Hindawi Publishing Corporation

Volume Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti 2015, ID

Artikel 287847, 16 halaman
http://dx.doi.org/10.1155/2015/287847

Mengulas artikel

Fishing for Nature's Hits: Pembentukan Ikan Zebra sebagai Model untuk
Skrining Produk Alami Antidiabetik

Nadia Tabassum, 1 Hongmei Tai, 2 Da-Woon Jung, 1 dan Darren R. Williams 1

1 Laboratorium Target Obat Baru, Sekolah Ilmu Hayati, Institut Sains dan Teknologi Gwangju, Gwangju 500-712, Republik Korea

2 Departemen Endokrinologi, Rumah Sakit Yanji, Jilin 133000, Cina

Korespondensi harus ditujukan kepada Da-Woon Jung; jung@gist.ac.kr dan Darren R. Williams; darren@gist.ac.kr Diterima 31 Agustus 2015;

Diterima 28 Oktober 2015

Editor Akademik: Attila Hunyadi

Hak Cipta © 2015 Nadia Tabassum dkk. Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah theCreativeCommonsAttributionLicense, yang mengizinkan penggunaan,
distribusi, dan reproduksi yang tidak dibatasi dalam media apa pun, asalkan karya asli dikutip dengan benar.

Diabetes mellitus mempengaruhi jutaan orang di seluruh dunia dan berdampak signifikan pada kualitas hidup mereka. Selain itu, penyakit yang mengancam jiwa, seperti infark
miokard, kebutaan, dan gangguan ginjal, meningkatkan angka morbiditas yang terkait dengan diabetes. Berbagai produk alami dari tumbuhan obat telah menunjukkan potensi
sebagai agen antidiabetes dalam sistem skrining berbasis sel. Namun, banyak dari "serangan" potensial ini gagal dalam tes mamalia, karena masalah seperti farmakokinetik yang
buruk dan / atau efek samping toksik. Untuk mengatasi masalah ini, ikan zebra ( Danio rerio) model telah dikembangkan sebagai "jembatan" untuk menyediakan sistem skrining
berbasis hewan yang nyaman secara eksperimental untuk mengidentifikasi kandidat obat yang aktif in vivo. Dalam ulasan ini, kami membahas penerapan ikan zebra untuk
teknologi skrining obat untuk penelitian diabetes. Secara khusus, penemuan senyawa antidiabetes berbasis produk alami menggunakan ikan zebra akan dijelaskan. Sebagai
contoh, baru-baru ini telah dibuktikan bahwa senyawa alami antidiabetes dapat diidentifikasi pada ikan zebra menggunakan fraksinasi yang dipandu aktivitas dari ekstrak
tumbuhan mentah. Selain itu, pengembangan bioprobe glukosa bertanda fluoresen telah memungkinkan skrining modulator homeostasis glukosa berbasis produk alami pada ikan
zebra. Kami berharap pembahasan tentang kemajuan ini dapat menggambarkan nilai dan kesederhanaan dalam menetapkan pengujian berbasis ikan zebra untuk senyawa
antidiabetes di laboratorium berbasis produk alami.

1. Perkenalan
Selama tiga dekade terakhir, prevalensi diabetes mellitus (DM) telah meningkat
secara dramatis baik di negara berkembang maupun negara maju, mempengaruhi
jutaan orang dewasa, dan jumlah ini diperkirakan akan meningkat menjadi sekitar
439 juta orang dewasa pada tahun 2030 [1]. DM adalah sekelompok kelainan
metabolisme heterogen yang terjadi baik karena resistensi tubuh untuk merespons
insulin atau karena produksi insulin yang tidak mencukupi di pankreas, keduanya
menyebabkan peningkatan kadar gula darah (hiperglikemia) [2]. Hiperglikemia
berkepanjangan menyebabkan komplikasi parah dan berpotensi fatal, seperti
penyakit kardiovaskular, nefropati, dan retinopati [3]. Banyak obat antidiabetes
telah dikembangkan, tetapi menyebabkan efek samping dengan tingkat keparahan
yang berbeda-beda, seperti mual, penambahan berat badan, atau masalah
kardiovaskular [4]. Sejak zaman kuno, obat-obatan herbal juga telah digunakan
untuk mengobati diabetes dalam budaya yang berbeda (ulasan contoh adalah [5,
6]). Bioaktif
produk alami yang diisolasi dari obat herbal telah menjadi sumber penting
obat baru untuk berbagai penyakit [7]. Misalnya, antara tahun 1981 dan
2002, hampir setengah dari 877 molekul kecil terapi New Chemical Entity
(NCE) adalah produk alami atau turunan sintetiknya [8]. Selain itu, sekitar
50% dari semua obat baru yang tersedia secara komersial dikembangkan
dari produk alami [7]. Produk alami merupakan titik awal yang menarik
untuk proses penemuan obat, karena banyak yang memiliki kompleksitas
struktural yang tidak dapat dicapai dengan sintesis kimia. Selain itu, analog
sintetis dari produk alami dapat dikembangkan, yang memiliki profil
keamanan dan kemanjuran yang superior [9, 10]. Namun, selama dua
dekade terakhir, penemuan obat berbasis produk alami oleh perusahaan
farmasi sebagian besar telah berkurang. Ini karena produk alami umumnya
tidak cocok untuk protokol skrining obat skala besar, dibandingkan dengan
senyawa sintetis. Biaya dan kesulitan teknis yang terkait dengan isolasi,
pemurnian, dan kontrol kualitas
2 Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti
Produk alami baru juga menghalangi penggunaannya dalam industri
penemuan obat. Namun, penemuan obat berbasis produk alami terus
berkembang di dunia akademis. Contoh terbaru adalah pengembangan obat
antikanker ecteinascidin 743 (dari muncrat laut, Ecteinascidia turbinate) ( Gambar
2) yang memperoleh persetujuan klinis untuk mengobati sarkoma jaringan
lunak metastatik [10]. Oleh karena itu, pengembangan alat tes skrining
kandungan tinggi yang kuat untuk produk alami akan melengkapi keunggulan
yang telah ditetapkan sebagai kandidat untuk penemuan obat.
Selama dua dekade terakhir, kemajuan besar telah dicapai dalam pengembangan teknologi
skrining, seperti skrining throughput tinggi (HTS) [11] dan strategi sintesis kimia, seperti sintesis
berorientasi keanekaragaman [12]. Namun, jumlah senyawa berlisensi yang diperoleh terhadap
target obat baru sangat rendah (hanya dua hingga tiga senyawa per tahun). Selain itu, satu
perusahaan farmasi dapat membelanjakan uangnya m 100–500 juta per tahun untuk menyelidiki
30–50 target [13] dan senyawa baru biasanya membutuhkan 12 tahun untuk memasuki pasar obat
[14]. Ada banyak alasan untuk menjelaskan jumlah obat baru yang rendah ini, seperti evaluasi
keamanan yang semakin ketat dan efisiensi yang berkurang dari penemuan berbasis target (dikenal
sebagai Hukum Eroom) [12]. Hambatan utama lainnya dalam proses penemuan obat adalah
kegagalan senyawa kandidat yang menjanjikan dalam uji hewan, karena masalah yang berkaitan
dengan absorpsi, kelarutan, stabilitas metabolik, distribusi, dan / atau toksisitas. Kegagalan ini juga
muncul karena sistem skrining berbasis sel tidak dapat merekapitulasi interaksi fisiologis yang
penting dalam evolusi beberapa gangguan, seperti penyakit metabolik [15]. Alasan penting lainnya
untuk penolakan obat kandidat adalah bahwa metode penemuan bergantung terutama pada
keberadaan target yang dapat diidentifikasi dan "dapat disaring" [16]. Penurunan tahap akhir obat
dalam pengembangan ini sangat mahal dan memakan waktu lama bagi perusahaan farmasi.
Kelemahan dari penemuan obat yang digerakkan oleh target ini telah mendorong para peneliti untuk
menyaring senyawa, termasuk produk alami, dalam sistem hewan secara keseluruhan untuk
mengidentifikasi target baru dan pada akhirnya obat yang berhasil. Pada bagian selanjutnya dari
ulasan ini, kami membandingkan sistem penyaringan konvensional dengan pendekatan berbasis
hewan dan memperkenalkan ikan zebra sebagai sistem model yang ideal untuk Kelemahan dari
penemuan obat yang digerakkan oleh target ini telah mendorong para peneliti untuk menyaring
senyawa, termasuk produk alami, dalam sistem hewan secara keseluruhan untuk mengidentifikasi
target baru dan pada akhirnya obat yang berhasil. Pada bagian selanjutnya dari ulasan ini, kami
membandingkan sistem penyaringan konvensional dengan pendekatan berbasis hewan dan
memperkenalkan ikan zebra sebagai sistem model yang ideal untuk Kelemahan dari penemuan obat
yang digerakkan oleh target ini telah mendorong para peneliti untuk menyaring senyawa, termasuk
produk alami, dalam sistem hewan secara keseluruhan untuk mengidentifikasi target baru dan pada
akhirnya obat yang berhasil. Pada bagian selanjutnya dari ulasan ini, kami membandingkan sistem
penyaringan konvensional dengan pendekatan berbasis hewan dan memperkenalkan ikan zebra
sebagai sistem model yang ideal untuk in vivo aplikasi penemuan obat.
2. Pengembangan Sistem Skrining Berbasis Hewan
untuk Penemuan Obat
Si tikus ( Mus musculus) adalah model hewan yang paling banyak
digunakan dalam penelitian biomedis dan dapat dianggap sebagai
organisme model "kuda pekerja" [28]. Ia memiliki banyak keuntungan untuk
tujuan penelitian, seperti berbagi 90% homologi genom dengan manusia, di
samping banyak kesamaan genetik, fisiologis, dan anatomi organ.
Keuntungan penting lainnya adalah bahwa manipulasi genetik pada tikus
dapat digunakan untuk memodelkan aksi obat potensial, melalui
penghancuran gen target kandidat. Dengan demikian, tikus adalah model
yang sangat berharga untuk penemuan target baru untuk intervensi terapi
[29]. Namun, dari perspektif skrining obat, tikus memiliki kelemahan yang
signifikan
membatasi penggunaannya di bidang farmasi. Masalah utama adalah biaya
yang dikeluarkan untuk memelihara koloni tikus besar untuk skrining
majemuk. Ada juga masalah biologis. Misalnya, hewan transgenik yang
digunakan untuk memodelkan penyakit mungkin tidak cocok untuk skrining,
karena potensi inisiasi mekanisme ekspresi gen kompensasi selama
perkembangan. Ini bisa menjadi masalah untuk menemukan senyawa yang
seharusnya aktif pada manusia [16]. Akibatnya, platform berbasis hewan
alternatif untuk skrining telah diselidiki. Dua contoh yang menonjol adalah
model invertebrata: lalat buah, Drosophilamelanogaster,
dan cacing gelang, Caenorhabditis elegans [ 30, 31]. Meskipun menawarkan
keuntungan tertentu, seperti penerapan HTS dan pelestarian beberapa
konteks fisiologis yang mirip dengan manusia, model invertebrata ini belum
banyak digunakan untuk skrining obat. Ini karena invertebrata ini telah
sangat mengurangi homologi genetik dengan manusia dibandingkan
dengan tikus. Selain itu, beberapa sistem organ utama yang ada pada
manusia, seperti sistem pernapasan dan peredaran darah intravaskular,
tidak terdapat pada invertebrata [32]. Masalah lainnya adalah kutikula tebal,
yang mempengaruhi penetrasi obat dan mempersulit interpretasi data
skrining (ini sangat relevan untuk C. elegans)
[33, 34]. Dengan demikian, potensi klinis senyawa baru yang ditemukan pada
invertebrata mungkin tidak cukup untuk membenarkan penyaringan dalam sistem
hewan ini.
3. Ikan Zebra: Berenang di Tempatnya di
Bidang Penemuan Obat
Keterbatasan yang dijelaskan di atas pada model mamalia dan invertebrata
untuk skrining senyawa memberikan dorongan untuk mengembangkan
sistem model hewan alternatif untuk mempelajari respon obat. Akibatnya,
ikan zebra ( Danio rerio) telah menjadi terkenal. Ikan zebra adalah teleost air
tawar kecil yang dikembangkan sebagai model hewan pada 1980-an untuk
studi biologi perkembangan dan embriogenesis [36, 37]. Serangkaian studi
penting, yang diterbitkan bersama dalam satu terbitan jurnal, Pengembangan,
( 1996) membantu membangun model hewan ini untuk mengkarakterisasi
jalur perkembangan vertebrata. Studi lebih lanjut dan produksi teknik
penargetan gen, seperti morpholinos anitisense dan generasi ikan
transgenik, memungkinkan ikan zebra menjadi model yang menarik untuk
mempelajari penyakit manusia [38, 39]. Secara kritis, keuntungan logistik
menggunakan ikan zebra juga telah meyakinkan komunitas peneliti untuk
mengadopsi model hewan ini. Keuntungan ini didaftar sebagai berikut:
(1) Berbeda dengan hewan pengerat, embrio ikan zebra secara optik
perkembangan transparan dan ikan zebra bersifat eksternal, yang
memungkinkan pengamatan langsung dari sistem organ embrio di
bawah berbagai kondisi laboratorium [40]. Untuk ukurannya, embrio
ikan zebra tergolong besar sehingga membantu penanganannya di
laboratorium.
(2) Perkembangan embrio sangat cepat dibandingkan dengan
mamalia. Rencana seluruh tubuh ditetapkan dalam 24 jam setelah
pembuahan (hpf) dan sebagian besar sistem organ utama, seperti
saluran pencernaan dan sistem kardiovaskular, dikembangkan 2
hari setelahnya.
Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti 3

Tabel 1: Perbandingan model hewan yang berbeda untuk skrining senyawa antidiabetik.

Mamalia besar (misalnya anjing dan

Invertebrata Ikan zebra Hewan pengerat
kelinci)

Mengembangkan diabetes mellitus

Ulat sutera bisa berkembang
diabetes mellitus bila diberi makan makanan
kaya glukosa [17].
Mereka dapat menyebabkan DM Mengembangkan diabetes mellitus
dalam beberapa hari dengan bahan kimia
perendaman sederhana di tempat tinggi dengan membuang pankreas mereka
injeksi atau setelah beberapa minggu, melalui
air glukosa [18]. [20].
makan makanan tinggi lemak [19].

Penyaringan utama Penyaringan throughput tinggi untuk Penyaringan throughput tinggi untuk Penyaringan throughput tinggi
obat antidiabetik dimungkinkan [21]. senyawa antidiabetik adalah senyawa antidiabetes tidak untuk senyawa antidiabetes
mungkin (misalnya, [22]). bisa jadi. itu tidak mungkin.

Mereka membutuhkan lebih sedikit waktu untuk

Membutuhkan lebih sedikit waktu untuk Memakan waktu karena mungkin diperlukan Mereka membutuhkan beberapa hari untuk
penyaringan dan lebih sedikit
mengembangkan diabetes mellitus dibandingkan beberapa hari untuk mengembangkan diabetes mengembangkan diabetes mellitus
senyawa uji relatif terhadap
dengan beberapa model mamalia. mellitus melalui makan [23]. [23].
model mamalia.

Murah untuk digunakan Mahal dan sulit ditangani

Murah dan mudah Mahal dan
model invertebrata dan persyaratan karena ukurannya yang relatif besar
menangani dibandingkan dengan masalah logistik / penanganan
logistik yang lebih sedikit (dibandingkan dengan ikan atau
model mamalia. karena ukurannya yang besar.
dibandingkan dengan mamalia. invertebrata).

Beberapa masalah etika tergantung

Mengurangi masalah etika Baik ikan zebra dewasa maupun larva
di negara penggunaan (mis., dijamin Masalah etika sebagai model
dibandingkan dengan mamalia cocok untuk penyaringan
perumahan yang dibutuhkan di Inggris atau eksperimental.
model. studi.
Amerika Serikat) [24].

Pencitraan fluoresensi
Mouse setuju untuk
Setuju untuk seluruh organisme mungkin untuk
berbasis pelacak fluoresensi Pencitraan berbasis fluoresen
pencitraan berbasis fluoresensi analisis penyerapan glukosa;
pencitraan insulin seluruh tubuh homeostasis glukosa tidak mungkin
dan kuantifikasi pengambilan glukosa gen reporter terkait diabetes
sensitivitas dan glukosa hati dilakukan.
[25]. skrining berdasarkan juga
produksi [27].
mungkin [26].

pemupukan (dpf). Embriogenesis sempurna (penetasan) terjadi
sebesar 72 hpf. Oleh karena itu, beberapa proses biologis yang
berbeda dan / atau mekanisme penyakit dapat dianalisis selama tahap
perkembangan awal ini (Gambar 1) [41].
(3) Ukuran kecil dari embrio ikan zebra (5mm pada
7 dpf), biaya pemeliharaan yang relatif rendah dibandingkan dengan hewan
pengerat, dan kesuburan yang tinggi (seekor betina tunggal dapat bertelur hingga
200 telur per minggu) memungkinkan penyaringan di 96- atau 384-well microtiter
plate [42, 43].
(4) Sekarang ditetapkan bahwa obat-obatan terhadap organ tertentu
atau jaringan yang berbeda atau tidak ada pada manusia juga dapat
ditemukan atau diuji pada ikan zebra. Misalnya, obat, rosuvastatin (Gambar
2), yang digunakan untuk mengobati kanker prostat, diidentifikasi dengan
skrining kimiawi ikan zebra meskipun ikan zebra jantan tidak memiliki kelenjar
prostat yang berkembang, hanya sel-sel yang menyerupai prostat [44].
dalam konteks penelitian diabetes, ditunjukkan pada Tabel 1. Perlu dicatat juga
bahwa model ikan teleost kecil terkemuka lainnya telah dikembangkan:
medaka (ikan beras Jepang; Oryzias latipes) [ 47, 48]. Medaka memiliki
keunggulan tertentu untuk penggunaan laboratorium dibandingkan ikan zebra,
seperti genom yang lebih kecil dan waktu perkembangan yang lebih cepat.
Namun, ikan zebra adalah model ikan yang lebih mapan dan telah terbukti
memiliki beberapa perbedaan fisiologis yang signifikan dibandingkan dengan
medaka, seperti regenerasi jantung yang lebih besar setelah cedera [49].
Potensi ikan zebra untuk pendekatan skrining obat terkait diabetes telah
direalisasikan selama dekade terakhir, dengan berbagai strategi yang
dikembangkan, seperti penilaian visual pengambilan glukosa atau analisis
kuantitatif homeostasis glukosa menggunakan format lempeng mikro.
Perkembangan ini dan aplikasinya untuk skrining berbasis produk alami dari
senyawa antidiabetes dijelaskan pada bagian selanjutnya dari tinjauan ini.

(5) Berbeda dengan model serangga untuk skrining obat,
ikan zebra adalah vertebrata dan memiliki homologi genetik yang lebih
tinggi dengan manusia (sekitar 80%, dibandingkan dengan lalat buah, Drosophilamelanogaster
( 60%), dan cacing gelang, Caenorhabditis elegans ( ∼ 36%)) [13, 45,
46].
Semua karakteristik yang tercantum di atas membuat ikan zebra menjadi sistem
model yang ideal untuk upaya penemuan obat (Gambar 1). Perbandingan
keuntungan pendekatan pengujian obat berbasis ikan zebra dalam hubungannya
dengan invertebrata dan mamalia,
3.1. Pengembangan Skrining Berbasis Ikan Zebra untuk Antidia-
betes Produk Alami. Menariknya, penggunaan pertama larva ikan zebra untuk
menyaring produk alami dan formodulator senyawa sintetik dari fisiologi sel
telah dilaporkan lebih dari lima puluh tahun yang lalu [50]. Anehnya, penelitian
∼ ini diabaikan hingga tahun 1990-an. Dalam dekade ini, sintesis kombinatorial
dari perpustakaan molekul kecil dikembangkan, memungkinkan produksi
perpustakaan majemuk yang terdiri dari ribuan molekul kecil [51]. Kemajuan ini
memerlukan persyaratan sistem penyaringan yang cepat dan efisien untuk
penemuan senyawa bioaktif. Seperti yang dijelaskan di bagian sebelumnya
dari ulasan ini,
4 Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti

Mata
Otolith (telinga)
Hati
Jantung
Otot
Caudal
hematopoietik
Usus
wilayah
sistem
Kloaka Ventral
sirip
Ekor

sirip

3 cm

(Sebuah) (b)

(1) Utama (2) Target obat (5) Preklinis

pemutaran ke identifikasi (3) Toksikologi (4) Menilai investigasi di Novel
dan mekanistik analisis "Di luar target" penyakit
mengidentifikasi kandidat obat
Senyawa "hit" studi efek model

(c)

Gambar 1: (a) Ikan zebra dewasa. (b) Perkembangan embrio ikan zebra sangat cepat, dengan sistem organ utama, seperti saraf, kardiovaskular, dan jaringan pencernaan,
terbentuk dalam 36 jam pembuahan [35] (gambar diadaptasi dari Wikimedia dan digunakan di bawah Creative Commons Attribution-Share Alike 4.0 International license). (c)
Model ikan zebra dapat memfasilitasi banyak langkah dalam proses penemuan obat.

komunitas riset farmasi menyadari bahwa sistem skrining berbasis hewan 3.2. Ikan Zebra Dapat Digunakan untuk Memodelkan Sel Beta Pankreas Neo-

dengan potensi skrining / validasi throughput yang tinggi dapat sangat
membantu penemuan obat. Akibatnya, model ikan zebra dikembangkan
untuk skrining senyawa berdasarkan banyak "pembacaan" eksperimental
seperti fenotipe perkembangan [24], modulasi pigmentasi [52-54], modulasi
regenerasi jaringan [55], dan sensitisasi radiasi [56]. Perkembangan
skrining senyawa antidiabetes berbasis ikan zebra didasarkan pada
penemuan kemiripan yang mencolok dalam homeostasis glukosa dengan
mamalia. Kesamaan ini, yang membenarkan penggunaan ikan zebra untuk
menyaring senyawa antidiabetes, diuraikan di bawah ini.
asal. Diabetes tipe I ditandai dengan penghancuran sel beta penghasil
insulin di pulau pankreas, menghasilkan defisiensi insulin dan hiperglikemia
yang dihasilkan. Sekresi insulin dari sel beta diinduksi oleh peningkatan
kadar glukosa darah setelah waktu makan (postprandial). Hiperglikemia
yang tidak diatur menyebabkan efek merusak pada banyak organ dan
jaringan, seperti jantung, ginjal, dan retina [2]. Menariknya, dalam kondisi
fisiologis tertentu, seperti peningkatan kebutuhan metabolik, • massa sel
dapat meningkat melalui tiga mekanisme: (i) diferensiasi sel prekursor
residen, (ii) transdiferensiasi jenis sel pankreas lainnya, dan (iii)

• proliferasi sel [57]. Jadi, mendorong • neogenesis sel

Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti 5

HAI
HO
HO BERSAMA 2 H.
HAI OHH
CH 3 HAI
N H. 3 C N N CH 2 OH
HAI HO HAI HO H.
HAI HAI
ONN OH OH H.
HAI HAI
OH CH 3 HO HAI
OH H.
OH

Ampkinone Kafein Asam klorogenat cpp532

OH HO
F
HAI CH 3 NH O
S HAI
CH 3 HO OH HO
HAI CH 3 H. HO N CH 3 HAI
H. H. 3 C N SS HAI S
N C
F N HAI HAI
CH 33 S
H. H. 3 C N
F H.
HAI Ph
HAI N
HAI
HAI OH

DAPT Deksametason Disulfiram Ecteinascidin 743

HN O
OH O OH HO
HO N+
HAI OH
HO HAI HAI HAI HAI
OH HO
CH 3 NN HAI
HO
N OHO N N
HAI
N
HAI N

NH 2

Emodin 5 • - N-ethylcarboxa- Fraxidin GB2-Cy3

midoadenosine

HAI

OO N
HAI S
HAI OH N
NH OH H
H.
HN N HO N HO
N HAI
Cl
H. H.
N HO HO
H.

Glipizide Isoprenalin Asam maslinic PK 11195

HAI
HAI NH 2
N HAI TIDAK 2
H.
HN N
HAI
CH 3 CH 3 CH HAI
3
N N NH NH N H. 3 C
OH
HN NN N N NH 2
HN
HO OH CH 3
H. H.
HAI OH
HO
Cl

PP-II-A03 Metformin 2-NBDG Asam retinoat

Cl
HAI
HAI F
N BEGITU
N+
NN N
Cl N N
N HAI - N

HO HAI NN
HAI
Cl HAI OH OH

Ro5-4864 Rosuvastatin Trigonelin Trazodone

Gambar 2: Struktur kimia senyawa yang dibahas dalam ulasan ini.

6 Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti
pada pasien diabetes tipe 1 bisa menjadi strategi terapeutik yang menjanjikan.
Selain itu, mendorong • transdiferensiasi sel dari jenis sel lain dapat
menyediakan sumber sel untuk transplantasi ke pasien diabetes [58, 59].
Secara tradisional, mouse telah digunakan sebagai model untuk mempelajari
restorasi • cellmass. Namun, penelitian terbaru pada ikan zebra telah menunjukkan
potensinya sebagai model mamalia
• regenerasi sel. Selain itu, perkembangan dan regenerasi pankreas dapat
dipelajari pada embrio ikan zebra transparan [60].
Meskipun ikan tropis ini berukuran kecil, struktur pankreasnya sangat
mirip dengan mamalia dan juga terdiri dari dua jenis jaringan kelenjar:
eksokrin dan endokrin. Banyak gen perkembangan pankreas dan hormon
yang mengatur metabolisme glukosa pada ikan zebra, seperti insulin dan
glukagon, mirip dengan mamalia [61, 62]. Misalnya, penanda awal
perkembangan pankreas yang khas, pdx-1 ( homeobox-1 pankreas dan
duodenum), dikonservasi antara mamalia dan ikan zebra [63]. Baik embrio
ikan zebra dan mamalia memiliki hubungan regulasi positif antara keduanya landak
pada ikan zebra. Di antaranya, asam retinoat (metabolit vitamin A) dan
dan pdx-1 dalam spesifikasi sel prekursor pankreas [64]. Dalam sebuah
penelitian terkait, ditunjukkan bahwa gangguan gen pankreas pada ikan
zebra menghasilkan fenotipe yang sangat mirip dengan penyakit manusia
yang setara. Misalnya mutasi protein nuklir
vhnf1 (tcf2) berhubungan dengan diabetes onset kematangan anak muda,
tipe V (MODY5). Vhnf1 Embrio ikan zebra mutan menunjukkan cacat
perkembangan di pankreas dan hati, bersama dengan pembentukan kista
ginjal, yang juga ditemukan pada pasien MODY5 [65, 66]. Menariknya,
konsentrasi glukosa darah ikan zebra dewasa mendekati tingkat fisiologis
manusia (50-75mg / dL dan 100mg / dL, resp.) [3, 67].
Kesamaan antara mamalia dan sel beta ikan zebra memberikan dorongan
penelitian untuk mengembangkan sistem skrining senyawa • neogenesis sel.
Misalnya ikan transgenik yang mengekspresikan tanda fluorescent nfsB ( reduktase
dihidropteri- dine; diekspresikan dalam pankreas embrionik) yang dihasilkan
untuk memungkinkan visualisasi ablasi sel pankreas yang bergantung pada
obat. Potensi sistem ini untuk skrining senyawa berbasis gambar divalidasi
menggunakan prodrug, metronidazole, yang dikenal sebagai sitotoksik untuk
sel beta [68]. Baru-baru ini, Rovira et al. menggunakan model ikan zebra
transgenik untuk melakukan skrining dari Perpustakaan Obat Johns Hopkins
(terdiri dari sekitar 1500 FDA dan obat-obatan yang disetujui asing) untuk
senyawa yang mempromosikan
Pembedaan sel.
Penyaringan throughput moderat mereka • ystem menggunakan pelat multiwell
untuk memungkinkan visualisasi sel pankreas pada larva hidup dan mengarah ke
identifikasi tiga obat yang disetujui FDA yang menginduksi diferensiasi sel yang
signifikan: (1) disulfiram, (2) DAPT (N- [N- (3,5- • difluorophenacetyl) -L-alanyl] -
S-phenylglycine t-butyl ester), dan (3) produk alami yang diturunkan dari jamur,
asam mycophenolic (Gambar 2) [69]. Dalam studi terkait, Andersson et al.
menggunakan platform penyaringan ikan zebra untuk menemukan senyawa yang
menyebabkannya
regen sel-
erasi [70]. Perpustakaan sekitar 7000 • senyawa (termasuk obat-obatan
yang disetujui FDA dan senyawa alami) disaring dalam model ikan zebra
transgenik yang menunjukkan ekspresi spesifik sel nitroreduktase [Tg (ins:
CFP-NTR) •
],
yang mengubah metronidazole (MTZ) menjadi produk sitotoksik yang
secara khusus membunuh sel beta. Setelah menghilangkan senyawa yang
diuji, larva menunjukkan rekonstitusi massa sel beta, yang dapat diukur
dengan mikroskop. Peningkat regenerasi sel yang paling menjanjikan
adalah NECA (5 •- N-ethylcarbox • Middleoadenosine, sebuah analog
adenosine). NECA selanjutnya diuji pada model tikus diabetes, yang
divalidasi kemampuannya untuk menginduksi regenerasi sel pada mamalia.
•
Sampai saat ini, penemuan obat untuk senyawa yang menginduksi
• proliferasi sel tidak menarik perhatian yang signifikan dari perusahaan farmasi,
karena jalur sinyal yang mengatur proses ini kurang dipahami. Baru-baru ini,
model skrining berbasis ikan zebra telah mendemonstrasikan kegunaannya
untuk skrining untuk mengidentifikasi penyebab proliferasi sel beta. Tsuji dkk.
mengembangkan sebuah in vivo pendekatan pencitraan yang menggunakan
indikator siklus sel berbasis ubiquitylation fluorescent. 20 molekul kecil di antara
883 diidentifikasi memiliki kemampuan untuk menginduksi proliferasi sel beta
antidepresan, trazodon (Gambar 2), telah terbukti meningkatkan proliferasi sel
beta mamalia yang menunjukkan bahwa skrining ikan zebra dapat mendeteksi
molekul bioaktif yang juga berfungsi pada rekan-rekan mamalia mereka
(Gambar 3) [71, 72]. Sebagai catatan, juga telah ditunjukkan bahwa berbagai
komponen aktif dari kopi (kafein, trigonelin, dan asam klorogenat) juga dapat
menginduksi regenerasi sel beta pada ikan zebra yang diobati dengan aloksan
[73]. Dalam studi ini, sel beta divisualisasikan menggunakan ikan transgenik Ins:
GFP atau hanya dengan merawat ikan dengan pelacak glukosa bertanda
fluoresen.
Menariknya, sekarang dimungkinkan untuk memodelkan efek resistensi
insulin pada jumlah sel beta menggunakan sistem ikan zebra. Ikan transgenik
dihasilkan dengan versi negatif-dominan yang diekspresikan berlebihan dari
reseptor faktor pertumbuhan seperti insulin [6]. Ikan muda menunjukkan toleransi
glukosa yang normal, karena merespon resistensi insulin dengan menginduksi
proliferasi sel beta. Namun, pada ikan yang lebih tua, respons ini menjadi kurang
efektif dan jumlah sel beta menurun, yang menghasilkan resistensi insulin. Dengan
demikian, dapat dibayangkan bahwa kandidat obat antidiabetik yang menargetkan
resistensi insulin dapat diuji dengan menggunakan ikan zebra transgenik ini.
3.3. Ikan Zebra sebagai Hewan Model untuk Analisis Kuantitatif
dari Homeostasis Glukosa. Untuk penelitian penemuan obat diabetes yang efektif
menggunakan ikan zebra, sebaiknya mempelajari regulasi glukosa darah dalam
model ini dan menghubungkan hubungannya dengan sistem metabolisme
manusia. Meskipun ukuran kecil embrio ikan zebra menghalangi pengambilan
sampel darah untuk mengukur kadar glukosa, hal ini dimungkinkan pada ikan
zebra dewasa. Sebagai contoh, metode untuk pengambilan sampel mikro dari
seluruh darah dan plasma telah dikembangkan untuk mengukur glukosa darah
dalam puasa dan refed ikan zebra [67]. Untuk mengukur kadar glukosa pada
embrio ikan zebra, yang menjadi cocok untuk skrining throughput yang tinggi [74,
75], Jurczyk et al. mengembangkan fluoresen, uji enzim ganda untuk mendeteksi
glukosa bebas dalam embrio [76]. Teknologi ini menunjukkan bahwa pulau
pankreas ikan zebra menghasilkan sistem glukosa pengatur pada tahap
perkembangan awal (48 hpf).
Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti 7

Pengobatan obat MTZ [79]. 96 hpf larva terkena cAMP dan dexametha- sone untuk mengaktifkan
(ablasi) (regenerasi) Analisis
zebrafish phosphoenolpyruvate carboxyki- nase (zfPEPCK), yang mengatur
80 128 ( hpf) kadar glukosa darah melalui glukoneogenesis di hati dan ginjal mamalia [80,
Tg (dalam: H 2 BGFP) Tg (dalam: CFP-NTR) 50
81]. Obat antidiabetes terkenal, seperti metformin, menurunkan ekspresi
(Sebuah) PEPCK dan enzim ini digunakan sebagai pembacaan model kultur sel
mamalia untuk memeriksa kemanjuran senyawa antidiabetik [26, 82].
Glipizide, metformin, dan rosiglitazone semuanya berhasil menghambat
aktivasi cAMP / dexamethasone dari ekspresi zfPEPCK, bahkan setelah
pengobatan dengan dosis yang relatif kecil, seperti 1 • M untuk rosiglitazone.
Temuan ini signifikan untuk penemuan obat antidiabetes berbasis ikan zebra,
karena menunjukkan bahwa obat yang memicu hipoglikemia, yang berfungsi
melalui penghambatan PEPCK, dapat dideteksi dengan menggunakan larva
ikan zebra, yang sesuai untuk skrining format plat 96 sumur [79]. Setelah
penelitian ini yang didasarkan pada pengukuran ekspresi zfPEPCK melalui
RT-PCR kuantitatif, Gut et al. merekayasa ikan zebra transgenik dengan
reporter PEPCK bercahaya luciferase untuk memanfaatkan larva dalam
platform aHTS [22]. Untuk memvalidasi sistem skrining mereka, dua
modulator yang diketahui dari kadar glukosa darah pada manusia diuji:
(b) metformin, yang menginduksi hipoglikemia, dan isoprenalin, yang
menginduksi hiperglikemia (Gambar 2) [83-85]. Isoprenalin dan metformin
16
∗ secara kuat menginduksi atau mengurangi ekspresi reporter PEPCK pada
14 ∗
larva ikan zebra. Kadar glukosa pada larva juga berkurang dengan metformin
12
dan penurunan ini dapat diatasi dengan pengobatan dengan isoprenalin.
10 2400 senyawa disaring (kumpulan senyawa alami, obat-obatan yang
Jumlah sel beta

8 disetujui FDA, dan bahan kimia bioaktif lainnya). 60 senyawa diidentifikasi

6 sebagai modulator ekspresi PEPCK. Menariknya, dua senyawa hit yang
paling menonjol, ligan translocator protein (TSPO) PK 11195 dan Ro5-4864,
4
menurunkan kadar glukosa dalam larva sementara menghasilkan
2
peningkatan ekspresi PEPCK. Dalam model mamalia obesitas yang diinduksi
0
diet, senyawa ini mengurangi intoleransi kadar glukosa darah dan
DMSO Asam retinoat Trazodone Prednisolon
menghambat perkembangan hepatosteatosis (penyakit hati berlemak). Jadi,
(c)
senyawa yang memodulasi ekspresi PEPCK pada larva ikan zebra
Gambar 3: (a) Diagram skematis untuk penyaringan senyawa berbasis ikan zebra yang merupakan kandidat obat untuk mengobati penyakit metabolik, seperti
mendorong regenerasi sel beta. Ikan transgenik yang mengekspresikan GFP dalam sel diabetes, pada mamalia.
beta (dalam: H2BGFP) dikawinkan dengan ikan transgenik yang mengekspresikan
nitroreduktase secara spesifik dalam sel beta Tg (dalam: CFP-NTR). Sel beta dihilangkan
menggunakan pengobatan MTZ dari 50 menjadi 80 hpf. Pada 80 hpf, Tg (dalam:
H2BGFP); Larva Tg (dalam: CFP-NTR) diberi perlakuan dengan senyawa selama 48 jam.
Jumlah sel beta Tg (dalam: H2BGFP) + dihitung pada 128 hpf. (b) Citra mikroskopis sel
Tg (dalam: H2BGFP) + beta pada larva 128 hpf yang diberi perlakuan 1 • M asam retinoat,
10 • M trazodone, atau 10 • M prednisolon dilarutkan dalam 1% DMSO. (c) Kuantifikasi
regenerasi sel beta per larva pada 128 hpf, setelah perawatan dengan senyawa hit dari Pendekatan ideal untuk mendeteksi senyawa yang mempengaruhi homeostasis
80 sampai 128 hpf. Bilah kesalahan mewakili SEM. ∗ glukosa pada ikan zebra adalah dengan secara langsung memvisualisasikan fluks
glukosa in vivo. Bioprobe glukosa dengan tanda fluoresen telah digunakan untuk

•< memvisualisasikan pengambilan glukosa dalam sel (ditinjau dalam [86]). Lee dkk.

0,05 dibandingkan dengan kontrol yang ditangani DMSO. Gambar direproduksi dari [71], di
bawah lisensi Creative Commons Attribution (CC BY).
menggunakan probe ini untuk mengembangkan sistem skrining untuk mengukur fluks
glukosa pada larva ikan zebra [26]. Sistem penyaringan ini relatif sederhana, karena ini
berlaku untuk ikan zebra tipe liar (ikan transgenik dapat dikenakan kontrol karantina)
dan fluks glukosa diukur menggunakan probe yang tersedia secara komersial, 2- (N-
(7-nitrobenz-2- oxa-

ikan zebra pdx-1 ekspresi gen selama embriogenesis menghasilkan hipoplasia pulau
kecil dan hiperglikemia persisten. Hasil ini berkorelasi dengan laporan studi
sebelumnya yang mengalami gangguan
pdx-1 aktivitas menyebabkan perkembangan pankreas yang rusak pada manusia [77, 78].
Mekanisme pengaturan yang mengontrol kadar glukosa darah pada ikan
zebra juga memiliki banyak kesamaan dengan mamalia. Elo dkk. menguji tiga
obat antidiabetes yang disetujui FDA: glipizide, metformin, dan rosiglitazone
(Gambar 2) pada ikan zebra
1,3-diazol-4-yl) amino) -2-deoxyglucose (2-NBDG; Gambar 2). Fluks
glukosa pada larva ikan zebra 72 hpf dapat dinilai dengan analisis
mikroskop fluoresen dari mata ikan zebra, yang mengekspresikan protein
pengangkut glukosa (GLUT) yang relatif tinggi [87]. Sistem penyaringan
mereka divalidasi menggunakan resin pencahar produk alami, emodin
(6-metil-
1,3,8-trihydroxyanthraquinone; Gambar 2), yang merupakan penginduksi yang diketahui
dari pengambilan glukosa [88]. Senyawa antidiabetes yang menginduksi pengambilan
glukosa juga bisa diukur dengan lisis
8 Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti

Fraksinasi terpandu aktivitas untuk senyawa antidiabetes menggunakan ikan zebra

100

Etil NAIK
Metanol UP asetat UP hexane
80
Tidak diobati pecahan pecahan pecahan

Intensitas fluoresensi
60

40

20

0
Tidak diobati Metanol Etil Hexane
asetat
Pecahan diuji
(Sebuah)

Emodin yang tidak diobati UP2.2 UP3.11.1 UP3.5.3 UP4.2.3 UP5.2.1 UP3.2 UP3.3 UP5.2.3

140
120
Intensitas fluoresensi

100
80
60
40
20
0
Tidak diobati Emodin UP2.2 UP3.11.1 UP3.5.3 UP4.2.3 UP5.2.1 UP3.2 UP3.3 UP5.2.3
(asam maslinic) (fraxidin)
Perawatan majemuk

(b)

Gambar 4: Fraksinasi yang dipandu aktivitas cangkang dalam pohon kastanye Jepang, Castanea crenata, menggunakan probe fluorescent 2- NBDG pada larva ikan zebra. (a) Fraksi metanol
menghasilkan serapan glukosa yang signifikan pada ikan zebra dibandingkan dengan fraksi heksana atau etil asetat. Garis merah pada grafik menunjukkan ambang batas untuk memilih obat
"hit" (yaitu, nilai serapan 2-NBDG untuk mata ikan zebra harus menunjukkan ≥ 100% meningkat dibandingkan dengan larva yang tidak diberi perlakuan). (b) Fraksi metanol dimurnikan untuk
mengisolasi delapan senyawa: UP2.2 (scopoletin 4), UP3.11.1 (asam maslinat), UP3.5.3 (fragransin), UP4.2.3 (asam 4-ketopentanoic), UP5.2.1 ( 4-hydroxy-5-methoxycinnamic acid), UP3.2
(fraxidin), UP3.3 (6,7,8-trimethoxycoumarin), dan UP5.2.3 (3,4,5-trimethoxycinnamic acid). Senyawa ini diuji untuk pengambilan glukosa di ikan zebra (10 • g / mL dosis selama 1 jam) dan
dibandingkan dengan emodin (penginduksi pengambilan glukosa yang diketahui). Fraxidin dan asam maslinic diidentifikasi sebagai senyawa hit untuk menginduksi pengambilan glukosa
(gambar dimodifikasi dari [26]).

larva dan mengukur fluoresensi 2-NBDG di pembaca pelat mikro.
Menariknya, penerapan sistem penyaringan ini untuk penelitian berbasis
produk alami ditunjukkan dengan menggunakan fraksinasi yang dipandu
aktivitas senyawa dari cangkang dalam dari pohon kastanye Jepang ( Cas-
tanea crenata) ( ditunjukkan pada Gambar 4). Senyawa berkinerja terkuat
diidentifikasi sebagai fraxidin, yang sebelumnya tidak memiliki aktivitas
antidiabetik yang dilaporkan. Senyawa ini
dikonfirmasi sebagai insulinmimetik baru dengan aktivitas pada mamalia melalui
pengujian dalam sistem adiposit mamalia. Senyawa antidiabetes yang diketahui,
asam maslinat (Gambar 2) [89], juga diidentifikasi dalam penelitian ini. Selain itu,
pemeriksaan koleksi produk alami berbahan dasar saponin yang diisolasi dari
ginseng Korea ( Panax ginseng) identifikasi yang diizinkan dari senyawa
antidiabetes baru, disebut cpp532 (Gambar 2). Memvisualisasikan homeostasis
glukosa melalui pengambilan probe fluoresen
Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti 9

Skrining berbasis ikan zebra untuk senyawa antidiabetes menggunakan probe GB2-Cy3

90

80 ∗
70

60

Intensitas fluoresensi
GB2 sendiri
50 ∗
40

30

20

10

0
Kontrol Ampkinone Zona Rosiglita
1% DMSO 10 • M 10 • g / mL

Perawatan obat
Ampkinone + GB2

(b)

20
19 ∗
18 ∗
17
Intensitas fluoresensi
16
15
14

Rosiglitazone + GB2 13
12
11
10
Kontrol Ampkinone Zona Rosiglita
1% DMSO 10 • M 10 • g / mL

Perawatan obat

(Sebuah) (c)

Gambar 5: Probe fluorescent GB2-Cy3 dapat digunakan untuk menguji kandidat senyawa antidiabetes pada ikan zebra. (a) Senyawa antidiabetes yang diketahui ampkinone (10 • M) dan
rosiglitazone (10 • g / mL) meningkatkan serapan probe pada larva ikan zebra. Dari perspektif penyaringan, serapan probe dapat dengan mudah diukur dengan analisis pembaca pelat mikro
fluoresen dari larva lisis untuk pengambilan GB2-Cy3 (b) atau klasifikasi berbasis gambar dari sinyal fluoresen dari mata ikan zebra ( ∗

= • <0,05 dibandingkan dengan kelompok kontrol) (gambar direproduksi dengan izin dari Kerajaan
Society of Chemistry dari [92]).

di mata adalah demonstrasi pertama bahwa fluks glukosa dalam sistem berbasis ikan
zebra dapat dibuktikan secara langsung dan menawarkan pendekatan baru untuk
penemuan obat antidiabetes [26]. Menariknya, probe glukosa 2-NBDG juga telah
menunjukkan penerapan untuk memvisualisasikan pengambilan glukosa oleh jaringan
sensitif insulin pada tikus [27, 86].
properti GB2-Cy3 dibandingkan dengan 2-NBDG [93]. Pada larva ikan zebra,
ditunjukkan bahwa GB2-Cy3 kira-kira sepuluh kali lipat lebih sensitif untuk
memantau fluks glukosa dan dapat digunakan pada konsentrasi perlakuan
serendah 5 • M (120 kali lebih rendah dari 2-NBDG) [92]. Sensitivitas fluoresensi
GB2-Cy3 terhadap modulator homeostasis glukosa yang diketahui ditunjukkan
dengan menggunakan produk alami, emodin (Gambar 2). Selain itu, dua obat

Sayangnya, probe glukosa 2-NBDG yang tersedia secara luas memang antidiabetes lain yang diketahui diuji untuk memvalidasi probe GB2-Cy3 dalam

memiliki kelemahan tertentu yang dapat membatasi penggunaannya untuk sistem ikan zebra ini: ampkinone dan rosiglitazone (Gambar 5) [94]. Hasil ini

memvisualisasikan homeostasis glukosa. in vivo. Misalnya, 2-NBDG membutuhkan
konsentrasi perlakuan yang tinggi (600 • M untuk ikan zebra), menderita
photobleaching yang cepat, dan memiliki sensitivitas yang relatif rendah
dibandingkan dengan probe lem yang dikembangkan baru-baru ini yang memiliki
fluorofor yang lebih kuat, seperti Cy3 [90]. Untuk lebih mengoptimalkan sistem
skrining larva ikan zebra untuk penemuan obat antidiabetes, probe 2-NBDG diganti
dengan GB2-Cy3 (Gambar 2) [91, 92]. Analisis berbasis sel sebelumnya
menunjukkan pencitraan yang superior
menunjukkan bahwa ikan zebra berbahan dasar larva ikan zebra in vivo skrining
untuk produk alami antidiabetik menggunakan probeGB2-Cy3 akan lebih kuat
secara eksperimental dibandingkan dengan skrining berdasarkan probe
2-NBDG. Namun, perlu dicatat bahwa pemeriksaan tes, seperti pendekatan
fraksinasi terpandu aktivitas yang dijelaskan untuk 2-NBDG (Gambar 4), tidak
dicoba untuk probe GB2-Cy3. Selain itu, tidak seperti 2-NBDG, GB2-Cy3
10
tidak tersedia secara komersial saat ini, yang membatasi kesesuaian probe
ini untuk digunakan oleh komunitas penelitian produk alami.
3.4. Validasi Senyawa Antidiabetik Kandidat dalam Model Komplikasi
Diabetes Berbasis Ikan Zebra. Sebagai pria-
disebutkan dalam pendahuluan tinjauan ini, ikan zebra menawarkan banyak
keuntungan logistik dan teknis untuk penilaian calon obat baru, sebelum
analisis praklinis dalam model berbasis hewan pengerat. Dalam konteks
penemuan obat antidiabetes, ikan zebra yang menunjukkan komplikasi
sekunder diabetes, seperti penyakit ginjal atau retinopati, akan menjadi
sumber daya yang berharga untuk validasi awal sederhana dari senyawa
"hit" yang diidentifikasi melalui skrining. Pada manusia, diabetes
menghasilkan banyak komplikasi yang melemahkan, seperti neuropati,
nefropati, retinopati, penyakit kardiovaskular, penyakit arteri perifer, stroke,
penyakit periodontal, dan peningkatan kerentanan terhadap infeksi
oportunis [95, 96]. Sejumlah model mamalia diabetes tipe 2 menyajikan
komplikasi sekunder yang diamati pada manusia (ditinjau dalam [97, 98]).
Keuntungan signifikan menggunakan ikan zebra untuk penelitian diabetes
adalah bahwa hiperglikemia dapat diinduksi hanya dengan menambahkan
glukosa ke dalam air ikan (misalnya, [99]). Sebaliknya, model tikus diabetes
biasanya memerlukan injeksi analog glukosa toksik, streptozotocin, atau aloksan,
yang secara istimewa membunuh pankreas. • sel. Namun, analog ini juga
menghasilkan efek samping yang signifikan. Misalnya streptozotocin bersifat
tumorigenik di ginjal, paru-paru, dan hati dan aloksan menghasilkan nekrosis hati
dan ginjal sebagai produk sampingan dari metabolisme [100].
Telah terbukti bahwa retinopati diabetik dapat dimodelkan pada ikan zebra [18]. Selama
periode 4 minggu, ikan direndam dalam larutan glukosa 2% atau 0%, bergantian di antara dua
larutan setiap 24 jam, yang terbukti memicu lonjakan hiperglikemia (glukosa 0 versus 2%). Setelah 4
minggu, mata dibedah dan dinilai dengan pemeriksaan mikroskopis. Ikan yang terpapar air glukosa
tinggi menunjukkan penurunan ketebalan lapisan plexiform bagian dalam retina (IPL) dan lapisan inti
bagian dalam (INL), yang juga diamati pada pasien diabetes. Sebagai perbandingan, lapisan retinal
pada tikus diabetes yang diberikan pengobatan streptozotocin ini menunjukkan penipisan yang lebih
sedikit dibandingkan dengan ikan zebra hiperglikemia [3]. Penelitian selanjutnya berdasarkan
metode yang sama untuk menginduksi hiperglikemia melaporkan bahwa pembuluh darah yang
menebal dan melebar terdapat di daerah pusat retina. yang menyerupai patofisiologi yang diamati
pada pasien manusia [101, 102]. Selama tahap proliferasi retinopati diabetik, faktor pertumbuhan
endotel vaskular sitokin (VEGF) diregulasi dan menginduksi proliferasi sel pembuluh darah
(angiogenesis). Ekspresi VEGF yang diatur lebih tinggi juga diamati pada ikan zebra diabetes. Ini
menyediakan sistem model yang relatif mudah untuk menguji senyawa antidiabetik baru untuk efek
pencegahan pada perkembangan retinopati, karena VEGF telah diidentifikasi sebagai target obat
yang menjanjikan untuk komplikasi ini [103]. Ekspresi VEGF yang diatur lebih tinggi juga diamati
pada ikan zebra diabetes. Ini menyediakan sistem model yang relatif mudah untuk menguji senyawa
antidiabetik baru untuk efek pencegahan pada perkembangan retinopati, karena VEGF telah
diidentifikasi sebagai target obat yang menjanjikan untuk komplikasi ini [103]. Ekspresi VEGF yang
diatur lebih tinggi juga diamati pada ikan zebra diabetes. Ini menyediakan sistem model yang relatif
mudah untuk menguji senyawa antidiabetik baru untuk efek pencegahan pada perkembangan
retinopati, karena VEGF telah diidentifikasi sebagai target obat yang menjanjikan untuk komplikasi ini
[103].
Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti
Masalah kardiovaskular, seperti penyakit jantung koroner dan stroke, merupakan komplikasi
utama dari diabetes [104]. Pemaparan embrio ikan zebra 6 hpf ke air glukosa 0,5% sampai 24 hpf
menghasilkan perkembangan jantung yang rusak dan ekspresi yang berubah dari penanda jantung
utama. Oleh karena itu, potensi senyawa antidiabetik baru untuk melindungi dari komplikasi
kardiovaskular dapat diuji dalam sistem ikan zebra ini [105]. Nefropati ginjal adalah komplikasi utama
lain dari diabetes dan merupakan penyebab utama dialisis di negara maju [106]. Hasil hiperglikemia
yang berkepanjangan di bekas luka difus dan penebalan membran basal glomerulus (GBM) di ginjal.
Komplikasi diabetes ini juga dapat dimodelkan pada ikan zebra [3]. Analisis mikroskopis
menunjukkan peningkatan yang signifikan pada ketebalan GBM ginjal ikan zebra 3 minggu setelah
onset diabetes. Menariknya, dalam penelitian ini, diabetes diinduksi pada ikan dengan injeksi
intraperitoneal streptozotocin (sebagai alternatif, streptozotocin juga disuntikkan ke sirip ekor). Selain
itu, gangguan pada ortolog ikan zebra dari keluarga pembawa zat terlarut 12 anggota 3 (pengangkut
natrium / klorida di ginjal yang terkait dengan nefropati diabetik (DN) pada manusia [107])
menghasilkan perubahan histopatologis di ginjal yang menyerupai DN manusia [108 ]. Dengan
demikian, efek perlindungan potensial dari senyawa baru pada DN juga dapat dengan mudah dinilai
dalam sistem ikan zebra. streptozotocin juga disuntikkan ke sirip ekor). Selain itu, gangguan pada
ortolog ikan zebra dari keluarga pembawa zat terlarut 12 anggota 3 (pengangkut natrium / klorida di
ginjal yang terkait dengan nefropati diabetik (DN) pada manusia [107]) menghasilkan perubahan
histopatologis di ginjal yang menyerupai DN manusia [108 ]. Dengan demikian, efek perlindungan
potensial dari senyawa baru pada DN juga dapat dengan mudah dinilai dalam sistem ikan zebra.
streptozotocin juga disuntikkan ke sirip ekor). Selain itu, gangguan pada ortolog ikan zebra dari
keluarga pembawa zat terlarut 12 anggota 3 (pengangkut natrium / klorida di ginjal yang terkait
dengan nefropati diabetik (DN) pada manusia [107]) menghasilkan perubahan histopatologis di ginjal
yang menyerupai DN manusia [108 ]. Dengan demikian, efek perlindungan potensial dari senyawa
baru pada DN juga dapat dengan mudah dinilai dalam sistem ikan zebra.
Diabetes menghasilkan cacat dalam penyembuhan luka, yang terkait dengan
regulasi negatif yang diinduksi hiperglikemia dari faktor pertumbuhan responsif-insulin,
seperti faktor pertumbuhan seperti insulin-1 (IGF-1) [109, 110]. Hal ini menyebabkan
komplikasi, seperti ulkus kaki diabetik, yang merupakan penyebab utama amputasi
yang mempengaruhi 15% dari semua pasien diabetes [111]. Sebagai catatan,
komplikasi ini juga dapat dimodelkan pada ikan zebra dan memberikan kesempatan
untuk skrining senyawa untuk mengidentifikasi peningkat penyembuhan luka diabetes
[3]. Ikan zebra yang sehat siap meregenerasi jenis jaringan yang berbeda setelah
amputasi / reseksi, seperti sirip, sumsum tulang belakang, dan bahkan bagian dari
ventrikel, otak, atau retina [112]. Sirip ekor ikan zebra adalah model yang sangat
menarik untuk mempelajari mekanisme molekuler yang mengatur regenerasi karena
struktur sirip yang relatif sederhana, yang tidak diperlukan untuk bertahan hidup dan
mengalami regenerasi yang cepat [113]. Amputasi sirip ekor pada ikan zebra diabetes
mengakibatkan berkurangnya penyembuhan / regenerasi dibandingkan dengan ikan
dengan normoglikemia, yang dapat dicitrakan dengan mudah menggunakan mikroskop
cahaya. Dengan demikian, model diabetes amputasi sirip ikan zebra dapat digunakan
untuk menentukan sinyal dan mekanisme yang mengatur regenerasi dalam konteks
diabetes [3].
Secara keseluruhan, ikan zebra telah berhasil digunakan untuk mengatasi
berbagai komplikasi diabetes yang diamati pada manusia. Ini memberikan sistem
model eksperimental yang menarik untuk dengan cepat mengkonfirmasikan efek
terapeutik dari senyawa antidia- betik baru yang diidentifikasi dengan skrining berbasis
ikan zebra.
4. Kesimpulan
Diabetes adalah ancaman serius bagi kesehatan manusia dan banyak perawatan
obat telah dikembangkan untuk penyakit ini. Namun, tidak ada obat yang
disetujui saat ini yang dapat sepenuhnya menyembuhkan diabetes dan terkait
dengan efek samping, seperti masalah gastrointestinal untuk obat yang biasa
diresepkan,
Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti
metformin [114]. Diabetes tipe II stadium akhir dapat diobati secara efektif
dengan terapi kombinasi obat hipoglikemik oral ditambah insulin [115].
Namun, insulin membutuhkan injeksi subkutan untuk pengiriman (bentuk
insulin yang dapat dihirup telah dikembangkan, tetapi tidak mungkin hemat
biaya [116]). Oleh karena itu, ada kebutuhan penelitian yang mendesak untuk
mengembangkan obat antidiabetik baru yang lebih efektif yang menghasilkan
lebih sedikit efek samping. Dalam ulasan ini, kami menjelaskan
pengembangan alat tes yang relevan dengan diabetes menggunakan sistem
model ikan zebra yang nyaman secara eksperimental dan mendiskusikan
keuntungan model ini untuk penelitian produk alami. Dalam 25 tahun terakhir,
popularitas penelitian produk alami telah berkurang dalam obat tersebut.
penemuan, karena kemajuan besar dalam bidang biologi molekuler dan
pembentukan kimia kombinator. Kemajuan ini memberikan teknologi untuk
merancang senyawa yang menargetkan target obat tertentu. Namun, ada
minat baru dalam penemuan dan pengembangan obat berbasis produk alami,
yang sebagian disebabkan oleh pembentukan ilmu "-omics", seperti
proteomik, genomik, dan metabolomik, yang memungkinkan karakterisasi rinci
efek senyawa alami pada pola ekspresi gen global dan analisis jalur sinyal
lengkap (kemajuan ini dibahas lebih rinci dalam [117]). Seperti dijelaskan
dalam ulasan ini, ikan zebra sekarang ditetapkan sebagai sistem skrining
yang kuat dan tervalidasi untuk penemuan obat sebelum pengujian praklinis
pada mamalia. Meskipun penerapan sistem ini untuk penemuan obat
antidiabetes relatif baru, dibandingkan dengan bidang penelitian lain (seperti
terapi kanker), sekarang diketahui bahwa ikan zebra dan manusia memiliki
mekanisme biologis yang tumpang tindih dan signifikan untuk mengatur
homeostasis glukosa. Mekanisme ini dapat dianalisis pada larva ikan dalam
format piring 96 sumur yang memfasilitasi skrining penemuan obat [79].
Hebatnya, sistem ikan zebra dapat digunakan untuk menguji senyawa yang
menunjukkan potensi tinggi untuk pengembangan obat antidiabetes, seperti
modulator baru pankreas. • regenerasi sel, yang dihancurkan pada diabetes
tipe 1. Keuntungan besar menggunakan skrining berbasis ikan zebra untuk
kandidat obat antidiabetik adalah bahwa hal itu hanya membutuhkan ikan tipe
liar, yang dapat dibeli dari toko hewan peliharaan [26]. Hanya dua atau tiga
tangki ikan yang dibutuhkan untuk mendirikan fasilitas ikan zebra skala kecil.
Peralatan tambahan, seperti ruang pembiakan dan silinder kultur untuk
Artemia ( sumber makanan yang disukai untuk ikan zebra), juga tersedia dengan
biaya rendah atau bahkan dapat "dibuat sendiri" [118]. Dengan demikian,
pengaturan dasar ikan zebra dapat ditempatkan di satu bangku di laboratorium.
Dari sudut pandang penelitian produk alami, sistem pengujian berbasis ikan zebra
dapat dimasukkan ke dalam laboratorium menggunakan jumlah ruang yang sama
sebagai fasilitas kultur sel, tetapi dengan biaya pengaturan dan pengoperasian
yang lebih rendah. Oleh karena itu, laboratorium penelitian produk alami dengan
minat pada skrining dan validasi obat dapat menggunakan sistem ikan zebra untuk
memberikan pengujian berbasis vertebrata untuk senyawanya. Analisis berbasis
hewan seperti itu berpotensi meningkatkan cakupan dan dampak penelitian
mereka. Dari perspektif penemuan obat diabetes, mekanisme pengaturan
homeostasis glukosa pada ikan zebra telah terbukti memiliki homologi yang
signifikan dengan manusia (misalnya, [79]). Selama sepuluh tahun terakhir, banyak
kemajuan penelitian telah dicapai dalam menetapkan ikan zebra sebagai model
hewan diabetes.
11
Ini dapat dicapai secara relatif sederhana, dengan suntikan tunggal
streptozotocin atau perendaman dalam air glukosa tinggi [119]. Yang penting,
aspek patofisiologi diabetes juga dapat dimodelkan, seperti kehilangan sel beta
dan modifikasi epigenetik yang menghasilkan "memori metabolik" setelah onset
hiperglikemia [68, 120, 121]. Penemuan ini telah meletakkan dasar untuk
skrining obat antidiabetes menggunakan ikan zebra dan memberikan validasi
lebih lanjut bahwa senyawa yang ditemukan dalam ikan zebra juga dapat efektif
pada mamalia. Oleh karena itu, ikan zebra dapat digunakan untuk menghindari
"kemacetan" utama dalam penemuan obat, yang merupakan kegagalan
serangan utama dari layar berbasis sel agar efektif dalam sistem model
mamalia.
Dua jenis protokol skrining utama telah dikembangkan untuk senyawa
antidiabetes pada ikan zebra dan divalidasi dalam sistem mamalia [22, 26]. Satu
protokol didasarkan pada larva ikan zebra transgenik yang mengekspresikan gen
reporter PEPCK yang berpendar [22] dan yang kedua didasarkan pada
pemantauan homeostasis glukosa menggunakan bioprobe fluoresen [26, 92].
Keuntungan dari protokol kedua adalah bahwa protokol ini mempekerjakan ikan
tipe liar dan tidak memerlukan pengetahuan sebelumnya tentang target obat
untuk skrining. Keuntungan dari protokol pertama adalah bahwa modulator dari
PEPCK target obat antidiabetes terkenal dapat diidentifikasi.
Dari sudut pandang penelitian produk alami, telah ditunjukkan bahwa
fraksinasi terpandu aktivitas senyawa antidiabetes dari ekstrak tumbuhan
dapat dilakukan pada ikan zebra. Selain itu, perpustakaan produk alami
telah disaring dalam sistem ikan zebra ini, yang menghasilkan penemuan
kandidat obat antidiabetes baru yang efektif dalam sistem mamalia [26].
Pengembangan skrining larva ikan zebra untuk agen antidiabetik adalah
kemajuan penelitian terbaru yang memungkinkan akses ilmuwan produk
alami ke pengujian sederhana, nyaman, dan murah untuk menguji senyawa
baru mereka. in vivo.
Ikan zebra semakin diminati sebagai alat untuk penemuan obat karena
telah dibuktikan bahwa analisis farmakoketik dapat dilakukan dalam model
ini [122, 123]. Selain itu, sebuah penelitian terbaru menunjukkan bahwa
efek glikosilasi senyawa pada aktivitas biologis dapat dinilai pada larva ikan
zebra transparan [124]. Hal ini sangat relevan untuk penelitian produk
alami, karena tanaman umumnya menyimpan bahan kimia sebagai
glikosida, yang kemudian diaktifkan oleh hidrolisis enzim [125]. Dengan
demikian, model ikan zebra dapat dianggap sebagai sistem "berdiri sendiri"
di mana skrining obat antidiabetes, validasi, efek pada komplikasi diabetes
sekunder dan farmakokinetik dapat diselidiki. Secara keseluruhan,
Singkatan
2-NBDG: 2- (N- (7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-
yl) amino) -2-deoxyglucose
kamp: Adenosin monofosfat siklik
DEX: Deksametason
DM: Diabetes mellitus
DN: Nefropati diabetik
12 Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti

dpf: Hari setelah pembuahan dan Pengobatan Alternatif, vol. 2015, ID Artikel 747982, 14 halaman,
FDA: Administrasi Makanan dan Obat 2015.

GBM: Membran basement glomerulus [6] M. Zarshenas, S. Khademian, dan M. Moein, “Diabetes dan
Glipizide: GLIP pengobatan terkait dalam pengobatan Persia abad pertengahan, " Jurnal Endokrinologi

KEKENYANGAN:Pengangkut glukosa dan Metabolisme India, vol. 18, tidak. 2, hlm. 142–149,

Hh: Jalur sinyal landak 2014.

hpf: Beberapa jam setelah pembuahan [7] N. Mandrekar dan NL Thakur, “Signifikansi ikan zebra

HTS: Penyaringan throughput tinggi model dalam penemuan molekul bioaktif dari alam, "
Surat Bioteknologi, vol. 31, tidak. 2, hlm. 171–179, 2009.
INL: Lapisan inti dalam
IPL: Lapisan plexiform bagian dalam [8] DJ Newman, GM Cragg, dan KM Snader, “Alami
produk sebagai sumber obat baru selama periode 1981–2002, ”
Bertemu: Metronidazol
Jurnal Produk Alami, vol. 66, tidak. 7, hlm. 1022–1037, 2003.
NTR: Nitroreduktase
[9] Y. Luo, RE Cobb, dan H. Zhao, “Kemajuan terbaru secara alami
pdx-1: Lapisan fotoreseptor homeobox-1 pankreas dan
penemuan produk, " Opini Terkini di Bioteknologi, vol. 30, hlm. 230–237, 2014.
PEPCK: Phosphoenolpyruvate carboxykinase
PSL: duodenum
[10] AL Harvey, R. Edrada-Ebel, dan RJ Quinn, "The re-emer-
PTU: 1-Fenil-2-tiourea
Kehadiran produk alami untuk penemuan obat di era genomik, " Penemuan
ROSI: Zona Rosiglita
Obat Ulasan Alam, vol. 14, tidak. 2, hlm. 111–129,
STZ: Streptozotocin
2015.
TriCA: Antidepresan trisiklik
[11] AD Rodrigues, “Metabolisme obat praklinis di usia
VS: Penyaringan virtual.
penyaringan throughput tinggi: perspektif industri, " Penelitian Farmasi, vol. 14,
tidak. 11, hlm. 1504–1510, 1997.
Konflik kepentingan [12] Y. Zhang, J. Gong, dan Z. Yang, “Sintesis total yang efisien dari
produk alami bioaktif: catatan pribadi, " Catatan Kimia, vol. 14, tidak. 4, hlm.
Penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan. 606–622, 2014.
[13] J. Knowles dan G. Gromo, “Panduan penemuan obat: target
seleksi dalam penemuan obat, " Penemuan Obat Ulasan Alam,
Kontribusi Penulis
vol. 2, tidak. 1, hlm. 63–69, 2003.

Nadia Tabassum yang menulis koran. Hongmei Tai mengedit makalah dan [14] CH Williams dan CC Hong, “Penggunaan multi-langkah in vivo

menyumbangkan diskusi penting tentang studi yang relevan. Da-Woon Jung model selama desain dan penemuan obat rasional, " Jurnal Internasional Ilmu

dan Darren R. Williams merencanakan garis besar kertas dan merancang /
memilih gambarnya. Semua penulis telah membaca dan menyetujui versi akhir
makalah.
Ucapan Terima Kasih
Penelitian kami didukung oleh hibah berikut: (1) Program Penelitian Sains
Dasar melalui NRF yang didanai oleh pemerintah Korea, MSIP
(NRF-2015R1A2A2A11001597); (2) hibah dari Pusat Penelitian Penuaan
Integratif dari Institut Sains dan Teknologi Gwangju. Penulis meminta maaf
kepada peneliti yang karyanya tidak dapat didiskusikan karena
keterbatasan tempat.
Molekuler, vol. 12, tidak. 4, hlm. 2262–2274,
2011.
[15] KH Bleicher, H.-J. Böhm, K. Müller, dan AI Alanine, “Hit
dan perolehan prospek: di luar penyaringan throughput tinggi, "
Penemuan Obat Ulasan Alam, vol. 2, tidak. 5, hlm. 369–378, 2003.
[16] MA Lindsay, “Penemuan target,” Ulasan Alam Drug Discov-
ery, vol. 2, tidak. 10, hlm. 831–838, 2003.
[17] Y. Matsumoto, E. Sumiya, T. Sugita, dan K. Sekimizu, “Sebuah pembalik-
model hiperglikemik tebrate untuk identifikasi obat antidiabetik, " PLoS ONE, vol.
6, tidak. 3, ID Artikel e18292, 2011.
[18] M. Gleeson, V. Connaughton, dan LS Arneson, “Induksi
hiperglikemia pada ikan zebra ( Danio rerio) menyebabkan perubahan morfologis di
retina, " Acta Diabetologica, vol. 44, tidak. 3, hlm. 157–163, 2007.

[19] M. Wei, L. Ong, MT Smith dkk., “Streptozotocin-diabetes

tikus sebagai model komplikasi kronis diabetes pada manusia, "
Referensi
Jantung, Paru-paru dan Sirkulasi, vol. 12, tidak. 1, hlm. 44–50, 2003.

[1] FB Hu, “Globalisasi diabetes: peran diet, gaya hidup, dan [20] DA Rees dan JC Alcolado, “Model hewan diabetes mel-
gen, " Perawatan Diabetes, vol. 34, tidak. 6, hlm. 1249–1257, 2011. litus, " Pengobatan Diabetes, vol. 22, tidak. 4, hlm. 359–370, 2005.

[2] M. Stumvoll, BJ Goldstein, dan TW Van Haeften, “Tipe 2
diabetes: prinsip patogenesis dan terapi, " The Lancet,
vol. 365, tidak. 9467, hlm. 1333–1346, 2005.
[3] AS Olsen, MP Sarras Jr., dan RV Intine, “Regenerasi anggota gerak
adalah gangguan pada model diabetes mellitus ikan zebra dewasa, "
WoundRepair andRegeneration, vol. 18, tidak. 5, hlm. 532–542, 2010.
[4] R. Mukesh dan P. Namita, “Tanaman obat dengan antidiabetik
[21] Y. Matsumoto, M. Ishii, Y. Hayashi dkk., “Ulat sutera diabetes
untuk evaluasi obat yang efektif secara terapeutik melawan diabetes tipe II, " Laporan
Ilmiah, vol. 5, ID Artikel 10722, 2015.
[22] P. Gut, B. Baeza-Raja, O. Andersson dkk., “Seluruh organisme
skrining untuk glukoneogenesis mengidentifikasi penggerak metabolisme puasa, " Biologi
Kimia Alam, vol. 9, tidak. 2, hlm. 97–104,
2013.

potensi — ulasan, ” Jurnal Ilmu Pertanian & Lingkungan Amerika-Eurasia, vol.
13, hlm. 81–94, 2013.
[5] H. Zhang, F. Liang, dan R. Chen, “Catatan kuno dan modern
penelitian tentang mekanisme pengobatan herbal China dalam pengobatan
diabetes mellitus, " Pelengkap Berbasis Bukti
[23] EU Etuk, “Model hewan untuk mempelajari diabetes mellitus,”
Jurnal Pertanian dan Biologi Amerika Utara, vol. 1, tidak. 2, hlm. 130–134,
2010.
[24] RT Peterson, BA Link, JE Dowling, dan SL Schreiber,
“Layar perkembangan molekul kecil mengungkapkan logika dan
 Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti
waktu perkembangan vertebrata, " Prosiding National Academy of Sciences of
the United States of America, vol. 97, tidak.
24, hlm. 12965–12969, 2000.
[25] Y. Inagaki, Y. Matsumoto, M. Ishii, K. Uchino, H. Sezutsu,
dan K. Sekimizu, “Pencitraan fluoresensi untuk non-invasif in vivo uji toksisitas
menggunakan ulat sutra transgenik yang mengekspresikan protein fluoresen hijau, " Laporan
Ilmiah, vol. 5, ID Artikel 11180,
2015.
[26] J. Lee, D.-W. Jung, W.-H. Kim et al., “Perkembangan yang sangat tinggi
tes visual, sederhana, dan cepat untuk penemuan mimetik insulin baru pada
vertebrata hidup, " ACSChemical Biology, vol. 8, tidak.
8, hlm. 1803–1814, 2013.
[27] S. Liu, Q. Liu, S. Sun, Q. Jiang, J. Peng, dan Z. Shen, “Aplikasi
kation 2-NBDG sebagai pelacak fluoresen untuk menilai produksi glukosa hati
pada tikus selama penjepit eugly-cemic hiperinsulinemik, " Acta Pharmaceutica
Sinica B, vol. 2, tidak. 4, hlm. 403–410, 2012.
[28] DB West, O. Iakougova, C. Olsson, D. Ross, J. Ohmen, dan
A. Chatterjee, "Genetika / genomik tikus: pendekatan yang efektif untuk
penemuan dan validasi target obat", Ulasan Penelitian Obat, vol. 20, tidak. 3,
hlm. 216–230, 2000.
[29] S. Harris, “KO transgenik sebagai bagian dari throughput tinggi,
pemilihan target berbasis bukti dan strategi validasi, " Penemuan Obat Hari Ini, vol.
6, tidak. 12, hlm. 628–636, 2001.
[30] TFC Mackay dan RRH Anholt, “Tentang lalat dan manusia: dro-
sophila sebagai model untuk ciri-ciri kompleks manusia, " Review Tahunan Genomik dan
Genetika Manusia, vol. 7, hlm. 339–367, 2006.
[31] C. elegans Sequencing Consortium, “Urutan genom
nematoda tersebut C. elegans: sebuah platform untuk menyelidiki biologi, "
Ilmu, vol. 282, tidak. 5396, hlm. 2012–2018, 1998.
[32] L. Ségalat, “Model hewan invertebrata sebagai skrining
alat dalam penemuan obat, " Biologi Kimia ACS, vol. 2, tidak. 4, hlm. 231–236, 2007.
[33] J. Giacomotto dan L. Ségalat, “Penyaringan throughput tinggi
dan model hewan kecil, di mana kita? ” Jurnal Farmakologi Inggris, vol. 160,
tidak. 2, hlm. 204–216, 2010.
[34] Partridge FA, AW Tearle, MJ Gravato-Nobre, WR Schafer,
dan J. Hodgkin, “The C. elegans glycosyltransferase BUS-8 memiliki dua peran
berbeda dan penting dalam morfogenesis epidermal, "
Biologi Perkembangan, vol. 317, no. 2, hlm. 549–559, 2008.
[35] C. Harper dan C. Lawrence, The Laboratory Zebrafish (Labora-
Referensi Saku Hewan), CRC Press, 2012.
[36] G. Streisinger, F. Coale, C. Taggart, C. Walker, dan DJ
Grunwald, "Asal-usul sel klonal di retina berpigmen mata ikan zebra," Biologi
Perkembangan, vol. 131, tidak. 1, hlm. 60–
69, 1989.
[37] N. Rosenthal dan M. Ashburner, “Memperhatikan model kami:
fungsi dan masa depan pusat stok, " Ulasan Alam Genetika, vol. 3, tidak. 9,
hlm. 711–717, 2002.
[38] JS Eisen, “Ikan zebra membuat percikan besar,” Sel, vol. 87, tidak. 6, hal.
969–977, 1996.
[39] W. Driever, L. Solnica-Krezel, AF Schier dkk., “Sebuah genetik
menyaring mutasi yang mempengaruhi embriogenesis pada ikan zebra, ”
Pengembangan, vol. 123, hlm. 37–46, 1996.
[40] AE Melby, RM Warga, dan CB Kimmel, “Spesifikasi
nasib sel di tepi punggung gastrula ikan zebra, " Pengembangan, vol. 122, tidak.
7, hlm. 2225–2237, 1996.
[41] TJA Chico, PW Ingham, dan DC Crossman, “Pemodelan
penyakit kardiovaskular di ikan zebra, " Tren dalam Pengobatan Kardiovaskular, vol.
18, tidak. 4, hlm. 150–155, 2008.
13
[42] B. Kar dan S. Subbiah, “Ikan Zebra: an in vivo model untuk
studi tentang penyakit manusia, " Jurnal Internasional Genetika dan Genomik, vol. 1,
tidak. 1, hlm. 6–11, 2013.
[43] TP Barros, WK Alderton, HM Reynolds, AG Roach, dan
S. Berghmans, “Ikan Zebra: teknologi baru untuk in vivo
penilaian farmakologis untuk mengidentifikasi potensi kewajiban keamanan dalam
penemuan obat awal, " Jurnal Farmakologi Inggris,
vol. 154, tidak. 7, hlm. 1400–1413, 2008.
[44] C. Wang, W. Tao, Y. Wang et al., “Rosuvastatin, diidentifikasi dari
layar genetik kimiawi ikan zebra untuk senyawa antiangiogenik, menekan
pertumbuhan kanker prostat, " Urologi Eropa, vol. 58, tidak. 3, hlm. 418–426,
2010.
[45] JP Hughes, SS Rees, SB Kalindjian, danK. L. Philpott, “Prin-
ciples penemuan obat awal, " Jurnal Farmakologi Inggris,
vol. 162, tidak. 6, hlm. 1239–1249, 2011.
[46] AL Hopkins dan CR Groom, “Genom druggable,”
Penemuan Obat Ulasan Alam, vol. 1, tidak. 9, hlm. 727–730, 2002.
[47] W. Lee, C.-W. Kang, C.-K. Su, K. Okubo, dan Y. Nagahama,
"Skrining aktivitas estrogenik kontaminan lingkungan dan sampel air
menggunakan bioassay embrio transgenik medaka,"
Kemosfer, vol. 88, tidak. 8, hlm. 945–952, 2012.
[48] J. Wittbrodt, A. Shima, dan M. Schartl, “Medaka — seorang model
organisme dari Timur Jauh, " Ulasan Alam Genetika, vol. 3, tidak. 1, hlm. 53–64,
2002.
[49] K. Ito, M. Morioka, S. Kimura, M. Tasaki, K. Inohaya, dan A.
Kudo, “Fenotipe reparatif yang berbeda antara ikan zebra dan medaka setelah
cedera jantung,” Dinamika Perkembangan, vol.
243, tidak. 9, hlm. 1106–1115, 2014.
[50] RW Jones dan MN Huffman, “Embrio ikan sebagai uji bio
bahan dalam menguji bahan kimia untuk mengetahui efek pada pembelahan dan
diferensiasi sel, " Transaksi dari American Microscopical Society, vol. 76, tidak. 2, hlm.
177–183, 1957.
[51] SL Schreiber, “Genetika kimiawi yang dihasilkan dari hasrat untuk
kimia organik sintetik, " Kimia Bioorganik & Obat, vol. 6, tidak. 8, hlm.
1127–1152, 1998.
[52] D.-W. Jung, D. Williams, SM Khersonsky dkk., “Identifikasi
dari ATPase mitokondria F1F0 sebagai target untuk memodulasi pigmentasi kulit
dengan menyaring pustaka triazin yang diberi tag pada ikan zebra, " BioSystems
Molekuler, vol. 1, tidak. 1, hlm. 85–92, 2005.
[53] C.-T. Yang dan SL Johnson, “Ablasi yang diinduksi oleh molekul kecil
dan regenerasi selanjutnya dari larva melanosit ikan zebra, "
Pengembangan, vol. 133, tidak. 18, hlm. 3563–3573, 2006.
[54] T.-Y. Choi, J.-H. Kim, DH Ko dkk., “Ikan zebra sebagai model baru
untuk skrining berbasis fenotipe dari senyawa pengatur melanogenik, " Penelitian
Sel Pigmen, vol. 20, tidak. 2, hlm. 120–127, 2007.
[55] LK Mathew, S. Sengupta, A. Kawakami dkk., “Mengurai
jalur regenerasi jaringan menggunakan genetika kimia, " Jurnal Kimia Biologi, vol.
282, tidak. 48, hlm. 35202–
35210, 2007.
[56] BE Lally, GA Geiger, S. Kridel et al., “Identifikasi dan
evaluasi biologis dari pemeka radiasi molekul kecil yang baru dan kuat melalui
layar yang tidak bias dari perpustakaan kimia, "
Penelitian kanker, vol. 67, tidak. 18, hlm. 8791–8799, 2007.
[57] LA Maddison dan Chen, “Nutrisi yang berlebihan merangsang •- sel
neogenesis pada ikan zebra, " Diabetes, vol. 61, tidak. 10, hlm. 2517–2524,
2012.
[58] AMJ Shapiro, JRT Lakey, EA Ryan dkk., “Islet trans-
perkebunan pada tujuh pasien dengan diabetes mellitus tipe 1 menggunakan
rejimen imunosupresif bebas glukokortikoid, " The New England Journal of Medicine,
vol. 343, tidak. 4, hlm. 230–238, 2000.
 14
[59] AMJ Shapiro, C. Ricordi, BJ Hering dkk., “Internasional
uji coba protokol Edmonton untuk transplantasi iaslet, ” The New England Journal
of Medicine, vol. 355, tidak. 13, hlm. 1318–1330,
2006.
[60] MD Kinkel dan VE Prince, “Pada menu diabetes: ikan zebra
sebagai model untuk perkembangan dan fungsi pankreas, " BioEssays,
vol. 31, tidak. 2, hlm. 139–152, 2009.
[61] N. Tiso, E. Moro, dan F. Argenton, “perkembangan pankreas ikan zebra-
opment, " Endokrinologi Molekuler dan Seluler, vol. 312, tidak. 1-2, hlm. 24–30, 2009.
[62] NS Yee, K. Lorent, dan M. Pack, “Pankreas eksokrin berkembang-
ment di ikan zebra, " Biologi Perkembangan, vol. 284, tidak. 1, hlm. 84–101, 2005.
[63] WM Milewski, SJ Duguay, SJ Chan, dan DF Steiner,
“Konservasi struktur, fungsi, dan ekspresi PDX-1 pada ikan zebra,” Endokrinologi,
vol. 139, tidak. 3, hlm. 1440–1449, 1998.
[64] S. Roy, T. Qiao, C.Wolff, danP.W. Ingham, "Sinyal Landak
jalur penting untuk spesifikasi pankreas dalam embrio ikan zebra, " Biologi Saat
Ini, vol. 11, tidak. 17, hlm. 1358–1363, 2001.
[65] Z. Sun dan N. Hopkins, “Vhnf1, MODY5 dan familial
Gen terkait GCKD, mengatur spesifikasi regional usus ikan zebra, pronephros,
dan otak belakang, " Gen dan Perkembangan, vol. 15, tidak. 23, hlm.
3217–3229, 2001.
[66] A. Seth, DL Stemple, dan I. Barroso, “Penggunaan yang muncul
ikan zebra untuk memodelkan penyakit metabolik, " Model dan Mekanisme Penyakit, vol.
6, tidak. 5, hlm. 1080–1088, 2013.
[67] SC Eames, LH Philipson, VE Prince, dan MD Kinkel,
“Pengukuran gula darah pada ikan zebra mengungkapkan dinamika homeostasis
glukosa,” Ikan zebra, vol. 7, tidak. 2, hlm. 205–213, 2010.
[68] H. Pisharath, JM Rhee, MA Swanson, SD Leach, dan M.
J. Parsons, “Target ablasi sel beta dalam embrio pankreas ikan zebra
menggunakan E. coli nitroreduktase, " Mekanisme Pembangunan, vol. 124, tidak.
3, hlm. 218–229, 2007.
[69] M. Rovira, W. Huang, S. Yusuff dkk., "Identifikasi kimiawi
menentukan obat yang disetujui FDA dan jalur target yang menyebabkan
diferensiasi endokrin pankreas sebelum waktunya, " Prosiding National Academy of
Sciences of the United States of America,
vol. 108, tidak. 48, hlm. 19264–19269, 2011.
[70] O. Andersson, BA Adams, D. Yoo dkk., “Pensinyalan Adenosine
mempromosikan regenerasi pankreas • sel in vivo, ” Metabolisme Sel, vol. 15, tidak.
6, hlm. 885–894, 2012.
[71] N. Tsuji, N. Ninov, M. Delawary dkk., “Seluruh organisme tinggi
skrining konten mengidentifikasi stimulator proliferasi sel beta pankreas, " PLoS
ONE, vol. 9, tidak. 8, ID Artikel e104112, 2014.
[72] Y. Ohta, Y. Kosaka, N. Kishimoto dkk., “Konvergensi
program insulin dan serotonin di pankreas •- sel," Dia- betes, vol. 60, tidak. 12,
hlm. 3208–3216, 2011.
[73] YH Nam, BN Hong, I. Rodriguez dkk., “Potensi sinergis-
tials kopi di pulau pankreas yang terluka dan kerja insulin melalui
K ATP pemblokiran saluran dalam bahasa zebra, " Jurnal Kimia Pertanian dan Pangan, vol.
63, tidak. 23, hlm. 5612–5621, 2015.
[74] DM Reif, L. Truong, D. Mandrell, S. Marvel, G. Zhang, dan
RL Tanguay, "Karakterisasi throughput yang tinggi dari perubahan perilaku
embrionik terkait bahan kimia memprediksi hasil teratogenik", Arsip Toksikologi,
2015.
[75] AM Stewart, R. Gerlai, dan A. V. Kalueff, "Mengembangkan highER-
throughput layar ikan zebra untuk in-vivo Penemuan obat CNS, "
Frontiers dalam Behavioral Neuroscience, vol. 9, pasal 14, 8 halaman,
2015.
Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti
[76] A. Jurczyk, N. Roy, R. Bajwa dkk., “Glukoregula dinamis-
tion dan respon seperti mamalia terhadap gangguan metabolisme dan
perkembangan pada ikan zebra, " Endokrinologi Umum dan Komparatif, vol. 170,
tidak. 2, hlm. 334–345, 2011.
[77] AR Clocquet, JM Egan, DA Stoffers et al., "Insulin Gangguan
sekresi dan peningkatan sensitivitas insulin dalam kematangan keluarga- onset
diabetes pada usia 4 muda (gen faktor 1 promotor insulin), "
Diabetes, vol. 49, tidak. 11, hlm. 1856–1864, 2000.
[78] EH Hani, DA Stoffers, J.-C. Chèvre dkk., “Muta- rusak
tions dalam gen insulin promoter factor-1 (IPF-1) pada diabetes mellitus tipe 2
onset lambat, " Jurnal Investigasi Klinis,
vol. 104, tidak. 9, hlm. R41 – R48, 1999.
[79] B. Elo, CM Villano, D. Govorko, dan LA White, “Larval
ikan zebra sebagai model untuk metabolisme glukosa: ekspresi
phosphoenolpyruvate carboxykinase sebagai penanda paparan senyawa
anti-diabetes, " Jurnal Endokrinologi Molekuler, vol. 38, tidak. 3-4, hlm.
433–440, 2007.
[80] A. Mitrakou, “Ginjal: dampaknya pada homeostasis glukosa dan
regulasi hormonal, " Penelitian Diabetes dan Praktek Klinis,
vol. 93, tidak. 1, hlm. S66 – S72, 2011.
[81] G. Rosella, JD Zajac, SJ Kaczmarczyk, S. Andrikopoulos,
dan J. Proietto, "Gangguan penekanan glukoneogenesis yang disebabkan oleh
ekspresi berlebih dari gen karboksiginase fosfoenolpiruvat
noninsulin-responsif," Endokrinologi Molekuler, vol. 7, tidak. 11, hlm.
1456–1462, 1993.
[82] L. Yuan, R. Ziegler, dan A. Hamann, "Penghambatan phospho-
enolpyruvate carboxykinase ekspresi gen oleh metformin dalam kultur
hepatosit, " Jurnal Medis Cina, vol. 115, tidak. 12, hlm. 1843–1848, 2002.
[83] AB Eisenstein, "Konsep glukoneogenesis saat ini," Itu
American Journal of Clinical Nutrition, vol. 20, tidak. 3, hlm. 282–
289, 1967.
[84] CA Millward, JD Heaney, DS Sinasac dkk., “Tikus dengan a
penghapusan gen untukCCAAT / protein pengikat peningkat • dilindungi dari obesitas
yang dipicu oleh diet, " Diabetes, vol. 56, tidak. 1, hlm. 161–167, 2007.
[85] M. Foretz, S. Hébrard, J. Leclerc dkk., “Metformin menghambat hep-
glukoneogenesis atic pada tikus secara independen dari jalur LKB1 / AMPK
melalui penurunan status energi hati, " Jurnal Investigasi Klinis, vol. 120, tidak.
7, hlm. 2355–2369, 2010.
[86] J. Um, J. Lee, D. Jung, dan D. Williams, “Gula yang bersinar di
gelap: bioprobe glukosa bertanda fluoresen dan fasilitasi mereka dalam proses
penemuan obat, " Kimia Obat Saat Ini,
vol. 22, tidak. 15, hlm. 1793–1807, 2015.
[87] Y.-C. Tseng, R.-D. Chen, J.-R. Lee, S.-T. Liu, S.-J. Lee, dan P.-
P. Hwang, “Ekspresi dan regulasi spesifik dari transporter glukosa dalam ionosit
ikan zebra,” American Journal of Physiology - Regulatory Integrative and
Comparative Physiology, vol. 297, tidak.
2, hlm. R275 – R290, 2009.
[88] J. Xue, W. Ding, dan Y. Liu, “Efek anti-diabetes dari emodin
terlibat dalam aktivasi PPAR • pada tikus diabetes yang diberi makan diet tinggi lemak dan tikus
diabetes yang diinduksi streptozotocin dosis rendah, " Fitoterapia,
vol. 81, tidak. 3, hlm. 173–177, 2010.
[89] J. Liu, H. Sun, W. Duan, D. Mu, dan L. Zhang, “Maslinik
asam mengurangi glukosa darah pada tikus KK-Ay, " Buletin Biologi & Farmasi,
vol. 30, tidak. 11, hlm. 2075–2078, 2007.
[90] WH Kim, J. Lee, D.-W. Jung, dan DR Williams, “Visualisasi
manis: semakin beragam aplikasi untuk bioprobe glukosa bertanda fluoresen
dan modifikasi strukturalnya baru-baru ini, " Sensor, vol. 12, tidak. 4, hlm.
5005–5027, 2012.
[91] J. Park, YL Hyang, M.-H. Cho, dan BP Seung, "Kembangkan-
tentang bioprobe glukosa berlabel Cy3 dan aplikasinya dalam format
 Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti
bioimaging dan skrining agen antikanker, " Angewandte Chemie — Edisi
Internasional, vol. 46, tidak. 12, hlm. 2018–2022,
2007.
[92] J. Park, JI Um, A. Jo et al., “Dampak muatan molekul pada
Pengambilan bioprob glukosa dan in vivo
penerapan glukosa bioprobe, GB2-Cy3, ” Komunikasi Kimiawi, vol. 50, tidak.
66, hlm. 9251–9254, 2014.
[93] HY Lee, JJ Lee, J. Park, dan SB Park, “Pengembangan
bioprobe glukosa fluoresen dan aplikasinya pada pemantauan pengambilan glukosa
secara real-time dan kuantitatif dalam sel hidup, "
Kimia — Jurnal Eropa, vol. 17, tidak. 1, hlm. 143–150, 2011.
[94] S. Oh, SJ Kim, JH Hwang dkk., “Antidiabetes dan antiobesitas
efek ampkinone (6f), aktivator molekul kecil baru dari protein kinase yang
diaktifkan AMP, " Jurnal Kimia Obat,
vol. 53, tidak. 20, hlm. 7405–7413, 2010.
[95] MP Gilbert, “Skrining dan pengobatan oleh perawatan primer
penyedia komplikasi diabetes yang umum, " Klinik Medis Amerika Utara, vol.
99, tidak. 1, hlm.201–219, 2015.
[96] M. Brownlee, “Patobiologi komplikasi diabetes. SEBUAH
mekanisme pemersatu, " Diabetes, vol. 54, tidak. 6, hlm. 1615–1625,
2005.
[97] WT Cefalu, “Model hewan dari diabetes tipe 2: klinis
presentasi dan relevansi patofisiologis dengan kondisi manusia, " Jurnal ILAR, vol.
47, tidak. 3, hlm. 186–198, 2006.
[98] SE Heinonen, G. Genové, E. Bengtsson dkk., “Model hewan
komplikasi makrovaskular diabetes: pemain kunci dalam pengembangan
pendekatan terapeutik baru, " Jurnal Penelitian Dia- betes, vol. 2015, ID Artikel
404085, 14 halaman, 2015.
[99] KM Capiotti, R. Antonioli, LW Kist, MR Bogo, CD Bonan,
dan RS Da Silva, "Glukosemetabolisme dengan gangguan persisten dalam model
hiperglikemia ikan zebra," Biokimia dan Fisiologi Komparatif Bagian B: Biokimia &
Biologi Molekuler, vol. 171, tidak. 1, hlm. 58–65, 2014.
[100] S. Lenzen, “Mekanisme aloksan- dan streptozotocin-
diabetes yang diinduksi, " Diabetologia, vol. 51, tidak. 2, hlm. 216–226, 2008.
[101] Y. Alvarez, K. Chen, AL Reynolds, N. Waghorne, JJ
O'Connor, dan BN Kennedy, “Disfungsi fotoreseptor kerucut dominan dalam
model hiperglikemik retinopati diabetik non-proliferatif”, Model & Mekanisme
Penyakit, vol. 3, tidak. 3-4, hlm. 236–245, 2010.
[102] Komite Ahli untuk Diagnosis dan Klasifikasi
dari Diabetes Mellitus, "Laporan komite ahli tentang diagnosis dan klasifikasi
diabetes mellitus," Perawatan Diabetes,
vol. 26, suplemen 1, hlm. S5 – S20, 2002.
[103] PG O'Malley, “Efektivitas komparatif dari faktor anti-pertumbuhan
terapi untuk edema makula diabetik: ringkasan temuan dan kesimpulan utama,
" Arsip InternalMedicine, vol. 172, tidak. 13, hlm. 1014–1015, 2012.
[104] SM Grundy, IJ Benjamin, GL Burke dkk., “Diabetes dan
penyakit kardiovaskular: pernyataan untuk profesional perawatan kesehatan dari
AmericanHeart Association, " Sirkulasi, vol. 100, hlm. 1134–1146, 1999.
[105] J. Liang, Y. Gui, W. Wang, S. Gao, J. Li, dan H. Song, “Elevated
glukosa menginduksi cacat jantung bawaan dengan mengubah ekspresi tbx5, tbx20,
dan has2 dalam perkembangan embrio ikan zebra, "
Penelitian Cacat Lahir Bagian A: Teratologi Klinis dan Molekuler,
vol. 88, tidak. 6, hlm. 480–486, 2010.
[106] E. Ritz, “Nefropati pada diabetes tipe 2,” Jurnal Internal
Obat, vol. 245, tidak. 2, hlm. 111–126, 1999.
[107] JH Kim, HD Shin, BL Park dkk., " SLC12A3 ( pembawa zat terlarut
family 12 anggota [natrium / klorida] 3) polimorfisme adalah
15
terkait dengan penyakit ginjal stadium akhir pada nefropati diabetik, " Diabetes, vol.
55, tidak. 3, hlm. 843–848, 2006.
[108] N. Abu Seman, B. He, JRM Ojala dkk., “Genetik dan bio-
efek logis dari kotransporter natrium-klorida ( SLC12A3) dalam nefropati
diabetes, " American Journal of Nephrology, vol. 40, hlm. 408–416, 2014.
[109] DL Brown, CD Kane, SD Chernausek, dan DG Green-
halgh, "Perbedaan ekspresi dan lokalisasi faktor pertumbuhan mirip insulin I
dan II pada luka kulit pada tikus diabetes dan non diabetes", The American
Journal of Pathology, vol. 151, tidak. 3, hlm. 715–724, 1997.
[110] MP Czubryt, “Benang umum pada fibrosis jantung, bekas luka infark
formasi, dan penyembuhan luka, " Fibrogenesis dan Perbaikan Jaringan,
vol. 5, tidak. 1, pasal 19, 2012.
[111] H. Brem dan M. Tomic-Canic, “Dasar seluler dan molekuler
penyembuhan luka pada diabetes, " Jurnal Investigasi Klinis, vol.
117, tidak. 5, hlm. 1219–1222, 2007.
[112] MC Mione dan NS Trede, “Ikan zebra sebagai model untuk
regenerasi jaringan kompleks, " Tren Genetika, vol. 29, tidak. 11, hlm. 517–523,
2013.
[113] S.-I. Higashijima, H. Okamoto, N. Ueno, Y. Hotta, dan G.
Eguchi, "generasi ikan zebra transgenik frekuensi tinggi yang dapat diandalkan
mengekspresikan GFP di seluruh otot atau seluruh tubuh dengan menggunakan promotor
yang berasal dari ikan zebra", Biologi Perkembangan,
vol. 192, no. 2, hlm. 289–299, 1997.
[114] S. Bolen, L. Feldman, J. Vassy dkk., “Tinjauan sistematis: com-
efektivitas paratif dan keamanan obat oral untuk diabetes mellitus tipe 2, " Annals
of Internal Medicine, vol. 147, tidak. 6, hlm. 386–399, 2007.
[115] A. Cahn, R. Miccoli, A. Dardano, dan S. Del Prato, “Bentuk baru
insulin dan terapi insulin untuk pengobatan diabetes tipe 2, " Diabetes Lancet &
Endokrinologi, vol. 3, tidak. 8, hlm. 638–652, 2015.
[116] P. Royle, N. Waugh, L. McAuley, L. McIntyre, S. Thomas, dan
N. Waugh, "Efektivitas klinis dan efektivitas biaya insulin inhalasi pada diabetes
mellitus: tinjauan sistematis dan evaluasi ekonomi," Penilaian Teknologi
Kesehatan, vol. 11, tidak.
33, hlm. 1–126, 2007.
[117] H.-F. Ji, X.-J. Li, dan H.-Y. Zhang, “Produk dan obat alami
penemuan. Dapatkah ribuan tahun pengetahuan medis kuno membawa kita pada
kombinasi obat baru dan kuat dalam memerangi kanker dan demensia? ” Laporan
EMBO, vol. 10, tidak. 3, hlm. 194–200, 2009.
[118] C. Nusslein-Volhard dan R. Dahm, Ikan zebra, Praktis
Seri Pendekatan, OUP, Oxford, Inggris, 2002.
[119] K. Jörgens, J.-L. Hillebrands, H.-P. Hammes, dan J. Kroll,
“Ikan zebra: model untuk memahami komplikasi diabetes”,
Endokrinologi & Diabetes Eksperimental dan Klinis, vol. 120, tidak. 4, hlm.
186–187, 2012.
[120] RV Intine, AS Olsen, danM. P. Sarras Jr., “Model ikan zebra
diabetes mellitus dan memori metabolik, " Jurnal Eksperimen Tervisualisasi, vol.
72, hlm. E50232 – e50239, 2013.
[121] Anggota Parlemen Sarras, AA Leontovich, danR. V. Intine, “Penggunaan ikan zebra
sebagai model untuk menyelidiki peran epigenetik dalam menyebarkan komplikasi
sekunder yang diamati pada diabetes mellitus, "
Biokimia dan Fisiologi Komparatif Bagian C: Toksikologi & Farmakologi, 2015.
[122] P. Kulkarni, GH Chaudhari, V. Sripuramet al., "Dosis oral dalam
ikan zebra dewasa: bukti konsep menggunakan farmakokinetik dan evaluasi
farmakologis karbamazepin, " Laporan Farmakologi, vol. 66, tidak. 1, hlm.
179–183, 2014.
 16 Pengobatan Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti

[123] L. Zang, D. Morikane, Y. Shimada, T. Tanaka, danN. Nishimura,

“Protokol baru untuk administrasi lisan bahan kimia uji untuk ikan zebra dewasa,” Ikan
zebra, vol. 8, tidak. 4, hlm. 203–210, 2011.
[124] S.-H. Park, HJ Kim, S.-H. Yimet al., “Penggambaran peran
glikosilasi dalam sifat sitotoksik quercetin menggunakan pengujian baru pada
vertebrata hidup, " Jurnal Produk Alami,
vol. 77, tidak. 11, hlm. 2389–2396, 2014.

[125] J. Appleton, "Mengevaluasi ketersediaan hayati isoquercetin,"

Jurnal Pengobatan Alami, vol. 2, hlm. 1–6, 2010.
 MEDIATOR
ATION dari

INFLAM

Ilmiah Gastroenterologi Jurnal dari

Jurnal Dunia Riset dan Praktek

Hindawi Publishing Corporation
http://www.hindawi.com
Hindawi Publishing Corporation
Volume 2014 http://www.hindawi.com
Hindawi Publishing Corporation
Penelitian Diabetes Penanda Penyakit
Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation
http://www.hindawi.com Volume 2014
Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014

Jurnal dari Jurnal Internasional

Penelitian Imunologi Endokrinologi

Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation

http://www.hindawi.com Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014

Kirimkan naskah Anda ke

http://www.hindawi.com

BioMed
Penelitian PPAR Riset Internasional
Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation

http://www.hindawi.com Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014

Jurnal dari

Kegemukan

Berbasis Bukti
Jurnal dari Sel Punca Pelengkap dan Jurnal dari

Ilmu Kesehatan Mata Internasional Obat alternatif Onkologi

Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation

http://www.hindawi.com Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014

Parkinson
Penyakit

Komputasi dan
Metode Matematika Perilaku AIDS Pengobatan Oksidatif dan
dalam Kedokteran Neurologi Penelitian dan Perawatan Umur Panjang Seluler
Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation

http://www.hindawi.com Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014 http://www.hindawi.com Volume 2014