ABSORBSI OBAT PER ORAL SECARA IN SITU

1. ABSORBSI
 Pengertian: Absorpsi merupakan bagian dari fase biofarmasetika dan tahap awal fase farmakokinetika dimana molekul-molekul obat masuk ke dalam
tubuh atau menuju ke peredaran darah setelah melewati membran biologis.
 Cara terjadinya absorbsi: Bioavailabilitas oral berhubungan langsung dengan proses kinetik saat obat melewati saluran pencernaan (GIT) melalui
-membran apikal sel epitel (yaitu enterosit), ke dalam pembuluh darah pra-hepatik, yang terkumpul pada vena portal- untuk melewati hati sebelum
mencapai sirkulasi sistemik (Gambar 2.1).
 Faktor-faktor yang mempengaruhi

2. PERORAL

3. IN SITU
 Pengertian: metode penentuan peff yang dilakukan dalam organ target tertentu yang masih berada dalam
sistem organisme hidup didasarkan atas penentuan kecepatan kecepatan hilangnya obat dari lumen usus
halus setelah larutan obat dengan kadar tertentu dilewatkan melalui usus halus secara perfusi dengan
kecepatan tertentu. Uji ini mengansumsikan obat yang diuji stabil, tidak mengalami metabolisme dalam
lumen usus sehingga hilangnya obat dari lumen usus akan muncul dalam darah
 Perbedaan in situ, in vivo, in vitro, dan ex vivo
 In situ dibandingkan in vitro
In situ methods offer advantages over in vitro models. Although the animal
has been anaesthetised and surgically manipulated, neural, endocrine, lymphatic,
and mesenteric blood supplies are intact and therefore all the transport mechanisms
present in a live animal should be functional. As a result absorption rates from these
methods may be more realistic in magnitude than those determined from in vitro
techniques.
In vitro dengan metode usus terbalik
In situ dibandingkan in vivo
The key advantage of conscious animal models over in situ techniques is the
avoidance of the non physiological conditions of anaesthesia and surgical trauma
which may affect absorption kinetics. However, as the complexity of the absorption
model increases, an increasing number of factors influencing drug absorption come
into play, which can complicate the interpretation of results. In addition,
 establishment of these techniques requires specialised surgical skills and very
intensive animal husbandry, and are therefore generally not suitable for routine
screening purposes.
 Keuntungan utama dari model hewan sadar dibandingkan teknik in situ adalah menghindari kondisi
non fisiologis dari anestesi dan trauma bedah yang dapat mempengaruhi kinetika absorbsi. Namun,
seiring dengan meningkatnya kompleksitas model absorbsi, semakin banyak faktor yang
mempengaruhi penyerapan obat ikut berperan, yang dapat memperumit interpretasi hasil. Selain itu,
pembentukan teknik-teknik ini memerlukan keterampilan bedah khusus dan peternakan hewan yang
sangat intensif, dan karenanya umumnya tidak cocok untuk keperluan penelitian rutin.

 In situ dibandingkan in vivo

Ex vivo methods provide a theoretical means of estimating human intestine absorption. They include
intestinal perfusion, everted gut sac (Fig. 1), and Ussing chambers. Ex vivo models have a number of
distinctive features that separate them from the in vitro Caco-2 model. Adequate paracellular
permeability is provided by the small intestinal epithelium, a mucus layer is present in the model, and
there is also expression of transport proteins and drug metabolism.
 Metode ex vivo menyediakan cara teoritis untuk memperkirakan penyerapan usus manusia. Mereka
termasuk perfusi usus, kantung usus terbalik (Gbr. 1), dan ruang Ussing. Model ex vivo memiliki
sejumlah fitur khas yang memisahkan mereka dari model Caco-2 in vitro. Permeabilitas paracellular
yang memadai disediakan oleh epitel usus kecil, lapisan lendir hadir dalam model, dan ada juga
ekspresi protein transpor dan metabolisme obat.

However, results from ex vivo sometimes inappropriately estimate the degree of oral absorption, due to
the interruption of normal blood flow and the lack of a nervous system. For example, investigation of an
ester prodrug using ex vivo methods, failed to provide evidence of significant transport enhancement
(Annaert et al., 2000). Despite these shortfalls, ex vivo methods are simple, and widely used in the design
and testing of potential new drugs.
 Namun, hasil dari ex vivo kadang-kadang secara tidak tepat memperkirakan tingkat penyerapan oral,
karena gangguan aliran darah normal dan kurangnya sistem saraf. Misalnya, investigasi ester prodrug
menggunakan metode ex vivo, gagal memberikan bukti peningkatan transportasi yang signifikan
(Annaert et al., 2000). Meskipun kekurangan ini, metode ex vivo sederhana, dan banyak digunakan
dalam desain dan pengujian obat baru yang potensial.

In situ methods. These methods offer many advantages in that they provide intact intestinal mucosa,
nerve system and blood flow, together with expression of enzymes and transporters (Holmstock et al.,
2012). However, they require sophisticated surgical procedures and instrumentations that make them
unsuitable for some laboratories.
 Metode in situ

 Metode-metode ini menawarkan banyak keuntungan karena mereka menyediakan mukosa usus utuh,
sistem saraf dan aliran darah, bersama dengan ekspresi enzim dan transporter (Holmstock et al.,
2012). Namun, mereka membutuhkan prosedur dan instrumen bedah canggih yang membuatnya tidak
cocok untuk beberapa laboratorium.

In direct in situ studies, absorption is measured by the disappearance of the absorbed drug from the gut.
However, many studies involve indirect measurements, appraising intestinal absorption by the rate of
appearance of drugs in plasma, excretion in urine, or by the speed of onset or degree of pharmacologic
action (Brodie, Hogben, Schanker, & Tocco, 1958).
 Dalam studi in situ langsung, penyerapan diukur dengan hilangnya obat yang diserap dari usus.
Namun, banyak penelitian melibatkan pengukuran tidak langsung, menilai penyerapan usus dengan
tingkat penampilan obat dalam plasma, ekskresi dalam urin, atau dengan kecepatan timbulnya atau
tingkat tindakan farmakologis (Brodie, Hogben, Schanker, & Tocco, 1958).

The efficiency of four in situ perfusion techniques including singlepass perfusion, recirculating perfusion,
closed-loop method and the oscillating perfusion has been evaluated in rats by comparing effective
permeability constants (ka) (Bijdendijk, Crommelin, Schurgers, & Tukker, 1986).
 Efisiensi empat teknik perfusi in situ termasuk perfusi singlepass, perfusi resirkulasi, metode loop
tertutup dan perfusi osilasi telah dievaluasi pada tikus dengan membandingkan konstanta
permeabilitas yang efektif (ka) (Bijdendijk, Crommelin, Schurgers, & Tukker, 1986).

Ex vivo intestinal perfusion// Perfusi usus ex vivo

The model has a viable mucosa, and it is a quick, simple technique for estimating of intestinal drug
transport.
 Model ini memiliki mukosa yang layak, dan merupakan teknik cepat dan sederhana untuk
memperkirakan transportasi obat usus.
Tissue viability and integrity of the intestinal respiratory system have a marked effect on the results. And
the barrier imposed by the intestinal wall and serosa may result in slower absorption rates than those
obtained in intact animals
 Kelangsungan hidup jaringan dan integritas sistem pernapasan usus memiliki efek yang nyata pada
hasilnya. Dan penghalang yang dikenakan oleh dinding usus dan serosa dapat menyebabkan tingkat
penyerapan lebih lambat daripada yang diperoleh pada hewan utuh

Ex vivo everted gut sac experiments//Eksperimen usus ex vivo everted

The model is simple, and it is very useful for predicting the extent of transfer and intestinal metabolism
of drugs.
 Modelnya sederhana, dan sangat berguna untuk memprediksi tingkat transfer dan metabolisme obat
di usus.
The everted intestinal sacs gradually lose structural integrity
 Kantung usus yang terbalik secara bertahap kehilangan integritas struktural
Ex vivo Ussing chamber
The method is well validated and it can be used to study the permeability of drugs that are poorly
absorbed, the absorption mechanisms of different compounds, the drug–drug interactions, and drug
transport processes.
 Metode ini divalidasi dengan baik dan dapat digunakan untuk mempelajari permeabilitas obat yang
diserap dengan buruk, mekanisme penyerapan senyawa yang berbeda, interaksi obat-obat, dan
proses transportasi obat.
The Ussing chamber method appears to be unsuitable for evaluating ester prodrugs. And it is also not
suitable for use with rabbit tissues as the duodenal and jejunal sections are too thick for the diffusion
chambers and leaks are observed
 Metode ruang penggunaan tampaknya tidak cocok untuk mengevaluasi produk ester. Dan itu juga
tidak cocok untuk digunakan dengan jaringan kelinci karena bagian duodenal dan jejunal terlalu
tebal untuk ruang difusi dan kebocoran diamati

In situ closed-loop method

 It enables intestinal absorption to occur at body temperature for an appointed time. The model also
allows absorption to be measured separately at different regions of rat intestine, jejunum, ileum and
colon. And it avoids the uncertainty of gastric emptying time
 ini memungkinkan penyerapan usus terjadi pada suhu tubuh untuk waktu yang ditentukan. Model ini
juga memungkinkan penyerapan diukur secara terpisah di berbagai daerah usus tikus, jejunum, ileum
dan usus besar. Dan itu menghindari ketidakpastian waktu pengosongan lambung
The procedure does not allow estimation of absorption at steady state. It is also necessary to undertake a
large number of experiments before statistically significant results can be obtained. And the operative
procedure is complex.
 Prosedur ini tidak memungkinkan estimasi penyerapan pada kondisi tunak. Penting juga untuk
melakukan sejumlah besar percobaan sebelum hasil yang signifikan secara statistik dapat diperoleh.
Dan prosedur operasinya rumit.

 In vivo adalah eksperimen dengan menggunakan keseluruhan organisme hidup. Pengujian dengan hewan
coba ataupun uji klinis merupakan salah satu bentuk penelitian in vivo. Pengujian in vivo lebih sering
dilakukan daripada in vitro karena lebih cocok untuk mengamati efek keseluruhan percobaan pada subjek
hidup. Dalam biologi molekular, in vivo sering merujuk pada eksperimen yang dilakukan dalam sel hidup
terisolasi, bukan pada keseluruhan organisme, misalnya, berasal dari sel-sel kultur biopsi. Dalam keadaan
ini, istilah yang lebih spesifik adalah ex vivo. Setelah sel terganggu dan bagian sel atau jaringan organisme
yang diuji atau dianalisis, hal ini dikenal sebagai in vitro.
 Prosedur in vitro mengacu pada prosedur yang dilakukan dalam lingkungan yang terkendali di luar
organisme hidup, tidak dalam hidup organisme, tetapi dalam lingkungan terkontrol, misalnya di dalam
tabung reaksi atau cawan Petri. Banyak percobaan biologi seluler dilakukan di luar organisme atau sel;
karena kondisi pengujian mungkin tidak sesuai dengan kondisi di dalam organisme, ini dapat mengakibatkan
hasil yang tidak sesuai dengan situasi yang muncul dalam organisme hidup. Akibatnya, hasil eksperimen
tersebut sering dijelaskan dengan in vitro, bertentangan dengan in vivo. Jenis penelitian ini bertujuan untuk
menjelaskan pengaruh dari variabel eksperimental pada bagian pokok suatu organisme. Hal ini cenderung
untuk memfokuskan pada organ, jaringan, sel, komponen sel, protein, dan/atau biomolekuler. Namun,
kondisi yang terkendali dalam sistem in vitro berbeda secara signifikan dengan in vivo, dan dapat
memberikan hasil yang menyesatkan. Oleh karena itu, dalam studi in vitro biasanya diikuti oleh studi vivo.
 Ex vivo berarti terjadi di luar organisme. Secara ilmiah, ex vivo mengacu pada percobaan atau pengukuran
yang dilakukan di dalam atau pada jaringan pada suatu lingkungan buatan di luar organisme dengan
perubahan minimum terhadap kondisi alamiah. Kondisi ex vivo memungkinkan eksperimen dengan kondisi
yang lebih terkendali daripada eksperimen in vivo, dengan cara mengubah lingkungan “alamiah” suatu
organisme. Keuntungan utama menggunakan jaringan ex vivo adalah kemampuan untuk melakukan tes atau
pengukuran yang tidak mungkin atau tidak etis dalam kehidupan subyek penelitian. Jaringan dapat
dikeluarkan dengan berbagai cara, baik sebagian organ, atau keseluruhan organ , atau sistem organ yang
lebih besar.

 2.5.2. Pilihan Model in situ Versus in Vivo

In situ techniques suffer the disadvantage that the animal is anaesthetised for the duration of the experiment.
Surgery and anaesthesia change several physiological factors that can alter drug absorption characteristics.
Anderson et al. [117] found the ABL thickness in laparotomised rats to be higher than in conscious non
laparotomised rats. Yuasa et al. [118] reported that the combined effect of laparotomy and anaesthesia
appears to increase ABL resistance, possibly as a result of reduced gut motility and luminal mixing, providing a
greater barrier to absorption of lipophilic drugs.
 Teknik in situ memiliki kerugian karena hewan dibius selama masa percobaan. Pembedahan dan anestesi
mengubah beberapa faktor fisiologis yang dapat mengubah karakteristik penyerapan obat. Anderson et al.
[117] menemukan ketebalan ABL pada tikus laparotomised lebih tinggi daripada pada tikus non
laparotomised sadar. Yuasa et al. [118] melaporkan bahwa efek gabungan laparotomi dan anestesi
tampaknya meningkatkan resistensi ABL, mungkin sebagai akibat dari penurunan motilitas usus dan
pencampuran luminal, memberikan penghalang yang lebih besar untuk penyerapan obat lipofilik.
Indeed, in studies on intestinal amino acid and xylose absorption, intestinal absorptive function was not fully
returned to normal levels until 2–3 days post-operative [90, 119]. Urethane and phenobarbital are the most
widely used anaesthetic regimens in intestinal absorption studies.
  Studi absorbsi asam amino dan xilosa pada usus, fungsi penyerapan usus tidak sepenuhnya kembali ke
tingkat normal sampai 2-3 hari pasca operasi [90, 119]. Uretan dan fenobarbital adalah rejimen anestesi
yang paling banyak digunakan dalam studi absorbsi usus.
Whereas urethane may offer advantages in terms of longer and more stable anaesthesia, phenobarbital
appeared to have less of an impact on the absorption process.
 Sementara uretan dapat menawarkan keuntungan dalam hal anestesi yang lebih lama dan lebih stabil,
fenobarbital tampaknya memiliki sedikit dampak pada proses penyerapan.
However, a study by Ueda et al. [120] found that bioavailability of oxacillin was increased in phenobarbital-
induced anaesthetised rats versus conscious rats and this was mainly due to a decrease in hepatic metabolic
extraction.
 namun, sebuah studi oleh Ueda et al. [120] menemukan bahwa bioavailabilitas oxacillin meningkat pada
tikus yang dianestesi fenobarbital dibandingkan tikus sadar dan ini terutama disebabkan oleh penurunan
ekstraksi metabolik hati.
Ketamine/midazolam appears to diminish the active transport of glucose and increase intestinal blood flow
and as such is not favoured in intestinal absorption studies [118].
 Ketamin / midazolam tampaknya mengurangi transpor aktif glukosa dan meningkatkan aliran darah usus
dan karena itu tidak disukai dalam studi penyerapan usus [118].
Uhing et al. [91] studied the effect of surgery/anaesthesia on CYP3A activity and portal venous blood flow in
acute (i.e. 4 h post-surgery) and chronic (i.e. 3 days post-surgery) groups of rats. Ketamine/xylazene
anaesthetic significantly reduced hepatic CYP3A activity and portal venous blood flow in the acute group.
 Uhing et al. [91] mempelajari efek operasi / anestesi pada aktivitas CYP3A dan aliran darah vena porta
pada kelompok tikus akut (mis. 4 jam pasca operasi) dan kronis (mis. 3 hari pasca operasi). Anestesi
ketamin / xylazene secara signifikan mengurangi aktivitas CYP3A hati dan aliran darah vena porta pada
kelompok akut.
Hence, while in situ methods facilitate a more mechanistic evaluation under controlled conditions, and are
generally cheaper to establish, the interpretation of in situ experimental results should carefully address the
impact of anaesthesia and/or surgical trauma.
 Oleh karena itu, walaupun metode in situ memfasilitasi evaluasi yang lebih mekanistik dalam kondisi yang
terkendali, dan umumnya lebih murah untuk dibangun, interpretasi hasil eksperimental in situ harus hati-
hati mengatasi dampak anestesi dan / atau trauma bedah.

https://coretanfifi.wordpress.com/2011/01/10/studi-absorbsi-obat/ (arti absorbsi,

kelemahan dan kelebihan studi absorbsi) dihasil nanti stressnya hewan uji bisa
mempengaruhi juga

2.2.2 Mekanisme Lintas Membran

Mekanisme lintas membran berkaitan dengan peristiwa absorpsi, meliputi mekanisme pasif
dan aktif (termasuk pembentukan) bersaing dalam proses perlintasan zat aktif melalui
membran (Syukri, 2002).
Difusi pasif “pH partisi hipotesis”
Difusi pasif menyangkut senyawa yang larut dalam komponen penyusun membran.
Penembusan terjadi karena adanya perbedaan konsentrasi atau elektrokimia tanpa
memerlukan energi, sehingga mencapai keseimbangan dikedua sisi membran. Waktu yang
diperlukan untuk mencapai keseimbangan tersebut mengikuti hukum difusi Fick (Syukri,
2002).

Jadi konsentrasi (C) senyawa di kedua sisi membran berpengaruh pada proses penembusan,
tetapi perlu ditekankan bahwa hanya fraksi bebas dari zat aktif yang diperhitungkan dalam
perbedaan konsentrasi. Kombinasi zat aktif protein yang terbentuk tersebut tidak dapat
terdifusi karena alasan bobot molekulnya. Dalam hal ini hanya fraksi bebas yang dapat
berdifusi, rantai protein merupakan faktor yang secara tidak langsung mempengaruhi laju
difusi melalui membran (Syukri, 2002).

Kebanyakan zat aktif merupakan basa atau asam organik, maka dalam keadaan terlarut
sebagian molekul berada dalam bentuk terionkan dan sebagian dalam bentuk tak terionkan.
Jika ukuran molekul tidak dapat melalui kanal-kanal membran, maka polaritas yang kuat
dari bentuk terionkan akan menghambat proses difusi transmembran. Hanya fraksi zat aktif
yang tak terionkan dan larut dalam lemak yang dapat melalui membran dengan cara difusi
pasif.

Pentingnya faktor-faktor yang berpengaruh pada difusi transmembran dari suatu molekul
(derajat ionisasi molekul, pH kompartemen) digarisbawahi dalam ini (Syukri, 2002). Untuk
obat yang zat aktifnya merupakan garam dari suatu asam kuat atau basa kuat, derajat
ionisasi berperan pada hambatan difusi transmembran. Sebaliknya untuk elektrolit lemah
berupa garam yang berasal dari asam lemah atau basa lemah yang sedikit terionisasi, maka
difusi melalui membran tergantung kelarutan bentuk tak terionkan (satu-satunya yang
berpengaruh pada konsentrasi), serta derajat ionisasi molekul (Syukri, 2002).

Derajat ionisasi tergantung pada dua faktor, (persamaan Henderson Hasselbach) yaitu:
a. Tetapan ionisasi dari suatu senyawa atau pKa
b. pH cairan dimana terdapat molekul zat aktif

Karakteristik fisiko-kimia sebagian besar molekul (polaritas, ukuran molekul, dan

sebagainya) merupakan hambatan penembusan transmembran oleh mekanisme pasif
secara filtrasi dan difusi. Pengikutsertaan proses aktif dapat menjelaskan perjalanan obat
yang kadang-kadang melintasi membran sel dengan sangat cepat (Syukri, 2002)
ABL, LIPOID, PERE PATHWAY
Ho et al. [5] presented a theoretical model for gastrointestinal absorption of drugs (Figure 2.2), which described
the
biomembrane as a series of lipoidal and aqueous pores in parallel.
 Ho et al. [5] mempresentasikan model teoritis untuk penyerapan obat gastrointestinal (Gambar 2.2), yang
menggambarkan biomembran sebagai serangkaian pori lipoidal dan air yang tersusun paralel.

Figure 2.2 Schematic diagram of the physical model for

passive transport of solutes across the intestinal
membrane.
 Gambar 2.2 Diagram skematis dari model fisik untuk
transpor pasif zat terlarut yang melintasi membran usus.

The bulk aqueous solution with an aqueous boundary layer

(ABL) on the mucosal side is followed by a heterogeneous
membrane consisting of lipoidal and aqueous channel
pathways and thereafter by a sink on the serosal side.
(Adapted from Ho et al. [5])
 Larutan air dalam jumlah besar dengan aqueous
boundary layer (ABL) pada sisi mukosa diikuti oleh
membran heterogen yang terdiri dari saluran lipoidal dan
aqueous dan selanjutnya oleh suatu sink pada sisi serosal.
(Diadaptasi dari Ho et al. [5])

It was postulated that the aqueous pores are available to all molecular species, both ionic and non-ionic, while the
lipoidal pathway is accessible only to un-ionised species.
 Didalilkan bahwa pori-pori aqueous tersedia untuk semua spesies molekuler, baik ionik maupun non-ionik,
sedangkan jalur lipoidal hanya dapat diakses oleh spesies yang tidak terionisasi.

In addition, Ho and co-workers introduced the concept of the aqueous boundary layer (ABL) [9, 10]. The ABL is
considered a stagnant water layer adjacent to the apical membrane surface that is created by incomplete mixing
of luminal contents near the intestinal cell surface.
 Selain itu, Ho dan rekan kerja memperkenalkan konsep lapisan batas aqueous (ABL) [9, 10]. ABL dianggap
sebagai lapisan air stagnan yang berdekatan dengan permukaan membran apikal yang dibuat oleh pencampuran
yang tidak lengkap dari konten luminal dekat permukaan sel usus.

The influence of drug structure on permeability in these domains will be different; for example ABL permeability
(Paq) is inversely related to solute size, whereas membrane permeability (Pm) is dependent on both size and
charge.
 Pengaruh struktur obat pada permeabilitas dalam domain ini akan berbeda; misalnya permeabilitas ABL (Paq)
berbanding terbalik dengan ukuran zat terlarut, sedangkan permeabilitas membran (Pm) tergantung pada
ukuran dan muatan.

2.2.2. General Model Describing Gastrointestinal Absorption//Model Umum Menggambarkan

Penyerapan Gastrointestinal
A basic starting point in the development of predictive absorption models is to review the mathematical
descriptions of rate and extent of drug absorption. A physical model for simultaneous fluid flow and intestinal
absorption that applies broadly to idealised simulation experiments, animal studies, and in vivo studies in humans
has been described by Ho et al. [30] and is depicted in Figure 2.4.
 Titik awal dasar dalam pengembangan prediksi model absorbsi adalah untuk meninjau deskripsi matematika
dari kecepatan dan tingkat absorbsi obat. Sebuah model fisik untuk aliran cairan simultan dan absorbsi usus
yang berlaku luas untuk eksperimen simulasi ideal, penelitian pada hewan, dan studi in vivo pada manusia telah
dijelaskan oleh Ho et al. [30] dan digambarkan dalam Gambar 2.4.

Figure 2.4 Schematic diagram of the physical

model relating non-steady-state intestinal
absorption and blood level kinetics with drug
infusion from the stomach. (Adapted from Ho et
al. [30]).
Gambar 2.4 Diagram skematis dari model fisik yang
berhubungan dengan absobrbsi pada usus non-
steady-state dan level kinetika darah dengan infus
obat dari lambung. (Diadaptasi dari Ho et al. [30]).
The change in blood levels of drug with time will be the result of nonsteady-state drug appearance kinetics within
a defined length of intestine and the rate of elimination from the blood.
 Perubahan kadar obat dalam darah dalam jangka waktu tertentu akan menjadi hasil dari kinetika obat yang
tidak tunak pada panjang usus yang ditentukan dan kecepatan eliminasi dari darah.

As drug from the stomach is infused into a flowing liquid within the small intestine, there occurs a non-steadystate
concentration gradient along the intestinal tract, and the concentration is a function of both distance and time.
The concentration gradient will be influenced by a number of factors: stomach emptying rate, intestinal fluid
flow, absorption rates, and the extent of spreading of solute along the tract.
 Ketika obat dari perut dimasukkan ke dalam cairan yang mengalir di dalam usus kecil, terjadilah gradien
konsentrasi non-steadystate di sepanjang saluran usus, dan konsentrasi adalah fungsi dari jarak dan waktu.
Gradien konsentrasi akan dipengaruhi oleh sejumlah faktor: laju pengosongan lambung, aliran cairan usus, laju
absorbsi, dan tingkat penyebaran zat terlarut di sepanjang saluran.

2.2.4. Estimating Effective Intestinal Permeability Coefficient Using a Mass Balance Approach
 2.2.4. Memperkirakan Koefisien Permeabilitas Usus yang Efektif Menggunakan Pendekatan Mass Balance
A physical model for simultaneous bulk fluid flow and absorption in the intestinal tract under steady-state
conditions is presented in Figure 2.5.
 Model fisik untuk aliran cairan dalam jumlah besar secara simultan dan absorbsi dalam saluran usus di bawah
kondisi tunak disajikan pada Gambar 2.5.

 Gambar 2.5 Model keseimbangan massa untuk percobaan perfusi usus pada kondisi tunak (Diadaptasi dari Johnson
dan Amidon [129]).
At steady state, the following mass balance can be applied across a perfused segment of the intestine.
 Pada kondisi tunak, keseimbangan massa berikut dapat diterapkan di seluruh segmen perfusi usus.

The rate of mass entering and exiting the intestinal segment (i.e. cylindrical tube) is the product of the volumetric
flow rate (Q) and either inlet concentration (Cin) or outlet concentration (Cout), respectively. Assuming that mass
is lost from the tube only by absorption into the blood, the mass absorbed per unit time is the difference between
the rates of mass flow in and out of the tube as follows:
 Laju massa yang masuk dan keluar dari segmen usus (yaitu tabung silinder) adalah produk dari laju aliran
volumetrik (Q) dan masing-masing konsentrasi inlet (Cin) atau konsentrasi outlet (Cout).
 Dengan asumsi bahwa massa hilang dari tabung hanya dengan absorbsi ke dalam darah, massa yang diabsorbsi
per satuan waktu adalah perbedaan antara laju aliran massa masuk dan keluar dari tabung sebagai berikut:

Estimating the term C ref lumen (i.e. bulk drug concentration profile in an intestinal segment) is dependent on the
flow dynamics in the intestine. Several mathematical models have been proposed to define this [34, 35].
 Memperkirakan istilah C lumen ref (yaitu profil konsentrasi obat massal dalam segmen usus) tergantung pada
dinamika aliran di usus. Beberapa model matematika telah diusulkan untuk mendefinisikan ini [34, 35].
The two most frequently models are described here [4].
 Dua model yang paling sering dijelaskan di sini [4].
The simplest model is the mixing tank or well-stirred model, where complete mixing (i.e. axial and radial) is
achieved within the intestine and as such there is a uniform concentration within the intestine. The model assumes
an instantaneous dilution of the inlet stream occurring in the intestinal segment. The term C lumen ref can thus be
approximated with the Cout concentration and Peff calculated as follows:
 Model yang paling sederhana adalah tangki pencampuran atau model yang diaduk dengan baik, di mana
pencampuran sempurna (yaitu aksial dan radial) dicapai dalam usus dan dengan demikian ada konsentrasi yang
seragam di dalam usus. Model ini mengasumsikan pengenceran seketika dari aliran masuk yang terjadi di segmen
usus. Istilah C lumen ref dengan demikian dapat diperkirakan dengan konsentrasi Cout. Kemudian Peff dihitung
sebagai berikut:

An alternative model is the complete radial mixing or parallel tube model which considers a constant fluid flow
down a cylinder. It is also referred to as an ‘open’ system, where the perfusion solution, containing a drug, flows
down a cylindrical segment and at steady state a constant concentration gradient is established along the length of
the segment. The concentration profile is considered to be constant radially but not axially. Hence, the
concentration profile will decrease in an exponential fashion, assuming first-order absorption.
 Model alternatif adalah pencampuran radial lengkap atau model tabung paralel yang mempertimbangkan aliran
fluida konstan ke silinder. Ini juga disebut sebagai sistem 'terbuka', di mana larutan perfusi, yang mengandung
obat, mengalir turun ke segmen silinder dan pada kondisi tunak, gradien konsentrasi konstan dibuat sepanjang
segmen. Profil konsentrasi dianggap konstan secara radial tetapi tidak secara aksial. Oleh karena itu, profil
konsentrasi akan menurun secara eksponensial, dengan asumsi absorbsi orde pertama.
The term Cref lumen can be approximated as
the logarithmic mean concentration (<C >) in the intestine [i.e.<C >=(Cout − Cin)/ ln(Cout/Cin)], substituting this
into Eq. 2.16 yields the following:
 Istilah Cref lumen dapat diperkirakan sebagai
konsentrasi rata-rata logaritmik (<C>) di usus [yaitu <C> = (Cout - Cin) / ln (Cout / Cin)],
menggantikan ini ke Persamaan. 2,16 menghasilkan yang berikut:

2.2.5. Using Peff to Estimate the Extent of Absorption

2.2.5. Menggunakan Peff untuk Memperkirakan Tingkat Penyerapan
2.3 In Situ Models 46
 2.3. Model In Situ
Many variations of intestinal perfusion methods have been used as absorption models over the years. In situ
methods offer advantages over in vitro models. Although the animal has been anaesthetised and surgically
manipulated, neural, endocrine, lymphatic and mesenteric blood supplies are intact and therefore all the
transport mechanisms present in a live animal should be functional. As a result absorption rates from these
methods may be more realistic in magnitude than those determined from in vitro techniques.
 Banyak variasi metode perfusi usus telah digunakan sebagai model absorbsi selama bertahun-tahun. Metode in
situ menawarkan keunggulan dibandingkan model in vitro. Meskipun hewan tersebut telah dibius dan
dimanipulasi secara bedah, pasokan darah saraf, endokrin, limfatik, dan mesenterika masih utuh dan karenanya
semua mekanisme transportasi yang ada pada hewan hidup harus fungsional. Akibatnya tingkat absorbsi dari
metode ini mungkin lebih realistis dalam besarnya daripada yang ditentukan dari teknik in vitro.

2.3.1 Intestinal Perfusion Techniques 46

 2.3.1. Teknik Perfusi Usus
The development of stable, vascularly perfused preparations of the small intestine has proved a powerful research
tool for the investigation of intestinal drug transport and metabolism. Since originally proposed by Schanker et al.
[39], this model has gained widespread use and application, owing to its relative simplicity, relative ease of
surgical techniques, and low cost.
 Pengembangan preparat perfusi vaskular yang stabil dari usus kecil telah terbukti sebagai alat penelitian yang
kuat untuk penyelidikan transportasi dan metabolisme obat usus. Sejak awalnya diusulkan oleh Schanker et al.
[39], model ini telah memiliki penggunaan dan aplikasi yang luas, karena relatif sederhana, relatif mudah teknik
bedahnya, dan biaya rendah.

In this approach, the abdominal cavity of an anaesthetised animal is exposed by laparotomy. A number of
modifications to the original method have been developed. The intestinal segment into which drug is introduced
can be either ‘closed’ or ‘open’.
 Dalam pendekatan ini, rongga perut hewan yang dibius terekspos oleh laparotomi. Sejumlah modifikasi pada
metode asli telah dikembangkan. Segmen usus tempat obat diperkenalkan dapat 'tertutup' atau 'terbuka'.

In closed loop experiments (Sect. 2.3.1.1), described by Doluisio et al. [40], a drug solution is placed in an isolated
segment of the intestine and the resultant luminal solution is analysed at pre-determined time points.
 Dalam percobaan loop tertutup (Bag. 2.3.1.1), dijelaskan oleh Doluisio et al. [40], larutan obat ditempatkan di
segmen terisolasi dari usus dan larutan luminal yang dihasilkan dianalisis pada titik waktu yang ditentukan
sebelumnya.

In the open loop or ‘through and through’ perfusion techniques (Sect. 2.3.1.2), originally proposed by Higuchi and
co-workers, continuous fluid flow is maintained down the intestine, and intestinal permeability is estimated via
the concentration difference in inlet and outlet perfusate at steady state [41]
 Dalam loop terbuka atau teknik perfusi 'melalui dan melalui' (Bagian 2.3.1.2), awalnya diusulkan oleh Higuchi
dan rekan kerja, aliran cairan kontinu dipertahankan di usus, dan permeabilitas usus diperkirakan melalui
perbedaan konsentrasi di perfusi inlet dan outlet pada kondisi tunak [41]

An additional consideration when using in situ techniques is the volume of the luminal drug solution as water
absorption and secretion during the perfusion may introduce errors in the lumenal concentrations and therefore in
the calculated absorption.
 Pertimbangan tambahan saat menggunakan teknik in situ adalah volume larutan obat luminal sebab penyerapan
dan sekresi air selama perfusi dapat menyebabkan kesalahan dalam konsentrasi lumenal dan oleh begitupula
dalam absorbsi yang dihitung.

Various water flux correction methods have been published [42] including the co-perfusion of a ‘non-absorbed’
marker such as phenol red, inulin, or 14C PEG 4000 (Eq. 2.29). Alternatively, a simpler gravimetric method may
also be applied using Eq. 2.30: where Qin and Qout are the measure flow rates entering and exiting the intestinal
segment.
 Berbagai metode koreksi fluks air telah diterbitkan [42] termasuk co-perfusi dari penanda tidak diabsorbsi’
seperti fenol merah, inulin, atau 14C PEG 4000 (Persamaan 2.29). Metode gravimetri sederhana juga dapat
 diterapkan menggunakan Persamaan. 2.30: di mana Qin dan Qout adalah ukuran laju aliran yang masuk dan
keluar dari segmen usus.

Sutton et al. [42] reported that the gravimetric method may in fact be as accurate as the ‘marker’ methods based
on non-absorbable markers, with the additional advantages of avoiding the risk of interactions between drug and
marker (e.g. analytical) and/or the possible effects of markers on membrane function.
 Sutton et al. [42] melaporkan bahwa metode gravimetri mungkin sebenarnya seakurat metode 'penanda'
berdasarkan penanda yang tidak dapat diabsorbsi, dengan keuntungan tambahan menghindari risiko interaksi
antara obat dan penanda (misalnya analitik) dan / atau kemungkinan efek marker pada fungsi membran.

2.3.1.1. Closed Loop Intestinal Perfusion Technique

 2.3.1.1. Teknik Perfusi Usus Loop Tertutup

In the closed loop experiments, the rats weighing 250–350 g are typically fasted overnight and allowed access to
water ad libitum. It is considered good practice to allow animals to acclimatise for typically 1 week prior to
experiment.
 Dalam percobaan loop tertutup, tikus dengan berat 250-350 g biasanya berpuasa semalaman dan diizinkan
mengakses air ad libitum. Merupakan praktik yang baik jika memungkinkan hewan melakukan
aklimatisasi/adaptasi lingkungan selama 1 minggu sebelum percobaan.

The rats are anaesthetised, placed on a heating pad to maintain a constant body temperature of 37 ◦C, and a
laparotomy is performed to identify the small intestine. Two L-shaped cannulas are inserted through small slits at
the duodenal and ileal ends. Efforts are made to minimise handling of the small intestine and to reduce surgery to
a minimum in order to maintain an intact blood supply.

 Tikus dianestesi, ditempatkan pada bantalan pemanas untuk menjaga suhu tubuh konstan 37 ◦C, dan laparotomi
dilakukan untuk mengidentifikasi usus kecil. Dua kanula berbentuk L dimasukkan melalui celah kecil di ujung
duodenum dan ileum. Upaya dilakukan untuk meminimalkan penanganan usus kecil dan untuk mengurangi
operasi seminimal mungkin untuk menjaga suplai darah yang utuh.

The cannulas are secured by ligature. Four-centimetre segments of polyethylene tubing are attached to the
exposed ends of both cannulas, and a 30-ml hypodermic syringe fitted with a three-way stopcock and containing
perfusion solution, warmed to 37 ◦C, is attached to the duodenal cannula.
 Kanula diamankan dengan ligatur. Segmen tabung polietilen empat sentimeter melekat pada ujung yang terbuka
dari kedua kanula, dan jarum suntik hipodermik 30-ml yang dilengkapi dengan stopcock tiga arah dan berisi
larutan perfusi, dipanaskan hingga 37 ◦C, melekat pada kanula duodenum.

The perfusion solution is then passed through the segment to clear intestinal contents and effluent discarded until
running clear. The remaining perfusion solution is then carefully expelled, by means of air pumped through the
intestine, 10 ml of drug solution is introduced into the isolated intestinal segment, and a second hypodermic
syringe is attached to the ileal cannula.
 larutan perfusi kemudian dilewatkan melalui segmen untuk membersihkan isi usus dan limbah dibuang hingga
berjalan jernih. Larutan perfusi yang tersisa kemudian dikeluarkan dengan hati-hati, dengan udara yang dipompa
melalui usus, 10 ml larutan obat dimasukkan ke dalam segmen usus yang terisolasi, dan jarum suntik hipodermik
kedua dipasang pada kanula ileum.

At pre-determined time intervals (e.g. 5-min intervals for 30 min), the lumen solution is sampled by pumping it
into either the duodenal or the ileal syringe, removing ∼0.1 ml solution, and returning the lumen solution within
10–15 s.
 Pada interval waktu yang telah ditentukan sebelumnya (mis. Interval 5 menit selama 30 menit), larutan lumen
diambil sampelnya dengan memompanya ke dalam jarum suntik duodenal atau ileum, melepaskan larutan 0.1
ml, dan mengembalikan larutan lumen dalam 10–15 detik. .

The method may be modified by the addition of an in-line peristaltic pump which facilitates constant and gradual
mixing of the medium in the lumen, without the mechanical trauma likely to be exerted upon the intestine each
time the syringe contents are alternated (i.e. recirculation apparatus).
 Metode ini dapat dimodifikasi dengan menambahkan pompa peristaltik in-line yang memfasilitasi pencampuran
media dalam lumen secara konstan dan bertahap, tanpa trauma mekanis yang cenderung diberikan pada usus
setiap kali isi jarum suntik berganti-ganti (mis. Alat resirkulasi) ).

Assuming sink conditions prevail, drug concentration in the ‘closed’ intestinal segment is assumed to decrease in a
first-order fashion with time, t, as defined in
 Dengan asumsi kondisi sink berlaku, konsentrasi obat di segmen usus 'tertutup' diasumsikan menurun secara orde
pertama seiring waktu, t, sebagaimana didefinisikan dalam

where C0 is the initial drug concentration. Hence a plot of drug concentration remaining versus time may be fitted
to a first-order equation, to define ka, the apparent first-order absorption rate constant. Peff can hence be
calculated from Eq. 2.9.
 di mana C0 adalah konsentrasi obat awal. Oleh karena itu sebidang konsentrasi obat yang tersisa terhadap waktu
dapat dipasang pada persamaan orde pertama, untuk mendefinisikan ka, konstanta laju absorpsi orde pertama.
Peff karenanya dapat dihitung dari Persamaan. 2.9.

2.3.1.2. Single Pass Intestinal Perfusion Technique

 2.3.1.2. Teknik Perfusi Usus Saluran Tunggal
For the quantitative estimation of absorption parameters, the Doluisio method has suffered from the potential
drawback that the drug is exposed to the entire surface area of the intestinal segment throughout the study, which
does not reflect the true in vivo situation (i.e. single-pass intestinal fluid flow).
 Untuk estimasi kuantitatif dari parameter absorbsi, metode Doluisio memiliki kelemahan potensial bahwa obat
tersebut terpapar ke seluruh area permukaan segmen usus sepanjang penelitian, yang tidak mencerminkan
situasi in vivo yang sebenarnya (yaitu aliran cairan usus jalur tunggal).

The single-pass perfusion or ‘through and through’ model, originally proposed by Higuchi and co-workers, is
designed to estimate drug absorption properties with continuous fluid flow through the intestine. It is generally
considered superior to the Doluisio method giving better control of the hydrodynamics and increased surface area
[30, 43].
 Perfusi jalur tunggal atau model 'melalui dan melalui', awalnya diusulkan oleh Higuchi dan rekan kerja,
dirancang untuk memperkirakan sifat absorbsi obat dengan aliran cairan kontinu melalui usus. Secara umum
dianggap lebih unggul daripada metode Doluisio yang memberikan kontrol hidrodinamika yang lebih baik dan
peningkatan luas permukaan [30, 43].

In general, Peff values obtained from both models tend to be similar when normalised for the perfused volumes
and intestinal lengths; however, the single-pass perfusion has been reported to give more reproducible absorption
rate and lower variance within experiments [44].
 Secara umum, nilai Peff yang diperoleh dari kedua model cenderung serupa ketika dinormalisasi untuk volume
perfusi dan panjang usus; Namun, perfusi jalur tunggal telah dilaporkan memberikan lebih banyak tingkat
absorbsi yang dapat direproduksi dan varians yang lebih rendah dalam percobaan [44].

The experimental set-up and cannulation of the intestinal segment is similar to that described in section 2.3.1.1.
The drug solution is perfused continuously (via an infusion pump) down a set length of intestine through the
duodenalend cannula and perfusate collected from the ileal-end cannula, at flow rates of between 0.1 and 0.3
ml/min. The samples collected at outflow are assayed for drug content.
 Pengaturan eksperimental dan kanulasi segmen usus mirip dengan yang dijelaskan dalam bagian 2.3.1.1.
Larutan obat perfusi terus menerus (melalui pompa infus) menuju ke bawah sesuai panjang usus yang
ditetapkan melalui kanula duodenalend dan perfusi yang dikumpulkan dari kanula ujung ileum, dengan laju
aliran antara 0,1 dan 0,3 ml / menit. Sampel yang dikumpulkan saat keluar diuji untuk konten obat.

In some experiments, to prevent entero-hepatic recycling the bile duct may be closed before perfusion.
 Dalam beberapa percobaan, untuk mencegah daur ulang entero-hepatik, saluran empedu dapat ditutup
sebelum perfusi.

Estimation of the effective intestinal permeability (Peff) is determined by calculating the concentration difference
between inlet and outlet fluids, once steady state has been achieved (i.e. when the outlet concentrations of the
compound are stable over time), using the parallel tube model (Eq. 2.18).
 Estimasi permeabilitas usus efektif (Peff) ditentukan dengan menghitung perbedaan konsentrasi antara cairan
inlet dan outlet, setelah kondisi stabil tercapai (yaitu ketika konsentrasi outlet senyawa stabil dari waktu ke
waktu), menggunakan model tabung paralel (Persamaan 2.18).

A comparison of both open and closed methods is presented in Table 2.2.

 Perbandingan metode terbuka dan tertutup disajikan pada Tabel 2.2.

Table 2.2 Comparison of closed loop and single-pass (open loop) intestinal perfusion models.
 Tabel 2.2 Perbandingan model perfusi usus tertutup dan loop tunggal (loop terbuka).
Closed loop Closed loop
Determining concentration drop between
Determining decrease in drug
Theoretical basis inlet and outlet concentration at steady
concentration for segment of intestine
Landasan teori state
over time
 Menentukan pemberian konsentrasi antara
 Menentukan penurunan konsentrasi obat
konsentrasi saluran masuk dan saluran
untuk segmen usus dari waktu ke waktu
keluar pada kondisi tunak
Fluid volumes 5–10 ml static over ∼30 min 3–100 ml continuous flow over ∼30 min
Hydrodynamics Well-stirred model, i.e. uniform Parallel tube model, i.e. concentration
is the study of the concentration inside intestine decrease exponentially down the length of
flow of water and  Model yang diaduk dengan baik, yaitu the intestine
other Newtonian konsentrasi seragam di dalam usus  Model tabung paralel, yaitu penurunan
fluids konsentrasi secara eksponensial di
sepanjang usus
Intestinal set-up Intestine is removed initially and may be Intestine is generally located outside the
returned to intestine during perfusion abdomen during perfusion.
 Usus dibuang pada awalnya dan dapat  Usus umumnya terletak di luar perut selama
dikembalikan ke usus selama perfusi perfusi.

The choice of flow rates in perfusion experiments is an important consideration as it may affect hydrodynamics
[35], ABL thickness [30], intestinal radius [34], intestinal surface area [45], and time to reach steady-state
conditions [32], all of which can impact on Peff estimates.
 Pilihan laju aliran dalam percobaan perfusi merupakan pertimbangan penting karena dapat mempengaruhi
hidrodinamika [35], ketebalan ABL [30], jari-jari usus [34], luas permukaan usus [45], dan waktu untuk mencapai
kondisi tunak [32] yang semuanya dapat berdampak pada perkiraan Peff.
o aqueous boundary layer baca 2.2.1. Estimating Drug Absorption Trends from Physiochemical
Characteristics
The intestinal radius has implications for the estimation of the permeability coefficient. The most widely used
estimate for the rat intestinal radius is 0.18 cm [34].
 Jari-jari usus memiliki implikasi/keterlibatan untuk estimasi koefisien permeabilitas. Perkiraan yang paling
banyak digunakan untuk jari-jari usus tikus adalah 0,18 cm [34].

These authors found that there was a small change in intra-luminal pressure with an increase in flow rate from
0.25 to 0.5 ml/min but that this was without any apparent change in the distension to the intestinal lumen
 Para penulis menemukan bahwa ada perubahan kecil dalam tekanan intra-luminal dengan peningkatan laju aliran
dari 0,25 menjadi 0,5 ml / menit namun tanpa perubahan nyata dalam distensi ke lumen usus.
o Distensi abdomen adalah istilah medis yang menggambarkan kejadian yang terjadi ketika ada zat (gas atau
cairan) menumpuk di dalam perut yang menyebapkan perut atau pinggang mengembung melebihi ukuran
normal.

The advantages of the in situ techniques include an intact blood supply; multiple samples may be taken, thus
enabling kinetic studies to be performed.
 Keuntungan dari teknik in situ termasuk suplai darah yang utuh; beberapa sampel dapat diambil, sehingga
memungkinkan studi kinetik untuk dilakukan.

A fundamental point regarding the in situ intestinal perfusion method is that the rat model has been demonstrated
to correlate with in vivo human data [46–49].
 Poin mendasar mengenai metode perfusi usus in situ adalah bahwa model tikus telah terbukti berkorelasi dengan
data in vivo manusia [46-49].

Amidon et al. [36] have demonstrated that it can be used to predict absorption for both passive and carrier-
mediated substrates. However, the intestinal luminal concentrations used in rat experiments should reflect
adequately scaled and clinically relevant concentrations to ensure appropriate permeability determinations [50].
 Amidon et al. [36] telah menunjukkan bahwa itu dapat digunakan untuk memprediksi absorbsi untuk substrat
pasif dan substrat yang dimediasi pembawa. Namun, konsentrasi luminal usus yang digunakan dalam percobaan
tikus harus mencerminkan skala yang cukup dan konsentrasi yang relevan secara klinis untuk memastikan
penentuan permeabilitas yang tepat [50].
There are limitations of the in situ rat perfusion models. The assumption involved in derivation of these models
that all drug passes into portal vein, that is drug disappearance reflects drug absorption, may not be valid in some
circumstances as discussed below
 Ada keterbatasan model perfusi tikus in situ. Asumsi yang terlibat dalam penurunan model-model ini bahwa
semua obat masuk ke portal vena, yaitu penghilangan obat mencerminkan absorbsi obat, mungkin tidak valid
dalam beberapa keadaan seperti yang dibahas di bawah ini.

If the drug under study is metabolised by enterocytes, drug disappearance from the lumen will not reflect drug
appearance into the blood.
 Jika obat yang diteliti dimetabolisme oleh enterosit, hilangnya obat dari lumen tidak akan mencerminkan
kondisi sesungguhnya obat ke dalam darah.
o enterosit Mereka adalah sel-sel epitel usus kecil yang fungsi utamanya adalah penyerapan nutrisi dan
transportasi mereka ke jaringan lain dari tubuh.

Conventional teaching of drug metabolism has tended to focus on hepatic metabolism, whereas the influence of
intestinal biotransformations has traditionally been considered a minor factor. However, since Watkins et al. [51]
reported that a major cytochrome P450 enzyme, CYP3A4, is relatively abundant in the intestinal mucosa, the
potential of the intestinal enzyme system to significantly reduce oral bioavailability has been a major topic for
discussion [52].
 Pengajaran konvensional metabolisme obat cenderung berfokus pada metabolisme hati, sedangkan pengaruh
biotransformasi usus secara tradisional dianggap sebagai faktor minor. Namun, karena Watkins et al. [51]
melaporkan bahwa enzim sitokrom P450 utama, CYP3A4, relatif melimpah di mukosa usus, potensi sistem
enzim usus untuk secara signifikan mengurangi ketersediaan hayati oral telah menjadi topik utama untuk
dibahas [52].
Watkins [53] proposed that despite the relatively small amount of P450 in the intestinal mucosa relative to the
liver (i.e. mean microsomal CYP3A4 contents are reported to be ∼50% of the levels found in human liver) the
intestine plays a major role in drug metabolism.
 Watkins [53] mengusulkan bahwa meskipun jumlah P450 yang relatif kecil dalam mukosa usus relatif terhadap
hati (yaitu rata-rata isi CYP3A4 mikrosomal dilaporkan ∼50% dari kadar yang ditemukan dalam hati manusia)
usus tersebut memainkan peran utama dalam metabolisme obat.

The location of the P450, just below the microvillus border, maximises drug metabolism as it traverses the
intestinal wall.
 Lokasi P450, tepat di bawah batas mikrovili, memaksimalkan metabolisme obat saat melintasi dinding usus.
o Vili dan mikrovili berfungsi memperluas permukaan usus halus sehingga penyerapan lebih efisien

In addition, Watkins [53] suggested that the exposure of enterocytes to high drug concentrations increase the
relative importance of intestinal metabolism, since CYP3A4 is a low affinity, high capacity enzyme. The high level
of specific CYP P450 becomes of even greater importance when it is recognised that more than 50% of drugs, for
human administration, may be substrates for this enzyme [54].
 Selain itu, Watkins [53] menyarankan bahwa paparan enterosit terhadap konsentrasi obat yang tinggi
meningkatkan metabolisme usus, karena CYP3A4 adalah afinitas rendah, enzim berkapasitas tinggi. Level CYP
P450 spesifik yang tinggi menjadi lebih penting bahkan ketika diakui bahwa lebih dari 50% obat, untuk
administrasi manusia, dapat menjadi substrat untuk enzim ini [54].

Hence the model assumption that metabolism in intestinal cells is not significant may in many circumstances be
untrue.
 Oleh karena itu model asumsi bahwa metabolisme dalam sel-sel usus tidak signifikan dalam banyak keadaan
mungkin tidak benar.

Similarly, intestinal perfusion models based on disappearance kinetics from the intestine segment assume drug
transport into the enterocyte (i.e. through the apical membrane) is rate limiting [55].
 Demikian pula, model perfusi usus berdasarkan hilangnya kinetika dari segmen usus mengasumsikan transportasi
obat ke dalam enterosit (yaitu melalui membran apikal) adalah pembatasan kecepatan [55].

This view is most likely true in the case of passively absorbed compounds but exceptions to this would include
drugs which are actively transported through the baso-lateral membrane. For example, considering the rapid
transport of di- and tripeptides through the oligopeptide carrier, it seems likely that the baso-lateral membrane is
the slowest step in the overall transport from lumen to portal blood [50, 56].
 Pandangan ini kemungkinan besar benar dalam kasus senyawa yang diabsorbsi secara pasif tetapi
pengecualian untuk ini akan mencakup obat yang secara aktif diangkut melalui membran baso-lateral.
Sebagai contoh, mempertimbangkan transportasi cepat di- dan tripeptida melalui pembawa oligopeptida,
nampaknya membran baso-lateral adalah langkah paling lambat dalam transportasi keseluruhan dari
lumen ke darah portal [50, 56].
o Zat terlarut organik meninggalkan epitel usus dan memasuki sirkulasi melalui pembawa yang
difasilitasi khusus yang terletak di membran basolateral.

Similarly if a drug is transported via the intestinal lymphatics (e.g. lipophilic drugs), association with intra-
cellularly produced lipoproteins appears to be the critical rate-limiting step for access to the systemic circulation
[57, 58].
 Demikian pula jika suatu obat diangkut melalui limfatik usus (mis. Obat lipofilik), hubungan dengan
lipoprotein yang diproduksi secara intra-seluler nampaknya merupakan langkah kritis pembatas laju untuk
akses ke sirkulasi sistemik [57, 58].

In general, the intestinal perfusion technique has proved a powerful research tool, despite these shortcomings. Its
primary application has been in the estimation of Peff; the model also lends itself to comparing permeability
differences from one site to another along the intestine, an essential prerequisite for accurately classifying
controlled release products [59].
 Secara umum, teknik perfusi usus telah membuktikan alat penelitian yang kuat, terlepas dari kekurangan
ini. Aplikasi utamanya adalah dalam estimasi Peff; model ini juga cocok untuk membandingkan perbedaan
 permeabilitas dari satu situs ke situs lain di sepanjang usus, prasyarat penting untuk mengklasifikasikan
produk rilis terkontrol secara akurat [59]

Carrier-mediated transport processes can be demonstrated by comparing Peff values at increasing drug
concentration in the perfusate, where a reduction in Peff suggests saturation of carrier-mediated influx [62] and
an increasing Peff values suggests saturation of efflux transporters [63].
 Proses transportasi yang dimediasi pembawa dapat ditunjukkan dengan membandingkan nilai Peff pada
peningkatan konsentrasi obat dalam perfusi, di mana pengurangan Peff menunjukkan saturasi dari
masuknya dari influx dimediasi pembawa [62] dan peningkatan nilai Peff menunjukkan saturasi
transporter eflux [63].
The closed loop technique may in fact offer advantages versus the single-pass technique in the investigation of low
permeability (i.e. high efflux) compounds, given that the entire contents of the solution are in contact with the
lumen for the duration of the experiment and hence disappearance rates (i.e. absorption rates) are higher. It also
facilitates a more precise control of concentrations of drug and/or inhibitor within the intestinal segment [66].
 Teknik loop tertutup mungkin sebenarnya menawarkan keuntungan versus teknik single-pass dalam
penyelidikan senyawa permeabilitas rendah (yaitu efflux tinggi), mengingat bahwa seluruh isi larutan
berada dalam kontak dengan lumen selama durasi percobaan dan karenanya tingkat hilangnya (yaitu
tingkat penyerapan) lebih tinggi.
 Ini juga memfasilitasi kontrol konsentrasi obat dan / atau inhibitor dalam segmen usus yang lebih tepat
[66].
in situ = anastesi, closed = terisolasi, open = dikeluarin

Perfusi usus single-pass untuk membangun permeabilitas usus obat model pada tikus