Machine Translated by Google

Lihat diskusi, statistik, dan profil penulis untuk publikasi ini di: https://www.researchgate.net/publication/7933330

Stabilitas obat protein: tantangan formulasi. Nat Rev Drug Discov 4:298- 306

Artikel di Nature Review Drug Discovery · Mei 2005

DOI: 10.1038/nrd1695 · Sumber: PubMed

KUTIPAN BACA

912 5.830

2 penulis:

Sven Frøkjaer Daniel Otzen

Universitas Kopenhagen Universitas Aarhus

121 PUBLIKASI 7.857 KUTIPAN 384 PUBLIKASI 18.209 KUTIPAN

LIHAT PROFIL LIHAT PROFIL

Beberapa penulis publikasi ini juga mengerjakan proyek terkait berikut:

Analog insulin Lihat proyek

Proyek Tampilan Lipat Protein Membran

Semua konten setelah halaman ini diunggah oleh Daniel Otzen pada 11 Agustus 2015.

Pengguna telah meminta peningkatan file yang diunduh.

Machine Translated by Google
ULASAN

STABILITAS OBAT PROTEIN:

TANTANGAN FORMULASI
Sven Frokjaer* dan Daniel E. Otzen‡
Abstrak | Meningkatnya penggunaan protein terapeutik yang diekspresikan secara rekombinan dalam industri
farmasi telah menyoroti masalah-masalah seperti stabilitasnya selama penyimpanan jangka panjang dan cara
pengiriman yang manjur yang menghindari efek samping imunogenik yang merugikan. Modifikasi kimia terkontrol,
seperti substitusi, asilasi, dan PEGilasi, telah memenuhi beberapa tetapi tidak semua janjinya, sementara hidrogel
dan formulasi berbasis lipid dapat dikembangkan dengan baik menjadi sistem pengiriman generik. Strategi untuk
mengekang agregasi dan kesalahan lipatan protein selama penyimpanan cenderung mendapat manfaat dari
lonjakan minat baru-baru ini pada fibrilasi protein. Hal ini pada gilirannya dapat mengarah pada pedoman dan tes
yang diterima secara umum untuk menghindari efek samping yang tidak terduga dalam pemberian obat.

Selama dua dekade terakhir, teknologi DNA rekombinan
telah menyebabkan peningkatan yang signifikan dalam
jumlah obat-obatan bioteknologi yang disetujui dan
pergeseran dari produksi bahan biologis aktif (biologis)
berdasarkan bahan hewan atau manusia, dan menuju
kloning dan fermentasi. Sebuah survei baru-baru ini
mencantumkan 324 obat bioteknologi, baik dalam uji klinis
pada manusia atau sedang ditinjau oleh badan pengatur.
Obat ini mencakup hampir 150 penyakit, termasuk kanker,
penyakit menular, penyakit autoimun, dan protein AIDS/
. Sejumlah besarinizat
HIV1. Perkembangan akan memperluas daftar obat-
ini adalah
obatan dan membuka jalan bagi pengobatan yang lebih
banyak dan lebih baik untuk kepentingan pasien.
Kecenderungan umum ini sesuai dengan visi beberapa
analis, termasuk Layanan Konsultasi Bisnis IBM2 .
*Departemen
Farmasi,
Menurut pandangan ini, banyak dari obat-obatan baru
Universitas Ilmu Farmasi akan didasarkan pada ekspresi DNA rekombinan protein
Denmark, daripada kimia organik, karena biologis secara umum
Universitetsparken 2, diharapkan kurang beracun dan berperilaku in vivo lebih
DK-2100Copenhagen O,
Denmark. ‡
dapat diprediksi. Oleh karena itu, obat-obatan bioteknologi
Departemen Ilmu
berpotensi mencapai pasar lebih cepat daripada entitas
Hayati, Universitas kimia yang dikembangkan melalui metode tradisional.
Aalborg, Sohngaardsholmsvej narkoba3,4 .
49, DK-9000Aalborg,
Denmark.
Korespondensi ke email
DEO: dao@bio.aau.dk Dalam
doi:10.1038/nrd1695 banyak hal, persyaratan kemanjuran dan keamanan biologik
mirip dengan persyaratan untuk obat kecil yang disintesis
secara kimiawi. Namun, karena asal biologis dan struktur
makromolekul biologik, ada fokus khusus pada kontaminasi
biologik dengan pengotor biologis lainnya, seperti virus,
serta perubahan konformasi yang diperkenalkan selama
produksi bahan curah atau formulasi akhir.
Metode biologis, fisik, dan kimia yang terdokumentasi dengan
baik dan tervalidasi adalah alat penting untuk mengamankan
kualitas dan keamanan biologi.
Beberapa tantangan dihadapi oleh para ilmuwan
farmasi yang terlibat dalam pengembangan obat-obatan
bioteknologi, seperti protein. Formulasi protein yang
sukses tergantung pada pemahaman menyeluruh tentang
karakteristik fisiko-kimia dan biologisnya, termasuk
stabilitas kimia dan fisik, sifat imunogenisitas dan
farmakokinetiknya. Aktivitas terapeutik protein sangat
bergantung pada struktur konformasinya. Namun, struktur
proteinnya fleksibel dan sensitif terhadap kondisi eksternal,
yang berarti bahwa produksi, formulasi dan penanganan
protein memerlukan perhatian khusus dalam
mengoptimalkan efikasi dan keamanan, termasuk
meminimalkan respon imun. obat-obatan berbasis protein.
Stabilitas kimia dan fisik protein dapat dikompromikan
oleh faktor eksternal seperti pH, suhu

298 | APRIL 2005 | VOLUME 4 www.nature.com/reviews/drugdisc

Machine Translated by Google
Pelepasan dari
bentuk sediaan
Gambar 1 | Hambatan transportasi obat biomakromolekul. Hambatan utama untuk pengangkutan yang
efisien ke tempat aksi adalah degradasi enzimatik dan membran biologis.
PARENTERAL
Zat yang dimasukkan ke
dalam tubuh tetap kecuali
melalui mulut.
FARMAKOKINETIK
Studi tentang penyerapan,
distribusi, metabolisme,
ekskresi dan interaksi obat.
PEGilasi
Pengikatan kovalen
polietilen glikol (PEG) ke
protein.
ULASAN ALAM | PENEMUAN OBAT
Protein
Situs aksi
Enzim
Penghalang sel
dan interaksi permukaan, serta oleh kontaminan dan
kotoran untuk eksipien, dan seterusnya5,6 . Beberapa
tinjauan baru-baru ini membahas pentingnya stabilitas
protein dalam pengembangan formulasi dan imunogenisitas
protein dari perspektif farmasi5,7 .
Selain itu, beberapa tinjauan baru-baru ini berfokus pada kondisi
yang menyebabkan perubahan yang tidak diinginkan dalam
struktur kimia protein8,9 .
Tantangan pengiriman
Pemberian obat secara oral adalah rute pemberian yang
disukai dan paling banyak digunakan. Namun, rute ini
umumnya tidak layak untuk pengiriman molekul makro
seperti protein. Ketidakstabilan protein yang melekat pada
saluran gastro-intestinal, serta permeabilitas rendah
melintasi membran biologis karena massa molekul tinggi
dan karakteristik permukaan polar dari protein, menyiratkan
bahwa protein untuk pengobatan sistemik harus diberikan
secara PARENTERAL; namun, upaya sedang dilakukan
untuk meningkatkan bioavailabilitas melalui rute pemberian
alternatif, misalnya melalui rute hidung atau paru10,11 .
Namun demikian, bioavailabilitas melalui berbagai rute
pemberian non-parenteral rendah dan biasanya tidak cukup
untuk efek sistemik yang efektif. Hambatan untuk pengiriman
yang efisien ke tempat kerja secara luas dapat dikategorikan
sebagai berbagai hambatan enzimatik yang ditemui protein
saat bergerak dari situs administrasi ke situs aksi, atau
penghalang fisik untuk transportasi yang efektif, seperti
lapisan sel epi dan endotel (Gbr. 1).
Sifat farmasi dan FARMAKOKINETIK protein dapat
dioptimalkan dengan pendekatan yang berbeda - misalnya,
dengan mutagenesis, modifikasi kimia atau dengan
merancang sistem penghantaran obat tertentu. Namun,
sebagian besar obat berbasis protein saat ini masih
diformulasikan sebagai suspensi atau larutan berair baik
dalam bentuk siap pakai atau sebagai produk terliofilisasi untuk rekonstitusi.
Substitusi dan modifikasi kimia
Protein untuk penggunaan terapeutik dapat dimodifikasi
secara kimia dalam beberapa cara — misalnya, dengan
memutasikan satu atau lebih asam amino (yaitu, membuat
analog protein) atau dengan asilasi atau PEGylation.
Modifikasi ini dapat digunakan untuk mengoptimalkan sifat
farmakokinetik protein, tetapi harus selalu berhati-hati agar
tidak mengurangi kemanjuran biologisnya.
ULASAN
Analog protein. Pengembangan analog insulin monomerik
kerja cepat memberikan contoh yang sangat baik dari
pendekatan analog12 . Ide dasar di balik perkembangan
ini adalah bahwa laju transpor dari tempat injeksi subkutan
melalui membran biologis ke sirkulasi sistemik akan
meningkat jika karakteristik self-association insulin dialihkan
dari insulin heksamerik menjadi insulin di- atau monomerik.
(Gbr. 2). Dengan memutasi asam amino yang terlibat
dalam asosiasi diri, pendekatan ini terbukti layak. Analog
insulin monomer dengan profil tindakan waktu yang lebih
cepat daripada insulin manusia sekarang ada di pasaran
(misalnya, insulin lispro (Eli Lilly) dan insulin aspart
(NovoRapid; Novo Nordisk)).
Interleukin-2 manusia rekombinan (IL-2) adalah contoh
lain di mana efek terapeutik ditingkatkan melalui desain
molekuler. Aldesleukin analog IL-2 non-glikosilasi yang
tersedia secara komersial (Proleukin; Chiron) adalah analog
des-alanil-1 dari IL-2 manusia di mana sistein pada posisi
125 telah digantikan oleh serin. Analog IL-2 eksperimental
BAY 50-4798 (Bayer) adalah contoh lain dari protein hasil
rekayasa genetika dengan potensi efek terapeutik yang
lebih baik.
Asilasi . Keterikatan kimia asam lemak pada residu yang
terpapar pada permukaan protein dalam beberapa kasus
dapat meningkatkan afinitas protein terhadap albumin
serum cukup untuk meningkatkan waktu sirkulasinya dalam
darah13,14 . Efek asilasi secara alami lebih besar untuk
protein dan peptida yang lebih kecil karena peningkatan
relatif lebih besar dalam hidrofobisitas. Sebagai contoh,
analog insulin asilasi [Lys.sup.B29]-tetradecanoyl des(B30)
insulin manusia, detemir insulin (Novo Nordisk A/S) bekerja
lama dan baru-baru ini telah disetujui oleh badan pengatur
di beberapa negara. Prinsip asilasi juga berhasil diterapkan
pada protein lain — misalnya, glukagon-like peptide 1
(GLP1) (REF. 15) dan interferon-ÿ16
, serta untuk peptida seperti desmo
pressin17 . Sementara asilasi insulin dan GLP1 spesifik
lokasi, asilasi interferon kurang spesifik.
Heterogenitas potensial dari interferon terasilasi ini pada
akhirnya dapat menjadi masalah baik dari segi efikasi
maupun keamanan.
Heksamer Dimer Monomer
membran biologis
Gambar 2 | Transportasi insulin melintasi membran biologis.
Monomer insulin memiliki fluks tertinggi.
VOLUME 4 | APRIL 2005 | 299
Machine Translated by Google
ULASAN
Gambar 3 | Ilustrasi skematis pelepasan protein dari polimer yang peka terhadap
rangsangan eksternal, seperti perubahan pH, kekuatan ionik, dan suhu. Pembengkakan
polimer melepaskan protein yang terperangkap.
EPITOP
Istilah alternatif untuk an
penentu antigenik. Ini adalah
kelompok kimia tertentu pada
molekul yang menimbulkan
respons imun spesifik.
300 | APRIL 2005 | VOLUME 4
Polimer
Perubahan
kondisi
eksternal
Protein
PEGilasi. Secara umum, PEGilasi mengurangi tingkat pembersihan
plasma dengan mengurangi degradasi metabolik dan penyerapan
protein yang dimediasi reseptor dari sirkulasi sistemik. PEGylation
juga meningkatkan profil keamanan protein dengan melindungi
EPITOP antigenik dan imunogenik yang penting untuk disadari,
baik dari sudut pandang efikasi dan keamanan,18bahwa
. Namun, itu benar
polimer
PEG terdiri dari campuran polimer dengan massa molekul berbeda;
selain itu, protein yang lebih besar akan memiliki beberapa situs
yang dapat diakses oleh PEGylation. Karena heterogenitas produk
potensial ini, dokumentasi klinis dan farmasi yang diperlukan untuk
persetujuan obat bisa lebih menuntut daripada protein yang tidak
dimodifikasi. PEG-interferon-ÿ adalah contoh komersial di mana
profil farmakokinetik ditingkatkan dengan PEGylation, yang
memungkinkan pemberian lebih jarang dan menghasilkan
kemanjuran yang lebih baik dengan profil efek samping yang
serupa19 . Di sisi lain, faktor pertumbuhan epidermal mono
PEGylated (EGF) dengan PEG 3400 di Lys28 dan Lys48 secara
signifikan kurang aktif daripada isomer EGF PEGylated di terminal
amino dalam uji in vitro untuk aktivitas mitogenik20 . Beberapa
ulasan bagus tersedia untuk jenis turunan khusus ini. Edisi terbaru
dari Tinjauan Penghantaran Obat Tingkat Lanjut dikhususkan
untuk PEGylation21 .
Sistem pengiriman obat. Jebakan dan enkapsulasi adalah
prinsip formulasi yang paling banyak digunakan untuk sistem
penghantaran protein. Sistem penghantaran obat polimer, seperti
hidrogel, nanokapsul dan mikrosfer, dan sistem penghantaran obat
berbasis lipid seperti liposom dan nanopartikel lipid padat,
semuanya adalah contoh sistem penghantaran protein (Gbr. 3).
Hidrogel adalah polimer hidrofilik berikatan silang yang
membentuk jaringan tiga dimensi, yang dapat disintesis untuk
terdegradasi pada laju tertentu atau untuk merespons beberapa
rangsangan fisiologis yang ada dalam tubuh, seperti pH, kekuatan
ionik, dan suhu.
Kedua prinsip tersebut digunakan untuk pelepasan protein yang
terkontrol22–25 . Hidrogel ini dapat diformulasikan baik sebagai
mikrosfer atau sebagai sistem pengiriman pembentuk in situ .
Sistem pembentuk in situ dapat memiliki beberapa keunggulan
dibandingkan mikrosfer konvensional, seperti kemudahan
administrasi dan tidak terlalu rumit dan berpotensi
kondisi pembuatan berbahaya yang sesuai untuk molekul obat
sensitif seperti protein26 .
Contoh formulasi berbasis lipid dengan potensi untuk melayani
sebagai sistem pengiriman untuk makromolekul seperti protein
termasuk liposom, nanosfer lipid padat dan emulsi air dalam
minyak27-29 . Penggabungan dan pelepasan protein dari liposom,
misalnya, dapat dikendalikan oleh karakteristik fisiko-kimia protein
- yaitu, luas permukaan hidrofobik, yang dapat dimodifikasi,
misalnya, dengan asilasi30 atau dengan membangun lapisan
ganda lipid yang peka terhadap degradasi yang dipicu oleh enzim
seperti fosfolipase A2 sekretori yang ada di jaringan inflamasi dan
cairan kanker tertentu31 . Contoh perwakilan dari modifikasi dan
sistem pengiriman diberikan dalam TABEL 1.
Imunogenisitas protein terapeutik. Kemampuan untuk
menghasilkan protein yang sangat murni yang identik atau hampir
identik dengan protein manusia endogen sering dianggap sebagai
kunci untuk menghindari reaktivitas T- dan B-limfosit selama
pengobatan, karena pasien diharapkan toleran terhadap protein
mereka sendiri. tingkat dan kejadian respons imun rendah,
sebagian besar protein ini telah terbukti imunogenik, dan dalam
beberapa kasus bahkan menyebabkan masalah keamanan yang
serius dan penghambatan efek terapeutik karena antibodi penawar.
Contohnya adalah pembentukan antibodi setelah pengobatan
jangka panjang dengan pasien interferon rekombinan dengan
multiple sclerosis, yang menunjukkan bahwa adanya antibodi
penawar terhadap interferon mengurangi efek klinis obat32,33 .
Erythropoietin manusia rekombinan adalah contoh lain di mana
antibodi penawar bereaksi terhadap erythropoietin dan
menyebabkan aplasia sel darah merah murni34 . Telah
dikemukakan bahwa alasan produksi anti-erythropoietin anti body
yang terlihat pada pasien mungkin terkait dengan proses produksi
. 1990-an
hormon35 A perubahan formulasi yang diperkenalkan pada
juga
akhir
telah
diusulkan sebagai alasan yang masuk akal untuk induksi anti bodi
yang menetralkan eritropoietin endogen.
Sebuah studi baru-baru ini menunjukkan bahwa formulasi ini
mengandung eritropoietin terkait misel, yang dapat menjadi faktor
risiko untuk pengembangan antibodi36 . Kesulitan dalam
mendeteksi perubahan struktural dalam protein dalam formulasi
farmasi yang lebih kompleks merupakan tantangan utama bagi
para ilmuwan formulasi yang bertanggung jawab atas
pengembangan dan kualitas obat-obatan biofarmasi37 .
Secara umum struktur proteinlah yang dapat memicu respon
imun selama pengobatan. Protein adalah molekul yang kompleks
dan fleksibel, dan bahkan perubahan kecil pada tempat tertentu
dapat mengakibatkan perubahan besar pada keseluruhan struktur
(Tabel 2). Misalnya, alergen bermutasi rekombinan dengan
topografi permukaan yang dimodifikasi, tetapi yang mempertahankan
pola pelipatan ÿ-karbon-tulang punggung, telah terbukti
mempertahankan kapasitas untuk menginduksi respons imun
spesifik-alergen, tetapi dengan potensi anafilaksis yang berbeda
di. luar
meskipun struktur permukaan diposisikan 38 Ini menunjukkan bahwa
daerah mutasi
dipertahankan, pengenalan mutasi yang mengubah topografi dan
muatan
www.nature.com/reviews/drugdisc
Machine Translated by Google
Tabel 1 | Protein yang dimodifikasi dan sistem pengiriman protein disetujui untuk pemasaran
Produk (perusahaan) Obat
Proleukin (Chiron) Aldesleukin
Humalog (Eli Lilly) Lispro insulin
NovoRapid (Novo Nordisk) Insulin aspart
Neulasta (Amgen) PEGinterferon ÿ-2a
Pegasis (Roche) Pegfilgrastim
Somavert (Apotek) Pegvisomat
Levemir (Novo Nordisk) Deteksi insulin
Nutropin Depot (Genentech) Mikrosfer PLGA hormon pertumbuhan manusia
InductOs (Wyeth (MDT)) Protein morfogenik tulang 2 Spons kolagen yang dapat diserap Perangkat medis yang dapat ditanam
PLGA, poli(asam laktida-ko-glikolat)
distribusi dapat cukup untuk mempengaruhi imunogenisitas
protein (Gambar 4). Namun, itu normal
sulit untuk menghubungkan perubahan tertentu dalam struktur protein
terhadap perubahan imunogenisitas.
Dua adalah kerumunan: mengatasi agregasi
Selama pemrosesan dan formulasi produk obat,
protein terkena kondisi yang bisa
efek signifikan pada stabilitas kimia dan fisiknya,
dan menyebabkan agregasi dan akhirnya presipitasi9,39–41 .
Oleh karena itu penting untuk memahami keadaan
dimana stabilitas protein terganggu. Utama
faktor geser/gemetar, suhu, pH dan protein
konsentrasi (lihat REF. 39 untuk ikhtisar terperinci). Mencukur
kekuatan yang dihadapi oleh pusaran dapat mempartisi protein
ke antarmuka udara-air, yang mendorong parsial
berlangsung pada paparan udara lebih hidrofobik
fase41,42 . Hal ini akan lebih terasa jika
fase kedua melibatkan pelarut organik seperti chlo roform43 .
Peningkatan suhu44 , perubahan pH atau
kondisi denaturan menengah45 juga dapat mendukung
pembentukan negara-negara seperti itu. Kecil, domain tunggal
protein biasanya membutuhkan kondisi ekstrim untuk terungkap,
tetapi untuk protein multidomain besar, beberapa 'tautan lemah'
terurai dalam kondisi yang relatif lembut bisa
cukup untuk memulai agregasi. Dibuka sebagian
negara jauh lebih rentan terhadap agregasi daripada
keadaan asli atau tidak terlipat, karena pemaparan daerah
hidrofobik yang bersebelahan yang terkubur di dalam
keadaan asli atau tidak ada dalam keadaan terdenaturasi40,46.
Meskipun agregasi pada dasarnya adalah bi-molekul,
ketergantungan pada konsentrasi akan mencerminkan
mekanisme proses. Jika terungkapnya negara asli
Tabel 2 | Modifikasi protein yang berpotensi imunogenik
Modifikasi Memengaruhi
Modifikasi yang direkayasa
Urutan asam amino Manusia versus analog dan protein non-manusia
Modifikasi kimia Asilasi, PEGilasi
Formulasi farmasi Liofilisasi, enkapsulasi mikro
Modifikasi yang tidak diinginkan selama pemrosesan, produksi, dan penyimpanan
Degradasi kimia Deamidasi, oksidasi
Degradasi fisik Denaturasi, agregasi, fibrilasi, kesalahan lipatan
PEG, polietilen glikol.
ULASAN ALAM | PENEMUAN OBAT
ULASAN
Modifikasi/sistem pengiriman Rute administrasi
Analog Intravena
Analog Subkutan
Analog Subkutan
Mono-pegilasi Subkutan
Mono-pegilasi Subkutan
Multi (4–6)-pegilasi Subkutan
Mono-asilasi Subkutan
Subkutan
membatasi laju, kinetika agregasi dapat menjadi pseudo-pertama
pesanan47,48 , sedangkan ada ketergantungan terbalik untuk
proses yang melibatkan antarmuka udara-air49 .Dimer awal
pembentukan terlihat dengan faktor perangsang koloni50 ,
sedangkan agregasi lisozim mengikuti urutan yang lebih tinggi
kinetika51 . Agregasi sering menunjukkan aktivasi yang tinggi
hambatan, yang membuat proses lambat, tidak dapat diubah dan
dikendalikan secara kinetik. Ini berarti bahwa penanganan
sejarah sampel dapat memiliki peran yang tidak proporsional dalam
hasil. Agregasi ireversibel, yang disebabkan oleh pengocokan
disulfida atau asosiasi hidrofobik yang stabil, dapat memiliki
dampak langsung pada potensi obat, imunogenisitas47 dan
respon protein yang tidak terlipat52,53 . Agregasi reversibel,
bagaimanapun, juga bisa menjadi masalah selama pemberian obat
administrasi, jika disosiasi lambat pada fisiologis
skala waktu. Kinetika disosiasi lambat dapat menjadi konsekuensi
dari efek crowding dalam tubuh, yang mendukung
negara agregat bahkan setelah dilution54,55 .
Rantai protein secara kimiawi kompleks dan dapat
mengasumsikan sejumlah astronomi konformasi yang mungkin,
stabilitas relatif yang sangat sensitif terhadap
pH, kekuatan ionik, dan suhu. Hal ini menciptakan besar
jumlah 'stasiun akhir konformasi'— termasuk
baik yang monomer maupun oligomer — itu
tergantung pada kondisi lingkungan (Gbr. 5). Gerbang agregat
bukan hanya tumpukan tanpa fitur; itu telah dikenal
lama agregasi itu umumnya cukup spesifik56 ,
melibatkan antarmuka oligomerisasi yang terdefinisi dengan baik.
Mungkin yang paling penting — dan tentu saja yang paling
dikarakterisasi dengan baik - keadaan agregasi adalah amiloid
fibril, terkait dengan penyakit neurodegeneratifseperti
Penyakit Alzheimer, Penyakit Parkinson, Penyakit Huntington
penyakit dan banyak lainnya. Anehnya, fibrilasi adalah
dieksploitasi dalam berbagai organisme, mulai dari
biofilm pada Escherichia coli 57 hingga pembentukan melanosom pada
manusia58 . Telah disarankan bahwa semua protein bisa
membentuk fibril dengan karakteristik struktural yang sama,
yaitu struktur lintas-ÿ dan paralel ÿ-heliks59 , terlepas dari
struktur asli dan urutan primer60 .
Ini menghadirkan potensi bahaya selama produksi
dan/atau penyimpanan. Fibrilasi sangat dianjurkan
dalam kondisi destabilisasi sedang, seperti pH
di bawah 3 atau di atas 10, suhu di atas 40o C dan/atau
konsentrasi denaturan menengah, yang memungkinkan
protein akses yang lebih baik ke konformasi lain sementara
mempertahankan beberapa struktur.
VOLUME 4 | APRIL 2005 | 301
Machine Translated by Google
ULASAN

Fibrilasi umumnya dimodelkan sebagai proses yang E45 (N28, K32) S45 (T28,Q32)
bergantung pada nukleasi, di mana nukleus terakumulasi selama
fase lag tanpa perubahan konformasi massal, diikuti oleh
akumulasi cepat dari protein berlapis fibril saat nukleus
diperpanjang61 . Fase lag biasanya sangat panjang, terutama
karena kesetimbangan orde tinggi yang mengarah ke inti tidak
menguntungkan pada konsentrasi protein rendah. Hal ini
membuat proses sangat sensitif terhadap konsentrasi protein;
untuk fibrilasi hemoglobin sel sabit, ketergantungan konsentrasi
hingga 50 telah diprediksi dan diamati62 . Mensimulasikan
agregasi dalam silika63,64 atau menyiapkan model matematika65
dapat berguna untuk memprediksi dan mencegah masalah
dalam produksi protein, tetapi tetap menantang untuk (N28, K32) (T28,Q32)
memasukkan semua faktor lingkungan yang memengaruhi
proses tersebut.
Agregasi pada dasarnya adalah penyimpangan dari jalur
pelipatan 'produktif', dan telah diusulkan bahwa lanskap atau
corong energi individu yang menggambarkan pelipatan protein
harus benar-benar direpresentasikan sebagai 'corong ganda',
yang kedua mewakili interaksi antarmolekul dari keadaan terlipat
66 .
sebagian (Gambar .6)
Pembentukan untaian ÿ antarmolekul dapat menjadi kekuatan
pendorong yang kuat untuk agregasi, dan kecenderungan untuk
(N28, K32) (T28,Q32)
membentuk untaian ÿ umumnya berkorelasi positif dengan
agregasi, berbeda dengan ÿ-heliks67 . Namun, baru-baru ini
disarankan bahwa ÿ-heliks dapat berkontribusi pada agregasi
melalui pembentukan kontak koil-koil68 , meskipun ini tidak
mungkin menjadi
untuk mekanisme
memprediksi umum.
tingkat Sekarang
agregasi dimungkinkan
absolut dan efek dari
perbedaan mutasi pada agregasi menggunakan pendekatan
fisika-kimia sederhana69-71 , seperti perubahan kecenderungan
struktur sekunder, hidrofobisitas, pola residu hidrofobik-hidrofilik
bolak-balik, pH, kekuatan ionik, konsentrasi, dan sebagainya.
P108 G108

Gambar 4 | Struktur protein dan imunogenisitas.

Sebagai contoh, lokasi berurutan asam amino hidrofobik
mengontrol fibrilasi amiloid ÿ (Aÿ) peptida72 dan insulin73 .
Kecenderungan agregasi bahkan dapat diprediksi pada tingkat
residu individu untuk menentukan hot spot agregasi69 . Residu
kunci 'penjaga gerbang' kadang-kadang terlibat dalam stabilisasi/
destabilisasi interaksi semacam itu, sehingga beberapa mutasi
dapat dengan mudah mengubah keseimbangan menuju bentuk
monomer74,75 . Namun, merupakan karakteristik kompleksitas
reaksi yang mengarah ke agregasi yang dimiliki oleh parameter
sederhana seperti pengadukan. belum dimasukkan ke dalam
model ini.
Jeda waktu mungkin merupakan parameter yang paling
penting dari sudut pandang formulasi. Sayangnya, sangat sulit
untuk diprediksi, tidak hanya karena sifat stokastik dari proses
nukleasi yang dapat menimbulkan fase jeda, tetapi juga karena
kompleksitas prosesnya. mekanisme yang terlibat. Adalah umum
untuk mengasumsikan bahwa waktu jeda mewakili kasus proses
61
nukleasi76. Fase lag juga dapat diamati
, tapibahkan
ini tidakdengan
selalu pasokan
benih fibrilasi yang telah dibentuk sebelumnya76 (JS Pedersen
dan DEO, pengamatan yang tidak dipublikasikan). Dalam kasus
seperti itu, fibrilasi lebih mungkin terjadi dipromosikan oleh fibril
kecil yang terfragmentasi menjadi entitas yang lebih kecil yang
dapat menangkap lebih banyak monomer sebelum mereka
terfragmentasi lagi, yang mengarah ke pertumbuhan eksponensial
fibril yang menjerat monomer77,78 . Di sini, fase lag tidak
memiliki interpretasi fisik yang sederhana, tetapi hanya
mencerminkan bahwa jumlah amiloid terlalu rendah untuk
Perbandingan permukaan molekul yang diwarnai
menurut potensial elektrostatik. Pengenalan mutasi asam
amino mengubah topografi dan polaritas secara lokal,
sedangkan struktur permukaan di luar lokasi mutasi
dipertahankan. Diadaptasi, dengan izin, dari REF. 38 © (2004)
Asosiasi Ahli Imunologi Amerika.
deteksi fase lag. Untuk sekuens poliglutamin yang terlibat dalam
penyakit Huntington, nukleus sebenarnya adalah monomer79 ,
mengungkapkan bahwa langkah pembatas laju bukanlah
perakitan spesies oligomer tetapi perubahan konformasi yang
terjadi pada tingkat monomer.
Dalam kasus di mana penyemaian telah terbukti mempercepat
proses, seperti untuk Aÿ peptida80 , ini mungkin memberikan
kelegaan bagi komunitas bioteknologi untuk mengetahui bahwa
kontaminan fibrilar palsu dari protein lain tidak perlu
mendatangkan malapetaka. Proses penyemaian sangat spesifik
dan menuntut urutan yang sangat dekat81 dan korespondensi
enantiomer82 antara monomer larut dan fibril; bahkan mutasi
titik dapat sepenuhnya menghapuskan kemampuan
penyemaian83 . Namun demikian, juga harus dicatat bahwa
protein fibrilasi dapat membentuk fibril yang berbeda secara
signifikan pada tingkat molekuler, hanya dengan memvariasikan
kondisi pertumbuhan seperti pengadukan/agregasi84 , suhu
atau kekuatan ionik (JS Pedersen dan DEO, pengamatan tidak
dipublikasikan), dan perbedaan ini dapat disebarkan dari satu
generasi ke generasi berikutnya. Polimorfisme ini adalah

302 | APRIL 2005 | VOLUME 4 www.nature.com/reviews/drugdisc

Machine Translated by Google
agregat tidak teratur
Perpaduan
agregat tidak teratur Fragmen yang terdegradasi
Gambar 5 | Banyak pilihan konformasi untuk rantai polipeptida. Diadaptasi,
dengan izin, dari REF. 138 © (2003) Macmillan Magazines Ltd.
ULASAN ALAM | PENEMUAN OBAT
Serat
Oligomer agregat tidak teratur
Dibuka Intermediat Warga asli
Kristal
Spesies prefibrillar
Fibril amiloid
seperti yang diharapkan, hanya karena belum ada tekanan
evolusioner untuk mengembangkan satu jenis fibril tertentu, dan
protein fibrillogenik biasanya fleksibel, memberikan akses ke
banyak konformasi. Studi kalorimetri85 dan struktural 86 juga
menunjukkan bahwa fibril lebih berpori daripada protein globular
konvensional .
Peptida lebih berbahaya daripada protein karena fleksibilitasnya
yang lebih besar dan akses ke pembentukan konformasi
fibrillogenik. Hormon peptida glukagon, yang tidak berfibrilasi
dalam tubuh, dapat berfibrilasi dengan cukup mudah jika salah
penanganan, misalnya, penyimpanan lama pada 2,5 mg per ml
atau lebih tinggi pada suhu 37oC87 . Adalah mungkin untuk
memilih varian peptida yang kurang rawan agregasi dengan
menggabungkan peptida yang dimaksud dengan protein fluoresen
hijau (GFP), yang tidak menunjukkan fluoresensi ketika
terakumulasi dalam badan inklusi 88 dan dengan demikian
menunjukkan hilangnya struktur dan fungsi biologis.
Merumuskan umur panjang: aditif dan penyimpanan
Pekerjaan terbaru telah mengungkapkan korelasi yang kuat
antara berbagai jenis stabilitas kinetik, seperti yang dievaluasi
dengan membuka dalam kondisi denaturan dan deterjen, serta
oleh resistensi proteolisis89sheet
, danoligomer
telah menemukan
menjadi sangat
proteinkuat.
ÿ-
Protein-protein ini lebih kaku daripada rekan-rekan ÿ-helix atau
campuran ÿ / ÿ mereka.
Secara analogi, protein menjadi kaku dan stabil secara kinetik
dalam konsentrasi pelarut organik yang sangat tinggi 90,91
mungkin karena kurangnya air curah yang bertindak sebagai
pelumas dapat mengurangi kekuatan pendorong energetik untuk
pembukaan parsial dan global. Stabilitas kinetik dapat ditingkatkan
dengan memperkenalkan mutasi hidrofobik, ikatan disulfida,
jembatan garam dan ion logam pada permukaan protein untuk
menstabilkan dan mengeraskan daerah yang terlibat dalam pembukaanmelalui
lokal92ekor
. alifatik103 .
ULASAN
Karena konsekuensi serius dari fibrilasi protein pada penyakit
neurodegeneratif, pencegahan agregasi in vivo adalah subjek
penelitian intensif93. Banyak protein fibrilasi yang relevan secara
medis telah mengalami prosedur penyaringan ekstensif,
menghasilkan lead molekul kecil yang menjanjikan untuk ÿ
-synuclein94 dan tau95 , misalnya. Fragmen peptida fibrilasi, yang
dapat berikatan dengan tepi tumbuh fibril dengan ikatan hidrogen
tetapi mencegah pemanjangan lebih lanjut karena ukurannya yang
kecil (atau dengan memasukkan residu 'pemecah-ÿ' seperti prolin),
juga memiliki efek 96 .A kombinasi dari dua pendekatan ini
mengarah pada penggunaan molekul kecil dengan pola ikatan
hidrogen yang melengkapi untai ÿ yang terbuka, tetapi tidak
dengan untaian ÿ baru yang masuk97 .
Pendekatan 'Trojan horse' yang lebih cerdik adalah memasangkan
pewarna pengikat fibril dengan peptida, yang, ketika berada di
dalam sel, mengikat pendamping FK506-binding protein (FKBP),
sehingga meningkatkan curah steriknya dan menghalangi fibrilasi
lebih lanjut98. Menghambat agregasi di bawah kondisi yang
relevan dengan aplikasi in vitro jelas juga sangat penting.
Mutagenesis untuk mengurangi agregasi adalah masalah karena
dapat memerlukan uji klinis ekstensif untuk mendokumentasikan
kurangnya efek samping lainnya. Oleh karena itu, pendekatan
yang lebih langsung adalah mengubah kondisi formulasi protein,
tetapi ini juga menantang. Banyak protein terapeutik diperlukan
dalam dosis tinggi, diberikan sebagai bagian dari rejimen dosis
sering, yang berarti penting untuk menjaganya agar tetap larut
secara stabil untuk waktu yang lama pada konsentrasi puluhan
mg per ml. protein adalah tugas yang kompleks, karena
kecenderungan protein untuk berinteraksi dengan diri mereka
sendiri, permukaan dan zat terlarut. Dari sekian banyak teknik u
sed untuk pemekatan protein, tidak ada yang tanpa masalah99 ,
dan sebagian besar hanya sesuai pada konsentrasitertentu.
protein
Saat ini, pencegahan agregasi sebagian besar masih bersifat
empiris, karena kurangnya wawasan tentang detail molekuler dari
proses agregasi (lihat REF. 39 untuk gambaran umum yang
sangat baik tentang berbagai pendekatan). Salah satu pendekatan
yang populer adalah menstabilkan protein dan dengan demikian
mengurangi akses ke konformasi yang terlipat sebagian yang
mendukung agregasi melalui kontak hidrofobik, misalnya. Strategi
tipikal adalah menambahkan gula atau garam ke dalam larutan protein.
Zat terlarut ini dianggap lebih disukai dikecualikan dari permukaan
protein, oleh karena itu mendukung keadaan padat100,101 .
Namun, karena agregasiper
mengubur
molekullebih banyak
protein, luas permukaan
stabilisasi yang
berlebihan pada akhirnya dapat menyebabkan agregasi.
Stabilisator lainnya termasuk poliol, PEG, dan polimer lain yang
secara sterik menghambat interaksi protein-protein dan membatasi
difusi. Asam amino bebas juga sering digunakan; arginin sangat
baik dalam mencegah agregasi selama pelipatan kembali protein
dari badan inklusi102 .
Pendekatan yang lebih canggih adalah dengan menambahkan
masing-masing 50 mM arginin dan glutamat, yang mengarah pada
, peningkatan stabilitas sampel jangka panjang, dan juga mencegah
agregasi, presipitasi, dan proteolisis103 . Telah diusulkan bahwa
dasar untuk efek luar biasa ini terletak pada kapasitas pasangan
untuk menetralkan muatan berlawanan (yang jika tidak akan
mengarah pada asosiasi antarmolekul) dikombinasikan dengan
kemampuan untuk menutupi daerah hidrofobik yang berdampingan
VOLUME 4 | APRIL 2005 | 303
Machine Translated by Google
ULASAN
Status tidak terlipat
Pengumpulan Melipat
Energi
Intermediat
Agregat Negara asal
Gambar 6 | Corong ganda lipat dan agregasi. Lipat adalah perjalanan melalui ruang
konformasi, yang arsitekturnya peka terhadap kondisi lingkungan, termasuk konsentrasi
protein. Apakah protein memilih corong pelipatan atau agregasi akan bergantung pada kondisi
ini. Perhatikan bahwa corong agregasi kurang bergerigi daripada corong asli, menekankan
bahwa ada ruang untuk lebih banyak 'pemberian konformasi' karena pembatasan yang lebih
rendah pada konformasi agregat. Diadaptasi, dengan izin, dari REF. 66 © (2004) Ilmu Elsevier.
Deterjen dan amfifil lainnya. Deterjen non-ionik sering
digunakan untuk mengurangi efek geser, karena mereka
mengungguli protein yang bersaing pada antarmuka udara-
air104 , tetapi ini kadang-kadang dapat diimbangi dengan
agregasi yang dipercepat di bawah penyimpanan rak tanpa
107 ,
gerak jangka panjang105 . Mereka
tidak selalu kadang-kadang
disebabkan 106. .Surfaktan
olehmencegah
mampu panas , tetapi
agresi
ionik umumnya mendenaturasi, tetapi lipatan reversibel telah
digunakan untuk mencegah agregasi RNase108 yang
terdenaturasi panas . Mereka cenderung menstabilkan
konformasi ÿ-heliks yang tidak membentuk kontak antarmolekul
dengan kesigapan yang sama seperti helai ÿ. Namun, sama
seperti air– permukaan kloroform dapat menjadi stimulan yang
kuat untuk agregasi43 , penelitian terbaru menunjukkan bahwa
permukaan anionik mendorong agregasi dan fibrilasi protein —
misalnya, melalui vesikel fosfolipid bermuatan negatif109,110
,
surfaktan anionik111 dan manik-manik polistiren termodifikasi
karboksilat112 . Lingkungan fosfolipid yang ditemui secara in
vivo beragam secara kimiawi, memberikan peluang untuk
interaksi hidrofobik di wilayah transmembran serta kontak polar
dan elektrostatik melalui kelompok kepala lipid di membran.
Telah disarankan bahwa permukaan lipid bertindak untuk
memusatkan dan menyelaraskan molekul protein. , mungkin
melalui kelompok residu kationik pada protein. Mekanisme lain
dapat berupa permukaan negatif untuk menstabilkan konformasi
monomer fibrillogenik, yang melalui interaksi antarmolekul
membentuk nukleus untuk fibrilasi berikutnya112 .
Siklodekstrin. Sebuah kelas zat yang telah ditemukan memiliki
potensi signifikan dalam mengurangi agregasi adalah
siklodekstrin. Ini adalah polimer sirkular yang biasanya terdiri dari limabeku tidak mudah; penyimpanan yang dipercepat
304 | APRIL 2005 | VOLUME 4
menjadi tujuh cincin glukosa113 , meskipun polimer yang lebih
besar juga terjadi114 .Siklodekstrin menekan agregasi protein
yang relevan secara terapeutik, seperti insulin115–117 dan
hormon pertumbuhan118,119
, lain120,121serta
. beberapa protein
Ini berasal dari kemampuannya untuk mengikat residu
aromatik122, yang dapat mengarah pada stabilisasi preferensial
dari keadaan tidak terlipat123 dan pengurangan tingkat pelipatan124 .
Kemampuan untuk menekan agregasi juga menyebabkan
penggunaannya sebagai pendamping sederhana untuk pelipatan
kembali protein dalam kombinasi dengan SDS107,125 . ÿ-
siklodekstrin yang umum digunakan tidak disetujui untuk
konsumsi manusia dalam bentuk yang tidak dimodifikasi karena
mampu mengekstraksi komponen biomembran126
membentuk
, dan
kompleks yang sangat tidak larut dengan kolesterol, yang dapat
menyebabkan efek toksik setelah paparan yang lama127 .Namun,
derivatisasi ÿ secara hati-hati -siklodekstrin mengubah
selektivitasnya terhadap komponen biomembran dan
meminimalkan toksisitasnya127 . Formulasi obat yang
mengandung hidroksipropil-ÿ-siklodekstrin (untuk peptidasleucine
enkephelin dan antagonis reseptor neuromedinB) dan
sulphobutylether-ÿ-cyclodextrin (untuk obat molekul kecil
ziprasidone (Geodon; Pfizer) dan vorikonazol (Vfend; Pfizer)
telah disetujui untuk obat parenteral administrasi.
Liofilisasi. Menyimpan protein dalam larutan pada suhu rendah
umumnya memperpanjang umur simpannya. Protein dapat
didenaturasi pada suhu rendah dalam fase cair, tetapi, secara
umum, denaturasi dingin bersifat reversibel, tidak seperti
kebanyakan denaturasi suhu tinggi, sehingga tidak menimbulkan
masalah praktis128 . Pembekuan jelas menyediakan akses ke
suhu yang bahkan lebih rendah, tetapi siklus pembekuan-
pencairan berulang dapat sangat merangsang agregasi dengan
memberikan permukaan nukleasi pada permukaan antar es-
air105 serta menyebabkan
, fase129 perubahan
. Oleh karena pH dan pemisahan
itu, pendekatan lain adalah
membatasi mobilitas protein dengan liofilisasi atau pengeringan
beku ,Misalnya.
Pengeringan beku adalah pemisahan air cair dari larutan yang
dibekukan menjadi es dengan sublimasi vakum, meninggalkan
zat terlarut dalam keadaan anhidrat atau hampir anhidrat .
prinsip fisika kimia dan teknik, dengan mempertimbangkan
parameter seperti komposisi dan konsentrasi produk, jenis
wadah, peralatan dan siklus proses (termasuk pengeringan
primer dan sekunder).
Metode ini bukannya tanpa tantangan, karena presipitasi yang
berbeda dari buffer atau komposisi pelarut lainnya selama
pembekuan dapat menyebabkan perubahan pH yang
menginaktivasi protein secara ireversibel. Hal ini dapat diatasi
dengan eksipien, seperti karbohidrat tertentu, polimer larut,
garam dan senyawa volatil, yang membentuk kaca selama
pembekuan, yang pada dasarnya menjaga sifat cair dalam
keadaan padat dan mencegah kristalisasi yang tidak diinginkan
dan reaksi samping kimia. Namun, pengaruhnya terhadap suhu
kaca juga harus diperhitungkan.
Suhu dan tekanan ruang keduanya mempengaruhi tingkat
sublimasi dan dapat dikombinasikan dengan bijaksana untuk
menghindari panas berlebih dan keruntuhan struktural dari
jaringan zat terlarut terliofilisasi. Menilai stabilitas produk kering
www.nature.com/reviews/drugdisc
Machine Translated by Google
ULASAN

pengujian dengan penekanan produk dapat menyesatkan,
karena kinetika Arrhenius yang digunakan untuk
mengekstrapolasi ke suhu rendah tidak sesuai untuk suhu
di sekitar transisi gelas132. Perlu juga dicatat bahwa protein
dapat mengalami perubahan konformasi reversibel dalam
keadaan terliofilisasi yang mengekspos sebaliknya terkubur
daerah, membuat mereka rentan terhadap reaksi samping
yang tidak diinginkan, seperti pengocokan ikatan disulfida di
hadapan jejak kelembaban. Contohnya termasuk insulin133
dan ÿ-galactosidase134 (lihat juga REF.135 dan referensi di dalamnya
untuk ).mengurangi atau mencegah degradasi kimia,
Reaksi ikatan silang lainnya meliputi transamidasi insulin136
dan pembentukan ditirosin yang terjadi di bawah kondisi
oksidatif atau tekanan ultraviolet137 .
Kesimpulan
Keberhasilan pengembangan obat-obatan berbasis protein
bergantung pada pemahaman mendalam tentang
karakteristik fisiko-kimia dan biologisnya, termasuk
stabilitas kimia dan fisik, dan profil kemanjuran dan
keamanannya. Untuk mendapatkan protein terapeutik yang
baru dan aman ke pasar lebih cepat, penting untuk
mendapatkan pemahaman rinci tentang jenis modifikasi
protein apa yang dapat diterima dari sudut pandang
keamanan dan kemanjuran di awal proses pengembangan.
Namun, sama pentingnya untuk memahami mekanisme
dimana struktur protein dapat dijanjikan selama pemrosesan
massal dan produksi produk akhir. Ini termasuk strategi
denaturasi, agregasi, dan perubahan struktural lainnya yang
terbukti menghambat keberhasilan pengembangan obat.
Merupakan tanggung jawab bersama akademisi, industri
farmasi, dan otoritas pengatur untuk menetapkan latar
belakang ilmiah untuk pengujian dan penilaian biofarmasi
baru yang aman dan cepat untuk kepentingan pasien dan
masyarakat.

1. Holmer, Survei AF: Obat Dalam Pengembangan untuk
HIV/ AIDS (Pharmaceutical Research and Manufacturers
Association, Washington DC, 2004).
2. Layanan Konsultasi IBM. Pharma 2010: Ambang Inovasi (IBM, 2003).
3. Dobson, CM Ruang Kimia dan Biologi. alam 432,
824–828 (2004).
4. Pavlou, AK & Reichert, JM Terapi protein rekombinan —
tingkat keberhasilan, tren pasar, dan nilai hingga 2010. Nature
Biotechnol. 22, 1513–1519 (2004).
5. Krishnamurthy, R. & Manning, MC Faktor stabilitas: pentingnya
pengembangan formulasi. Kur. Farmasi.
Biotek. 3, 361–371 (2002).
6. Wang, W. Ketidakstabilan, stabilisasi, dan perumusan cairan
farmasi protein. Int. J. Farmasi. 185, 129–188 (1999).
7. Hermelin, S., Crommelin, DJA, Schellekenes, H. & Jiskoot, W.
Struktur-imunogenisitas hubungan protein terapeutik. Farmasi.
Res. 21, 897–903 (2004).
8. Ahern, TJ & Manning, MC (eds) Stabilitas Farmasi Protein — Bagian
A: Jalur Kimia dan Fisik Degradasi Protein Seri Bioteknologi
Farmasi Vol. 2 (Plenum, New York, 1992).
9. Cleland, JL, Powell, MF & Shire, SJ Pengembangan formulasi protein
yang stabil: melihat dari dekat agregasi protein, deamidasi dan oksidasi.
Kritik. Pdt. Sistem Pengangkut Narkoba. 10, 307–377 (1993).
10. Alpar, HO, Somavarapu, S., Atuah, KN & Bramwell, VW
Partikel mukoadhesif yang dapat terbiodegradasi untuk antigen
hidung dan paru serta pengiriman DNA. Lanjut Pengiriman Obat.
Wahyu 57, 411–430 (2005).
11. Hussain, A., Arnold, JJ, Khan, MA & Ashan, F. Peningkat penyerapan
dalam pengiriman protein paru.
J.Kontrol. Rilis 94, 15–24 (2004).
12. Brange, J., Owens, DR, Kang, S. & Vølund, A. Insulin monomer dan
implikasi eksperimental dan klinisnya.
Perawatan Diabetes 13, 923–954 (1990).
13. Kurtzhals, P. et al. Pengikatan albumin insulin diasilasi dengan asam
lemak: karakterisasi interaksi ligan-protein dan korelasi antara afinitas
pengikatan dan waktu efek insulin in vivo. Biokimia. J.312 , 725–731
(1995).
14. Markussen, J. et al. Insulin asilasi asam lemak yang larut berikatan dengan
albumin dan menunjukkan aksi yang berlarut-larut pada babi.
Diabetologia 39, 281–288 (1996).
15. Knudsen, LB dkk. Turunan potensial dari peptida-1 seperti glukagon
dengan sifat farmakokinetik yang cocok untuk pemberian sekali
sehari. J.Med. kimia 43, 1664–1669 (2000).
16. Foldvari, M. et al. Derivatif palmitoil dari interferon ÿ: potensi pengiriman
kulit. J. Farmasi. Sains. 87, 1203–1208 (1998).
17. Wang, J., Shen, D. & Shen, WC Persiapan, pemurnian, dan
karakterisasi desmopressin lipidisasi reversibel dengan potensi
aktivitas anti-diuretik. Farmasi. Res. 16, 1674–1679 (1999).
18. Bhadra, D., Bhadra, S., Jain, P. & Jain, NK Pegnologi:
tinjauan sistem PEG-ylated. Pharmazie 57, 5–29 (2002).
19. Matthews, SJ & McCoy, C. Peginteferon ÿ2a: ulasan tentang
penggunaan yang disetujui dan diselidiki. Klinik. Ada. 26,
991–1025 (2004).
20. Lee, H.-J. & Park, TG Persiapan dan karakterisasi faktor pertumbuhan
epidermal mono-PEGylated: evaluasi aktivitas biologis in vitro .
Farmasi. Res. 19, 845–851 (2002).
21. Veronese, F. & Harris, JM Pengantar dan ikhtisar pegilasi peptida
dan protein. Lanjut Pengiriman Obat. Wahyu 54, 453–459 (2002).
22. Dailey, LA, Wittmar, M. & Kissel, T. Peran poliester bercabang dan
modifikasinya dalam pengembangan kendaraan pengiriman obat
modern. J.Kontrol. Rilis 101, 137–149 (2005).
23. Kopecek, J. Smart dan biomaterial rekayasa genetika dan sistem
pengiriman obat. eur. J. Farmasi. Sains. 20, 1–16 (2003).
24. Crommelin, DJ dkk. Pendekatan nanoteknologi untuk pengiriman
makromolekul. J.Kontrol. Rilis 87, 81–88 (2003).
25. Peppas, NA, Bures, P., Leobandung, W. & Ichikawa, H.
Hidrogel dalam formulasi farmasi. eur. J. Farmasi.
Biofarm. 50, 27–46 (2000).
26. Packhaeuser, CB, Schnieders, J., Oster, CG & Kissel, T. In situ membentuk
sistem pengiriman obat parenteral: ikhtisar.
eur. J. Farmasi. Biofarm. 58, 445–455 (2004).
27. Metselaar, JM, Mastrobattista, E. & Storm, G. Liposom untuk penargetan
obat intravena: desain dan aplikasi. Mini Rev.Med. kimia 4, 319–329
(2002).
28. Muller, R., Radtke, M. & Wissing, SA Matriks lipid berstruktur nano
untuk meningkatkan mikroenkapsulasi obat. Int. J.
Farmasi. 248, 121–128 (2002).
29. Bjerregaard, S. et al. Emulsi air/minyak parenteral yang mengandung
senyawa hidrofilik dengan peningkatan retensi in vivo : formulasi,
karakterisasi reologi dan studi nasib in vivo menggunakan
gammascintography seluruh tubuh. Int. J. Farmasi. 215, 13–27 (2001).
30. Pedersen, TB, Sabra, MC, Frokjaer, S., Mouritsen, OG & Jorgensen, K.
Asosiasi dekapeptida kationik asilasi dengan membran lipid
dipalmitoylphosphatidylserine dipalmitoylphosphatidylcholine. kimia
Fisika. Lipid 113, 83–95 (2001).
31. Jørgensen, K., Davidsen, J. & Mouritsen, OG Mekanisme biofisik
aktivasi phosholipase A2 dan penggunaannya dalam pengiriman
berbasis liposom. FEB Lett. 531, 23–27 (2002).
32. Ross, C. dkk. Imunogenisitas interferon-ÿ pada pasien multiple
sclerosis: pengaruh persiapan, dosis, frekuensi dosis, dan rute
pemberian. Ann. Neurol. 48, 706–712 (2000).
33. Sorensen, PS dkk. Kepentingan klinis dari antibodi penawar terhadap
interferon-ÿ pada pasien dengan multiple sclerosis yang kambuh.
Lancet 203, 1184–1191 (2003).
34. Casadevall, N. et al. Aplasia sel darah merah murni dan antibodi
antierythropoitin pada pasien yang diobati dengan erythropoietin rekombinan. 52. Gass, JN, Gunn, KE, Sriburi, R. & Brewer, JW
N.Engl. J.Med. 346, 469–475 (2002).
35. Casadevall, N. Antibodi terhadap rHuEPO: asli dan
rekombinan. Nefro. Panggil. Transplantasi. 17 (Sup. 5), 42–47 (2002).
36. Hermelin, S., Schellekenes, H., Crommelin, DJ & Jiskoot, protein terkait
W. Micelle dalam formulasi epoetin: faktor risiko imunogenisitas?
Farmasi. Res. 20, 1903–1907 (2003).
37. Jørgensen, L., Van de Weert, M., Vermehren, C.,
Bjerregaard, S. & Frokjaer, S. Menyelidiki perubahan struktural
protein yang dimasukkan ke dalam emulsi air dalam minyak. J. Farmasi.
Sains. 93, 1847–1859 (2004).
38. Holm, J. et al. Rekayasa vaksin alergi: epitop
modulasi Bet v 1 rekombinan mengurangi pengikatan IgE tetapi
mempertahankan pola pelipatan protein untuk induksi respons
antibodi pemblokiran protektif. J. Imunol. 173, 5258–5267 (2004).
39. Wang, W. Agregasi protein dan penghambatannya dalam
biofarmasi. Int. J. Farmasi. (dalam tekanan).
40. Fink, AL Agregasi protein: agregat lipat, badan inklusi dan amiloid. Lipat
Des. 3, R9–R29 (1998).
41. Carpenter, JF, Kendrick, BS, Chang, BS, Manning, MC
& Randolph, TW dalam Methods in Enzymology (ed. Wetzel, R.) 236–
255 (Academic, San Diego, 1999).
42. Gidelevitz, D., Zhengoing, H. & Rice, SA Lipatan protein pada antarmuka
udara-air dipelajari dengan reflektifitas sinar-X.
Proses Natl Acad. Sains. AS 96, 2608–2611 (1999).
43. Nichols, MR, Moss, M., Reed, DK, Hoh, JH &
Rosenberry, TL Perakitan cepat amyloid-ÿ peptide pada antarmuka
cair/cair menghasilkan serat ÿ-sheet yang tidak stabil.
Biokimia 44, 165–173 (2005).
44. Kato, A. & Takagi, T. Pembentukan struktur ÿ-sheet antarmolekul
selama denaturasi panas ovalbumin. J.Agri.
Makanan Kimia. 36, 1156–1159 (1988).
45. Pedersen, JS, Christiansen, G. & Otzen, DE Modulasi fibrilasi S6 dengan
membuka tingkat dan residu penjaga gerbang.
J.Mol. Biol. 341, 575–588 (2004).
46. Fields, G. & Alonso, D. Teori agregasi protein dan kopolimer. J.Fis. kimia
B 96, 3674–3981 (1992).
47. Chi, EY, Krishnan, S., Randolph, TW & Carpenter, JF
Stabilitas fisik protein dalam larutan berair: mekanisme dan kekuatan
pendorong dalam agregasi protein non-asli. Farmasi.
Res. 20, 1325–1336 (2003).
48. Kendrick, BS, Tukang Kayu, JF, Cleland, JL &
Randolph, TW Ekspansi sementara dari keadaan asli mendahului
agregasi interferon-ÿ manusia rekombinan.
Proses Natl Acad. Sains. AS 95, 14142–14146 (1998).
49. Treuheit, MJ, Kosky, AA & Brems, DN Terbalik
hubungan konsentrasi protein dan agregasi. Farmasi.
Res. 19, 511–516 (2002).
50. Krishnan, S. dkk. Agregasi faktor perangsang koloni granulosit
dalam kondisi fisiologis: karakterisasi dan penghambatan
termodinamika. Biokimia 41, 6422–6431 (2002).
51. Hevehan, D. & De Bernardez-Clark, E. Renaturasi oksidatif lisozim pada
konsentrasi tinggi. Bioteknologi. Bioeng. 54, 221–230 (1997).
Sel B stres? Diferensiasi sel plasma dan
respon protein terbuka. Tren Immunol. 25, 17–24 (2004).
53. Rutkowski, DT & Kaufman, RJ Perjalanan ke UGD: mengatasi
dengan stres. Tren Biol Sel. 14, 20–28 (2004).
54. Ellis, RJ Macromolecular crowding: tapi penting
aspek lingkungan intraseluler yang terabaikan. Kur. Opin.
Struktur. Biol. 11, 114–119 (2001).

ULASAN ALAM | PENEMUAN OBAT VOLUME 4 | APRIL 2005 | 305

Machine Translated by Google
ULASAN
55. Minton, AP Pengaruh volume yang dikecualikan pada
struktur dan asosiasi makromolekul dalam media 'ramai'. Kur.
Opin. Biotek. 8, 65–69 (1997).
56. London, J., Skrzynia, C. & Goldberg, ME Renaturasi Escherichia coli
tryptophanase setelah terpapar 8M urea.
Bukti keberadaan pusat nukleasi. eur. J.
Biokimia. 47, 409–415 (1974).
57. Chapman, MR dkk. Peran operon Eschericia coli curli dalam mengarahkan
pembentukan serat amiloid. Sains 295, 851–855 (2002).
58. Huff, ME, Balch, WE & Kelly, JW Pathological and
pembentukan amiloid fungsional diatur oleh jalur sekretori. Kur. Op.
Struktur. Biol. 13, 674–682 (2003).
59. Sunde, M. dkk. Struktur inti umum dari fibril amiloid oleh difraksi sinar-X
synchrotron. J.Mol. Biol. 273, 729–739 (1997).
60. Dobson, CM Kesalahan lipatan protein, evolusi dan penyakit.
Tren Biokimia. Sains. 24, 329–332 (1999).
61. Harper, JD & Lansbury, PT Model penyemaian amiloid pada penyakit
Alzheimer dan scrapie: kebenaran mekanistik dan konsekuensi
fisiologis dari kelarutan protein amiloid yang bergantung pada waktu.
Tahun. Pendeta Biokimia. 66, 385–407 (1997).
62. Cao, Z. & Ferrone, FA Reaksi orde ke-50 diprediksi dan diamati untuk
nukleasi hemoglobin sabit. J.Mol. Biol. 256, 219–222 (1996).
63. Patro, SY & Przybycien, TM Simulasi struktur agregat protein yang
ireversibel secara kinetik. Biofisika. J.66 , 1274–1289 (1994).
64. Simulasi Istrail, S., Schwartz, R. & King, J. Lattice
corong agregasi untuk pelipatan protein. J.Komput. Biol. 6, 143–
162 (1999).
65. Ferrone, F. Analisis kinetika agregasi protein. Met.
Enzimol. 309, 256–274 (1999).
66. Clark, PL Lipatan protein di dalam sel: membentuk kembali corong
lipat. Tren Biokimia. Sains. 29, 527–534 (2004).
67. Chiti, F. et al. Partisi kinetik pelipatan dan agregasi protein.
Struktur Alam. Biol. 9, 137–143 (2002).
68. Kunjithapatham, R. et al. Peran ÿ-helix dalam agregasi protein yang
menyimpang. Biokimia 44, 149–156 (2005).
69. Fernandez-Escamilla, AM, Rousseau, F., Schymkowitz, J.
& Serrano, L. Prediksi efek urutan-tergantung dan mutasi pada
agregasi peptida dan protein. Bioteknologi Alam. 22, 1302–
1306 (2004).
70. Chiti, F., Stefani, M., Taddei, N., Ramponi, G. & Dobson, CM
Rasionalisasi efek mutasi pada tingkat agregasi peptida dan
protein. Alam 424, 805–808 (2003).
71. DuBay, KF dkk. Memprediksi tingkat agregasi absolut dari rantai
polipeptida amiloidogenik. J.Mol. Biol. 341, 1317–1326 (2004).
72. Fraser, PE dkk. Konformasi dan fibrillogenesis dari
Peptida Alzheimer Aÿ dengan substitusi terpilih dari residu bermuatan.
J.Mol. Biol. 244, 64–73 (1994).
73. Frokjaer, S. dkk. Menyelidiki mekanisme pembentukan fibril insulin
dengan mutan insulin. Biokimia 40, 8397–8409 (2001).
74. Otzen, DE, Kristensen, P. & Oliveberg, M. Dirancang protein tetramer zip
bersama dengan urutan Alzheimer: petunjuk struktural perakitan
amiloid. Proses Natl Acad. Sains.
AS 97, 9907–9912 (2000).
75. Otzen, DE & Oliveberg, M. Jalan memutar yang diinduksi garam
daerah padat lanskap pelipatan protein. Proses Natl Acad. Sains. AS
96, 11746–11751 (1999).
76. Ferrone, F. Analisis kinetika agregasi protein. Met.
Enzimol. 309, 256–274 (1999).
77. Hall, D. & Edskes, H. Prion diam menunggu: dua pukulan
model pembentukan prion/amiloid dan infeksi. J.Mol. Biol. 336, 775–
786 (2004).
78. Masel, J. & Jansen, VA Merancang obat untuk menghentikan
pembentukan agregat prion dan amiloid lainnya. Biofisika.
kimia 88, 47–59 (2000).
79. Usia onset penyakit Chen, S., Ferrone, F. & Wetzel, R. Huntington terkait
dengan nukleasi agregasi poliglutamin.
Proses Natl Acad. Sains. AS 99, 11884–11889 (2002).
80. Jarrett, JT, Berger, EP & Lansbury, PT Karboksi
ujung protein ÿ amiloid sangat penting untuk pembenihan pembentukan
amiloid: implikasi untuk patogenesis Penyakit Alzheimer. Biokimia 32,
4693–4697 (1993).
81. Krebs, MR, Morozova-Roche, LA, Daniel, K.,
Robinson, CV & Dobson, CM Pengamatan spesifisitas urutan dalam
penyemaian fibril amiloid protein. Ilmu Protein. 13, 1933–1938 (2004).
82. Wadai, H. et al. Pembentukan fibril seperti amiloid stereospesifik oleh
fragmen peptida ÿ2-mikroglobulin. Biokimia 44, 157–164 (2004).
83. O'Nuallain, B., Williams, AD, Westermark, P. & Wetzel, R.
Spesifisitas penyemaian dalam pertumbuhan amiloid
yang diinduksi oleh fibril heterolog. J.Biol. kimia 279, 17490–17499 (2004).
84. Petkova, AT dkk. Menyebar sendiri, tingkat molekuler
polimorfisme pada fibril ÿ-amiloid Alzheimer. Sains 307, 262–265
(2005).
306 | APRIL 2005 | VOLUME 4
Lihat statistik publikasi
85. Kardos, J., Yamamoto, K., Hasegawa, K., Naiki, H. & Goto, Y.
Pengukuran langsung parameter termodinamika pembentukan
amiloid dengan kalorimetri titrasi isotermal. J.Biol.
kimia 279, 55308–55314 (2004).
86. Perutz, MF, Finch, JT, Berriman, J. & Lesk, A. Amyloid
serat adalah nanotube berisi air. Proses Natl Acad. Sains. Amerika Serikat
99, 5591–5595 (2002).
87. Onoue, S. et al. Kesalahan penanganan peptida terapeutik
glukagon menghasilkan fibril amiloidogenik sitotoksik. Farmasi.
Res. 21, 1274–1283 (2004).
88. Mutasi Wurth, C., Guimard, NK & Hecht, MH yang mengurangi
agregasi peptida Aÿ42 Alzheimer: pencarian yang tidak bias untuk
penentu urutan amiloidogenesis Aÿ. J.Mol. Biol. 319, 1279–1290
(2002).
89. Manning, M. & Colón, W. Dasar struktural stabilitas kinetik protein:
resistensi terhadap natrium dodesil sulfat menunjukkan peran sentral
untuk kekakuan dan bias terhadap struktur ÿ-sheet.
Biokimia 43, 11248–11254 (2004).
90. Klibanov, AM Mengapa enzim kurang aktif dalam organik
pelarut daripada di air? Tren Bioteknol. 15, 97–101 (1997).
91. Partridge, J., Moore, BD & Halling, PJ ÿ-chymotrypsin
stabilitas dalam campuran berair-asetonitril: apakah enzim asli stabil
secara termodinamika atau kinetik di bawah kondisi air rendah? J.Mol.
Katal., Enzim B. 6, 11–20 (1999).
92. Machius, M., Declerck, N., Huber, R. & Wiegand, G. Stabilisasi kinetik
Bacillus licheniformis ÿ-amilase melalui pengenalan residu hidrofobik
di permukaan. J.Biol.
kimia 278, 11546–11553 (2003).
93. Murphy, CM Peptida agregasi pada penyakit neurodegeneratif. Tahun.
Pendeta Biomed. Eng. 4, 155–174 (2002).
94. Conway, KA, Rochet, J.-C., Bieganski, RM &
Lansbury, PT Stabilisasi kinetik dari protofibril ÿ-synuclein dengan
adisi dopamin-ÿ-synuclein. Sains 294, 1346–1349 (2001).
95. Taniguchi, S. dkk. Penghambatan pembentukan filamen tau yang
diinduksi heparin oleh fenotiazin, polifenol, dan porfirin.
J.Biol. kimia 280, 7614–7623 (2005).
96. Tjernberg, LO dkk. Penangkapan pembentukan fibril ÿ-amiloid oleh ligan
pentapeptida. J.Biol. kimia 271, 8545–8548 (1996).
97. Rzepecki, P. et al. Pencegahan penyakit Alzheimer
agregasi Aÿ terkait dengan ligan ÿ-sheet nonpeptidic yang dirancang
secara rasional. J.Biol. kimia 279, 47497–47505 (2004).
98. Gestwicki, JE, Crabtree, GR & Graef, IA Harnessing
pendamping untuk menghasilkan inhibitor molekul kecil dari agregasi ÿ
amiloid. Sains 306, 865–869 (2004).
99. Shire, SJ, Shahrokh, Z. & Liu, JH Tantangan di
pengembangan formulasi konsentrasi protein tinggi.
J. Farmasi. Sains. 93, 1390–1402 (2004).
100. Timasheff, S. Hidrasi protein, pengikatan termodinamika, dan hidrasi
preferensial. Biokimia 41, 13473–13482 (2002).
101. Baldwin, RL Bagaimana interaksi ion Hofmeister mempengaruhi
stabilitas protein. Biofisika. J.71 , 2056–2063 (1996).
102. De Bernardez-Clark, E., Schwarz, E. & Rudolph, R. Penghambatan
reaksi samping agregasi selama pelipatan protein in vitro .
Met. Enzimol. 309, 217–236 (1999).
103. Golovanov, AP, Hautbergue, GM, Wilson, SA & Lian, L.-Y.
Metode sederhana untuk meningkatkan kelarutan protein dan
stabilitas jangka panjang. Selai. kimia Soc. 126, 8933–8939 (2004).
104. Webb, SD, Cleland, JL, Carpenter, JF & Randolph, TW
Mekanisme baru untuk mengurangi agregasi interferon-ÿ manusia
rekombinan oleh surfaktan: memperlambat pembubaran formulasi
terliofilisasi dalam larutan yang mengandung 0,03% polisorbat 20. J.
Pharm. Sains. 91, 543–558 (2002).
105. Kerwin, BA, Heller, MC, Levin, SH & Randolph, TW
Efek Tween 80 dan sukrosa pada stabilitas jangka pendek akut dan
penyimpanan jangka panjang pada –20 ºC hemoglobin rekombinan. J.
Farmasi. Sains. 87, 1062–1068 (1998).
106. Arakawa, T. & Kita, Y. Perlindungan albumin serum sapi dari agregasi
oleh Tween 80. J. Pharm. Sains. 89, 646–651 (2000).
107. Rozema, D. & Gellman, SH Pelipatan karbonat anhidrase B. J. Biol
dengan bantuan pendamping buatan. kimia 271, 3478–3487 (1996).
108. Tsai, AM, van Zanten, JH & Betenbaugh, MJ II:
Efek elektrostatik dalam agregasi RNase A terdenaturasi panas
dan implikasi untuk desain aditif protein.
Bioteknologi. Bioeng. 59, 281–285 (1998).
109. Zhao, H., Tuominen, EKJ & Kinnunen, PKJ Pembentukan serat amiloid
dipicu oleh membran yang mengandung fosfatidilserin. Biokimia 43,
10302–10307 (2004).
110. Knight, JD & Miranker, Katalisis fosfolipid AD
perakitan amiloid diabetes. J.Mol. Biol. 341, 1175–1187 (2004).
111. Necula, M., Chirita, CN & Kuret, J. Misel anionik cepat yang dimediasi
fibrilasi ÿ-sinuklein secara in vitro. J.Biol. kimia 278, 46674–46680
(2003).
112. Chirita, CN & Kuret, J. Bukti perantara dalam pembentukan filamen
tau. Biokimia 43, 1704–1714 (2004).
113. Fromming, K.-H. & Szejtli, J. Cyclodextrins in Pharmacy (Kluwer
Academic, Dordrecht, 1994).
114. Larsen, KL Siklodekstrin besar. Biol. J. Armenia 53, 9–26 (2001).
115. Banga, AK & Mitra, R. Minimisasi akibat goncangan
pembentukan agregat insulin yang tidak larut oleh siklodekstrin.
J. Sasaran Obat. 1, 341–345 (1993).
116. Dotsikas, Y. & Loukas, YL Studi degradasi kinetik
kompleks insulin dengan siklodekstrin metil-ÿ. Konfirmasi kompleksasi
dengan spektrometri massa elektrospray dan 1H-NMR. J. Farmasi.
Bioma. Anal. 29, 487–494 (2002).
117. Tokihiro, K., Irie, T., Uekama, K. & Pitha, J. Potensi penggunaan
maltosyl-ÿ-cyclodextrin untuk penghambatan asosiasi diri insulin dalam
larutan air. Farmasi. Sains. 1, 49–53 (1995).
118. Otzen, DE, Knudsen, BR, Aachmann, FL, Larsen, KL
& Wimmer, R. Dasar struktural untuk penekanan siklodekstrin terhadap
agregasi hormon pertumbuhan manusia. Ilmu Protein. 11, 1779–1787
(2002).
119. Hagenlocher, M. & Pearlman, R. Penggunaan pengganti
siklodekstrin untuk stabilisasi larutan hormon pertumbuhan
manusia rekombinan. Farmasi. Res. 6, S30 (1989).
120. Sharma, L. & Sharma, A. Pengaruh cincin siklodekstrin
substituen pada agregasi karbonat anhidrase sapi yang berhubungan
dengan pelipatan. eur. J. Biochem. 268, 2456–2463 (2001).
121. Sigurjonsdottir, JF, Loftsson, T. & Masson, M. Pengaruh siklodekstrin
pada stabilitas kalsitonin salmon peptida dalam larutan berair. Int. J.
Farmasi. 186, 205–213 (1999).
122. Aachmann, FL, Otzen, DE, Larsen, KL & Wimmer, R.
Latar belakang struktural interaksi siklodekstrin-protein.
Protein Eng. 16, 1–8 (2003).
123. Cooper, A. Pengaruh siklodekstrin pada stabilitas termal
protein globular. Selai. kimia Soc. 114, 9208–9209 (1992).
124. Otzen, DE & Oliveberg, M. Cara sederhana untuk mengukur
laju pelipatan protein dalam air. J.Mol. Biol. 313, 479–483 (2001).
125. Karuppiah, N. & Sharma, A. Cyclodextrins sebagai alat bantu pelipatan
protein. Biokimia. Biofisika. Res. Komunal. 211, 60–66 (1995).
126. Easton, CJ & Lincoln, SF Modifikasi Siklodekstrin:
Perancah dan Template untuk Kimia Supramolekul (Imperial
College Press, London, 1999).
127. Szejtli, J & Osa, T (eds). Kimia Supramolekul Komprehensif (Elsevier
Science, Oxford, 1996).
128. Franks, F. Destabilisasi protein pada suhu rendah. Lanjut
Kimia Protein. 46, 105–139 (1995).
129. Wang, W. Liofilisasi dan pengembangan obat-obatan protein geser.
Int. J. Farmasi. 203, 1–60 (2000).
130. Franks, F. Pengeringan beku bioproduk: mempraktikkan prinsip. eur. J.
Farmasi. Biofarm. 45, 221–229 (1998).
131. Franks, F. Stabilisasi biologis jangka panjang.
Bioteknologi (NY) 12, 253–256 (1994).
132. Levine, H. & Slade, L. Air sebagai plasticizer: aspek fisikokimia dari sistem
polimer kelembaban rendah. Ilmu Air. Wahyu 3, 79–185 (1988).
133. Costantino, HR, Langer, R. & Klibanov, AM Kelembaban
menginduksi agregasi insulin terliofilisasi. Farmasi. Res. 11, 21–29
(1994).
134. Yoshioka, S., Aso, Y., Izutsu, K. & Terao, T. Agregat
terbentuk selama penyimpanan ÿ-galactosidase dalam larutan dan
dalam keadaan beku-kering. Farmasi. Res. 10, 687–691 (1993).
135. Klibanov, AM & Schefiliti, JA Tentang hubungan antara konformasi dan
stabilitas dalam formulasi protein farmasi padat. Bioteknol. Lett. 26,
1103–1106 (2004).
136. Brange, J., Andersen, L., Laursen, ED, Meyn, G. &
Rasmussen, E. Menuju pemahaman fibrilasi insulin.
J. Farmasi. Sains. 86, 517–525 (1997).
137. Malencik, DA & Anderson, SR Dityrosine sebagai produk stres oksidatif
dan probe fluoresen. Asam Amino 25, 233–247 (2003).
138. Dobson, CM Protein melipat dan melipat salah. alam 426,
884–890 (2003).
Ucapan Terima Kasih DO
didukung oleh Technical Science Research Foundation dan Villum Kann
Rasmussen Foundation.
Pernyataan kepentingan bersaing Para
penulis menyatakan tidak ada kepentingan finansial yang bersaing.
Tautan daring
DATABASES
Istilah-istilah berikut dalam artikel ini ditautkan secara online ke: Entrez
Gene: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=gene GLP1 | IL-2
OMIM: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=OMIM penyakit
Alzheimer | Penyakit Huntington | penyakit Parkinson
INFORMASI LEBIH LANJUT FoldX
— medan gaya untuk kalkulasi energi dalam protein: http://foldx.embl.de
Tango — algoritme komputer untuk prediksi wilayah agregasi dalam
rantai polipeptida yang tidak dilipat: http://tango.embl.de Akses ke tautan
interaktif ini kotak gratis online.
www.nature.com/reviews/drugdisc