oksidasi CDP870, sebuah pegylated satu setengah
antibodi (satu lampu dan satu rantai berat) pada residu
Met (M3) juga diamati setelah inkubasi
 ANTIBODI FORMULASI 13
protein di 258C atau 408C selama 12 minggu (14%
80
pada pH 4,1 dan 4,2% pada pH 5,5). paparan cahaya
dapat mempercepat oksidasi dasar. Sebagai contoh,
paparan cahaya (20.000 lux selama 2 minggu di 278C)
rekombinan manusiawi antibodi monoklonal HER2,
rhuMAb HER2 menyebabkan peningkatan 5-10%
dalam oksidasi dalam berbagai formulasi cair pada Met
H255 (situs utama) dan Met H431 di tempera-
81
membangun struktur 30 dan 408C.
Pembentukan asam atau Basic Spesies
Antibodi dapat membentuk spesies asam atau basa,
yang sering dipantau dengan kromatografi IEF atau ion
exchange. Di antara semua kemungkinan, deamidasi
adalah yang paling mungkin degradasi jalan-jalan, yang
menyebabkan terbentuknya spesies asam. Ada-kedepan,
pembentukan spesies tersebut digunakan secara longgar
sebagai indikasi deamidasi tanpa adanya studi
konfirmasi lainnya. Sebenarnya, pembentukan spesies
tersebut hanya dapat dianggap sebagai indikasi
ketidakstabilan kimia (lihat di bawah). Sebuah pH-
ketergantungan hampir pasti untuk jenis degradasi.
Dalam stabilisasi CDP870, satu-setengah antibodi (satu
lampu dan satu rantai berat), yang terkait melalui Cys ke
bercabang (20 kDa masing-masing) PEG, Johnson et
80
al. menemukan bahwa protein yang dihasilkan spesies
DOI 10,1002 / jps
14 WANG ET AL.
Hal ini juga terjadi untuk rekombinan manusiawi
antibodi monoklonal HER2 (rhuMAb HER2, Herceptin,
37
trastuzumab) dan rekombinan monoklonal anti-IgE
36
antibodi (E25). Itu menyarankan bahwa belahan dada
adalah karena aksi carboxypeptidases dasar selama
37
produksi.
fragmentasi
Urutan paling mungkin menyebabkan Fragmenta-tion
83
dalam protein yang Asp-Gly dan Asp-Pro, meskipun
urutan lain juga dapat mengalami perpecahan, seperti
79
Asn-Ser. Fragmentasi dapat dengan mudah terjadi pada
antibodi bahkan selama proses produk-ion. Sejumlah
kecil fragmen (MW< LC) terdeteksi di bawah dikurangi
Condi-tion dalam MAb IgG4 pro-teknya di indung telur
7
hamster Cina (CHO) sel rekombinan dimurnikan.
Setengah molekul harus dipantau secara rutin untuk
84
IgG4s.
Berbagai kondisi pengolahan mungkin Accel-erate
fragmentasi antibodi, seperti asam atau
pengobatan dasar,
72
perlakuan termal,
41,67
freeze-
41 17,73,78
thaw, dan penyimpanan. Fragmen bisa hanya
termasuk massa dengan hilangnya rantai ringan (M-LC),
hilangnya lengan Fab (M-Fab), dan dipisahkan berat
rantai (HC) dan cahaya-chain (LC), serta spesies kurang
lebih asam (sampai 17% pada pH 4,1 dan 41% pada pH
5,5) oleh IEF sebagai pH larutan meningkat dari 4,1,
4,5, 5,0, 5,5 selama penyimpanan di 258C untuk
12 minggu.
80
Mekanisme lain yang mungkin untuk menghasilkan
spesies asam dalam antibodi adalah Maillard reac-tion,
di mana mengurangi gula dapat bereaksi dengan residu
lisin. reation seperti itu akan mengakibatkan hilangnya
muatan positif dan pembentukan spesies tampaknya
lebih asam. Ini adalah kasus untuk anti-IgE antibodi
monoklonal manusiawi semprot-kering dengan laktosa
71
selama penyimpanan.
Pembentukan spesies dasar juga diamati pada
antibodi. pembentukannya dapat hasil dari beberapa
kemungkinan, kemungkinan besar sebagai hasil dari
pembentukan suksinimida, penghapusan asam sialic,
dan pembentukan pyroGlu. Seperti spesies dasar diamati
setelah inkubasi antibodi monoklonal manusia (C23)
di 378C selama 14 hari dalam larutan pada pH asam
72
oleh IEF.
Kliping C-Terminal
Terminal perpecahan dapat dengan mudah terjadi
selama produksi normal antibodi. Sebagai contoh,
sebagian besar protein chimeric dimurnikan rCD4-IgG
82
tidak memiliki rantai berat C-terminal Lys.
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
dari umum subunit antibodi, yang dihasilkan dari kedua
67
peptida dan / atau ikatan disulfida clea-vage. Antibodi
85
juga tunduk pada perpecahan akibat radiasi.
Maillard Reaksi
Protein dapat membentuk adduct dengan gula. Dalam
sebuah studi investigasi, MAbs tikus ditemukan untuk
membentuk adduct glukosa setelah inkubasi dengan 0,5
M glukosa pada pH 7,4 selama 14-21 hari di 378C dan
antibodi terglikasi secara signifikan meningkatkan
86
disosiasi kompleks antigen-antibodi yang mengikat.
ANTIBODI FORMULASI
Seperti disebutkan di atas, antibodi, seperti pro-teins
lainnya, dapat menghasilkan berbagai urai selama
produksi, pengolahan, dan penyimpanan baik di negara-
negara cair dan padat. kecenderungan mereka untuk
menghasilkan urai seperti sangat tergantung pada urutan
individu, pI, hidrofobisitas, dan konten karbohidrat
23
mereka. Antibodi produk degrada-tion mungkin
memiliki aktivitas berkurang dan yang lebih penting,
14,87
meningkat imunogenisitas. Sebuah respon
kekebalan yang kuat (pembentukan antibodi)

dapat menyebabkan netralisasi parah dari produk obat
protein dan bahkan protein endogen.
Tujuan utama dari merumuskan antibodi sebagai
agen terapeutik adalah untuk mengontrol laju degradasi
antibodi untuk memberikan kehidupan rak diterima
untuk pengiriman dan penyimpanan di seluruh dunia.
Hal ini dapat dilakukan dengan memilih eksipien
formulasi yang tepat dan kondisi formulasi lainnya.
Perlu ditekankan bahwa salah satu eksipien formulasi
menstabilkan antibodi spe-cific mungkin tidak cocok
untuk yang lain karena perbedaan dalam urutan mereka.
Komposisi formulasi yang tepat tidak hanya maksimal
melestarikan aktivitas antibodi tetapi juga
meminimalkan respon imun potensial, sebagai eksipien
bisa mengubah respon imun dengan mengubah
14
presentasi protein (seperti jarak epitop). Bagian berikut
akan membahas faktor-faktor penting dalam
merumuskan kedua produk antibodi cair dan
lyophilized. formulasi canggih juga akan dijelaskan
secara singkat.
Formulasi cair
bentuk sediaan cair biasanya lebih disukai untuk produk
lyophilized karena lebih mudah untuk mengelola dan
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
47
formulasi protein. Di sisi lain, peningkatan mod-erate
konsentrasi protein mungkin tidak memiliki dampak
yang signifikan. Bahkan, meningkatkan konsentrasi
0 protein (baik sendiri tidak memiliki pengaruh yang
antifebrin T2G1s Fab (IgG1 (k)), 0,05-5,0 mg / mL
dalam larutan menghasilkan
penurunan pembentukan dimer selama penyimpanan
61
(73,2% ke 22,9% setelah 13 minggu di 228C).
Cara yang efektif untuk mengurangi viskositas solusi
antibodi adalah dengan menambahkan jumlah yang
5,88
cukup NaCl. Penyesuaian pH formulasi berpotensi
88
mengurangi viskositas larutan antibodi. Meskipun
tidak sangat efektif, histidin telah terbukti mengurangi
viskositas larutan antibodi manusia sepenuhnya anti-IL8
monoklonal (ABX-IL8; IgG2) dari 20 sampai sekitar 9
centistokes bila konsentrasinya meningkat dari 0 hingga
21
60 mM. Namun, penggunaan eksipien tersebut dalam
mengurangi viskositas dapat dibatasi, sebagai eksipien
dapat mempengaruhi stabilitas antibodi, seperti MAb
anti-CD20.
55
Masalah lain yang potensial dalam merumuskan
produk antibodi-konsentrasi tinggi adalah batas
kelarutannya, sebagai kehadiran protein undissolved
umumnya tidak dapat diterima untuk injeksi intravena.
Untungnya, kelarutan antibodi tampaknya relatif tinggi
dan kelarutan terbatas rumus-tion kesulitan jarang
dilaporkan untuk pengetahuan kita. Untuk
lebih murah untuk memproduksi. Di antara semua
produk antibodi komersial, sekitar setengah cukup stabil
untuk dirumuskan dalam bentuk cair (Tab. 1).
Merumuskan produk cair yang sukses perlu
pertimbangan setidaknya aspek-aspek berikut.
protein Konsentrasi
Karena nilai-nilai EC50 antibodi sering 10-1,000 kali
lebih tinggi dibandingkan protein lain seperti hormon
35
dan sitokin, jumlah yang relatif besar antibodi perlu
dosis untuk mencapai efek terapi. Dosis besar
mensyaratkan bahwa produk antibodi perlu
dirumuskan / disusun kembali pada konsentrasi tinggi
untuk mengurangi volume yang dosis, terutama untuk
suntikan subcuta-neous; sebaliknya, volume besar
persiapan antibodi telah harus diinfus. Karena proses
agregasi biasanya tergantung konsentrasi, antibodi pada
konsentrasi tinggi memiliki minimal dua potensi
masalah: kecenderungan tinggi untuk agregat selama
penyimpanan dan viskositas mungkin tinggi,
menyebabkan lebih banyak kesulitan selama injeksi
47
(waktu injeksi berkorelasi dengan viskositas). Ia telah
mengemukakan bahwa agregasi protein tergantung
konsentrasi adalah tantangan terbesar untuk
mengembangkan konsentrasi tinggi
DOI 10,1002 / jps
meningkatkan kelarutan Antibo-dies, eksipien seperti
surfaktan dapat digunakan. Dalam laporan terbaru,
89
Golovanov menemukan bahwa kombinasi L-Arg dan
L-Glu pada konsentrasi molar yang sama (50 mM)
secara signifikan meningkatkan kelarutan beberapa
signifikan). Selain itu, stabilitas penyimpanan suhu
kamar (fragmentasi) protein secara signifikan
ditingkatkan dipantau oleh SDS-PAGE.
Satu keuntungan potensial merumuskan produk
protein pada konsentrasi yang lebih tinggi adalah lebih
besar stabilitas beku-mencair. Seringkali, protein pada
konsentrasi tinggi lebih tahan terhadap freeze-thaw-
diinduksi agregasi, sebagai denaturasi protein
antarmuka yang diinduksi dapat dengan mudah
mencapai titik jenuh. Namun, tampaknya tidak menjadi
kasus untuk antibodi. Meningkatkan Concentra-tion dari
antibodi chimeric (L6) tidak menghambat freeze-thaw-
41
diinduksi agregasi. Selain itu, surfaktan seperti
Pluronic F68 dan Tween 80 tidak lumayan mencegah
agregasi antibodi. Dalam sebuah studi yang berbeda,
Tween 80 saja (atau F68 Pluoronic) di 0,1% gagal untuk
menawarkan perlindungan terhadap agregasi beku-
mencair-diinduksi dari rantai tunggal antigen-binding
protein CC49 / 218 sFv (MW 27.000 d) di 1.45 mg /
RNL sodium PBS di
 ANTIBODI FORMULASI 15
56
pH 7,3. Hasil ini menunjukkan bahwa agregasi
antibodi beku-mencair-induced mungkin bukan
fenomena permukaan.
Pengaruh Formulasi pH
pengembangan formulasi sering dimulai dengan
menghalangi-mination dari pH formulasi stabil. Seperti
protein lain, efek pH pada stabilitas anti-badan
55 41
tergantung pada komposisi formulasi, kondisi stres,
84
dan bahkan antibodi Concentra-tion. Formulasi pH
dapat mempengaruhi stabilitas fisik antibodi karena
mengubah jumlah dan distribusi biaya pada permukaan
protein. Sebagai contoh, pH rendah (di bawah 3)
menyebabkan hilangnya struktur tersier di rhuMAb anti-
55
CD20. PH rendah (pH 3 dan 4) juga bertanggung
jawab untuk pengendapan dua antibodi monoklonal
tikus IgG2a (k) dan IgG1 (k) selama inkubasi pada
17
378C selama 32 hari. Kerentanan terhadap stres pH
68
bervariasi antara molekul IgG yang berbeda.
Mengenai stabilitas kimia, pH formulasi mungkin
memainkan peran penting dalam mengendalikan banyak
jalur degradasi, seperti disulfida pembentukan ikatan /
exchange, deamidasi, fragmentasi, isomerisasi, dll
Karena efek variabel pada jalur degradasi yang berbeda,
optimum nilai pH bervariasi tergantung pada kedua
DOI 10,1002 / jps
16 WANG ET AL.
125 mM NaCl lebih lambat pada pH 5,5 daripada pada
pH 4,1
80
(4,2% vs 14% setelah 12 minggu di 408C).
Karena keberadaan simultan dari beberapa jalur
degradasi antibodi, pH formulasi harus disesuaikan
untuk menyeimbangkan semua degradasi potensial.
Umumnya, kondisi asam lemah tampaknya menjadi
optimal untuk sebagian besar antibodi (lihat Tab. 1).
Pengaruh Buffering Agen
Telah lama diakui bahwa kedua jenis dan konsentrasi
zat penyangga dapat mempengaruhi stabilitas protein
44
(lihat ). Misalnya, dapar fosfat dipercepat deamidasi
dari IgG1 relatif terhadap penyangga sitrat pada kedua
78
pH 6,5 dan 7,0 selama penyimpanan di 258C. Oleh
karena itu, pilihan yang tepat dari agen penyangga
berpotensi dapat mencapai kedua kontrol pH dan
stabilisasi antibodi. Dalam kasus yang jarang terjadi,
agen penyangga yang baik untuk satu antibodi dapat
membahayakan lain. Salah satu agen ini adalah histidin,
yang memiliki pKa pH 6 dan berpotensi baik dalam
mengendalikan kondisi asam lemah. Telah terbukti
memberikan perlindungan yang lebih baik terhadap
curah hujan untuk manusia sepenuhnya anti-IL8
antibodi monoklonal (ABX-IL8; IgG2) pada ther-mal
urutan antibodi dan metode analisis yang digunakan
dalam memantau stabilitas. Dengan IEF, Lam et al.
menemukan bahwa rhuMAb anti-CD20 adalah yang
paling stabil pada pH 5 dalam kisaran pH 3-6 terlepas
dari konsentrasi protein dalam formulasi yang
mengandung 10 mM sitrat, 8% trehalosa, dan Tween 20
55
0,05%. Dengan SEC-HPLC, Usami et al. menemukan
bahwa pH 6 adalah kondisi paling stabil selama
inkubasi dari antibodi monoklonal manusia (C23) pada
378C selama 14 hari dalam larutan yang mengandung
72
natrium klorida isotonik antara pH 4 dan 10. Kadang-
kadang, nilai-nilai pH optimum berada di luar kisaran
tertentu. Dalam studi stabilitas antibodi chimeric (L6),
jumlah minimum pembentukan dimmer diamati pada
pH di bawah 5.5 atau di atas 8,5 (kurang dari 2%)
41
selama beku-mencair.
Perlu disebutkan bahwa oksidasi dapat dihambat
dengan menyesuaikan pH formulasi. Dalam formulasi
yang mengandung 40 mg / mL MAb anti-CD20, 150
mM trehalosa, 0,9% benzil alkohol, 0,02% Tween 20,
dan 50 mM histidin, mengurangi pH 7,5-5 hampir
dihilangkan oksidasi selama penyimpanan pada 408C
55
selama 2 bulan . Dalam sebuah studi yang berbeda,
oksidasi (M3) dari PEG-CDP870, satu-setengah
antibodi, dalam formulasi yang mengandung 160 mg /
mL CDP870, 10 mM natrium asetat, dan
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
21
inkubasi baik di 50 dan 408C dari sitrat pada pH 6.
Penambahan sejumlah kecil histidin (0,4 mM) juga
meningkatkan beku-mencair (4) pemulihan dari rantai
tunggal antigen-binding protein CC49 / 218 sFv (MW
27.000 d) di 1.45 mg / RNL dalam larutan PBS pada pH
56
7,3 dari 37% menjadi 90%. Sebaliknya, histidin
ditemukan tidak hanya untuk meningkatkan tingkat
agregasi rhuMAb anti-CD20 selama penyimpanan tetapi
juga untuk menginduksi warna dari solusi dibandingkan
dengan solusi antibodi asetat-buffered pada pH 5.
55
Selain itu, oksidasi Fc juga lebih cepat dalam larutan
histidin.
Efek konsentrasi zat penyangga ditunjukkan dalam
studi di mana beku-mencair-diinduksi agregasi dari
antibodi chimeric (L6) lebih tinggi dengan
meningkatnya konsentrasi buffer fosfat (0,01 vs 0,05).
41
Oleh karena itu, baik jenis dan konsentrasi agen
penyangga perlu diperiksa.
Pengaruh Formulasi eksipien
Penggunaan eksipien formulasi tetap menjadi
pendekatan utama dan nyaman dalam menstabilkan
antibodi dalam solusi. Hal ini jadi setidaknya dalam
47
mengurangi agregasi antibodi. Berbagai eksipien
formulasi telah terbukti menstabilkan antibodi dalam
kondisi pengolahan yang berbeda dan selama sto-

41 41 41,84
mengamuk, termasuk gula, poliol, asam amino,
84 45,84
surfaktan, dan polimer.
eksipien formulasi efektif umumnya dalam
melindungi stabilitas fisik antibodi. Di antara eksipien
ini, gula yang paling sering digunakan. Berbagai gula,
seperti sukrosa, trehalosa, glukosa, telah terbukti
mengurangi agregasi freeze / thaw-diinduksi rhuMAb
55 41
anti-CD20, antibodi chimeric (L6), manusia antibodi
21
monoklonal anti-IL8 (ABX-IL8; IgG2), dan satu-
rantai antigen-binding pro-Tein CC49 / 218 sFv (27
56
kDa). eksipien lain bisa sama-sama atau bahkan lebih
efektif dalam melindungi antibodi. Histidin terbukti
sama-sama efektif sebagai sukrosa dalam mengurangi
beku-mencair diinduksi agregasi dari anti-IL8 mono-
klonal antibodi manusia (ABX-IL8; IgG2) dan
kombinasi dengan Arg menghasilkan perlindungan yang
lebih baik daripada sukrosa dalam stabilitas larutan pada
21
inkubasi yang berbeda suhu. Gula tidak selalu efektif.
Dalam evaluasi stabilitas beku-mencair dari rantai
tunggal antigen-binding protein CC49 / 218 sFv (MW
27 kDa) di 1.45 mg / mL natrium fosfat buffered saline
(PBS) pada pH 7,3, addi-tion dari 10 mM trehalosa,
laktosa, glukosa, atau manitol tidak menawarkan
56
perlindungan apapun. Dalam kasus yang jarang
terjadi, sukrosa telah ditunjukkan untuk
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
efektif dalam mengurangi gemetar / pengadukan-
91
diinduksi agregasi tetapi mungkin memiliki efek
92
negatif selama penyimpanan jangka panjang. Salah
satu kekhawatiran yang jelas adalah bahwa senyawa
tersebut dapat mengandung tingkat residu peroksida,
yang telah terbukti menyebabkan oksidasi
93
protein. Oleh karena itu, penggunaan surfaktan harus
disimpan ke minimum dalam formulasi antibodi jika
memungkinkan. Misalnya, menghapus Tween 20 dalam
rekombinan manusiawi antibodi monoklonal HER2,
solusi rhuMAb HER2 mengurangi antibodi oxi-dized
81
dari 52% menjadi<10% pada 408C.
Pengaruh Sambil / Shearing
Kedua gemetar dan geser dapat mengubah sifat Antibo-
mati. Ditemukan bahwa gemetar produk berbasis
antibodi murine disebabkan curah hujan antibodi dan
bentuk endapan berbeda tergantung-ing pada volume
53
mengisi. Dalam evaluasi efek geser pada aktivitas
antigen-binding dari scFv fragmen antibodi recom-
45
binant dalam buffer solu-tion, Harrison et al.
menemukan bahwa aktivitas mengikat membusuk pada
konstan tingkat rata-rata 0,83 / jam pada geser sekitar
20.000 / s.
mempromosikan agregasi agitasi yang diinduksi
90
antibodi IgG1.
eksipien formulasi dapat menghambat degradasi
kimia antibodi. Mengganti 0,14 M NaCl dengan 8%
trehalosa atau 4% manitol dalam rhuMAb anti-CD20
meningkatkan stabilitas kimia yang diukur dengan IEX
selama penyimpanan di
55
408C. efek seperti
kemungkinan hasil dari stabilisasi konformasi antibodi.
Beberapa eksipien dapat melindungi antibodi terhadap
oksidasi. Mengganti NaCl dengan 4% manitol dan 1%
benzyl alcohol dilindungi rekombinan manusiawi
antibodi monoklonal HER2, rhuMAb HER2, terhadap
oksidasi (terutama Bertemu-255) pada 30 atau
81
408C. Efek ini mungkin karena fungsi dari manitol
sebagai pemulung radikal bebas. Beberapa antioksidan
yang umum digunakan, seperti tiosulfat dan metionin,
efektif dalam menghambat oksidasi antibodi. Tingkat
efektif minimum (rasio molar antibodi anti-oksidan)
yang diperlukan untuk menghambat oksidasi suhu yang
diinduksi rhuMAb HER2 adalah 1: 5 dan 1:25 untuk
81
metionin dan tiosulfat, masing-masing. Bagaimana-
pernah, penggunaan tiosulfat telah menyebabkan
81
pembentukan aduk tiosulfat dari rhuMAb HER2.
Keselamatan seperti aduk tio mengandung belum
dilaporkan.
Salah satu eksipien utama sering digunakan dalam
formulasi anti-tubuh surfaktan. Mereka biasanya
DOI 10,1002 / jps
Pengaruh Pengawet
Sebuah jumlah terbatas penelitian telah dilakukan pada
kompatibilitas pengawet dengan anti-tubuh.
Kompatibilitas tergantung baik pada anti-tubuh dan
pengawet. Dalam evaluasi efek dari beberapa bahan
pengawet, termasuk benzil alkohol, chlorobutanol,
Methylparaben, propil paraben, fenol, dan m-kresol,
pada stabilitas antibodi monoklonal manusiawi, Gupta
94
dan Kaisheva menemukan bahwa antibodi itu paling
stabil di hadapan Methylparaben propil paraben,
kompatibel dengan benzil alco-hol dan chlorobutanol
pada konsentrasi rendah, dan tidak kompatibel dengan
fenol dan m-kresol, yang diukur dengan berbagai tes,
termasuk SEC-HPLC, DSC, hamburan cahaya, UV, dan
uji potensi.
Pengaruh Peralatan Pengolahan
Isu penting lainnya dalam perumusan antibodi adalah
pilihan yang tepat peralatan pengolahan / kontainer.
Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa stabilitas
anti-tubuh dapat terpengaruh jika pilihan yang pantas
dibuat. Dalam studi stabilitas rekombinan manusiawi
antibodi monoklonal HER2, rhuMAb HER2, dalam
81
cairan formu-lations, Lam et al. menemukan bahwa
mengganti pengisi stainless steel dengan pengisi baja ANTIBODI FORMULASI 17
nonstainless
mengurangi antibodi teroksidasi (terutama bertemu-
255) dari 52% menjadi 18% setelah penyimpanan
selama 2 minggu di 408C. Disarankan bahwa ion Fe,
dibebaskan dari erosi dari stainless steel dengan ion
klorida pada rendah
pH, katalis oksidasi. Dalam kasus serupa, Chen et
21
al. menunjukkan bahwa manusia sepenuhnya anti-IL8
antibodi monoklonal (ABX-IL8) dalam formulasi aqu-
eous mengandung 60 mM Nya memiliki tingkat yang
lebih tinggi dari agregat setelah beku-mencair dalam
bejana stainless steel dan penyimpanan selanjutnya di
408C, mungkin karena efek Fe ion yang dihasilkan dari
mekanisme yang serupa. Sebagai tambahan,
95
protein telah terbukti memfasilitasi korosi logam.

Pengaruh Kontainer Produk

Pengaruh kontainer produk jelas ditunjukkan dalam
sebuah studi baru-baru ini. McCormick et
96
al. melaporkan bahwa Tween 80, dimaksudkan untuk
menggantikan albumin manusia di asli rumus-tion,
berinteraksi dengan sumbat karet dilapisi dalam sekali
pakai jarum suntik Eprex. Sumbat kehabisan sejumlah
kecil plasticizer dalam larutan obat, yang bertindak
sebagai adjuvant, dan menyebabkan respon IgG yang
kuat untuk rekombinan manusia erythro-poietin. Respon
imun secara signifikan diminimalkan kemudian dengan
beralih ke sumbat karet PTFE berlapis. Selain itu,
headspace oksigen dapat mempercepat oksidasi antibodi
dan repla-semen dengan gas inert bisa meminimalkan
73
reaksi seperti itu.

Studi Stabilitas dipercepat

Untuk mempercepat proses pengembangan formulasi,
studi stabilitas dipercepat biasanya con-menyalurkan.
Namun, perkiraan suhu kamar atau stabilitas 58C
berdasarkan studi stabilitas dipercepat untuk antibodi,
seperti protein lain, mungkin atau tidak mungkin atau
akurat. The unpredict-kemampuan ini disebabkan oleh
adanya jalur degradasi kompleks dan beberapa, yang
mungkin memiliki tingkat yang berbeda dari
10 10
ketergantungan suhu. Kroon et al. menemukan
bahwa dibandingkan dengan jalur degradasi lain dari
antibodi monoklonal, OKT3 (IgG2a), Asn deamidasi itu
preferen-tially dipercepat dengan meningkatnya suhu.
Oleh karena itu, hati-hati perlu diterapkan dalam antar-
preting seperti suhu tinggi yang disebabkan deamida-
41
tion. Di sisi lain, Poborji et al. menemukan bahwa
hilangnya antibodi chimeric monomer (L6) pada pH 7,2
yang diikuti perilaku Arrhenius pada kisaran suhu 30-
508C dan ekstrapolasi dari suhu tinggi Data SEC untuk
2-88C pada pH 7 dan

5.5 mengakibatkan perkiraan stabilitas sebanding

dengan data real-time tersedia.

lyophilized Formulasi
Persiapan formulasi protein liofilisasi telah ditinjau
secara luas.
97-101
Seperti kebanyakan protein, beberapa
antibodi tidak cukup dalam bentuk cair dan bentuk
sediaan terliofilisasi yang stabil harus dipertimbangkan.
Liofilisasi itu SUG-gested menjadi salah satu dari dua
pendekatan dalam memecahkan agregasi antibodi.
47
Bagian ini akan membahas beberapa isu penting dalam
merumuskan produk antibodi lyophilized.
Amorf Versus Crystalline Negara
Telah umumnya percaya bahwa protein lebih stabil
103
dalam keadaan amorf. Hal ini terutama karena
protein membutuhkan eksipien lain (s) untuk
menggantikan molekul air untuk dari H-obligasi yang
diperlukan sebagai molekul air dikeluarkan selama
pengeringan dan matriks kristal tidak memberikan
intim H-ikatan antara eksipien dan protein.
104.105
Tampaknya bahwa jika protein
sendiri dapat mengkristal selama proses liofilisasi
(mungkin sulit dibilang), protein bisa lebih stabil dan
mungkin tidak perlu sebanyak menstabilkan sebagai
agen di negara amorf. Dalam laporan terbaru, Shenoy et
106
al. dibandingkan stabilitas dua protein Model, glukosa
oksidase (GO) dan lipase, dan menunjukkan bahwa
formulasi kristal kering secara signifikan lebih stabil
daripada rekan-rekan amorf mereka sebagai dipantau
dengan kromatografi ukuran-eksklusi. Ini masih harus
dilihat apakah ini dapat berlaku untuk antibodi.
Pengaruh Formulasi eksipien
Untuk membuat produk antibodi lyophilized, setidaknya
satu eksipien formulasi, agen bulking, diperlukan untuk
menganugerahkan kue diterima. Jika antibodi tidak
stabil cukup dengan adanya bulking agent selama
liofilisasi atau penyimpanan, penstabil (s) disertakan.
Jumlah relatif eksipien formulasi (bulking dan
menstabilkan agen) harus dipilih secara hati-hati karena
agen ini dapat mempengaruhi perilaku masing-masing,
tonisitas, dan stabilitas produk terliofilisasi.
agen bulking umum digunakan termasuk manni-tol
dan glisin. Kristalisasi agen ini selama liofilisasi
membuat mereka indah agen massal-ing tapi agen
57
stabilisasi miskin. Meskipun manitol bisa
menstabilkan antibodi seperti dalam kasus
untuk konjugat antibodi-vinca monoklonal dalam
60
larutan PBS pada pH 7,4 pada liofilisasi, banyak studi
menunjukkan bahwa mannitol tidak bisa menstabilkan
efektif atau bahkan mendestabilkan Antibo-mati.
Contoh tersebut meliputi agregasi dari liofilisasi Model
rekombinan manusiawi mono-klonal antibodi (rhuMAb
3,57
HER2) di hadapan manitol selama penyimpanan.
Dalam liofilisasi dari antibodi monoklonal manusia
pada 1 mg / mL, itu menunjukkan bahwa penambahan
5% manitol tidak berpengaruh pada liofilisasi-diinduksi
aggre-gation di PBS atau garam fisiologis yang diukur
dengan OD600 dan penambahan 10% manitol
sebenarnya dipercepat agregasi selama proses
58
liofilisasi. Di sisi lain, bila digunakan dalam
kombinasi dengan sukrosa atau trehalosa, tingkat yang
sama stabilisasi dengan yang untuk gula saja dapat
dicapai seperti kasus untuk model recombi-nant
57
manusiawi antibodi monoklonal (rhuMAb HER2).
Disakarida / manitol formulasi juga deamidasi
menghambat antibodi ini selama penyimpanan untuk
tingkat yang lebih besar daripada formulasi
57
lyoprotectant saja.
Gula adalah agen stabilisasi yang paling umum
digunakan dalam formulasi terliofilisasi. Di antaranya,
dua gula nonreducing, sukrosa dan trehalosa, biasanya
pilihan pertama. Kedua gula dilindungi stabilitas
antibodi liofilisasi beberapa sama baiknya. Antibodi ini
termasuk liofilisasi recom-binant manusiawi antibodi
57
monoklonal, rhuMAb HER2, IgG1 (mengandung 12
62 107
intra dan 4 disulfida antar-rantai), anti-IgG, dan
64
chimeric antibodi monoklonal. Namun, sukrosa
tampaknya lebih efektif dalam melindungi IgG1
lyophilized terhadap agregasi selama penyimpanan pada
408C pada gula: rasio berat protein dari 1: 1 (Chang et
102
al 2005b.). Dalam studi lain, sukrosa 5% gagal untuk
menawarkan perlindungan apapun untuk mouse
liofilisasi mono-klonal antibodi (MN12) (IgG2a (k))
59
selama penyimpanan di 568C selama 18 hari. Sekali
lagi, seperti yang disebutkan di bagian formulasi cair,
bahkan stabilisator digunakan paling com-monly
mungkin tidak menstabilkan semua antibodi dalam
keadaan padat dan antibodi perlu diperlakukan sebagai
individu molekul yang berbeda.
Ketika gula digunakan sebagai menstabilkan agen
(lyoprotectants), jumlah yang cukup harus digunakan
untuk mencapai efek yang signifikan tergantung pada
konsentrasi protein. Ia telah mengemukakan bahwa
lyoprotectant molar: rasio protein dari 300: 1 atau lebih
47
besar harus digunakan. Memang, data literatur yang
tersedia menunjukkan rasio yang lebih tinggi dari 300
yang dibutuhkan untuk stabilisasi yang lebih baik. Hal
ini menunjukkan bahwa gula melindungi stabilitas
(agregasi dan Asp isomerisasi) dari liofilisasi,
monoklonal
antibodi (ketik tidak ditentukan) untuk tingkat
signifikan ketika gula rasio molar protein meningkat
menjadi 500: 1, yang terjadi pada jumlah theore-vertikal
1 dan selama penyimpanan pada 378C dengan cara yang
air situs mengikat di mol-cule. Demikian pula, Andya
62
et al. menunjukkan bahwa penggunaan sukrosa atau
trehalosa menghambat aggrega-tion dari antibodi
liofilisasi (IgG1 yang mengandung 12 intra dan 4
disulfida merantaikan) selama penyimpanan pada 308C
untuk tingkat maksimum ketika sukrosa / trehalosa:
rasio protein adalah 500 atau lebih tinggi, yang kira-kira
setara dengan jumlah situs pengikat air di permukaan
protein (550 diperkirakan). Meningkatkan trehalosa
rasio / anti-HER2 dari 60 mM (rasio 360 molar) ke 200
mM (rasio molar 1.200) secara signifikan meningkatkan
stabilitas (monomer oleh SEC-HPLC) formulasi lyophi-
107
lized pada 25 mg / mL pada 408C. Dalam laporan
terbaru, ditemukan bahwa setidaknya perbandingan
berat 2: 1 (rasio molar dari sekitar 800) diperlukan
untuk mencapai perlindungan yang maksimal dari
sukrosa liofilisasi: formulasi IgG1 terhadap kedua
aggrega-
tion dan kimia degradasi selama penyimpanan pada
101
408C (Chang et al. 2005a).
eksipien formulasi lain juga digunakan dan beberapa
ini efektif dalam menstabilkan antibodi tertentu. Sebuah
studi baru-baru ini menunjukkan bahwa penambahan
sorbitol untuk formulasi sukrosa atau trehalosa
mengakibatkan peningkatan lebih lanjut
stabilitas penyimpanan dari IgG1 antibodi liofilisasi
102
(Chang et al. 2005b). Entah dekstran atau HB-b-
CD (baik) dilindungi aktivitas mouse liofilisasi antibodi
monoklonal (MN12) (IgG2a (k)) selama
59
penyimpanan. Glukosa ini terbukti menghambat
gamma fragmentasi iradiasi-diinduksi antibodi
85
monoklonal manusiawi (hr3).
Pengaruh Formulasi '' pH '' dan Buffering Agen
PH formulasi cair dapat memiliki efek potensial pada
stabilitas formulasi liofilisasi, meskipun solid-state '' pH
'' tidak dapat didefinisikan dengan baik. Dalam evaluasi
stabilitas monoklonal konjugat antibodi-tapak dara
liofilisasi, agregasi tampaknya menjadi lebih rendah
pada pH netral 7,1 dari pada baik pH 8,5 atau 6,1 ketika
60
formulasi terliofilisasi disimpan pada 258C. Dalam
mengatur pH formulasi, penggunaan agen penyangga-
ing mungkin memiliki efek pada stabilitas antibodi baik
selama liofilisasi dan penyimpanan produk terliofilisasi.
Sebagai contoh, dalam studi stabilitas anti-IL8 mono-
klonal antibodi manusia sepenuhnya (ABX-IL8; IgG2),
21
Chen et al. menunjukkan bahwa penambahan histidin
menghambat pembentukan spesies HMW pada
liofilisasi
tergantung pada antibodi dan jalur degradasi sedang
57
dipantau. Umumnya, semakin meningkat-ing kadar air
ANTIBODI FORMULASI 19
tergantung konsentrasi. Di antara beberapa eksipien
termasuk Nya, Gly, manitol, Glu, dan polysor-bate 20,
Nya adalah yang paling penting dalam melindungi
stabilitas solid-state antibodi (meminimalkan aggre-
gation). Dalam sebuah studi yang berbeda, tingkat
agregasi dari liofilisasi anti-IgE pada 58C pada 5 mg /
mL dalam 10 penyangga mM dipengaruhi baik oleh pH
dan buffer dalam urutan sebagai berikut: Na fosfat, pH
7> K Fosfat, pH 7 > Na suksinat, pH 6 atau 5 >
107
Histidin, pH 7. Perlu dicatat bahwa beberapa agen
penyangga dapat menyebabkan perubahan pH yang
signifikan karena kristalisasi selektif selama liofilisasi,
seperti natrium fosfat. agen penyangga tersebut harus
dihindari dalam mempersiapkan formulasi antibodi pH-
sensitif.
Pengaruh Protein Konsentrasi
Dalam banyak kasus, meningkatkan protein Concentra-
tion meningkatkan stabilitas protein selama liofilisasi
98
(lihat review). Namun, antibodi tampaknya tidak
mengikuti tren ini dan banyak antibodi telah terbukti
menjadi kurang stabil baik selama liofilisasi dan
penyimpanan di concen-trations tinggi. Misalnya,
lyophilization dari antibodi monoklonal manusia yang
disebabkan signifikan aggrega-tion dari MAb
dirumuskan dalam PBS atau garam fisiologis yang
diukur dengan OD600 dan meningkatkan konsentrasi
protein 1-2,5 atau 5 mg / mL meningkatkan OD600
0,194-0,311 atau 0,427, masing-
58
masing. Kecenderungan serupa juga diamati selama
penyimpanan formulasi terliofilisasi. Semakin
meningkat-ing konsentrasi antibodi monoklonal
chimeric dari 2,5 mg / mL untuk 25 mg / mL dalam
formulasi terliofilisasi, mengandung 31 mg / mL
sukrosa, 15 mM NaCl, 0,02% Tween 80, 10 mM sitrat,
meningkatkan tingkat agregat dari 0,4% ke 0,6% setelah
64
2 bulan di 58C. Dalam evaluasi stabilitas model
rekombinan manusiawi antibodi monoklonal (rhuMAb
57
HER2), Cleland et al. diperagakan bahwa peningkatan
konsentrasi protein dari 25 mg / mL untuk 50 mg / mL
dalam formulasi terliofilisasi (mengandung 60 mM
treha-kalah, 5 mM Nya pada pH 6) meningkatkan
tingkat agregat dari 8,5% menjadi lebih dari 30% oleh
SEC-setelah penyimpanan pada 408C selama 44 bulan.
Perilaku tersebut juga diamati dari anti-HER2 5-21 mg /
107
mL yang mengandung 250 manitol.
Pengaruh Kadar Air
Pengaruh kelembaban pada stabilitas antibodi lyophi-
lized belum konsisten dan tampak
dari antibodi liofilisasi akan secara bertahap
meningkatkan tingkat degradasi selama penyimpanan.
efek negatif seperti kelembaban jelas ditunjukkan dalam
berbagai jalur degradasi, termasuk dimerisasi dari
0 canggih Formulasi
T2G1s Fab (IgG1 (k)) dalam berbagai kadar air 1,5-
61
12,3%, agregasi dari TNF-MAb antara 0,68% dan
108
8%, pembentukan spesies asam / dasar rhuMAb
57
HER2 antara 1% dan 8,4% dan fragmentasi dari
antibodi monoklonal tikus (MN12) dengan dan tanpa
59
pengeringan sekunder.
Dalam kasus lain, pengaruh kelembaban adalah baik
kompleks atau tidak signifikan. Misalnya, Breen et
1
al. menemukan bahwa formulasi kelembaban tinggi
(8%) dari antibodi monoklonal liofilisasi (ketik tidak
ditentukan) menunjukkan tingkat yang lebih tinggi dari
agregasi, fragmentasi, dan Asp isomerisasi selama sto-
marah selain yang mengandung 2% atau 5%
kelembaban tapi formulasi yang mengandung
kelembaban menengah tingkat (2-3%) kurang rentan
terhadap agregasi dari yang mengandung tingkat
kelembaban yang lebih rendah (1%) yang diukur dengan
SEC di bawah kondisi penyimpanan dipercepat.
Demikian pula, agregasi dari IgG1 lyophi-lized
ditemukan minimal pada tingkat kelembaban-
memediasi antar sekitar 3% pada suhu penyimpanan
yang berbeda. (Chang et al. 2005b).
102
Dalam sebuah
57
studi yang berbeda, Cleland et al. menemukan bahwa
menggunakan model rekombinan antibodi monoklonal
manusiawi (rhuMAb HER2), kelembaban sisa antara 1
dan 8,4% tidak berdampak pada tingkat agregasi selama
penyimpanan di 2-8 atau 408C selama 12 bulan.
Studi Stabilitas dipercepat
Seperti antibodi dalam keadaan cair, mereka dalam
keadaan padat mungkin atau mungkin tidak mengalami
degradasi yang merupakan ciri dari perilaku Arrhenius.
Hal ini Wegener-sekutu percaya bahwa studi stabilitas
harus dilakukan setidaknya di bawah suhu transisi gelas
64
formulasi. Duddu et al. menemukan bahwa dipercepat
stabilitas data yang dihasilkan di kaca negara (408C)
tampaknya menjadi prediktor yang lebih baik dari
stabilitas relatif dari formulasi dari data yang dihasilkan
pada suhu tinggi (608C). Dalam studi stabilitas dari
konsentrasi tinggi, liofilisasi, antibodi monoklonal
1 Antibodi melalui Mutagenesis stabil
(ketik tidak ditentukan), Breen et al. menunjukkan
bahwa jalur degradasi kimia dan fisika diikuti Arrhenius
kinetika selama penyimpanan di fase kaca. Hanya Asp
isomerisasi mengikuti model Arrhenius di atas nilai Tg.
Selain bentuk sediaan cair dan liofilisasi di pasar,
bentuk sediaan lain telah dicoba dan sukses terbatas
telah dilaporkan.
Formulasi semprot-kering
Spray drying adalah cara yang efisien mempersiapkan
bentuk sediaan padat karena penghapusan cepat dari
pelarut (s) dari solusi obat. Ini adalah alternatif yang
sangat menarik untuk liofilisasi dalam formulasi protein
padat prepar-ing. Sejauh ini, sejumlah penelitian telah
dilakukan untuk protein dan sebagian karena paparan
suhu tinggi dalam proses, meskipun sangat singkat,
keberhasilan yang terbatas telah dicapai. agregasi
protein selama pengeringan semprot tampaknya menjadi
besar
tantangan.65,66,109,110
Pengeringan semprot antibodi juga telah dicoba.
Adapun protein lain, proses-diinduksi agregasi protein
71.110
tampaknya menjadi masalah besar.
hati-hati memilih eksipien yang tepat bisa mini-mize
masalah ini. Dalam evaluasi formulasi semprot-kering
untuk rhuMAbE25, itu menunjukkan bahwa trehalosa
atau laktosa diminimalkan agregasi selama pengeringan
semprot (agregat turun dari 5-6% menjadi 1%). Untuk
trehalosa, rasio molar untuk penghambatan yang
signifikan dari aggrega-tion adalah pada atau di atas
71
300: 1 hingga 500: 1 (eksipien: protein). rasio tersebut
tampaknya sebanding dengan yang digunakan dalam
pembentukan terliofilisasi. Penambahan manitol juga
berkurang agregasi, tapi hanya sampai rasio molar 200:
1 dan peningkatan lebih lanjut dalam konten manitol
mengakibatkan kristalisasi, yang memiliki efek yang
71
merugikan pada stabilitas protein dan kinerja aerosol.
Dalam sebuah studi yang berbeda, baik trehalosa atau
sorbitol bisa menghambat agregasi IgG selama
110
pengeringan semprot.
fragmen antibodi, seperti scFv, adalah terapi antibodi
alternatif. Namun, karena stabilitas mereka tidak
sebagus antibodi full-length, mutagenesis, atau
modifikasi kimia telah mencoba untuk meningkatkan
stabilitas. Misalnya, R71A mutagenesis dalam rantai
berat dari scFv tidak stabil secara dramatis
meningkatkan stabilitas ketika diinkubasi dalam serum
manusia sementara memiliki hanya efek kecil pada
111
afinitas pengikatan molekul. Sebuah rantai berat lebih
stabil, dilakukan melalui mutasi, dapat meningkatkan
stabilitas
rantai ringan, dan dengan demikian memberi stabilitas
24
ke seluruh scFv.
Antibodi via Kimia Modifikasi stabil
Kinerja klinis dari antibodi dapat diinginkan diubah
dengan konjugasi antibodi kepada entitas lain.
112
Misalnya, McIntosh et al. menunjukkan bahwa
konjugasi karboksimetil dekstran untuk antibodi
monoklonal-tumor-specific antigen (A5B7)
meningkatkan pembersihan antibodi pada tikus tapi
konjugasi cisplatin (cis-dichlorodiammine platinum II)
dengan kompleks antibodi dibatasi jaringan distribusi
dan mengurangi izin sistemik yang .
pegylated Antibodi
Metode umum untuk meningkatkan paruh plasma
protein adalah untuk meningkatkan ukuran protein
dengan melampirkan bagian PEG. Saat ini, setidaknya
ada empat pegylated protein komersial pro-saluran di
pasar. Namun, plasma panjang paruh (setinggi 7-23
hari) dari antibodi yang dibuat jauh lebih menarik
pengembangan produk antibodi tersebut. Sejak lama
paruh adalah karena pengikatan Fc ke Fc-reseptor
(Fc reseptor neonatal, FcRn) di berbagai tis-
33,35 0
menggugat, fragmen antibodi, seperti Fab
kekurangan-
ing bagian Fc memiliki lebih pendek setengah-hidup
dan bisa menjadi kandidat yang baik untuk PEGylation.
0
seperti modifikasi dibuat pada manusiawi IgG Fab
fragmen melalui attachment situs-spesifik untuk residu
Cys tambahan direkayasa, sebagai mod-ification melalui
residu lisin menyebabkan kerugian besar dalam kegiatan
29
mengikat.
Sistem Rilis dikendalikan
sistem pelepasan terkontrol telah secara ekstensif
diselidiki untuk protein dalam dua Desember-ades masa
113.114
lalu. Namun, pekerjaan yang terbatas telah
dilakukan di daerah ini untuk antibodi, sebagian karena
plasma yang relatif lama mereka setengah-hidup com-
dikupas dengan protein lainnya. Untuk mencapai efek
jangka panjang, sistem dirilis dikendalikan terdiri dari
poli biodegradable asam (laktat-glikolat) (PLGA)
disiapkan untuk anti-kokain katalitik antibodi mono-
klonal dan rilis in vivo antibodi hingga 10 hari itu
115
ditunjukkan pada tikus setelah injeksi subkutan. Hal
ini diantisipasi bahwa sistem tersebut dapat berguna jika
durasi minimal 1 minggu dari rilis dicapai.
REFERENSI
ANTIBODI FORMULASI 21
RINGKASAN
Antibodi memiliki struktur tersier yang sama. Kehadiran
sejumlah besar ikatan disulfida dan interaksi domain-
domain intim dalam antibodi membuat mereka relatif
stabil dan lebih tahan terhadap moderat stres termal
com-dikupas ke protein lain. Namun demikian, antibodi
melakukan mengalami berbagai ketidakstabilan mirip
dengan kebanyakan protein. Ini ketidakstabilan fisik dan
kimia meliputi denaturasi, agregasi, adsorpsi
permukaan, deamidasi, oksidasi, iso-merization,
fragmentasi, dll Karena perbedaan sig-nifikan di urutan
utama antara antibodi yang berbeda, tingkat keparahan
relatif dari jalur degradasi ini dapat signifi -cantly yang
berbeda. Pada rata-rata, agregasi, deamidasi, dan
isomerisasi tampaknya lebih lazim di antibodi.
Sebagian karena perbedaan stabilitas, beberapa
produk antibodi yang dibuat menjadi bentuk cair
sementara yang lain liofilisasi (Tab. 1). Solusi pH
produk-produk komersial baik netral atau asam lemah,
menunjukkan bahwa seperti pH mungkin optimal untuk
sebagian besar antibodi. Surfac-tants telah digunakan di
sebagian besar produk-produk antibodi, mungkin untuk
menghambat antibodi aggrega-tion, dan kemungkinan
akan digunakan dalam kandidat obat antibodi lainnya.
Dua yang paling umum digunakan eksipien formulasi
dalam formulasi antibodi sukrosa dan NaCl. Untuk
formulasi cair, salah satu dapat digunakan jika mereka
menawarkan tingkat perlindungan yang sama stabilitas.
Untuk formulasi terliofilisasi, sukrosa lebih disukai
sebagai NaCl tidak membentuk intim H-obligasi dengan
antibodi dan juga mengurangi suhu transisi gelas untuk-
mulation, membuat liofilisasi kurang efisien. Semua
eksipien formulasi dan agen penyangga digunakan
dalam produk antibodi komersial atau dibahas dalam
artikel harus dievaluasi secara individual untuk setiap
calon obat antibodi melalui studi stabilitas sebelum
mereka dipilih sebagai bagian dari produk, seperti
antibodi yang structu-reli yang berbeda.
Data stabilitas tersedia dalam literatur dan informasi
tentang produk antibodi komersial menunjukkan bahwa
formulasi antibodi tampaknya menantang tetapi relatif
dikelola, dibandingkan dengan obat protein lainnya.
Tiga isu utama dalam perumusan antibodi rupanya
menantang dan membutuhkan perhatian yang signifikan
di tahun-tahun mendatang:
(1) pengembangan formulasi-konsentrasi tinggi yang
stabil, (2) pengelolaan viskositas tinggi konsentrasi
terkait dari formulasi ini dan (3) minimalisasi formulasi
antibodi yang diinduksi respon imun.
1. Breen ED, Curley JG, Overcashier DE, Hsu CC, Shire
SJ. 2001. Pengaruh kelembaban pada stabilitas
formulasi antibodi monoklonal manusiawi lyophilized.
Pharm Res 18: 1345-1353.
 2. Roque ACA, Lowe CR, Taipa MA. 2004. Antibodi dan
molekul terkait rekayasa genetika: Produksi dan
pemurnian. Biotechnol Prog 20: 639-654.
3. Pavlou AK, Belsey MJ. 2005. terapi antibodi pasar untuk
2008. Eur J Pharm Biopharm 59: 389-396.
4. Martsev SP, Tsybovsky YI, Stremovskiy OA, Odintsov
SG, Balandin TG, Arosio P, Kravchuk ZI, Deyev SM.
2004. Fusion dari domain VL antibodi antiferritin untuk
barnase hasil kelarutan enhanc-ed dan stabilitas pH
diubah. Protein Eng Des Sel 17: 85-93.
5. Harris RJ, Shire SJ, Musim Dingin C. formulasi 2004.
manufaktur skala komersial dan karakterisasi analitis
terapi rekombinan anti-tubuh. Obat Dev Res 61: 137-
154.
6. Janeway CA, Travers PA, Walport M, Shlomchik MJ.
2001. Immunobiology. New York: Garland Publishing.
7. Zhang W, Czupryn MJ. 2002. sulfhidril gratis di antibodi
monoklonal rekombinan. Biotechnol Prog 18: 509-513.
8. Ruzheinikov SN, Muranova TA, Sedelnikova SE,
Partridge LJ, Blackburn GM, Murray IA, Kaki-numa H,
Takahashi-Ando N, Shimazaki K, Sun J, Nishi Y, Beras
DW. struktur kristal 2003. resolusi tinggi dari Fab-
fragmen dari keluarga antibodi katalitik tikus dengan
aktivitas esterase. J Mol Biol 332: 423-435.
9. Glockshuber R, Schmidt T, Pluckthun A. 1992. ikatan
disulfida di antibodi domain variabel: Efek pada
stabilitas, lipat in vitro, dan ekspresi fungsional dalam
Escherichia coli. Biokimia 31: 1270-1279.
10. Kroon DJ, Baldwin-Ferro A, Lalan P. 1992. Identifikasi
situs degradasi dalam antibodi monoklonal Thera-peutic
oleh pemetaan peptida. Pharm Res 9: 1386-1393.
11. Wright A, Morrison SL. 1997. Pengaruh glycosyla-tion
12. pada fungsi antibodi: Implikasi untuk rekayasa genetika.
Tren Biotechnol 15: 26-32.
13. Tao MH, Morrison SL. 1989. Studi aglycosy-lated
chimeric tikus-manusia IgG. Peran carbo-hidrat dalam
struktur dan efektor fungsi dimediasi oleh daerah
konstan IgG manusia. J Immunol 143: 2595-2601.
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
diselidiki dengan mutan direkayasa untuk stabi-lity.
Biokimia 37: 13.120-13.127.
25. Dall'acqua W, Simon AL, Mulkerrin MG, Carter
13. Leibiger H, Wustner D, Stigler RD, Marx U. 1999.
Variabel oligosakarida domain-linked dari monoklonal
IgG manusia: Struktur dan pengaruh pada antigen
mengikat. Biochem J 338: 529-538.
14. Hermeling S, Crommelin DJA, Schellekens H, Jiskoot
W. 2004. Struktur-imunogenisitas rela-tionships protein
terapeutik. Pharm Res 21: 897-903.
15. Shinkawa T, Nakamura K, Yamane N, Shoji-Hosaka E,
Kanda Y, Sakurada M, Uchida K, Anazawa H, Satoh M,
Yamasaki M, Hanai N, Shitara K. 2003. Tidak adanya
fucose tetapi tidak kehadiran galaktosa atau membagi
dua N-acetylglu-cosamine dari IgG1 manusia yang
kompleks-jenis oligosac-charides menunjukkan peran
penting meningkatkan sitotoksisitas sel antibodi-
dependent. J Biol Chem 278: 3466-3473.
16. Berburu G, Moorhouse KG, Chen AB. 1996. kapiler
isoelektrik fokus dan natrium dodesil sulfat-kapiler
elektroforesis gel rekombinan huma-nized antibodi
monoklonal HER2. J Chromatogr A 744: 295-301.
17. Jiskoot W, Beuvery EC, de Koning AAM, Herron JN,
Crommelin DJA. 1990. Analisis pendekatan untuk studi
stabilitas antibodi monoklonal. Pharm Res 7: 1234-1241.
18. Wang L, Amphlett G, Lambert JM, Blattler W, Zhang
W. 2005. karakterisasi Struktural dari antibodi
monoklonal rekombinan oleh electrospray waktu-of-
flight spektrometri massa. Pharm Res 22: 1338-1349.
19. Wan M, Shiau TA, Gordon W, Wang GY. 1999. Varian
identifikasi antibodi oleh peptida peta-ping. Biotechnol
Bioeng 62: 485-488.
20. Ramsland PA, Farrugia W. 2002. Kristal struc-
membangun struktur antibodi manusia: Sebuah rinci dan
unfin-nan permadani produk gen immunoglobulin. J Mol
Recognit 15: 248-259.
21. Chen B, Bautista R, Yu K, Zapata GA, Chamow SM, et
al. 2003. Pengaruh histidin pada stabilitas dan sifat fisik
dari antibodi manusia penuh dalam bentuk air dan padat.
Pharm Res 20: 1952-1960.
22. Furtado PB, Whitty PW, Robertson A, Eaton JT,
Almogren A, Kerr MA, Woof JM, Perkins SJ. 2004.
Solusi struktur penentuan IgA2 manusia monomer oleh
X-ray dan hamburan neutron, ultrasentrifugasi analitis
dan dibatasi pemodelan: Perbandingan dengan IgA1
manusia monomer. J Mol Biol 338: 921-941.
23. Bogard WC, Jr., Dean RT, Deo Y, Fuchs R, Mattis JA,
McLean AA, Berger HJ. 1989. Pertimbangan praktis
dalam produksi, pemurnian, dan formulasi antibodi
monoklonal untuk immunoscintigraphy dan imunoterapi.
Semin Nucl Med 19: 202-220.
24. Dikenakan A, Pluckthun A. 1998. Reksa stabilisasi VL
dan VH dalam fragmen antibodi rantai tunggal,
DOI 10,1002 / jps
P. 1998. Kontribusi residu domain antarmuka untuk
stabilitas antibodi domain CH3 homo-dimer. Biokimia
37: 9266-9273.
26. Chan LA, Phillips ML, Wims LA, Trinh KR, Denham J,
Morrison SL. 2004. Variabel pertukaran domain
 wilayah di IgG manusia mempromosikan pembentukan
kompleks anti-tubuh disertai perubahan struc-tanian dan
fungsi efektor diubah. Mol Immunol 41: 527-538.
27. Morea V, Tramontano A, Rustici M, Chothia C, Lesk
AM. Struktur Antibodi 1997., prediksi dan desain ulang.
Biophys Chem 68: 9-16.
28. Oliva B, Bates PA, Querol E, Aviles FX, Sternberg MJE.
1998. Automated klasifikasi saling melengkapi antibodi
penetapan kawasan 3 dari rantai berat (h3) loop ke dalam
bentuk kanonik dan aplikasi untuk prediksi struktur
protein.
J Mol Biol 279: 1193-1210.
29. Weir ANC, Nesbitt A, Chapman AP, Popplewell AG,
Antoniw P, Lawson ADG. 2002. fragmen antibodi
Formatting untuk menengahi fungsi terapi tertentu.
Biochem Soc Trans 30: 512-516.
30. Presta LG, Lahr SJ, Shields RL, Porter JP, Gorman CM,
Fendly BM, Jardieu PM. 1993. Humanisasi antibodi
diarahkan terhadap IgE. J Immunol 151: 2623-2632.
31. Sheriff S, Chang CYY, Jeffrey PD, Bajorath J. 1996.
struktur X-ray dari br96 antibodi anti-tumor
terkomplekskan dan perbandingan dengan bentuk
antigen yang terikat nya. J Mol Biol 259: 938-946.
32. Van Regenmortel MHV. 2002. Reduksionisme dan
pencarian hubungan struktur-fungsi dalam molekul
antibodi. J Mol Recognit 15: 240-247.
33. Lobo ED, Hansen RJ, Balthasar JP. 2004.
farmakokinetik Anti-tubuh dan farmakodinamik.
J Pharm Sci 93: 2645-2668.
34. Coloma MJ, Trinh KR, Wims LA, Morrison SL. 1997.
engsel sebagai spacer kontribusi untuk perakitan kovalen
dan diperlukan untuk fungsi IgG.
J Immunol 158: 733-740.
35. Stockwin LH, Holmes S. 2003. Antibodi sebagai agen
terapi: Vive la renaissance! Ahli Opin Biol Ther 3: 1133-
1152.
36. Cacia J, Keck R, Presta LG, Frenz J. 1996. Isomerisasi
residu asam aspartat di daerah saling melengkapi-
penentuan antibodi recom-binant ke IgE manusia:
Identifikasi dan berpengaruh pada afinitas mengikat.
Biokimia 35: 1897- 1903.
37. Harris RJ, Kabakoff B, Macchi FD, Shen FJ, Kwong M,
Andya JD, Shire SJ, Bjork N, Totpal K, Chen AB. 2001.
Identifikasi berbagai sumber biaya heterogenitas dalam
antibodi rekombinan. J Chromatogr B Biomed Sci Appl
752: 233-245.
DOI 10,1002 / jps
24 WANG ET AL.
ANTIBODI FORMULASI 23
38. Dall'acqua W, Carter P. 1998. antibodi engineer-ing.
Curr Opin Struct Biol 8: 443-450.
39. Le Gall F, Reusch U Little M, Kipriyanov SM. 2004.
Pengaruh urutan linker antara antibodi domain variabel
pada pembentukan, stabilitas dan aktivitas biologis dari
diabody perlu bispesific tandem. Protein Eng Des Sel 17:
85-93.
40. Chu GC, Coulibaly SB, Raibekas A, Deechongkit S.
formulasi 2005. Protein dari antibodi IgG1 dengan
glikosilasi atipikal: Sebuah studi pada stabi-lity
glycoform nya. Abstr Pap Am Chem Soc 229: U210-
U211.
41. Paborji M, Pochopin NL, Coppola WP, Bogardus JB.
1994. Kimia dan stabilitas fisik chimeric L6, sebuah
monoklonal anti-tubuh tikus-manusia. Pharm Res 11:
764-771.
42. Welfle K, Misselwitz R, Hausdorf G, Hohne W, Welfle
H. 1999. konformasi, con-formational perubahan pH-
diinduksi, dan termal terungkapnya anti-p24 (HIV-1)
antibodi monoklonal CB4-1 dan yang Fab dan Fc
fragmen . Biochim Biophys Acta 1431: 120-131.
43. Li SQ, Bomser JA, Zhang QH. 2005. Pengaruh medan
listrik berdenyut dan perlakuan panas pada stabilitas dan
struktur sekunder dari sapi im-munoglobulin G. J Agric
Food Chem 53: 663-670.
44. Wang W. 1999. Instabilitas, stabilisasi, dan perumusan
obat-obatan protein cair. Int J Pharm 185: 129-188.
45. Harrison JS, Gill A, Hoare M. 1998. Stabilitas dari rantai
tunggal Fv fragmen antibodi bila terkena lingkungan
geser tinggi dikombinasikan dengan antarmuka udara-
cairan. Biotechnol Bioeng 59: 517-519.
46. Taschner N, Muller SA, Alumella VR, Goldie KN,
Drake AF, Aebi U, Arvinte T. 2001. Modulasi
antigenisitasnya terkait dengan perubahan antibodi flex-
ibility pada liofilisasi. J Mol Biol 310: 169- 179.
47. Shire SJ, Shahrokh Z, Liu J. 2004. Tantangan dalam
pengembangan formulasi konsentrasi protein tinggi. J
Pharm Sci 93: 1390-1402.
48. Braun A, Kwee L, Labow MA, Alsenz J. 1997. agregat
Protein tampaknya memainkan peran kunci di antara
parameter yang mempengaruhi antigenisitasnya
interferon alfa (IFN-alpha) pada tikus normal dan trans-
genic. Pharm Res 14: 1472-1478.
49. Demeule B, Gurny R, Arvinte T. 2005. Dimana penyakit
patogenesis memenuhi formulasi protein: deposisi ginjal
agregat imunoglobulin. Eur J Pharm Biopharm.
50. Ryan ME, Webster ML, Statler JD. 1996. Efek samping
dari terapi immunoglobuin intravena. Clin Pediatr 35:
23-31.
51. Schreiber G. 2002. studi kinetik dari interaksi protein-
protein. Curr Opin Struct Biol 12: 41-47.
52. Sukumar M, Doyle BL, Combs JL, Pekar AH. 2004.
terbuat dr batu baiduri penampilan antibodi IgG1
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
pada konsentrasi tinggi dan hubungannya dengan
asosiasi noncovalent. Pharm Res 21: 1087- 1093.
53. Levine HL, Ransohoff TC, Kawahata RT, McGre-gor
WC. 1991. Penggunaan tegangan permukaan ukuran-
KASIH dalam desain formulasi produk berbasis
antibodi. J Parenter Sci Technol 45: 160-165.
54. Ferri C, Zignego AL, Pileri SA. 2002. Cryoglobu-lins. J
Clin Pathol 55: 4-13.
55. Lam XM, Oeswein JQ, Ongpipattanakul B, Shah-Rokh
Z, Wang SX, Weissburg RP, Wong RL. 2000. stabil
Antibodi Formulasi. Genentech, Inc, AS US Patent
6991790 B1.
56. Lee LS. 1997. stabil protein com-posisi monomer.
Enzon, Inc, AS US Patent 5.656.730.
57. Cleland JL, Lam X, Kendrick B, Yang J, Yang TH,
Overcashier D, Brooks D, Hsu C, Carpenter JF. 2001.
Rasio molar spesifik stabilizer untuk protein diperlukan
untuk stabilitas penyimpanan antibodi monoklonal
lyophilized. J Pharm Sci 90: 310-321.
58. Hagiwara H, Yuasa H, Yamamoto Y. 2000. stabi-lized
persiapan antibodi monoklonal manusia, Yoshihide
Hagiwara.
59. Ressing ME, Jiskoot W, Talsma H, Van Ingen CW,
Crommelin DJ, et al. 1992. Pengaruh sukrosa, dekstran,
dan hidroksipropil-beta-siklodekstrin sebagai
lyoprotectants untuk mouse IgG2a antibodi monoklonal
beku-kering (MN12). Pharm Res 9: 266- 270.
60. Roy ML, Pikal MJ, Rickard EC, Maloney AM. 1992.
Efek dari perumusan dan kelembaban pada stabilitas dari
monoklonal konjugat antibodi-vinca beku-kering:
Sebuah tes teori transisi WLF kaca. Dev Biol Berdiri 74:
323-339; Diskusi 340.
61. Kamat MS, Tolman GL, Brown JM. 1996. Untuk-
mulation pengembangan radiofarmaka antibodi
monoklonal antifibrin. Pharm Biotechnol 9: 343-364.
62. Andya JD, Hsu CC, Shire SJ. 2003. Mekanisme
pembentukan agregat dan stabilisasi karbohidrat eksipien
formulasi antibodi monoklonal manusiawi lyophilized.
AAPS PharmSci 5: E10.
63. Riggin A, Clodfelter D, Maloney A, Rickard E, Massey
E. stabilitas 1991. Solusi dari antibodi-vinca alkaloid
konjugat mono-klonal, KS1 / 4-DAVLB. Pharm Res 8:
1264-1269.
64. Duddu SP, Dal Monte PR. 1997. Pengaruh suhu transisi
kaca pada stabilitas formulasi lyophi-lized mengandung
chimeric Thera-peutic antibodi monoklonal. Pharm Res
14: 591- 595.
65. Maa YF, Nguyen PA, Andya JD, Dasovich N, Hsu CC,
et al. 1998. Pengaruh pengeringan semprot dan kondisi
pengolahan sub-sequent atas konten lembab-ure residual
dan stabilitas fisik / biokimia dari bubuk protein inhalasi.
Pharm Res 15: 768- 775.
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
66. Maa YF, Nguyen PA, Hsu SW. 1998. Spray-pengeringan
antarmuka udara-cairan sensitif rekombinan hormon
pertumbuhan manusia. J Pharm Sci 87: 152-159.
67. Alexander AJ, Hughes DE. 1995. Pemantauan antibodi
IgG stabilitas termal dengan kromatografi kapiler
elektro-kinetik misel dan matriks-dibantu laser yang
massa desorpsi / ionisasi spectro-Metry. Anal Chem 67:
3626-3632.
68. Hartmann WK, Saptharishi N, Yang XY, Mitra G,
Soman G. 2004. Karakterisasi dan analisis denaturasi
termal antibodi berdasarkan ukuran EXCLU-sion-
kromatografi cair kinerja tinggi dengan deteksi empat
kali lipat. Anal Biochem 325: 227-239.
69. Doran PM. 2006. Kehilangan antibodi yang disekresikan
dari kultur jaringan transgenik karena adsorpsi
permukaan. J Biotechnol 122: 39-54.
70. Morales AA, Nunez-Gandolff G, Perez NP, Veliz SM,
Caballero-Torres I, Duconge J, Fernandez E, Crespo FZ,
Veloso A, Iznaga-Escobar N. 1999. beku-kering
formulasi untuk langsung 99mTc-label-ing IOR -egf / r3
MAb: Aditif, biodistribusi, dan stabilitas. Nucl Med Biol
26: 717-723.
71. Andya JD, Maa YF, Costantino HR, Nguyen PA,
Dasovich N, Sweeney TD, Hsu CC, Shire SJ. 1999.
Pengaruh eksipien formulasi pada stabilitas protein dan
kinerja aerosol bubuk semprot-kering dari manusiawi
anti-IgE antibodi monoklonal rekombinan. Pharm Res
16: 350-358.
72. Usami A, Ohtsu A, Takahama S, Fujii T. 1996. Pengaruh
pH, hidrogen peroksida dan suhu pada stabilitas antibodi
monoklonal manusia. J Pharm Biomed Anal 14: 1133-
1140.
73. Rao PE, Kroon DJ. 1993. Orthoclone OKT3 mechanims
kimia dan efek fungsional degradasi dari antibodi
monoklonal terapeutik. Dalam: Pearlman R, Wan YJ,
editor. Stabilitas dan karakterisasi protein dan kasus obat
peptida sejarah. New York: Plenum Press. p. 135-158.
74. Tous GI, Wei Z, Feng J, Bilbulian S, Bowen S, Smith J,
Strouse R, McGeehan P, Casas-Finet J, Schenerman
MA. 2005. Karakterisasi modifikasi baru untuk antibodi
monoklonal: tioeter cross-link rantai berat dan ringan.
Anal Chem 77: 2675-2682.
75. Cleland JL, Powell MF, Shire SJ. 1993. Pengembangan
formulasi protein yang stabil: Sebuah melihat dari dekat
agregasi protein, deamidasi, dan oksidasi. Crit Rev Ther
Obat Pembawa Syst 10: 307-377.
76. Xie M, Schowen RL. 1999. sekunder struktur dan
protein deamidasi. J Pharm Sci 88: 8-13.
77. Kwong MY, Harris RJ. 1994. Identifikasi situs SUC-
cinimide dalam protein dengan analisis urutan N-
terminal setelah pembelahan hydroxylamine alkali.
Protein Sci 3: 147-149.
78. Zheng JY, Janis LJ. 2005. Pengaruh pH, spesies
penyangga, dan suhu penyimpanan pada physicochem-
DOI 10,1002 / jps
stabilitas ical dari LA298 antibodi monoklonal
manusiawi. Int J Pharm 308: 46-51.
79. Tyler-Cross R, Schirch V. 1991. Pengaruh urutan asam
amino, buffer, dan kekuatan ion pada tingkat dan
mekanisme deamidasi residu asparagin di peptida kecil. J
Biol Chem 266: 22.549-22.556.
80. Johnson RE, Qi H, Borgmeyer JR, Kessler RK, Zeng
DL. 2004. pH Stabil dioptimalkan perumusan antibodi
dimodifikasi. Pharmacia Corporation. paten internasional
Wo2004 / 019.861 A2.
81. Lam XM, Yang JY, Cleland JL. 1997. Antioksidan untuk
pencegahan oksidasi metionin di recombi-nant antibodi
monoklonal HER2. J Pharm Sci 86: 1250-1255.
82. Harris RJ. 1995. Pengolahan C-terminal lisin dan arginin
residu protein diisolasi dari kultur sel mamalia. J
Chromatogr A 705: 129- 134.
83. Powell MF. 1996. Sebuah ringkasan dan analisis
hydropathy / fleksibilitas situs umum reaktif protein:
Reaktivitas di Asn, Asp, Gln, dan motif Met dalam
larutan pH netral. Dalam: Pearlman R, Wang YJ, editor.
Formulasi, karakterisasi, dan stabilitas obat protein. New
York: Plenum Press. p. 1-140.
84. Sarno MEC, Vasquez RA, Yung SG, Graf CR. 1999.
Stabil intravena-administrable persiapan immune
globulin. Baxter International Inc, US5945098 paten AS.
85. Caballero saya, Altanes S, Castillo A, Deridder V,
Gomez T, Miralles Y, Naydenov V, Prieto E, Tilquin B.
studi 2004. Radiosensitivity antibodi beku-kering iradiasi
Gamma. Ame Pharm Rev 7: 40-46, 81.
86. Kennedy DM, Skillen AW, Self CH. 1994. Glyca-tion
antibodi monoklonal mengganggu kemampuan mereka
untuk mengikat antigen. Clin Exp Immunol 98: 245-251.
87. Patten PA, Schellekens H. 2003. immuno-genicity
biopharmaceuticals. Pelajaran dan konsekuensi untuk
pengembangan obat protein. Dev Biol (Basel) 112: 81-
97.
88. Liu J, Nguyen MD, Andya JD, Shire SJ. 2005.
Reversible diri asosiasi meningkatkan viskositas dari
antibodi monoklonal terkonsentrasi dalam larutan air. J
Pharm Sci 94: 1928-1940.
89. Golovanov AP, Hautbergue GM, Wilson SA, Lian LY.
2004. Sebuah metode sederhana untuk meningkatkan
kelarutan protein dan stabilitas jangka panjang. J Am
Chem Soc 126: 8933-8939.
90. Kueltzo LA. 2004. Agregasi antibodi monoklonal dalam
larutan berair dengan dan tanpa agitasi. Strategi
Formulasi untuk Therapeutics Protein. Boston, MA: Ilmu
IBC Life.
91. Mahler HC, Muller R, Friebeta W, Delille A, Matheus S.
2005. Induksi dan analisis aggre-gerbang dalam
formulasi IgG1-antibodi cair. Eur J Pharm Biopharm 59:
407-417.
DOI 10,1002 / jps
26 WANG ET AL.
ANTIBODI FORMULASI 25
92. Treuheit MJ, Kosky AA, Brems DN. 2002. Hubungan
Inverse konsentrasi protein dan aggrega-tion. Pharm Res
19: 511-516.
93. Ha E, Wang W, Wang YJ. 2002. Peroksida untuk-mation
di polisorbat 80 dan protein stabilitas. J Pharm Sci 91:
2252-2264.
94. Gupta S, Kaisheva E. 2003. Pengembangan formulasi
multi-dosis untuk antibodi monoclo-nal manusiawi
menggunakan desain eksperimental techni-ques. AAPS
PharmSci 5: E8.
95. Kocijan A, Milosev saya, Pihlar B. 2003. Pengaruh zat
pengompleks dan protein pada korosi baja tahan karat
dan komponen logam mereka. J Mater Sci Mater Med
14: 69-77.
96. McCormick D. 2004. Perubahan kecil, efek besar di
bidang manufaktur biologis. Pharm Technol 28:16.
97. Carpenter JF, Pikal MJ, Chang BS, Randolph TW. 1997.
Rasional desain formulasi protein terliofilisasi yang
stabil: Beberapa saran praktis. Pharm Res 14: 969-975.
98. Wang W. 2000. Lyophilization dan pengembangan obat-
obatan protein padat. Int J Pharm 203: 1-60.
99. Akers MJ, Vasudevan V, Stickelmeyer M.
pengembangan 2002. Formulasi bentuk sediaan protein.
Pharm Biotechnol 14: 47-127.
100. Chang BS, Hershenson S. 2002. Praktis ap-proaches
untuk pengembangan formulasi protein. Pharm
Biotechnol 13: 1-25.
101. Chang LL, Shepherd D, Sun J, Ouellette D, Grant KL,
Tang XC, Pikal MJ. 2005. Mekanisme stabilisasi protein
dengan gula selama beku-kering dan penyimpanan:
struktur pelestarian asli, interaksi tertentu, dan / atau
imobilisasi dalam matriks gelas? J Pharm Sci 94: 1427-
1444.
102. Chang LL, Shepherd D, Sun J, Tang XC, Pikal MJ.
2005. Pengaruh sorbitol dan kelembaban residual pada
stabilitas antibodi liofilisasi: Implikasi untuk mekanisme
stabilisasi protein dalam keadaan padat. J Pharm Sci 94:
1445-1455.
103. Pikal MJ, Rigsbee DR. 1997. Stabilitas insu-lin dalam
padatan kristal dan amorf: observa-tion dari stabilitas
yang lebih besar untuk bentuk amorf. Pharm Res 14:
1379-1387.
104. Crowe JH, Crowe LM, Carpenter JF. 1993. Pre-melayani
biomaterial kering: Hipotesis pengganti air, bagian 1.
Biopharm 6: 28-37.
105. Crowe JH, Crowe LM, Carpenter JF. 1993. Pre-melayani
biomaterial kering: Hipotesis pengganti air, bagian 2.
Biopharm 6: 40-43.
106. Shenoy B, Wang Y, Shan W, Margolin AL. 2001.
Stabilitas protein kristal. Biotechnol Bioeng 73: 358-369.
107. Andya J, Cleland JL, Hsu CC, Lam XM, Over-kasir DE,
Shire SJ, Yang JY-F, Wu SS-Y. 2004. formulasi Protein.
Genentech, Inc.
108. Ma X, Wang DQ, Bouffard R, MacKenzie A. 2001.
Karakterisasi antibodi monoklonal murine
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
untuk tumor necrosis factor (TNF-MAb) formulasi untuk
pengembangan siklus pengeringan beku. Pharm Res 18:
196-202.
109. Maa YF, Costantino HR, Nguyen PA, Hsu CC. 1997.
Pengaruh operasi dan formulasi variabel pada morfologi
partikel protein semprot-kering. Pharm Dev Technol 2:
213-223.
110. Maury M, Murphy K, Kumar S, Mauerer A, Lee G.
2005. Spray-pengeringan protein: Pengaruh sorbitol dan
trehalosa pada agregasi dan FT-IR amida I spektrum
immunoglobulin G. Eur J Pharm Biopharm 59: 251-
261.
111. Krauss J, Arndt MA, Zhu Z, Newton DL, Vu BK,
Choudhry V, Darbha R, Ji X, Courtenay-Keberuntungan
NS, Deonarain MP, Richards J, Rybak SM. 2004.
Dampak residu kerangka antibodi VH-71 pada stabilitas
dari manusiawi anti-MUC1 scFv dan berasal
immunoenzyme. Br J Kanker 90: 1863- 1870.
JURNAL FARMASI SCIENCES, VOL. 96, NO. 1, Januari 2007
jps
112. McIntosh DP, Cooke RJ, McLachlan AJ, Daley-Yates
PT, Rowland M. 1997. Farmakokinetik dan distribusi
jaringan cisplatin dan konjugat dari cisplatin dengan
carboxymethyldextran dan A5B7 antibodi monoklonal
pada tikus CD1. J Pharm Sci 86: 1478-1483.
113. Yewey GL, Duysen EG, Cox SM, Dunn RL. 1997.
Pengiriman protein dari pelepasan terkontrol suntik
implan. Pharm Biotechnol 10: 93-117.
114. Porjazoska A, Goracinova K, Mladenovska K, Glavas
M, Simonovska M, Janjevic EI, Cvetkovska M. 2004.
Poli (laktida-co-glycolide) mikropartikel sebagai sistem
untuk pelepasan terkontrol persiapan proteins- dan
karakterisasi. Acta Pharm 54: 215-229.
115. Homayoun P, Mandal T, Landry D, Komiskey H. 2003.
Controlled rilis anti-kokain antibodi katalitik dari
polimer biodegradable mikro-bola. J Pharm Pharmacol
55: 933-938.
DOI 10,1002 /