Machine Translated by Google

Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Jurnal Rilis Terkendali

beranda jurnal: www.elsevier.com/loc/jconrel

Mengulas artikel

Model in vitro mereplikasi epitel usus manusia untuk studi penyerapan

dan metabolisme: Tinjauan sistematis
Arianna Fedi a,b, Chiara Vitale B
, Giulia Ponschin A , Seyoum Ayehunie C, Marco Fato a,b,
b,*
Silvia Scaglione
A
Departemen Ilmu Komputer, Bioteknologi, Robotika dan Teknik Sistem, Universitas Genoa, 16126 Genoa, Italia
B
Dewan Riset Nasional Italia, Institut Elektronik, Komputer dan Telekomunikasi (IEIIT), 16149 Genoa, Italia
C
MatTek Corporation, Ashland, MA, AS

INFO PASAL ABSTRAK

Kata kunci: Studi penyerapan, distribusi, metabolisme dan ekskresi (ADME) merupakan langkah mendasar dalam tahap awal penemuan
ADME
obat. Secara khusus, penyerapan obat-obatan yang diberikan secara oral, yang terjadi pada tingkat usus, telah mendapat
penyerapan
perhatian karena bioavailabilitas oral yang buruk sering kali menyebabkan kegagalan dalam persetujuan obat baru.
Dalam konteks ini, beberapa model praklinis in vitro baru-baru ini dikembangkan dan dioptimalkan agar lebih menyerupai
bioavailabilitas oral
fisiologi manusia di laboratorium dan berfungsi sebagai alternatif hewan untuk mencapai prinsip 3R.
permeabilitas usus skrining
obat praklinis model in vitro Namun, banyak model yang tidak efektif dalam merekapitulasi fitur-fitur utama epitel usus kecil manusia dan kurangnya
potensi prediksi penyerapan dan metabolisme obat selama tahap praklinis.
Dalam ulasan ini, kami memberikan gambaran umum model in vitro yang bertujuan meniru penghalang usus untuk
skrining farmasi. Setelah menjelaskan secara singkat cara kerja usus kecil manusia, kami menyajikan i) sistem sintetik 2D
konvensional dan berbasis sel, ii) model 3D yang mereplikasi fitur utama arsitektur usus, iii) sistem reproduksi mikro-
fisiologis (MPS). rangsangan dinamis dimana sel-sel terpapar di lingkungan mikro asli. Dalam ulasan ini, kami akan menyoroti
kelebihan dan kekurangan model in-testinal terkemuka yang digunakan untuk studi penyerapan obat dan metabolisme.

1. Perkenalan
Penyerapan, distribusi, metabolisme dan ekskresi (ADME) adalah proses
biologis yang melibatkan beberapa organ (yaitu usus, hati, ginjal), yang akhirnya
menentukan kadar obat dalam jaringan [1]. Saat ini, sifat farmakokinetik (PK) dan
farmakodinamik (PD) yang buruk dari kandidat obat telah diidentifikasi sebagai
penyebab potensial tingginya tingkat kegagalan obat, karena hanya satu dari
ratusan senyawa yang biasanya disetujui oleh Food and Drug Administration
(FDA). ) [2]. Oleh karena itu, semakin jelas bahwa pembuatan profil ADME
merupakan langkah mendasar dalam pemilihan entitas kimia baru (NCE). Sebagai
konsekuensinya, penilaian mekanisme ADME menjadi bagian penting dari jalur
penemuan obat, mulai dari tahap identifikasi hit hingga pembuatan dan optimalisasi
prospek, dan fase pra-klinis awal pengembangan obat [3-6] . Senyawa yang
tertelan secara oral, yang paling sering diberikan kepada pasien, harus melalui
semua proses ADME; khususnya, penyerapan, terutama terjadi di tingkat usus,
merupakan langkah penting pertama dalam menentukan fraksi obat yang berhasil
memasuki darah
sirkulasi. Oleh karena itu, penting untuk mengembangkan obat yang dapat
menembus epitel usus secara efisien. Di sini, banyak sel, pembawa dan enzim
terlibat dalam transportasi dan metabolisme zat yang dikirimkan [4]. Faktanya,
saluran cerna (GIT) merupakan salah satu organ paling aktif dan dinamis dalam
tubuh yang mewakili penghalang fisik dan kimia pertama yang dihadapi oleh
senyawa eksogen yang berasal dari rongga mulut [7]. Anatomi dan fisiologi
saluran pencernaan (misalnya pH lingkungan) bersama dengan sifat fisio-kimia
obat serta jenis bentuk sediaan (misalnya kapsul, larutan, emulsi, tablet)
mengkondisikan penyerapan oral senyawa alami dan buatan [8,9 ], akhirnya
mempengaruhi bioavailabilitasnya. Laporan terbaru menyoroti bahwa 90% obat
yang diminum memiliki bioavailabilitas yang buruk sebagai konsekuensi dari
penyerapan usus yang tidak efisien, sehingga menghambat kemanjuran terapeutik
obat tersebut [10,11].
Pada dasarnya, bioavailabilitas oral (F) mengacu pada dosis yang mencapai
sirkulasi sistemik utuh. Ini didefinisikan sebagai:
F = Fa*Fg*Fh (1)

* Penulis koresponden di: CNR – IEIIT Institute, National Research Council of Italy, Via De Marini 6, 16149 Genova, Italia Alamat email:
silvia.scaglione@ieiit.cnr.it (S.Scaglione).

https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2021.05.028 Diterima
26 Maret 2021; Diterima dalam bentuk revisi 18 Mei 2021; Diterima 20 Mei 2021 Tersedia online 24
Mei 2021
0168-3659/© 2021 Penulis. Diterbitkan oleh Elsevier BV Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
dimana Fa adalah fraksi yang diserap, yaitu bagian dari dosis yang diserap ke
dalam enterosit membran usus; Fg adalah kemampuan bioavail usus, yaitu
bagian dari dosis yang lolos dari metabolisme di enterosit; Fh adalah
bioavailabilitas hati, yaitu bagian dosis yang masuk ke hati yang lolos dari
metabolisme hati [12].
Meningkatnya isu bioavailabilitas oral yang rendah menyebabkan peningkatan
dosis obat, sehingga menimbulkan risiko toksisitas dan komplikasi yang tinggi,
serta limbah yang ekonomis, atau bahkan perubahan rute pemberian [13]. Oleh
karena itu, sangatlah penting untuk mengklarifikasi dan memprediksi fenomena
biologis kompleks yang terjadi dari mulut hingga usus, agar dapat menyusun dan
merancang terapi baru yang diberikan secara oral dengan tepat.
Saat ini, pengujian pada hewan masih merupakan standar emas dalam pra-
klinik karena mampu mereproduksi proses ADME yang dimediasi oleh sirkulasi
darah sistemik [14]. Terlepas dari kenyataan ini, sulit untuk membedakan dan
memisahkan semua parameter yang terlibat dalam perjalanan suatu molekul
melintasi beberapa hambatan biologis yang ditemui secara in vivo [15].
Selain itu, pengujian berbasis hewan sering gagal dalam memprediksi
penyerapan obat dan metabolisme lintas pertama pada manusia karena
perbedaan spesies dalam transporter dan ekspresi enzim serta respon imun
[16,17]. Selain itu, model in vivo umumnya padat karya, mahal, dan memakan
waktu. Oleh karena itu, ada kebutuhan untuk mengembangkan dan
mempromosikan platform in vitro alternatif dalam penelitian farmasi sesuai
dengan prinsip 3R (Reduce, Refine, replace) [18,19].
Lapisan tunggal sel konvensional dianggap sebagai model utama untuk
mengevaluasi efek ADME dari obat yang dikonsumsi secara oral. Sistem datar
ini merupakan alat yang sederhana, hemat biaya, dan terstandarisasi untuk
mereplikasi mekanisme biologis secara in vitro. Namun, kultur 2D tidak dapat
secara tepat mereproduksi lingkungan fisiologis jaringan manusia, karena sel
melekat pada permukaan datar dan menampilkan interaksi sel-sel dan matriks
sel yang tidak lengkap atau berubah (20). Sel yang ditumbuhkan pada plastik
terlalu banyak terkena bahan kimia yang ditambahkan ke dalam media kultur;
hal ini sering menghasilkan hasil positif palsu untuk kandidat obat sehingga
mengganggu terjemahan klinis NCE [21-23].
Hasilnya, sistem kultur sel 3D telah direalisasikan untuk menciptakan kembali
fungsi jaringan asli dengan lebih baik dan membuka jalan bagi platform pengujian
obat in vitro yang lebih prediktif [24]. Model 3D memberikan ruang yang lebih
relevan secara fisiologis untuk pertumbuhan sel jika dibandingkan dengan kultur
2D, namun tetap mempertahankan keunggulannya dibandingkan hewan.
Akibatnya, ketika obat diuji dalam konteks 2D atau 3D, efektivitasnya berubah
secara drastis [25]; khususnya, sel yang dikultur dalam lingkungan 3D seringkali
lebih resisten terhadap pengobatan farmasi dibandingkan sel yang ditumbuhkan
sebagai lapisan tunggal, serupa dengan apa yang terjadi di tubuh manusia [22,25].
Namun demikian, meskipun ada kemajuan besar, model in vitro 3D (misalnya
organoid, spheroid, dll.) tidak memiliki rangsangan dinamis spesifik organ yang
secara signifikan memengaruhi perilaku sel. Studi tentang mekanisme ADME
khususnya memerlukan adanya aliran cairan yang menyerupai aliran darah, dan
juga sirkulasi sistemik obat dan kinetika transpornya.
Untuk mengatasi kebutuhan ini, para peneliti baru-baru ini membuat sistem
mikro-fisiologis (MPS) dengan mengintegrasikan kultur sel 3D dengan teknik
mikrofabrikasi untuk menerapkan kondisi kultur dinamis pada skala terkecil yang
dapat diterima secara biologis [26]. MPS tersebut memungkinkan untuk mengatur
pola aliran fluida yang terkendali, memberikan kekuatan mekanik dan transportasi
zat yang efisien juga [27]. Terutama, organ-on-chip (OOCs) mendukung kultur
substruktur sebagai unit fungsional organ hidup berskala mikro dalam kondisi
yang sangat andal [28]. Sejauh ini, teknologi ini menawarkan peluang untuk
menciptakan kembali model ginjal [29], hati [30], otak [31], jantung [32], otot
rangka [33] dan usus [34] dengan pengurangan konsumsi reagen yang mahal
secara signifikan. , jumlah sel dan obat [35,36]. Penggunaan MPS meningkatkan
otomatisasi dan paralelisasi eksperimen untuk pengumpulan kumpulan data profil
ADME berskala besar, berpotensi mempercepat proses penemuan dan
pengembangan obat [24,28]. Namun, miniaturisasi model yang berlebihan dalam
beberapa kasus dapat mempengaruhi reproduksi fungsi tingkat organ,
memerlukan kompleksitas eksperimental yang secara bersamaan menghambat
operasi praktis dan manipulasi sistem [23,36,37].
248
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
Oleh karena itu, tinjauan ini merinci model usus yang saat ini diadopsi untuk
menyelidiki penyerapan senyawa yang diberikan secara oral yang mencakup
lapisan tunggal usus konvensional 2D, jaringan 3D kompleks, dan sistem kultur
MPS baru yang relevan secara fisiologis.
Singkatnya, kami akan fokus pada model usus yang mereproduksi berbagai
fitur organ manusia dan secara akurat memprediksi profil penyerapan obat yang
bergantung pada waktu yang terjadi secara in vivo.
2. Fisiologi GIT
Obat yang diberikan secara oral mengikuti jalur yang tepat mulai dari mulut,
melewati kerongkongan dan lambung, mengakhiri perjalanan di usus besar.
Saluran pencernaan ini dilapisi dengan mukosa, yang terdiri dari epitel yang
menutupi lamina propria tempat darah dan pembuluh limfatik berada. Setelah
melewati bagian pertama GIT, obat (misalnya tablet) memasuki lambung, di mana
obat tersebut bertemu dengan lingkungan asam (pH berkisar antara 1,5 hingga
3,5 [38]) dan enzim spesifik yang terlibat dalam pencernaan makanan [39].
Kontraksi otot juga terjadi untuk memecah tablet padat menjadi partikel yang
lebih kecil, sehingga terjadi disintegrasi dan pelarutan. Secara khusus, kelarutan
obat dalam air, lipofilisitas, dan hidrofilisitas, serta keberadaan eksipien,
merupakan faktor penting dalam menentukan keberhasilan pemenuhan fase
penyerapan awal ini [12].
Selanjutnya, isi gastrointestinal menuju ke usus kecil (duodenum, jejunum,
dan ileum), yang mewakili tempat utama penyerapan nutrisi, air, elektrolit dan
xenobiotik [40].
Di sini, mukosa serap dicirikan oleh epitel kolumnar sederhana yang terletak di
atas lamina propria dengan perfusi darah tinggi, yang memaksimalkan
kemungkinan molekul memasuki sirkulasi sistemik melalui pembuluh mesenterika.
Di sini, mukosa memiliki luas permukaan yang besar (250 m2 ) dengan lipatan
lebar, vili dan mikrovili (Gambar 1A) yang secara signifikan mempengaruhi tingkat
serapan dengan menambah luas permukaan serap yang tersedia [41]. Lapisan
otot polos juga terdapat dalam lamina propria yang menyebabkan vili
bergelombang dan isi luminal bercampur secara dinamis, sehingga mendorong
penyerapan zat tersebut [42].
Epitel usus terdiri dari satu lapisan yang terdiri dari beberapa jenis sel, seperti
ditunjukkan pada Gambar 1B. Secara khusus, enterosit adalah sel dominan di
dalam usus. Mereka adalah sel tipe kolumnar yang disatukan oleh sambungan
rapat, yang memainkan peran penting dalam mengatur difusi senyawa kecil dan
mengeluarkan molekul besar yang beracun. Selain itu, mereka dicirikan oleh
adanya sekitar 3000-7000 mikrovili di atas membran apikalnya, yang sangat
menguntungkan mekanisme penyerapan [43]. Namun, enterosit juga mengandung
sejumlah besar enzim pemetabolisme obat dan makanan untuk xenobiotik dan
pencernaan nutrisi serta untuk perlindungan zat eksogen [44-46].
Oleh karena itu, reaksi yang dipandu enzim yang terjadi di usus kecil membatasi
bioavailabilitas oral dari senyawa yang diberikan [47]. Oleh karena itu,
pertimbangan metabolisme usus sangat diperlukan.
Lapisan tunggal enterositik terganggu oleh tempat tinggal sel enteroendokrin
dan sel Goblet. Yang pertama bertanggung jawab untuk melepaskan hormon
peptida, yang berkorelasi dengan perbaikan jaringan, angiogenesis, diferensiasi
dan polarisasi enterosit [48].
Sebaliknya, sel goblet menghasilkan lendir, suatu zat reologi yang menutupi
epitel usus, yang bertindak sebagai lapisan pelindung terhadap zat berbahaya
dan infeksi mikroba seperti bakteri atau racun. Yang penting, gel ini adalah
penghalang pertama yang menyaring dan mempersempit penyerapan molekul,
sehingga penting dalam pemeliharaan homeostasis usus [49]. Sifat lendir dan
fungsinya bervariasi seiring dengan GIT; misalnya, lendir usus kecil mengandung
pori-pori besar hingga 2 ÿm2 untuk memastikan penyerapan nutrisi secara besar-
besaran [50]. Baru-baru ini, penelitian menunjukkan bahwa perubahan dalam
arsitektur dan kandungan lendir dapat menyebabkan beberapa patologi, yang
menegaskan dampak luar biasa dari gel kental ini pada kesehatan usus [51].
Sel induk usus kolumnar (ISC), yang terletak di dasar ruang bawah tanah,
mampu berdiferensiasi menjadi semua jenis sel usus lainnya,
Machine Translated by Google

A.Fedi dkk. Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268

Gambar 1. Kartun yang menggambarkan

arsitektur usus halus dan mekanisme
transportasinya. (A) GIT terdiri dari
esofagus, lambung, usus kecil, usus
besar, dan rektum (kiri, [62]). Tampilan
penampang skematis dari jaringan usus
kecil dengan pembesaran yang semakin
besar (kanan). Lipatan mukosa yang lebar
(plicae sirkulares) ditandai dengan
tonjolan vili seperti jari yang menonjol ke
dalam lumen usus; mikrovili juga terdapat
pada enterosit untuk meningkatkan area
penyerapan; dicetak ulang dan diadaptasi
dari [63], Hak Cipta (2008) dengan izin
dari Elsevier. (B) Ilustrasi unit ruang
bawah tanah/villus basal yang khas pada
mukosa usus kecil. Epitel kolumnar ini
terdiri dari beberapa jenis sel yang
berdekatan, yang disatukan erat melalui
sambungan rapat; lapisan lendir yang
menutupi membran sel apikal memberikan
penghalang fisik dan biokimia tambahan,
sementara pembuluh darah memberikan
perfusi yang tinggi ke jaringan sehingga
memaksimalkan kemungkinan molekul memasuki sirk
Jalur pengangkutan zat melintasi epitel
usus; penyerapan dapat terjadi secara
paralel yang melibatkan mekanisme pasif
(trans-seluler dan paraseluler) dan aktif
(dimediasi pembawa transseluler dan
dimediasi vesikel).

249
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
memberikan pembaharuan diri usus yang sangat tinggi menjaga integritas dan
fungsi jaringan [52,53]. Akhirnya, sel-sel Paneth juga berada di wilayah ruang
bawah tanah dan terspesialisasi dalam mendukung ISC dalam ceruk tersebut
dengan mensekresi faktor pertumbuhan dan memproduksi peptida antimikroba [54,55].pelarut organik, meniru membran lipid dari enterosit [66].
Obat yang tertelan berjalan dari sisi luminal epitel usus ke basolateral untuk
memasuki pembuluh darah mesenterika melalui berbagai mekanisme yang
melibatkan transpor pasif atau aktif (Gambar 1C).
Transpor pasif dapat terjadi melalui jalur transeluler, dimana obat melewati
membran sel, dan jalur paraseluler, dimana obat melewati ruang antar sel.
Keduanya diatur oleh hukum difusi Fick:
J = ÿ D dC/ dx (2)
dimana J adalah laju perpindahan per satuan luas (fluks) (g/cm2 /h), dC adalah
gradien konsentrasi (g/cm3 ), dx adalah jarak linier yang ditempuh (cm) dan D
adalah koefisien difusi (cm2 / H).
Selain itu, koefisien permeabilitas semu (Papp) menggambarkan jumlah obat
yang melintasi penghalang per satuan waktu dan satuan luas (A), dan dapat
dihitung dari apikal ke basolateral (influx) atau basolateral ke apikal (efluks).
arah melalui persamaan di bawah ini yang diturunkan oleh hukum Fick:
dQ/ dt
Pap = (3)
Sebuah C0
dimana dQ/dt menyatakan laju kemunculan obat di sisi akseptor dan C0 adalah
konsentrasi obat awal di sisi donor [56]. Khususnya, nilai Papp biasanya diadopsi
untuk menentukan fraksi oral yang diserap (Fa) pada manusia [57,58].
Mekanisme paraseluler adalah proses difusi utama zat hidrofilik, yang terjadi
melalui ruang antar sel berisi air (persimpangan rapat). Oleh karena itu, jalur
paraseluler secara ketat mengacu pada integritas penghalang, yang dapat
dipantau secara in vitro dengan mengukur hambatan listrik trans-epitel (TEER)
[59,60].
Di sisi lain, transpor transeluler sebagian besar memandu penyerapan
senyawa lipofilik melintasi membran sel lipid.
Meskipun demikian, transpor aktif juga mendorong perjalanan senyawa
menuju sisi basolateral usus kecil. Mekanisme yang dimediasi pembawa
transeluler dan endo-atau trans-sitosis yang dimediasi vesikular secara aktif
membawa obat [61]. Selain itu, transporter penghabisan yang ada di sisi apikal
atau basolateral dapat memodulasi transfer dari sitoplasma sel kembali ke lumen
usus, sehingga mengurangi jumlah bersih yang diserap.
Oleh karena itu, model epitel usus kompleks yang merekapitulasi berbagai
dinamika sel diperlukan untuk melakukan penyelidikan farmakologis in vitro
yang lebih dapat diprediksi.
3. Model in vitro 2D untuk mengevaluasi penyerapan usus
Saat ini, sistem kultur 2D masih banyak digunakan untuk menentukan
bioavailabilitas suatu obat yang diberikan secara oral, terutama karena biayanya
yang rendah, reproduktifitas yang tinggi, dan kemudahan manipulasi.
Secara khusus, model in vitro 2D yang secara konvensional digunakan
dalam farmakologi dapat dibagi menjadi dua kategori utama: (i) model sintetik
berdasarkan membran lipid, yang menawarkan reproduktifitas dan stabilitas
yang tinggi, digunakan untuk mempelajari proses difusi pasif [64], dan (ii) kultur
berbasis sel yang hidup dan sistem yang lebih andal memungkinkan analisis
spektrum penyerapan usus yang lebih luas (Gambar 2A).
3.1. Model sintetis
3.1.1. PAMPA
Uji Permeabilitas Membran Buatan Paralel (PAMPA) adalah sistem permeasi
bebas sel yang secara in vitro mereproduksi komposisi fosfolipid dari penghalang
biologis manusia yang diinginkan (misalnya usus) untuk
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
mengevaluasi penyerapan transeluler pasif [65]. Terutama, teknologi yang
sepenuhnya buatan ini terdiri dari dua kompartemen yang dipisahkan oleh
membran yang direndam dengan campuran fosfolipid yang dilarutkan dalam
Mengingat bahwa 80-95% obat komersial terutama diserap melalui difusi
pasif, PAMPA merupakan alat yang berguna untuk skrining ADME tahap awal
terhadap senyawa yang diberikan secara oral [66,67].
Khususnya, laju permeasi melintasi membran berbasis lipid merupakan indikator
valid potensi penyerapan obat. Faktanya, beberapa penelitian menunjukkan
hubungan yang baik antara data kemampuan permeabilitas yang diukur dengan
PAMPA dan data yang diperoleh dengan model berbasis sel Caco-2 untuk obat
yang diangkut secara transelular [68].
Di sisi lain, PAMPA tidak dapat mengklasifikasikan senyawa hidrofilik yang
ditransfer melalui jalur paraseluler. Untuk mengatasi keterbatasan ini, varian
lain dari struktur asli dikembangkan dengan mengubah faktor kunci yang
mempengaruhi kinerja membran (misalnya sifat pendukung filter, kondisi pH dan
komposisi membran lipid) [7]. Secara khusus, Double Sink PAMPA menunjukkan
korelasi yang lebih kuat dengan data manusia dan potensi prediksi yang lebih
baik untuk obat yang sukar larut dalam air [69].
Oleh karena itu, PAMPA dinyatakan sebagai platform yang cepat, solid, dan
berbiaya rendah untuk mengukur permeabilitas molekul lipofilik di beberapa
penghalang biologis (usus, juga kulit, penghalang darah-otak), sehingga
membatasi pengujian berbasis seluler atau pengujian hewan pada tahap pra-
klinis. skenario [70,71]. Namun demikian, potensi dan penerapannya terhambat
oleh aseluleritasnya dan adanya pelarut organik, yang dapat berinteraksi dengan
filter pendukung [64]; sehingga alternatif sintetik lainnya baru-baru ini
dikembangkan [7].
3.1.2. PVPA
Uji Permeasi Berbasis Vesikel Fosfolipid (PVPA) adalah sistem berbasis
membran buatan lainnya yang saat ini digunakan untuk karakterisasi farmasi
NCE (72). Sebagai PAMPA, PVPA diperkenalkan untuk mereplikasi komposisi
lipid epitel biologis secara in vitro untuk mengukur permeabilitas obat yang
diberikan secara pasif [73,74].
Tidak seperti PAMPA, ini adalah platform bebas pelarut organik sintetik yang
terdiri dari penghalang ketat yang dibuat dengan menyimpan liposom di antara
pori-pori dan di atas dukungan filter yang meniru lapisan ganda fosfolipid, seperti
pada membran sel usus [75]. Biasanya, PVPA mampu membayangkan fraksi
yang diserap manusia dengan lebih baik dibandingkan dengan PAMPA dengan
melakukan eksperimen pada konteks yang lebih relevan secara biologis,
memberikan hasil yang lebih mirip dengan kultur sel Caco-2 [64,73,74].
Selama bertahun-tahun, beragam kemajuan PVPA telah meningkatkan
biomimetisme model ini secara signifikan. Misalnya, muatan negatif dipasang,
dan komposisi lipid pada membran dimodifikasi agar sesuai dengan komposisi
penghalang usus, sehingga memungkinkan dilakukannya uji permeabilitas pada
kondisi pH yang relevan secara fisiologis. Dengan cara ini, kemampuan akurat
untuk mengklasifikasikan dengan benar setidaknya 80% senyawa yang diuji
ditunjukkan sesuai dengan fraksi yang diserap in vivo [74,76].
PVPA dianggap sebagai pendekatan yang mapan untuk menilai secara tepat
potensi penyerapan kandidat obat lipofilik secara in vitro dengan reproduktifitas
tinggi dan penanganan yang lebih baik dibandingkan dengan model berbasis sel
[74,76]. Meskipun demikian, ciri-ciri morfologi dan fisiologi yang signifikan tidak
terlihat, seperti adanya vili dan protein transpor aktif, berbeda dengan pengujian
berbasis sel (Tabel 1). Akibatnya, PVPA, dan juga PAMPA, tetap menjadi alat
yang cocok hanya untuk memprediksi permeabilitas obat yang diserap secara
transelular.
3.2. Model seluler
3.2.1. Garis sel CACO-2
Garis sel Caco-2, diisolasi pertama kali oleh Fogh et al. [77] dari adenokarsinoma
usus besar manusia, adalah model berbasis sel yang paling banyak digunakan untuk
mensimulasikan secara in vitro penghalang fisik dan biokimia dari adenokarsinoma usus besar.
250
Machine Translated by Google

A.Fedi dkk. Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268

(keterangan di halaman berikutnya)

251
Machine Translated by Google

A.Fedi dkk. Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268

Gambar 2. Sistem kultur 2D yang saat ini digunakan untuk menentukan bioavailabilitas obat yang diberikan secara oral. (A) Skema pengaturan monolayer berbasis lipid
buatan (kiri) dan berbasis sel (kanan). (B) Perkembangan sambungan rapat pada lapisan tunggal sel Caco-2 2D setelah pelapisan 3 (kiri) dan 18 (tengah). Gambar
diperoleh dengan menggabungkan 100 bingkai z-tumpukan protein ZO-1 yang memediasi persimpangan; dicetak ulang dan diadaptasi dari [166], Hak Cipta (2012),
dengan izin dari Elsevier. Gambar SEM menunjukkan pola mikrovili yang sangat padat pada sel Caco-2 setelah 21 hari kultur (kanan, [167]). (C) Tampak samping sel
TC-7 yang dikultur pada filter polikarbonat dengan batas kuas dan mikrovili (kiri, gambar SEM); bilah skala = 1,9 ÿm; dua sel TC-7 yang berdekatan menampilkan mikrovili
dan dipegang erat oleh sambungan rapat (kanan, gambar TEM); bilah skala = 0,4 ÿm; dicetak ulang dan diadaptasi dari [134] Hak Cipta (2001), dengan izin dari Elsevier.
(D) Gambar fluoresensi menunjukkan pembentukan persimpangan ketat (kiri) dan struktur padat filamen aktin (kanan) dalam kultur berbasis sel MDCK 2D [168]. (E)
Histologi monolayer sel HT29-MTX; sel tersusun dalam struktur berlapis-lapis setelah 7 hari, sedangkan sel terpolarisasi dengan baik dan tertutup lendir (berwarna biru)
setelah 30 hari kultur statis (kiri); dicetak ulang dan diadaptasi dengan izin dari [169] Hak Cipta (2018) American Chemical Society. Gambar SEM menunjukkan tampilan
lateral dari monolayer HT29-MTX yang dikultur pada filter polikarbonat dengan sedikit mikrovili dan tetesan lendir yang menutupi membran apikal sel (kanan); bilah skala
= 2,4 ÿm; dicetak ulang dan diadaptasi dari [134] Hak Cipta (2001), dengan izin dari Elsevier.

usus manusia di bidang farmasi dan nutraceutical.
Sel Caco-2 mewakili standar emas yang diterima oleh otoritas pengatur untuk
studi ADME-Tox karena sel tersebut terbukti sangat berguna untuk (i) menjelaskan
penyerapan dan metabolisme zat di seluruh epitel usus, (ii) memprediksi
penyerapan fraksi pada manusia [78], dan (iii) mempelajari, memilih dan
mengklasifikasikan kandidat obat dalam kondisi terkendali, menurut Sistem
Klasifikasi Biofarmasi (BCS) [79]. Memang benar, meskipun berasal dari kolon,
lapisan tunggal Caco-2 menyerupai sebagian besar karakteristik morfologi dan
fungsional usus kecil (80).
Secara konvensional, sel-sel ini menunjukkan karakteristik yang tidak
terdiferensiasi pada tahap awal kultur (setelah 3 atau 4 hari), sedangkan sel-sel
ini mampu mencapai fenotip enterositik pada tahap akhir kultur (dalam waktu
sekitar 3 minggu), mengekspresikan protein sitoskeleton yang khas (misalnya
villin) . ]) dan membentuk lapisan terpolarisasi dengan mikrovili batas sikat
(dikonfirmasi oleh imunoreaktivitas sukrase [82]) serta sambungan rapat
(dikonfirmasi oleh pewarnaan antibodi occludin [83]) antara sel-sel yang
berdekatan, seperti ditunjukkan pada Gambar 2B. Namun, persimpangan ketat ini
memerlukan resistensi transmembran yang lebih tinggi (150-400 ÿÿcm2 [84])
dibandingkan usus kecil (12-120 ÿÿcm2 [85]). Hal ini dapat disebabkan oleh jumlah
dan ukuran pori-pori berisi air yang lebih kecil pada sel Caco-2 (sekitar 3,7 ÿ)
dibandingkan saluran usus pertama (8-13 ÿ) [59,86–88]. Oleh karena itu, beberapa
penelitian, yang menyelidiki penyerapan senyawa hidrofilik paraseluler (misalnya
atenolol, manitol), menunjukkan ketidakmampuan model ini dalam memprediksi
transpor paraseluler [89-91]. Faktanya, dalam literatur, meremehkan kinetika
difusi paraseluler secara sistematis dilaporkan secara luas untuk sel Caco-2.
Misalnya, terdeteksi adanya perbedaan yang luar biasa pada jejunum manusia
sehubungan dengan penyerapan obat yang lambat dan tidak sempurna. Kecepatan
transpor menjadi 30 hingga 80 kali lipat lebih rendah pada model Caco-2,
menyoroti keterbatasan garis sel tersebut dalam mereplikasi secara tepat sifat
fisiologis dan anatomi jejunum [90]. Terlebih lagi, telah diketahui bahwa obat-
obatan dengan daya serap yang buruk, yang tidak mampu melintasi persimpangan
vili yang sempit, bertahan dalam waktu yang lama di dalam lumen, mengendap
menuju daerah ruang bawah tanah, di mana obat-obatan tersebut dapat melewati
persimpangan ruang bawah tanah yang lebih bocor. Namun demikian, fenomena
ini tidak dapat terjadi pada lapisan tunggal datar karena kurangnya struktur crypt-
villus 3D [92]. Perubahan integritas sambungan akibat larutan pengkhelat kalsium
(misalnya EDTA) dapat membantu meningkatkan permeabilitas dan prediktabilitas
jalur paraseluler; namun, penggunaan pelarut ini merupakan kontraindikasi [58].
Sebaliknya, kemiripan yang tinggi dengan enterosit serap membuat lapisan
tunggal Caco-2 dianggap sebagai model peniruan membran usus yang efisien
untuk mempelajari penetrasi transeluler pasif senyawa lipofilik (misalnya propranolol
dan metoprolol). Kemampuan permeabilitas obat yang diserap dengan cepat dan
sempurna berbeda 2 hingga 4 kali lipat dibandingkan dengan nilai usus manusia
untuk rute ini [90] dan korelasi tinggi diamati antara nilai Caco-2 Papp dan Fa in
vivo .
Yang mengejutkan, korelasi yang masuk akal juga ditemukan untuk senyawa
yang sulit diserap, sesuai dengan data PK yang dipublikasikan manusia dari 30
senyawa yang dipasarkan [58] dan peptidomimetik [93,94]. Oleh karena itu,
Caco-2 dapat dianggap sebagai alat yang berharga untuk menyaring senyawa
yang diangkut secara pasif (koefisien korelasi >83% [95]) serta model yang lebih
kompleks seperti perfusi in situ [96,97].
Hasil yang kurang menarik diperoleh dengan menggunakan sel-sel ini untuk
memodelkan transpor aktif. Meskipun beberapa analisis memberikan hasil yang
menjanjikan tentang jalur yang bergantung pada ATP (98) dan profil gen trans-
porter usus, seperti P-glikoprotein (P-gps), yang terlibat dalam menjaga
homeostasis usus dengan memediasi penghabisan dan sekresi xenobiotik (99),
pola ekspresi protein lain (misalnya protein resisten kanker payudara (BCRPs)
dan protein resisten multidrug (MRPs)) [100-102] diamati sangat berbeda dari
jaringan duodenum [95] dan je-junal [103]. Karena alasan ini, meskipun FDA dan
European Medicines Agency (EMA) mengakui garis kanker ini sebagai pengganti
uji permeasi in vitro , masih ada perdebatan mengenai apakah garis ini mewakili
model biorelevan untuk aplikasi tertentu, seperti penyerapan aktif atau interaksi
obat-obat yang dimediasi transporter [103]. Selain itu, variabilitas intrinsik antara
dan di dalam laboratorium serta ketergantungan yang kuat pada waktu kultur
terlihat pada konten transporter [103].
Demikian pula, beberapa cacat dapat diamati pada metabolisme enzim yang
bertanggung jawab untuk eliminasi banyak obat (misalnya sitokrom P450 -CYP-
isoform) [44,45]. Secara khusus, defisiensi enzim CYP3A4 merupakan kelemahan
yang luar biasa untuk menyelidiki metabolisme Fase I dan efek lintas pertama
dari obat yang diminum [104,105].
Untuk mengatasi hal ini, beberapa kelompok mencoba menginduksi ekspresi
CYP3A4 dengan memperlakukan sel Caco-2 dengan 1-ÿ-2,5-dihydroxyvitamin D3
atau menggabungkan CYP3A4 dengan NADPH ke sisi basolateral [106] sehingga
sangat meningkatkan relevansi dalam memperkirakan ekspresi CYP3A4 pertama.
melewati metabolisme dalam kinetika in-testinal [79]. Di sisi lain, keberadaan
hidrolase yang terkait dengan membran mikrovilar telah diverifikasi dalam sel Caco-2,

Tabel 1
Kelebihan dan kekurangan model sintetik vs seluler.
ADV DIS-ADV REF

Model • Biaya rendah • Prediksi rute paraseluler yang buruk • Tidak [73.170]
sintetis • Cepat digunakan ada reproduksi morfologi epitel usus • Tidak ada ekspresi protein
• Mudah dimanipulasi • pengangkut • Tidak adanya enzim •
Kuat untuk menguji senyawa lipofilik • Kemampuan Penyederhanaan sistem
mereproduksi transpor pasif • Kapasitas untuk meniru yang berlebihan • Variabilitas tinggi terkait
Seluler anatomi, biokimia, dan struktur in vivo dengan diferensiasi sel dan [7,21,82,170–172]
model ciri-ciri usus kecil kondisi budaya
• Kemampuan untuk mereproduksi transpor pasif dan aktif. • Kemungkinan • Waktu persiapan lebih lama • Risiko
untuk memanfaatkan sel manusia kontaminasi menghambat keseluruhan percobaan • Biaya
lebih tinggi

252
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
memungkinkan untuk secara akurat meniru aktivitas enzim perbatasan usus kecil [81].
Dengan demikian, hasil kontroversial dan ketidaksepakatan dapat ditemukan
dalam literatur (Gambar SI-1). Hal ini mungkin disebabkan oleh sel-sel ini yang berasal
dari kanker kolon, yang menunjukkan gambaran struktural dan fungsional yang lebih
mirip dengan sel-sel usus besar dibandingkan sel-sel usus kecil (misalnya sambungan
rapat yang lebih kuat, nilai TEER yang lebih tinggi, perubahan ekspresi enzim dan
transporter) [104,107] .
Lebih lanjut, banyak penelitian menyoroti bahwa sistem berbasis sel Caco-2
sangat dipengaruhi oleh kondisi kultur eksperimental, garis sel itu sendiri (yaitu tahap
diferensiasi seluler, apakah sel telah mencapai pertemuan), dan nomor lintasan [108 ].
Mereka adalah populasi heterogen yang sifat-sifatnya dapat berbeda antar dan di
dalam laboratorium berdasarkan periode kultur yang berbeda dan media kultur yang
digunakan. Oleh karena itu, sangat penting untuk mengkalibrasi sistem eksperimental
berbasis Caco-2 dengan senyawa referensi (bahan kimia dengan fraksi serapan yang
diketahui secara in vivo) dan secara hati-hati mengontrol lingkungan (suhu, pH) dan
kondisi penghalang (TEER) [78].
Saat ini, kultur monolayer statis Caco-2 adalah standar emas untuk pengujian in
vitro terhadap sifat penghalang usus setelah paparan senyawa farmasi dan
nutraceutical [109].
Secara umum diterima bahwa sel Caco-2 adalah model epitel usus terbaik karena
mereka memungkinkan untuk mereplikasi pengambilan secara tepat melalui jalur
transeluler, yang merupakan rute permeasi obat yang paling umum [14].
Di sisi lain, jalur aktif serta metabolisme obat di usus diremehkan secara drastis
[82,90]. Selain itu, tidak adanya lapisan lendir memiliki dampak yang signifikan terhadap
kesetiaan model ini, karena lapisan ini merupakan penghalang pertama yang ditemui
molekul, sehingga membatasi ketersediaannya pada sel di bawahnya (110).
3.2.2. Garis sel TC-7
Garis sel TC-7 merupakan salah satu subklon Caco-2 yang diisolasi untuk
mengatasi keterbatasan utama garis induk, dengan tetap mempertahankan morfologinya
(Gambar 2C) [111]. Di antara beberapa keunggulan sel TC-7, pertumbuhan sel yang
lebih cepat karena waktu penggandaan yang lebih pendek dan nilai TEER yang lebih
rendah tentunya merupakan fitur yang menguntungkan untuk mensimulasikan epitel
usus kecil secara lebih dekat [82,111]. Selain itu, karena populasinya homogen,
variabilitas antara dan di dalam laboratorium lebih sedikit, sehingga meningkatkan
kekuatan data yang dikumpulkan [111].
Mengenai fitur morfologi, monolayer TC-7 menunjukkan peningkatan tinggi (15,4 ± 1,2
ÿm) dibandingkan sel Caco-2 (13,8 ± 2,4 ÿm) lebih mirip dengan jaringan asli (25 ÿm)
[112].
Oleh karena itu, sel TC-7 sangat berguna untuk menganalisis biokinetika transpor
bahan kimia. Korelasi yang baik antara garis subklon ini dan sel Caco-2 ditemukan
untuk obat yang diserap secara transelular, menunjukkan bahwa model TC-7 adalah
alternatif yang sangat baik untuk lapisan tunggal Caco-2 [113,114]. Yang penting, sel
TC-7 juga menunjukkan kemampuan untuk membawa penanda paraseluler dengan
benar (misalnya manitol, PEG-4000) melalui rute pasif ini dan kandungan transporter
apikal yang tinggi, bahkan mampu mereproduksi pengiriman yang dimediasi oleh
pembawa, tidak seperti Caco-2 sel [115].
Beberapa enzim brush-border yang menyerupai metabolisme enterositik manusia
juga diamati, sehingga melampaui model aslinya (113). Jumlah UDP-
glukuronosiltransferase (enzim metabolik fase II), hidrolase sukrase-isomaltase dan
isoenzim CYP3A (misalnya
CYP3A4 dan CYP3A5), yang mencapai puncaknya pada pertemuan akhir, diketahui
diekspresikan sangat mirip dengan saluran jejunum pada manusia [116] [108,117].
Selain itu, diamati bahwa penghabisan yang dimediasi P-gp juga terjadi secara in vivo
dibandingkan garis orang tua [111,115].
Akibatnya, masuk akal untuk mempertimbangkan sel TC-7 sebagai pilihan yang
berguna untuk mempelajari metabolisme lintas pertama usus dan jalur penyerapan
aktif, berbeda dari lapisan tunggal Caco-2 [118].
Namun, penyelidikan lebih lanjut yang teliti mengenai penggunaannya diperlukan
untuk mengevaluasi potensi skrining skala besar dengan lebih baik, karena hanya
sedikit data permeabilitas yang tersedia untuk sel TC-7 [115].
253
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
3.2.3. garis sel MDCK
Ginjal anjing Madin-Darby (MDCK) adalah garis sel epitel lain yang digunakan
untuk pengukuran permeabilitas, yang diisolasi untuk pertama kalinya oleh Madin &
Darby dari jaringan ginjal distal anjing [82]. Meskipun asal usulnya berbeda, sel MDCK
secara morfologi analog dengan sel Caco-2, meniru topologi penghalang usus in vivo .
Faktanya, sel-sel ini berkumpul untuk membentuk lapisan tunggal kolumnar terpolarisasi
yang menampilkan batas sikat dan sambungan antar sel yang rapat (173 ± 51 ÿÿcm2 )
(Gbr. 2D) [118]. Dua strain garis MDCK yang berbeda dibedakan: (i) MDCK-I, yang
dapat menghasilkan epitel rapat dengan nilai TEER tinggi (di atas 1000 ÿÿcm2 ) dan
(ii) MDCK-II, yang membentuk lapisan yang lebih permeabel dengan TEER lebih
rendah nilai (sekitar 100 ÿÿcm2 ), sehingga lebih dekat ke usus kecil daripada sel
Caco-2 [119]. Secara khusus, sel-sel ini memakan waktu lebih sedikit (sel berkumpul
setelah 3-5 hari kultur) dibandingkan model sel epitel lainnya, sehingga mengurangi
kemungkinan kontaminasi sel serta biaya [79]. Untuk mendapatkan manfaat tersebut,
sel MDCK diadopsi untuk melakukan pemeriksaan permeabilitas dua arah yang cepat
di seluruh epitel ginjal dan gastrointestinal selama tahap awal penemuan obat [119,120]
[118].
Hubungan yang jelas antara garis keturunan anjing ini dan garis Caco-2 yang
diturunkan dari manusia ditunjukkan untuk obat yang diserap secara pasif dengan
2 =0,79)
korelasi yang kuat (r [121]. Selanjutnya sel MDCK berkorelasi baik = 0,54)
2 =0,58), sejalan dengan sel Caco-2 (r 2
data serapan manusia (r
[121.122].
Namun, beberapa kekurangan mempengaruhi percobaan yang dilakukan dengan
menggunakan sel MDCK. Pertama, karena lapisan tunggal tidak tahan terhadap pelarut
organik dalam jumlah besar, senyawa berair yang sulit larut sulit untuk dinilai dengan
menggunakan sistem ini. Selain itu, sel-sel ini berasal dari luar usus serta
heterogenitasnya dapat menghambat keandalan hasil, tergantung pada sumber sel,
kultur, dan kondisi transportasi. Tingkat ekspresi transporter dan aktivitas metabolik
juga tampak sangat berbeda pada garis MDCK sehubungan dengan skenario asli dan
sel-sel yang berasal dari usus (120).
Untuk mengatasi kekurangan ini, misalnya, gen MDR1 manusia ditransfer ke
dalam sel MDCK-II untuk mendapatkan tingkat yang serupa dengan di saluran usus.
[7]. Menariknya, sel-sel MDR1-MDCK yang ditransfeksi ini mengekspresi secara
berlebihan isoform P-gp serta peningkatan efflux terpolarisasi dari sub-strat yang
diketahui (misalnya digoksin) dibandingkan dengan klon MDCK lain dan sel Caco-2
(123).
Oleh karena itu, sel MDCK yang ditransfusikan MDR-1 memiliki banyak aspek sel
epitel yang sama dengan mukosa usus manusia dan dapat menjadi model yang
berguna untuk memeriksa aktivitas pembawa kandidat obat, seperti P-gps. Namun
demikian, prediktabilitas dan penerapannya masih sangat rendah dibandingkan dengan
sel Caco-2 (124).
3.2.4. Garis sel HT-29
Sel HT-29 adalah sel adenokarsinoma usus besar manusia yang mendapat
perhatian lebih karena karakteristik khas sel usus dewasa [125]. Sel HT-29
mengekspresikan ciri-ciri enterosit serap dan sel sekretorik usus yang menghasilkan
zat seperti lendir agar-agar. Untuk alasan ini, model seluler ini digunakan secara luas
untuk melakukan studi bioavailabilitas atau untuk menyelidiki respon imun usus
terhadap infeksi bakteri yang dapat mempengaruhi sifat-sifat lendir yang disekresikan
[126].
Khususnya, fenotip sel HT-29 sangat bergantung pada kondisi kultur, dengan
perhatian khusus pada ada atau tidaknya glukosa dalam media kultur. Sel-sel epitel ini
membentuk multilayer yang tidak berdiferensiasi dan tidak terpolarisasi tanpa ciri khas
sel-sel di dalam usus dalam kondisi suplai glukosa normal [127].
Sebaliknya, sel HT-29 mengalami pola diferensiasi usus baik modifikasi media
kultur maupun penambahan
penginduksi diferensiasi digunakan. Misalnya, mereka dapat mengekspresikan
beberapa karakteristik yang mirip dengan enterosit manusia seperti struktur monolayer
terpolarisasi, sambungan rapat yang berkembang dengan baik, batas sikat dan mikrovili
ketika media kultur bebas glukosa digunakan [128]. Selain itu, keberadaan enzim
yang berhubungan dengan batas sikat juga diamati
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
sel HT-29 seperti enterosit [129]. Menariknya, kebanyakan dari mereka juga
menunjukkan tingkat vilin yang tepat serta reseptor fungsional untuk peptida dan hormon
yang ada secara in vivo [81,127,129]. Namun demikian, mengingat tidak semua hidrolase
terdapat (misalnya laktase) dan aktivitas enzimatik (misalnya hidrolase dan sukrase-
isomaltase) lebih rendah dibandingkan sel Caco-2 dan usus kecil manusia, maka
hidrolase tersebut tidak dapat dianggap sebagai model yang dapat diandalkan enterosit
usus kecil [81,127]. Di sisi lain, mereka tidak dapat diperlakukan sebagai enterosit kolon
karena mereka mengekspresikan hidrolase terlokalisasi di apikal, yang biasanya tidak
ada di usus besar (125). Kegunaan garis sel ini juga kontroversial karena beberapa
reseptor yang secara alami tidak ada dalam epitel manusia (seperti neurotensin [130])
terdeteksi dalam sel HT-29, dan reseptor lain yang secara tradisional ada (seperti pada
peptida YY atau neuropeptida Y) belum teridentifikasi [126]. Untuk mengatasi kendala
ini, strategi lain untuk menginduksi diferensiasi enterositik dalam sel HT-29 dilakukan
[131,132].
Yang mengejutkan, upaya tersebut memunculkan lini menarik lainnya: HT29-18-
N2, HT29-H dan HT-29/16E. yang menghasilkan sejumlah besar musin, yang secara
akurat menyerupai aktivitas sel goblet in vivo , sehingga berguna untuk menguji pengaruh
lapisan lendir pada penyerapan usus [81]. Khususnya, klon HT29-H menunjukkan
ketebalan lapisan yang bervariasi dan permeabilitas paraseluler yang lebih tinggi dan
lebih mirip dengan jaringan asli sehubungan dengan lapisan tunggal Caco-2 (133).
Meskipun demikian, sel HT-29 yang diobati dengan metotreksat (MTX; HT29-MTX)
saat ini tetap menjadi model yang paling banyak digunakan untuk memeriksa bagaimana
makanan dan xenobiotik mengubah lendir dan sebaliknya [134]. Secara khusus, kadar
musin yang disekresikan dipengaruhi oleh konsentrasi obat ini. MTX dosis rendah
berhubungan dengan serangkaian sel penyerap dan penghasil mukus yang heterogen,
sedangkan sel yang mensekresi mukus terjadi dengan meningkatkan jumlah MTX [126].
Selain itu, sub-populasi HT29-MTX-D1 dan HT29-MTX-E12 dipilih karena
kemampuannya untuk (i) mengembangkan sambungan paha, (ii) terus menerus
mengeluarkan lendir dan (iii) menjaga stabilitas selama lebih dari 7 saluran.
Menariknya, ditemukan hubungan terbalik antara permeabilitas obat lipofilik (misalnya
barbiturat dan testosteron) dan ketebalan lapisan lendir. Terutama, nilai Papp lebih
rendah pada HT29-MTX-E12, yang menunjukkan lapisan lendir yang lebih bocor namun
lebih tebal, dibandingkan HT29-MTX-D1, yang mengeluarkan lendir dalam jumlah yang
lebih kecil [129,135].
Oleh karena itu, sel-sel tersebut terbukti secara efektif mereproduksi sifat asli lendir.
Meskipun terdapat keterbatasan umum yang disebabkan oleh sumber karsinoma
usus besar manusia, sel HT-29 dari orang tua dan turunannya terbukti menjadi model
yang berharga untuk menyaring senyawa endogen dan eksogen [136,137]. Fenotip yang
mensekresi lendir mendapat perhatian besar dalam penelitian yang berfokus pada
pencernaan makanan dan bioavailabilitas obat karena zat ini mempengaruhi
homeostasis jaringan usus. Sejalan dengan hal ini, sel-sel HT29-MTX tampaknya
menjadi model yang paling cocok karena produksi lendirnya yang efisien (Gambar 2E),
dan karena alasan ini, sel-sel tersebut sebagian besar dikultur bersama dengan sel-sel
penyerap Caco-2 untuk menghasilkan lebih banyak sel serapan. epitel yang meniru
usus secara in vitro [138].
3.2.5. garis sel IEC
Kelompok sel epitel usus (IECs) adalah garis sel tikus usus yang dapat membentuk
pseudo-monolayer yang memperlihatkan mikrovili, sambungan rapat dan zat amorf
yang mirip dengan membran basal [82.139.140]. Meskipun diferensiasinya sulit diinduksi
secara in vitro karena berasal dari sel epitel ruang bawah tanah yang tidak berdiferensiasi,
sel-sel IEC yang diberi mesenkim usus janin tikus atau tikus menjadi (i) serap, (ii) piala,
(iii) endokrin, dan (iv) Paneth's tipe seluler granular di usus [81]. Jalur IEC mencakup
berbagai subgrup seluler, seperti jalur IEC-18, IEC-6, dan IEC-14. Secara khusus, garis
sel IEC-14 sangat membantu dalam memeriksa regulasi proliferasi dan diferensiasi sel
crypt (139).
Namun, subline IEC-18 adalah model penghalang usus yang paling umum digunakan
secara tradisional untuk menyelidiki asam amino in vitro , glukosa dan nutrisi lainnya,
pencernaan dan pencernaan serta kolesterol.
254
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
sintesis [118].
Yang penting, TEER sel-sel ini (55 ÿÿcm2 ) ditemukan sebanding dengan bagian
usus kecil ileum (88 ÿÿcm2 ), di mana permeasi paraseluler terjadi secara masif
[141,142]. Sebagai konsekuensinya, dipastikan bahwa sel-sel IEC merekapitulasi jalur
paraseluler dengan lebih baik dibandingkan dengan sel Caco-2 (143). Memang benar,
penanda hidrofilik paraseluler seperti manitol, dekstran, dan PEG-4000 menunjukkan
koefisien permeabilitas yang lebih besar pada lapisan tunggal IEC-18 dan transpor
ketergantungan radius molekul, tidak seperti sel kolon (144).
Demikian pula, senyawa alami seperti glikosida genistein dan daidzein (masing-masing
genistin dan diadzin) melintasi epitel usus berbasis IEC-18 melalui pengiriman paraseluler
dengan tingkat penyerapan yang tinggi [145].
Oleh karena itu, sel IEC-18 memberikan penghalang selektif ukuran untuk
membedakan dan mengklasifikasikan molekul hidrofilik secara in vitro berdasarkan
berat molekulnya [141,146]. Hal ini sangat menghormati sel Caco-2 yang secara
sistematis meremehkan serapan paraseluler.
Sebaliknya, tingkat serapan sebanding dengan skenario in vivo dan sel Caco-2
terdeteksi untuk molekul lipofilik yang ditransfer melalui rute transeluler pasif, meskipun
sel IEC-18 kurang berdiferensiasi dibandingkan sel Caco-2 [141,146]. Memang, mereka
memiliki kompleks persimpangan ketat yang kurang berkembang dan sedikit polarisasi,
dan menunjukkan ekspresi enzim brush border yang rendah (misalnya sukrase-
isomaltase atau isotipe alkalin fosfatase usus) [139,147]. Hal ini juga mengakibatkan
perubahan ekspresi sistem transportasi yang dimediasi oleh pembawa seperti yang ada
pada keluarga MRP. Selain itu, tidak adanya P-gps pada domain apikal semakin
berkorelasi dengan rendahnya status diferensiasi sel tikus ini dengan asal usul ruang
bawah tanahnya [141,144].
Jika digabungkan, hasil ini menunjukkan bahwa garis turunan ileum ini adalah
sistem seluler in vitro yang berguna untuk memprediksi mekanisme penyerapan yang
dimediasi difusi, terutama untuk senyawa hidrofilik, yang gagal diantisipasi oleh sel
Caco-2. Khususnya, mereka justru menyerupai morfologi in vivo dan fungsi kripta usus
daripada enterosit yang terlokalisasi di vili karena kurangnya pembawa dan enzim.
Akibatnya, sel-sel yang berasal dari usus besar tikus ini dapat dengan cepat kehilangan
penanda diferensiasi dan sifat spesifiknya, sehingga menjadi tidak stabil dan tidak dapat
diprediksi [82,147].
3.2.6. garis sel HIEC
Kebutuhan untuk menggunakan sel usus jenis baru untuk mengatasi kekurangan
yang berasal dari sifat kanker dari garis sel Caco-2 dan HT-29 diatasi dengan
menggunakan sel epitel usus manusia (HIEC). Sel-sel ini mewakili pilihan berharga yang
mampu menunjukkan beberapa fitur mirip ruang bawah tanah manusia (148). Secara
khusus, HIEC dapat membentuk lapisan tunggal sel kolumnar terpolarisasi dengan
mikrovili padat dan sambungan rapat yang tidak terorganisir dengan baik, sehingga
menghasilkan morfologi yang sangat mirip dengan konteks in vivo (149). Mereka
menunjukkan nilai TEER yang rendah (98,9 ÿÿcm2 ) serta ukuran dan distribusi pori-pori
berair yang menentukan kesesuaian garis ini dalam mereplikasi beberapa aspek penting
dan fungsi domain usus kecil manusia [150].
Oleh karena itu, adanya hubungan sigmoidal antara nilai-nilai Fa in vivo dan yang
diukur secara in vitro untuk sepuluh senyawa yang dikirimkan secara paraseluler telah
ditunjukkan, menunjukkan sensitivitas dan akurasi yang lebih besar dalam mengantisipasi
penyerapan paraseluler manusia berdasarkan model Caco-2. Secara khusus, koefisien
permeabilitas yang tinggi secara sistematis ditemukan untuk obat yang tidak terserap
sempurna dan buruk dengan sel HIEC.
Demikian pula, obat-obatan yang diangkut secara transeluler dapat meresap dengan
baik, menyoroti efisiensi model yang diturunkan dari manusia ini dalam memprediksi
fraksi yang diserap pada manusia (151).
Selain itu, penanda sel usus yang khas dari sel kripta yang tidak berdiferensiasi
ditemukan diekspresikan dalam baris ini, seperti rendahnya tingkat enzim dalam usus
(misalnya sukrase-isomaltase, alkalinephosphatese, CYP2C9, CYP2C19) [152,153].
Khususnya, penelitian lain menemukan jumlah CYP3A4 yang rendah (<7% dari
kandungan usus kecil manusia) dalam HIEC dan tidak ada perbedaan besar antara
lapisan tunggal HIEC dan Caco-2 untuk enzim pemetabolisme obat (misalnya CYP3A5)
dan
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
transporter (misalnya BCRP, MRP1, MRP2, dan MRP3) [150].
Berbagai tahapan diferensiasi dalam sel HIEC dapat dicapai dengan mereplikasi
aspek crypt atau enterosit manusia. Hal ini juga bervariasi berdasarkan jaringan asal sel
HIEC. Misalnya, Tak-enaka dkk. menyelidiki karakteristik dan kemungkinan penerapan
sel epitel yang dibedakan dari ISC dewasa. Sel-sel tersebut, yang memiliki proliferasi
jangka panjang dan kemampuan berdiferensiasi tinggi, menghasilkan enterosit serap,
tetapi juga sel goblet, enteroendokrin dan Paneth dalam kondisi kultur yang sesuai
(150). Pendekatan alternatif lain mungkin dengan memperoleh sel HIEC dari usus janin
manusia pada pertengahan masa kehamilan dari kehamilan yang telah dihentikan (154)
atau menggunakan janin yang berasal dari aborsi legal, yang memiliki jaringan dengan
metabolisme cepat dan penanda diferensiasi dewasa yang sudah terekspresikan (148).
Meskipun demikian, terlepas dari kelebihannya, sel-sel ini dilarang untuk digunakan
karena masalah etika terkait di banyak negara [148].
3.2.7. Model budaya bersama
Model seluler yang disebutkan di atas masih jauh dari mencerminkan heterogenitas
kompleks organ usus manusia (82). Untuk alasan ini, sel Caco-2 konvensional sering
dikolaborasikan dengan tipe sel lain untuk menghasilkan model yang lebih dapat
diprediksi dan dengan demikian melakukan pengujian skrining obat yang efektif
[118,155]. Misalnya, integrasi sel Caco-2 yang mengekspresikan penanda enterositik
dengan sel sekretori, seperti sub-populasi HT-29, dapat menyediakan lingkungan yang
lebih meniru kondisi in vivo . Kehadiran kontemporer mereka dapat memodulasi struktur
persimpangan menjadi lebih mirip dengan usus kecil [120]. Memang benar, lapisan
monolayer campuran Caco-2/HT-29 dan Caco-2/HT-29-H menampilkan membran
batas sikat dengan sambungan yang rapat, dan mikrovili tidak beraturan yang jarang di
bagian apikal [156]. Selain itu, kemampuan permeabilitas yang lebih tinggi mendekati
nilai Fa ditunjukkan pada senyawa yang tertelan secara pasif berdasarkan sistem
berbasis Caco-2 murni, memberikan prediksi yang lebih baik terhadap obat yang
ditransfer secara transelular dan paraseluler [157].
Demikian pula, permeabilitas obat yang diserap melalui jalur paraseluler, transeluler,
dan yang dimediasi pembawa dievaluasi dengan menggunakan tiga rasio penyemaian
awal yang berbeda dari sel Caco-2 dan HT29-MTX.
Meskipun tidak ada perbedaan signifikan dengan lapisan murni Caco-2 yang diamati
untuk rute transeluler, penambahan fraksi sel HT29-MTX menghasilkan peningkatan
serapan senyawa yang dikirimkan secara paraseluler [155]. Menariknya, ekspresi P-gps
dalam kultur terdeteksi pada tingkat yang lebih rendah dibandingkan dengan model
Caco-2, dan hubungan terbalik terlihat antara jumlah P-gps dan fraksi sel mirip piala
[155,158 ].
Meskipun demikian, campuran sel ini bukanlah satu-satunya yang digunakan sejauh ini.
Misalnya, garis sel Raji-B yang berasal dari limfoma Burkitt baru-baru ini mendapat
perhatian, karena sel mirip limfosit B ini dapat menginduksi fenotip mirip sel Microfold
(sel M) dalam sel Caco-2 [7,159].
Khususnya, mereka adalah sel epitel khusus yang memainkan peran penting dalam
imunitas mukosa dengan mengangkut antigen dan patogen ke jaringan limfoid di
bawahnya [120,160]. Karena alasan ini, model kultur bersama Caco-2/Raji-B terbukti
sangat berguna dalam menyelidiki nanopartikel pas-sage yang mengandung peptida
terapeutik dan vaksin [82.161.162], dan mengeksplorasi kemampuan penyerapan
enterosit usus dan sel M [163] . Menariknya, ketiga garis sel tersebut mempertahankan
fungsinya ketika dikultur bersama, membentuk aset yang dapat menciptakan kembali
kompleksitas penghalang usus manusia (164).
Oleh karena itu, kultur sel multipel ini dapat digunakan untuk mendapatkan model in
vitro usus yang lebih relevan secara fisiologis untuk mengevaluasi dan memprediksi
mekanisme penyerapan usus dengan lebih baik (165) (Tabel 2).
4. Model seluler 3D
Baru-baru ini, kemajuan luar biasa dalam pengembangan platform kultur sel 3D
telah dicapai dengan meniru isyarat fisiologis mendasar yang ada dalam jaringan asli in
vivo . Kami akan menyajikan gambaran umum sistem kultur statis 3D yang saat ini
diadopsi dalam penelitian farmakologi dan
255
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
industri mendiskusikan kelebihan dan keterbatasannya (Tabel 3) [179,180].
4.1. Perancah berbentuk vili untuk kultur mono dan ko-kultur sel Caco-2 sel usus
Meniru geometri kompleks epitel usus kecil dalam kultur monolayer dan kultur
monolayer tradisional masih menjadi tantangan saat ini. Oleh karena itu, beberapa
upaya yang berorientasi pada model berbasis perancah 3D menyebar untuk
merekapitulasi arsitektur usus secara lebih dekat (Gambar 3A) dan dengan demikian
melakukan uji farmasi yang lebih akurat. Terutama, perancah bertindak sebagai
pendukung pro-liferasi, diferensiasi dan migrasi sel [181,182], memainkan peran
mendasar dalam mempengaruhi perilaku sel karena sifat kimia, mekanik dan
permukaannya [183,184].
Di antara beberapa bahan dan substrat, hidrogel berbasis kolagen adalah yang
paling banyak digunakan untuk mereproduksi bentuk sumbu vili-ruang bawah tanah.
Sel Caco-2 yang dikultur pada struktur 3D ini (Gbr. 3B) menunjukkan peningkatan luas
permukaan serap karena konformasi perancah seperti vili bersama dengan ekspresi
protein yang tepat yang memediasi persimpangan antar sel, menghasilkan penurunan
nilai TEER dan dengan demikian lebih banyak model representatif dari usus kecil
manusia menghormati lapisan tunggal konvensional [185,186]. Menariknya, dilaporkan
bahwa diferensiasi sel bervariasi di sepanjang vili seperti yang diamati secara in vivo
(185).
Dalam konteks ini, karena rute penyerapan paraseluler diketahui sangat diremehkan
pada sel datar Caco-2, beberapa studi permeabilitas obat yang menyelidiki jalur ini
dilakukan untuk memverifikasi apakah pertumbuhan sel pada perancah berbentuk vili
3D lebih menyerupai pertumbuhan sel usus. fungsi penghalang. Secara khusus, transpor
paraseluler dari obat yang diserap secara lambat (FITC-dextran dan atenolol) dan obat
yang diserap dengan cepat (fluorescein) menunjukkan tingkat permeabilitas yang lebih
tinggi dibandingkan dengan kultur berbasis sumur 2D [181,186]. Secara khusus,
koefisien permeabilitas aten-olol 13 kali lebih tinggi dalam model 3D dibandingkan sel
Caco-2 planar, yaitu sekitar 60% diukur dalam perfusi usus manusia, sehingga
membuktikan bahwa struktur 3D ini dapat meningkatkan prediksi kinetika usus manusia
[172,181,185 ].
Selain itu, aktivitas enzim metabolik dan pengangkut obat dalam model 3D tersebut
ditemukan lebih mirip dengan skenario in vivo
[186]. Misalnya, analisis imunohistokimia menunjukkan keberadaan protein P-gp yang
cukup rendah, sementara protein tersebut terdistribusi secara merata dan diekspresikan
secara berlebihan dalam kultur 2D [185-187].
Namun, meskipun kolagen cocok untuk mendukung pertumbuhan dan migrasi sel
dalam kultur 3D yang memadai secara fisik, polimer ini dapat mengalami variasi batch,
dan keberadaannya dapat membatasi laju penyerapan obat yang cepat diserap. Untuk
mengatasi permasalahan ini, penyelidikan tentang bahan alternatif diusulkan untuk
merekapitulasi arsitektur vili dan kriptus tanpa mengganggu proses permeasi [185,188].
Pasien dkk. perancah nanofibro polietilen tereftalat yang dibuat untuk meniru
topografi epitel usus. Sedangkan untuk kolagen, nilai TEER lebih rendah dibandingkan
yang diamati pada Transwell unggulan 2D Caco-2
dilaporkan, mungkin karena peningkatan porositas serat nano dibandingkan lapisan
tunggal. Selain itu, penyerapan dua arah FITC-dextran, lucifer yellow, rhodamin 123,
propranolol, dan atenolol menunjukkan permeabilitas yang lebih tinggi melalui sel
Caco-2 yang dikultur pada scaffold 3D dibandingkan dengan platform tipikal 2D [187].
Oleh karena itu, diterima secara luas bahwa struktur bergelombang 3D mendorong
pembentukan penghalang yang beroperasi secara fisiologis sangat dekat dengan epitel
usus asli yang meningkatkan potensi model uji dalam memprediksi asupan obat-obatan
baik melalui jalur pasif dan aktif, terlepas dari itu. dari bahan perancah yang digunakan
[188,189].
Menariknya, kemampuan model ini untuk berhasil mendukung kultur sel Caco-2
dan HT29-MTX dengan sel stroma yang menonjol (yaitu fibroblas dan makrofag
imunokompeten) juga dieksplorasi.
Pengaturan ini menunjukkan luas permukaan serap 3D yang lebih besar, penurunan
nilai TEER dan pembentukan lapisan lendir kental. Ini lebih
 Machine Translated by Google

Meja 2
Karakteristik model seluler.

Model CACO-2 TC-7 MDCK HT-29 BUDAYA BERSAMA HIEC

A.Fedi IEC

SUMBER SEL Garis sel Subklon Caco-2 Garis turunan jaringan ginjal Garis sel Sel Garis sel manusia yang Garis sel tikus yang berasal dari
adenokarsinoma usus besar manusia distal anjing adenokarsinoma usus besar manusia adenokarsinoma usus besar manusia diturunkan dari ruang bawah tanah usus kecil ruang bawah tanah usus kecil
garis
MORFOLOGI Lapisan tunggal Lapisan tunggal terpolarisasi Lapisan tunggal Lapisan tunggal Lapisan tunggal Lapisan tunggal terpolarisasi Lapisan tunggal
terpolarisasi dengan dengan sambungan rapat, batas terpolarisasi dengan terpolarisasi dengan terpolarisasi dengan dengan sambungan rapat terpolarisasi dengan
sambungan rapat yang kuat, sikat apikal, dan mikrovili sambungan rapat, batas sikat sambungan rapat, tepi sikat sambungan rapat, batas yang tidak terorganisir dengan sambungan yang kurang
batas sikat apikal, dan mikrovili apikal, dan mikrovili apikal dengan sikat apikal, mikrovili, dan baik, batas sikat apikal, dan berkembang, batas sikat,
mikrovili yang jarang dan lapisan mukus mikrovili yang padat mikrovili apikal, dan zat
pendek atau lapisan mukus amorf yang mirip dengan lapisan bawah tanah
(berdasarkan selaput
TEER [ÿÿcm2] 250-2500 150-750 173 (garis orang tua); kandungan media kultur) 15 (tidak berdiferensiasi
250-400 (50% CACO-2/ 98.9 55 (IEC-18); 100 (IEC)
256
~1000 (subgrup MDCK- garis sel HT29); 280 50% HT29-MTX); 60
I); ~100 (subgrup MDCK-II) (subklon HT29- (CACO-2/HT-29/Raji-B)
MTX-D1); 170 (HT29-
subklon MTX-E12) •
ENZIM & • Ekspresi P-gp (MDR1), • Ekspresi P-gps yang tinggi • • Ekspresi minimal Ekspresi rendah • Ekspresi P- yang tepat • Ekspresi BCRP, • Perubahan ekspresi
TRANSPORTER MRP2, Ekspresi UDP- P-gp (diselesaikan dengan enzim brush border gps MRP1, MRP2, dan dimediasi oleh operator

MRP4 dan BCRP,
OATP1B1, OATP1B3,
OATP2B1, PepT1,
OCT1, OCT2 dan OCT3 •
Tidak adanya CYP
isoenzim (kemungkinan
untuk menginduksi
ekspresi CYP3A4
dengan
1- ÿ-2,5- dihidroksivitamin
D3 atau
NADPH) • Ekspresi yang tepat
enzim brush border •
ADV Akurasi tinggi dalam
mereplikasi fenotip
enterositik • Viabilitas sel
jangka panjang •
Reproduksi
glukuronosiltransferase,
hidrolase sukrase
isomaltase
• Enzim CYP3A dalam jumlah
besar (CYP3A4 dan
CYP3A5)
• Pertumbuhan sel yang
cepat • Homogenitas yang
baik memastikan hasil yang
konsisten • Reproduksi jalur pasif
yang baik • Korelasi
garis sel MDR1-MDCK) (misalnya bentuk MRP3 sistem transportasi (mis
• Ekspresi MDR1, hidrolase) • • Ekspresi CYP3A5 Keluarga MRP)
MRP1, MRP2 dan Tidak adanya laktase enzim • • Ekspresi P-gps yang buruk
MRP5 Jumlah rendah •
CYP3A, CYP2C9, Ekspresi P-gps yang rendah
CYP2C19, sukrase- enzim batas sikat (misalnya
isomaltase dan alkali sukrase-
fosfatase isomaltase, alkaline
fosfatase)
• Waktu kultur singkat (3-5 hari) • Tidak ada ekspresi P-gps • • Reproduksi sel epitel serap • Ukuran pori dan • Asal non-kanker • Asal usus
• Biaya Kemungkinan untuk diperoleh dan sekretorik distribusi mirip dengan • Reproduksi jalur
rendah beberapa sub-klon dengan manusianya kecil paraseluler yang baik
• Kemungkinan memperoleh memperlakukan media usus
beberapa sub-klon. • kultur dengan zat tertentu • Produksi lendir • • Kemampuan • Model yang berguna untuk

jalur transeluler yang baik • yang baik Reproduksi jalur pasif yang Permeabilitas tinggi terhadap proliferasi jangka panjang • mempelajari sintesis
Reproduksi jalur Caco-2 untuk obat yang diangkut baik • Kemungkinan memperoleh obat yang diserap Kemampuan berdiferensiasi kolesterol dan peran faktor
aktif yang secara pasif • sel mirip piala secara menjadi beberapa jenis sel pertumbuhan pada

DIS-ADV
baik

• Asal usul kanker usus

besar • Waktu diferensiasi
yang lama (~3
minggu) • Kurangnya faktor
fisiologis (lendir, garam
Kemungkinan untuk dipelajari
metabolisme usus

• Tidak adanya data berskala besar

Jurnal
• Asal non-manusia • Asal
non-usus • Variabilitas tinggi
• Toleransi yang
sangat rendah terhadap pelarut
organik dalam jumlah
Kemungkinan untuk
mempelajari lapisan lendir

• Asal kanker • Asal non-

usus kecil • Perubahan

metabolisme glukosa
• Diferensiasi
pasif • Kemungkinan
memodifikasi
penghalang permeabilitas
lapisan tunggal sel
(fleksibilitas)
• Reproduksibilitas yang baik
• Asal kanker
Kesulitan dalam
memanipulasi dan
memelihara garis sel yang
berbeda
• Akurasi yang tinggi dalam
memprediksi serapan
paraseluler manusia

• Asal ruang
bawah tanah • Antarindividu
variasi
• Masalah etika
melarang penggunaannya di
beberapa negara bagian
lapisan epitel

• Asal non-manusia • Asal

ruang bawah
tanah • Waktu diferensiasi
yang lama (~3
minggu) • Ketidakstabilan
(kehilangan penanda
empedu, kolesterol) besar secara bersamaan

REF
• Variabilitas antar
dan intra-laboratorium
• Meremehkan
transportasi paraseluler

[7,85,177,178] [113.177] [7.124.175–177]

Rilis proses hanya terjadi
pada kondisi kultur tertentu
dan memerlukan waktu
yang lama •
Tidak adanya protein
metabolisme utama
[120,135,174] [120.138.155.173] [150]
diferensiasi
dengan cepat) • Tidak
ada protein pengangkut

[7.141]
Machine Translated by Google

A.Fedi dkk.
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268

Tabel 3
Karakteristik model 3D.
Model Statis 3D Perancah berbentuk vili untuk kultur mono dan Organoid Epi-Usus
ko-kultur usus

MORFOLOGI Struktur dengan luas permukaan serap yang
meningkat karena pembentukan vili; terdapat
sambungan rapat dan lapisan mukus pada kultur
bersama
TEER [ÿÿcm2 ] 40-80 (perancah hidrogel 3D); 220 (serat
nano 3D); •
ENZIM & Kehadiran P-gps yang lebih rendah dan
TRANSPORTER ekspresi transporter yang lebih tinggi
(misalnya BCRP, MRP) sehubungan
ADV dengan monokultur 2D • Akses mudah ke apikal dan basolateral
sisi
• Luas permukaan serap 3D yang besar
• Produksi lendir yang tinggi •
Reproduksi morfologi vili-kripta usus yang akurat
• Penggunaan bahan
biodegradable dan bioaktif
Epitel terdiferensiasi yang sangat terlipat dengan daerah
berongga di tengah yang terdiri dari sel-sel yang berdiferensiasi
(piala, sel enteroendokrin, enterosit) yang diekstrusi ke dalam lumen
menciptakan domain vili dan daerah puncak (sel ISC dan Paneth)
Tidak dapat diukur
• Ekspresi transporter GLUT2, GLUT5 dan PEPT1 • Ekspresi
CYP3A4, CYP3A5, CYP1B1, CYP2B6 yang tinggi
dan enzim CYP2J2 •
Pengorganisasian
mandiri •
Pembaruan diri • Kemungkinan untuk
berkembang tanpa batas waktu • Kultur
jangka panjang (1 tahun atau lebih) • Tidak adanya sel kanker
• Reproduksi heterogenitas seluler usus. • Reproduksi morfologi
vili-kripta
jaringan mikro terpolarisasi dari dinding ke
dinding; epitel berdiferensiasi tinggi termasuk enterosit,
Sel paneth, sel M dan ISC dengan vili, mikrovili,
persimpangan ketat, batas sikat dan lapisan lendir
130-192
• Ekspresi P-gps dan MRP-1, MRP-2, BCRP • Kehadiran
enzim yang paling relevan (CYP3A4,
CYP3A5, CYP2B6, CYP2C9, UGT) •
Akses mudah ke sisi apikal dan basolateral • Kultur
jangka panjang (hingga 6 minggu) •
Reproduksibilitas tinggi •
Variabilitas jaringan lot-to-lot rendah
Relatif tidak mahal

DISADV • Perancah dapat membatasi laju penyerapan. •
Hidrogel mengalami variasi batch
• Proses fabrikasi yang relatif rumit
REF [85.113.177.178.185]
• Lumen yang tertutup dan sulit dimanipulasi • • Polimorfik asal donor tunggal yang tidak diketahui
Tidak adanya vaskularisasi • Biaya memetabolisme enzim yang tidak mewakili suatu
tinggi • populasi
Variabilitas tinggi (sumber, ukuran, bentuk) •
Teknik eksperimental yang rumit •
Kebutuhan akan sel primer
[201,204,205,207,221,227,228] [85.219–221.226]

Gambar 3. Sistem kultur statis 3D usus menyerupai fitur penting dari jaringan usus yang berdiferensiasi. (A) Representasi skema fabrikasi perancah berbentuk vili. (B)
Gambar confocal sel Caco-2 yang dikultur pada perancah berbasis kolagen (kiri); irisan horizontal hidrogel menunjukkan sel-sel terpolarisasi dengan baik dan tersebar
secara merata pada perancah (kanan); diterbitkan ulang dengan izin Royal Society of Chemistry, Hak Cipta (2010), dari [223]. (C) Ilustrasi topografi organoid usus
dengan tonjolan vili ke arah lumen dan ruang bawah tanah (atas); arsitektur seperti itu dapat diperoleh secara in vitro dengan membiakkan kripta yang berasal dari
jaringan usus manusia (bawah, kiri) setelah 21 hari (bawah, kanan); skala bar: 100 ÿm [224]. (D) Perbedaan produksi Muc-2, Alkaline Phosphatase, dan ekspresi
Sucrase Isomaltase pada organoid usus yang tidak berdiferensiasi (atas) dan berdiferensiasi (bawah). Bilah skala = 1 ÿm untuk gambar TEM dan 50 ÿm untuk gambar
mikroskop; dicetak ulang dan diadaptasi dari [225], Hak Cipta (2016), dengan izin dari Elsevier. (E) Gambar histologi tipikal (atas) dan imunohistokimia (bawah) dari
jaringan Epi-IntestinalTM (SMI-100) yang mengilustrasikan struktur 3D mirip in vivo dan keberadaan sel-sel yang mensekresi lendir dan sel-sel yang menyerap secara
simultan setelah 14 hari budaya, masing-masing [219].

257
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
morfologi fisiologis mencapai puncaknya pada penurunan permeabilitas untuk obat
dengan penyerapan sedang atau tinggi (propranolol, verapamil, antipy-rine dan
carbamazepine), dan peningkatan penyerapan untuk senyawa dengan penyerapan
rendah (ranitidine dan furosemide) dengan korelasi yang tinggi dengan data manusia
2
(r =0,84) [190].
Secara keseluruhan, hasil ini menunjukkan model mukosa usus berbasis perancah
3D sebagai sistem yang kuat dan serbaguna untuk menyerupai fitur dan fungsi asli
yang paling penting, dengan potensi kuat dalam percobaan skrining obat dalam
kondisi statis (191). Namun, penelitian tambahan harus dilakukan untuk memilih
bahan lain dengan sifat biokimia dan mekanik yang lebih sesuai untuk menghasilkan
epitel usus mirip in vivo . Menarik juga untuk memasukkan garis usus lain dan sel
induk yang berasal dari kultur organoid, serta untuk menyelidiki apakah struktur 3D
biofabrikasi atau perancah submukosa usus kecil yang didekellularisasi dapat
mengontrol diferensiasi sel usus.
aktivitas asi, proliferasi dan transportasi [189,192].
Akhirnya, perkembangan masa depan harus mencakup aliran fluida dan me-
rangsangan mekanis seperti yang terjadi di usus hidup [193].
4.2. Organoid
Organoid adalah tunas organ 3D yang dibuat secara in vitro yang memiliki
mikroanatomi realistis karena kemampuan mengatur dirinya sendiri dan memperbaharui
dirinya seperti in vivo (183). Mereka membawa perbaikan penting dalam rekayasa
jaringan dengan menunjukkan tingkat kompleksitas seluler yang mirip dengan organ
asli, menjembatani kesenjangan antara lapisan tunggal 2D dan pengujian pada hewan
[163,194]. Sampai saat ini, beberapa kultur organotipik 3D yang mereplikasi berbagai
organ yang terlibat dalam saluran pencernaan, seperti pankreas [195], lambung [196]
dan usus [197], telah dikembangkan. Khususnya, organoid kecil di dalam usus, juga
disebut usus mini atau enteroid, adalah teknologi canggih yang saat ini mendorong
pemodelan in vitro untuk menyelidiki mekanisme fisio-patologis. Usus mini dapat
mereplikasi morfologi dan fisiologi jaringan in vivo dengan mempertahankan kondisi
dan fungsi fisiologis utama usus (misalnya kripta dan pembentukan vili yang menonjol,
aktivitas metabolisme sitokrom P-450, sekresi lendir) untuk waktu yang lama (Gbr.
3C, D) [163.198.199 ]. Mereka mempunyai daerah berongga pusat yang terdiri dari
sel-sel yang berdiferensiasi (misalnya sel goblet, sel enter-oendokrin, enterosit), yang
diekstrusi ke dalam lumen membentuk domain mirip vili dan mikrovili, dan daerah
puncak tempat sel ISC dan Paneth berada. menimbulkan basis ruang bawah tanah
[194.200].
Enteroid biasanya berasal dari jaringan primer (baik dari penanda Lgr5 yang
mengekspresikan ISC atau kriptus usus terisolasi [201-203]) atau juga dari sel induk
berpotensi majemuk (PSC), baik dalam bentuk terinduksi (iPSCs) maupun embrionik
(ESCs). ) sel [204], yang dapat berdiferensiasi menjadi semua jenis sel usus dewasa
sehingga menciptakan sistem kultur multilineage [205]. Khususnya, dalam skenario
pengobatan yang dipersonalisasi, organoid yang diinduksi sel induk yang berasal
dari usus pasien sangat berguna untuk membangun biobank pasien dan platform
spesifik untuk mengevaluasi strategi terapeutik yang mencegah respons imun apa
pun [206].
Namun, meskipun struktur seluler 3D ini menyerupai kompleksitas usus kecil
manusia, morfologi dan arsitekturnya mungkin merupakan hambatan yang signifikan
untuk mempelajari fungsi penyerapan penghalang usus karena geometrinya [207].
Lumen yang tertutup menghalangi akses langsung ke permukaan apikal sehingga
menghambat penilaian PK terhadap zat endogen dan asing [207,208]. Sangat sulit
untuk memanipulasi sel yang terperangkap dan melakukan analisis kuantitatif difusi
transeluler dan paraseluler serta keberadaan pembawa apikal tanpa mengubah
arsitektur organoid [209]. Untuk alasan ini, metode alternatif untuk mengakses sisi
luminal, seperti teknik mikroinjeksi, telah disusun, khususnya untuk memeriksa
fenomena transportasi makanan, racun dan obat-obatan melintasi epitel usus [207].
Misalnya, translokasi senyawa monosakarida (misalnya glukosa dan fruktosa) dan
peptida (misalnya Gly-Sar) diselidiki dengan mengadopsi strategi ini dan
mengkonjugasikan a
258
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
pelacak fluoresen ke zat yang diinginkan [204.210.211]. Meskipun demikian, biaya
fluorofor yang berlebihan dan terbatasnya kemampuan reproduksi mikroinjeksi, yang
biasanya memerlukan penggunaan mikromanipulator, menghambat penerapannya
pada organoid untuk mempelajari permeasi zat [62,204]. Selain itu, strategi ini hanya
memperoleh keberhasilan yang terbatas karena juga menimbulkan kerusakan yang
tidak dapat diperbaiki pada jaringan [212].
Solusi lain diidentifikasi dengan mengganggu struktur 3D organoid secara mekanis
dan kemudian melapisi kembali sel-sel yang dipulihkan dalam pelat 2D tradisional
untuk mendapatkan sel multilineage usus yang terdiferensiasi dengan baik dalam
konformasi yang mudah digunakan, memungkinkan manipulasi langsung pada sisi
apikal dan basolateral jaringan. [213]. Baru-baru ini, metode ini diadopsi oleh Yoshida
dkk. untuk mengevaluasi masuk dan metabolisme senyawa farmasi [214]. Khususnya,
setelah kultur organotipik terbentuk dari iPSC manusia, kultur tersebut kemudian
dipisahkan secara mekanis. Kemudian, para peneliti memurnikan kultur dari sel
mesenkim, yang dapat mempengaruhi aktivitas penyaringan model, membiakkan IEC
turunan iPSC yang dikumpulkan sebagai lapisan tunggal [197,214]. Potensi penghalang
iPSC-IECs yang ada dikonfirmasi oleh metabolisme terfenadine dan midazolam yang
tepat, yang masing-masing merupakan substrat perwakilan CYP3A dan CYP2J2 serta
enzim CYP3A, dan tidak dapat direproduksi dengan model 2D konvensional. Teknik
ini juga valid untuk menilai penyerapan molekul lain, membuktikan keandalan lapisan
tunggal epitel turunan organoid untuk menyelidiki penyerapan xenobiotik [104,214].
Namun, proses disosiasi dapat mengganggu kompartemen sel induk dan dengan
demikian kemampuan propagasi organ-noid secara terus menerus. Selain itu, penulis
menyarankan bahwa penyempurnaan prosedur yang disajikan masih diperlukan untuk
memastikan reproduktifitas dan replikasi untuk melakukan pengujian throughput tinggi
[214].
Oleh karena itu, usus kecil bukanlah alat yang paling mudah digunakan untuk
menyelidiki proses transportasi melalui model penghalang usus. Selain itu, tidak
adanya pembuluh darah, yang penting untuk transportasi nutrisi dan limbah, serta
rangsangan cairan dan mekanik (misalnya aliran luminal atau gerakan peristaltik)
sangat berdampak pada keandalan model [194,197]. Untuk menutup kesenjangan ini,
strategi yang mungkin dilakukan adalah dengan mengintegrasikan enteroid ini
dengan sistem kultur dinamis, seperti bioreaktor komersial atau perangkat fluida yang
dibuat khusus, di mana parameter fisik, biologi, dan kimia dapat ditentukan secara
akurat [215,216].
Namun demikian, peningkatan biaya untuk pembentukan dan pemeliharaan
enteroid juga harus dipertimbangkan dalam pandangan pra-klinis. Dalam skenario ini,
juga diketahui bahwa hasil yang diperoleh dari uji toksisitas dan kemanjuran obat,
yang dilakukan dengan menggunakan organoid usus, seringkali kurang dapat
direproduksi karena variabilitas intrinsik dari sumber, ukuran dan bentuk organoid
tersebut [7,215]. Semua aspek ini dapat menyebabkan kesulitan yang signifikan dalam
mendapatkan statistik yang kuat dari hasil yang diperoleh, seperti profil PK dari
kandidat obat baru, sehingga mengganggu potensi translasi dari mini-guts sebagai
platform penyaringan praklinis [62]. Oleh karena itu, upaya lebih lanjut tentunya
diperlukan untuk mempertimbangkan sistem organotipik yang menjanjikan ini dalam
perspektif yang semakin berkembang saat ini untuk mengurangi sebanyak mungkin
pengujian pada hewan dalam penemuan dan pengembangan obat (217).
4.3. Jaringan usus kecil yang direkonstruksi manusia
Epi-IntestinalTM adalah model jaringan usus manusia 3D inovatif yang
direkonstruksi dan dikembangkan oleh MatTek Corporation yang secara cermat
merekapitulasi beberapa isyarat penghalang usus kecil asli. Memang, hal ini terbukti
menjadi alat fungsional yang relevan secara biologis dalam berbagai aplikasi, seperti
penyerapan obat dan metabolisme serta toksisitas GIT dan studi inflamasi [85,218].
Teknologi terbaru ini muncul di bidang penelitian in vitro GIT berkat keunggulannya
yang telah terbukti dibandingkan sistem berbasis sel lain yang saat ini digunakan
[219,220]. Faktanya, Epi-Intestinal, seperti enteroid, terdiri dari heterogenitas seluler
yang berasal dari sel-sel usus primer, yang menjadikan keandalan data lebih solid
dibandingkan dengan berbasis sel yang diabadikan 2D.
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
model (Gbr. 3E). Secara khusus, ini mencakup enterosit, sel Paneth, sel M, dan
sel induk usus ke dalam epitel terpolarisasi, yang secara tepat mereplikasi fitur
arsitektur dan fenotipik usus kecil.
Selain itu, jaringan mikro organotipik ini memiliki permukaan luminal fisiologis
terbuka yang sangat berfungsi dalam menyelidiki pemrosesan obat dan nutrisi,
berbeda dari geometri tertutup model berbasis organoid. Yang penting, topografi
ini memungkinkan akses mudah ke kompartemen lumen yang sangat
menguntungkan untuk studi permeasi dua arah baik dari lumen ke aliran darah
dan sebaliknya [221].
Untuk menunjukkan analoginya dengan usus kecil manusia, fitur utama lain
dari Epi-intestinal diperiksa. Misalnya, Aye-hunie dan rekannya menunjukkan
pembentukan vili, mikrovili, persimpangan ketat dan batas sikat mirip dengan
skenario in vivo dengan melakukan analisis imunohistokimia [85]. Ekspresi genetik
dari enzim-enzim pemetabolisme dan trans-porter serapan dan penghabisan
ditentukan secara hati-hati dengan substrat selektif dan in-hibitor. Hasil penelitian
menunjukkan adanya MRP-1 dan MRP-2, BCRP, dan enzim pemetabolisme obat
utama (CYP3A4, CYP3A5, CYP2B6, CYP2C19, CYP2C9 dan UDP-
glucuronosyltransferases (UGT) dengan sedikit perbedaan biologis sesuai dengan
situasi manusia [ 85.220 ].
Hasil ini mendukung potensi peningkatan prediktabilitas sistem Epi-intestinal
dibandingkan dengan kultur sel Caco-2, di mana CYP3A4 dan beberapa
pengangkut obat hampir tidak ada atau diekspresikan dengan rendah (220).
Kehadiran transporter dan enzim yang relevan menjadikan Epi-intestinal model
yang cocok juga untuk studi bioavailabilitas banyak obat (termasuk talinolol,
ranitidine dan warfarin) dengan sifat fisikokimia yang berbeda. Dalam konteks ini,
sistem Epi-intestinal ditemukan sangat berguna untuk mengurutkan senyawa
dalam urutan obat yang diserap rendah (<50%), sedang (50-84%) dan tinggi
(ÿ85%) [221].
Sejalan dengan hal ini, korelasi yang baik antara ketersediaan GIT lintas pertama
(Fa × Fg) yang dihitung secara in vitro dengan nilai PK manusia terlihat pada panel
yang terdiri dari dua belas obat (misalnya atenolol dan midazolam) [220].
Ketidakmampuan sistem berbasis sel kanker dalam memprediksi penyerapan
pada manusia ditekankan dibandingkan dengan teknologi Epi-intestinal.
Data yang diukur dengan menggunakan jaringan organotipik usus menunjukkan
2
korelasi yang lebih tinggi dengan fraksi manusia (r =0,91) hormati Caco-2
sel (r 2
=0,71) [85.221]. Selain itu, reproduktifitas tinggi dan variabilitas jaringan
lot-to-lot yang rendah untuk pengujian permeabilitas telah ditunjukkan, dibandingkan
dengan kultur monolayer tradisional [85,222].
Oleh karena itu, jaringan mikro Epi-intestinal mewakili model 3D yang optimal
untuk menyelidiki penyerapan obat, dengan meniru aspek morfologi dan fungsi
usus kecil. Meskipun memberikan banyak keuntungan dibandingkan sistem in vitro
lain yang tersedia , beberapa keterbatasan menghambat penggunaannya dalam
penelitian farmasi. Misalnya, seperti model jaringan 3D lainnya, Epi-intestinal tidak
dilengkapi dengan vaskularisasi bagian dalam dan biasanya digunakan dalam
kondisi inkubasi statis, yang tidak menyerupai rangsangan fluida fisiologis dari
lingkungan mikro in vivo [219]. Selain itu, kurangnya daur ulang obat yang dinamis
mungkin meremehkan bioavailabilitasnya, terutama untuk obat yang dibersihkan
secara metabolik secara ekstensif [220]. Sepengetahuan kami, hanya Marrella dkk.
mengusulkan pendekatan baru untuk menyelesaikan masalah ini dengan
mengintegrasikan jaringan Epi-intestinal 3D ke dalam bioreaktor yang
dikomersialkan untuk lebih meniru lingkungan mikro dinamis-cairan fisiologis usus
[219]. Selain itu, jaringan mikro tersebut berasal dari donor tunggal sehingga tidak
dapat mewakili populasi dengan enzim metabolisme polimorfik (220).
Oleh karena itu, meskipun Epi-Intestinal adalah teknologi in vitro terkemuka
yang diterima secara luas oleh para ilmuwan formulasi dan ahli toksikologi sebagai
platform alternatif hewan yang sangat baik untuk pengujian penyerapan dan
toksisitas produk farmasi dan nutraceutical, diperlukan upaya tambahan untuk
menguji kumpulan senyawa yang lebih besar. untuk dilaksanakan.
259
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
5. Model 3D fluid-dynamic in vitro dari penghalang usus manusia
Model 3D fluid-dynamic in vitro adalah alat menjanjikan yang berpotensi
mereproduksi secara dekat fisiologi kompleks usus manusia, mengatasi batasan
yang memengaruhi kultur statis. Dalam bidang penelitian gastroenterologi, mereka
memberikan aspek fisikokimia penting yang sangat penting dalam meniru aktivitas
usus, menciptakan kembali lingkungan mikro dinamis seperti in vivo [229].
Faktanya, aliran cairan dan rangsangan mekanis terbukti sangat mengubah profil
ekspresi gen (target 23.000 gen) dibandingkan dengan sistem statis (230). Di sini,
kami memberikan ikhtisar tentang usus-on-chip yang ada dan, lebih umum lagi,
platform fluida yang bertujuan untuk merekapitulasi fisiologi usus manusia dengan
tingkat skala organ untuk penyelidikan penyerapan dan metabolisme. OOC usus
manusia biasanya terdiri dari 2 saluran, meniru lumen usus dan pembuluh darah,
dipisahkan oleh membran berpori berlapis gel yang meniru ECM di mana sel-sel
epitel usus dapat dikultur (seperti ditunjukkan pada Gambar 4A- SM). Seringkali,
Polydimethylsiloxane (PDMS) digunakan untuk merealisasikan chip ini karena
dapat menyerap gas dan memungkinkan pengetikan cepat dan pencitraan resolusi
tinggi [62]. Dalam sistem ini, kondisi budaya dinamis dibentuk dengan menerapkan
aliran fluida yang disesuaikan; dengan cara ini, masuk dan keluarnya zat-zat yang
ada dalam chyme dan aliran darah dapat diselidiki melintasi penghalang simulasi
usus [62,207].
Menariknya, meskipun garis sel yang diabadikan (misalnya sel Caco-2)
menunjukkan beberapa keterbatasan dalam kondisi kultur statis, mereka dapat
mengembangkan lapisan epitel usus kompak dengan struktur mirip vili 3D dan
kripta basal ketika distimulasi dengan baik oleh lingkungan aktif dinamis-fluida
[ 179,231 –234]. Selain itu, sel Caco-2 menyelesaikan diferensiasinya setelah 5-7
hari di bawah aliran cairan, tidak seperti lapisan tunggal planar yang menunjukkan
fenotip matang lengkap setelah 21 hari (Gambar 4B) [56,179,233,235,236].
Ketika rangsangan fluida juga dikombinasikan dengan strain siklik mekanis
untuk melakukan deformasi seperti peristaltik, sel-sel usus mengalami diferensiasi
spontan yang memprogram ulang dirinya menjadi 4 jenis sel usus kecil yang
berbeda (enterosit, enteroendokrin, sel Pan-eth dan sel Goblet), menyajikan
sebuah kolom di dalamnya . morfologi sel mirip vivo [179].
Dalam konteks ini, beberapa penelitian yang bertujuan untuk menyelidiki
xenobiotik dan entitas terkait makanan yang diangkut melintasi epitel usus
dilakukan dan dibandingkan dengan kultur tradisional berbasis ruang Transwell
atau Ussing. Misalnya, Kulthong dkk. melakukan studi bio-kinetik terhadap
senyawa permeabilitas tinggi (antipirin, ketoprofen dan digoksin) dan rendah
(amoksisilin) dalam dua kondisi kultur yang berlawanan. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa penyerapan obat yang lebih rendah terjadi pada gut-on-a-
chip sehubungan dengan kondisi statis dengan nilai permeabilitas yang sejalan
dengan BCS. Demikian pula, tingkat penyerapan beberapa senyawa (kurkumin,
manitol, dekstran, kafein dan atenolol) dalam perangkat mikrofluida yang
diunggulkan sel Caco-2 dilaporkan sebanding dengan data manusia [56.231.234].
Selain itu, di bawah stimulasi dinamis, sel Caco-2 terbukti efisien dalam memeriksa
dan mereproduksi profil PK agen kemoterapi yang diberikan secara oral secara in
vitro , yang seringkali gagal melewati penghalang usus karena kelarutan dan
kemampuan permeabilitasnya yang rendah. Wawasan baru diberikan untuk obat
kemoterapi lipofilik seperti SN-38 (7-ethyl-10-hydroxycamptothecin) dan obat
antineoplastik yang disetujui seperti 5-FU [56,237]. Khususnya, untuk yang terakhir
ini, kurva konsentrasi-waktu dengan pola penyerapan dan ekskresi seperti in-vivo
dihasilkan dengan menerapkan aliran peristaltik pada saluran atas, dan efek
terapeutiknya pada sel kanker paru target diverifikasi dalam chip yang sama.
Oleh karena itu, jelas bahwa aliran cairan secara signifikan mengatur
pengangkutan obat, misalnya membatasi difusi obat karena resirkulasi isi lumen.
Kondisi dinamis memicu morfogenesis seperti usus 3D in vivo, meningkatkan
permukaan serap yang tersedia dan, akibatnya, efisiensi serap jaringan (238).
Machine Translated by Google

A.Fedi dkk. Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268

Gambar 4. OOC usus menyediakan lingkungan yang relevan secara fisiologis: epitel usus manusia dapat direkapitulasi secara akurat secara in vitro. (A) Desain khas
dari usus-on-a-chip yang terdiri dari dua saluran yang meniru lumen dan sirkulasi darah, dipisahkan oleh membran tempat sel-sel dikultur. (B) Rendering 3D sel Caco-2
yang diunggulkan chip mikrofluida (kiri); immunostaining sel Caco-2 yang dikultur dalam sistem Transwell (tengah, kondisi statis) pada hari ke 21 dan perangkat
mikrofluida (kanan, kondisi dinamis) pada hari ke 3. Aliran cairan merangsang pembentukan morfologi 3D bergelombang dengan batas kuas. Ketinggian monolayer
mencapai 40 ÿm – 50 ÿm pada hari ke 3 ketika distimulasi secara fluida (bawah); skala bar = 50 ÿm [231]. (C) Representasi skema (kiri atas, [216]) dan gambar (kanan
atas, diterbitkan ulang dan diadaptasi dengan izin Royal Society of Chemistry, Hak Cipta (2012), dari [236]) dari “Intestine Chip” oleh Emulate Inc. terdiri dari dua saluran
yang dipisahkan oleh epitel yang menyerupai usus dan dikelilingi oleh dua ruang vakum lateral yang memberikan tekanan siklik pada sel; mikrograf fluoresen confocal
mengkonfirmasi bahwa rangsangan fluida dan mekanis menginduksi diferensiasi sel yang berasal dari organoid menjadi beberapa jenis sel usus setelah 8 hari kultur
dalam chip (bawah) (216). (D) Desain perangkat aliran ganda yang meledak mampu menahan dan mengalirkan darah ke bagian jaringan usus dengan ketebalan penuh
(atas); Pewarna merah dan biru menunjukkan sirkuit fluida ganda yang independen (bawah); dicetak ulang dari [243], dengan izin dari AIP Publishing. (E) Ilustrasi skema
chip mikro-fluida yang mampu mempertahankan eksplan jaringan usus ex vivo dalam lingkungan yang relevan secara fisiologis (kiri); Gambar eksplan titik dua tikus di
dalam perangkat (kanan, atas) pada 0 jam dan 72 jam melalui jendela tampilan (kanan, bawah). Bilah skala: 2 mm; diterbitkan ulang dengan izin Royal Society of
Chemistry, Hak Cipta (2020), dari [244]. (F) Peta panas profil ekspresi gen yang membandingkan jaringan in vivo (jejunum, ileum, duodenum) dan model epitel yang
direkonstruksi secara in vitro (Transwell berbasis Caco-2, chip berbasis Caco-2, organoid 3D, chip usus berbasis organoid) . Menggabungkan sel-sel epitel yang berasal
dari organoid dengan stimulasi fluidik dan mekanis memungkinkan untuk menciptakan kembali fisiologi tingkat organ usus dengan lebih baik (247). (G) Representasi
skema sistem fluidik MIVO® yang menampung monolayer Caco-2 dan jaringan EpiIntestinal™ (SMI-100) dan menyerupai aliran kapiler di bawah model usus (atas);
analisis imunohistokimia menunjukkan bahwa jaringan EpiIntestinalTM (SMI-100) mengembangkan morfologi mirip in vivo (adanya vili dan mikrovili) ketika distimulasi
dengan baik oleh aliran cairan yang relevan secara biologis [219].

Faktanya, baru-baru ini ditunjukkan bahwa gaya yang berhubungan dengan aliran
cairan seperti tegangan geser memainkan peran penting dalam pertumbuhan sel
epitel dan pembentukan mikrovili [239,240].
Khususnya, sel Caco-2 mengeluarkan lendir, tidak seperti kultur statis standar
dalam chip mikrofluida (179). Lebih lanjut, telah ditunjukkan bahwa aliran luminal dan
basal bertanggung jawab atas ekspresi transporter yang tepat pada sisi apikal dan
basolateral penghalang [231]. Demikian pula, chip bio-mimetik mendorong
pembentukan jalur metabolisme usus utama, berbeda dari sistem Transwell, di
mana sel-sel kekurangan ekspresi sebagian besar enzim [232]. Misalnya, perancah
berbasis kolagen 3D yang diunggulkan dengan sel Caco-2 diintegrasikan ke dalam
chip untuk memasangkan topografi usus 3D dengan pola aliran cairan [193,241].
Namun, hidrogel sulit untuk disuntikkan ke perangkat mikro pada konsentrasi rendah,
dan, pada saat yang sama, peningkatan volume kemudian mengubah kekakuan
matriks mimesis. Oleh karena itu, teknik ini saat ini jarang digunakan [62].
Selain itu, perlu diingat bahwa sel Caco-2 juga menunjukkan profil genetik
bermutasi spesifik ketika distimulasi secara fluida [242].
Oleh karena itu, pendekatan berharga lainnya diidentifikasi
menggabungkan eksplan mamalia dengan ketebalan penuh dalam platform aliran
ganda [243–245] (Gbr. 4D-E). Meskipun hasil yang menjanjikan diperoleh dengan
meniru semua aspek patofisiologi usus, penggunaannya masih sangat terbatas
karena kesulitan yang luar biasa dalam kegunaan dan pemeliharaannya dalam
kultur, sehingga menghambat kemungkinan untuk melakukan uji farmakologi
[207,243].
Sampai saat ini, kemajuan dalam penelitian GIT dan hasil yang diharapkan dari
perangkat mikrofluida menentukan keadaan untuk menciptakan kembali fisiologi
tingkat organ usus dengan menggabungkan organoid dan perangkat fluida. Dalam
skenario ini, beberapa peneliti mampu membiakkan sel induk primer (berasal dari
enteroid yang terfragmentasi) dalam platform ini, mengatasi tantangan yang
ditunjukkan oleh organoid manusia dalam melakukan pengujian skrining karena
geometri tertutup, seperti yang telah dibahas sebelumnya [246]. Dengan cara ini,
epitel usus yang terbentuk dengan baik dengan persimpangan yang rapat, batas
sikat dan tonjolan seperti vili yang memanjang, serta diferensiasi usus yang lengkap
dapat dikembangkan sebagai respons terhadap rangsangan cairan dan mekanis
dalam waktu 8-12 hari [246-248] . Mikroskop fluoresensi mengkonfirmasi
keberhasilan pematangan semua jenis sel epitel usus utama, seperti sel proliferatif
di basal.

260
Machine Translated by Google

A.Fedi dkk. Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268

Tabel
4 Karakteristik model fluid-dinamis.
Model Sumber sel Fitur Adv Dis-adv Ref

Gut-on-a chip Garis sel (mono dan kultur Chip berbasis PDMS dengan 2 saluran • Lapisan lendir • • Kemungkinan tidak spesifik [231–235]
bersama) yang mereproduksi lumen usus dan pembuluh Pembentukan seperti vili 3D pengikatan molekul hidrofobik
darah, dipisahkan oleh membran berpori struktur ke permukaan PDMS •
berlapis gel yang meniru ECM • Reproduksi tingkat fisiologis aliran
cairan dan gaya geser. • Spontan dan Perubahan profil ekspresi gen
cepat

diferensiasi karena rangsangan

dinamis (5-7 hari) • Kombinasi
Perancah 3D menyala Garis sel (mono dan kultur Perangkat mikrofluida (lembaran PDMS dengan vili 3D • Kemungkinan tidak spesifik [193.241]
keping bersama) saluran fluida) terintegrasi dengan perancah geometri dengan aliran cairan pengikatan molekul hidrofobik
mirip vili berbasis hidrogel 3D berdampak positif terhadap ke permukaan PDMS •
diferensiasi sel Perancah
dapat membatasi laju
penyerapan •
Hidrogel mengalami variasi batch
• Proses fabrikasi yang
sangat kompleks •
Biaya tinggi • Pengujian
Mikrofluida Bagian jaringan usus dengan Aliran ganda yang memperfusi bagian • Model kultur biomimetik dan jangka pendek [243.244]
perangkat ketebalan penuh dan eksplan jaringan usus dengan ketebalan penuh atau eksplan organotipik usus. • Adanya (72 jam) • Skalabilitas dan
organotipik jaringan jaringan ex vivo dalam lingkungan yang bakteri secara simultan kemampuan pengulangan
relevan secara fisiologis komponen otot, saraf, imun dan epitel yang buruk
• Aliran cairan ganda yang
meniru lumen usus dan pembuluh darah
• Kombinasi sel-sel usus yang
berasal dari
“Chip Usus” oleh Garis sel (kultur mono dan ko- Chip berbasis PDMS dengan 2 saluran organoid dari tiga donor independen • Usus lebih panjang [216.236.247]
Emulate Inc. kultur), sel turunan organoid yang mereproduksi lumen usus dan pembuluh dengan teknologi chip mikrofluida diferensiasi (8-12 hari) •
darah, dipisahkan oleh membran berpori • Terbentuk dengan baik seperti Teknik
berlapis gel yang meniru ECM dan didukung in vivo eksperimen yang rumit • Biaya
dengan dua ruang vakum lateral yang menerapkan tinggi
regangan siklik ke sel
epitel usus • Rangsangan
cairan dan mekanis secara
simultan
• Profil ekspresi gen yang tepat
•
“MIVO” oleh Garis sel (kultur mono dan ko- Platform multi-ruang in vitro transparan optik dengan Transportasi massal fisiologis dan • Penggunaan volume yang lebih [22.219]
Bereaksi4hidup kultur), sel turunan organoid, mudah mengakomodasi monolayer sel 2D atau pembuangan limbah karena aliran besar dibandingkan chip
biopsi, jaringan jaringan manusia 3D dan biopsi dengan cairan dinamis • Ukuran mikrofluida. • Throughput rendah
rekonstruksi komersial 3D ukuran yang relevan secara klinis model jaringan yang relevan secara
klinis
• Kemungkinan untuk mempelajari
lewatnya molekul melintasi
penghalang usus kecil yang sehat
atau patologis

daerah, sel penghasil musin, enterosit yang ditutupi mikrovili padat, dan sel
enteroendokrin dan Paneth [216.247.248] (Gbr. 4C).
Menariknya, antarmuka jaringan-jaringan endotel-parenkim usus manusia juga
berhasil direkapitulasi dengan menyemai sel-sel endotel mikrovaskuler manusia di
dalam usus (HIMECs) di saluran bawah, memungkinkan penyelidikan jalur obat dan
konsumsi nutrisi melintasi penghalang yang lebih alami [ 216,247 ].
Oleh karena itu, chip usus yang berasal dari organoid adalah alat yang sangat
berguna untuk mewujudkan model usus manusia yang relevan secara klinis. Analisis
transkriptomik menunjukkan bahwa sistem berbasis sel primer manusia ini lebih
mirip dengan skenario usus kecil manusia dibandingkan dengan enteroid yang
diturunkan dari biopsi usus dua belas jari dan usus dua belas jari berbasis Caco-2 [216,247].
Oleh karena itu, masih terdapat kebutuhan mendesak untuk lebih meningkatkan
Kasendra dkk. [216,247] menemukan bahwa subset dari 305 gen yang terkait
dengan fungsi biologis dasar usus (misalnya pencernaan, metabolisme, transportasi,
detoksifikasi) diekspresikan dalam Duodenum Intestine-Chip yang serupa dengan
jaringan asli duodenum, menyoroti potensi platform ini untuk menyelidiki proses
biokinetik dan biotransformasi nutrisi dan obat-obatan (seperti yang diilustrasikan
pada Gambar 4F). Faktanya, lokalisasi apikal dan fungsi pengangkut obat utama,
seperti MDR1, BCRP dan PEPT1, dan ekspresi sitokrom CYP450 (CYP3A4) yang
tinggi telah dikonfirmasi.
Perangkat mikrofluida menawarkan kemungkinan untuk secara in vitro
mereproduksi secara menyeluruh proses biokimia yang terjadi secara dinamis di
usus manusia. Jelasnya, penggunaan sinergis sel primer dan chip fluida
memungkinkan pembentukan platform pra-klinis yang relevan secara fisiologis untuk
prediksi PK manusia yang lebih baik, risiko toksisitas, serta peningkatan ekstrapolasi
data in vitro-ke-in vivo dibandingkan dengan sel yang diabadikan. chip berbasis
garis.
Sayangnya, hingga saat ini, beberapa keterbatasan teknis masih ada pada
sistem ini, seperti kebocoran cairan, kebutuhan pompa, kesulitan dalam melakukan
eksperimen yang kuat dan throughput yang tinggi [249]. Selain itu, meskipun PDMS
memiliki sifat menguntungkan, PDMS dapat mengadsorpsi molekul kecil dan
hidrofobik, mempengaruhi evaluasi PK dan PD [250].
sistem OOC usus guna meningkatkan ketahanan dan keandalannya sebagai
platform skrining obat (Tabel 4). Teknik manufaktur alternatif telah diadopsi untuk
mewujudkan jenis sistem mikrofisiologis lainnya untuk penghantaran obat dan uji
toksisitas [251-253]. Sebuah penelitian inovatif baru-baru ini diterbitkan oleh Marrella
et al. untuk secara in vitro menjelaskan mekanisme penyerapan gula yang berbeda
(manitol dan laktulosa) dalam kondisi sehat dan patologis dengan menggabungkan
jaringan Epi-Intestinal dalam perangkat fluida komersial (bernama MIVO®), disajikan
pada Gambar. 4G, mampu menyerupai rangsangan fisiologis dari usus

261
Machine Translated by Google

A.Fedi dkk. Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268

lingkungan [219].
Secara keseluruhan, platform dinamis ini memiliki potensi besar untuk

,2
5[
mempelajari aktivitas usus di lingkungan hidup yang meniru manusia dengan

0801
82

0543

01
2
06

8055,9
0

9,5
-

-
hpc

685
apdia

],338322..22
01
menerapkan aliran luminal dan basal serta menciptakan gerakan seperti
peristaltik. Beberapa perbaikan dapat dilakukan lebih lanjut, misalnya dengan
mempertimbangkan variasi spasial yang ada di sepanjang usus,
mensimulasikan berbagai segmen organ ini dalam model in vitro yang sama .
Selain itu, integrasi mikrobiota usus dan sel imun dapat membuka jalan baru
-

-
6,0

6,0

-
45,1
8

,5[
PCU
E

78
-IA
S

]122.912.5
5,1
SC
2-O U

untuk reproduksi sistem in vivo yang lebih baik , meningkatkan pertumbuhan

dan kualitas opsi in vitro yang lebih andal , sesuai dengan prinsip 3R (Reduce,
Refine, replace) [ 254].

0,9111[
21

5,9
1
l iV
3

X-T9M
2

-
THC

-
5,54,1
8
6

-
3,3

0,04
iD

/2-OC-A

3]7
76

62
6
5

7
6. Pembahasan dan kesimpulan

Secara umum diketahui bahwa sifat ADME sangat penting bagi keberhasilan

]182[
61
-

515
3
2

24
3
/2-OCAC

-
TMH

IJAR

7,2
6
4

3,5
-9/2X-T

3
4

klinis calon obat. Sampai saat ini, bioavailabilitas oral yang buruk – karena
penyerapan usus yang tidak efisien – telah diidentifikasi sebagai penyebab
utama tingginya tingkat kegagalan persetujuan obat baru.
Karena alasan ini, beberapa sistem kultur in vitro yang meniru epitel dalam
721

6,7
1
2

84,51
-

-
%A0C
1

2,0

-
TMH

8,4
8

96,2
0
57
3
-9/2X-T

237

338
7
2-OC

4
8

8
7

usus telah menyebar luas pada tahap awal penemuan dan pengembangan
obat untuk memprediksi permeabilitas usus dengan lebih cepat dan sekaligus
mengurangi pengujian pada hewan, sehingga mempercepat penerjemahan
4,1

61
33
-

3,3
-

22
26

-
7,0

obat-obatan ke dalam klinik. Tabel 5 menunjukkan nilai Papp yang diperoleh

dari berbagai penelitian dan laboratorium dengan mengadopsi model in vitro
epitel usus yang telah dijelaskan sebelumnya, dengan fokus pada 17 obat
model yang termasuk dalam kelas BCS berbeda dan dicirikan oleh berbagai pKA.
73
-

12
-

-
6,6
2
31,2
6,0

13
5

Model 2D saat ini merupakan platform yang paling terstandarisasi karena

memungkinkan penyaringan yang hemat biaya dan throughput tinggi. Secara
khusus, sel Caco-2 telah diterima sebagai standar emas karena kemampuannya
sangat mirip dengan fenotip enterositik. Faktanya, model seluler Caco-2 dan
0,1
2
0

22
1[
-

,4,0
3
-

51
,9

,8
39

2057
19
576

95

2–.5
]8
0
2

19
]0 61
5

TC-7 menunjukkan korelasi yang jauh lebih tinggi dengan data in vivo jika
dibandingkan dengan model sintetis (Gbr. SI-2). Namun, meskipun kultur sel
konvensional ini menunjukkan korelasi kuantitatif yang baik dengan fraksi yang
01
1
53

02
4025,1
0

522[
1

-
TIM
H

,7
685
D
T
X2E

,772.]5
C
R
-9C
-K

diserap pada manusia untuk obat yang diangkut secara transelular, hanya
hasil kualitatif yang baik yang dicapai untuk rute lain, karena asal kolonnya
dan perubahan ekspresi protein dasar yang melakukan metabolisme dan
pengangkutan. Namun demikian, kultur sel Caco-2 dan HT-29-MTX - dengan
9,51
6[
8
3
0
2
0,1
9
0
5
2

,73
1
271

.96
5
1
18,3

94
51.8
6
5
2
16
2
5
8
0

.3712
8

atau tanpa kehadiran perancah 3D menunjukkan peningkatan korelasi dengan

,511]6

data in vivo (R2 ), seperti yang digambarkan pada Gambar SI-2.

0,12
3[
5
0
4
1
CCT

17
8,4
55 3
7
2
54
3
1
5
6
2-O7C-A

,]2
3– 7
4
1
3
0
9
8

Oleh karena itu, dengan semakin banyaknya bukti bahwa model in vitro
,5517
6
5

multiseluler 3D merekapitulasi lingkungan in vivo dengan lebih baik , beberapa

kelompok telah mengembangkan alat yang lebih prediktif untuk mempelajari
73
5[
9
2
1
7
4
0
-
APVP

3,6
,8
9
6

konsumsi dan pencernaan xenobiotik melalui penghalang usus. Diantaranya,

–4
–0,67
]2 2
8
5
1
9
3,2
]63
4
77
3
4
6
0
8
1
5

organoid mampu mereproduksi diferensiasi multilineage serta morfologi 3D

jaringan asli; namun penggunaannya terbatas dalam bidang ini karena
permukaan lumen tidak dapat diakses. Hasilnya, jaringan usus hasil
rekonstruksi manusia yang lebih mudah digunakan telah dikomersialkan
2,5
2
9
1
ytxA
dc(

APMAP
km

03
6,1
3
)/1
-0a

45
9
2
6h

untuk melakukan studi permeasi dua arah dari lumen ke aliran darah dan
sebaliknya. Hubungan antara Papp dan Fa ditemukan lebih tinggi dari 0,98
dengan menggunakan jaringan Epi-IntestinalTM, di mana terdapat banyak sel.
05

55
58
54

89

4,28
2[
6
4
9
1
3
04
6

59

79

04
,]8
7 89
6526.]5
9
1
2
6 60
05
4
8
7
1
,2
95

Bagaimanapun, kurangnya rangsangan dinamis yang memediasi proses

ADME dalam tubuh manusia mendorong pembuatan teknologi mikro-fisiologis
eaB
K
F

UKA

AYAS

UKA

AYAS

AYAS

II
UKA

VI
VI
II
AYAS

II
AYAS

UKA

AYAS

UKA

AYAS
alC

yang mampu meniru gradien kimia, aliran luminal, dan gerakan peristaltik
sS

dengan cara yang sangat terkendali. Kemajuan luar biasa baru-baru ini
diperoleh dengan menggabungkan cangkok organotipik dengan sistem dinamis
fluida dalam penelitian GIT. Namun, banyak tantangan yang harus dihadapi
untuk mendapatkan hasil tes yang dapat direproduksi dengan menggunakan platform ini.
Memang benar, karakterisasi obat yang sistematis, protokol standar untuk
membiakkan sel-sel yang berasal dari epitel dan organoid, serta metrik yang
5 jelas dalam memilih teknik dan bahan manufaktur masih tertinggal dalam
menerjemahkan perangkat tersebut ke pasar. Mengingat hal ini, sejumlah
niefaK

nipezamabraK

niditemiS

lisailsaAs
dizaitorolkordiH
7

neforpoteK

lolorpoteM

niditinaR

feR
dimesoruF

nexorpan

lolonarporP

nilatubreT
lolonetA

lomatesaraP

nilisiskomA

niripitnA

limapareV

besar upaya harus dilakukan untuk meningkatkan kemampuan reproduksi

tam

Tabel
vitro .
in
issahaelukelm
e tun
rsgtdua bsim
ilp
ro e R
os
p
e
u

eksperimental antara dan di dalam laboratorium dan dengan demikian proses in vitro ke in
na

262
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
ekstrapolasi data, yang pada akhirnya memperoleh kumpulan data yang kuat yang
dapat menunjukkan keandalan model ini.
Oleh karena itu, implementasi aspek-aspek ini di masa depan, bersama dengan
realisasi model yang lebih mirip in vivo yang harus mencakup
seluruh mikrobioma, lapisan lendir dan jenis sel lainnya (misalnya sel imun), akan
meningkatkan ketahanan dan potensi prediksi sistem ini.
Kontribusi penulis
A. Fedi mengonsep karya tersebut; A. Fedi, C. Vitale dan G. Ponschin melakukan
kurasi data; A. Fedi, C. Vitale dan G. Ponschin menulis draf aslinya; A. Fedi, C. Vitale,
S. Ayehunie, S. Scaglione merevisi dan mengedit draf asli; M. Fato dan S. Scaglione
mengawasi pekerjaan tersebut; S. Scaglione merevisi naskah akhir. Semua penulis
telah membaca dan menyetujui versi final naskah.
Deklarasi Kepentingan Bersaing
Penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan untuk diungkapkan.
Lampiran A. Data tambahan
Data tambahan untuk artikel ini dapat ditemukan online di https://doi. org/10.1016/
j.jconrel.2021.05.028.
Referensi
[1] R. Prantil-Baun, R. Novak, D. Das, MR Somayaji, A. Przekwas, DE Ingber,
Analisis farmakokinetik dan farmakodinamik berbasis fisiologis yang dimungkinkan oleh
organ-on-chip yang terhubung secara mikrofluida, Annu. Pdt. Farmakol. beracun. 58
(2018) 37–64.
[2] J. Wang, L. Urban, Dampak pembuatan profil ADME awal pada penemuan obat dan strategi
pengembangan, Drug Discov. Dunia. (2004) 73–86.
[3] DB Kassel, Penerapan ADME throughput tinggi dalam penemuan obat, Curr.
Pendapat. kimia. biologi. 8 (2004) 339–345, https://doi.org/10.1016/j.
cbpa.2004.04.015.
[4] AP Li, Skrining sifat obat ADME/Tox manusia dalam penemuan obat, Penemuan Obat. Hari
ini. 6 (2001) 357–366, https://doi.org/10.1016/S1359-6446(01) 01712-3.
[5] H. Yu, A. Adedoyin, ADME-Tox dalam penemuan obat: integrasi teknologi eksperimental
dan komputasi, Drug Discov. Hari ini. 8 (2003) 852–861, https://doi.org/10.1016/
S1359-6446(03)02828-9 .
[6] S. Balani, G. Miwa, L.-S. Gan, J.-T. Wu, F. Lee, Strategi pemanfaatan alat ADME in vitro dan
in vivo untuk optimalisasi timbal dan pemilihan kandidat obat, Curr. Atas.
medis. kimia. 5 (2005) 1033–1038, https://doi.org/10.2174/
156802605774297038.
[7] PA Billat, E. Roger, S. Faure, F. Lagarce, Model penyerapan obat dari usus kecil: kemana
kita dan kemana kita pergi? Penemuan Narkoba. Hari ini. 22 (2017) 761–775, https://doi.org/
10.1016/j.drudis.2017.01.007.
[8] L. Lin, H. Wong, Memprediksi penyerapan obat oral: Tinjauan mini tentang model
farmakokinetik berbasis fisiologis, Pharmaceutics 9 (2017), https://doi.org/ 10.3390/
pharmaceutics9040041.
[9] DM Mudie, GL Amidon, GE Amidon, Parameter fisiologis untuk oral
pengiriman dan pengujian in vitro, Mol. farmasi. 7 (2010) 1388–1405, https://doi.org/
10.1021/mp100149j.
[10] P. Fasinu, V. Pillay, VMK Ndesendo, LC du Toit, YE Choonara, Beragam
pendekatan untuk peningkatan bioavailabilitas obat oral, Biopharm. Tempat Penyimpanan
Narkoba . 32 (2011) 185–209.
[11] T. Hou, Y. Li, W. Zhang, J. Wang, Perkembangan terkini prediksi in silico penyerapan usus
dan bioavailabilitas oral, Comb. kimia. Layar Throughput Tinggi. 12 (2009) 497–506,
https://doi.org/10.2174/138620709788489082.
[12] SE Rosenbaum, Farmakokinetik dasar dan farmakodinamik: Buku teks terintegrasi dan
simulasi komputer, John Wiley & Sons, 2016.
[13] S. Majumdar, AK Mitra, Modifikasi kimia dan pendekatan formulasi untuk meningkatkan
transportasi obat melintasi membran sel, Expert Opin. Pengiriman Obat. 3 (2006) 511–527,
https://doi.org/10.1517/17425247.3.4.511.
[14] D. Dahlgren, H. Lennern¨ as, Permeabilitas usus dan penyerapan obat:
pendekatan eksperimental prediktif, komputasi dan in vivo, Pharmaceutics 11 (2019),
https://doi.org/10.3390/pharmaceutics11080411.
[15] L. Meigs, L. Smirnova, C. Rovida, M. Leist, T. Hartung, Pengujian pada hewan dan
alternatif - omics yang paling penting adalah ekonomi, ALTEX 35 (2018) 275–305, https://
doi.org/10.14573/altex.1807041.
[16] R. Negoro, K. Takayama, Y. Nagamoto, F. Sakurai, M. Tachibana, H. Mizuguchi, Pemodelan
induksi CYP3A4 yang dimediasi obat dengan menggunakan sel mirip enterosit yang
diturunkan dari sel iPS manusia, Biochem. Biofisika. Res. Komunitas. 472 (2016) 631–636.
263
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
[17] L. Romero, JM Vela, Model alternatif dalam penemuan dan pengembangan obat bagian I:
model in silico dan in vitro, Model Vivo. Penemuan Narkoba. 9783527333 (2014) 27–58,
https://doi.org/10.1002/9783527679348.ch02.
[18] G. Dothel, V. Vasina, G. Barbara, F. De Ponti, Model hewan secara kimia
menginduksi peradangan usus: prediktifitas dan masalah etika, Pharmacol. Ada. 139 (2013)
71–86, https://doi.org/10.1016/j.pharmthera.2013.04.005.
[19] SK Doke, SC Dhawale, Alternatif pengujian pada hewan: ulasan, Saudi Pharm. J.23 (2015)
223–229, https://doi.org/10.1016/j.jsps.2013.11.002.
[20] H. Lee, DS Kim, SK Ha, I. Choi, JM Lee, JH Sung, Multi-organ-on-a-chip (MOC) tanpa pompa
yang dikombinasikan dengan model farmakokinetik-farmakodinamik (PK-PD),
Bioteknologi. Bioeng. 114 (2017) 432–443, https://doi.org/10.1002/bit.26087 .
´
[21] M. Kapaÿczynska, T. Kolenda, W. Przybyÿa, M. Zajÿczkowska, A. Teresiak, V. Filas, M. Ibbs,
R. Bli´zniak, ÿ. ÿuczewski, K. Lamperska, kultur sel 2D dan 3D – perbandingan berbagai
jenis kultur sel kanker, Arch. medis. Sains. 14 (2018) 910–919, https://doi.org/10.5114/
aoms.2016.63743.
[22] A. Marrella, model kanker ovarium dinamis cairan 3D yang menyerupai pemberian obat
sistemik untuk uji kemanjuran, ALTEX 37 (2020) 1–14, https://doi.org/ 10.14573/
altex.2003131.
[23] C. Vitale, A. Fedi, A. Marrella, G. Varani, M. Fato, S. Scaglione, Hidrogel perfusi 3D
merekapitulasi lingkungan dinamis kanker untuk menyelidiki kolonisasi metastasis secara
in vitro, Polimer (Basel). 12 (2020) 1–19, https://doi.org/ 10.3390/polym12112467.
[24] D. Huh, GA Hamilton, DE Ingber, Dari kultur sel 3D hingga organ-on-chip,
Biol Sel Tren. 21 (2011) 745–754.
[25] R. Edmondson, JJ Broglie, AF Adcock, L. Yang, Sistem kultur sel tiga dimensi dan aplikasinya
dalam penemuan obat dan biosensor berbasis sel, Assay Drug Dev. Teknologi. 12 (2014)
207–218, https://doi.org/10.1089/adt.2014.573.
[26] U. Marx, T. Akabane, TB Andersson, E.Baker, M. Beilmann, S. Beken,
S. Brendler-Schwaab, M. Cirit, R. David, EM Dehne, I. Durieux, L. Ewart, S.
C. Fitzpatrick, O. Frey, F. Fuchs, LG Griffith, GA Hamilton, T. Hartung, J. Hoeng, H.
Hogberg, DJ Hughes, DE Ingber, A. Iskandar, T. Kanamori, H. Kojima, J. Kuehnl, M.
Leist, B. Li, P. Loskill, DL Mendrick, T. Neumann, G. Pallocca, I. Rusyn, L. Smirnova,
T. Steger-Hartmann, DA Tagle, A. Tonevitsky, S. Tsyb, M. Trapecar, B. Van de Water, J.
Van den Eijnden-van Raaij, P. Vulto, K. Watanabe, A. Wolf, X. Zhou, A. Roth, Sistem
mikrofisiologi yang terinspirasi dari biologi untuk memajukan manfaat pasien dan hewan
kesejahteraan dalam pengembangan obat, ALTEX 37 (2020) 364–394, https://doi.org/
10.14573/altex.2001241.
[27] AM Id, A. Fedi, G. Varani, I. Vaccari, MF Id, G. Firpo, P. Guida, N. Aceto, S.
S. Id, Nilai tegangan geser aliran darah yang tinggi dikaitkan dengan disagregasi cluster
sel tumor yang bersirkulasi dalam perangkat mikrofluida multi-saluran, PLoS One (2021)
1–19, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0245536 .
[28] D. Huh, HJ Kim, JP Fraser, DE Shea, M. Khan, A. Bahinski, GA Hamilton, D.
E. Ingber, Pembuatan mikro organ manusia pada chip, Nat. protokol. 8 (2013) 2135–
2157, https://doi.org/10.1038/nprot.2013.137.
[29] KJ Jang, KY Suh, Perangkat mikrofluida multi-lapis untuk kultur dan analisis sel tubular
ginjal yang efisien, Lab Chip. 10 (2010) 36–42, https://doi.org/ 10.1039/b907515a.
[30] J. Deng, W. Wei, Z. Chen, B. Lin, W. Zhao, Y. Luo, X. Zhang, Merekayasa platform liver-on-
a-chip untuk meniru fungsi hati dan aplikasi biomedisnya: a ulasan, Mesin Mikro. 10 (2019)
676.
[31] LM Griep, F. Wolbers, B. De Wagenaar, PM Ter Braak, BB Weksler, I.
A. Romero, PO Couraud, I. Vermes, AD Van Der Meer, A. Van Den Berg, BBB di CHIP:
Platform mikrofluida untuk memodulasi fungsi penghalang darah-otak secara mekanis dan
biokimia, Biomed. Perangkat mikro. 15 (2013) 145–150, https://doi. org/10.1007/
s10544-012-9699-7.
[32] M. Kitsara, D. Kontziampasis, O. Agbulut, Y. Chen, Heart on a Chip: Micro-
Nanofabrication dan Microfluidics Steering the Future of Cardiac Tissue
Engineering, 2019, https://doi.org/10.1016/j .mee.2018.11.001.
[33] MB Esch, JH Sung, J. Yang, C. Yu, J. Yu, JC March, ML Shuler, Pada membran polimer
berpori chip untuk integrasi epitel saluran pencernaan dengan perangkat 'body-on-a-chip'
mikrofluida , Biomed. Perangkat mikro. 14 (2012) 895–906.
[34] C. Beaurivage, E. Naumovska, YX Chang, ED Elstak, A. Nicolas, H. Wouters, G. van
Moolenbroek, HL Lanz, SJ Trietsch, J. Joore, Pengembangan gut-on-a- chip model untuk
pemodelan penyakit throughput tinggi dan penemuan obat, Int. J.Mol.
Sains. 20 (2019) 5661.
[35] P. Neuÿzil, S. Giselbrecht, K. L¨ ange, TJ Huang, A. Manz, Meninjau kembali teknologi lab-on-
a-chip untuk penemuan obat, Nat. Penemuan Narkoba Pendeta. 11 (2012) 620–632,
https://doi.org/10.1038/nrd3799.
[36] EW Esch, A. Bahinski, D. Huh, Organs-on-chip di garis depan obat-obatan
penemuan, Nat. Penemuan Narkoba Pendeta. 14 (2015) 248–260, https://doi.org/10.1038/
nrd4539 .
[37] N. Khalid, I. Kobayashi, M. Nakajima, Perkembangan lab-on-chip terkini untuk penemuan obat
baru, Wiley Interdiscip. Pdt. Syst. biologi. medis. 9 (2017), e1381.
[38] EN Marieb, Anatomi dan Fisiologi Manusia 1, CA Benjamin/Cummings Publ.
Perusahaan, Ine., Redwood City, 1992, hlm.306–307. ¨
Dressman, H. Lennernas, 2000. Penyerapan Obat Oral: Prediksi dan Penilaian, [39] JB
[40] PR Kiela, FK Ghishan, Fisiologi penyerapan dan sekresi usus, Praktik Terbaik. Res. Klinik.
Gastroenterol. 30 (2016) 145–159, https://doi.org/10.1016/j. bpg.2016.02.007.
[41] L. Shargel, BC Andrew, S. Wu-Pong, Biofarmasi & Farmakokinetik Terapan,
Appleton & Lange Stamford, 1999.
[42] CAM Fois, TYL Le, A. Schindeler, S. Naficy, DD McClure, MN Baca,
P. Valtchev, A. Khademhosseini, F. Dehghani, Model usus untuk menganalisis
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
dampak makanan dan obat-obatan, Adv. Kesehatanc. Materi. 8 (2019) 1–23, https://doi.org/
10.1002/adhm.201900968.
[43] RE McConnell, JN Higginbotham, DA Shifrin Jr., DL Tabb, RJ Coffey, M.
J. Tyska, Mikrovilus enterosit adalah organel penghasil vesikel, J. Cell Biol. 185 (2009) 1285–
1298.
[44] MF Paine, HL Hart, SS Ludington, RL Haining, AE Rettie, DC Zeldin, Sitokrom usus manusia
P450 “pai”, Metab Obat. Dispos. 34 (2006) 880–886.
[45] KE Thummel, Naluri usus: CYP3A4 dan metabolisme obat usus, J. Clin.
Menginvestasikan. 117 (2007) 3173–3176.
[46] MVS Varma, RS Obach, C. Rotter, HR Miller, G. Chang, SJ Steyn, A. El-
Kattan, MD Troutman, Ruang fisikokimia untuk bioavailabilitas oral yang optimal: Kontribusi
penyerapan usus manusia dan eliminasi lintas pertama, J. Med.
kimia. 53 (2010) 1098–1108, https://doi.org/10.1021/jm901371v.
[47] D. Onozato, M. Yamashita, A. Nakanishi, T. Akagawa, Y. Kida, I. Ogawa,
T. Hashita, T. Iwao, T. Matsunaga, Generasi organoid usus yang cocok untuk studi
farmakokinetik dari sel induk berpotensi majemuk yang diinduksi manusia, Metab Obat.
Dispos. 46 (2018) 1572–1580.
[48] G. Roda, A. Sartini, E. Zambon, A. Calafiore, M. Marocchi, A. Caponi, A. Belluzzi, E. Roda, Sel
epitel usus pada penyakit radang usus, World J.
Gastroenterol. WJG. 16 (2010) 4264.
[49] M. Herath, S. Hosie, JC Bornstein, AE Franks, EL Hill-Yardin, Peran sistem lendir gastrointestinal
dalam homeostasis usus: implikasi terhadap gangguan neurologis, Front. Sel.
Menulari. Mikrobiol. 10 (2020), https://doi.org/10.3389/fcimb.2020.00248 .
[50] BH Bajka, NM Rigby, KL Cross, A. Macierzanka, AR Mackie, Pengaruh struktur lendir usus
kecil pada transportasi partikel ex vivo, Permukaan Koloid B Biointerfaces. 135 (2015) 73–80.
[51] M. Kebouchi, Z. Hafeez, Y. Le Roux, A. Dary-Mourot, M. Genay, Pentingnya lendir pencernaan
dan musin untuk merancang bahan makanan fungsional baru, Food Res. Int. 131 (2020)
108906, https://doi.org/10.1016/j.foodres.2019.108906.
[52] N. Barker, Sel induk usus dewasa: pendorong penting homeostasis epitel dan
regenerasi, Nat. Pendeta Mol. Biol Sel. 15 (2014) 19–33.
[53] N. Barker, JH Van Es, J. Kuipers, P. Kujala, M. Van Den Lahir, M. Cozijnsen,
A. Haegebarth, J. Korving, H. Begthel, PJ Peters, Identifikasi sel induk di usus kecil dan usus
besar dengan penanda gen Lgr5, Alam. 449 (2007) 1003–1007.
[54] R. Sakamori, S. Yu, X. Zhang, A. Hoffman, J. Sun, S. Das, P. Vedula, G. Li, J. Fu, F. Walker,
penghambatan CDC42 menekan perkembangan usus yang baru jadi tumor, Kanker Res. 74
(2014) 5480–5492.
[55] J. Wehkamp, NH Salzman, E. Porter, S. Nuding, M. Weichenthal, RE Petras,
B. Shen, E. Schaeffeler, M. Schwab, R. Linzmeier, Mengurangi sel Paneth ÿ-defensin pada
penyakit ileal Crohn, Proc. Natal. Akademik. Sains. 102 (2005) 18129–18134.
[56] K. Pocock, L. Delon, V. Bala, S. Rao, C. Priest, C. Prestidge, B. Thierry, Model mikrofluida
usus-on-a-chip untuk skrining in vitro serapan kemoterapi oral yang efisien,
Biomater ACS. Sains. bahasa Inggris 3 (2017) 951–959, https://doi.org/10.1021/
acsbiomaterials.7b00023 .
[57] P. Prieto, S. Hoffmann, V. Tirelli, F. Tancredi, I. Gonz´ alez, M. Bermejo, I. De Angelis,
Sebuah studi eksplorasi dua model sel Caco-2 untuk penyerapan oral: sebuah laporan
pada variabilitas dalam laboratorium dan antar laboratorium, serta kapasitas prediktifnya,
ATLA Altern. ke Lab. animasi. 38 (2010) 367–386, https://doi. org/10.1177/026119291003800510.
[58] C. Li, T. Liu, X. Cui, AS Uss, KC Cheng, Pengembangan in vitro
skrining farmakokinetik menggunakan sistem hibrida Caco-2, hepatosit manusia, dan
Caco-2/hepatosit manusia untuk prediksi bioavailabilitas oral pada manusia, J. Biomol.
Layar. 12 (2007) 1084–1091, https://doi.org/10.1177/ 1087057107308892.
[59] S. Tavelin, J. Taipalensuu, L. Soderberg, ¨ R. Morrison, S. Chong, P. Artursson, Prediksi
penyerapan oral obat dengan permeabilitas rendah menggunakan monolayer sel 2/4/A1
seperti usus kecil , Farmasi. Res. 20 (2003) 397–405.
[60] V. Gupta, N. Doshi, S. Mitragotri, Permeasi insulin, kalsitonin dan exenatide di seluruh lapisan
tunggal Caco-2: pengukuran menggunakan sistem cepat 3 hari, PLoS One. 8 (2013), e57136.
[61] S.Fowler, WLK Chen, DB Duignan, A.Gupta, N.Hariparsad, JR Kenny, W.
G. Lai, J. Liras, JA Phillips, J. Gan, Sistem mikrofisiologi untuk aplikasi terkait ADME: status
terkini dan rekomendasi untuk pengembangan dan karakterisasi sistem, Lab Chip. 20
(2020) 446–467, https://doi.org/10.1039/c9lc00857h .
[62] SN Steinway, J. Saleh, BK Koo, D. Delacour, DH Kim, Manusia
model mikrofisiologi jaringan usus dan mikrobioma usus, Depan. Bioeng.
Bioteknologi. 8 (2020), https://doi.org/10.3389/fbioe.2020.00725.
[63] JM DeSesso, AL Williams, Bab 21 - membedakan saluran pencernaan mamalia: faktor-faktor
yang mempengaruhi penyerapan, dalam: MC Macor (Ed.), JEBT-AR, Academic Press,
2008, hlm. 353–371, https: //doi.org/10.1016/S0065-7743(08) 00021-3.
[64] SP Gantzsch, B. Kann, M. Ofer-Glaessgen, P. Loos, H. Berchtold, S. Balbach, T. Eichinger,
CM Lehr, UF Schaefer, M. Windbergs, Karakterisasi dan evaluasi penghalang PVPA
yang dimodifikasi dibandingkan dengan lapisan tunggal sel Caco-2 untuk pengujian disolusi
dan permeasi gabungan, J. Control. Melepaskan. 175 (2014) 79–86, https://doi.org/10.1016/
j.jconrel.2013.12.009.
[65] JM Reis, B. Sinko, CHR Serra, Uji permeabilitas membran buatan paralel (PAMPA) - apakah
lebih baik daripada Caco-2 untuk prediksi permeabilitas pasif manusia?
Ulasan Mini Med. kimia. 10 (2012) 1071–1076, https://doi.org/10.2174/
1389557511009011071.
[66] P. Ilmu Pengetahuan, Pemeriksaan Permeabilitas Obat Dengan Metode PAMPA
Dalam Aspek Teoritis Dan Praktis G´ abor Vizser´ alek, 2016.
264
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
[67] H. Yu, Q. Wang, Y. Sun, M. Shen, H. Li, Y. Duan, Model PAMPA baru yang diusulkan
berdasarkan membran fosfolipid sintetis, PLoS One. 10 (2015) 1–13, https://doi.org/10.1371/
journal.pone.0116502.
[68] M. Kansy, F. Senner, K. Gubernator, Penapisan throughput tinggi fisikokimia: uji permeasi
membran buatan paralel dalam deskripsi proses penyerapan pasif, J. Med. kimia. 41
(1998) 1007–1010.
[69] A. Avdeef, Bangkitnya PAMPA, Opin Ahli. Metab Obat. beracun. 1 (2005)
325–342.
[70] J. Mensch, A. Melis, C. Mackie, G. Verreck, ME Brewster, P. Augustijns,
Evaluasi berbagai model PAMPA untuk mengidentifikasi metode yang paling diskriminatif
dalam memprediksi permeabilitas BBB, Eur. J.Pharm. Biofarmasi. 74 (2010) 495–502,
https://doi.org/10.1016/j.ejpb.2010.01.003.
´
[71] B. Sinko, TM Garrigues, GT Balogh, ZK Nagy, O. Tsinman, A. Avdeef, K. Tak´ acs-Nov
´ ak, Skin-PAMPA: Metode baru untuk prediksi cepat penetrasi kulit, Eur. J.Pharm.
Sains. 45 (2012) 698–707, https://doi.org/10.1016/j. ejps.2012.01.011.
ÿ
[72] M. Falavigna, M. Klitgaard, C. Brase, S. Ternullo, N. Skalko-Basnet, GE Flaten, Mucus-PVPA
(mucus Phospholipid Vesicle-based Permeation Assay): Alat permeabilitas buatan untuk
skrining dan formulasi obat pembangunan, Int. J.Pharm. 537 (2018) 213–222, https://doi.org/
10.1016/j.ijpharm.2017.12.038.
[73] P. Berben, A. Bauer-Brandl, M. Brandl, B. Faller, GE Flaten, AC Jacobsen,
J. Brouwers, P. Augustijns, Profil permeabilitas obat menggunakan alat permeasi bebas sel:
Ikhtisar dan aplikasi, Eur. J.Pharm. Sains. 119 (2018) 219–233, https://doi.org/10.1016/
j.ejps.2018.04.016.
[74] GE Flaten, AB Dhanikula, K. Luthman, M. Brandl, Permeabilitas obat melintasi penghalang
berbasis vesikel fosfolipid: pendekatan baru untuk mempelajari difusi pasif, Eur.
J.Pharm. Sains. 27 (2006) 80–90, https://doi.org/10.1016/j. ejps.2005.08.007.
ÿ ÿ
[75] GE Flaten, Z. Palac, A. Engesland, J. Filipovi´c-Grÿci´c, Z. Vani´c, N. Skalko-Basnet,
Model kulit in vitro sebagai alat dalam optimalisasi formulasi obat, Eur. J.Pharm.
Sains. 75 (2015) 10–24, https://doi.org/10.1016/j.ejps.2015.02.018.
[76] E. Naderkhani, J. Isaksson, A. Ryzhakov, GE Flaten, Pengembangan a
uji permeasi berbasis vesikel fosfolipid biomimetik untuk estimasi permeabilitas obat usus,
J. Pharm. Sains. 103 (2014) 1882–1890, https://doi. org/10.1002/jps.23954.
[77] J. Fogh, T. Orfeo, J. Tiso, FE Sharkey, Pembentukan karsinoma usus besar manusia
garis pada tikus telanjang, Patobiologi. 47 (1979) 136–144.
[78] I. de Angelis, L. Turco, sel Caco-2 sebagai model penyerapan usus, Curr.
protokol. beracun. (2011) 1–15, https://doi.org/10.1002/0471140856.tx2006s47.
[79] M. Hu, J. Ling, H. Lin, J. Chen, Penggunaan monolayer Sel Caco-2 untuk mempelajari obat
penyerapan dan metabolisme, Optim. Penemuan Narkoba. (2004) 19–35, https://doi.org/
10.1385/1-59259-800-5:019 .
[80] IJ Hidalgo, TJ Raub, RT Borchardt, Karakterisasi garis sel karsinoma usus besar manusia
(Caco-2) sebagai sistem model untuk permeabilitas epitel usus, Gastroenterologi.
96 (1989) 736–749, https://doi.org/10.1016/ 0016-5085(89)90897-4.
[81] A. Zweibaum, M. Laburthe, E. Grasset, D. Louvard, Penggunaan garis sel yang dikultur dalam
studi diferensiasi dan fungsi sel usus, Compr. Fisiol. (2011), https://doi.org/10.1002/
cphy.cp060407.
[82] B. Sarmento, F. Andrade, SB Da Silva, F. Rodrigues, J. Das Neves, D. Ferreira, Model in vitro
berbasis sel untuk memprediksi permeabilitas obat, Expert Opin. Metab Obat. beracun. 8
(2012) 607–621, https://doi.org/10.1517/ 17425255.2012.673586.
[83] P. Dowdell, S. Chankhamhaengdecha, W. Panbangred, T. Janvilisri,
A. Aroonnual, Aktivitas probiotik Enterococcus faecium dan Lactococcus Lactis yang
diisolasi dari sosis fermentasi Thailand dan efek perlindungannya terhadap
Clostridium difficile, Antimikroba Probiotik. Protein. 12 (2020) 641–648, https://doi.org/
10.1007/s12602-019-09536-7.
[84] B. Srinivasan, AR Kolli, MB Esch, HE Abaci, ML Shuler, JJ Hickman, Teknik pengukuran TEER
untuk sistem model penghalang in vitro, J. Lab. Otomatis. 20 (2015) 107–126, https://
doi.org/10.1177/2211068214561025.
[85] S. Ayehunie, T. Landry, Z. Stevens, A. Armento, P. Hayden, M. Klausner, Jaringan mikro
organotipik berbasis sel primer manusia untuk pemodelan penyerapan obat usus kecil,
Pharm. Res. 35 (2018), https://doi.org/10.1007/s11095-018-2362-0.
[86] P.Artursson, A.-L. Ungell, J.-E. Lofroth, ¨ Permeabilitas paraseluler selektif menjadi dua
model penyerapan usus: kultur lapisan tunggal sel epitel usus manusia dan segmen
usus tikus, Pharm. Res. 10 (1993) 1123–1129, https://doi.org/10.1023/A:1018903931777.
[87] Y. Tanaka, Y. Taki, T. Sakane, T. Nadai, H. Sezaki, S. Yamashita, Karakterisasi pengangkutan
obat melalui jalur persimpangan ketat di monolayer Caco-2: perbandingan dengan
Tikus Jejunum dan usus besar yang terisolasi, farmasi. Res. 12 (1995) 523–528,
https://doi.org/10.1023/A:1016245711557.
¨
[88] J. Linnankoski, J. Makel ¨ a, J. Palmgren, T. Mauriala, C. Vedin, A. Ungell, L. Lazorova,
P. Artursson, A. Urtti, M. Yliperttula, Porositas paraseluler dan ukuran pori epitel usus
manusia dalam model kultur jaringan dan sel, J. Pharm. Sains. 99 (2010) 2166–
2175, https://doi.org/10.1002/jps.21961.
[89] G. Wilson, IF Hassan, CJ Dix, I. Williamson, R. Shah, M. Mackay, P. Artursson, Sifat
transportasi dan permeabilitas sel Caco-2 manusia: model in vitro dari penghalang sel epitel
usus , J. Kontrol. Rilis 11 (1990) 25–40, https://doi.org/10.1016/0168-3659(90)90118-D .
[90] P. Artursson, K. Palm, K. Luthman, Lapisan tunggal Caco-2 dalam prediksi eksperimental
dan teoretis pengangkutan obat, Adv. Pengiriman Obat. Wahyu 64 (2012) 280–289,
https://doi.org/10.1016/j.addr.2012.09.005.
[91] AL Rao, GG Sankar, Caco-2: gambaran umum, Jprhc. 1 (2009) 260–275.
[92] JL Madara, G. Hecht, Persimpangan ketat (tertutup) pada sel epitel yang dikultur (dan
asli), Fungsi. epitel. Kultus Sel. (1989) 131–163.
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
[93] D.-C. Kirn, PS Burton, RT Borchardt, Korelasi antara karakteristik permeabilitas serangkaian
peptida menggunakan model kultur sel in vitro (Caco-2) dan model ileum tikus perfusi in situ pada
mukosa usus, Pharm. Res. 10 (1993) 1710–1714, https://doi.org/10.1023/A:1018961828510.
[94] RA Conradi, KF Wilkinson, BD Rush, AR Hilgers, MJ Ruwart, PS Burton, Model in vitro/in vivo untuk
penyerapan oral peptida: perbandingan permeabilitas sel Caco-2 dengan penyerapan peptida
penghambat renin di usus tikus, Pharm.
Res. 10 (1993) 1790–1792, https://doi.org/10.1023/A:1018990602102.
[95] D. Sun, H. Lennernas, LS Welage, JL Barnett, CP Landowski, D. Foster,
D. Fleisher, KD Lee, GL Amidon, Perbandingan profil ekspresi gen duodenum manusia dan
Caco-2 untuk 12.000 tag sekuens gen dan korelasi dengan permeabilitas 26 obat, Pharm.
Res. 19 (2002) 1400–1416, https://doi.org/ 10.1023/A:1020483911355.
[96] W. Rubas, J. Villagran, M. Cromwell, A. McLeod, J. Wassenberg, Korelasi fluks zat terlarut pada
lapisan tunggal Caco-2 dan jaringan kolon in vitro, STP Pharma Sci. 5 (1995) 93–97.
[97] P. Wils, A. Warnery, V. Phung-Ba, D. Scherman, Diferensiasi usus
garis sel epitel model asin vitro untuk memprediksi penyerapan obat di usus, Cell Biol. beracun.
10 (1994) 393–397.
[98] G. Wilson, IF Hassan, CJ Dix, I. Williamson, R. Shah, M. Mackay, Mengangkut sifat permeabilitas
sel caco-2 manusia: model in vitro dari penghalang sel epitel usus * dan P Artursson Saat
menggunakan filter nitroselulosa, di dalam ruangan, sel Caco-2 membentuk lapisan tunggal
konfluen dengan beberapa lapisan yang tepat, Science 11 (1990) 25–40.
[99] J. Hunter, MA Jepson, T. Tsuruo, NL Simmons, BH Hirst, Fungsional
ekspresi P-glikoprotein dalam membran apikal sel Caco-2 usus manusia. Kinetika sekresi
vinblastine dan interaksi dengan modulator, J. Biol.
kimia. 268 (1993) 14991–14997.
[100] N. Maubon, M. Le Vee, L. Fossati, M. Audry, E. Le Ferrec, S. Bolze, O. Fardel,
Analisis ekspresi pengangkut obat dalam sel Caco-2 usus manusia dengan PCR waktu nyata,
Fundam. Klinik. Farmakol. 21 (2007) 659–663, https://doi.org/ 10.1111/
j.1472-8206.2007.00550.x.
[101] C. Hilgendorf, G. Ahlin, A. Seithel, P. Artursson, A.-L. Ungell, J. Karlsson,
Ekspresi tiga puluh enam gen pengangkut obat di usus manusia, hati, ginjal, dan garis sel
organotipik, Metab Obat. Dispos. 35 (2007) 1333–1340. ¨ S0300-9084(86)80177-8.
[102] J. Taipalensuu, H. Tornblom,
¨ ¨ ¨ G. Lindberg, C. Einarsson, F. Sjoqvist, H. Melhus,
P. Garberg, B. Sjostr B. Lundgren, P. Artursson, Korelasi ekspresi gen om, dari sepuluh protein
penghabisan obat dari keluarga pengangkut kaset pengikat ATP di jejunum manusia normal
dan pada lapisan tunggal sel Caco-2 epitel usus manusia , J .Farmakol. Contoh.
Ada. 299 (2001) 164–170.
[103] S. Brück, J. Strohmeier, D. Busch, M. Drozdzik, S. Oswald, Caco-2
ekspresi sel, regulasi dan fungsi pengangkut obat dibandingkan dengan jaringan jejunum
manusia, Biopharm. Tempat Penyimpanan Narkoba. 38 (2017) 115–126.
[104] MH Macedo, F. Araújo, E. Martínez, C. Barrias, B. Sarmento, turunan iPSC
sel mirip enterosit untuk studi penyerapan obat dan metabolisme, Trends Mol.
medis. 24 (2018) 696–708, https://doi.org/10.1016/j.molmed.2018.06.001.
[105] A.-LB Ungell, Caco-2 ganti atau perbaiki? Penemuan Narkoba. Teknologi Hari Ini. 1 (2004)
423–430.
[106] Tes permeabilitas sel RB Van Breemen, Y. Li, Caco-2 untuk mengukur obat
penyerapan, Opini Ahli. Metab Obat. beracun. 1 (2005) 175–185, https://doi. org/
10.1517/17425255.1.2.175.
´
[107] NJ Darling, CL Mobbs, AL Gonzalez-Hau, M. Freer, S. Przyborski, Model kultur
bersama in vitro novel bioteknologi yang mewakili mukosa usus manusia dengan
peningkatan struktur Caco-2 dan fungsi penghalang, Front.
Bioeng. Bioteknologi. 8 (2020) 1–15, https://doi.org/10.3389/fbioe.2020.00992.
[108] V. Meunier, M. Bourri´e, Y. Berger, G. Fabre, Garis sel epitel usus manusia Caco-2; aplikasi
farmakologis dan farmakokinetik, Cell Biol.
beracun. 11 (1995) 187–194, https://doi.org/10.1007/BF00756522.
[109] H. Sun, ECY Chow, S. Liu, Y. Du, KS Pang, Monolayer sel Caco-2:
Kegunaan dan keterbatasan, Expert Opin. Metab Obat. beracun. 4 (2008) 395–411, https://
doi.org/10.1517/17425255.4.4.395.
[110] P. Artursson, Kultur sel sebagai model penyerapan obat di seluruh mukosa usus, Crit. Pdt. Ada.
Sistem Pembawa Narkoba. 8 (1991) 305–330.
[111] AV Lyubimov, E. Le Ferrec, O. Fardel, Aplikasi menggunakan sel Caco-2 dan TC7 untuk studi
metabolisme obat, Encycl. Metab Obat. Berinteraksi. (2012), https://doi. org/
10.1002/9780470921920.edm061.
[112] W. Jee, L. Weiss, Histologi: biologi sel dan jaringan, Histol. Biol Jaringan Sel. 5
(1983) 200–255.
[113] L. Turco, T. Catone, F. Caloni, E. Di Consiglio, E. Testai, A. Stammati, karakterisasi garis sel Caco-2/
TC7 untuk penyerapan usus: seberapa andal model in vitro ini untuk prediksi dari fraksi dosis
oral yang diserap pada manusia? beracun.
Vitr. 25 (2011) 13–20, https://doi.org/10.1016/j.tiv.2010.08.009.
[114] H. Lennern¨ as, K. Palm, U. Fagerholm, P. Artursson, Perbandingan antara transpor obat aktif dan
pasif dalam sel epitel usus manusia (Caco-2) in vitro dan jejunum manusia in vivo, Int. J.Pharm.
127 (1996) 103–107.
[115] M.-C. Gr`es, B. Julian, M. Bourri´e, V. Meunier, C. Roques, M. Berger, X. Boulenc, Y. Berger, G.
Fabre, Korelasi antara penyerapan obat oral pada manusia, dan permeabilitas obat yang nyata
dalam sel TC-7, garis sel epitel usus manusia: perbandingan dengan garis sel induk Caco-2,
Pharm. Res. 15 (1998) 726–733, https://doi.org/10.1023/A:1011919003030.
[116] X. Liu, VH Tam, M. Hu, Disposisi flavonoid melalui daur ulang enterik:
penentuan isoform UDP-glukuronosiltransferase yang bertanggung jawab untuk metabolisme
flavonoid dalam sel Caco-2 TC7 utuh menggunakan siRNA, Mol. farmasi. 4 (2007) 873–882.
[117] I. Caro, X. Boulenc, M. Rousset, V. Meunier, M. Bourri´e, B. Julian, H. Joyeux,
C. Roques, Y. Berger, A. Zweibaum, Karakterisasi Caco-2 yang baru diisolasi
265
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
clone (TC-7), sebagai model proses transportasi dan biotransformasi obat, Int. J.Pharm. 116
(1995) 147–158.
[118] E. Le Ferrec, C. Chesne, P. Artusson, D. Brayden, G. Fabre, P. Gires, F. Guillou, M. Rousset, W.
Rubas, ML Scarino, Model in vitro dari penghalang usus , Alternatif ATLA. ke Lab. animasi. 29
(2001) 649–668, https://doi.org/10.1177/ 026119290102900604.
[119] MJ Cho, DP Thompson, CT Cramer, TJ Vidmar, JF Scieszka, Monolayer sel epitel ginjal anjing
Madin Darby (MDCK) sebagai model penghalang transportasi seluler, Pharm. Res. 6
(1989) 71–77.
[120] F. Antunes, F. Andrade, D. Ferreira, H. Morck Nielsen, B. Sarmento, Model untuk memprediksi
penyerapan peptida dan protein terapeutik di usus, Curr. Metab Obat. 14 (2012) 4–20, https://
doi.org/10.2174/138920013804545160.
[121] JD Irvine, L. Takahashi, K. Lockhart, J. Cheong, JW Tolan, HE Selick, J.
R. Grove, sel MDCK (ginjal anjing Madin-Darby): Alat untuk skrining permeabilitas
membran, J. Pharm. Sains. 88 (1999) 28–33, https://doi.org/10.1021/js9803205 .
[122] PV Balimane, S. Chong, RA Morrison, Metodologi saat ini digunakan untuk
evaluasi permeabilitas dan penyerapan usus, J. Pharmacol. beracun.
Metode. 44 (2000) 301–312, https://doi.org/10.1016/S1056-8719(00)00113-1.
[123] F. Tang, K. Horie, RT Borchardt, Apakah sel MDCK ditransfeksi dengan manusia
Gen MRP2 merupakan model yang baik dari mukosa usus manusia? farmasi. Res. 19 (2002)
773–779, https://doi.org/10.1023/A:1016192413308.
[124] DA Volpe, Uji permeabilitas obat dan transporter dalam lini sel Caco-2 dan MDCK, Future Med.
kimia. 3 (2011) 2063–2077, https://doi.org/10.4155/fmc.11.149 .
[125] D. Martínez-Maqueda, B. Miralles, I. Recio, garis sel HT29, Impact Food Bioact.
Sembuh. (2015) 113–124.
[126] D. Martínez-Maqueda, B. Miralles, I. Recio, HT29 Cell Line BT, dalam: K. Verhoeckx, P. Cotter, I.
´ ´
Lopez-Exp osito, C. Kleiveland, T. Lea, A. Mackie , H. Wichers (Eds.), Dampak Bioaktif Makanan
pada Kesehatan: model in vitro dan ex vivo, Springer International Publishing, Cham, 2015, hlm.
113–124, https://doi.org/10.1007/ 978- 3-319-16104-4_11.
[127] M. Rousset, Garis sel karsinoma usus besar manusia HT-29 dan Caco-2: dua model in vitro untuk
studi diferensiasi usus, Biochimie. 68 (1986) 1035–1040, https://doi.org/10.1016/
[128] C. Huet, C. Sahuquillo-Merino, E. Coudrier, D. Louvard, Subklon penyerap dan pensekresi lendir
yang diisolasi dari garis sel usus multipoten (HT-29) memberikan model baru untuk
polaritas sel dan diferensiasi terminal, J .Biol Sel. 105 (1987) 345–357, https://doi.org/10.1083/
jcb.105.1.345.
[129] T. Lesuffleur, A. Barbat, E. Dussaulx, A. Zweibaum, Adaptasi pertumbuhan terhadap
metotreksat sel karsinoma usus besar manusia HT-29 dikaitkan dengan mereka
kemampuan untuk berdiferensiasi menjadi sel serap kolumnar dan sel yang mensekresi lendir,
Cancer Res. 50 (1990) 6334–6343.
[130] P. Kitabgi, C. Poustis, C. Granier, J. van Rietschoten, J. Rivier, J.-L. Morgat,
P. Freychet, Ikatan neurotensin dengan reseptor ekstraneural dan saraf: perbandingan dengan
aktivitas biologis dan struktur—hubungan aktivitas, Mol. Farmakol. 18 (1980) 11–19.
[131] P. Wils, S. Legrain, E. Frenois, D. Scherman, sel usus HT29-18-C1: Model baru untuk mempelajari
transpor epitel obat, BBA - Mol. Resolusi Sel. 1177 (1993) 134–138, https://doi.org/
10.1016/0167-4889(93)90032-K.
[132] C. Augeron, CL Laboisse, Munculnya klon sel yang berdiferensiasi secara permanen dalam garis
sel kanker kolon manusia dalam kultur setelah pengobatan dengan natrium butirat, Cancer Res.
44 (1984) 3961–3969.
[133] A. Wikman, J. Karlsson, I. Carlstedt, P. Artursson, Model penyerapan obat berdasarkan lapisan
lendir yang memproduksi garis sel piala usus manusia HT29-H, Pharm.
Res. Mati. Selai. Asosiasi. farmasi. Sains. 10 (1993) 843–852, https://doi.org/ 10.1023/
A:1018905109971.
[134] C. Pontier, J. Pachot, R. Botham, B. Lenfant, P. Arnaud, HT29-MTX dan Caco-2/ TC7 monolayer
sebagai model prediktif untuk penyerapan usus manusia: Peran lapisan lendir, J. Pharm . Sains.
90 (2001) 1608–1619, https://doi.org/10.1002/jps.1111 .
[135] I. Behrens, P. Stenberg, P. Artursson, T. Kissel, Transportasi obat lipofilik
molekul dalam model kultur sel penghasil lendir baru berdasarkan sel HT29-MTX, Pharm. Res.
18 (2001) 1138–1145, https://doi.org/10.1023/A:1010974909998.
[136] R. Dupak, I. Spevakova, M. Capcarova, Penggunaan garis sel HT-29 untuk menyelidiki
efek toksikologi mikotoksin: review mini, Sci. Ayah. animasi. Sains. Bioteknologi.
tugas. Zooteh. Si Biotehnol. 53 (2020).
[137] L. Mahlert, J. Anderski, D. Mulac, K. Langer, Dampak lendir gastrointestinal pada penetrasi
nanopartikel – evaluasi in vitro nanopartikel penembus lendir untuk terapi fotodinamik,
Eur. J.Pharm. Sains. 133 (2019) 28–39, https://doi.org/10.1016/j.ejps.2019.03.010.
[138] E. Walter, S. Janich, BJ Roessler, JM Hilfinger, GL Amidon, HT29-MTX/Caco-2 cocultures sebagai
model in vitro untuk epitel usus: Korelasi in vitro-in vivo dengan data permeabilitas dari tikus
dan manusia, J.Pharm. Sains. 85 (1996) 1070–1076, https://doi.org/10.1021/js960110x.
[139] S. The, C. Biology, N. Feb, Kultur Sel Epithelioid dari Usus Kecil Tikus:
Karakterisasi berdasarkan Kriteria Morfologi dan Imunologi Penulis: Andrea Quaroni, Jack
Wands, Robert L. Trelstad dan Kurt J. Isselbacher 80, 2014, hlm.248–265.
[140] A. Quaroni, KJ Isselbacher, Efek sitotoksik dan metabolisme benzo [a]
pyrene dan 7, 12-dimethylbenz [a] antrasena dalam kultur sel epitel duodenum dan ileum, J.
Natl. Institut Kanker. 67 (1981) 1353–1362.
[141] E. Duizer, AH Penninks, WH Stenhuis, JP Groten, Perbandingan karakteristik permeabilitas kolon
manusia Caco-2 dan garis sel IEC-18 usus kecil tikus, J. Control. Melepaskan. 49 (1997) 39–49,
https://doi.org/10.1016/S0168-3659 (97)00058-8.
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
[142] DW Powell, Fungsi penghalang epitel, Am. J.Fisiol. Fisiol Hati. 241 (1981)G275–G288.
[143] P. Artursson, J. Karlsson, Korelasi antara penyerapan obat oral pada manusia dan koefisien
permeabilitas obat yang nyata dalam sel epitel usus manusia (Caco-2), Biochem. Biofisika.
Res. Komunitas. 175 (1991) 880–885.
[144] CHM Versantvoort, RCA Ondrewater, E. Duizer, JJM Van de Sandt, A.
J. Gilde, JP Groten, Lapisan tunggal sel IEC-18 sebagai model in vitro untuk menyaring transpor
transseluler dan paraseluler pasif melintasi penghalang usus: perbandingan transpor aktif dan
pasif dengan garis sel karsinoma usus besar manusia Caco-2, Environ. beracun. Farmakol.
11 (2002) 335–344.
[145] A. Steensma, HPJM Noteborn, HA Kuiper, Perbandingan garis sel Caco-2, IEC-18 dan HCEC
sebagai model penyerapan genistein, daidzein dan glikosidanya di usus, Environ. beracun.
Farmakol. 16 (2004) 131–139, https://doi. org/10.1016/j.etap.2003.11.008.
[146] TY Ma, D. Hollander, D. Bhalla, H. Nguyen, P. Krugliak, IEC-18, a
garis sel usus kecil yang tidak berubah untuk mempelajari permeabilitas epitel, J. Lab. Klinik.
medis. 120 (1992) 329–341.
[147] CHM Versantvoort, RCA Ondrewater, E. Duizer, JJM Van De Sandt, A.
J. Gilde, JP Groten, Erratum: lapisan tunggal sel IEC-18 sebagai model in vitro untuk menyaring
transpor transseluler dan paraseluler pasif melintasi penghalang usus: perbandingan transpor
aktif dan pasif dengan garis sel karsinoma usus besar manusia Caco-2 ( Lingkungan),
Lingkungan. beracun. Farmakol. 13 (2003) 55, https://doi.org/10.1016/S1382-6689(02)00123-0.
[148] Z. Liu, P. Zhang, Y. Zhou, H. Qin, T. Shen, Kultur sel epitel usus manusia menggunakan enzim
disosiasi thermolysin dan endothelin-3, Brazil J.
medis. biologi. Res. 43 (2010) 451–459, https://doi.org/10.1590/
S0100-879X2010007500036 .
[149] N. Perreault, JF Beaulieu, Penggunaan enzim disosiasi thermolysin untuk
menghasilkan kultur sel epitel usus normal manusia yang layak, Exp. Resolusi Sel. 224 (1996)
354–364, https://doi.org/10.1006/excr.1996.0145.
[150] T. Takenaka, N. Harada, J. Kuze, M. Chiba, T. Iwao, T. Matsunaga, Sel epitel usus kecil manusia
dibedakan dari sel induk usus dewasa sebagai sistem baru untuk memprediksi penyerapan obat
oral pada manusia, Metab Obat. Dispos. 42 (2014) 1947–1954, https://doi.org/10.1124/
dmd.114.059493.
[151] T. Takenaka, N. Harada, J. Kuze, M. Chiba, T. Iwao, T. Matsunaga, Penerapan monolayer sel
epitel usus manusia untuk prediksi penyerapan obat oral pada manusia sebagai alternatif
yang lebih unggul daripada Monolayer sel Caco-2, J. Pharm. Sains. 105 (2016) 915–924,
https://doi.org/10.1016/j.xphs.2015.11.035.
[152] L. Pageot, N. Perreault, N. Basora, C. Francoeur, P. Magny, J. Beaulieu, Model sel manusia untuk
mempelajari fungsi usus kecil: rekapitulasi sumbu crypt-villus , Microsc. Res. Teknologi. 49
(2000) 394–406.
[153] F. Escaffit, N. Perreault, D. Jean, C. Francoeur, E. Herring, C. Rancourt, N. Rivard, PH Vachon, F.
Par´e, M.-P. Boucher, Ekspresi E-cadherin yang ditekan di ruang bawah tanah bawah usus
kecil manusia: penanda sel yang memiliki relevansi fungsional, Exp.
Resolusi Sel. 302 (2005) 206–220.
[154] J.-F. Beaulieu, D. M´enard, Isolasi, karakterisasi, dan kultur sel kripta dan vili usus manusia
normal, dalam: Hum. Kultus Sel. Protoc., Springer, 2012, hlm.157–173.
[155] C. Hilgendorf, H. Spahn-Langguth, CG Regårdh, E. Lipka, GL Amidon, P. Langguth, garis
sel kultur bersama Caco-2 versus Caco-2/HT29-MTX: Permeabilitas melalui difusi,
di dalam- dan transportasi yang dimediasi oleh operator dari luar, J. Pharm. Sains. 89
(2000) 63–75, https://doi.org/10.1002/(SICI)1520- 6017(200001)89:1<63::AID-JPS7>3.0.CO;2-6.
[156] A. Wikman-Larhed, P. Artursson, Kultur bersama piala usus manusia (HT29- H) dan sel serap
(Caco-2) untuk studi penyerapan obat dan peptida, Eur. J.
farmasi. Sains. 3 (1995) 171–183.
[157] C. Pereira, J. Costa, B. Sarmento, F. Araújo, Model in vitro berbasis sel untuk
studi permeabilitas usus, dalam: Model Konsep. Studi Permeabilitas Obat. Vitr Berbasis Jaringan
Sel. Kultus. Model, 2016, hlm. 57–81, https://doi.org/10.1016/B978- 0-08-100094-6.00005-5.
[158] A. B´eduneau, C. Tempesta, S. Fimbel, Y. Pellequer, V. Jannin, F. Demarne,
A. Lamprecht, Model kultur bersama Caco-2/HT29-MTX yang meniru permeabilitas variabel
usus manusia yang diperoleh melalui prosedur penyemaian asli, Eur. J.Pharm. Biofarmasi. 87
(2014) 290–298.
[159] S. Kern´eis, A. Bogdanova, J.-P. Kraehenbuhl, E. Pringault, Konversi oleh patch limfosit Peyer dari
enterosit manusia menjadi sel M yang mengangkut bakteri, Science (80) 277 (1997) 949–
952.
[160] A. Frey, KT Giannasca, R. Weltzin, PJ Giannasca, H. Reggio, WI Lencer, M.
R. Neutra, Peran glikokaliks dalam mengatur akses mikropartikel ke membran plasma apikal sel
epitel usus: implikasi terhadap perlekatan mikroba dan penargetan vaksin oral, J. Exp.
medis. 184 (1996) 1045–1059.
[161] A. Des Rieux, V. Fievez, I. Th´eate, J. Mast, V. Pr´eat, YJ Schneider, Model in vitro epitel terkait
folikel usus manusia yang ditingkatkan untuk mempelajari transportasi nanopartikel oleh
sel M , euro. J.Pharm. Sains. 30 (2007) 380–391, https://doi.org/10.1016/j.ejps.2006.12.006 .
[162] A. Des Rieux, EGE Ragnarsson, E. Gullberg, V. Pr´eat, YJ Schneider,
P. Artursson, Pengangkutan nanopartikel melintasi model in vitro epitel terkait folikel usus
manusia, Eur. J.Pharm. Sains. 25 (2005) 455–465, https://doi.org/10.1016/j.ejps.2005.04.015.
[163] J. Costa, A. Ahluwalia, Kemajuan dan tantangan terkini dalam usus in vitro
rekayasa model: intisari, Depan. Bioeng. Bioteknologi. 7 (2019) 1–14, https://doi.org/10.3389/
fbioe.2019.00144 .
[164] F. Araújo, B. Sarmento, Menuju karakterisasi triple co-in vitro
model sel kultur usus untuk studi permeabilitas, Int. J.Pharm. 458 (2013) 128–134, https://
doi.org/10.1016/j.ijpharm.2013.10.003.
266
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
[165] F. Antunes, F. Andrade, F. Araújo, D. Ferreira, B. Sarmento, Pembentukan model sel in vitro tiga
kultur bersama untuk mempelajari penyerapan obat peptida di usus, Eur. J.Pharm.
Biofarmasi. 83 (2013) 427–435, https://doi.org/10.1016/j. ejpb.2012.10.003.
[166] M. Natoli, BD Leoni, I. D'Agnano, F. Zucco, A. Felsani, Praktik kultur sel Caco-2 yang baik, Toxicol.
Vitr. 26 (2012) 1243–1246, https://doi.org/10.1016/j. tiv.2012.03.009.
´ ´
[167] T. Lea, garis sel Caco-2 BT, dalam: K. Verhoeckx, P. Cotter, I. Lopez-Exp osito,
C. Kleiveland, T. Lea, A. Mackie, H. Wichers (Eds.), Dampak Bioaktif Makanan terhadap
Kesehatan: Model In Vitro dan Ex Vivo, Springer International Publishing, Cham, 2015, hlm.103–
111, https ://doi.org/10.1007/978-3-319-16104-4_10. ¨
[168] M. Kaiser, L. Pohl, S. Ketelhut, L. Kastl, C. Gorzelanny, M. Gotte,
J. Schnekenburger, FM Goycoolea, B. Kemper, Capsaicin nanoenkapsulasi mengubah
perilaku migrasi dan morfologi monolayer sel ginjal anjing madin darby , PLoS One. 12 (2017),
e0187497.
[169] S. Kootala, L. Filho, V. Srivastava, V. Linderberg, A. Moussa, L. David,
S. Tromboto, T. Crouzier, Memperkuat sifat penghalang lendir dengan kitosan massa molar
rendah, Biomakromolekul. 19 (2018) 872–882, https://doi.org/ 10.1021/acs.biomac.7b01670.
[170] DA Volpe, Penerapan kesesuaian metode untuk klasifikasi permeabilitas obat, AAPS J. 12 (2010)
670–678, https://doi.org/10.1208/s12248-010-9227-8.
[171] S. Youhanna, VM Lauschke, Sistem sel in vitro usus masa lalu, sekarang dan masa depan untuk
studi penyerapan obat, J. Pharm. Sains. 110 (2021) 50–65, https://doi. org/10.1016/
j.xphs.2020.07.001.
[172] DA Volpe, Kemajuan dalam uji permeabilitas berbasis sel untuk menyaring obat untuk
penyerapan usus, Expert Opin. Penemuan Narkoba. 15 (2020) 539–549.
[173] L. Shuler, JJ Hickman, Pengukuran TEER dalam Sel, 2016, https://doi.org/
10.1177/2211068214561025.TEER.
´ ´
[174] K. Verhoeckx, P. Cotter, I. Lopez-Exp osito, C. Kleiveland, T. Lea, A. Mackie, T. Requena, D.
Swiatecka, H. Wichers, Dampak bioaktif makanan terhadap kesehatan: model in vitro dan ex
vivo, dampak bioak makanan, Sembuh. Vitr. Mantan Model Vivo. (2015) 1–327, https://doi.org/
10.1007/978-3-319-16104-4.
[175] E. Le Ferrec, C. Chesne, P. Artusson, D. Brayden, G. Fabre, P. Gires, F. Guillou, M. Rousset, In
Vitro Models of the Intestinal Barrier, 2001, hlm. 649– 668.
[176] Ginjal Anjing Madin Darby.pdf, 2020.
[177] E. Le Ferrec, C. Chesne, P. Artusson, D. Brayden, G. Fabre, P. Gires, F. Guillou, M. Rousset, W.
Rubas, ML Scarino, Model in vitro dari penghalang usus : Laporan dan rekomendasi lokakarya
ECVAM 461,2, ATLA Altern. ke Lab.
animasi. 29 (2001) 649–668, https://doi.org/10.1177/026119290102900604.
[178] SC Pearce, HG Coia, JP Karl, IG Pantoja-Feliciano, NC Zachos, K. Racicot, Model usus in vitro
dan ex vivo untuk mempelajari interaksi inang-mikrobioma dan pemicu stres akut, Front. Fisiol.
9 (2018), https://doi.org/10.3389/fphys.2018.01584 .
[179] HJ Kim, DE Ingber, lingkungan mikro Gut-on-a-Chip menginduksi sel-sel usus manusia untuk
menjalani diferensiasi vili, Integr. biologi. (Britania Raya). 5 (2013) 1130–1140, https://doi.org/
10.1039/c3ib40126j.
[180] A. Skardal, T. Shupe, A. Atala, Sistem organoid-on-a-chip dan body-on-a-chip untuk skrining obat
dan pemodelan penyakit, Drug Discov. Hari ini. 21 (2016) 1399–1411, https://doi.org/
10.1016/j.drudis.2016.07.003.
[181] KA Fitzgerald, M. Malhotra, CM Curtin, FJ O'Brien, CM O'Driscoll, Kehidupan dalam 3D tidak
pernah datar: model 3D untuk mengoptimalkan pemberian obat, J. Control. Melepaskan. 215 (2015)
39–54.
[182] DW Hutmacher, Perancah dalam rekayasa jaringan tulang dan tulang rawan, Biomaterial.
21 (2000) 2529–2543.
[183] JS Joseph, ST Malindisa, M. Ntwasa, Dua dimensi (2D) dan tiga dimensi
kultur sel dimensi (3D) dalam penemuan obat, Kultus Sel. 2 (2018) 1–22.
[184] E. Piskin, Polimer yang dapat terbiodegradasi sebagai biomaterial, J. Biomater. Sains. Polim. Ed. 6
(1995) 775–795.
[185] J. Yu, S. Peng, D. Luo, JC March, Model vili usus kecil manusia 3D in vitro untuk penentuan
permeabilitas obat, Bioteknologi. Bioeng. 109 (2012) 2173–2178, https://doi.org/10.1002/
bit.24518.
[186] B. Yi, KY Shim, SK Ha, J. Han, HH Hoang, I. Choi, S. Park, JH Sung, Model usus in vitro tiga
dimensi pada perancah kolagen berbentuk vili, Biochip J. 11 (2017) 219–231, https://doi.org/
10.1007/s13206-017-1307-8.
[187] Pasien JD, H. Hajiali, K. Harris, B. Abrahamsson, C. Tannergren, LJ White, A.
M. Ghaemmaghami, PM Williams, CJ Roberts, FRAJ Rose, Perancah nanofibro mendukung
model permeabilitas in vitro 3D dari epitel usus manusia, Front. Farmakol. 10 (2019) 456.
[188] RH Dosh, A. Essa, N. Jordan-Mahy, C. Sammon, CL Le Maitre, Penggunaan perancah hidrogel
untuk mengembangkan model kultur 3D in vitro epitel usus manusia, Acta Biomater. 62 (2017)
128–143, https://doi.org/10.1016/j. actbio.2017.08.035.
[189] T. Nakajima, K. Sasaki, A. Yamamori, K. Sakurai, K. Miyata, T. Watanabe, Y.
T. Matsunaga, Model usus tiga dimensi sederhana yang dibangun dalam ruang mikro duktal
terbatas menginduksi integritas sel epitel usus dan memfasilitasi uji penyerapan, Biomater.
Sains. 8 (2020) 5615–5627, https://doi.org/10.1039/d0bm00763c .
[190] N. Li, D. Wang, Z. Sui, X. Qi, L. Ji, X. Wang, L. Yang, Pengembangan model mukosa usus in vitro
tiga dimensi yang lebih baik untuk evaluasi penyerapan obat, Tissue Eng . - Metode
Bagian C. 19 (2013) 708–719, https://doi.org/ 10.1089/ten.tec.2012.0463.
[191] I. Pereira, A. Lechanteur, B. Sarmento, model 3D yang mereplikasi usus
berfungsi untuk mengevaluasi permeabilitas obat, pada: Epitel. Kultus Sel., Springer, 2018,
hlm.107–113.
[192] SA Shaffiey, H. Jia, T. Keane, C. Costello, D. Wasserman, M. Quidgley, J. Dziki, S. Badylak, CP
Sodhi, JC March, Pertumbuhan dan diferensiasi sel induk usus
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
pada perancah tubular dengan evaluasi pada hewan kecil dan besar, Regen. medis. 11 (2016) 45–
61.
[193] KY Shim, D. Lee, J. Han, NT Nguyen, S. Park, JH Sung, Microfluidic gut-on-a-chip dengan struktur
vili tiga dimensi, Biomed. Perangkat Mikro 19 (2017), https://doi.org/10.1007/s10544-017-0179-
y.
[194] PH Dedhia, N. Bertaux-Skeirik, Y. Zavros, JR Spence, model Organoid
perkembangan dan penyakit pencernaan manusia, Gastroenterologi. 150 (2016) 1098–1112,
https://doi.org/10.1053/j.gastro.2015.12.042.
[195] C. Greggio, F. De Franceschi, M. Figueiredo-Larsen, S. Gobaa, A. Ranga, H. Semb, M. Lutolf, A.
Grapin-Botton, Relung tiga dimensi buatan mendekonstruksi perkembangan pankreas in
vitro , Perkembangan. 140 (2013) 4452–4462.
[196] N. Barker, M. Huch, P. Kujala, M. van de Wetering, HJ Snippert, JH van Es, T. Sato, DE Stange, H.
Begthel, M. van den Born, Lgr5+ dan penggerak sel induk pembaharuan diri di lambung dan
membangun unit lambung berumur panjang secara in vitro, Cell Stem Cell. 6 (2010) 25–36.
[197] Y. Fang, RM Eglen, Kultur sel tiga dimensi dalam penemuan dan pengembangan obat, SLAS
Discov. 22 (2017) 456–472, https://doi.org/10.1177/
1087057117696795.
[198] KL Fair, J. Colquhoun, NRF Hannan, Organoid usus untuk pemodelan
perkembangan dan penyakit usus, Philos. Trans. R.Soc. B Biologi. Sains. 373 (2018), https://
doi.org/10.1098/rstb.2017.0217.
[199] R. Conder, Kultur organoid usus: sejarah organoid usus menggunakan organoid usus sebagai model
sistem kultur, Stem Cell Rev. (2015) 1–4.
[200] JR Spence, CN Mayhew, SA Rankin, MF Kuhar, JE Vallance, K. Tolle, E.
E. Hoskins, VV Kalinichenko, SI Wells, AM Zorn, NF Shroyer, JM Wells, Mengarahkan
diferensiasi sel induk berpotensi majemuk manusia ke dalam jaringan usus secara in vitro, Nature.
470 (2011) 105–110, https://doi.org/10.1038/nature09691.
[201] M. Noben, W. Vanhove, K. Arnauts, A. Santo Ramalho, G. Van Assche,
S. Vermeire, C. Verfaillie, M. Ferrante, Epitel usus manusia dalam piring: model terkini untuk
penelitian patofisiologi gastrointestinal, United Eur.
Gastroenterol. J.5 (2017) 1073–1081, https://doi.org/10.1177/ 2050640617722903.
[202] T. Sato, RG Vries, HJ Snippert, M. Van De Wetering, N. Barker, DE Stange, J.
H. Van Es, A. Abo, P. Kujala, PJ Peters, H. Clevers, Sel induk Lgr5 tunggal membangun struktur
crypt-villus in vitro tanpa ceruk mesenkim, Alam. 459 (2009) 262–265, https://doi.org/10.1038/
nature07935.
[203] T. Sato, H. Clevers, Menumbuhkan usus kecil yang mengatur dirinya sendiri dari sel induk usus
tunggal: mekanisme dan aplikasi, Sains (80) 340 (2013) 1190–1194, https://doi.org/10.1126 /
sains.1234852.
[204] T. Zietek, P. Giesbertz, M. Ewers, F. Reichart, M. Weinmüller, E. Urbauer,
D. Haller, IE Demir, GO Ceyhan, H. Kessler, E. Rath, Organoid untuk mempelajari
transportasi nutrisi usus, penyerapan obat dan metabolisme – memperbarui model manusia dan
perluasan aplikasi, Depan. Bioeng. Bioteknologi. 8 (2020) 1–14, https://doi.org/10.3389/
fbioe.2020.577656.
[205] S. Rahmani, NM Breyner, HM Su, EF Verdu, TF Didar, Organoid usus: paradigma baru untuk rekayasa
epitel usus in vitro, Biomaterial. 194 (2019) 195–214, https://doi.org/10.1016/
j.biomaterials.2018.12.006.
[206] K. Takahashi, S. Yamanaka, Menginduksi sel induk berpotensi majemuk dalam kedokteran dan
biologi, Pembangunan. 140 (2013) 2457–2461.
[207] A. Bein, W. Shin, S. Jalili-Firoozinezhad, MH Park, A. Sontheimer-Phelps,
A. Tovaglieri, A. Chalkiadaki, HJ Kim, DE Ingber, Model organ-on-a-chip mikrofluida usus manusia,
Cmgh. 5 (2018) 659–668, https://doi.org/10.1016/j. jcmgh.2017.12.010.
[208] A. Sontheimer-Phelps, BA Hassell, DE Ingber, Pemodelan kanker pada organ-on-chip mikrofluida
manusia, Nat. Pendeta Kanker. 19 (2019) 65–81, https://doi.org/ 10.1038/s41568-018-0104-6.
[209] SN Bhatia, DE Ingber, Organ-on-chip mikrofluida, Nat. Bioteknologi. 32 (2014)
760–772.
[210] H. Uchida, M. Machida, T. Miura, T. Kawasaki, T. Okazaki, K. Sasaki,
S. Sakamoto, N. Ohuchi, M. Kasahara, A. Umezawa, H. Akutsu, Sistem bebas xenogenik yang
menghasilkan organoid usus manusia fungsional dari sel induk berpotensi majemuk, JCI Insight.
2 (2017) 1–13, https://doi.org/10.1172/jci.insight.86492.
[211] T. Zietek, E. Rath, D. Haller, H. Daniel, Organoid usus untuk menilai transportasi nutrisi, penginderaan
dan sekresi incretin, Sci. Rep.5 (2015) 1–10, https://doi. org/10.1038/srep16831.
[212] IA Williamson, JW Arnold, LA Samsa, L. Gaynor, M. DiSalvo, JL Cocchiaro, I. Carroll, MA Azcarate-
Peril, JF Rawls, NL Allbritton, Platform mikroinjeksi organoid throughput tinggi untuk mempelajari
mikrobiota gastrointestinal dan fisiologi luminal, Sel. mol. Gastroenterol. hepatol. 6 (2018)
301–319.
[213] T. Roodsant, M. Navis, I. Aknouch, IB Renes, RM van Elburg, D. Pajkrt, K.
C. Wolthers, C. Schultsz, KCH van der Ark, A. Sridhar, V. Muncan, Model monolayer epitel turunan
organoid primer 2D manusia untuk mempelajari interaksi inang-patogen di usus kecil, Front.
Sel. Menulari. Mikrobiol. 10 (2020) 1–14, https://doi.org/10.3389/fcimb.2020.00272.
[214] S. Yoshida, H. Miwa, T. Kawachi, S. Kume, K. Takahashi, Generasi organoid usus yang berasal dari
sel induk berpotensi majemuk manusia untuk pengujian obat, Sci. Rep.10 (2020) 1–11, https://
doi.org/10.1038/s41598-020-63151-z.
[215] M. Kasendra, JM Wells, Sebuah jendela menuju usus Anda: terinspirasi secara biologis
rekayasa tabung usus mini in vitro, Dev. Sel. 55 (2020) 522–524, https://doi. org/10.1016/
j.devcel.2020.11.015.
[216] M. Kasendra, R. Luc, J. Yin, DV Manatakis, G. Kulkarni, C. Lucchesi, J. Sliz,
A. Apostolou, L. Sunuwar, J. Obrigewitch, KJ Jang, GA Hamilton, M. Donowitz, K. Karalis, chip
usus Duodenum untuk penilaian obat praklinis dalam model yang relevan dengan manusia, Elife.
9 (2020) 1–23, https://doi.org/10.7554/eLife.50135.
267
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
[217] YB Yin, HR de Jonge, X. Wu, YL Yin, Mini-gut: model yang menjanjikan untuk pengembangan obat,
Drug Discov. Hari ini. 24 (2019) 1784–1794, https://doi.org/ 10.1016/j.drudis.2019.06.006.
[218] D. Jirova, M. Dvorakova, K. Kejlova, L. Kasparova, D. Kresk, H. Kolarova, Evaluasi keamanan
nanosilver menggunakan jaringan GIT manusia yang direkonstruksi, di: World Congr.
Pameran Nanoteknologi. Materi. Sains., 2015.
[219] A. Marrella, P. Buratti, J. Markus, G. Firpo, M. Pesenti, T. Landry, S. Ayehunie, S. Scaglione, H.
Kandarova, M. Aiello, Demonstrasi in vitro mekanisme penyerapan usus gula yang berbeda
menggunakan jaringan organotipik 3d dalam perangkat fluida, ALTEX 37 (2020) 255–264,
https://doi.org/10.14573/altex.1908311 .
[220] Y. Cui, S. Claus, D. Schnell, F. Runge, C. Maclean, Karakterisasi mendalam jaringan mikro
epiintestinal sebagai model penyerapan dan metabolisme obat usus pada manusia,
Farmasi 12 (2020), https: //doi.org/10.3390/ farmasi12050405.
[221] J. Markus, T. Landry, Z. Stevens, H. Scott, P. Llanos, M. Debatis, A. Armento,
M. Klausner, S. Ayehunie, Model kultur organotipik usus kecil manusia untuk permeasi obat,
peradangan, dan uji toksisitas, Vitr. Sel. Dev. biologi. - Animasi. (2020), https://doi.org/10.1007/
s11626-020-00526-6.
[222] J. Markus, T. Landry, M. Klausner, H. Kandarova, Z. Stevens, C. Donovan, S. Ayehunie,
Reproduksibilitas laboratorium ke laboratorium dalam produksi jaringan usus kecil yang
direkonstruksi dan relevan secara fisiologis untuk pengujian in vitro toksisitas, permeasi dan
peradangan, Toksikol. Biarkan. 280 (2017) S324, https://doi.org/10.1016/j.toxlet.2017.08.077 .
[223] JH Sung, J. Yu, D. Luo, ML Shuler, JC March, Hidrogel 3-D Skala Mikro
perancah untuk model saluran gastrointestinal (GI) biomimetik, Lab Chip. 11 (2011) 389–392.
[224] LM Gonzalez, I. Williamson, JA Piedrahita, AT Blikslager, ST Magness, Identifikasi garis keturunan
sel dan kultur sel induk dalam model babi untuk studi regenerasi epitel usus, PLoS One. 8 (2013),
e66465.
[225] J. Foulke-Abel, J. In, J. Yin, NC Zachos, O. Kovbasnjuk, MK Estes, H. de Jonge, M. Donowitz, Enteroid
manusia sebagai model fisiologi dan patofisiologi transpor ion usus kecil bagian atas ,
Gastroenterologi 150 (2016) 638–649, e8, https://doi.org/10.1053/j.gastro.2015.11.047.
[226] S. Ayehunie, Z. Stevens, T. Landry, M. Klausner, P. Hayden, S. Letasiova, Novel 3-D model jaringan
usus kecil manusia untuk menilai permeasi obat, peradangan, dan penyembuhan luka, Toksikol.
Biarkan. 229 (2014) S144, https://doi.org/10.1016/j. toxlet.2014.06.505.
[227] AWF Janssen, LPM Duivenvoorde, D. Rijkers, R. Nijssen, AAC
M. Peijnenburg, M. van der Zande, J. Louisse, Ekspresi, induksi dan aktivitas sitokrom P450
dalam organoid usus yang berasal dari sel induk berpotensi majemuk yang diinduksi manusia dan
perbandingan dengan sel epitel usus manusia primer dan sel Caco-2, Arch. beracun. (2020),
https://doi.org/10.1007/s00204-020-02953- 6.
[228] F. Yu, Rekayasa Mesin Mikro Platform Organoid-on-a-Chip Mikrofluida Rekayasa Platform Organoid-
on-a-Chip Mikrofluida, 2019, https://doi.org/ 10.3390/mi10030165.
[229] M. Mehling, S. Tay, Kultur sel mikrofluida, Curr. Pendapat. Bioteknologi. 25 (2014)
95–102.
[230] HJ Kim, H. Li, JJ Collins, DE Ingber, Kontribusi mikrobioma dan
deformasi mekanis terhadap pertumbuhan bakteri usus yang berlebihan dan peradangan pada
usus manusia, Proc. Natal. Akademik. Sains. AS 113 (2016) E7–E15, https://doi.org/10.1073/
pnas.1522193112 .
[231] HY Tan, S. Trier, UL Rahbek, M. Dufva, JP Kutter, TL Andresen, Model penghalang usus
mikrofluida multi-ruang menggunakan sel Caco-2 untuk studi transpor obat, PLoS One. 13
(2018) 1–23, https://doi.org/10.1371/journal. pone.0197101.
[232] Y. Guo, Z. Li, W. Su, L. Wang, Y. Zhu, J. Qin, Sebuah biomimetik usus manusia pada-a-chip untuk
memodelkan metabolisme obat di usus, Artif. Organ. 42 (2018) 1196–1205, https://doi.org/10.1111/
aor.13163.
[233] K. Kulthong, L. Duivenvoorde, H. Sun, S. Confederat, J. Wu, B. Spenkelink, L. de Haan, V. Marin, M.
van der Zande, H. Bouwmeester, Chip mikrofluida untuk budidaya lapisan sel epitel usus:
karakterisasi dan perbandingan transportasi obat antara model dinamis dan statis, Toxicol. Vitr. 65
(2020), https://doi.org/10.1016/j.tiv.2020.104815 .
[234] D. Gao, H. Liu, JM Lin, Y. Wang, Y. Jiang, Karakterisasi permeabilitas obat dalam lapisan tunggal
Caco-2 dengan spektrometri massa pada perangkat mikrofluida berbasis membran, Lab Chip. 13
(2013) 978–985, https://doi.org/10.1039/c2lc41215b.
[235] K. Kulthong, L. Duivenvoorde, BZ Mizera, D. Rijkers, G. Ten Dam, G. Oegema, T. Puzyn, H.
Bouwmeester, M. Van Der Zande, Implementasi usus dinamis-on- model penghalang a-chip
untuk studi transportasi congener dioksin lipofilik, RSC Adv. 8 (2018) 32440–32453, https://
doi.org/10.1039/c8ra05430d .
[236] HJ Kim, D. Huh, G. Hamilton, DE Ingber, Usus manusia pada sebuah chip dihuni oleh flora mikroba
yang mengalami gerakan dan aliran seperti peristaltik usus, Lab Chip. 12 (2012) 2165–2174,
https://doi.org/10.1039/c2lc40074j.
[237] Y. Guo, P. Deng, W. Chen, Z. Li, Pemodelan profil farmakokinetik untuk
penilaian obat anti kanker pada sistem mikrofluida, Micromachines 11 (2020), https://doi.org/
10.3390/MI11060551.
[238] W. Shin, CD Hinojosa, DE Ingber, HJ Kim, Morfogenesis usus manusia dikendalikan oleh gradien
morfogen transepitel dan isyarat fisik yang bergantung pada aliran dalam rekayasa mikro usus-
on-a-chip, IScience. 15 (2019) 391–406, https://doi.org/10.1016/j.isci.2019.04.037 .
[239] S. Miura, K. Sato, M. Kato-Negishi, T. Teshima, S. Takeuchi, Geser cairan memicu pembentukan
mikrovili melalui aktivasi mekanosensitif TRPV6, Nat. Komunitas. 6 (2015), https://doi.org/10.1038/
ncomms9871.
Machine Translated by Google
A.Fedi dkk.
[240] LC Delon, Z. Guo, A. Oszmiana, CC Chien, R. Gibson, C. Prestidge, B. Thierry, Investigasi
sistematis tentang pengaruh tekanan geser cairan pada sel Caco-2 terhadap optimalisasi
epitel model organ-on-chip, Biomaterial. 225 (2019) 119521, https://doi.org/10.1016/
j.biomaterials.2019.119521.
[241] SH Kim, JW Lee, I. Choi, YC Kim, JB Lee, JH Sung, Perangkat mikrofluida dengan perancah
vili hidrogel 3-D untuk mensimulasikan penyerapan usus, J. Nanosci.
Nanoteknologi. 13 (2013) 7220–7228, https://doi.org/10.1166/jnn.2013.8088.
[242] JP Mochel, AE Jergens, D. Kingsbury, HJ Kim, MG Martín, K. Allenspach, Sel induk usus
untuk memajukan pengembangan obat, presisi, dan pengobatan regeneratif: perubahan
paradigma dalam penelitian translasi, AAPS J. 20 (2018 ) 1–9, https://doi.org/10.1208/
s12248-017-0178-1.
[243] A. Dawson, C. Dyer, J. Macfie, J. Davies, L. Karsai, J. Greenman, M. Jacobsen, Model
berbasis chip mikrofluida untuk studi jaringan usus manusia dengan ketebalan penuh
menggunakan aliran ganda, Biomikrofluida 10 (2016), https://doi.org/10.1063/
1.4964813.
[244] A. Richardson, LA Schwerdtfeger, D. Eaton, I. McLean, CS Henry, SA Tobet, Perangkat
organotipik mikrofluida untuk kultur usus mamalia: ex vivo, Anal. Metode. 12 (2020) 297–
303, https://doi.org/10.1039/c9ay02038a.
[245] K. Tsilingiri, A. Sonzogni, F. Caprioli, M. Rescigno, Metode baru untuk kultur dan stimulasi
terpolarisasi eksplan mukosa usus manusia, JoVE (2013), e4368, https://doi.org/10.3791 /
4368.
[246] MJ Workman, JP Gleeson, EJ Troisi, HQ Estrada, SJ Kerns, CD Hinojosa, GA Hamilton, SR
Targan, CN Svendsen, RJ Barrett, Peningkatan pemanfaatan organoid usus manusia yang
diturunkan dari sel induk berpotensi majemuk menggunakan chip rekayasa mikro,
Cmgh 5 (2018) 669–677, e2, https://doi.org/10.1016/j. jcmgh.2017.12.008.
[247] M. Kasendra, A. Tovaglieri, A. Sontheimer-Phelps, S. Jalili-Firoozinezhad, A. Bein, A.
Chalkiadaki, W. Scholl, C. Zhang, H. Rickner, CA Richmond, H. Li, D.
T. Breault, DE Ingber, Pengembangan usus kecil manusia primer dalam sebuah chip
menggunakan organoid yang diturunkan dari biopsi, Sci. Rep.8 (2018) 1–14, https://doi.org/
10.1038/s41598-018-21201-7.
[248] A. Sontheimer-Phelps, DB Chou, A. Tovaglieri, TC Ferrante, T. Duckworth, C. Fadel, V.
Frismantas, AD Sutherland, S. Jalili-Firoozinezhad, M. Kasendra, E. Stas, JC Weaver , CA
Richmond, O. Levy, R. Prantil-Baun, DT Breault, D.
E. Ingber, Kolon-on-a-chip manusia memungkinkan analisis in vitro berkelanjutan terhadap
akumulasi dan fisiologi lapisan lendir usus besar, Cmgh. 9 (2020) 507–526, https://doi. org/
10.1016/j.jcmgh.2019.11.008.
[249] C. Probst, S. Schneider, P. Loskill, Sistem organ-on-a-chip throughput tinggi: status saat ini
dan tantangan yang tersisa, Curr. Pendapat. Bioma. bahasa Inggris 6 (2018) 33–41,
https://doi.org/10.1016/j.cobme.2018.02.004.
´
[250] S. Halldorsson, E. Lucumi, R. Gomez-Sj oberg, ¨ RMT Fleming, Keuntungan dan tantangan
kultur sel mikrofluida dalam perangkat polidimetilsiloksan, Biosens.
Bioelektron. 63 (2015) 218–231, https://doi.org/10.1016/j.bios.2014.07.029.
[251] S. Giusti, T. Sbrana, M. La Marca, V. Di Patria, V. Martinucci, A. Tirella,
C. Domenici, A. Ahluwalia, Bioreaktor aliran ganda baru yang mensimulasikan
peningkatan permeabilitas fluorescein dalam penghalang jaringan epitel, Biotechnol. J.9
(2014) 1175–1184, https://doi.org/10.1002/biot.201400004.
[252] S. Sibilio, V. De Gregorio, F. Urciuolo, PA Netti, G. Imparato, Pengaruh gerakan seperti
peristaltik pada tabung usus yang direkayasa secara biologis, Mater. Bio hari ini. 4 (2019) 1–
9, https://doi.org/10.1016/j.mtbio.2019.100027.
[253] MJC Santbergen, M. van der Zande, A. Gerssen, H. Bouwmeester, MW
F. Nielen, Model penghalang usus in vitro dinamis yang digabungkan dengan spektrometri
massa kromatografi cair berbasis chip untuk studi bioavailabilitas oral, Anal. Bioanal.
kimia. 412 (2020) 1111–1122, https://doi.org/10.1007/s00216-019-02336-6.
[254] WMS Russell, RL Burch, Prinsip Teknik Eksperimental yang Manusiawi, Methuen, 1959.
[255] A. Avdeef, KY Tam, Seberapa baik model ginjal anjing caco-2/madin-darby memprediksi
permeabilitas jejunum manusia yang efektif? J.Med. kimia. 53 (2010) 3566–3584,
https://doi.org/10.1021/jm901846t.
[256] H. Lennern¨ as, Data hewan: kontribusi dari Kamar Ussing dan
sistem perfusi untuk memprediksi pemberian obat oral pada manusia secara in vivo, Adv.
Pengiriman Obat. Wahyu 59 (2007) 1103–1120, https://doi.org/10.1016/j.addr.2007.06.016.
[257] H. Li, HE Jin, WS Shim, CK Shim, Peningkatan prediksi permeabilitas usus in vivo manusia
dan obat kelas BCS menggunakan rasio permeabilitas in vitro yang diperoleh untuk usus
tikus menggunakan sistem ruang Ussing, Drug Dev. Ind.
farmasi. 39 (2013) 1515–1522, https://doi.org/10.3109/03639045.2012.714787.
[258] YH Zhao, J. Le, MH Abraham, A. Hersey, PJ Eddershaw, CN Luscombe,
D. Boutina, G. Beck, B. Sherborne, I. Cooper, JA Platts, Evaluasi data penyerapan usus
manusia dan penurunan selanjutnya dari struktur kuantitatif - Hubungan aktivitas (QSAR)
dengan deskriptor Abraham, J. Pharm. Sains. 90 (2001) 749–784, https://doi.org/10.1002/
jps.1031.
[259] M. Iyer, YJ Tseng, CL Senese, J. Liu, AJ Hopfinger, Prediksi dan interpretasi mekanistik
penyerapan obat oral manusia menggunakan analisis MI-QSAR, Mol.
farmasi. 4 (2007) 218–231, https://doi.org/10.1021/mp0600900.
[260] K. Sugano, H. Hamada, M. Machida, H. Ushio, K. Saitoh, K. Terada, Kondisi optimal uji
permeasi membran buatan bio-mimetik, Int. J.Pharm. 228 (2001) 181–188, https://doi.org/
10.1016/S0378-5173(01)00845-6.
[261] K. Sugano, N. Takata, M. Machida, K. Saitoh, K. Terada, Prediksi pasif
penyerapan usus menggunakan uji permeasi membran buatan bio-mimetik dan
268
Jurnal Rilis Terkendali 335 (2021) 247–268
model jalur paraseluler, Int. J.Pharm. 241 (2002) 241–251, https://doi. org/10.1016/
S0378-5173(02)00240-5.
[262] H. Yu, Q. Wang, Y. Sun, M. Shen, H. Li, Y. Duan, Model PAMPA baru diusulkan berdasarkan
membran fosfolipid sintetis, PLoS One. 10 (2015), e0116502.
[263] K. Sugano, Y. Nabuchi, M. Machida, Y. Aso, Prediksi penyakit usus manusia
permeabilitas menggunakan permeabilitas membran buatan, Int. J.Pharm. 257 (2003) 245–
251, https://doi.org/10.1016/S0378-5173(03)00161-3.
[264] E. Naderkhani, Pengembangan Biomimetik Fosfolipid Berbasis Vesikel
Permeation Assays (PVPA) sebagai Alat Skrining dalam Pengembangan Obat, 2015.
[265] M. Di Cagno, HA Bibi, A. Bauer-Brandl, Penghalang biomimetik baru PermeapadTM untuk
penyelidikan efisien permeabilitas pasif obat, Eur. J.Pharm. Sains. 73 (2015) 29–34.
[266] AC Jacobsen, S. Nielsen, M. Brandl, A. Bauer-Brandl, Profil permeabilitas obat menggunakan
pelat sumur 96 Novel Permeapad®, Pharm. Res. 37 (2020) 93, https://doi.org/10.1007/
s11095-020-02807-x .
[267] SM Fischer, GE Flaten, E. Hagesæther, G. Fricker, M. Brandl, In-vitro
permeabilitas obat yang sukar larut dalam air dalam uji permeasi berbasis vesikel
fosfolipid: pengaruh surfaktan nonionik, J. Pharm. Farmakol. 63 (2011) 1022–1030.
[268] A. Collett, E. Sims, D. Walker, YL He, J. Ayrton, M. Rowland, G. Warhurst,
Perbandingan garis sel HT29-18-C1 dan Caco-2 sebagai model untuk mempelajari
penyerapan obat paraseluler usus, Pharm. Res. 13 (1996) 216–221, https://doi.org/ 10.1023/
A:1016082829111.
[269] Y. Kamiya, H. Takaku, R. Yamada, C. Akase, Y. Abe, Y. Sekiguchi, N. Murayama, M. Shimizu,
M. Kitajima, F. Shono, K. Funatsu, H. Yamazaki , Penentuan dan prediksi permeabilitas
melintasi lapisan tunggal sel epitel usus dari beragam bahan kimia/obat industri untuk
memperkirakan penyerapan oral sebagai penanda dugaan hepatotoksisitas, Toksikol.
Laporan. 7 (2020) 149–154, https://doi.org/ 10.1016/j.toxrep.2020.01.004.
[270] J. Westerhout, E. Van De Steeg, D. Grossouw, EE Zeijdner, CAM Krul, M. Verwei, HM
Wortelboer, Pendekatan baru untuk memprediksi penyerapan usus manusia
menggunakan jaringan usus babi dan matriks biorelevan, Eur. J.Pharm.
Sains. 63 (2014) 167–177, https://doi.org/10.1016/j.ejps.2014.07.003.
[271] V. Pade, S. Stavchansky, Estimasi kontribusi relatif dari
jalur transeluler dan paraseluler untuk pengangkutan obat yang diserap secara pasif
dalam model kultur sel Caco-2, Pharm. Res. 14 (1997) 1210–1215, https://doi.org/
10.1023/A:1012111008617.
[272] M. Yazdanian, SL Glynn, JL Wright, A. Hawi, Mengkorelasikan partisi dan permeabilitas
sel Caco-2 dari senyawa dengan berat molekul kecil yang beragam secara
struktural, Pharm. Res. 15 (1998) 1490–1494, https://doi.org/10.1023/A: 1011930411574.
[273] J. Alsenz, E. Haenel, Pengembangan uji permeabilitas 7-Hari, 96-Sumur Caco-2 dengan
analisis senyawa UV langsung throughput tinggi, Pharm. Res. 20 (2003) 1961–1969,
https://doi.org/10.1023/B:PHAM.0000008043.71001.43.
[274] P. Artursson, Transportasi epitel obat dalam kultur sel. I: model untuk mempelajari difusi pasif
obat pada sel penyerap usus (Caco-2), J. Pharm.
Sains. 79 (1990) 476–482, https://doi.org/10.1002/jps.2600790604.
[275] V. Fade, Hubungan antara kelarutan penyerapan obat dan pengukuran permeabilitas dalam
sel Caco-2, J. Pharm. Sains. 87 (1998) 1604–1607, https://doi.org/10.1021/js980111k .
[276] XC Wu, JR Williford, S. Gokhin, S. Lee, MR Davis, P. Sheffels, X. Wang,
J. Migeon, MC Bodinier, TC7 Cell Monolayer adalah Model Epitel Usus in vitro yang Berharga
untuk
´ Skrining Permeabilitas Membran, 2020. ´
´
[277] E. Hellinger, S. Veszelka, AE Toth, F. Walter, A. Kittel, ML Bakk, K. Tihanyi, V. H´
ada, S. Nakagawa, TDH Duy, Perbandingan sel endotel kapiler otak dan sel epitel (MDCK-
MDR1, Caco-2, dan VB-Caco-2) model penetrasi penghalang darah-otak pengganti
berbasis , Eur. J.Pharm. Biofarmasi. 82 (2012) 340–351.
[278] X. Jin, T.-L. Luong, N. Reese, H. Gaona, V. Collazo-Velez, C. Vuong, B. Potter, J.
C. Sousa, R. Olmeda, Q. Li, Perbandingan uji permeabilitas berbasis sel MDCK-MDR1 dan
Caco-2 untuk skrining obat anti malaria dan investigasi obat, J. Pharmacol. beracun.
Metode. 70 (2014) 188–194.
[279] Q. Wang, JD Rager, K. Weinstein, PS Kardos, GL Dobson, J. Li, IJ Hidalgo, Evaluasi garis sel
MDR-MDCK sebagai layar permeabilitas untuk penghalang darah-otak, Int.
J.Pharm. 288 (2005) 349–359.
[280] KA Lentz, JW Polli, SA Wring, JE Humphreys, JE Polli, Pengaruh permeabilitas pasif pada
kinetika P-glikoprotein, Pharm. Res. 17 (2000) 1456–1460.
´
[281] I. Lozoya-Agullo, F.
´ Araújo, I. Gonz´ alez-Alvarez, M. Merino-Sanju´ an, M. Gonz´
alez-Alvarez, M. Bermejo, B. Sarmento, Kegunaan Caco-2 /HT29-MTX dan model budidaya
Caco-2/HT29-MTX/Raji B untuk memprediksi permeabilitas usus dan kolon dibandingkan
dengan monokultur Caco-2, Mol. farmasi. 14 (2017) 1264–1270, https://doi.org/
10.1021/acs.molpharmaceut.6b01165.
[282] JH Yeon, JK Park, Uji permeabilitas obat menggunakan sel yang terperangkap lubang mikro
dalam perangkat mikrofluida, Anal. kimia. 81 (2009) 1944–1951, https://doi.org/
10.1021/ac802351w.
[283] DW Lee, SK Ha, I. Choi, JH Sung, chip usus-hati 3D dengan model PK untuk
prediksi metabolisme lintas pertama, Biomed. Perangkat Mikro 19 (2017), https://doi. org/
10.1007/s10544-017-0242-8.