BAB I

PENDAHULUAN

Bidang menarik dari antibodi monoklonal terapeutik (mAbs) berawal dari Milstein
dan Koehler mempresentasikan teknologi hybrid murine mereka pada tahun 1975 (Kohler
dan Milstein, 1975). Teknologi ini menyediakan metode yang dapat direproduksi untuk
memproduksi monoklonal antibodi dengan selektivitas target unik di hampir jumlah tak
terbatas. Pada 1984, kedua ilmuwan menerima Hadiah Nobel untuk terobosan ilmiah
mereka, dan pekerjaan mereka dipandang sebagai tonggak penting dalam sejarah mAbs
sebagai modalitas terapi dan mereka Aplikasi lain.
Meskipun butuh beberapa waktu sampai mAb terapi pertama mendapat otorisasi
pasar dari FDA pada tahun 1986 (Orthoclone OKT3, Bab 17), antibodi monoklonal
sekarang menjadi standar perawatan di beberapa daerah penyakit. Secara khusus, di bidang
onkologi (Bab 16), transplantasi (Bab 17) dan pasien penyakit radang (Bab 18) sekarang
memiliki alternatif pengobatan yang mengubah kehidupan penyakit yang sudah sangat
terbatas atau tidak ada pilihan perawatan medis sebelum kemunculan mAbs.
Sampai saat ini lebih dari dua puluh mAb, dan mAb derivatif termasuk protein fusi
dan fragmen mAb tersedia untuk berbagai terapi (Tabel 1): sembilan mAbs dan dua
immunoconjugate dalam onkologi; enam mAbs dan tiga Fc (Kristalisasi fragmen) - protein
fusi dalam peradangan; tiga mAbs di transplantasi; satu fragmen mAb untuk area
kardiovaskular). Evolusi teknologi selanjutnya memungkinkan aplikasi mAb lebih luas
melalui kemampuan untuk menghasilkan chimeric mouse / manusia, mAb manusiawi dan
sepenuhnya manusiawi dari yang murni asal murine.
Secara khusus, pengurangan Bagian xenogenik dari struktur mAb menurun potensi
imunogenik dari murine mAbs memungkinkan aplikasi mereka yang lebih luas. mAbs
pada umumnya obat yang sangat aman karena selektivitas target mereka, dengan demikian
menghindari paparan yang tidak perlu dan akibatnya aktivitas di organ non-target. Ini
khususnya jelas di bidang onkologi, di mana mAbs suka rituximab, trastuzumab dan
bevacizumab dapat menawarkan tingkat rasio kemanjuran / keamanan yang lebih baik
dibandingkan untuk rejimen pengobatan kemoterapi umum untuk beberapa tumor
hematologi dan padat

1
 Pemanfaatan dinamis dari bioteknologi ini metode tidak hanya menghasilkan obat
baru, tetapi juga memicu pengembangan bisnis yang sama sekali baru model untuk
penelitian dan pengembangan obat dengan ratusan baru terbentuk dan berkembang pesat
perusahaan biotek. Selanjutnya, kemampuan selektif target molekul yang berhubungan
dengan penyakit menghasilkan a bidang ilmiah baru dari obat yang ditargetkan molekuler,
di mana pengembangan novel mAbs mungkin berkontribusi secara substansial untuk
menetapkan standar baru untuk proses penelitian dan pengembangan obat yang sukses.
Istilah kedokteran translasi dikembangkan untuk mencakup biokimiawi, biologis,
(patho) fisiologis memahami dan menggunakan pengetahuan ini untuk menemukan pilihan
intervensi untuk mengobati penyakit. Selama ini proses, biomarker (mis., tingkat ekspresi
genetik gen penanda, ekspresi protein dari protein target, pencitraan molekuler) digunakan
untuk mendapatkan yang terbaik pemahaman tentang aktivitas biologis obat dalam rasa
kualitatif dan yang paling penting kuantitatif, yang meliputi dasarnya juga seluruh bidang
farmakokinetik / farmakodinamik (PK / PD). Itu penerapan metode ilmiah tersebut
bersama dengan prinsip kombinasi obat yang ditargetkan secara molekuler dengan PK
yang menguntungkan dan keamanan mAb setidaknya sebagian menjelaskan mengapa
produk turunan bioteknologi memiliki tingkat keberhasilan yang jauh lebih tinggi untuk
menjadi terapi yang dipasarkan dibandingkan dengan yang diturunkan secara kimia obat-
obatan molekul kecil.

Tabel 1. Sifat farmakologis dari antibodi terapeutik yang disetujui, isotipe antibodi,
target antigen, indikasi klinis, dan parameter PK.

2
 Bab ini mencoba membahas hal-hal berikut pertanyaan: Apa saja elemen struktural
mAb? Bagaiman mAbs mengubah perbedaan fungsional menjadi berbeda kegiatan
fungsional? Dan bagaimana protein mAb berubah dari calon obat klinis potensial menjadi
a obat terapeutik dengan menggunakan obat translasi kerangka?.

3
 BAB II
PEMBAHASAN

A. Struktur Dan Kelas Antibodi

Antibodi (Abs), imunoglobulin (Ig) kira-kira Molekul berbentuk Y atau
kombinasi molekul tersebut. Ada lima kelas utama Ig: IgG, IgA, IgD, IgE, dan IgM.
Tabel 2 merangkum karakteristik molekul-molekul ini, terutama strukturnya
(Monomer, dimer, pentamer, atau hexamer), molekuler berat (mulai dari ~ 150 kDa
hingga ~ 1150 kDa), fungsinya (mis., aktifkan komplemen, mengikat FcγR).
Di antara kelas-kelas ini, IgG dan turunannya terbentuk kerangka kerja untuk
pengembangan terapi antibodi. Gambar 1 menggambarkan struktur umum suatu IgG
dengan komponen strukturalnya serta a struktur konformasi efalizumab (anti-CD11a,
Raptiva). Molekul IgG memiliki empat rantai peptida, termasuk dua rantai berat (H)
identik (~ 50–55 kDa) dan dua rantai cahaya (L) identik (25 kDa), yaitu terhubung
melalui ikatan disulfida (S-S) di daerah engsel. Yang pertama ~ 110 asam amino dari
kedua rantai membentuk variabel region (VH dan VL), dan juga merupakan antigen
daerah yang mengikat.
Setiap domain V berisi tiga pendek peregangan peptida dengan urutan
hipervariabel (HV1, HV2, dan HV3), dikenal sebagai komplementaritas menentukan
wilayah (CDR), yaitu, wilayah yang mengikat antigen. Urutan yang tersisa dari setiap
rantai terdiri dari satu domain konstan tunggal (CL). Itu sisa dari setiap rantai berat
mengandung tiga konstanta wilayah (CH1, CH2, dan CH3). Daerah konstan adalah
bertanggung jawab atas pengakuan dan pengikatan efektor. IgG selanjutnya dapat
dibagi menjadi empat subclass (IgG1, IgG2, IgG3, dan IgG4). Perbedaan di antara ini
subclass juga diringkas dalam Tabel 2.

1. Murine, Chimeric, Humanized and Fully MAb yang dimanusiakan

Dengan kemajuan teknologi murine awal mAbs telah direkayasa lebih jauh
menjadi chimer (mouse CDR human Fc), manusiawi dan sepenuhnya manusia
mAbs (Gbr. 2). Murine mAbs, chimeric mAbs, dimanusiakan mAbs dan mAb yang
sepenuhnya manusiawi memiliki 0%, ~ 60% hingga ~ 70%, ~ 90% hingga ~ 95%

4
dan ~ 100% urutan yang mirip dengan mAbs manusia, masing-masing. Mengurangi
bagian xenogenik dari mAb yang berpotensi mengurangi risiko imunogenik karena
menghasilkan antibodi anti-terapi (ATA).
Muromonab-CD3 (Orthoclone OKT3), generasi pertama mAb yang berasal
dari murine, telah menunjukkan kemanjuran dalam pengobatan penolakan
transplantasi akut dan mAb pertama yang dilisensikan untuk digunakan pada
manusia. Kabarnya bahwa 50% dari pasien yang menerima OKT3 diproduksi
HAMA setelah dosis pertama. HAMA mengganggu Ikatan OKT3 dengan sel-T,
sehingga mengurangi kemanjuran terapi mAb (Norman et al., 1993). Kemudian,
kloning molekuler dan ekspresi gen wilayah variabel IgG telah memfasilitasi
generasi antibodi yang direkayasa.
Generasi kedua dari mAbs, mAbs chimeric terdiri dari manusia daerah
konstan dan daerah variabel mouse. Itu spesifisitas antigen dari mAb chimeric sama
dengan antibodi tikus induk; Namun, Fc manusia region menjadikan waktu paruh in
vivo lebih lama dari induk murine mAb dan fungsi efektor serupa seperti manusia
Ab. Saat ini, ada lima chimeric antibodi dan fragmen di pasar (abciximab,
basiliximab, cetuximab, infliximab, dan rituximab). Antibodi ini masih bisa
menginduksi manusia anti-chimeric antibodi (HACA). Misalnya, sekitar 61% dari
pasien yang menerima infliximab memiliki respons HACA terkait dengan durasi
kemanjuran terapi yang lebih pendek dan peningkatan risiko reaksi infus.
Pengembangan ATA saat ini tidak dapat diprediksi, karena 6 dari 17 pasien
dengan sistemik lupus erythematosus menerima rituximab dikembangkan high-titer
HACA (Looney et al., 2004), sedangkan hanya 1 dari 166 pasien limfoma
mengembangkan HACA (McLaughlin et al., 1998). MAb yang dimanusiakan
mengandung bagian signifikan dari urutan manusia kecuali CDR yang masih
berasal dari murine. Ada 10 dipasarkan antibodi manusiawi di pasar (alemtuzumab,
bevacizumab, daclizumab, efalizumab, gemtuzumab, natalizumab, omalizumab,
palivizumab, anibizumab dan trastuzumab). Kejadian tingkat antibodi anti-obat
[yaitu, manusia anti-manusia antibodi (HAHA)] sangat menurun untuk ini mAb
yang dimanusiakan.

5
 Trastuzumab telah melaporkan Tingkat kejadian HAHA hanya 0,1% (1 dari
903 kasus) (Herceptin, 2006), tetapi daclizumab memiliki tingkat HAHA setinggi
34% (Zenapax, 2005). Cara lain untuk mencapai biokompatibilitas mAb adalah
untuk berkembang sepenuhnya antibodi manusiawi, yang dapat diproduksi oleh dua
pendekatan: melalui pustaka tampilan fage dan oleh menggunakan XenoMouse
transgenik dengan berat manusia dan fragmen gen rantai ringan (Weiner, 2006).

Tabel 2. Sifat penting subclass imunoglobulin endogen.

Adalimumab adalah lisensi pertama mAb yang sepenuhnya dihasilkan oleh

pustaka tampilan fage. Adalimumab disetujui pada tahun 2002 dan 2007 untuk
pengobatan rheumatoid arthritis dan penyakit Crohn, masing-masing (Humira,
2007). Namun, terlepas dari itu struktur Ab sepenuhnya manusia, kejadian HAHA
adalah sekitar 5% (58 dari 1062 pasien) dalam tiga secara acak uji klinis dengan
adalimumab (Cohenuram dan Saif, 2007; Humira, 2007).
Panitumumab adalah pertama antibodi monoklonal yang sepenuhnya
dimanusiakan dihasilkan dengan menggunakan teknologi mouse transgenik. Tidak
Respons HAHA telah dilaporkan secara klinis uji coba setelah dosis kronis dengan
panitumumab hingga saat ini (Vectibix, 2006; Cohenuram dan Saif, 2007). Dari
catatan, biasanya ATA diukur menggunakan uji ELISA dan tingkat kejadian ATA
yang dilaporkan untuk mAb yang diberikan dapat dipengaruhi oleh sensitivitas dan

6
 spesifisitas pengujian. Selain itu, kejadian yang diamati kepositifan antibodi dalam
suatu pengujian juga dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor lain termasuk
penanganan sampel, waktu pengumpulan sampel, obat yang bersamaan, dan
penyakit yang mendasarinya.
Untuk alasan ini, perbandingan dari kejadian mAb spesifik dengan mungkin
timbulnya antibodi terhadap produk lain menyesatkan

2. Komponen Struktural Utama Mabs

Pencernaan antibodi proteinolitik melepaskan berbeda fragmen disebut Fv
(Fragment variable), Fab (Pengikatan antigen fragmen) dan Fc. Ini berbeda
formulir telah ditinjau oleh orang lain (Wang, et al., 2007). Fragmen ini juga dapat
dihasilkan oleh rekayasa rekombinan. Pengobatan dengan papain menghasilkan dua
Fab yang identik dan satu Fc. Pepsin pengobatan menghasilkan fragmen F (ab0) 2
dan beberapa fragmen yang lebih kecil. Pengurangan F (ab0) 2 akan menghasilkan
dua Fab. Fragmen Fv terdiri dari yang berat domain variabel rantai (VH) dan rantai
cahaya domain variabel (VL) yang disatukan oleh nonkovalen yang kuat interaksi.
Stabilisasi fragmen Fv oleh peptide linker menghasilkan FV rantai tunggal (scFv).

3. Memodifikasi Struktur
Fc Wilayah Fc dari mAbs memainkan peran penting tidak hanya di fungsi
mereka tetapi juga dalam disposisi mereka di dalam tubuh. Antibodi monoklonal
mendatangkan fungsi efektor [antibodi-sitotoksisitas seluler dependen (ADCC) dan
sitotoksisitas komplemen-dependen (CDC)] berikut interaksi antara daerah Fc
mereka dan Fcγ berbeda reseptor dan fiksasi komplemen (C1q, C3b).
Rekayasa peningkatan atau penurunan aktivitas ADCC dan CDC telah
diproduksi oleh manipulasi Fc kritis daerah. Umana et al. (1999) merekayasa
antineuroblastomal IgG1 dengan aktivitas ADCC yang ditingkatkan dibandingkan
dengan tipe liar (WT). Shields et al. (2001) menunjukkan bahwa varian IgG1 yang
dipilih dengan peningkatan mengikat FcRIIIA menunjukkan peningkatan dalam
ADCC untuk sel monosit darah tepi atau sel pembunuh alami. Temuan ini
menunjukkan bahwa direkayasa Antibodi mungkin memiliki aplikasi penting untuk
meningkatkan kemanjuran terapi. Itu ditemukan bahwa dimorfisme gen FcγRIIIA

7
 menghasilkan dua allotypes: FcγRIIIa-158V dan FcγRIIIa-158F dan polimorfisme
dalam FcRIIIA dikaitkan dengan respons klinis yang menguntungkan setelah
rituximab administrasi pada pasien limfoma non-Hodgkin.
Saat ini, beberapa mAb anti-CD20 dengan peningkatan pengikatan afinitas
terhadap FcRIIIA sedang dalam uji klinis. Kemanjuran protein fusi antibodi-
interleukin-2 (Ab-IL-2) adalah ditingkatkan dengan mengurangi interaksinya
dengan Fcγ reseptor (Gillies et al., 1999). Selain itu, Fc porsi mAb juga berikatan
dengan reseptor FcRn (FcRn bernama berdasarkan penemuan pada tikus neonatal
sebagai neonatal Fc reseptor), suatu reseptor Fc milik struktur kompleks
histokompatibilitas utama, yaitu terlibat dalam transportasi dan pembersihan IgG
(Junghans, 1997). Engine mAb dengan penurunan atau peningkatan Afinitas
pengikat FcRn telah diselidiki untuk potensi memodifikasi perilaku PK mAb (lihat
bagian “Antibodi clearance” untuk detail).

4. Antibodi Derivatif [F (ab0) 2, Obat Antibodi Konjugat (ADC)] dan Protein

Fusion Fragmen antibodi (Fab, F (ab0) 2, dan scFv) memiliki waktu paruh
lebih pendek dibandingkan dengan ukuran penuh antibodi yang sesuai. scFv dapat
direkayasa lebih lanjut menjadi dimer bivalen (diabody) (~ 60 kDa, atau trimer:
triabody ~ 90 kDa). Dua diabodi bisa jadi selanjutnya dihubungkan bersama untuk
menghasilkan tandem bispecific diabody (tandab). Gambar 3 menggambarkan
struktur fragmen antibodi yang berbeda. Dari catatan, abciximab dan ranibizumab
adalah dua fragmen Fab yang disetujui oleh FDA Abciximab adalah Fab chimeric
yang digunakan untuk menyimpan darah dari pembekuan dan itu menunjukkan
paruh 20 hingga 30 menit dalam serum dan 4 jam dalam trombosit.
Ranibizumab, yang diadministrasikan melalui injeksi intravitreal, disetujui
untuk pengobatan degenerasi makula pada tahun 2006 dan 2006 menunjukkan
paruh eliminasi vitreous 9 hari (Albrecht dan DeNardo, 2006). Waktu paruh
fragmen Fc lebih mirip bahwa IgG berukuran penuh (Lobo et al., 2004). Karena itu,
Fc porsi IgG telah digunakan untuk membentuk fusi dengan molekul seperti
sitokin, enzim faktor pertumbuhan atau daerah reseptor atau adhesi yang mengikat
ligan molekul untuk meningkatkan paruh dan stabilitasnya. Alefacept, abatacept,
dan etanercept adalah tiga Fcfusion protein di pasar. Etanercept, seorang dimeric

8
 molekul fusi yang terdiri dari reseptor TNF-α menyatu dengan wilayah Fc IgG1
manusia, memiliki waktu paruh sekitar 70 hingga 100 jam (Zhou, 2005), yang jauh
lebih lama daripada reseptor TNF-α itu sendiri (30 menit hingga 2 jam).
Antibodi dan fragmen antibodi juga bisa terkait secara kovalen dengan obat
beracun atau radioisotop membentuk immunoconjugate atau ADC. Dalam setiap
kasus, Ab digunakan sebagai mekanisme pengiriman secara selektif targetkan obat
beracun ke tumor. Contohnya adalah gemtuzumab, mAb anti-CD33 yang
terhubung dengan a ozogamicin obat kemoterapi. Ozogamicin sendiri memiliki
efek samping yang sangat signifikan. Dihipotesiskan bahwa berdasarkan
penargetan ozogamicin sebagian besar disampaikan ke sel mengekspresikan protein
CD33 dengan berkurang paparan sel normal. Ini mengarah ke peningkatan jendela
terapi. Radioimunoterapi saat ini agen yang dilisensi oleh FDA adalah ibritumomab
/ tiuxetan dan tositumomab / 131I-tositumomab untuk limfoma. Kedua mAbs utuh
di atas mengikat CD-20 dan membawa radioisotop pemancar partikel beta yang
kuat (90Y untuk ibritumomab / tiuxetan dan 131I untuk tositumomab).

B. Bagaimana Fungsi Antibodi Sebagai Terapeutik

Efek farmakologis dari antibodi adalah yang pertama diawali oleh interaksi
spesifik antara antibodi dan antigen. Antibodi monoklonal umumnya terlihat
spesifisitas istimewa untuk antigen target. Itu situs pengikatan pada antigen yang
disebut epitop dapat linear atau konformasional, dan dapat terdiri dari kontinu atau
urutan asam amino terputus-putus. Itu epitop adalah penentu utama antibodi fungsi
modulasi dan tergantung pada epitop, antibodi dapat mengerahkan efek antagonis atau
agonis, atau mungkin non-modulasi. Epitop juga bisa mempengaruhi kemampuan
antibodi untuk menginduksi ADCC dan CDC. Antibodi monoklonal mengerahkan
farmakologisnya efek melalui berbagai mekanisme yang mencakup modulasi langsung
dari antigen target, CDC dan ADCC, dan pengiriman radionuklida atau imunotoksin
untuk menargetkan sel.

1. Modulasi Langsung Target Antigen

Contoh modulasi langsung dari antigen target termasuk terapi anti-TNFα,
anti-IgE dan anti-CD11a yang terlibat dalam pemblokiran dan / atau penghapusan

9
 antigen target. Sebagian besar antibodi monoklonal bekerja melalui berbagai
mekanisme dan dapat menunjukkan kooperatif dengan terapi bersamaan.

2. Sitotoksisitas Ketergantungan-Komplemen (CDC)

Sistem komplemen adalah bagian penting dari sistem kekebalan bawaan.
Terdiri dari dari banyak enzim yang membentuk kaskade dengan masing-masing
enzim bertindak sebagai katalis. Hasil CDC dari interaksi antibodi monoklonal
yang terikat sel dengan protein dari sistem komplemen. CDC adalah diprakarsai
oleh pengikatan protein komplemen, C1q,ke domain Fc. Isotipe IgG1 dan IgG3
memilikiaktivitas CDC tertinggi, sedangkan isotipe IgG4 tidak memiliki C1q
aktivasi yang mengikat dan komplemen. Setelah mengikat ke kompleks imun, C1q
mengalami perubahan konformasi dan hasilnya diaktifkan kompleks memulai
kaskade enzimatik yang melibatkan melengkapi protein C2 hingga C9 dan
beberapa lainnya faktor-faktor. Kaskade ini menyebar dengan cepat dan berakhir
dipembentukan kompleks serangan membran (MAC), yang menyisipkan ke dalam
membran target dan menyebabkan gangguan osmotik dan lisis target.Gambar 4
menggambarkan mekanisme untuk CDC rituximab (antibodi chimeric, yang
menargetkanAntigen CD20) sebagai contoh.

3. Sitotoksisitas Sel Ketergantungan Antibodi (ADCC)

ADCC adalah mekanisme kekebalan yang dimediasi sel dimana sel efektor
dari sistem kekebalan tubuh secara aktif melisis sel target yang telah diikat oleh
antibodi spesifik. Ini adalah salah satu mekanisme melalui antibodi, sebagai bagian
dari humoral respon imun, dapat bertindak membatasi dan mengandung infeksi.
ADCC klasik dimediasi oleh alami sel pembunuh, NK, monosit atau makrofag
tetapi ADCC alternatif digunakan oleh eosinofil untuk membunuh cacing parasit.
ADCC adalah bagian dari respon imun adaptif karena sifatnya ketergantungan pada
respons antibodi sebelumnya. Itu ADCC khas melibatkan aktivasi sel NK, monosit
atau makrofag dan tergantung pada pengakuan sel yang terinfeksi antibodi yang
dilapisi oleh Reseptor Fc pada permukaan sel-sel ini. Fc reseptor mengenali bagian
Fc dari antibodi tersebut sebagai IgG, yang mengikat permukaan patogen yang
terinfeksi sel target. Reseptor Fc yang ada di permukaan sel NK disebut CD16 atau

10
 FcγRIII. Sekali terikat pada reseptor Fc dari IgG yang dikeluarkan sel NK sitokin
seperti IFN-γ, dan butiran sitotoksik seperti perforin dan granzyme yang masuk ke
sel target dan mempromosikan kematian sel dengan memicu apoptosis. Ini adalah
mirip dengan, tetapi independen dari, respons oleh sitotoksikSel-T. Gambar 5
menggambarkan mekanisme untuk ADCC dengan rituximab sebagai contoh.

4. Apoptosis
Antibodi monoklonal mencapai efek terapeutiknya melalui berbagai
mekanisme. Selain hal di atas fungsi efektor disebutkan mereka dapat memiliki
langsung efek dalam memproduksi apoptosis atau sel yang diprogram kematian. Ini
ditandai dengan degradasi DNA nuklir, degenerasi dan kondensasi nuklir, dan
fagositosis dari sisa-sisa sel.

C. Proses Pengembangan / Pengembangan Operasi

Koneksi antara ilmu dasar dan klinis adalah bagian penting dari kedokteran
translasi, tujuannya adalah untuk menerjemahkan pengetahuan diperoleh dari ilmu
dasar menjadi terapi praktis aplikasi untuk pasien.

Gambar ADCC. Dalam situasi ini rituximab menargetkan antigen CD20. Antigen ini diekspresikan
pada sejumlah besar keganasan sel-B. Fragmen Fc dari antibodi monoklonal mengikat
reseptor Fc yang ditemukan pada monosit, makrofag, dan sel NK. Sel-sel ini pada gilirannya
menelan sel tumor yang terikat dan menghancurkannya. Sel NK mensekresi sitokin yang
menyebabkan kematian sel, dan mereka juga merekrut sel B. Singkatan: ADCC, sitotoksisitas
seluler yang tergantung-antibodi; NK, pembunuh alami.

11
 Kerangka kerja kedokteran translasi ini diterapkan selama proses penemuan dan
pengembangan obat dari antibodi spesifik terhadap penyakit tertentu. Termasuk
langkah-langkah utama seperti bantuan yang penting dan target antigen patofisiologis
yang layak untuk Manfaat penyakit dengan cara yang bermanfaat, menghasilkan
mAbs dengan elemen struktural memberikan PK optimal, Mengakses mAb dalam
keamanan dan kemanjuran non-klinis model, dan akhirnya studi klinis pada pasien.
Sebuah ikhtisar fase pengembangan untuk suatu molekul dan berbagai kegiatan di
bidang PK / PD / toksikologi diuraikan pada Gambar 6. Selanjutnya kritis komponen
dari seluruh proses pengembangan mAbs dari perspektif PK / PD menggambarkan di
detail di bagian berikut

1. Penilaian Keselamatan Praklinis dari mAb

Penilaian keselamatan praklinis dari mAb menawarkan keunikan
menantang banyak evaluasi klasik digunakan untuk molekul kecil tidak tepat untuk
terapi protein secara umum dan mAbs di tertentu. Misalnya, tes genotoksikologi in
vitro seperti Ames dan tes penyimpangan kromosom umumnya tidak dilakukan
untuk mAb diberikan interaksi terbatas dengan bahan nuklir dan kekurangannya
dari reseptor / target ekspresi yang sesuai dalam ini sistem.
Karena mAb mengikat cenderung sangat spesifik, model hewan yang cocok
sering terbatas primata non-manusia dan karena alasan ini, banyak model in vivo
yang umum seperti karsinogenesis hewan pengerat bioassay dan beberapa bioassay
farmakologi keselamatan tidak layak untuk kandidat terapi mAb. Untuk studi
toksikologi umum, cynomolgus dan rhesus monyet paling sering dipekerjakan dan
ditawarkan banyak keuntungan diberikan filogenetik dekat mereka hubungan
dengan manusia; Namun, karena logistik, ketersediaan hewan, dan biaya, ukuran
kelompok cenderung jauh lebih kecil daripada yang biasanya digunakan untuk
spesies yang lebih rendah dengan demikian membatasi kekuatan statistik. Dalam
beberapa kasus, alternatif model digunakan untuk memungkinkan studi di tikus.
Daripada langsung menguji terapi kandidat, antibodi monoklonal analog
yang bisa mengikat target epitop pada spesies yang lebih rendah (mis., tikus) dapat
direkayasa dan digunakan sebagai mAb pengganti untuk keamanan evaluasi
(Clarke et al., 2004). Seringkali antibodi kerangka kerja urutan asam amino
dimodifikasi untuk mengurangi antigenisitas dengan demikian memungkinkan

12
studi jangka panjang (Albrecht dan DeNardo, 2006; Weiner, 2006; Cohenuram dan
Saif, 2007). Pendekatan lain adalah dengan gunakan model transgenik yang
mengekspresikan manusia reseptor / target minat (Bugelski et al., 2000); meskipun,
hasilnya harus ditafsirkan dengan hati-hati sebagai model transgenik sering telah
mengubah fisiologi dan biasanya tidak memiliki data latar belakang historis untuk
model.
Untuk mengatasi masalah pengembangan yang ada khusus untuk antibodi
monoklonal dan protein lainnya terapi Konferensi Internasional Harmonisasi (ICH)
telah mengembangkan pedoman khusus untuk evaluasi praklinis dari bioteknologi
obat-obatan (ICH, 1997a). Untuk studi keselamatan umum, pemilihan spesies
adalah pertimbangan penting mengingat kekhususan yang sangat istimewa sering
ditemui dengan mAbs. Model seleksi harus dibenarkan berdasarkan yang sesuai
ekspresi epitop target, mengikat yang sesuai afinitas dengan kandidat terapeutik,
dan sesuai aktivitas biologis dalam sistem uji. Untuk membantu interpretasi hasil,
studi reaktivitas silang jaringan menawarkan kemampuan untuk membandingkan
lokalisasi obat di keduanya jaringan hewan dan manusia.

Gambar Diagram alir yang menggambarkan persyaratan studi PK / PD / toksikologi selama

pengembangan produk obat praklinis dan klinis. Singkatan: BLA, aplikasi lisensi biologik;
IND, aplikasi obat baru investigasi; PD, farmakodinamik; PK, farmakokinetik.

13
 Untuk terapi mAb kandidat, kisaran tiga tingkat dosis atau lebih biasanya
dipilih untuk mencapai relevan secara farmakologis konsentrasi serum, untuk
perkiraan tingkat yang diantisipasi di klinik, dan untuk memberikan informasi di
dosis lebih tinggi dari yang diantisipasi di klinik. Untuk kebanyakan Indikasi,
penting untuk memasukkan tingkat dosis itu memungkinkan identifikasi efek
samping yang tidak dapat diamati level (NOAEL). Jika memungkinkan, dosis
tertinggi seharusnya termasuk dalam kisaran di mana toksisitas diantisipasi;
meskipun, dalam praktiknya banyak antibodi monoklonal tidak menunjukkan
toksisitas dan faktor lain membatasi dosis maksimum.
Untuk mencerminkan eksposur manusia dengan sebaik-baiknya, dosis
sering dinormalisasi dan dipilih agar sesuai dan melebihi paparan terapeutik
manusia yang diantisipasi di plasma, serum atau darah berdasarkan
paparanparameter, area di bawah kurva konsentrasi-waktu (AUC), konsentrasi
maksimum (Cmax) atau konsentrasi sebelum perawatan selanjutnya (Ctrough).
Rute dari administrasi, rejimen dosis dan durasi dosis harus dipilih untuk model
terbaik penggunaan yang diantisipasi dalam uji klinis (ICH, 1997b).
Untuk secara memadai menginterpretasikan hasil studi non-klinis penting
untuk mengkarakterisasi respons ATA. Untuk mAbs manusia, respons ATA sangat
menonjol pada spesies yang lebih rendah tetapi juga terbukti pada non-manusia
primata meskipun pada tingkat yang lebih rendah, membuat spesies inilebih layak
untuk studi toksisitas kronis. ATA bisa berdampak pada aktivitas obat dalam
berbagai cara. Netralisasi ATA adalah yang mengikat pada terapi dalam cara yang
mencegah aktivitas, seringkali dengan menghambat mengikat langsung ke epitope
target. Non-netralisasi Antibodi juga dapat secara tidak langsung mempengaruhi
aktivitas obat, untuk contoh pembersihan cepat kompleks obat-ATA dapat secara
efektif mengurangi konsentrasi obat serum.
Di situasi di mana respons ATA yang menonjol diharapkan, administrasi
kelipatan dosis tinggi dosis klinis yang diantisipasi dapat mengatasi masalah ini
dengan mempertahankan konsentrasi sirkulasi yang memadai obat aktif. Untuk
menafsirkan hasil studi dengan benar penting untuk menggambarkan insiden dan
besarnya ATA sebagai terjadinya respons ATA bisa menutupi toksisitas. Atau,
respons ATA yang kuat mungkin menginduksi tanda-tanda toksisitas yang

14
signifikan seperti infus terkait anafilaksis yang mungkin tidak dapat diprediksi hasil
manusia di mana pembentukan ATA mungkin terjadi lebih sedikit masalah. Jika
pembentukan ATA jelas berdampak tingkat obat yang beredar, individu yang
positif ATA sering dihapus dari pertimbangan saat mengevaluasi Parameter PK
untuk lebih mencerminkan PK yang diantisipasi di populasi manusia.

1. Farmakokinetik
Program PK menyeluruh dan ketat di awal fase pengembangan obat
praklinis dapat menyediakan hubungan antara penemuan obat dan
perkembangan praklinis. Informasi PK dapat ditautkan ke PD oleh pemodelan
matematika, yang memungkinkan mengkarakterisasi perjalanan waktu dari
intensitas efek dihasilkan dari rejimen dosis tertentu. Antibodi sering
menunjukkan sifat PK yang jauh lebih banyak kompleks daripada yang
biasanya terkait dengan molekul kecil obat-obatan.

Tabel 3 merangkum perbedaan PK antara obat molekul kecil dan antibodi terapeutik
tentang PK

15
 Di bagian berikut kami telah meringkas dasar karakteristik antibodi PK. PK
antibodi sangat berbeda dari yang kecil molekul. Tabel 3 merangkum perbedaan
PK antara obat molekul kecil dan antibodi terapeutik tentang PK. Sensitif dan
akurat metode bioanalitik sangat penting untuk interpretasi PK. Namun, untuk
mAbs, immunoassays dan metodologi bioassay sering kurang spesifik sebagai
dibandingkan dengan tes yang digunakan untuk obat-obatan molekul kecil (mis.,
LC / MS / MS).
Antibodi monoklonal ditangani oleh tubuh sangat berbeda dari molekul
kecil. Di berbeda dengan obat molekul kecil, metabolisme khas enzim dan protein
transporter seperti sitokrom P450, pompa efluks multi-obat tidak terlibat dalam
disposisi mAb. Karena itu, interaksi obat-obat pada level obat ini enzim
metabolisme dan transporter tidak menyulitkan faktor dalam proses pengembangan
obat mAbs dan tidak perlu ditangani secara in vitro dan studi in vivo. MAb utuh
tidak dapat dibersihkan oleh ginjal normal karena berat molekul besar; Namun,
proses pembersihan ginjal dapat memainkan peran penting peran dalam
penghapusan molekul yang lebih kecil berat molekul seperti Fabs dan diturunkan
secara kimia obat-obatan molekul kecil. Penyerapan yang berbeda, Distribusi,
Metabolisme, dan Eliminasi (ADME) proses yang terdiri dari PK mAb akan
dibahas secara terpisah untuk mengatasi kekhasan masing-masing.

a. Penyerapan
Antibodi monoklonal tidak diberikan secara oral karena stabilitas
pencernaan mereka terbatas, rendah lipofilisitas, dan ukuran yang semuanya
menghasilkan kekurangan resistensi terhadap gastrointestinal proteolitik yang
bermusuhan lingkungan dan permeasi yang sangat terbatas melalui dinding
usus lipofilik. Karena itu, intravena administrasi masih merupakan rute yang
paling sering digunakan, yang memungkinkan untuk pengiriman sistemik
segera besar volume produk obat dan menyediakan lengkap ketersediaan
sistemik. Dari catatan, 6 dari lebih dari 20 FDA terapi antibodi yang disetujui
tercantum dalam Tabel 1 adalah dikelola oleh rute ekstravaskular [adalimumab
(SC), efalizumab (SC), omalizumab (SC), alefacept (IM), palivizumab (IM),
ranibizumab [intravitreal injeksi (ITV)].

16
 Mekanisme penyerapan SC atau administrasi IM kurang dipahami.
Namun, diyakini bahwa penyerapan mAb setelah IM atau SC kemungkinan
melalui lalur limfatik berat molekul besar mereka, menyebabkan lambat tingkat
penyerapan. Ketersediaan hayati untuk antibodi setelah pemberian SC atau IM
dilaporkan sekitar 50% hingga 100% dengan maksimal konsentrasi plasma
diamati 1 hingga 8 hari setelahnya administrasi.
Perbedaan menarik dalam PK juga telah diamati antara berbagai situs
pemberian dosis IM. PAmAb, mAb manusia sepenuhnya terhadap Bacillus
anthracis protektif antigen, memiliki PK yang sangat berbeda antara IM-GM
(situs gluteus maximus) dan IM-VL (vastus situs lateralis) suntikan pada
relawan sehat. Ketersediaan hayati PAmAb adalah 50-54% untuk injeksi IM-
GM dan 71% untuk 85% untuk injeksi IM-VL. Sebagai catatan, mAbs
tampaknya memiliki bioavailabilitas yang lebih besar setelah pemberian SC
pada monyet daripada pada manusia Ketersediaan hayati rata-rata adalimumab
ada di sekitar 64% dengan Cmax 4,7 ± 1,6 μg / mL dan Tmax 131 ± 56 jam
setelah administrasi SC tunggal 40mg di subyek dewasa yang sehat.
Berarti bioavailabilitas omalizumab adalah sekitar 62% dan konsentrasi
serum puncak diamati pada 7 sampai 8 hari setelah dosis SC tunggal pada
pasien dengan asma. Anti-interleukin-5 monoklonal yang dimanusiakan
dilaporkan telah menyelesaikan penyerapan (118% ± 1,16%) pada monyet
mengikuti administrasi SC. Temuan serupa juga diamati untuk adalimumab
setelah pemberian SC tunggal pada monyet (96%).

b. Distribusi
Setelah mencapai aliran darah, mAbs menjalani disposisi biphasic dari
serum, dimulai dengan a fase distribusi cepat. Volume distribusi kompartemen
distribusi yang cepat relatif kecil dalam kisaran volume plasma. Dilaporkan
demikian volume kompartemen pusat (Vc) sekitar 2 hingga 3 L dan volume
distribusi kondisi tunak (Vss) adalah sekitar 3,5 hingga 7 L untuk mAbs pada
manusia. Vc kecil dan Vss untuk mAbs menunjukkan bahwa distribusi mAbs
adalah terbatas pada darah dan ruang ekstraseluler atau jaringan target, yang

17
sesuai dengan jaringan mereka sifat hidrofilik sehingga membatasi akses ke
kompartemen jaringan lipofilik dan molekulnya yang besar bobot.
Volume distribusi yang kecil adalah konsisten dengan jaringan yang
relatif kecil: rasio darah untuk sebagian besar antibodi biasanya berkisar dari
0,1 hingga 0,5. Otak dan cairan serebrospinal secara anatomis dilindungi oleh
penghalang jaringan darah. Oleh karena itu, kedua kompartemen distribusi
sangat terbatas kompartemen untuk Abs yang menghalangi akses untuk mAbs
terapi. Misalnya IgG endogen level dalam CSF ditunjukkan hanya di kisaran
0,1 hingga 1% dari level serum masing-masing.
Namun, sudah berulang kali ditunjukkan bahwa Vss yang dilaporkan
diperoleh oleh non-kompartemen tradisional atau analisis kompartemen
mungkin tidak mengoreksi beberapa mAbs dengan tingkat katabolisme yang
tinggi dalam jaringan. Tingkat dan luasnya antibodi distribusi akan tergantung
pada kinetika ekstravasasi antibodi dalam jaringan, distribusi dalam jaringan,
dan eliminasi dari jaringan. Konveksi, difusi, transcytosis, mengikat dan
katabolisme faktor penentu penting untuk distribusi antibodi. Oleh karena itu,
Vss mungkin jauh lebih besar dari volume plasma di Indonesia khusus untuk
mAb yang menunjukkan ikatan tinggi afinitas dalam jaringan. Efek kehadiran
spesifik reseptor (mis., antigen sink) pada distribusi untuk mAb telah
dilaporkan oleh berbagai kelompok penelitian (Danilov et al., 2001; Kairemo et
al., 2001). Danilov et al.(2001) menemukan bahwa anti-PECAM-1 (CD31)
menunjukkan mAbs jaringan: rasio konsentrasi darah 13.1, 10.9, dan 5.96
untuk paru-paru, hati, dan limpa, masing-masing, pada tikus di 2 jam setelah
injeksi. Oleh karena itu, Vss sebenarnya dari anti-PECAM-1 cenderung 15 kali
lipat lebih besar dari volume plasma.
Kompleksitas lain, yang perlu dipertimbangkan, adalah distribusi
melalui interaksi dengan target protein (mis., protein permukaan sel) dan
selanjutnya internalisasi kompleks antigen-mAb mungkin tergantung dosis.
Untuk mAb analog murine dari efalizumab (M17), distribusi tergantung dosis
ditunjukkan oleh jaringan perbandingan: rasio konsentrasi darah untuk hati,
limpa, sumsum tulang, dan kelenjar getah bening setelah pelacak dosis M17
radiolabel dan pengobatan dosis tinggi. Dosis pelacak M17 menghasilkan

18
 secara substansial jaringan yang lebih tinggi: rasio konsentrasi darah 6,4, 2,8,
1,6, dan 1,3 untuk paru-paru, limpa, sumsum tulang, dan getah bening simpul,
masing-masing, pada tikus pada 72 jam setelah injeksi. Padahal, kejenuhan
antigen target pada tingkat dosis tinggi mengurangi distribusi jaringan ke target
distribusi independen dan hasilnya ke dalam jaringan yang jauh lebih rendah:
konsentrasi darahrasio (kurang dari satu).
FcRn dapat memainkan peran penting dalam transportasi IgGs dari
plasma ke cairan interstitial jaringan. Namun, efek FcRn pada jaringan mAbs
distribusi belum sepenuhnya dipahami. Ferl et al. (2005) melaporkan bahwa
farmakokinetik berbasis fisiologis (PBPK) model, termasuk interaksi kinetik
antara mAb dan FcRn di dalamnya kompartemen intraseluler, bisa
menggambarkan biodistribusi dari mAb anti-CEA dalam berbagai jaringan
kompartemen seperti plasma, paru-paru, limpa, tumor, kulit, otot, ginjal,
jantung, tulang dan hati. FcRn tadinya juga dilaporkan memediasi IgG
melintasi plasenta hambatan (Junghans, 1997) dan transportasi vektor IgG ke
dalam lumen usus dan paru-paru.

c. Bersihan Antibodi
Antibodi terutama dibersihkan oleh katabolisme dan dipecah menjadi
fragmen peptida dan asam amino yang dapat didaur ulang-digunakan sebagai
pasokan energi atau untuk sintesis protein baru. Karena berat molekul kecil
fragmen antibodi (mis. Fab dan Fv), eliminasi fragmen ini lebih cepat dari IgG
utuh, dan mereka dapat disaring melalui glomerus dan diserap kembali dan /
atau dimetabolisme oleh sel tubulus proksimal nephron. Beberapa penelitian
melaporkan bahwa ginjal itu rute utama untuk katabolisme Fab dan
penghapusan Fab yang tidak berubah.
IgG memiliki paruh sekitar 21 hari dengan nilai pembersihan sekitar 3
hingga 5 mL/hari / kg kisaran dosis yang digunakan secara klinis menghasilkan
PK linier. Pengecualian adalah IgG3, yang hanya memiliki waktu paruh 7 hari.
Waktu paruh IgG jauh lebih lama dari yang lain Igs (IgA 6 hari, IgE 2,5 hari,
IgM 5 hari, IgD 3 hari). Laporan terbaru menunjukkan bahwa FcRn reseptor
adalah penentu utama disposisi Antibodi IgG. FcRn, yang melindungi IgG dari

19
katabolisme dan berkontribusi lama waktu paruh plasma IgG, pertama kali
didalilkan oleh Brambell pada tahun 1964. dan dikloning pada akhir 1980-an
(Simister dan Mostov, 1989a, b). FcRn adalah heterodimer yang terdiri dari
rantai β2m dan a Kelas MHC-rantai berat. Reseptornya adalah di mana-mana
diekspresikan dalam sel dan jaringan. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa
pembersihan IgG dalam sistem β2m tikus dan tikus knockout rantai berat FcRn
(Roopenian et al., 2003) meningkat 10 hingga 15 kali lipat, tanpa perubahan
dalam eliminasi Igs lainnya. Gambar 7 menggambarkan bagaimana FcRn
melindungi IgG dari katabolisme dan berkontribusi pada paruh panjangnya. Itu
FcRn berikatan dengan IgG dengan cara bergantung pada pH: mengikat IgG
pada pH asam (6.0) di endosome dan melepaskan IgG pada pH fisiologis (7.4).
Tidak terikat IgG berlanjut ke lisosom dan mengalami proteolisis.
Hal ini menunjukkan bahwa waktu paruh IgG tergantung pada
afinitasnya dengan FcRn. Waktu paruh IgG3 yang lebih pendek dikaitkan
dengan afinitas ikatan yang rendah dengan FcRn. Murine mAbs memiliki
waktu paruh serum 1 hingga 2 hari pada manusia. Itu paruh pendek antibodi
murine pada manusia disebabkan untuk afinitas ikatan mereka yang rendah
dengan FcRn manusia reseptor. Dilaporkan bahwa FcRn manusia berikatan
dengan manusia, kelinci, dan kelinci percobaan, tetapi tidak untuk tikus, IgG
tikus, domba dan sapi; namun, mouse FcRn mengikat IgG dari semua spesies
ini (Ober et al., 2001). IgG1 manusia yang direkayasa telah sifat yang berbeda
dalam murine dan sistem manusia (Vaccaro et al., 2006). IgG yang direkayasa
dengan yang lebih tinggi afinitas terhadap FcRn memiliki waktu paruh 2
hingga 3 kali lipat lebih lama dibandingkan dengan WT pada tikus dan monyet.
Dua direkayasa mutan IgG1 manusia dengan afinitas pengikatan yang
ditingkatkan FcRn manusia menunjukkan paruh jauh diperpanjang
dibandingkan dengan tipe liar di hFcRn transgenik tikus (4,35 ± 0,53, 3,85 ±
0,55 hari vs 1,72 ± 0,08 hari). Hinton et al. (2006) menemukan itu waktu paruh
mutan IgG1 FcRn dengan meningkatnya ikatan afinitas dengan FcRn manusia
pada pH 6,0 adalah sekitar 2,5- lipat lebih panjang dari WT Ab pada monyet
(838 ± 187 jam vs. 336 ± 34 jam).

20
 Dosis proporsional, pembersihan linier telah diamati untuk mAb
terhadap antigen terlarut dengan rendah level endogen (seperti TNF-α, IFN-α,
VEGF dan IL-5). Sebagai contoh, PK linier telah diamati untuk a mAb yang
dimanusiakan diarahkan ke human interleukin-5 setelah pemberian intravena
lebih dari 6000 kali lipat kisaran dosis (0,05–300 mg / kg) pada monyet (Zia-
Amirhosseini et al., 1999). Pembersihan rhuMAb terhadap faktor pertumbuhan
endotel vaskular setelah IV dosis (2-50 mg / kg) berkisar 4,81-5,59 mL / hari /
kg dan tidak tergantung pada dosis (Lin et al., 1999). Rerata total serum
clearance dan estimasi berarti paruh paruh adalimumab dilaporkan berkisar
antara 0,012 hingga 0,017 L / jam, 10,0 hingga 13,6 hari, masing-masing,
untuk uji klinis lima kohort (0,5-10mg / kg), dengan waktu paruh rata-rata
keseluruhan 12 hari (den Broeder et al., 2002). Namun, mAb tidak larut antigen
dengan kadar endogen tinggi (seperti IgE) pameran PK non-linear. PK
omalizumab, sebuah antibodi terhadap IgE, linier hanya pada dosis yang lebih
besar dari 0,5mg / kg (Petkova et al., 2006; Xolair, 2006).
Eliminasi mAb juga dapat dipengaruhi oleh interaksi dengan antigen
terikat sel yang ditargetkan, dan Fenomena ini ditunjukkan oleh
ketergantungan dosis izin dan waktu paruh. Pada dosis rendah, mAbs
menunjukkan waktu paruh yang lebih pendek dan izin lebih cepat karena
eliminasi yang dimediasi reseptor. Dengan meningkatnya dosis, reseptor
menjadi jenuh; paruh secara bertahap meningkat menjadi konstan; dan
pembersihan secara bertahap berkurang ke konstan. Afinitas pengikat (Kd),
densitas antigen dan laju pergantian antigen mungkin mempengaruhi eliminasi
yang dimediasi reseptor. Koon et al. (2006) menemukan korelasi terbalik yang
kuat antara ekspresi sel CD25þ dan daclizumab (mAb yang secara spesifik
mengikat CD25) paruh. Telah terbukti bahwa PK murine anti-manusia
Antibodi CD3 dapat ditentukan oleh hilangnya antigen target. Pada monyet dan
tikus, pembersihan SGN-40, monoklonal yang dimanusiakan antibodi anti-
CD40, jauh lebih cepat di rendah dosis, menunjukkan PK non-linear (Kelley et
al., 2006). Di Selain itu, Ng et al. (2006) menunjukkan bahwa anti-CD4
antibodi monoklonal memiliki ~ 5 kali lipat CL lebih cepat pada 1 mg / dosis
kg dibandingkan dengan dosis 10mg / kg (7,8 ± 0,6 vs 37,4 ± 2,4 mL / hari /

21
kg) pada sukarelawan sehat. Mereka juga menemukan bahwa CL yang
dimediasi reseptor berkontribusi 8,69%, 27,1%, dan 41,7% dari total CL ketika
dosis masing-masing adalah 1, 5, dan 10 mg / kg.
Eliminasi mAb juga dapat dipengaruhi oleh interaksi dengan antigen
terikat sel yang ditargetkan, dan Fenomena ini ditunjukkan oleh
ketergantungan dosis izin dan waktu paruh. Pada dosis rendah, mAbs
menunjukkan waktu paruh yang lebih pendek dan izin lebih cepat karena
eliminasi yang dimediasi reseptor. Dengan meningkatnya dosis, reseptor
menjadi jenuh; paruh secara bertahap meningkat menjadi konstan; dan
pembersihan secara bertahap berkurang ke konstan. Afinitas pengikat (Kd),
densitas antigen dan laju pergantian antigen mungkin mempengaruhi eliminasi
yang dimediasi reseptor. Koon et al. (2006) menemukan korelasi terbalik yang
kuat antara ekspresi sel CD25þ dan daclizumab (mAb yang secara spesifik
mengikat CD25) paruh. Telah terbukti bahwa PK murine anti-manusia
Antibodi CD3 dapat ditentukan oleh hilangnya antigen target (Meijer et al.,
2002). Pada monyet dan tikus, pembersihan SGN-40, monoklonal yang
dimanusiakan antibodi anti-CD40, jauh lebih cepat di rendah dosis,
menunjukkan PK non-linear (Kelley et al., 2006). Di Selain itu, Ng et al.
(2006) menunjukkan bahwa anti-CD4 antibodi monoklonal memiliki ~ 5 kali
lipat CL lebih cepat pada 1 mg / dosis kg dibandingkan dengan dosis 10mg / kg
(7,8 ± 0,6 vs 37,4 ± 2,4 mL / hari / kg) pada sukarelawan sehat. Mereka juga
menemukan bahwa CL yang dimediasi reseptor berkontribusi 8,69%, 27,1%,
dan 41,7% dari total CL ketika dosis masing-masing 1, 5, dan 10 mg / kg.
Imunogenisitas antibodi: Penghapusan mAb pada manusia sering
meningkat dengan meningkatnya level imunogenisitas (Ternant dan Paintaud,
2005; Tabrizi et al., 2006).
Tingkat dan sifat glikosilasi antibodi: studi yang dilakukan oleh
Newkirk et al. (1996) menunjukkan itu Keadaan glikosilasi IgG mempengaruhi
waktu paruh di tikus, dan itu dengan menghapus gula terminal (sialic asam dan
galaktosa), antibodi (IgG2a) akan tetap ada dalam sirkulasi secara signifikan
lebih lama. Namun, baru-baru ini Studi menunjukkan bahwa anti-Aβ mAb

22
 yang dimanusiakan dengan glycans berbeda di wilayah Fc memiliki hal yang
sama pembersihan pada tikus (Huang et al., 2006).
Kerentanan antibodi terhadap proteolisis: Gillies et al. (2002)
meningkatkan paruh paruh antibodi interleukin yang bersirkulasi
2immunocytokine 2 kali lipat dibandingkan dengan tipe liar (1,0 jam vs 0,54
jam) dengan meningkatkan resistensi terhadap degradasi intraseluler.
Fungsi efektor: Fungsi efektor, seperti interaksi dengan FcγR, bisa
juga mengatur eliminasi dan PK mAbs (Mahmood dan Green, 2005). Mutasi
para situs pengikatan FcγRmemiliki efek dramatis pada pembersihan protein
fusi Ab-IL-2 (Gillies et al., 1999).
Obat bersamaan: Methotrexate mengurangi adalimumab pembersihan
yang jelas setelah dosis tunggal dan beberapa dosis masing-masing sebesar
29% dan 44% di pasien dengan rheumatoid arthritis (Humira, 2007). Di Selain
itu, azathioprine dan mikofenolat mofetil dilaporkan mengurangi izin
basiliximab oleh sekitar 22% dan 51%, masing-masing (Simulect, 2005).
Interaksi ini dapat dijelaskan oleh efek obat molekul kecil pada ekspresi
Reseptor Fcγ. Telah ditemukan metotreksat itu berdampak pada profil ekspresi
FcγRI pada monosit secara signifikan pada rheumatoid arthritis pasien
(Bunescu et al., 2004).
Demografi: Berat badan, usia, keadaan penyakit, dan faktor lain juga
dapat mengubah mAb PK (Mold dan Sweeney, 2007) (lihat diskusi tentang
“Population PK”).

2. Prediksi Manusia PK / PD Berdasarkan Informasi Praklinis

Sebelum studi manusia pertama, beberapa praklinis in vivo dan percobaan
in vitro dilakukan untuk memahami PK dari potensi obat baru serta keamanannya
dan kemanjuran dalam model hewan. Namun, yang paling utama Tujuannya adalah
setiap saat untuk memprediksi bagaimana ini praklinis hasil pada PK, keamanan
dan kemanjuran diterjemahkan menjadi diberikan populasi pasien. Karena itu,
prediksi manusia PK, keamanan dan kemanjuran adalah fokus dari obat awal
pengembangan mengakui kesamaan dan perbedaan antara model praklinis dan

23
populasi pasien masing-masing (lihat bagian "Penilaian Keselamatan Praklinis
mAbs").
Selama bertahun-tahun, banyak teori dan berbeda pendekatan telah
diusulkan dan digunakan untuk penskalaan data praklinis ke data klinis. Gambar 8
menggambarkan prediksi manusia PK / PD berdasarkan praklinis informasi. Skala
alometrik adalah yang paling sederhana dan metode yang paling banyak digunakan
(lihat Bab 5), yaitu didasarkan pada hubungan hukum kekuasaan antara tubuh
ukuran dan parameter fisiologis dan anatomi. Ini dapat dijelaskan dengan
persamaan: Y¼a ⋅BWb, di mana Y adalah parameter PK (seperti CL, V); BW
adalah tubuh bobot; a adalah koefisien; b adalah eksponen dari persamaan
alometrik. Potensi hidup maksimum, otak berat, dan persamaan daya dua istilah
telah diusulkan sebagai faktor koreksi untuk meningkatkan prediksi untuk CL.
Keakuratan prediksi PK parameter oleh penskalaan alometrik tergantung pada
banyak faktor, seperti spesies, desain eksperimental, kesalahan analitis, dan lain-
lain (Mahmood, 2005; Tang dan Mayersohn, 2005). Namun, hanya ada sedikit
melaporkan prediksi PK menggunakan penskalaan alometrik untuk mAbs. Lin et al.
(1999) memproyeksikan CL bevacizumab pada manusia sebagai ~ 2.4 mL / hari /
kg berdasarkan sederhana prinsip penskalaan alometrik. Juga Kelley et al. (2006)
menggunakan alometri sederhana untuk memprediksi CL dari CD40 mAb sekitar
12 mL / hari / kg pada manusia. Untuk dua contoh ini, izin manusia dikonfirmasi
harus sesuai dengan praklinis prediksi oleh alometri.
Pendekatan lain untuk penskalaan antarspesies adalah pemodelan
farmakokinetik berbasis fisiologis (PBPK), yang menetapkan PK hewan
berdasarkan pada data pre-provinsi in vitro dan in vivo pada langkah pertama. Di
langkah kedua, model ini kemudian diskalakan ke manusia dengan menggunakan
informasi fisiologis manusia seperti aliran darah, volume jaringan serta beberapa
potensi data in vitro manusia tambahan. Meskipun PBPK pemodelan menyediakan
evaluasi berbasis mekanisme disposisi obat, pendekatan ini mahal, secara
matematis kompleks dan memakan waktu. Karena itu dalam narkoba
pengembangan dan penemuan, model PBPK tidak sama banyak digunakan
dibandingkan dengan allometri. Namun, untuk scaling antarspesies mAb,
memungkinkan pemodelan PBPK untuk mengeksplorasi beberapa faktor fisiologis

24
dengan simulasi teknologi yang tidak dapat dimasukkan ke dalam metode
penskalaan alometrik empiris, seperti ikatan afinitas, kinetika pengikat, dan PK
non-linear. Baxter et al. (1995) menggunakan model PBPK untuk memprediksi PK
mAb terhadap antigen carcinoembryonic pada manusia di Indonesia berbagai
jaringan termasuk kompartemen tumor. Saya t juga telah ditunjukkan bahwa model
PBPK termasuk Komponen FcRn bekerja sangat baik untuk menggambarkan PK
dari mAb utuh dan Fab di jaringan berbeda di tikus, dengan atau tanpa tumor.

Gambar 8 Pendekatan penskalaan PK / PD dari studi praklinis ke manusia. (A) Pendekatan

penskalaan secara keseluruhan. (B) penskalaan alometrik. (C) Pendekatan Dedrick Dasar.
Singkatan: Cyno, Cynomolgus monyet; PK, farmakokinetik; PD, farmakodinamik.

Selain itu, metode waktu spesies-invarian (Mahmood, 2005) dan pemodelan

efek campuran non-linear (Martin-Jimenez dan Riviere, 2002; Jolling et al., 2005)
telah digunakan untuk penskalaan antar spesies untuk skala kecil molekul. Metode
waktu spesies-invarian, juga disebut Pendekatan Dedrick, pertama kali dijelaskan
pada 1973 (Dedrick, 1973).

25
 Waktu fisiologis, waktu yang diperlukan untuk melengkapi spesies
fisiologis independen acara, dapat diperoleh dengan transformasi kronologis waktu
menjadi spesies waktu invarian (setara waktu, kallynochron, apolysichron, dan
dienetichron). Dalam hal PK mengikuti alometrik prinsip transformasi kronologis
ke waktu fisiologis harus memberikan tumpang tindih profil konsentrasi waktu
untuk semua spesies. Dalam bukunya karya perintis yang diperlihatkan oleh
Dedrick metotreksat sebagai senyawa model (Dedrick, 1973).
Penskalaan alometrik antar spesies juga bisa dilakukan dengan
menggunakan pendekatan populasi (non-linear teknik pemodelan efek campuran).
Koefisien alometrik dan eksponen serta variabilitas dari antar hewan, intra hewan
dan antar spesies dan kesalahan acak dapat diperkirakan dalam satu langkah dengan
menggunakan pendekatan ini. Karena kerumitan PD, segala ekstrapolasi bagi
manusia membutuhkan pertimbangan yang lebih kompleks daripada untuk PK.
Melalui pemodelan dan integrasi PK / PD skala antarspesies dari PK, PD pada
manusia mungkin diprediksi jika hubungan PK / PD diasumsikan sama antara
model hewan dan manusia. Untuk misalnya, model PK / PD pertama kali
dikembangkan untuk mengoptimalkan rejimen dosis mAb terhadap EGF / r3
menggunakan tikus telanjang yang mengandung tumor model penyakit manusia
(Duconge et al., 2004). Ini Model PK / PD kemudian diintegrasikan dengan
alometrik scaling untuk menghitung jadwal dosis yang diperlukan dalam a uji klinis
potensial untuk mencapai efek tertentu (Duconge et al., 2004). Singkatnya,
perbedaan spesies dalam antigen kepadatan, pengikatan antigen-antibodi, dan
kinetika antigen, perbedaan FcRn yang mengikat antar spesies, perlu
imunogenisitas dan faktor-faktor lain dipertimbangkan selama penskalaan PK / PD
mAb dari hewan ke manusia.
3. PK / PD dalam Pengembangan Klinis PT Terapi Antibodi
Beberapa perkembangan baru telah terjadi di terapi antibodi dalam beberapa
tahun terakhir. Penekanannya di lapangan telah tumbuh dan jelas oleh kenyataan itu
banyak perusahaan sekarang terlibat dalam pembangunan kolaborasi berbasis
produk antibodi. Pengembangan obat secara tradisional telah dilakukan secara
berurutan fase, dibagi menjadi praklinis dan klinis fase I-IV. Selama fase
pengembangan molekul, keamanan dan karakteristik PK / PD didirikan untuk

26
 mempersempit kompleks dipilih untuk pengembangan dan rejimen dosisnya. Ini
proses pengumpulan informasi baru-baru ini telah ditandai sebagai dua siklus
pembelajaran-konfirmasi yang berurutan (Sheiner, 1997; Sheiner dan Wakefield,
1999).
Siklus pertama (Fase I dan IIa) terdiri belajar tentang dosis yang ditoleransi
secara sehat subyek dan mengkonfirmasikan bahwa dosis ini memiliki beberapa
manfaat terukur pada pasien yang ditargetkan. Sebuah jawaban afirmatif pada
siklus pertama ini menyediakan pembenaran untuk learningconfirm kedua yang
lebih besar dan lebih mahal siklus (Fase IIb dan III), tempat pembelajaran langkah
difokuskan pada bagaimana menggunakan manfaat / risiko obat rasio, sedangkan
langkah konfirmasi ditujukan untuk menunjukkan manfaat / risiko yang dapat
diterima pada pasien besar populasi (Meibohm dan Derendorf, 2002). Dalam
bagian berikut kami telah menyediakan studi kasus dengan efalizumab sebagai
antibodi terapeutik yang disetujuiuntuk memahami berbagai langkah selama
pengembangan antibodi untuk berbagai indikasi.
Ringkasan data PK / PD keseluruhan dari banyak penelitian dalam
efalizumab (Raptiva ) program pengembangan klinis dan terintegrasi ikhtisar
tentang bagaimana data ini digunakan untuk pengembangan dan pemilihan dosis
yang disetujui efalizumab untuk psoriasis akan dibahas secara rinci. Psoriasis
adalah penyakit kulit kronis yang ditandai oleh diferensiasi keratinosit abnormal
dan hiperproliferasi dan oleh proses inflamasi yang menyimpang di dermis dan
epidermis. Infiltrasi sel T dan aktivasi di kulit dan dimediasi sel-T berikutnya
proses telah terlibat dalam patogenesis psoriasis (Krueger, 2002). Efalizumab
adalah subkutan (SC) yang diberikan IgG1 monoklonal manusiawi rekombinan
antibodi yang telah mendapat persetujuan untuk perawatan pasien dengan psoriasis
di lebih dari 30 negara, termasuk Amerika Serikat dan Uni Eropa (Raptiva, 2004).
Efalizumab adalah penghambat yang ditargetkan Interaksi sel-T (Werther et al.,
1996). Luas Program penelitian praklinis dilakukan untuk belajar keamanan dan
mekanisme aksi (MOA) dari efalizumab. Berbagai studi klinis juga telah dilakukan
dilakukan untuk menyelidiki kemanjuran, keamanan, PK, PD, dan MOA
efalizumab pada pasien dengan psoriasis.
a. Studi Pra-Fase I

27
 Dalam proses pengembangan antibodi terapeutik pemahaman terpadu
tentang konsep (PK / PD) menyediakan alat yang sangat menjanjikan. Lengkap dan
program praklinis yang ketat dalam pembelajaran awal fase pengembangan obat
praklinis dapat memberikan a hubungan antara penemuan obat dan praklinis
pengembangan. Saat itu mengatur panggung untuk lebih jauh kegiatan
pengembangan, informasi yang diperoleh di titik ini adalah kunci untuk langkah
selanjutnya (Meibohm dan Derendorf, 2002). Pada tahap praklinis, potensial
aplikasi mungkin terdiri dari evaluasi in vivo potensi dan aktivitas intrinsik,
identifikasi penanda bio- / pengganti, memahami MOA sebagai serta bentuk
sediaan / pemilihan rejimen dan optimisasi. Beberapa tujuan spesifik ini dijelaskan
di bawah ini dengan informasi tentang efalizumab sebagai contoh.
b. Identifikasi MOA dan PD Biomarker
Identifikasi titik akhir PD yang sesuai adalah sangat penting untuk proses
pengembangan obat. Jadi, biomarker biasanya diuji lebih awal selama eksplorasi
pengembangan praklinis untuk penggunaan potensial mereka sebagai PD atau
endpoint pengganti. Melalui program penelitian praklinis yang luas, biomarker
MOA dan PD untuk efalizumab telah didirikan. Efalizumab mengikat ke CD11a, α-
subunit dari fungsi leukosit antigen-1 (LFA-1), yang diekspresikan pada semua
leukosit, dan menurun ekspresi permukaan sel CD11a. Efalizumab menghambat
pengikatan LFA-1 ke adhesi antar sel molekul-1 (ICAM-1), dengan demikian
menghambat adhesi leukosit ke jenis sel lainnya. Interaksi antara LFA-1 dan
ICAM-1 berkontribusi pada inisiasi dan pemeliharaan berbagai proses, termasuk
aktivasi limfosit T, adhesi limfosit T untuk sel endotel, dan migrasi limfosit T ke
situs peradangan, termasuk kulit.
Konsisten dengan usulan MOA untuk efalizumab, percobaan in vitro telah
menunjukkan bahwa efalizumab mengikat sangat kuat untuk limfosit manusia
dengan Kd sekitar 110 ng / mL (Werther et al., 1996; Dedrick et al., 2002) dan
memblokir interaksi limfosit T manusia dengan sel-sel spesifik jaringan seperti itu
sebagai keratinosit dalam konsentrasi tergantung cara. Setelah memahami MOA,
efek PD relevan dengan MOA efalizumab biasanya diukur untuk mengidentifikasi
dosis manjur terapi antibodi. Sebagai saturasi CD11a situs mengikat oleh
efalizumab telah terbukti meningkat sementara aktivasi sel T semakin dihambat,

28
 saturasi maksimum dari situs pengikatan CD11a terjadi pada konsentrasi
efalizumab> 10 μg / mL, dihasilkan dalam penghambatan sel T maksimum
(Werther et al., 1996; Dedrick et al., 2002). Oleh karena itu, ekspresi CD11a dan
saturasi telah dipilih sebagai PD yang relevan penanda untuk molekul ini.
c. Peran Molekul Pengganti
Peran molekul pengganti dalam menilai ADME antibodi terapeutik penting
sebagai antigen batas spesifisitas studi ADME monoklonal yang dimanusiakan
antibodi pada tikus. Dalam pengembangan antibodi terapeutik berbagai molekul
dapat digunakan untuk memberikan pandangan komprehensif tentang PK / PD
mereka properti. Studi dengan pengganti mungkin mengarah ke informasi penting
mengenai keselamatan, mekanisme aksi, disposisi obat, distribusi jaringan dan
farmakologi reseptor, yang mungkin terlalu rumit dan mahal untuk dilakukan di
non-manusia primata.
Pengganti (mouse / tikus) menyediakan sarana untuk mendapatkan
pengetahuan tentang PK dan PD secara praklinis model tikus sehingga
memungkinkan optimasi dosis rasional di klinik. Karena itu dalam kasus
efalizumab untuk lengkapi penilaian keamanan yang lebih komprehensif, a antibodi
CD11a anti-tikus tikus chimeric, muM17, adalah dikembangkan dan dievaluasi
sebagai pengganti spesies-spesifik molekul untuk efalizumab. muM17 mengikat
mouse CD11a dengan kekhususan dan afinitas mirip dengan efalizumab kepada
manusia. Selain itu, muM17 pada tikus ditunjukkan memiliki farmakologis yang
serupa kegiatan seperti yang efalizumab pada manusia (Nakakura et al., 1993;
Clarke et al., 2004). Perwakilan PK profil efalizumab dan muM17 di berbagai
spesies digambarkan pada Gambar 9 untuk membantu memahami spesies
perbedaan dalam perilaku PK molekul.
d. PK dari Efalizumab
Tinjauan singkat efalizumab PK / PD non-klinis hasilnya disediakan di
bagian berikut untuk merangkum pengamatan utama yang mengarah pada
keputusandalam merancang program klinis selanjutnya. ItuProgram ADME terdiri
dari PK, PD (downmodulation CD11a)dan saturasi), dan data toxicokineticdari PK,
PD, dan studi toksikologi dengan efalizumabpada simpanse dan dengan muM17
pada tikus. Penggunaan efalizumab pada simpanse dan muM17 pada tikus untuk

29
PK dan PD dan studi keselamatan didukung oleh penilaian aktivitas in vitro. Data
non-klinis digunakan untuk karakterisasi PK dan PD, berbasis PD pemilihan dosis,
dan dukungan toksikinetik untuk konfirmasi paparan dalam studi toksikologi.
Bersama-sama, ini data telah mendukung kedua desain nonklinis program dan
relevansinya dengan klinis program.
PD yang diamati serta mekanisme aksi efalizumab dan muM17 dikaitkan
dengan pengikatannya dengan CD11a hadir pada sel dan jaringan. Afinitas yang
mengikat dari efalizumab kepada manusia dansimpanse CD11a pada limfosit CD3
sebanding mengkonfirmasikan penggunaan simpanse sebagai nonklinis yang valid
model untuk manusia. Ekspresi CD11a telah diamati sangat berkurang pada T-
limfosit di simpanse dan tikus yang diobati dengan efalizumab dan muM17,
masing-masing. Ekspresi CD11a dipulihkan karena efalizumab dan muM17
dieliminasi dari plasma. Ketersediaan hayati efalizumab pada simpanse dan
muM17 pada tikus setelah dosis SC tergantung dosis dan berkisar antara 35%
hingga 48% dan 63% hingga 89% pada simpanse dan tikus, masing-masing.
Mengikat ke CD11a berfungsi sebagai jalur utama untuk pembersihan ini molekul,
yang mengarah ke PK non-linear tergantung pada jumlah relatif CD11a dan
efalizumab atau muM17 (Coffey et al., 2005).

Gambar 9 Molekul perbandingan anti-CD11a PK profil pada manusia, simpanse, kelinci dan tikus
yang mengikuti dosis SC. Karena perbedaan spesies dalam pengikatan, farmakokinetik dari

30
 efalizumab bersifat non-linear (mis., Tergantung dosis) pada manusia dan simpanse
sementara linear pada kelinci (spesies tidak mengikat). muM17, di sisi lain, berikatan dengan
mouse anti-CD11a dan menunjukkan farmakokinetik yang tergantung dosis pada tikus.

Disposisi efalizumab dan mouse pengganti muM17 terutama ditentukan

oleh kombinasi dari kedua interaksi spesifik dengan ligand-CD11a dan dengan
kerangka IgG1 mereka dan dibahas secara rinci sebagai berikut. Faktor-faktor yang
mengendalikan disposisi antibodi ini ditunjukkan pada Gambar 10 dan termasuk
yang berikut ini:
1) Pengikatan antibodi gratis dengan ligannya CD11a hadir pada kedua limfosit yang
bersirkulasi dan jaringan mengarah pada pengangkatannya dari sirkulasi. Data
menunjukkan bahwa antibodi anti-CD11a adalah diinternalisasi oleh sel-T yang
dimurnikan dan pada internalisasi, antibodi tampaknya menjadi sasaran untuk
lisosom dan dibersihkan dari dalam sel dalam tergantung waktu. Internalisasi yang
dimediasi CD11a dan penargetan lisosomal dari efalizumabmungkin merupakan
satu jalur dimana antibodi ini dibersihkan in vivo (Coffey et al., 2005).
2) Mengikat ke CD11a bersifat spesifik dan jenuh ditunjukkan oleh clearance
tergantung dosis efalizumab pada simpanse dan manusia atau muM17 pada tikus.
3) Karena kerangka kerja IgG1-nya, gratis atau tidak terikat tingkat efalizumab atau
muM17 juga mungkin dipengaruhi oleh:
a) Sebuah daur ulang dan sirkulasi berikut mengikat dan internalisasi oleh reseptor
Fc neonatal (FcRn),
b) serapan dan pembersihan non-spesifik oleh jaringan,
c) mengikat melalui kerangka Fc-nya ke reseptor Fc hadir pada endotel sinusoidal
hati sel.
Disposisi efalizumab diatur oleh spesies spesifisitas dan afinitas antibodi
untuk itu ligan CD11a, jumlah CD11a dalam sistem, dan dosis yang diberikan.
Berdasarkan studi keamanan, efalizumab adalah umumnya ditoleransi dengan baik
pada simpanse dengan dosis hingga 40mg / kg / minggu IV selama 6 bulan,
menyediakanrasio paparan 339 kali lipat berdasarkan dosis kumulatifdan 174
kalilipat berdasarkan AUC kumulatif, dibandingkandengan dosis klinis 1mg / kg /
minggu. Itu antibodi pengganti muM17 juga ditoleransi dengan baik pada tikus
dengan dosis hingga 30mg / kg / minggu SC. Di ringkasan efalizumab dianggap

31
 memiliki profil keselamatan non-klinis yang sangat baik sehingga mendukung
penggunaan pada pasien dewasa.

Gambar 10 Jalur pathways untuk efalizumab.

e. Program Klinis Efalizumab: Studi PK / PD, Penilaian Dosis, Rute, dan
Regimen
Proses pengembangan obat pada tahap klinis menyediakan beberapa
peluang untuk integrasi PK / Konsep PD. Studi peningkatan dosis klinis fase I
memberikan, dari sudut pandang PK / PD, peluang unik untuk mengevaluasi
hubungan dosis-konsentrasi-efek untuk efek terapeutik dan toksik pada rentang luas
dosis hingga atau bahkan melampaui batas maksimum yang dapat ditoleransi dosis
dalam kondisi terkontrol (Meredith et al., 1991). Evaluasi PK / PD pada tahap obat
ini pengembangan dapat memberikan informasi penting tentang potensi dan
tolerabilitas obat in vivo dan verifikasi dan kesesuaian PK / PD konsep yang
ditetapkan selama studi praklinis.
Data PK dan PD Efalizumab tersedia dari 10 studi di mana lebih dari 1700
pasien dengan psoriasis menerima IV atau SC efalizumab. Dalam Fase I studi,
parameter PK dan PD ditandai oleh pengambilan sampel ekstensif selama
perawatan; dalam Fase III uji coba, tingkat palung steady-state diukur sekali atau

32
 dua kali selama periode pengobatan 12 minggu pertama untuk semua penelitian dan
selama periode perawatan yang diperpanjang untuk beberapa penelitian. Beberapa
uji coba Fase I dan II awal telah memeriksa injeksi IV efalizumab dan doseranging
Temuan dari percobaan ini telah berfungsi sebagai dasar untuk tingkat dosis SC
yang digunakan dalam beberapa berikutnya fase I dan semua uji coba Tahap III.
f. Administrasi Efalizumab
PK antibodi monoklonal sangat bervariasi, tergantung terutama pada
afinitas mereka untuk dan distribusi antigen target mereka (Lobo et al., 2004).
Efalizumab menunjukkan non-linear yang bergantung pada konsentrasi PK setelah
pemberian IV dosis tunggal 0,03, 0,1, 0,3, 0,6, 1,0, 2,0, 3,0, dan 10,0mg / kg dalam
a Studi fase I. Non-linearitas ini berhubungan langsung dengan pengikatan
efalizumab spesifik dan saturable ke selnya reseptor permukaan, CD11a, dan telah
dijelaskan oleh a Model PK / PD yang dikembangkan oleh Bauer et al. (1999) yang
dibahas di bagian berikut.

Gambar 11 Konsentrasi plasma dibandingkan profil waktu untuk efalizumab setelah dosis IV tunggal tunggal
pada pasien psoriasis
Profil PK efalizumab setelah dosis IV tunggal dengan diamati data dan
model yang diprediksi sesuai disajikan dalam Gambar 11. Mean clearance (CL)
menurun dari 380 mL / kg / d hingga 6,6 mL / kg / d untuk dosis 0,03mg / kg

33
 hingga 10 mg / kg, masing-masing. Volume distribusi kompartemen pusat (Vc) dari
efalizumab adalah 110 mL / kg pada 0,03 mg / kg (kira-kira dua kali volume
plasma) dan menurun menjadi 58 mL / kg pada 10mg / kg (kira-kira sama dengan
volume plasma), konsisten dengan pengikatan efalizumab yang dapat saturable
pada CD11a di kompartemen vaskular. Karena efalizumab's non-linear PK, waktu
paruh (t1 / 2) adalah tergantung dosis.
Dalam studi Fase II efalizumab, ditunjukkan bahwa dengan dosis mingguan
0,1 mg / kg IV, pasien melakukannyatidak mempertahankan modulasi down
maksimal CD11a ekspresi dan tidak mempertahankan saturasi maksimal. Juga pada
akhir 8 minggu pengobatan efalizumab, 0,1 mg / kg / minggu IV, pasien tidak
memiliki secara statistik perbaikan histologis yang signifikan dan tidak mencapai
respons klinis penuh. Minimum mingguan Dosis efalizumab IV yang diuji
menghasilkan histologis perbaikan dalam biopsi kulit adalah 0,3 mg / kg /minggu
dan dosis ini menghasilkan saturasi submaksimaldari situs pengikatan CD11a tetapi
modulasi turun maksimalekspresi CD11a. Perbaikan pada pasienpsoriasis juga
diamati, sebagaimana ditentukan oleh histologi dan berdasarkan area Psoriasis dan
indeks keparahan(PASI) (Papp et al., 2001).
g. Penentuan Dosis SC
Meskipun kemanjuran diamati pada Fase I dan Fase Studi II dengan 0,3 mg
/ kg / minggu IV efalizumab, dosis 0,6mg / kg / minggu dan lebih besar (diberikan
selama 7 hingga 12 minggu) memberikan CD11a T limfosit yang lebih konsisten
saturasi dan efek PD maksimal. Dengan dosis≤ 0,3 mg / kg / minggu, besar di
antara variabilitas subjek diamati, sedangkan pada dosis 0,6 atau 1,0mg / kg /
minggu, pasien mengalami peningkatan PASI yang lebih baik skor, dengan
variabilitas antar-pasien yang lebih rendah di CD11a saturasi dan down-
modulation. Karena itu, dosis ini digunakan untuk memperkirakan yang tepat dosis
SC minimum 1mg / kg / minggu (berdasarkan 50% bioavailabilitas) yang akan
menyebabkan perubahan serupa pada PASI, tindakan PD, dan histologi.
Keselamatan, PK, dan PD dari berbagai dosis efalizumab SC (0,5-4,0 mg /
kg / minggu diberikan selama 8-12 minggu) dievaluasi awalnya dalam 2 studi Fase
I (Gottlieb et al., 2003). Untuk menetapkan apakah dosis SC yang lebih tinggi dapat
menghasilkan hasil yang lebih baik, beberapa uji klinis Fase III dinilai dosis SC

34
 2.0mg / kg / minggu di samping 1,0mg / dosis kg / minggu. Dosis 1,0 mg / kg /
minggu SC efalizumab dipilih karena menghasilkan palung yang cukup kadar pada
pasien untuk mempertahankan downmodulation maksimal ekspresi CD11a dan
situs pengikatan saturasi antara dosis mingguan (Joshi et al., 2006). Gambar 12
menggambarkan tingkat efalizumab serum, CD11a ekspresi, dan situs pengikatan
CD11a yang tersedia di Tlymphocytes (rata-rata ± SD) setelah pemberian subkutan
1 mg / kg efalizumab.
h. Administrasi SC dari Efalizumab
PK efalizumab SC telah ditandai dengan baik mengikuti beberapa dosis SC
1.0 dan 2.0mg / kg / minggu (Mortensen et al., 2005; Joshi et al., 2006). Fase I studi
yang mengumpulkan data PK dan PD keadaan tunak untuk 12 dosis SC mingguan
1,0 dan 2,0 mg / kg dalam psoriasis pasien, menyediakan sebagian besar data
farmakologis relevan dengan produk yang dipasarkan. Meski puncaknya
konsentrasi serum setelah dosis terakhir (Cmax) adalah diamati lebih tinggi untuk
2.0mg / kg / minggu (30,9 μg /mL) dibandingkan untuk dosis 1.0mg / kg / minggu
(12,4 μg / mL), tidak ada perubahan tambahan dalam efek PD yang diamati
semakin tinggi dosis (Mortensen et al., 2005). Berikut dosis 1,0 mg / kg / minggu,
konsentrasi serum efalizumab cukup untuk menginduksi downmodulation
maksimal ekspresi CD11a dan pengurangan situs pengikatan CD11a bebas pada
limfosit-T.

Gambar 12 Profil PK / PD setelah efalizumab pada manusia (1 mg / kg SC). Singkatan: PK, farmakokinetik;
PD, farmakodinamik.

35
 Level efalizumab serum stabil tercapai lebih cepat dengan dosis 1.0mg / kg
/ minggu di 4 minggu dibandingkan dengan dosis 2,0 mg / kg / minggu di 8 minggu
(Mortensen et al., 2005), yang ada di perjanjian dengan waktu paruh efektif rata-
rata untuk SC efalizumab 1,0 mg / kg / minggu 5,5 hari (Boxenbaum dan Battle,
1995). Ketersediaan hayati diperkirakan sebesar sekitar 50%. Analisis populasi PK
ditunjukkan bahwa berat badan adalah kovariat yang paling signifikan
mempengaruhi efalizumab SC clearance, dengan demikian mendukung dosis
berdasarkan berat badan untuk efalizumab (Sun et al., 2005).

Gambar 13 Efalizumab serum, ekspresi CD11a, dan situs pengikatan CD11a gratis pada limfosit T, jumlah
limfosit absolut, dan skor Psoriasis PASI (rata-rata) setelah efalizumab SC 1.0 mg / kg / minggu
selama 12 minggu dan 12 minggu pasca perawatan.
4. Pendekatan Pemodelan Mekanis
Dalam pengembangan obat klinis, pemodelan PK / PDpendekatan dapat
diterapkan sebagai alat analisis untukmengidentifikasi dan mengkarakterisasi dosis-
respons hubungan obat dan mekanisme dan faktor modulasi yang terlibat. Selain
itu, mereka mungkin digunakan sebagai alat prediksi untuk menjelajahi berbagai
rejimen dosis serta untuk mengoptimalkan lebih lanjut desain uji klinis, yang
mungkin memungkinkan seseorang untuk melakukannya melakukan lebih sedikit,
studi yang lebih fokus dengan peningkatan efisiensi dan efektivitas biaya.
Database PK / PD didirikan selama pembelajaran praklinis dan klinis fase
dalam proses pengembangan dan ditambah dengan analisis data populasi
memberikan tulang punggung untuk penilaian ini. Pemodelan PK / PD telah

36
 digunakan untuk mengkarakterisasi efalizumab konsentrasi plasma dan ekspresi
CD11a pada limfosit positif CD3 pada simpanse dan pada subjek dengan psoriasis
(Bauer et al., 1999). Sebagai data PK mengungkapkan bahwa CL efalizumab tidak
konstan di tingkat dosis, salah satu model dijelaskan oleh Bauer et al. (1999)
berbadan hukum a Michaelis – Menten istilah kliring ke dalam persamaan PK dan
memanfaatkan hubungan respons tidak langsung untuk jelaskan pergantian CD11a.
Namun di atas model hubungan pajanan-respons efalizumab tidak ditangani
dan laporan lain diperluas pada PK dan PD yang dimediasi reseptor yang
dikembangkan model dengan menggabungkan data dari lima Fase I dan Studi II
untuk mengembangkan model PK-PD-efficacy (E) untuk lebih lanjut meningkatkan
pemahaman tentang efalizumab interaksi dengan CD11a pada sel-T dan
konsekuensinya pengurangan keparahan psoriasis (Ng et al., 2005). SEBUAH garis
besar umum dari pendekatan pemodelan mekanistik untuk berbagai molekul
disajikan bersama model untuk efalizumab pada Gambar 14A. Deskripsidari model
efikasiumab PK-PD-efikasi di pasien psoriasis dijelaskan di bawah ini dan secara
skematis terwakili dalam Gambar 14B. Detail tentang parameter digunakan dalam
model dapat ditemukan di koran oleh Ng et al. (2005).
a. Analisis PK
Penyerapan orde dua, model dua kompartemen dengan eliminasi linier dan
Michaelis-Menten digunakan untuk menggambarkan konsentrasi efalizumab
plasma data. Model ini direpresentasikan secara skematis pada Gambar 14B (iv).
b. Analisis PD
Model PD yang dimediasi reseptor sebelumnya dikembangkan digunakan
untuk menggambarkan interaksi dinamis efalizumab ke CD11a, menghasilkan
penghapusan efalizumab dari sirkulasi dan pengurangan sel permukaan CD11a
(Bauer, Dedrick et al., 1999). Ini Model secara skematis direpresentasikan dalam
Gambar 14B (v).
c. Analisis Khasiat
Tingkat keparahan penyakit telah dinilai oleh Skor PASI yang diasumsikan
berkaitan langsung dengan produksi kulit psoriasis. Tingkat psoriasis produksi kulit
kemudian dimodelkan secara langsung sebanding dengan jumlah permukaan bebas
CD11a pada Sel-T, yang diimbangi dengan laju penyembuhan kulit [Ara. 14B (vi)].

37
d. Hasil Model
Setelah evaluasi dan pengembangan, model itu digunakan agar sesuai
dengan data PK / PD / kemanjuran secara bersamaan. Profil waktu konsentrasi
plasma dari efalizumab dijelaskan secara wajar dengan menggunakan orde
pertamapenyerapan, model dua kompartemen denganMichaelis – Menten eliminasi
dari kompartemen pusat. Selain itu, model PD menggambarkan mengamati data
waktu CD11a dari semua penelitiancukup baik. Dalam model kemanjuran
tambahan Komponen CD11a-independen untuk kulit psoriasis produksi
menyumbang respons tidak lengkap untuk terapi efalizumab dan model
menggambarkan data yang diamati dengan baik. Gambar 15 menggambarkan fit
dari model untuk data PK / PD / kemanjuran.
Model efikasi PK-PD dikembangkan untuk efalizumab memiliki aplikasi
luas untuk antibodi itu target reseptor yang terikat sel, menjadi sasaran reseptor
clearance, dan untuk yang lapisan dan modulasi reseptor diharapkan terkait untuk
respon klinis (Mold et al., 1999). Meskipun PK non-linear dari agen-agen ini,
model dapat digunakan untuk menggambarkan arah waktu dari efek PD dan
kemanjuran setelah rejimen dosis yang berbeda.
5. Populasi PK Antibodi Monoklonal
Dibandingkan dengan obat molekul kecil, monoklonal Antibodi biasanya
menunjukkan lebih sedikit subjek antar dan intras variabilitas parameter PK

38
 standarseperti volume distribusi dan izin.

Gambar 14 (A) Skema untuk model respons farmakokinetik-farmakodinamik untuk terapi antibodi (i) PK (ii)
PD (iii) Respons. (B). representasi kimia model efikasiumab PK-PD-efikasi pada pasien
psoriasis. (iv) Orde dua bsorpsi orde dua, kompartemen PK model dengan eliminasi linier dan
non-linier dari kompartemen pusat. (v) Model PD dengan mekanisme umpan balik negatif. (vi)
Model efikasi dengan jalur CD11a- dependen dan-independen. Singkatan: PK, farmakokinetik;
PD, farmakodinamik; PASI, area psoriasis dan indeks keparahan.
Namun, ada kemungkinan patofisiologis tertentu kondisi dapat
menyebabkan peningkatan yang substansial variabilitas intra- dan antar-pasien.
Tambahanpasien biasanya tidak terlalu homogen; pasien bervariasi dalam jenis
kelamin, usia, berat badan; mungkin mereka punya penyakit bersamaan dan
mungkin menerima beberapa perawatan obat. Bahkan diet, gaya hidup, etnis,
danlokasi geografis dapat berbeda dari grup yang dipilih subyek "normal". Kovariat
ini dapat memiliki pengaruh substansial pada parameter PK. Karena itu, praktik
terapi yang baik harus selalu didasarkan pada pemahaman tentang kedua pengaruh
kovariat pada parameter PK serta variabilitas PK dalam a diberikan populasi
pasien. Dengan pengetahuan ini, penyesuaian dosis dapat dilakukan untuk
mengakomodasi perbedaan PK karena genetik, lingkungan, faktor fisiologis atau
patologis, misalnya pada kasus senyawa dengan terapi yang relatif kecil indeks.
Kerangka kerja aplikasi populasi PK selama pengembangan obat dirangkum dalam
dokumen pedoman FDA berjudul "Bimbingan untuk Industri — Farmakokinetik
Penduduk ”(www. fda.gov).

39
Gambar15 Representasi profil efikasi PK-PD dari pasien yang menerima efalizumab dosis 1 mg / kg
mingguan secara subkutan selama 12 minggu. Segitiga padat, efalizumab plasma (μg / mL);
lingkaran terbuka,% CD11a; lingkaran padat, PASI. Garis padat, garis putus-putus, dan titik-titik
mewakili konsentrasi efalizumab plasma yang diprediksi masing-masing,% CD11a awal, dan
PASI, masing-masing. Singkatan: PD, farmakodinamik; PK, farmakokinetik
Untuk analisis data PK penduduk, ada umumnya dua pendekatan yang
andal dan praktis. Satu Pendekatan adalah metode dua tahap standar, yang
memperkirakan parameter dari konsentrasi obat data untuk subjek individu selama
tahap pertama. Taksiran dari semua mata pelajaran kemudian digabungkan ke
memperoleh perkiraan populasi dan perkiraan variabilitas untuk parameter yang
menarik. Metode ini bekerja dengan baik ketika cukup data konsentrasi waktu obat
tersedia untuk setiap pasien. Sebentar pendekatan, pemodelan efek campuran non-
linear (NONMEM) mencoba menyesuaikan data dan partisi perbedaan yang tak
terduga antara teori dan nilai-nilai yang diamati menjadi istilah kesalahan acak. Itu
pengaruh efek tetap (yaitu, usia, jenis kelamin, berat badan,dll) dapat diidentifikasi
melalui model regresi proses pembangunan.
Ruang lingkup asli menggunakan NONMEM adalah itu itu berlaku bahkan
ketika jumlah konsentrasi waktu data yang diperoleh dari masing-masing individu
adalah analisis PK kompartemen jarang dan konvensional tidak layak. Ini biasanya
terjadi selama kunjungan rutin dalam studi klinis Fase III atau IV. Saat ini,
pendekatan ini diterapkan jauh melampaui itu lingkup asli karena fleksibilitas dan
kekokohannya. Saya ttelah digunakan untuk menggambarkan Fase I dan Fase yang
kaya dataIIa mempelajari atau bahkan data praklinis untuk memandu
danmempercepat pengembangan obat dari awal praklinis ke studi klinis (Aarons et
al., 2001; Chien et al., 2005).
Ada peningkatan minat dalam penggunaan analisis populasi PK dan PD
untuk antibodi yang berbeda produk (mis., antibodi, fragmen antibodi, atau protein
fusi antibodi) selama 10 tahun terakhir (Lee et al., 2003; Nestorov et al., 2004;
Zhou et al., 2004; Yim et al., 2005; Hayashi et al., 2006). Satu contohnya
melibatkan analisis plasma populasi data konsentrasi melibatkan protein fusi dimer,
etanercept (Enbrel ). Urutan pertama satu kompartemen model PK populasi
penyerapan dan eliminasi dengan variabilitas interindividual dan interoccasion on
clearance, volume distribusi, dan penyerapan tingkat konstan, dengan kovariat jenis
kelamin dan ras clearance jelas dan berat badan saat clearance dan volume
distribusi, dikembangkan untuk etanercept pada pasien dewasa rheumatoid arthritis

40
(Lee et al., 2003). Model populasi PK untuketanercept selanjutnya diterapkan pada
pasien anak dengan rheumatoid arthritis remaja dan didirikan dasar dari rejimen 0,8
mg / kg sekali seminggu di pasien anak dengan rheumatoid arthritis remaja (Yim et
al., 2005). PK etanercept yang tidak diubah dengan metotreksat bersamaan pada
pasien dengan reumatoid arthritis telah ditunjukkan dalam studi Fase IIIb
menggunakan pendekatan pemodelan PK populasi (Zhou et al., 2004). Jadi, tidak
diperlukan penyesuaian dosis etanercept untuk pasien yang menggunakan
metotreksat bersamaan.
Latihan simulasi penggunaan populasi akhir PK model etanercept yang
dikelola secara subkutan di pasien dengan psoriasis menunjukkan bahwa keduanya
rejimen dosis yang berbeda (50mg setiap minggu vs 25mg setiap minggu) berikan
steadystate yang serupa paparan (Nestorov et al., 2004). Karena itu, mereka profil
efikasi dan keamanan masing-masing cenderung sama juga.
Fitur tambahan adalah pengembangan a model populasi yang melibatkan
PK dan PD. Pemodelan populasi PK / PD telah digunakan untuk ciri obat PK dan
PD dengan model mulai dari model PK / PD empiris sederhana hingga mahir
model mekanistik dengan menggunakan pengikatan reseptor obat prinsip atau
prinsip berbasis fisiologis lainnya. SEBUAH populasi berbasis mekanisme
pengikatan PK dan PD Model dikembangkan untuk DNAderived rekombinan
antibodi monoklonal IgG1 yang dimanusiakan, omalizumab (Xolair ) (Hayashi et
al., 2006). Izin dan volume distribusi untuk omalizumab bervariasi dengan berat
badan, sedangkan clearance dan laju produksi IgE diprediksi secara akurat oleh
baseline IgE dan secara keseluruhan, kovariat ini menjelaskan banyak hal
variabilitas antar-individu. Selanjutnya, mekanisme ini- populasi berdasarkan
model PK / PD diaktifkan estimasi tidak hanya omalizumab disposisi, tetapi juga
mengikat dengan targetnya, IgE, dan tingkat produksi, distribusi dan penghapusan
IgE.
Analisis populasi PK / PD dapat menangkap ketidakpastian dan variabilitas
yang diharapkan dalam data PK / PD dihasilkan dalam studi praklinis atau fase
awal perkembangan klinis. Memahami yang terkait Variabilitas PK atau PD dan
melakukan uji klinis simulasi dengan memasukkan ketidakpastian dari data PK /

41
 PD yang ada memungkinkan proyeksi yang masuk akal berbagai dosis untuk studi
klinis di masa depan dan penggunaan praktis akhir.

BAB III
PENUTUP

A. Perspektif Masa Depan

Keberhasilan antibodi monoklonal sebagai agen terapi baru di beberapa
penyakit seperti onkologi, radang, penyakit autoimun dan transplantasi telah memicu
pertumbuhan minat ilmiah, terapeutik dan bisnis dalam teknologi mAb. Pasar untuk
terapi mAb adalah salah satu sektor paling dinamis dalam industri farmasi.
Pertumbuhan lebih lanjut yang diharapkan adalah mengembangkan mAb protein
permukaan lainnya sebagai target, dimana belum tercakup oleh pasar mAbs. Terutama,
kemajuan teknologi di pada area immunoconjugate dan fragmen mAb dapat mengatasi
beberapa batasan mAbs dengan memberikan obat yang sangat manjur secara selektif
untuk efek kompartemen dan untuk memperluas distribusi moiety aktif, yang biasanya
tidak tercapai oleh mAbs.
Khususnya imunokonjugasi menjanjikan untuk penyediaan obat selektif
dengan selektivitas sendiri yang tidak diinginkan ke sel target (mis., obat sitotoksik
yang sangat kuat). Beberapa diantaranya immunoconjugate sedang dalam
pengembangan untuk ditargetkan jenis tumor yang berbeda dan diharapkan untuk
mencapai pasar di tahun-tahun berikutnya. Modifikasi mAb struktur memungkinkan
menyesuaikan properti sesuai dengan kebutuhan terapeutik (mis., menyesuaikan waktu
paruh, meningkat volume distribusi, mengubah jalur izin). Dengan menggunakan
turunan mAb yang dimodifikasi, dioptimalkan agen terapeutik mungkin tersedia.
Dengan demikian sejauh ini teknologi ini telah berhasil digunakan dua fragmen
antibodi yang dipasarkan secara inflamasi penyakit dan anti-angiogenesis (abciximab,
ranibizumab).
Tantangan khusus dalam pengembangan obat akan menjadi terapi kombinasi
dengan mAb yang berbeda menargetkan antigen target berbeda secara bersamaan di

42
 untuk menggunakan efek sinergis atau aditif mAbs. Biokimia, dinamika patofisiologis
yang kompleks dari negara penyakit akan membutuhkan yang baru dan menantang
pengembangan model PK / PD untuk dipahami aktivitas gabungan dari kombinasi
mAb berkaitan dengan keamanan dan kemanjuran. mAbs telah menjadi terapi yang
sangat menarik dan akan terus menjadi area fokus penemuan dan pengembangan obat.

DAFTAR PUSTAKA

Annad, Bannmeet, Rong Deng, Frank-Peter Theil, Jing Li, Shasha Jumbe, Thomas
Gelzleichter, Paul Fielder, Amita Joshi, and Saraswati Kenkare-Mitra. 2007.
Monoclonal Antibodies: From Structure to Therapeutic Application. Pharmaceutical
Biotechnology.

43