PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM TABLET TEMULAWAK (Curcuma

xanthorrhiza Roxb.) SECARA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI

Determination od curcumine content of Temulawak (Curcuma xanthorrhiza
Roxb.) tablet by TLC densitometry

Faridah, Suciati Widiyani

Fakultas Farmasi Universitas Pancasila
Jl. Srengseng Sawah Jagakarsa, Pasar Minggu, Jakarta Selatan 12640
e-mail: idaffup@gmail.com

ABSTRAK

Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) merupakan tanaman yang banyak digunakan oleh masyarakat
secara empirik sebagai obat peluruh haid (emenagoga), memperlancar pengeluaran empedu ke usus
(colagoga), mengatasi gangguan fungsi hati, penambah nafsu makan untuk anak-anak dan banyak lagi
khasiat yang lainnya. Penelitian ini dilakukan untuk mendapatkan metode penetapkan kadar kurkumin
dalam tablet yang mengandung serbuk rimpang temulawak. Telah dilakukan identifikasi, optimasi dan
validasi metode penetapan kadar kurkumin dalam tablet yang mengandung serbuk rimpang temulawak
secara KLT-Densitometri, menggunakan lempeng silika gel GF254. Hasil yang diperoleh: cairan eluasi terbaik
adalah kloroform-etanol-asam asetat glassial (94:5:1) yang diukur pada panjang gelombang 429 nm, kadar
rata-rata kurkumin dalam tablet yang beredar dipasaran 0,7327%, dalam serbuk tablet temulawak buatan
sendiri 0,7233%. Nilai simpangan baku relatif 1,0559%, batas deteksi 5,97 bpj, batas kuantitasi 18,09 bpj,
hasil uji perolehan kembali pada konsentrasi 80% dan 120% bahan baku dalam plasebo berturut-turut adalah
100,52% dan 99,73%, serta uji t menunjukkan t hitung (0,2521) lebih kecil dari t tabel (2,571) pada (p)=0,05.
Hasil tersebut menunjukkan bahwa metode KLT-Densitometri cukup valid dan dapat digunakan untuk
menetapkan kadar kurkumin dalam sediaan tablet temulawak.

Kata kunci: temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.), kurkumin, KLT densitometri

ABSTRACT

Turmeric (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) is a plant that is widely used empirically by society as emenagoga,
colagoga, liver function, appetite enhancer for children and many more other properties. This research was
conducted to find a method in determining the levels of containing curcumin of powdered turmeric rhizome

Volume 5 No 1 Agustus 2012 37

Faridah, Suciati Widiyani

tablets. The identified, optimization and validation of the assay method tablets containing curcumin in turmeric
rhizome powder by TLC-densitometry have been done, using silica gel GF254 plates. The results: best eluation liquid
is chloroform-ethanol-glassial acetic acid (94:5:1) as measured at a wavelength of 429 nm, the average levels of
curcumin in tablet in the market 0.7327%, the powder of turmeric tablets made own 0.7233%. Relative standard
deviation value of 1.0559%, the detection limit of 5.97 ppm, 18.09 ppm limit of quantitation, recovery test results
at concentrations of 80% and 120% of raw materials in the placebo respectively were 100.52% and 99.73%, and
the t test showed thitung (0.2521) is smaller than T Table (2.571) to (p) = 0.05. The results showed that the TLC-
densitometry method is valid and can be used to determine levels of curcumin in turmeric tablet.

Key words: turmeric (Curcuma xanthorrhiza Roxb.), curcumin, TLC densitometry

PENDAHULUAN sedangkan kadar kurkumin pada temulawak

Temulawak (Curcuma xanthorrhiza
Roxb.) merupakan jenis rimpang yang sangat
terkenal di Indonesia yang banyak digunakan
dalam ramuan obat tradisional. Temulawak juga
merupakan salah satu tumbuhan obat-obatan
yang banyak digunakan didunia yang terdapat
di dalam daftar prioritas WHO dan dipakai
sekurang-kurangnya di 23 negara (Darwis
dkk., 1991). Rimpang dari suku Zingiberaceae
ini banyak digunakan sebagai ramuan obat
tradisional karena khasiatnya yang cukup banyak,
antara lain sebagai peluruh haid (emenagoga),
memperlancar pengeluaran empedu ke usus
(colagoga), sakit lever (kuning), mengatasi
gangguan hati, dan penambah nafsu makan
untuk anak-anak (Heyne, 1987). Penelitian yang
telah dilakukan menyatakan bahwa kurkumin
juga dapat mencegah kerusakan mitokondria
yang disebabkan oleh oksidan (Syamsudin et al.,
2004), menghambat kontraksi maupun aktivitas
relaksasi pada otot polos aorta tikus terisolasi
(Nugroho, 2008). Hasil penelitian mengenai
kandungan temulawak diantaranya: kurkuminoid
(kurkumin 61-67%, demetoksikurkumin 22-
26%, bisdemetoksikurkumin 1-3%, turunan
kurkuminoid lainnya 10-11%) (Wardiyati, 2002),
0,08-1,25% (O’Neil, 2001). 2 Beberapa industri
farmasi di Indonesia telah membuat sediaan
temulawak dalam berbagai bentuk seperti cair
(sirup), tablet, kapsul, dan serbuk. Kandungan
tabletnya pun berbagai macam, selain temulawak
juga terdapat kombinasi berbagai vitamin, lesitin,
kolin dan campuran ekstrak maupun rimpang
dari simplisia lainnya.
Untuk menjamin mutu produk, perlu
dilakukan berbagai pengujian salah satunya
penetapan kadar. Kromatografi lapis tipis
densitometri merupakan gabungan antara
kromatografi lapis tipis merupakan gabungan
antara kromatografi lapis tipis yaitu pemisahan
dua atau lebih zat, di atas lempeng oleh cairan
pengembang berdasarkan perbedaan kelaporan
dan densitometri yaitu metode pengukuran luas
area bercak pada panjang gelombang sarapan
maksimum.
Penetapan kadar kurkumin dalam
rimpang temulawak yang telah dilakukan oleh
peneliti sebelumnya metode menggunakan
metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT),
dengan menggunakan fase diam C-18, dan fase
gerak metanol-air dengan perbandingan (85:15)
pada panjang gelombang 426 mm (Juwita, 2002).

38 Volume 5 No 1 Agustus 2012

 PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM TABLET TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.)
Determination of curcumine content of Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) tablet by TLC densitometry
Penetapan kadar dalam penelitian
ini menggunakan tablet yang mengandung
temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.)
dengan metode KLT-densitometri, karena KLT
merupakan suatu tehnik pemisahan yang baik
dan memiliki beberapa keuntungan antara lain:
proses sederhananya dengan waktu yang cukup
singkat, memungkinkan penggunaan pereaksi-
pereaksi pengoksidator kuat, yang harus
dihindari pemakaiannya dalam kromatografi,
membutuhkan sampel yang sedikit dapat
menganalisis berbagai campuran komponen
secara bersamaan.
Penelitian ini bertujuan untuk
mendapatkan metode yang valid untuk
penetapan kadar kurkumin dalam tablet.
METODE PENELITIAN
Bahan
Rimpang temulawak (Curcuma
xanthorrhiza), kurkumin Bp (SIGMA), serbuk
tablet buatan sendiri yang mengandung serbuk
rimpang temulawak, tablet yang beredar yang
mengandung serbuk rimpang temulawak,
pereaksi; etanol, kloform, n-heksan, asam asetat
glasial, metanol, aseton dan bahan tambahan
tablet: avicel, talk, magnesium stearat, pati.
Alat
Bejana kromatografi, densitometer
“Camag TLC Scanner 3”, lempeng Silika gel GF254,
alat-alat gelas, timbangan analitik, mikropipet.
Cara kerja
Determinasi
Rimpang Temulawak Determinasi
dilakukan di Herbarium Bogoriense, Bogor.
Identifikasi
Sejumlah 5 mg serbuk rimpang temulawak
SECARA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI
ditambahkan:
1. 5 tetes asam sulfat
2. 5 tetes asam klorida pekat P
3. 5 tetes larutan natrium hidroksida P 5% b/v
4. 5 tetes amonia (25%) P
5. 5 tetes larutan besi(III) klorida P 5% b/v
Penetapan susut pengeringan
Sejumlah 1-2 g serbuk wadah yang telah
ditara dikeringkan pada suhu penetapan hingga
bobot tetap.
Pemilihan cairan eluasi
Untuk memisahkan kurkumin dengan
matriks tablet perlu dicari cairan eluasi yang
cocok. Beberapa cairan eluasi yang dicoba:
1. Kloroform-etanol (7 : 3)
2. Kloroform-etanol-asam asetat glasial (94:5:1)
3. n-heksana-etil asetat (1:1)
4. Aseton metanol (2:1)
Cara membuat larutan percobaan
• Sejumlah 10 mg kurkumin Bp dilarutkan dan
diencerkan dengan etanol 50 ml, dikocok
homogen. Dipipet 2 ml, ditambahkan etanol
sampai 10 ml, dikocok hingga homogen.
• Sejumlah 50,3 mg serbuk temulawak
ditimbang, selanjutnya dikerjakan dengan
cara yang sama seperti pada kurkumin Bp,
hanya perlu disaring sebelum dipipet 2 ml.
• Sebanyak 20 µl larutan a dan b ditotolkan pada
lempeng silika gel GF254 secara berdampingan,
dieluasi dengan cairan eluasi, dengan jarak
rambat 8 cm. kemudian lempeng dikeringkan
pada suhu kamar lalu bercak diamati pada
254 nm dan 366 nm.
Identifikasi kurkumin dari tablet Temulawak
secara Kromatografi lapis tipis
Volume 5 No 1 Agustus 2012 39
Faridah, Suciati Widiyani
a. Larutan uji
Sejumlah 20 tablet digerus halus dan
homogen, ditimbang lebih kurang 150 mg,
kemudian dilarutkan dan diencerkan dengan
etanol sampai 10 ml, dikocok hingga homogen,
kemudian disaring.
b. Larutan baku pembanding
Sejumlah 10,1 mg kurkumin Bp dilarutkan
dan diencerkan dengan etanol sampai 50 mL,
dihomogenkan. Dipipet 2 ml, ditambahkan
etanol sampai 10 ml, dihomogenkan. Sejumlah
20 µl larutan uji dan larutan Bp ditotolkan pada
lempeng silika gel GF254 secara berdampingan,
dieluasi dengan cairan eluasi kloroform-etanol-
asam asetat glasial (94:5:1), dengan jarak rambat
8 cm, kemudian dikeringkan pada suhu kamar,
bercaknya diamati 254 nm dan 366 nm.
Hasil identifikasi kurkumin dan nilai hRf
yang diperoleh selanjutnya digunakan untuk
penetapan kadar kurkumin dalam tablet secara
KLT densitometri.
Penetapan panjang gelombang serapan
maksimum
Sejumlah 10,2 mg kurkumin Bp
dilarutkan dengan etanol sampai 50 ml, dipipet
2,0 ml diencerkan dengan etanol sampai 10 ml.
Sejumlah 20 µl larutan tersebut ditotolkan pada
lempeng KLT silika gel GF254 dan dieluasi dengan
cairan eluasi kloroform-etanol-asam asetat
glasial (94:5:1), posisi bercak dideteksi pada 366
nm. Kemudian lempeng ditempatkan dalam alat
densitometer dan dibuat spektrum serapan zat
pada panjang gelombang 500-200 nm. panjang
gelombang serapan maksimum yang diperoleh
kemudian digunakan pada penetapan kadar.
40 Volume 5 No 1 Agustus 2012
Uji pengaruh matriks tablet
Sejumlah matriks tablet masing-masing
diekstraksi dengan etanol dan disaring, filtrat
ditotolkan pada lempeng dan dikembangkan
dalam bejana kromatografi.
Validasi Metode
a. Uji linearitas dan perhitungan garis regresi
Sejumlah 10 mg kurkumin Bp dilarutkan
dan diencerkan dengan etanol 10 ml (1.000 bpj).
Selanjutnya dibuat pengenceran hingga diperoleh
konsentrasi 20 bpj, 30 bpj, 40 bpj, 50 bpj dan
60 bpj. Sebanyak 20 µl masing-masing larutan
ditotolkan pada lempeng KLT silika gel GF254,
dieluasi menggunakan cairan eluasi kloroform-
etanol-asam asetat glasial (94:5:1) dengan jarak
rambat 8 cm, bercak dideteksi pada 366 nm dan
ditandai, kemudian dengan alat densitometer,
bercak diukur areanya pada panjang gelombang
429 nm. Dibuat kurva hubungan linear antara
konsentrasi larutan kurkumin baku pembanding
dengan area.
b. Uji penentuan batas deteksi (limit of
detection/LOD)
Uji ini dilakukan untuk mengetahui batas
konsetrasi terkecil zat uji yang masih dapat
terdeteksi dengan baik oleh alat densitometer,
melalui perhitungan dari kurva baku pada uji
linearitas.
c. Uji penentuan batas kuantitasi (Limit of
Quantitation (LOQ))
Uji ini dilakukan untuk mengetahui batas
konsetrasi terkecil zat uji yang masih dapat
dianalisis dengan presisi dan akurasi yang baik,
diperoleh dari perhitungan kurva baku pada uji
linearitas.
 PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM TABLET TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.)
Determination of curcumine content of Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) tablet by TLC densitometry
d. Uji presisi
Sejumlah 20 tablet digerus halus dan
homogen, ditimbang sejumlah serbuk tablet yang
setara dengan lebih kurang 50 mg C. xanthorrhiza,
dilarutkan dengan etanol sampai 10 ml dikocok
homogen, disaring, kemudian sejumlah 20
µl ditotolkan pada lempeng KLT selanjutnya
dikerjakan dengan cara yang sama seperti pada
uji linearitas. Dihitung nilai simpangan baku
relatifnya.
e. Uji perolehan kembali
Uji perolehan kembali dilakukan
menggunakan metode plasebo.
• Konsentrasi (100%)
• Serbuk tablet buatan sendiri yang
mengandung serbuk rimpang temulawak
200 mg, pati 100 mg, talk 30 mg, magnesium
stearat 20 mg, dan avicel 250 mg. Ditimbang
± 150 mg. Dilarutkan dan diencerkan
dengan etanol sampai 10 ml, dikocok hingga
homogen, kemudian disaring, dan diambil
filtratnya.
• Konsentrasi 80%. Dibuat dengan cara yang
sama dan komposisi matriks yang sama
seperti pada (no 1) tetapi mengandung
serbuk rimpang temulawak 160 mg, dengan
komposisi matriks yang disesuaikan. 3)
Konsentrasi 120%
• Dibuat dengan cara yang sama dan komposisi
matriks yang sama seperti pada no 1 tetapi
mengandung serbuk rimpang temulawak
240 mg, dengan komposisi matriks yang
disesuaikan.
• Cara penetapan
• Sebanyak 20 µl larutan 1, 2, dan 3 ditotolkan
secara berdampingan pada lempeng silika
SECARA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI
gel GF254 berukuran 20x20 cm. Kemudian
kloroform-etanol-asam asetat glasial
(94:5:1) dengan jarak rambat 8 cm, lempeng
dikeringkan pada suhu kamar kemudian
bercak dideteksi pada 366 nm dan ditandai,
dengan alat densitometer diukur areanya
pada panjang gelombang 429 nm.
Penetapan kadar Kurkumin dalam tablet
secara KLT Densitometri
a. Larutan baku pembanding
Sejumlah 10 mg kurkumin Bp, dilarutkan
dan diencerkan dengan etanol 10 ml (1.000
bpj). Pipet 1 ml, ditambahkan etanol sampai 10
ml, dikocok homogen. Dipipet 4 ml kemudian
ditambahkan etanol sampai 10 ml, dikocok
homogen, kemudian filtrat ditampung.
b. Larutan uji
• Sejumlah 20 tablet yang mengandung serbuk
rimpang temulawak, kemudian digerus
halus dan homogen, selanjutnya ditimbang
sejumlah serbuk tablet yang setara dengan
lebih kurang 50 mg C. xanthorrhiza,
ditambahkan pelarut etanol sampai 50 ml,
dikocok homogen, disaring, kemudian filtrat
ditampung.
• Cara yang sama dilakukan untuk serbuk
tablet buatan sendiri
• Cara penetapan dilakukan seperti pada uji
perolehan kembali
HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi Rimpang Temulawak
Hasil determinasi rimpang yang digunakan
dalam penelitian adalah C. xanthorrhiza Roxb.
Anggota suku Zingiberaceae.
Uji Pendahuluan serbuk temulawak
Volume 5 No 1 Agustus 2012 41
Faridah, Suciati Widiyani

Hasil identifikasi menunjukkan pada Dari hasil identifikasi tersebut dapat

penambahan: dinyatakan bahwa tablet temulawak tersebut
1. 5 tetes asam sulfat terjadi warna ungu mengandung kurkumin.
kecoklatan. Penetapan Panjang Gelombang Serapan
2. 5 tetes asam sulfat terjadi warna ungu
kecoklatan. Maksimum
3. 5 tetes asam sulfat terjadi warna merah Untuk mendapatkan kepekaan yang tinggi
coklat. dalam pengukuran pada densitometer dilakukan
4. 5 tetes asam sulfat terjadi warna merah
penetapan panjang gelombang serapan dari
kecoklatan.
kurkumin, diukur pada panjang gelombang 200-
5. 5 tetes asam sulfat terjadi warna merah.
500 mm diperoleh panjang gelombang serapan
Hasil ini sesuai dengan yang maksimum untuk kurkumin adalah 429 nm.
dipersyaratkan pada rimpang temulawak.
Penetapan Susut Pengeringan
Hasil penetapan susut pengeringan rata-
rata adalah 8,55 % (persyaratan 10%).
Pemilihan Cairan Eluasi
Dari sejumlah kombinasi eluen yang
dicoba baik dari jenis maupun perbandingan
dengan jarak rambat 8 cm diperoleh cairan
eluasi yang memberikan hasil paling baik yaitu
kloroform-etanol-asam asetat glasial (94:5:1)
menghasilkan 3 (tiga) bercak terpisah dengan
Gambar 2. Hasil pengambaran densitometer untuk
baik, dan tidak ada bercak yang berekor. kurkumin pada panjang gelombang 200-
Identifikasi Kurkumin Dari Tablet Temulawak 500 mm (konsentrasi (bpj))
Secara KLT
Identifikasi kurkumin dari tablet yang Uji L inearitas
20000

mengandung rimpang temulawak dapat 18000

16000

dilakukan dengan cara pengukuran nilai hRf. 14000

12000

Diperoleh hasil sebagai berikut: 10000

8000
6000
Jenis hRf 4000

Kurkumin Bp 69 2000
0

70 0 10 20 30 40 50 60 70

Tablet temulawak 38
Gambar 3. Hasil uji linearitas (konsentrasi/ luas area)
11
Gambar 1. Kromatogram Kurkumin BP dan kurkumin Uji Pengaruh Bahan Pembantu
dalam tablet temulawak pada sinar biasa
& sinar UV 366 Tabel1. Pengaruh bahan pembantu tablet

42 Volume 5 No 1 Agustus 2012

 PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM TABLET TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.)
SECARA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI
Determination of curcumine content of Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) tablet by TLC densitometry

Jenis bahan Respon detector Area Validasi Metode

Avicel Tidak terdeteksi - Hasil evaluasi dari validasi metode
Pati Tidak terdeteksi - menunjukkan ketelitian yang baik dengan nilai
Mg. Stearat Tidak terdeteksi - persamaan regresi linear antara konsentrasi
Talk Tidak terdeteksi - dengan luas bercak sebagai Y= 1361,744 +
Uji pengaruh bahan pembantu tablet 271,1141X dengan koef korelasi r= 0,9935 dengan
dilakukan untuk mengetahui apakah bahan- rentang linearitas 20-60 bpj. Batas deteksi 5,97
bahan tersebut memberikan respon berupa bpj, batas kuantitasi 18,09 bpj, uji perolehan
bercak. Hasil yang diperoleh menunjukkan kembali 100,52% dan simpangan baku relatif
bahwa bahan pembantu tablet tidak memberikan 1,0559 %. Hasil evaluasi tersebut menunjukkan
respon, sehingga tidak akan mempengaruhi bahwa metode penetapan kadar kurkumin dalam
penetapan kadar kurkumin dalam sediaan tablet. tablet KLT densitometri mempunyai ketepatan
dan ketelitian yang tinggi.
Tabel 2. Penetapan kadar kurkumin dalam tablet secara KLT-Densitometri
Konsentrasi (bpj) Area Kadar (%) Kadar rata-rata (%)
BP 40 11229,02
Contoh 1 14990 12902,29 0,7342 0,7327
14980 12790,27 0,7284
15020 12950,05 0,7355
Contoh 2 14990 12667,89 0,7209 0,7233
15000 12863,85 0,7316
14980 12596,45 0,7173
Hasil penetapan kadar kurkumin rata-rata dalam serbuk tablet simulasi 0,7233% dan dalam
tablet komersial (yang beredar) 0,7327%.

KESIMPULAN 1,0559% lebih kecil) dan ketepatan yang baik

1. Kurkumin dalam tablet yang mengandung
rimpang temulawak dapat ditetapkan
kadarnya dengan metode kromatografi
lapis tipis densitometri dengan: Fase diam
: Lempeng silika gel GF254. Cairan eluasi
adalah Kloroform: Etanol : Asam asetat
glasial (94:5:1). Volume penotolan adalah 20
µl (± 15.000 bpj). Jarak rambat adalah 80 mm
diukur pada panjang gelombang 429 nm.
2. Metode kromatografi lapis tipis-densitometri,
memberikan ketelitian yang baik (SBR =
(nilai perolehan kembali t hitung = 0,2521
lebih kecil dari ttabel 2,571).
3. Kadar kurkumin dalam tablet komersial
(yang beredar) 0,7327% dan dalam serbuk
tablet simulasi (buatan sendiri) 0,7233%.
DAFTAR PUSTAKA
Darwis, SN., Indo AM., Hasiyah S. 1991. Tumbuhan
obat famili zingiberaceae. Badan Penelitian
dan Pengembangan Pertanian. Bogor: p
58-9

Volume 5 No 1 Agustus 2012 43

Faridah, Suciati Widiyani

Heyne, K. 1987. Tumbuhan berguna Indonesia.

Jilid I. Diterjemahkan oleh Badan Litbang
Kehutanan. Departemen Kehutanan.
Jakarta. p 601
Juwita, R. 2002. Penetapan kadar kurkuminoid
dalam rimpang temulawak (Curcuma
xanthorrhiza Roxb.) pada umur tanam yang
berbeda secara kromatografi cair kinerja
tinggi. Jakarta
Nugroho AE., Suhardjono D., Mulyono, Margono
SA. 2008. Efek vasodilatasi kurkumin
dan turunannya pada organ aorta tikus
terisolasi. Majalah Farmasi Indonesia,
19(2):70-6.
O´Neil JM. (editor). 2001. The Merck Index an
encyclopedia of chemicals, drugs, and
biologicals. Thirteenth edition. New Jersey
: Merck&Co inc. p. 465.
Syamsudin, Suyatna FD., Ganiswara S., Sadikin
M. 2004. Efek Kurkumin terhadap aktivitas
enzim glutation Peroksidase Mitokondria
hati tikus. Jurnal ilmu kefarmasian
Indonesia, 2(2): 77-80.
Wardiyati T., Rinanto Y., Sunarni T., Azizah N.
2002. Identifikasi hasil dari kurkumin
pada Curcuma xanthorrhiza dan Curcuma
domestica hasil koleksi di Jawa dan Bali.
Jurnal Agrivita Fakultas Pertanian, 32:1-12

44 Volume 5 No 1 Agustus 2012