Identifikasi Enzim Lipolitik Yang Diisolasi Dari Bakteri Asli Ke

Identifikasi enzim lipolitik yang diisolasi dari bakteri asli ke spesies
kayu Eucalyptus untuk aplikasi dalam industri pulping
Abstrak
Studi ini menyoroti pentingnya menentukan spesifisitas substrat pada kondisi eksperimental
variabel. Lipase dan esterase diisolasi dari mikroorganisme yang dibudidayakan dari spesies
kayu Eucalyptus dan kemudian terkonsentrasi (dihilangkan selulase) dan dikarakterisasi. Piring agar-
agar merah ditambah dengan minyak zaitun 1% atau tributyrin dipastikan menjadi metode skrining
yang paling menguntungkan untuk aktivitas lipolitik. Aktivitas lipolitik dari berbagai enzim tertinggi
pada 45-61 U / ml pada suhu optimum dan pH antara pada 30-35 ° C dan pH 4-5, masing-
masing. Perubahan pH mempengaruhi spesifisitas substrat dari enzim yang diuji. Mayoritas enzim
diuji ditampilkan kecenderungan untuk rantai asil alifatik lagi seperti dodecanoate (C 12 ), miristat
(C 14 ), palmitat (C 16 ) dan stearat (C 18 ) menunjukkan bahwa mereka bisa dicirikan sebagai lipase
yang potensial. Esterase prospektif juga terdeteksi dengan spesifisitas terhadap asetat (C 2 ), butirat
(C 4 ) dan valerat (C 5 ). Enzim dipertahankan hingga 95% aktivitas pada pH dan suhu optimal selama
2–3 jam. Sangat penting untuk menguji substrat pada berbagai pH dan suhu saat menentukan
aktivitas optimal enzim lipolitik, metode yang jarang digunakan. Stabilitas enzim pada pH asam dan
suhu moderat membuat mereka menjadi kandidat yang sangat baik untuk aplikasi dalam perlakuan
pitch selama proses pengilangan bi-sulfit asam, yang akan sangat menguntungkan industri pulp dan
kertas.
1 . pengantar
Lipase dan esterase adalah dua kelas utama enzim hidrolase [1] . Lipase
(triasilgliserol acylhydrolases, EC 3.1.1.3) mengkatalis hidrolisis rantai
panjang triasilgliserol substrat (> C8), sedangkan esterase (EC 3.1.1.x)
mengkatalisis hidrolisis glycerolesters dengan rantai asil pendek (<C8)[2 ]. Struktur
tiga dimensi (3D) dari kedua enzim menunjukkan karakteristik lipatan α / β-
hidrolase [3]urutan pasti dari heliks α dan β-lembar . The catalytic triad terdiri dari
Ser-Asp-Nya (Glu bukan Asp untuk beberapa lipase) dan biasanya juga urutan
konsensus (Gly-x-Ser-x-Gly) ditemukan di sekitar situs
aktif serin [4]. Ini lipolitikenzim telah diisolasi dari tanaman, hewan, dan
mikroorganisme[1,5], namun, enzim lipolitik mikroba dilaporkan lebih kuat di
alam daripada tumbuhan atau hewan enzim[6,7]. Mereka juga menarik karena
biaya produksi yang rendah dan mereka mudah memanipulasi[1]. Beberapa spesies
mikroba dilaporkan untuk menghasilkan enzim ini
termasuk Bacillus sp.,Pseudomonassp.,Burkholderiasp.,Candida rugosa,Candida
antarctica ,Galactomyces geotricum,Saccharomyces
cerevisiae, Yarrowia lipolytica,Trichosporon
fermantans, Cryptococcus albidus, Aspergillus flavus,Thermomyces
lanuginosusdanRhizopus oryzae[8–13]. Karena fleksibilitas lipase dan esterase,
mereka memiliki berbagai aplikasi dalam industri seperti deterjen, pati dan bahan
bakar, makanan, kue, pulp dan kertas, lemak dan minyak, sintesis organik, kulit
dan aplikasi lingkungan[14,15].
Dalam industri pulp dan kertas, keberadaan ekstraktif kayu memainkan peran
penting. Selama pulping, partikel pitch (terdiri dari ekstraktif
seperti trigliserida , ester asam lemak , glikosida , sterol bebas dan
terkonjugasi) [16] cenderung menyatu untuk membentuk deposit pitch hitam pada
pulpa dan pada mesin yang memiliki dampak negatif pada proses dan kualitas
pulp [17,18] . Pulp sulfit (asam) khususnya mempertahankan jumlah ekstraksi
yang lebih besar dalam kaitannya dengan pulp kraft (alkalin), karena metode alkali
membasmi dan melarutkan resin kayu [19] . Produksi melarutkan pulp , yang
merupakan pulp selulosa tingkat tinggi, dihasilkan dengan menggunakan metode
asam bi-sulphite.
Metode tradisional untuk kontrol pitch termasuk bumbu dan penambahan bahan
kimia [20] . Pendekatan bioteknologi menggunakan enzim untuk kontrol pitch
adalah pilihan alternatif, terutama untuk menghilangkan gliserida . Perlakuan pulpa
dengan lipase telah efektif dalam mengurangi trigliserida (TG), namun, steryl ester
(SE) sering berada pada sumber pembentukan
lapangan [17] . Nonylphenolethoxylates (NPEs) adalah bahan kimia terbaik untuk
menghilangkan komponen pitch dalam pulping kimia. Sayangnya, penggunaannya
dikecam karena efek meniru estrogen mereka. Memang, penggunaannya telah
dilarang di pabrik pulp kimia Amerika Utara dan Eropa sebagai penangan pulp di
pasar Eropa yang enggan untuk menangani pulp yang diperlakukan dengan
NPE [21,22] . Juga, sisa NPE dalam pulp sulfit yang tidak diinginkan karena pulp
biasanya digunakan dalam aplikasi farmasi dan makanan. Berdasarkan studi pabrik
yang dilakukan oleh Sithole et al. (2010) disarankan bahwa dimasukkannya enzim
untuk menargetkan residu steryl ester dapat memberikan solusi strategis untuk
menghilangkan ekstraktif yang ada dalam pulp sulfit [21] .
Enzim oksidatif seperti lakase juga telah diimplementasikan dalam degradasi

berbagai ekstraksi lipofilik seperti trigliserida, sterol bebas dan terkonjugasi , asam
lemak dan asam resin [23] . Laccases adalah khas untuk fungi pelapuk putih dan
telah digambarkan sebagai degradasi lignin utama. Perlakuan kayu atau bubur
dengan enzim-enzim ini dapat menawarkan keuntungan ganda dalam perusahaan
mediator redoks [24,25] . Mediator redoks memfasilitasi penghapusan lakase sisa
lignin, bersamaan dengan degradasi ekstraktif yang ekstensif [26] . Penurunan
jumlah kappa dan peningkatan kecerahan pulpa juga dapat diamati [19,26] .
Enzim yang dicirikan dalam penelitian ini adalah untuk aplikasi dalam industri
pulp dan kertas, untuk pengurangan atau penghapusan pembentukan deposit pitch
selama pulping. Penelitian sebelumnya telah melaporkan degradasi pitch yang
tidak sempurna oleh lipase [19,21] , maka kami yakin bahwa inklusi esterase akan
membantu dalam menargetkan kelompok-kelompok samping yang secara teoritis
hadir setelah rantai asil rantai yang lebih panjang (triasilgliserida) telah
terdegradasi oleh lipase. Lipase, esterase dan lakase dimasukkan sebagai bagian
dari penelitian ini dan dipilih berdasarkan stabilitas dan aktivitas mereka pada suhu
dan tingkat pH yang digunakan selama penguraian bi-sulfit asam dari spesies
kayu Eucalyptus . Sepengetahuan kami, enzim lipolitik dihasilkan oleh
mikroorganisme yang berasal dari Eucalyptus sp. kayu belum pernah diteliti
sebelumnya. Hasil penelitian ini akan memberikan informasi lebih lanjut tentang
karakteristik enzim-enzim ini dan potensi mereka untuk mengurangi komponen
pitch dalam pulp. Untuk penelitian ini penting untuk memasukkan berbagai jenis
enzim yang dapat bermanfaat bagi proses pulping. Oleh karena itu pemurnian
enzim bunga tidak diperlukan, karena koktail enzim (tidak termasuk selulase)
diperlukan dan ideal dalam penelitian ini untuk menghilangkan atau mendegradasi
semua senyawa yang tidak diinginkan (tidak termasuk selulosa). Kombinasi
hemicellulases, ligninase dan enzim aksesori lainnya diketahui sangat penting
untuk hidrolisis biomassa tanaman [27] . Itu juga penting untuk menguji efek
berbagai kondisi pada spesifisitas substrat karena sebagian besar peneliti hanya
fokus pada pH dan suhu optima enzim dan kemudian menguji spesifisitas substrat
pada kondisi optimum. Mengabaikan untuk menyelidiki efek pH dan suhu pada
spesifisitas substrat enzim dapat memiliki implikasi drastis untuk efisiensi dan
efektivitasnya. Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk
menyaring mikroflora asli dari spesies Eucalyptus untuk aktivitas lipolitik dan
untuk menentukan efek pH dan suhu pada hidrolisis substrat yang berbeda dari
enzim lipolitik ini (lipase, esterase dan laccases).
2 . Bahan dan metode

2.1 . Isolasi dan identifikasi budaya bakteri dan jamur
Lima gram serpihan kayu dari tumpukan kayu chip komersial dan
individu Eucalyptus spp. dicuci secara menyeluruh dengan vortexing dengan
5 ml buffer fosfat (pH 8,0) selama 5 menit. Pencucian diencerkan secara seri dan
disebarkan ke nutrient agar (NA) dan potato dextrose agar (PDA) (Merck, Afrika
Selatan) dan diinkubasi pada 37 ° C dan 40 ° C selama 1 dan 5 hari, untuk
pertumbuhan bakteri dan jamur, masing-masing. Koloni dipilih berdasarkan fitur
morfologi; ukuran, bentuk, pigmentasi, margin, konsistensi dan elevasi dan sub-
kultur sampai isolat murni diperoleh [28] . DNA diekstraksi dari isolat dan 16S
rRNA dan 18S rRNA untuk bakteri dan jamur, masing-masing, diperkuat sesuai
dengan Ramnath et al. [28] . Berikut PCR , yang amplikon yang diurutkan (Inqaba
Biotech, Afrika Selatan), dan urutan diedit dan dimasukkan dalam Alignment
Search Tool Dasar (BLAST) algoritma [29] untuk identifikasi mikroorganisme.
2.2 . Optimalisasi pengujian skrining pelat untuk aktivitas lipolitik
Ada sejumlah metode yang tersedia saat ini untuk

skrining lipase dan esterase . Namun, mereka bervariasi dengan sensitivitas, biaya
dan kemudahan persiapan. Dalam penelitian ini beberapa metode diuji dan
dievaluasi.
Semua strain pra-dibudidayakan di Luria-Bertani (LB) medium dan ekstrak
rempah-rempah untuk bakteri dan jamur, masing-masing. Untuk mendeteksi
aktivitas esterase media basal yang mengandung 0,5% (w / v) pepton , 0,3% (b / v)
ekstrak ragi dan 2% bakteriologis (pH 7) yang ditambahkan dengan 1%, 2% dan
5% tributyrin digunakan. Sumur lima milimeter yang bosan ke piring agar dan
diinokulasi dengan 50 μl budaya bakteri murni. Pelat diinkubasi pada 37 ° C
selama 48 jam. Setelah inkubasi, isolat diamati untuk zona hidrolisis (lingkaran
cahaya yang jelas) di sekitar koloni. Aktivitas lipase disaring pada piring minyak
zaitun / rhodamin B agar. Rhodamin B (1 mg / ml; Sigma Chemical Co., Munich,
Jerman) dilarutkan dalam air suling dan sterilisasi filter. Piring agar mengandung
8 g kaldu nutrisi, 4 g natrium klorida , 10 g agar (per liter) (pH 7). Setelah
autoklaf, medium didinginkan hingga 60 ° C, minyak zaitun 31,25 ml dan 10 ml
larutan Rhodamin B (0,001% [wt / vol]) ditambahkan dan diaduk kuat selama
1 menit. Medium itu dibiarkan berdiri selama 10 menit untuk mengurangi berbusa
sebelum dituangkan ke dalam cawan petri steril. Produksi lipase terdeteksi oleh
pelat penyinaran dengan sinar UV pada 350 nm [30] . Karena kesulitan yang
dihadapi dengan membaca pelat skrining menggunakan metode yang disebutkan di
atas, dua metode skrining tambahan diuji, yaitu, uji dengan fenol merah dan tween
pemutaran agar plate. Pelat tuang phenol olive oil / tributyrin merah disiapkan
sebagai berikut (g / L); 0,01% (b / v) fenol merah, 0,1% (b / v) CaCl 2 , 1% (v / v)
substrat, 2% (b / v) agar dan pH disesuaikan dengan 7,3-7,4 dengan 0,1 N
NaOH [31 ] . Organisme diinokulasi ke lempeng agar fenol merah yang dilengkapi
dengan 1% substrat dan diinkubasi pada 37 ° C selama 2-4 hari. Prinsip di balik
pengujian ini adalah bahwa sedikit penurunan pH dari 7,3 (titik akhir dari warna
merah fenol) ke pH yang lebih asam akan menghasilkan perubahan warna dari
merah menjadi jingga. Peningkatan keasaman adalah karena pelepasan asam lemak
berikut lipolisis [31] . Uji presipitasi menggunakan Tween 20 dan Tween 80 agar
dilakukan untuk mengkonfirmasi aktivitas lipolitik. Tween pelat substrat disiapkan
sebagai berikut (g / L); 10 g pepton, 5 g NaCl 2 , 0,1 g CaCl 2 · 2H 2 O, 20 g agar
dan 10 ml (v / v) Tween 20/80 [32] . Metode ini didasarkan pada prinsip presipitasi
garam kalsium. Hidrolisis tween melepaskan asam lemak yang mengikat dengan
kalsium dalam medium untuk membentuk kristal yang tidak larut di sekitar titik
inokulasi. Tween 80 digunakan untuk mendeteksi lipase karena mengandung
ester asam oleat , sementara Tween 20 digunakan untuk esterases karena
mengandung ester dari asam lemak rantai bawah [32] . Organisme diinokulasi ke
lempeng dan diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 2–4 hari. Presipitasi putih di
sekitar batas koloni menunjukkan aktivitas lipase [31] .
Isolasi jamur disaring untuk aktivitas lakase pada pelat PDA yang dilengkapi
dengan dan 0,2% bromophenol blue [33] (Merck, Afrika Selatan). Pelat diinkubasi
pada 40 ° C selama 5 hari, dan kemudian secara visual diperiksa untuk
mengevaluasi kemampuan dekolourisasi dari enzim jamur. Untuk
membangun aktivitas selulase , substrat spesifik untuk deteksi exoglucanan (1% (w
/ v) avicel) dan endoglucanase (1% (w / v) karboksimetil selulosa (CMC))
digunakan untuk menyaring isolat pada NA dan PDA agar piring, untuk bakteri
dan jamur, masing-masing. Semua tes skrining dilakukan dalam rangkap dua.
2.3 . Tes enzim
Aktivitas lipolitik ditentukan secara spektrofotometri dengan mengukur

pelepasan p- nitrophenol. P- nitrophenyl ( p -NP) ester dengan berbagai panjang
rantai asil alifatik digunakan untuk menentukan esterase; p -NP asetat (C 2 ), p -NP
butirat (C 4 ), p -NP valerate (C 5 ) dan lipase; p -NP octanoate (C 8 ), p -NP
dodecanoate (C 12 ), p -NP miristat (C 14 ), p -NP palmitat (C 16 ), dan p -NP stearat
(C 18 ) aktivitas. Campuran substrat terdiri dari 0,5 mM p -NP substrat dalam
metanol, 50 mM tris-HCl buffer (pH 8) dan 0,1% Triton X-100. Campuran
pengujian standar mengandung 200 μl campuran substrat dan 20 μl dari
supernatan mentah, yang diinkubasi pada 37 ° C selama 1 jam. The aktivitas
enzim ditentukan dengan mengukur pelepasan p -NP pada absorbansi 405 nm. Satu
unit (U) aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim yang diperlukan untuk
melepaskan 1 nM dari p -NP per menit dalam kondisi pengujian. Lipase / esterase
dan aktivitas lakase dihitung dari rumus berasal dari Beer-Lambert Hukum:
aktivitas enzim (U ml -1 ) = Δ A.V / ε.tv . ΔA adalah perubahan absorbansi dari
waktu ke waktu; V adalah volume total campuran reaksi (ml); ε adalah koefisien
kepunahan molar dalam nM −1 cm −1 ; t adalah waktu inkubasi dalam menit, dan v
adalah volume enzim dalam campuran assay (ml) [34] . Koefisien kepunahan yang
tepat untuk masing-masing substrat dalam kondisi pengujian ini digunakan untuk
menghitung aktivitas [35] .
Aktivitas lakase ditentukan berdasarkan oksidasi substrat syringaldazine sesuai

dengan protokol dari Sigma-Aldrich (USA) [36] . Campuran assay (1 ml)
mengandung 733 μl buffer asetat (100 mM, pH 4/5) dan 167 μl ekstrak enzim
laccase. Pembuluh reaksi disetimbangkan menjadi 37 ° C dan absorbansi dipantau
pada 530 nm sampai konstan. Setelah itu, 100 μl 0,216 mM syringaldazine
ditambahkan ke assay (untuk memulai reaksi), diikuti dengan pencampuran
langsung dengan inversi. Tes tersebut diinkubasi selama 10 menit dan peningkatan
absorbansi direkam menggunakan UV-1800 Shimadzu UV Spectrophotometer
(Jepang). Produksi quinone yang sesuai dipantau pada 530 nm (ε530 = 65
000 M −1 cm −1 ). Satu unit enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim yang akan
mengoksidasi 1 μmol syringaldazine per menit, di bawah kondisi pengujian [37] .
Uji dinitrosalicylic acid (DNS) digunakan untuk menentukan aktivitas selulase

dengan mendeteksi gula pereduksi yang dibebaskan oleh aksi hidrolitik endo dan
exo-glucanase pada substrat selulosa yang berbeda (avicel dan
carboxymethylcellulose) [38] .
2.4 . Pengaruh suhu dan pH pada aktivitas lipase / esterase dan stabilitas
Pengaruh suhu pada aktivitas enzim ditentukan dengan melakukan pengujian pada
suhu inkubasi mulai dari 25 hingga 50 ° C (dengan peningkatan 5 ° C) dan
berbagai ester p -NP sebagai substrat [39] . Stabilitas suhu enzim dimurnikan
ditentukan oleh inkubasi enzim pada berbagai suhu (25-50 ° C) dan
memperkirakan aktivitas enzim sisa setelah inkubasi selama 30 menit, 1, 1,5, 2,
2,5, dan 3 jam. Pengaruh pH pada aktivitas enzim ditentukan dengan menguji
aktivitas enzim selama rentang pH 3–12 menggunakan p -NP ester sebagai
substrat [39] . Larutan sitrat-fosfat (pH 3-6), buffer tris-HCl (pH 7 dan 8), buffer
karbonat-bikarbonat (pH 9 dan 10) dan buffer natrium-bikarbonat dan natrium-
fosfit (pH 11 dan 12) digunakan sebagai sistem penyangga. Stabilitas enzim yang
dimurnikan pada rentang pH juga ditentukan dengan mengukur aktivitas residu
setelah menginkubasi 200 μl enzim pada 1800 μl sistem buffer yang disebutkan di
atas (pH 3-12) selama 3 jam pada suhu optimum. Absorbansi dibaca pada
405 nm.
2.5 . Produksi ekstrak enzim mentah
Isolat bakteri yang dipilih ditanam dalam medium basal yang mengandung 0,5%
(w / v) pepton dan 0,3% (b / v) ekstrak ragi ditambah dengan 1% tributyrin. Flasks
diinkubasi pada 37 ° C selama 24 jam pada 180 rpm. Sel dipanen dengan
sentrifugasi pada 10.000 rpm selama 10 menit. Pelet sel kemudian diresuspensi
dalam buffer lisis (20 mM Tris-HCl, 0,5 M NaCl, pH 8,0) dan terganggu oleh
perawatan ultrasonik selama 10 menit dalam 10 detik interval. Sel lysate
disentrifugasi pada 10 000 rpm selama 10 menit pada 4 ° C, dan supernatan
dipulihkan untuk menguji aktivitas intraseluler. Untuk menguji aktivitas
ekstraseluler, supernatan sel bebas dikumpulkan dan dipekatkan 10 kali lipat
dengan ultrafiltrasi dengan sistem Amicon (Millipore, Massachusetts, USA)
menggunakan membran cut-off 3 kDa terlebih dahulu setelah itu membran cut-off
50 kDa digunakan pada sampel terkonsentrasi untuk menghilangkan protein yang
lebih besar dari 50 kDa.
2.6 . Native & SDS-PAGE
Ukuran protein ditentukan oleh Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel

Electrophoresis (SDS-PAGE) sebagaimana digariskan oleh Judd
(1996) [40] . Sampel dielektroforesis oleh Native-PAGE (tidak termasuk SDS)
dan SDS-PAGE dalam 12% gel poliakrilamida sesuai dengan metode Laemmli
(1970) [41] . Konsentrasi protein ditentukan dengan menggunakan uji Bradford
(Bradford, 1976) [42] .
Native SDS-PAGE digunakan untuk memastikan penghilangan selulase

potensial. Untuk mengidentifikasi endo dan exo-glucanases, 12% gel PAGE asli
yang mengandung 1% avicel dan carboxymethylcellulose, masing-masing,
(disiapkan dalam 50 mM dapar fosfat pH 7) disiapkan. Setelah elektroforesis pada
100 V selama sekitar 90 menit pada suhu kamar, gel slab dipotong dalam dua
bagian; satu setengah diwarnai menggunakan 0,5% Coomassie Brilliant Blue R250
(Sigma-Aldrich, Jerman) untuk menentukan ukuran protein dan bagian lainnya
digunakan untuk mendeteksi aktivitas enzim. Gel untuk pewarnaan aktivitas dicuci
dengan 50 mM dapar fosfat (pH 7) selama 5 menit, diikuti dengan pewarnaan
dalam larutan Congo-Red (0,1%, [w / v]) selama 15 menit. Gel kemudian
ditakdirkan dengan 1 M NaCl untuk memvisualisasikan zona kliring hidrolisis, dan
kemudian diperbaiki dengan 0,5% (v / v) asam asetat [43] .
2.7 . Analisis statistik
Hasil yang ditampilkan di sini adalah cara tiga penentuan independen. Standar
deviasi untuk masing-masing hasil eksperimen dihitung menggunakan perangkat
lunak Microsoft Excel dan direpresentasikan sebagai bar kesalahan.
3 . hasil dan Diskusi

3.1 . Identifikasi bakteri dan jamur yang terisolasi
Sebanyak sepuluh strain bakteri yang berbeda diisolasi menggunakan metode

kultur dan identifikasi tradisional menggunakan 16S rRNA sequencing :
tiga Bacillus . Spp, tiga yang berbeda Pseudomonasaeruginosa isolat, Inquilinus .
Sp, Micrococcus sp,. Pantoea sp,. Klebsiella , Streptomyces sp. dan Cellulosimicro
bium sp. ( Tabel 1 ) (semua dengan indeks kesamaan lebih dari
97%). Bacillus spp. adalah spesies bakteri yang dominan (33%). Beberapa genera
seperti Bacillus , Pantoea , Klebsiella dan Pseudomonas sebelumnya telah
diidentifikasi di hutan lainnya [44,45] , sementara yang lain
seperti Inquilinusdan Mucilaginibacter belum diamati di hutan. Dua isolat jamur
yang dijelaskan dalam penelitian ini diidentifikasi sebagai Paecilomyces
formosus (F4) dan Phialophora alba (X) menggunakan sekuensing 18S
rRNA . Kedua isolat jamur ini belum diidentifikasi sebelumnya
dalam Eucalyptus spp. hutan.
Tabel 1 . Aktivitas lipase dan esterase bakteri yang diisolasi dari tumpukan
kayu Eucalyptus campuran .
Lipase Lipase
Esterase Esterase Esterase
Jenis AccessionNumber 1% 2,5%
1% Trb 2% Trb 5% Trb
Minyak Minyak
Pseudomonas
B1 JX945659 + + - - -
aeruginosa
Pseudomonas
B2 JX945660 ++ - - - -
aeruginosa
B4 Bacillus firmus JX945657 + + - + +
Micrococcus
B5 JX945661 + + - + -
luteus
Lipase Lipase
Esterase Esterase Esterase
Jenis AccessionNumber 1% 2,5%
1% Trb 2% Trb 5% Trb
Minyak Minyak
B6 Bacillus sp. JX945662 ++ - - + -
Inquilinus
B7 JX945663 +++ - + - -
limosus
B9 Pantoea sp. JX945664 ++ - - + -
B10 Klebsiella sp. JX945665 + - - - -
Bacillus
B12 JX945658 ++ ++ + + -
ginsengihumi
Streptomyces
B14 JX945666 - - - - -
costaricanus
Pseudomonas
B15 JX945667 - - + - -
aeruginosa
Selulosa
B16 JX945668 - - - + +
selulosa
Key: + = lingkaran cahaya sedikit (1-2 mm), ++ = lingkaran cahaya menengah

(2-5 mm), +++ = lingkaran cahaya besar (> 5 mm), TRB = tributyrin ,
Oil = minyak zaitun, - = tidak ada halos .
3.2 . Optimalisasi pengujian skrining plat untuk aktivitas lipase dan esterase
Satu persen tributyrin (aktivitas esterase) adalah optimal untuk bakteri yang
diisolasi dari sampel kayu campuran ( Tabel 1 ), namun, 2% optimal untuk bakteri
dari spesies kayu individu ( Tabel 2 ). Lingkaran tipis diamati untuk beberapa
isolat bakteri di 5% lempeng tributyrin. Uji skrining plat
untuk aktivitas lipase menunjukkan aktivitas lipase minimum untuk isolat dari
spesies kayu campuran; Namun, untuk bakteri yang diisolasi
dari spesies Eucalyptus individu , konsentrasi substrat 1% optimal. Enam puluh
tujuh persen, 28% dan 28% dari isolat menunjukkan aktivitas pada 1%, 2% dan 5%
lempeng tributyrin, masing-masing. Bacillus firmus mampu menghidrolisis ketiga
konsentrasi tributyrin, tetapi halo terbesar diamati pada konsentrasi substrat
1%. Micrococcus luteus , P. aeruginosa , dan Cellulosimicrobium cellulans juga
diidentifikasi sebagai produsen esterase . Delapan persen, 63% dan 22% dari isolat
ditampilkan aktivitas pada 1%, 2% dan 5% lempeng tributyrin, masing-
masing. Curtobacterium flaccumfaciens , Bacillus thuringiensis , B.
cereus , Pantoea agglomerans dan P. vagans menghasilkan zona terbesar hidrolisis
yang menunjukkan aktivitas esterase, dengan zona halo 2-5 mm ( Gambar
1 ). Penelitian lain juga memiliki beberapa tingkat keberhasilan dengan
penggunaan tributyrin dan minyak zaitun / rhodamine B sebagai substrat dan
metode untuk skrining untuk aktivitas lipolitik [32,46,47] .
Tabel 2 . Aktivitas lipase dan esterase bakteri yang diisolasi dari

berbagai Eucalyptus spp.
Lipase
Lipase1
Jeni Nomor Esterase1 Esterase2 Esterase5 2,5%
%
s GenBank % Trb % Trb % Trb Minya
Minyak
k
E. dunnii
Mucilaginibacter s
DF1 JF999998.1 - - + - -
p.
Tidak
DF2 - - ++ + - +
teridentifikasi
Curtobacterium HE613377.
DF3 - ++ + - -
flaccumfaciens 1
CP002206.
DF5 Pantoea vagans - - + + -
1
Tidak
DF6 - - ++ + + -
teridentifikasi
Bacillus FN667913.
DF7 - ++ + + +
thuringiensis 1
Tidak
DF8 - - + + - -
teridentifikasi
E. grandis
Aglomerans
G1 FJ11844.1 - ++ + - -
Pantoea
Curtobacterium
G2 JF706511.1 - ++ - - -
flaccumfaciens
CP002206.
G3 Pantoea vagans - ++ + + -
1
Tidak
G4 - - - + - -
teridentifikasi
E. nitens
N1 Bacillus cereus JF758862.1 ++ ++ + - -
JN853250.
N2 Pantoea sp. - - + - +
1
Curtobacterium sp HQ219967.
N3 - +++ + - -
. 1
JQ308572.
N4 Bacillus cereus - - + - +
1
EU621383.
N5 Bacillus cereus - - + - -
1
EU162013.
N6 Bacillus sp. - ++ + - +
1
Bacillus FN667913.
N7 - ++ + - -
thuringiensis 1
Key: + = lingkaran cahaya sedikit (1-2 mm), ++ = lingkaran cahaya menengah
(2-5 mm), +++ = lingkaran cahaya besar (> 5 mm), TRB = tributyrin ,
Oil = minyak zaitun, - = tidak ada halos .
1. Unduh gambar resolusi tinggi (471KB)

2. Unduh gambar ukuran penuh
Gambar. 1 . A- 1% tes skrining tributyrin plat untuk

mendeteksi aktivitas esterase isolat bakteri murni dari spesies kayu Eucalyptus , B-
1% olive oil / rhodamine B tes skrining piring untuk
mendeteksi aktivitas lipase dari isolat bakteri murni dari spesies kayu Eucalyptus .
Karena kesulitan yang dihadapi dengan visualisasi dan zona kliring, tes tambahan
seperti phenol red dan tween agar plate screening juga dilakukan untuk
memvalidasi hasil yang diperoleh. Kedua tes mengkonfirmasi hasil,
bagaimanapun, tes plat agar merah fenol lebih sensitif daripada tes
lainnya. Pembersihan yang berbeda untuk pelat merah fenol dan zona pengendapan
untuk pelat tween diamati ( Gbr. 2 ). Pelat skrining fenol merah digunakan untuk
mengukur aktivitas ( Tabel 1 dan 2 ).
Fig. 2 . 1% Tween 80 agar plate (kiri) dan 1% tributyrin phenol red agar plate
(kanan) untuk mendeteksi aktivitas lipase dan esterase , masing-masing, dari isolat
bakteri murni dari spesies kayu Eucalyptus .
Lipase dan esterase telah diidentifikasi dengan skrining mikroorganisme pada

berbagai jenis piring agar seperti fenol merah, rhodamin B , tween, Nile blue dan
sebagainya [48] . Namun berbagai tingkat keberhasilan telah dilaporkan dengan
metode penyaringan yang berbeda. Lipase ekstraseluler yang diisolasi
daristrain Pseudomonas psikrotrofikditemukan dengan skrining pada piring agar
minyak zaitun. Beberapa peneliti telah menemukan keberhasilan dengan metode
pewarna rhodamin B yang dikembangkan oleh Kouker dan Jaeger
(1987) [30,32,49,50] . Namun, yang lain mengalami kesulitan dalam
mempersiapkan media, serta memvisualisasikan aktivitas lipase yang lebih
lemah [51] . Berdasarkan hasil dari penelitian ini, metode yang direkomendasikan
untuk skrining untuk aktivitas lipolitik adalah, pelat agar fenol merah yang
ditambahkan dengan 1% minyak zaitun atau tributyrin.
Selain itu, isolat juga diskrining untuk aktivitas selulosa. Dalam industri pulp dan
kertas, keberadaan selulase memiliki efek yang tidak diinginkan pada kualitas
pulpa yang dihasilkan, khususnya dalam produksi bubur pelarut (pulp selulosa
tingkat tinggi, > kandungan selulosa 98%). Selulase potensial akan
menghidrolisis serat selulosa sehingga terjadi penurunan selulosa alfa, sehingga
berdampak pada hasil [52] . Akibatnya, deteksi dan penghapusan aktivitas selulase
penting. Baik kuantitatif (pelat penyaringan) dan kualitatif (uji DNS) menunjukkan
aktivitas selulase yang dapat diabaikan kecuali untuk C. flaccumfaciens ( Tabel
3 ). Ini diatasi dengan menggunakan kolom spin dengan ukuran cut-off khusus
untuk menghilangkan protein yang lebih besar (> 50 kDa) yang bisa menjadi
selulase potensial.
Tabel 3 . Aktivitas lipase / esterase

dan selulase (aktivitas endoglucanase dan exoglucanase menggunakan uji DNS)
dan konsentrasi protein dari fraksi intraseluler dan ekstraseluler dari isolat yang
berbeda.
Konsentrasi Aktivitas Aktivitas

Asetat (U Butir (U /
Protein. (μg / Endoglucanase Exoglucanase
/ ml) ml)
ml) (U / ml) (U / ml)
Ext. Int. Ext. Int. Ext. Int.
Bacillus
BT 5.55 5.24 9,75 5,78 212.9 1,57 0,057 0,043
thuringiensis
Bacillus
DF7 10.71 5.16 10.98 4.34 414,3 1,84 0,021 0,013
thuringiensis
B9 Pantoea sp. 5.12 6,75 2.82 5.27 1,69 25 0,012 0,015
Curtobacterium
DF3 10,35 4,09 10.70 3.44 62.86 1,88 0,203 0,121
flaccumfaciens
Paecilomyces
F4 7.78 - 18,89 - 51,43 - 0,019 0,029
formosus
Phialophora
X 2.18 - 30.11 - 98,57 - 0,034 0,041
alba
3.3 . Native & SDS-PAGE
PAGE gel asli yang dilengkapi dengan carboxymethylcellulose dan avicel

digunakan untuk memastikan bahwa endoglukanase minimal
dan aktivitas exoglucanase yang diamati dihilangkan. Sampel terkonsentrasi
dengan kolom spin 3 kDa setelah itu melewati kolom spin50kDa untuk
menghilangkan protein yang lebih besar, mungkin dianggap selulase ( Gambar
3 ). Sangat penting bahwa ekstrak enzim yang dicirikan di sini, tidak mengandung
aktivitas selulase yang dapat menurunkan serat selulosa. Semua enzim aksesori
lainnya seperti xilanase , lakase , dan ligninase yang mungkin ada akan
berkontribusi positif terhadap produksi pulp selulosa berkualitas tinggi. Lipase
bakteri dan esterases umumnya memiliki ukuran protein yang diharapkan antara 15
dan 45 kDa [53] . Protein yang lebih besar dari 50 kDa dianggap sebagai selulase
potensial. Selulase memiliki dampak negatif pada pulpa akhir dengan mengurangi
rantai selulosa. Sebuah esterase sekecil 1,57 kDa dari Bacillus
stearothermophilius telah dijelaskan oleh Simoes et al. (1997) [54] . Bacillus
thuringiensis telah dilaporkan menghasilkan 38 kDa fosfolipase [55] .
Gambar 3 . PAGE gel asli dilengkapi dengan carboxylmethylcellulose (CMC)

untuk mengkonfirmasi penghilangan endoglucanases potensial . A: SDS-
PAGE enzim mentah, 1- DF7, 2- DF3, 3-BT. B: PAGE asli enzim mentah, 1- BT,
2-DF3, 3- DF7. C: Halaman asli dari enzim mentah setelah pemurnian parsial, 1-
BT, 2- DF3, 3- DF7.
3.4 . Aktivitas lipase dan esterase
Setelah evaluasi skrining awal, isolat berikut dipilih untuk studi lebih lanjut, DF3 -
C. flaccumfaciens , DF7 - B. thuringiensis , B9 - Pantoea sp. dan BT - B.
thuringiensis . Selain isolat bakteri yang dipilih, dua isolat jamur F4– P.
formosus dan X- P. alba dipilih berdasarkan pemeriksaan pelat awal yang serupa
(data tidak ditampilkan) serta studi sebelumnya pada aktivitas
lakase [56] . Pengaruh pH awal pada aktivitas ekstraseluler dan intraseluler lipase /
esterase dari isolat yang dipilih diselidiki pada pH 8 dan 37 ° C dengan asetat dan
butirat sebagai substrat (umumnya dipilih untuk penyelidikan awal). Hasil
pada Tabel 3 menunjukkan aktivitas enzim yang lebih tinggi dalam fraksi
ekstraseluler BT, DF7, dan DF3, sementara B9 menunjukkan aktivitas yang lebih
tinggi dalam fraksi intraseluler. Oleh karena itu, fraksi yang sesuai digunakan
untuk karakterisasi lebih lanjut dari enzim-enzim ini. Jamur diketahui
menghasilkan enzim ekstraseluler untuk mendegradasi polimer yang tidak dapat
diserap [57] , oleh karena itu tidak terduga bahwa fraksi intraseluler tidak
menghasilkan aktivitas enzim.
3,5 . Pengaruh suhu dan pH pada aktivitas enzim
Spesifitas lipase diarahkan oleh berbagai sifat seperti jenis substrat, posisi asam
lemak ester, stereospecificity dan kombinasi dari keempatnya. Ini termasuk faktor-
faktor yang mengubah pengikatan enzim ke substrat, sifat-sifat molekul enzim, dan
struktur substrat [58] . Oleh karena itu, dalam pekerjaan yang dilaporkan di sini,
penting untuk melembagakan desain eksperimental untuk menguji efek pH dan
suhu pada berbagai substrat. Mayoritas penelitian yang dilaporkan memilih untuk
menentukan pH dan suhu optima dan kemudian menguji spesifisitas substrat dari
enzim yang diekspresikan secara optimal [59,60]; studi kurang rinci telah
menunjukkan beberapa efek pH pada spesifisitas substrat lipase dan
esterase [61] . Ertuğrul dan rekan menemukan bahwa pada pH 6, lipase
dari Bacillus galur menunjukkan aktivitas tertinggi terhadap rantai
panjang trigliserida trimiristin (C 14 ), namun, pada pH 9, rantai lebih
pendek trigliserida seperti tributyrin (C4) dan triacetin (C2) yang disediakan
aktivitas yang lebih tinggi lipase dibandingkan dengan trigliserida rantai panjang
(C 8 -C 14 ) [61] . Perilaku ini juga telah dilaporkan untuk esterase
asetil dari Thermomyces lanuginosus di mana, tidak ada aktivitas yang diamati
terhadap p -NP-asetat pada pH 9,0, namun, aktivitas pada pH 4,0 tercatat [62] . Ini
mengungkapkan berbagai tingkat aktivitas lipase dan esterase tergantung pada pH
medium, yang mungkin dikaitkan dengan adanya isoenzim . Hasil penelitian kami
menunjukkan bahwa spesifisitas substrat dipengaruhi oleh perubahan pH dan suhu.
Enzim dalam penelitian kami menunjukkan preferensi untuk kondisi asam yang
cukup jarang di antara lipase bakteri. Mayoritas lipase diketahui menunjukkan
aktivitas tertinggi mereka pada pH netral atau basa [63–65] . Namun, ada laporan
produksi lipase asam dari bakteri meskipun dengan berbagai jumlah
aktivitas. Ramani dkk. (2010) menjelaskan produksi lipase asam
oleh Pseudomonas gessardii yang memiliki aktivitas maksimum 156 U / ml pada
pH 3,5 [66] . Pada ujung bawah skala, lipase asam diproduksi
oleh Aeromonas sp. menunjukkan aktivitas optimal 0,7 U / ml pada pH 6 [67] .
Tingkat hidrolisis tertinggi diperoleh dengan lipase potensi diisolasi dari B.

thuringiensis (BT dan DF7) pada p -NP-valerat (C 5 ) p -NP-octanoate (C 8 ), p -
NP-dodecanoate (C 12 ), dan p -NP-miristat (C 14 ), menunjukkan kecenderungan
enzim untuk panjang rantai asil yang lebih panjang ( Gambar 5 ). The p ester -NP
dari asam palmitat dan stearat juga substrat yang baik, namun lebih pendek ester
rantai asil seperti asetat, butirat dan valerat yang dihidrolisis pada tingkat yang
lebih rendah tetapi dengan aktivitas yang relatif sebanding dengan substrat rantai
rantai asil lagi. Hal ini menunjukkan bahwa enzim dari kedua isolat B.
thuringiensis berpotensi menghasilkan lipase dan esterase. Lipase
dari Bacillus spesies seperti Bacillus stearothermophilus telah dilaporkan
menghidrolisis substrat sintetis dengan panjang rantai gugus asil antara C 8 dan
C 12 dengan aktivitas optimal pada C 10 p -NP-kaprat [68] . Di sisi lain, lipase yang
diisolasi dari B. stearothermophilus memiliki spesifisitas substrat yang luas
terhadap trigliserida dengan C 4 C 18 [69] .
Awalnya, ketika enzim diuji pada pH 8, aktivitas yang lebih besar diamati
dengan p -NP asetat dan p -NP butirat (data tidak ditampilkan). Namun, pada pH
optimal 4 dan 5, aktivitas yang lebih besar terhadap dodecanoate, miristat dan
palmitat tercatat ( Tabel 4 ). Ini menunjukkan bahwa perubahan pH memiliki
pengaruh pada spesifisitas substrat dari enzim. Temuan ini dapat dijelaskan oleh
fenomena model fit yang diinduksi . Model ini mengklaim bahwa substrat dapat
menyebabkan transformasi substansial dalam ikatan tiga dimensi dari asam amino
di situs aktif dan modifikasi ini dalam struktur protein yang diprakarsai oleh
substrat akan membawa kelompok katalitik ke dalam orientasi yang sesuai untuk
reaksi [70] . Post dan Ray (1995) menunjukkan bahwa perubahan
konformasi dapat meningkatkan spesifisitas suatu enzim dengan efisiensi katalitik
suboptimal [71] .
Tabel 4 . Mengoptimalkan pH, suhu dan substrat untuk enzim lipolitik dari
berbagai isolat.
Memisahkan PH optimal Suhu Optimum Kekhususan Substrat

BT 5 30 ° C Dodecanoate, Myristate, Octanoate, Acetate
DF7 4 35 ° C Dodecanoate, Octanoate, Valerate, Butyrate
B9 4 35 ° C Valerasi, Dodecanoate, Butyrate, Oktanoate
DF3 4 30 ° C Palmitat, Dodecanoate, Myristate, Oktanoate
F4 4 35 ° C Dodecanoate, Palmitate, Oktanoate, Myristate
X 5 30 ° C Dodecanoate, Stearate, Myristate, Octanoate
Enzim yang diisolasi dari mikroorganisme lain (DF3, F4, X) menunjukkan

preferensi untuk dodekanoat, palmitat, miristat, oktanoat dan substrat
stearat. Spesifisitas enzim dalam kaitannya dengan lipid dengan residu asam lemak
C 8 -C 18 panjang rantai compellingly menunjukkan bahwa enzim yang dijelaskan
dalam penelitian ini bisa menjadi lipase benar. Enzim terisolasi
dari Pantoea sp. (B9) berpotensi diklasifikasikan sebagai esterases karena
spesifitas mereka terhadap butirat dan valerat. Kriteria yang digunakan untuk
membedakan esterase dari lipase, adalah bahwa esterase tidak menghidrolisis ester
yang mengandung panjang rantai asil lebih dari 10 atom karbon [72] . Merupakan
hal yang tidak biasa untuk mengisolasi B9 agar lebih menyukai pNP-butirat di atas
pNP-asetat, spesifisitas seperti itu tidak lazim di alam, bagaimanapun, esterase
baru dari Lactobacillus casei dan Escherichia coli sebelumnya telah menunjukkan
preferensi katalitik seperti itu [72,73] . C. flaccumfaciens (DF3) menunjukkan
aktivitas tertinggi 60 U / ml pada 30 ° C dengan spesifisitas substrat terhadap
palmitat. C. flaccumfaciens adalah bakteri endofit yang terkait dengan tanaman
seperti padi, kentang, ubi, tembakau, dan mentimun dan mampu menghasilkan
lipase [74] . Ini bisa menjadi laporan pertama dari lipase yang dikarakterisasi
dari C. flaccumfaciens yang diisolasi dari kayu Eucalyptus .
Aktivitas rendah diperoleh untuk laccases ( Gambar 4 ), dan ini diharapkan sebagai
laccases ekstraseluler dari jamur basidiomycete diketahui diproduksi dalam jumlah
rendah [75] . Diketahui bahwa ketika jamur ditanam dalam media pH 5, lakase
akan diproduksi secara berlebihan, namun kebanyakan penelitian menunjukkan
bahwa kisaran pH 3,6 hingga 5,2 cocok untuk produksi enzim [76] . Suhu optimal
untuk aktivitas lakase dapat bervariasi secara signifikan di antara organisme. Ada
laporan kegiatan dalam kisaran 25 hingga 80 ° C, dengan sebagian besar enzim
memiliki optimum pada 50 hingga 70 ° C [77] . Dalam penelitian ini suhu
optimum dari lipase dan esterase adalah 30 dan 35 ° C, masing-masing. Oleh
karena itu, aktivitas laccase dan stabilitas diuji pada suhu ini karena aplikasi akhir
dari penelitian ini adalah untuk menciptakan suatu koktil enzim untuk mengolah
pulp untuk menghilangkan ekstraksi lipofilik yang efektif. Namun demikian, ada
variasi minimal dalam aktivitas dari pH optimal dan suhu isolat F4 dan X. Isolat F4
ditampilkan 6,8% dan 9,7% lebih banyak aktivitas pada kondisi optimal 40 ° C
dan pH 5,5 masing-masing. Isolat X menunjukkan aktivitas 15,3% lebih banyak
pada 50 ° C, sementara pH optimal tetap sama. Hasil kami sebanding dengan
penelitian lain di mana produksi maksimum lakase dari Trichoderma
harzianum diamati pada 35 ° C dan pH 5 setelah 6 hari [78] .

Gambar. 4 . Aktivitas dan stabilitas lakase dari isolat jamur F4 dan X. A: aktivitas
pada 30 ° C, 35 ° C, pH 4 dan pH 5; B: stabilitas enzim pada 35 ° C dan pH 4
untuk F4 dan 30 ° C dan pH 5 untuk X..
Gambar. 5 . Pengaruh suhu (pada pH optimum 4 atau 5) pada aktivitas esterase /

lipase dari isolat DF3 (pH 4), DF7 (pH 4), B9 (pH 4), F4 (pH 4), BT (pH 5) dan X
(pH 5) pada p -NP ester (C 2 –C 18 ).
Selain menunjukkan aktivitas lakase (hingga 3,1 U / ml) ( Gambar 4 ), P.

formosus (F4) dan P. alba (X) juga menunjukkan spesifitas substrat tinggi terhadap
dodecanoate pada 35 dan 30 ° C, masing-masing. Informasi yang terbatas telah
dipublikasikan pada enzim yang diproduksi oleh P . alba , bagaimanapun,
pekerjaan sebelumnya menunjukkan bahwa xilanase dari mikroorganisme ini
ditandai dengan aktivitas hingga 420 IU / ml [79] . Kehadiran enzim dari
mikroorganisme ini dapat sangat membantu dalam pengurangan pembentukan
lapangan serta pemecahan xilan yang akan mengurangi jumlah bahan kimia yang
digunakan dalam pemrosesan pulp hilir [80,81] . Laccases juga memiliki
kemampuan untuk mendegradasi senyawa fenolik dan non-fenolik. Phenol
tanaman yang dilepaskan oleh kayu keras selama proses pulping mungkin
memiliki efek penghambatan pada aktivitas enzim [82] , oleh karena itu inklusi
jamur laccases dalam penelitian ini dapat mengurangi efek penghambatan senyawa
fenolik.
3.6 . Pengaruh suhu dan pH pada stabilitas enzim

Dalam industri pulp dan kertas, enzim pra-perawatan pulp adalah urusan yang
rumit. Ketika mempertimbangkan penambahan enzim untuk pulpa, sejumlah
variabel seperti dosis, masa inkubasi, suhu, pH dan kombinasi enzim perlu
diperhitungkan. Waktu adalah uang, jadi jumlah waktu yang minimal untuk pra-
perawatan enzim akan optimal. Oleh karena itu, ketika menentukan stabilitas
enzim, rentang yang lebih pendek untuk periode inkubasi dipilih. Namun stabilitas
diuji pada 18 jam untuk menetapkan rentang yang lebih luas untuk waktu
inkubasi, namun, dalam waktu pra-perawatan industri hingga 18 jam tidak dapat
dilakukan.
Enzim dari berbagai mikroorganisme tampaknya relatif stabil selama 18 jam pada
suhu optimal. Enzim dari DF3, DF7, dan X mempertahankan aktivitas lipolitik
mereka selama 3 jam dengan kerugian minimal dalam aktivitas dan
mempertahankan setidaknya 60% aktivitas setelah 18 jam ( Gambar 6 ). Enzim
terisolasi dari BT, X, F4, DF3 dan DF7 cukup stabil hingga 2 jam dan setelah itu
penurunan 30-40% dalam aktivitas diamati. Lebih dari 90% dari aktivitas asli
dipertahankan setelah 18 jam untuk DF3 dengan dodecanoate dan palmitat sebagai
substrat. Enzim dari DF7 dan F4 mempertahankan lebih dari 75% aktivitas setelah
18 jam dengan butirat dan valerat sebagai substrat, masing-masing. B9 di sisi lain,
awalnya menunjukkan stabilitas tinggi setelah 1 jam inkubasi diikuti oleh
penurunan aktivitas menjadi 70% setelah 3 jam inkubasi. Hasil ini baik
dibandingkan dengan penelitian lain dalam kondisi serupa. Misalnya, dalam studi
oleh Eggert et al. (2001) varian esterase (LipB, EC 3.1.1.1) dari Bacillus
subtilis ditemukan stabil pada pH 5 dan 45 ° C selama 1 jam [83] .
Gambar 6 . Stabilitas esterase / lipase dari DF3 (A); DF7 (B); B9 (C); F4 (D); BT
(E) dan X (F) pada suhu dan pH optimum.
Spesifisitas enzim dari DF3, DF7, F4 dan X terhadap kedua rantai asil alifatik yang
lebih pendek dan lebih lama selama periode inkubasi 18 jam menunjukkan
berbagai substrat yang dapat ditindaklanjuti oleh enzim ini. Stabilitas enzim-enzim
ini adalah karakteristik yang diinginkan dan akan menawarkan keuntungan dalam
aplikasi industri potensial. Namun, untuk tujuan penelitian ini, penambahan enzim-
enzim ini menjadi bubur sebagai langkah pra-perawatan akan optimal hingga 2–
3 jam. Hasil serupa dilaporkan oleh Massadeh dan Sabra (2011) di mana lipase
yang diisolasi dari B. stearothermophilus tetap stabil pada kisaran pH 7-9 setelah
inkubasi selama 1 jam pada 30 ° C, dengan sisa aktivitas di atas 50% untuk pH 7
–9 [84] . Namun, organisme extremophilic mampu menghasilkan lipase yang lebih
keras. Sebuah termostabil lipase dari Geobacillus thermodenitrificans IBRL-nra
ditemukan memiliki suhu optimal 65 ° C, di mana ia ditahan kegiatan awal untuk
3 jam. Aktivitas lipase tertinggi dilaporkan pada pH 7,0 dan stabil selama 16 jam
pada 65 ° C [85] . Borkar et al. (2009) melaporkan lipase dari strain P.
aeruginosa yang ditemukan stabil pada 55 ° C setelah 2 jam pada pH
6,9 [86] . Sebuah lipase dari psychrotolerant Pseudomonas fluorescens galur aktif
pada kisaran suhu 15-65 ° C, bagaimanapun, menunjukkan aktivitas maksimum
pada 45 ° C dan pH 8,0. Enzim ini menunjukkan stabilitas tinggi,
mempertahankan 100% dan 70% dari aktivitasnya setelah periode inkubasi 45 dan
100 menit, masing-masing, pada 45 ° C dan pH 8,0. Lipase khusus ini juga
menunjukkan spesifisitas substrat yang luas yang bekerja pada p ester -nitrophenyl
dengan C 8 -C 18 kelompok asil sebagai substrat [60] .
Banyak peneliti memilih mengkloning gen yang mengkode enzim yang diinginkan
untuk meningkatkan aktivitas dan meningkatkan produksi [87-89] . Namun, dalam
industri ini mungkin bukan pendekatan praktis karena penyaringan perpustakaan
klon melibatkan metode berbasis plat agar konvensional, yang akan membutuhkan
sekitar 10.000 lempeng petri, masing-masing berisi 10.000 klon. Ini memakan
waktu dan akan sangat meningkatkan pengeluaran [90] . Aktivitas enzim yang
diamati dalam penelitian ini sebanding dengan, jika tidak lebih tinggi, dari lipase
dan esterase yang belum dimodifikasi atau dikloning ( Tabel 5 ). Kegiatan yang
dicatat dalam penelitian ini (hingga 60 U / ml) bisa sangat berharga dalam
pengurangan formasi pitch di industri pulp dan kertas. Selain itu, enzim yang
dijelaskan di sini adalah asli untuk spesies kayu Eucalyptus dan belum
dimodifikasi dengan cara apapun, sehingga membuatnya layak dan ideal untuk
aplikasi industri. Ini terutama kasus untuk proses pulping asam-bisulfit yang
digunakan untuk memproduksi bubur pelarutan, karena proses ini melibatkan
kondisi proses pH asam yang akan cocok untuk enzim yang dijelaskan dalam
penelitian ini.
Tabel 5 . Perbandingan suhu optimal dan pH beberapa lipase dan esterase

yang diisolasi dari bakteri yang berbeda.
Aktivitas
Suhu
Memisahkan Enzim pH Enzim (U / Referensi.
(° C)
ml)
Dharmsthiti dan
Bacillus THL027 Lipase 7 70 8.3
Luchai [91]
Bacillus coagulans BTS-3 Lipase 8,5 55 1.16 Kumar dkk. [65]
Geobacillus zalihae sp. Lipase 6.5 65 0,15 Rahman dkk. [92]
Pseudomonas Dharmsthiti dan
Lipase 8 55 3,5
aeruginosa LP602 Kuhasuntisuk [93]
Pseudomonas gessardii Lipase 3,5 30 156 Ramani dkk. [66]
Multivanoran Burkholderia Lipase 7 30 58 Gupta dkk. [94]
Aktivitas
Suhu
Memisahkan Enzim pH Enzim (U / Referensi.
(° C)
ml)
Burkholderia multivorans V2 Lipase 8 37 14 Dandavate et al. [95]
Burkholderia sp. ZYB002 Lipase 8 65 22,8 Shu et al. [96]
Enterococcus
Lipase 4.6 30 207.6 Vrinda [97]
durans NCIM5427
Streptomyces
Lipase 6 37 6.9 Aly dkk. [98]
mengelupas LP10
Salinivibrio sp. saring SA-2 Lipase 7,5 50 5.1 Amoozegar dkk. [64]
Anoxybacillus gonensis A4 Esterase 5,5 60–80 0,8 Faiz et al. [99]
Bacillus sp. saring DVL2 Esterase 7 37 5.2 Kumar dkk. [100]
8– Alvarez-Macarie
Bacillus licheniformis Esterase 45 12
8,5 dkk. [101]
Geobacillus sp. DF20 Esterase 7 50 27,9 Özbek dkk. [102]
Lactobacillus brevis NJ13 Esterase 8 50 48,12 Kim et al. [103]
Poornima dan
Alcaligens faecalis Esterase 8 30 0,27
Kasthuri [104]
Burkholderia fungorum A216 Esterase 6.5 37 0,014 Jiao dkk. [105]
Achromobacter
Esterase 8 50 89,5 Pradeep dkk. [106]
denitrificans regangan SP1
Janthinobacterium lividum Esterase 7 30 0,00568 Park et al. [107]
Pseudomonas sp. KWI-56 Esterase 7,5 22 51,6 Sugihara dkk. [108]
4 . Kesimpulan
Dalam karya ini, koktail lipolitik bebas selulosa dan enzim lainnya diperoleh dari
mikroorganisme yang berasal dari serabut kayu Eucalyptus Afrika
Selatan . Lipase dan esterase menunjukkan aktivitas optimal pada suhu sedang (30
dan 35 ° C) dan rentang pH asam (pH 4 dan 5). Stabilitas dan aktivitas enzim pada
berbagai substrat lipofilik dapat menyebabkan aplikasi bioteknologi potensial
dalam penghapusan komponen lipofilik yang menyebabkan masalah pitch dalam
pembuatan pulp kimia kemurnian tinggi seperti melarutkan pulp
kayu. Dimasukkannya laccases memiliki potensi untuk membantu dalam degradasi
lebih lanjut dari senyawa lipofilik yang bermasalah ini. Pekerjaan di masa depan
akan fokus pada penerapan enzim ini langsung ke chip kayu yang diolah dan
mengevaluasi potensi mereka untuk mengurangi aglomerasi senyawa lipofilik yang
menyebabkan pembentukan pitch selama pulping. Aplikasi enzim yang diproduksi
oleh mikroflora asli akan membantu mengurangi biaya dan merupakan alternatif
yang lebih hijau untuk perawatan kimia.
Konflik kepentingan
Tidak ada.
Ucapan terima kasih
Pekerjaan ini didukung oleh National Research Foundation (NRF) dan Fasilitas
Pengembangan Industri Biorefinery di Council for Scientific and Industrial
Research (CSIR), Durban, Afrika Selatan.
Artikel yang disarankanMengutip artikel ( 0 )
Referensi
[1]
S. Kulkarni , P. Sadichha , S. Satpute Esterases mikroba: gambaran
umum
Int. J. Curr. Mikrobiol. Appl. Sci. , 2 ( 2013 ) , pp. 135 - 146
Lihat Rekam di Scopus Google Scholar
[2]
UT Bornscheuer Microbial carboxyl esterases: klasifikasi, sifat dan
aplikasi dalam biocatalysis
FEMS Microbiol. Pdt. , 26 ( 2002 ) , hlm. 73 - 81
Artikel Unduh PDF CrossRef Lihat Rekam di Scopus Google Scholar
[3]
DL Ollis , E. Cheah , M. Cygler , B. Dijkstra , F. Frolow , SM Franken , M.
Harel , SJ Remington , I. Silman , J. Schrag , dkk. Lipatan hidrolase alpha
/ beta
Protein Eng. , 5 ( 1992 ) , pp. 197 - 211
CrossRef Lihat Rekam di Scopus Google Scholar
[4]
G. Dodson , A. Triad Katalitik Wlodawer dan keluarga mereka
Tren Biochem. Sci. , 23 ( 1998 ) , pp. 347 - 352
Artikel Unduh PDF Lihat Rekam di Scopus Google Scholar
[5]
S. Sharma , SS Kanwar Lipase dan aplikasi yang toleran terhadap
pelarut organik
Sci. World J. ( 2014 ) , hal. 625258
beasiswa Google
[6]
SM Thomas , S. Kavitha Isolasi dan skrining lipase yang menghasilkan
mikroorganisme dari tanah dan studi banding aktivitas enzim dengan
substrat yang berbeda
Int. J. Sci. Ya Technol. Res. , 4 ( 2015 ) , hlm. 5778 - 5781
[7]
V. Ramakrishnan , LC Goveas , B. Narayan , PM Halami Perbandingan
produksi lipase oleh Enterococcus faecium MTCC, 5695
dan Pediococcus acidilactici MTCC, 11361 menggunakan limbah ikan
sebagai substrat: optimalisasi kondisi budaya oleh metodologi
permukaan respon
Int. Sch. Res. Pemberitahuan: Biotechnol. ( 2013 ) , hal. 980562
beasiswa Google
[8]
A. Knapp , S. Voget , R. Gao , N. Zaburannyi , D. Krysciak , M. Breuer , B.
Hauer , WR Streit , R. Müller , R. Daniel , K.-E. Jaeger Mutasi
meningkatkan produksi dan sekresi lipase ekstraseluler
oleh Burkholderia glumae PG1
Appl. Mikrobiol. Biotechnol. , 100 ( 2016 ) , pp. 1265 - 1273
[9]
J. Rodrigues , A. Canet , I. Rivera , NM Osório , G. Sandoval , F. Valero , S.
Ferreira-Dias Produksi biodiesel dari minyak Jatropha mentah yang
dikatalisis oleh Rhizopus oryzae dan Carica papaya lipase non-
komersial amobilisasi
Bioresour. Technol. , 213 ( 2016 ) , pp. 88 - 95
[10]
ME Vaquero , J. Barriuso , MJ Martínez , A. Prieto Properties, struktur,
dan aplikasi esterase sterol mikroba
[11]
R. Gupta , A. Kumari , P. Syal , Y. Singh 2015 Keragaman molekuler dan
fungsional ragi dan lipase jamur: peran mereka dalam vioteknologi dan
fisiologi seluler
Prog Lipid Res. , 57 ( 2015 ) , hlm 40 - 54
[12]
VP Lailaja , M. Chandrasekaran Detergent alkaline lipase yang
kompatibel diproduksi oleh Bacillus smithii BTMS 11 laut
Dunia J. Mikrobiol. Biotechnol. , 29 ( 2013 ) , pp. 1349 - 1360
[13]
R. Fernández-Lafuente Lipase dari Thermomyces lanuginosus :
menggunakan dan prospek sebagai biokatalis industri
J. Mol. Catal. B: Enzym. , 62 ( 2010 ) , pp. 197 - 212
[14]
S. Vijayalakshmi , S. Venkatkumar , V. Thankamani Skrining protease
termofilik alkalofilik yang diisolasi dari Bacillus RV.B2.90 untuk
aplikasi industri
Res. Biotechnol. , 2 ( 2011 ) , pp. 32 - 41
[15]
M. Imran , MJ Asad , SH Hadri , S. Mehmood Produksi dan aplikasi
industri enzim laccase
J. Cell Mol. Biol. , 10 ( 2012 ) , pp. 1 - 11
[16]
N. Gurung , S. Ray , S. Bose , V. Rai Pandangan yang lebih luas: enzim
mikroba dan relevansinya dalam industri, obat-obatan, dan seterusnya
Res BioMed. Int. , 18 ( 2013 )
beasiswa Google
[17]
PS Nigam Mikroba enzim dengan karakteristik khusus untuk aplikasi
bioteknologi
Biomolekul , 3 ( 2013 ) , hlm 597 - 611
[18]
E. Kembali , LH Allen Pitch Control, Resin Kayu dan Deresinasi
EL Back , LH Allen (Eds.) , TAPPI Press ( 2000 ) , hal. 307 - 328
beasiswa Google
[19]
A. Gutiérrez , JC del Río , AT Martínez Mikroba dan kontrol enzimatik
pitch dalam industri pulp dan kertas
Appl. Mikrobiol. Biotechnol. , 82 ( 2009 ) , hal. 1005 - 1018
[20]
A. Gutiérrez , JC del Río , AT Martínez Fungi dan enzim mereka untuk
kontrol pitch di industri pulp dan kertas
M. Hofrichter (Ed.) , Aplikasi Industri , Spinger-verlag , Berlin,
Heidelberg ( 2010 )
beasiswa Google
[21]
B. Sithole , S. Shirin , X. Zhang , L. Lapierre , J. Pimental , M. Paice Piliha
n Deresinasi dalam pembuatan pulp sulfit
BioResources , 5 ( 2010 ) , pp. 187 - 205
[22]
BB Sithole , EJ Pimentel Penentuan nonylphenol dan nonylphenol
ethoxylates dalam sampel pulp oleh Py-GC / MS
J. Anal. Appl. Pirolisis , 85 ( 2009 ) , hlm 465 - 469
[23]
P. Bajpai , PK Bajpai , R. Kondo Bioteknologi untuk Perlindungan
Lingkungan dalam Industri Pulp dan Kertas
Springer , Jerman ( 1999 ) , pp. 13 - 28
CrossRef Google Scholar
[24]
E. Dube , F. Shareck , Y. Hurtubise , M. Beauregard , C. Daneault Pendekat
an berbasis enzim untuk kontrol pitch dalam pulping
thermomechanical dari kayu lunak dan pengangkatan pitch dalam air
proses
EXFOR dan Pertemuan Tahunan , Montreal, QC, Kanada, 3–4
Februari ( 2009 ) , hlm. 69 - 74
[25]
Aplikasi M. Paice Enzyme dalam pembuatan pulp dan kertas
Paprican Proceeding, Simposium Universitas Lakehead , Kanada, 27
September ( 2005 ) , pp. 1 - 40
[26]
A. Gutiérrez , C. José , JC del
Rio , D. Ibarra , J. Rencoret , J. Romero , M. Speranza , dkk. Penghapusan
enzimatik sterol bebas dan terkonjugasi membentuk deposit pitch
dalam pemutihan pulp kayu eukaliptus yang ramah lingkungan
Mengepung. Sci. Technol. , 40 ( 2006 ) , pp. 3416 - 3422
[27]
D. Robl , PS Costa , SC Rabelo , PS Delabona , DJS Lima , G. Padilla , JGC
Pradella Penggunaan ekstrak ascomycete dalam pembuatan koktail
enzimatik meningkatkan hidrolisis ampas tebu tebu
BioEnergy Res. , 9 ( 2016 ) , hlm. 559 - 565
[28]
L. Ramnath , T. Bush , R. Govinden Metode optimasi untuk denaturasi
gradient gel electrophoresis (DGGE) analisis mikroflora
dari Eucalytpus sp., Serpihan kayu yang ditujukan untuk pulping
Afr. J. Biotechnol. , 13 ( 2014 ) , hal. 356 - 365
[29]
SF Altschul , W. Gish , W. Miller , EW Myers , DJ Lipman Alat pencarian
pelurusan lokal dasar
J. Mol. Biol. , 215 ( 1990 ) , pp. 403 - 410
[30]
G. Kouker , K.-E. Jaeger Pelat khusus dan sensitif untuk lipase bakteri
Appl. Mengepung. Mikrobiol. , 53 ( 1987 ) , hlm 211 - 213
[31]
B. Rai , A. Shrestha , S. Sharma , J. Joshi Skrining, optimasi dan skala
proses untuk produksi skala pilot lipase oleh Aspergillus niger
Biomed. Biotechnol. , 2 ( 2014 ) , pp. 54 - 59
[32]
D. Kumar , L. Kumar , S. Nagar , C. Raina , R. Parshad , VK Gupta Screeni
ng, isolasi dan produksi lipase / esterase yang
memproduksi Bacillus sp. saring DVL2 dan evaluasi potensinya dalam
reaksi esterifikasi dan resolusi
Lengkungan. Appl. Sci. Res. , 4 ( 2012 ) , pp. 1763 - 1770
[33]
L. Singh , VP Singh Biodegradasi pewarna tekstil, bromophenol blue
dan Congo red oleh jamur Aspergillus flavus
Mengepung. Kami Int. J. Sci. Technol. , 5 ( 2010 ) , pp. 235 - 242
[34]
SS Desai , GB Tennali , N. Channur , AC Anup , G. Deshpande , BP Azhar
Murtuza Isolasi lakase yang menghasilkan jamur dan karakterisasi
parsial laccase, Bioteknologi
Bioinform. Bioeng. , 1 ( 2011 ) , pp. 543 - 549
[35]
Y. Hu , Y. Huang , Y. Yin , G. Cheng , F. Lei , N. Lu , J. Li , EJ Ashforth ,
L. Zhang , B. Zhu 2010 Novel gen lipolitik dari perpustakaan
metagenomik mikroba Selatan Sedimen laut Cina
FEMS Microbiol Ecol. , 72 ( 2010 ) , pp. 228 - 237
[36]
JP Ride Pengaruh lignifikasi yang diinduksi pada ketahanan dinding sel
gandum terhadap degradasi jamur
Physiol. Plant Pathol. , 16 ( 1980 ) , pp. 187 - 196
[37]
Z. Wang , Y. Cai , X. Liao , G. Tao , Y. Li , F. Zhang , D. Zhang Pemurnia
n dan karakterisasi dua laccases termostabil dengan karakteristik
adaptasi dingin yang tinggi dari Pycnoporus sp. SYBC-L1
Proses Biochem. , 45 ( 2010 ) , pp. 1720 - 1729
[38]
MJ Bailey , P. Biely , K. Poutanen pengujian antar laboratorium metode
untuk pengujian aktivitas xilanase
J. Biotechnol. , 23 ( 1992 ) , hlm. 257 - 270
[39]
L. Bülow , K. Mosback Ungkapan dalam E. coli dari gen polimerik yang
mengkode esterase meniru katalis hidrolisis ester-nitrophenyl p
FEBS Lett. , 210 ( 1987 ) , pp. 147 - 152
[40]
Pemetaan RC Judd Peptide dengan kromatografi lapisan tipis
elektroforesis tipis dua dimensi
JM Walker (Ed.) , The Protein Protocols Handbook , Humana Press
Inc. , Totowa, New Jersey, USA ( 1996 ) , hlm. 439
beasiswa Google
[41]
UK Laemmli Pembelahan protein struktural selama perakitan kepala
bakteriofag T4
Nature , 227 ( 1970 ) , pp. 680 - 685
[42]
MM Bradford Metode cepat dan sensitif untuk kuantisasi jumlah
mikrogram protein menggunakan prinsip mengikat protein-pewarna
Anal. Biochem. , 72 ( 1976 ) , hlm 248 - 254
[43]
L. Govender , L. Naidoo , ME Setati Isolasi bakteri penghasil hidrolase
dari Sua pan solar salterns dan produksi endo-1, 4-β-xilanase dari
haloalkaliphilic Nesterenkonia sp yang baru diisolasi
Afr. J. Biotechnol. , 8 ( 2009 ) , pp. 5458 - 5466
[44]
PSB Miguel , MNV de Oliveira , JC Delvaux , GL de
Jesus , Borges AC , MR Tótola , JCL Neves , MD Costa Keragaman dan
distribusi komunitas bakteri endofit pada berbagai
tahap pertumbuhan Eukaliptus
Antonie Van Leeuwenhoek , 109 ( 2016 ) , hlm. 755 - 771
[45]
RA Castro , MC Quecine , PT Lacava , Batista BD , DM Luvizotto , J. Marc
on , A. Ferreira , IS Melo , JL Azevedo Isolasi dan enzim bioprospeksi
bakteri endofit yang terkait dengan tanaman ekosistem mangrove
Brasil
Springer Plus , 3 ( 2014 ) , hlm 382 - 391
[46]
FN Niyonzima , SS Lebih Banyak Screening dan identifikasi bakteri
penghasil alkali lipase baru
Int. J. Pharm. Bio. Sci. , 4 ( 2013 ) , pp. 1037 - 1045
beasiswa Google
[47]
M. Veerapagu , AS Narayanan , K. Ponmurugan , KR Jeya Penyaringan
seleksi identifikasi produksi dan optimalisasi lipase bakteri dari
tumpahan minyak tanah
Asian J. Pharm. Clin. Res. , 6 ( 2013 ) , hlm 62 - 67
[48]
S. Lanka , JNL Latha Ulasan singkat tentang berbagai metode skrining
untuk mengisolasi produsen lipase potensial: lipase-enzim saat ini dan
masa depan industri bioteknologi
Int. J. Biol. Chem. , 9 ( 2015 ) , pp. 207 - 219
[49]
ZB Bakir , K. Metin Screening untuk enzim industri penting dari bakteri
thermophilic; pemilihan mikroorganisme penghasil lipase dan
optimalisasi kondisi budaya
Eur. J. Biotechnol. Biosci. , 3 ( 2015 ) , hlm 43 - 48
[50]
W. Latip , RNZRA Rahman , ATC Leow , FM Shariff , MSM Ali Expressi
on dan karakterisasi lipase thermotolerant dengan profil pH yang luas
diisolasi dari Pseudomonas sp Antartika . saring AMS3
Peer J. , 4 ( 2016 ) , hlm. e2420
[51]
CA Thomson , PJ Delaquis , G. Mazza Deteksi dan pengukuran aktivitas
lipase mikroba: ulasan
Crit. Pdt. Food Sci. Nutr. , 39 ( 2006 ) , pp. 165 - 187
[52]
IS Sindhu , S. Chhibber , N. Capalash , P. Sharma Produksi xilanase bebas
selulosa dari Bacillus megaterium dengan fermentasi zat padat untuk
biobleaching pulp
Curr. Mikrobiol. , 53 ( 2006 ) , pp. 167 - 172
[53]
R. Sharma , Y. Chisti , UC Banerjee Pemurnian, karakterisasi, dan
aplikasi lipase produksi
Biotechnol. Adv. , 19 ( 2001 ) , hal. 627 - 662
[54]
DdCM Simoes , D. McNeill , B. Kristiansen , M. Mattey Pemurnian dan
karakterisasi parsial dari 1,57 kDa esterase termostabil dari Bacillus
stearothermophilus
FEMS Microbiol. Lett. , 147 ( 1997 ) , pp. 151 - 156
[55]
T. Kupke , M. Lechner , G. Kaim , F. Götz Peningkatan pemurnian dan
sifat-sifat biokimia fosfatipase C fosfatidilinositol spesifik dari Bacillus
thuringiensis
Eur. J. Biochem. , 185 ( 1989 ) , pp. 151 - 155
[56]
AF Gokul Screening dan Karakterisasi Jamur Laccases. Mendesain
disertasi. University of KwaZulu-Natal, Disiplin Mikrobiologi, Sekolah
Ilmu Kehidupan, Sekolah Tinggi Pertanian
Teknik dan Ilmu Pengetahuan , Tas Pribadi X54001, Durban, 4000 , Afrika
Selatan ( 2014 ) , hal. 4
[57]
AL. Sunesson, metabolit Volatile dari mikroorganisme di lingkungan indoor
- sampling, analisis dan identifikasi. Disertasi magister. Umeá University,
Departemen Kimia Analitik, S-901 87 Umeá dan Institut Nasional untuk
Kehidupan Kerja, Divisi Kimia Analitik, PO Box 7654, S-907 13 Umeá,
Swedia, pp. 11 (1995).
[58]
RG Jensen , FA DeJong , RM Clark Penentuan spesifisitas lipase
Lipids , 18 ( 1983 ) , pp. 239 - 252
[59]
MP Prasad Produksi enzim lipase dari Pseudomonas aeruginosa diisolasi
dari tanah kaya lipid
Int. J. Pure Appl. Biosci. , 2 ( 2014 ) , pp. 77 - 81
[60]
AA Gökbulut , A. Arslanoğlu Pemurnian dan karakterisasi biokimia dari
lipase ekstraseluler dari psychrotolerant Pseudomonas
fluorescens KE38
Turk. J. Biol. , 37 ( 2013 ) , hlm. 538 - 546
beasiswa Google
[61]
S. Ertuğrul , G. Dönmez , S. Takaç Isolasi lipase yang
menghasilkan Bacillus sp. dari air limbah pabrik minyak zaitun dan
meningkatkan aktivitas enzimnya
J. Hazard. Mater. , 149 ( 2007 ) , pp. 720 - 724
[62]
SK Ghatora , BS Chadha , HS Saini , MK Bhat , CB Faulds Keragaman
esterasis dinding sel tumbuhan di fungi thermophilic dan
thermotolerant
J. Biotechnol. , 125 ( 2006 ) , pp. 434 - 445
[63]
M. Guncheva , D. Zhiryakova Sifat katalitik dan aplikasi potensial
dari Bacillus lipase
J. Mol. Catal. B: Enzym. , 68 ( 2011 ) , pp. 1 - 21
[64]
MA Amoozegar , E. Salehghamari , K. Khajeh , M. Kabiri , S. Naddaf Prod
uksi lipase termofilik ekstraseluler dari bakteri moderat
halophilic, Salinivibrio sp. saring SA-2
J. Mikrobiol Dasar. , 48 ( 2008 ) , pp. 160 - 167
[65]
S. Kumar , K. Kikon , A. Upadhyay , SS Kanwar , R. Gupta Produksi,
pemurnian, dan karakterisasi lipase dari thermophilic dan
alkaliphilic Bacillus coagulans BTS-3
Protein Expr. Purif. , 41 ( 2005 ) , hlm 38 - 44
[66]
K. Ramani , E. Chockalingam , G. Sekaran Produksi lipase asam
ekstraseluler baru dari Pseudomonas gessardii menggunakan limbah
rumah jagal sebagai substrat
J. Ind. Mikrobiol. Biotechnol. , 37 ( 2010 ) , hlm. 531 - 535
[67]
C.-H. Liu , W.-M. Chen , J.-S. Metode Chang untuk skrining cepat dan
isolasi bakteri yang menghasilkan lipase asam: studi kelayakan dan
protokol pengujian aktivitas baru
Dunia J. Mikrobiol. Biotechnol. , 23 ( 2007 ) , hlm. 633 - 640
[68]
S. Sinchaikul , B. Sookkheo , S. Phutrakul , FM Pan Optimalisasi lipase
termostabil dari Bacillus stearothermophilus P1: Overexpression,
pemurnian, dan karakterisasi
Protein Expr. Purif. , 22 ( 2001 ) , hlm 388 - 398
[69]
M. Kambourova , N. Kirilova , R. Mandeva , A. Derekova Pemurnian dan
sifat lipase termostabil dari thermophilic Bacillus
stearothermophilus MC 7
J. Mol. Catal. B: Enzym. , 22 ( 2003 ) , hal. 307 - 313
[70]
DE Koshland Penerapan teori spesifisitas enzim untuk sintesis protein
Proc. Natl. Acad. Sci. , 44 ( 1958 ) , pp. 98 - 104
[71]
CB Post , WJ Ray Re-pemeriksaan fit diinduksi sebagai penentu
spesifisitas substrat dalam reaksi enzimatik
Biokimia , 34 ( 1995 ) , pp. 15881 - 15885
[72]
J.-K. Rhee , D.-G. Ahn , Y.-G. Kim , J.-W. Oh esterase thermophilic dan
thermostable baru dengan kesamaan urutan dengan keluarga lipase
hormon-sensitif, klon dari perpustakaan metagenomik
Appl. Mengepung. Mikrobiol. , 71 ( 2005 ) , pp. 817 - 825
[73]
YJ Choi , CB Miguez , BH Lee Karakterisasi dan ekspresi gen heterolog
dari esterase baru dari Lactobacillus casei CL96
Appl. Mengepung. Mikrobiol. , 70 ( 2004 ) , hal. 3213 - 3221
[74]
WL Araújo , PT Lacava , FD Andreote , JL Azevedo Interaksi antara
endofit dan inang tumbuhan: aspek bioteknologi
C. Ait Barka , C. Clément (Eds.) , Interaksi Tanaman-Mikroba , Papan
Penandaan Penelitian , Kerala, India ( 2008 ) , hal. 95 - 115
[75]
LC Octavio , PP Ma , C. Irma , BRJ Ricardo , VO Francisco Bab 15:
Laccases
Kemajuan dalam Bioteknologi Pertanian dan Pangan , Ranjau
Penelitian , Kerala, India ( 2006 ) , hlm. 323 - 340
[76]
V. Madhavi , SS Lele Laccase sifat dan aplikasi
BioResources , 4 ( 2009 ) , pp. 1694 - 1717
[77]
J. Snajdr , P. Baldrian Suhu efek produksi, aktivitas dan stabilitas enzim
ligninolytic di Pleurotus ostreatus dan Trametes versicolor
Folia Microbiol. , 52 ( 2007 ) , hlm. 498 - 502
[78]
RA Abd El Monssef , EA Hassan , EM Ramadan Produksi enzim lakase
untuk aplikasi potensial mereka untuk mendekolorisasi pigmen jamur
pada kertas tua dan perkamen
Ann. Agric. Sci. , 61 ( 2016 ) , hlm 145 - 154
[79]
LN Mosina Partial Purification dan Karakterisasi Phialophora
alba Xylanases dan Aplikasi untuk Pretreated Sugarcane Bagasse,
Disertasi Masters
Departemen Mikrobiologi, Sekolah Ilmu Kehidupan, Universitas KwaZulu-
Natal , Durban, Afrika Selatan ( 2013 )
beasiswa Google
[80]
SS Dhiman , J. Sharma , B. Aplikasi Industri Botan dan prospek masa
depan xylanase mikroba: ulasan
Bioresources , 3 ( 2008 ) , pp. 1377 - 1402
[81]
GM Gübitz , D. Haltrich , B. Latal , W. Steiner Mode depolimerisasi
hemiselulosa oleh berbagai mannanase dan xilanase dalam kaitannya
dengan kemampuan mereka untuk memutihkan pulp kayu lunak
[82]
P. Upadhyay , R. Shrivastava , PK Agrawal Bioprospecting dan aplikasi
bioteknologi dari jamur laccase
3 Biotech , 6 ( 2016 ) , pp. 15 - 27
beasiswa Google
[83]
T. Eggert , G. van Pouderoyen , BW Dijkstra , K.-E. Enzim
lipolitik Jaeger Lipa dan LipB dari Bacillus subtilis berbeda dalam
pengaturan ekspresi gen sifat biokimia, dan struktur tiga dimensi
Fed. Eur. Biochem. Soc. Lett. , 502 ( 2001 ) , pp. 89 - 92
[84]
MI Massadeh , FM Sabra Production dan karakterisasi lipase
dari Bacillus stearothermophilus
Afr. J. Biotechnol. , 10 ( 2011 ) , pp. 13139 - 13146
[85]
A. Balan , D. Ibrahim , RA Rahim , FAA Rashid Pemurnian dan
karakterisasi lipase termostabil dari Geobacillus
thermodenitrificans IBRL-nra
Res Enzim. , 2012 ( 2012 ) , hal. 987523
beasiswa Google
[86]
PS Borkar , RG Bodade , SR Rao , CN Khobragade Pemurnian dan
karakterisasi lipase ekstraseluler dari strain baru - Pseudomonas
aeruginosa SRT 9
Braz. J. Microbiol. , 40 ( 2009 ) , hal. 358 - 366
[87]
SC Lehmann , A. Maraite , M. Steinhagen , MB Ansorge-
Schumacher Karakterisasi Pseudomonas stutzeri lipase / esterase baru
dengan aplikasi potensial dalam produksi alkohol sekunder kiral
Adv. Biosci. Biotechnol. , 5 ( 2014 ) , hal. 1009 - 1017
[88]
L. Chriş , M. Hriscu , A. Bica , M. Tosa , G. Nagy , G. Róna , BG Vértessy ,
FD Irimie Kloning molekuler dan karakterisasi esterase / lipase
termostabil yang dihasilkan oleh strain Anoxybacillus flavithermus
yang baru.
J. Jenderal Appl. Mikrobiol. , 59 ( 2013 ) , pp. 119 - 134
[89]
BV Cedillo , FJ Plou , MJ Martínez Esterase sterol rekombinan
dari Ophiostoma piceae : biokatalis yang membaik yang dinyatakan
dalam Pichia pastoris
Microb. Fakta Sel. , 11 ( 2012 ) , hlm. 73 - 87
[90]
EJ Mathur , G. Toledo , BD Hijau , M. Podar , TH Richardson , M. Kulwiec
, HW Chang Sebuah pendekatan berbasis keanekaragaman hayati
untuk pengembangan enzim kinerja: metagenomik terapan dan evolusi
terarah
Ind. Biotechnol. , 4 ( 2005 ) , hlm. 283 - 287
[91]
S. Dharmsthiti , S. Luchai Produksi, pemurnian dan karakterisasi lipase
termofilik dari Bacillus sp. THL027
FEMS Microbiol. Lett. , 179 ( 1999 ) , hlm. 241 - 246
[92]
RNZRA Rahman , TC Leow , AB Salleh , M. Basri Geobacillus
zalihae sp. nov., bakteri lipolitik termofilik yang diisolasi dari limbah
pabrik kelapa sawit di Malaysia
BMC Mikrobiol. , 7 ( 2007 ) , pp. 77 - 86
[93]
S. Dharmsthiti , B. Kuhasuntisuk Lipase dari Pseudomonas
aeruginosa LP602: sifat biokimia dan aplikasi untuk pengolahan air
limbah
J. Ind. Mikrobiol. Biotechnol. , 21 ( 1998 ) , hlm. 75 - 80
[94]
N. Gupta , V. Sahai , R. Gupta Alkaline lipase dari strain
baru Burkholderia multivorans : optimasi media statistik dan produksi
dalam bioreaktor
Proses Biochem. , 42 ( 2007 ) , hal. 518 - 526
[95]
V. Dandavate , J. Jinjala , H. Keharia , D. Madamwar Produksi,
pemurnian parsial dan karakterisasi lipase toleran organik pelarut
dari Burkholderia multivorans V2 dan aplikasinya untuk sintesis ester
Bioresour. Technol. , 100 ( 2009 ) , hal. 3374 - 3381
[96]
Z.-Y. Shu , J.-G. Wu , L.-X. Cheng , D. Chen , Y.-M. Jiang , X. Li , J.-
Z. Huang Produksi dan karakterisasi lipase seluruh sel
dari Burkholderia sp organik toleran toleran . ZYB002
Appl. Biochem. Biotechnol. , 166 ( 2012 ) , hal. 536 - 548
[97]
R. Vrinda Karakterisasi Lipase dari Bakteri Asam Laktat Terisolasi
dari Limbah Pengolahan Ikan, Ph.D Tesis
Universitas Mysore , Karnataka, India ( 2013 )
beasiswa Google
[98]
MM Aly , S. Tork , SM Al-Garni , L. Nawar Produksi lipase
dari Streptomyces yang ditingkatkan secara genetik mengelupas LP10
yang diisolasi dari tanah yang terkontaminasi minyak
Afr. J. Microbiol. Res. , 6 ( 2012 ) , hlm. 1125 - 1137
[99]
O. Faiz , A. Colak , N. Saglam , S. Canakçi , AO Beldüz Penentuan dan
karakterisasi aktivitas esterolitik termostabil dari bakteri termofilik
baru Anoxybacillus gonensis A4
J. Biochem. Mol. Biol. , 40 ( 2007 ) , pp. 588 - 594
[100]
S. Kumar , R. Karan , S. Kapoor , SP Singh , SK Khare Screening dan
isolasi bakteri halophilic yang menghasilkan enzim penting secara
industri
Braz. J. Microbiol. , 43 ( 2012 ) , pp. 1595 - 1603
[101]
E. Alvarez-Macarie , V. Augier-
Magro , J. Baratti Karakterisasi ester termostabil
dari termiltrasi moderat Bacillus licheniformis
Biosci. Biotechnol. Biochem. , 63 ( 1999 ) , hlm 1865 - 1870
[102]
E. Özbek , Y. Kolcuoğlu , L. Konak , A. Çolak , F. Öz Pemurnian parsial
dan karakterisasi biokimia dari esterase yang sangat termos dan pH-
stabil dengan afinitas substrat yang besar.
Turk. J. Chem. , 38 ( 2014 ) , hlm. 538 - 546
[103]
CH Kim , SB Cho , JI Chae , DW Kim , Lee AR , JK Park , NJ Choi Isolasi
esterase yang memproduksi Lactobacillus brevis NJ13 dari kim-chi dan
penyelidikan bahan media yang efektif untuk produksi esterase
menggunakan metode statistik
J. Anim. Menanam sci. , 23 ( 2013 ) , pp. 149 - 156
[104]
S. Poornima , J. Kasthuri Depolymerase dan uji esterase dalam Alcaligens
faecalis terhadap coploymerized Acinetobacter junii CN1 PHBV
Int. J. Sci Terbaru. Res. , 7 ( 2016 ) , hal. 9713 - 9717
[105]
A. Jiao , Z. Xu , X. Yang , Q. Guo , X. Liu Skrining dan identifikasi
feruloyl esterase memproduksi bakteri Burkholderia fungorum A216
J. Chem. Pharm. Res. , 6 ( 2014 ) , pp. 1040 - 1046
[106]
S. Pradeep , MS Josh , ES Hareesh , S. Kumar , S. Benjamin Achromobacte
r denitrificans strain SP1 menghasilkan esterase intraseluler setelah
menggunakan di (2ethylhexyl) phthalate
Int. Biodeterior. Biodegrad. , 105 ( 2015 ) , hlm 160 - 167
[107]
J.-S. Park , J.-Y. Choi , P.-M. Joung , SJ Park , YH Rhee , K.-S. Shin Isolasi
dari asam rantai panjang polyhydroxyalkanoic merendahkan
bakteri, Janthinobacterium lividum
J. Microbiol. , 39 ( 2001 ) , hlm 139 - 141
[108]
A. Sugihara , Y. Shimada , T. Nagao , T. Lizumi , K. Nakamura , T. Fukase
, Y. Tominaga Pemurnian dan karakterisasi carboxylesterase
dari Pseudomonas sp. KWI-56
Biosci. Biotechnol. Biochem. , 58 ( 1994 ) , hlm. 752 - 755
© 2017 Para Penulis. Diterbitkan oleh Elsevier BV
Artikel yang disarankan


In vitro dan in silico karakterisasi selulosa yang berasal dari tanah

metagenom yang mampu menghidrolisis tandan kosong kelapa sawit
Laporan Bioteknologi, Volume 15, 2017, hlm. 55-62
Unduh PDFMelihat rincian
Gula, asam dan kuantifikasi furfural di pabrik pulp sulfit: Feedstock,

produk dan analisis hidrolisat oleh HPLC / RID
Laporan Bioteknologi, Volume 15, 2017, hlm. 75-83
Sintesis dan karakterisasi selulosa bakteri dan hidrogel berbasis

gelatin-komposit untuk sistem pengiriman obat
Laporan Bioteknologi, Volume 15, 2017, pp. 84-91

Lihat artikel lainnya
Mengutip artikel (0)

Metrik Artikel
Captures
 Pembaca: 13
Melihat rincian
Tentang ScienceDirect Akses jarak jauh Keranjang belanja Kontak dan

dukungan Syarat dan ketentuan Kebijakan privasi
Cookie digunakan oleh situs ini. Untuk informasi lebih lanjut, kunjungi halaman
cookie .
Hak cipta © 2018 Elsevier BV atau pemberi lisensinya atau

kontributor. ScienceDirect ® adalah merek dagang terdaftar milik Elsevier BV
Teks asli
Sumbangkan terjemahan yang lebih baik

Identifikasi Enzim Lipolitik Yang Diisolasi Dari Bakteri Asli Ke

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Identifikasi Enzim Lipolitik Yang Diisolasi Dari Bakteri Asli Ke

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Identifikasi enzim lipolitik yang diisolasi dari bakteri asli ke spesies

kayu Eucalyptus untuk aplikasi dalam industri pulping

Enzim oksidatif seperti lakase juga telah diimplementasikan dalam degradasi

2 . Bahan dan metode

2.2 . Optimalisasi pengujian skrining pelat untuk aktivitas lipolitik

Ada sejumlah metode yang tersedia saat ini untuk

2.3 . Tes enzim

Aktivitas lipolitik ditentukan secara spektrofotometri dengan mengukur

Aktivitas lakase ditentukan berdasarkan oksidasi substrat syringaldazine sesuai

Uji dinitrosalicylic acid (DNS) digunakan untuk menentukan aktivitas selulase

2.5 . Produksi ekstrak enzim mentah

2.6 . Native & SDS-PAGE

Ukuran protein ditentukan oleh Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel

Native SDS-PAGE digunakan untuk memastikan penghilangan selulase

2.7 . Analisis statistik

3 . hasil dan Diskusi

Sebanyak sepuluh strain bakteri yang berbeda diisolasi menggunakan metode

Key: + = lingkaran cahaya sedikit (1-2 mm), ++ = lingkaran cahaya menengah

Tabel 2 . Aktivitas lipase dan esterase bakteri yang diisolasi dari

1. Unduh gambar resolusi tinggi (471KB)

Gambar. 1 . A- 1% tes skrining tributyrin plat untuk

Lipase dan esterase telah diidentifikasi dengan skrining mikroorganisme pada

Tabel 3 . Aktivitas lipase / esterase

Konsentrasi Aktivitas Aktivitas

3.3 . Native & SDS-PAGE

PAGE gel asli yang dilengkapi dengan carboxymethylcellulose dan avicel

Gambar 3 . PAGE gel asli dilengkapi dengan carboxylmethylcellulose (CMC)

3.4 . Aktivitas lipase dan esterase

3,5 . Pengaruh suhu dan pH pada aktivitas enzim

Tingkat hidrolisis tertinggi diperoleh dengan lipase potensi diisolasi dari B.

Memisahkan PH optimal Suhu Optimum Kekhususan Substrat

Enzim yang diisolasi dari mikroorganisme lain (DF3, F4, X) menunjukkan

1. Unduh gambar resolusi tinggi (192KB)

Gambar. 5 . Pengaruh suhu (pada pH optimum 4 atau 5) pada aktivitas esterase /

Selain menunjukkan aktivitas lakase (hingga 3,1 U / ml) ( Gambar 4 ), P.

3.6 . Pengaruh suhu dan pH pada stabilitas enzim

Tabel 5 . Perbandingan suhu optimal dan pH beberapa lipase dan esterase

Artikel yang disarankanMengutip artikel ( 0 )

Artikel yang disarankan

In vitro dan in silico karakterisasi selulosa yang berasal dari tanah

Laporan Bioteknologi, Volume 15, 2017, hlm. 55-62

Unduh PDFMelihat rincian

Gula, asam dan kuantifikasi furfural di pabrik pulp sulfit: Feedstock,

Laporan Bioteknologi, Volume 15, 2017, hlm. 75-83

Unduh PDFMelihat rincian

Sintesis dan karakterisasi selulosa bakteri dan hidrogel berbasis

Laporan Bioteknologi, Volume 15, 2017, pp. 84-91

Lihat artikel lainnya

Mengutip artikel (0)

Tentang ScienceDirect Akses jarak jauh Keranjang belanja Kontak dan

Hak cipta © 2018 Elsevier BV atau pemberi lisensinya atau

Anda mungkin juga menyukai