Optimasi Analisis Campuran Maltitol, Manitol, Sorbitol, dan Xilitol secara

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Jansen Wijaya Jap, Harmita, Herman Suryadi

Fakultas Farmasi, Universitas Indonesia, Kampus UI Depok, Depok, 16424, Indonesia

Email : jansen.wijaya@hotmail.com

Abstrak

Senyawa gula poliol, seperti maltitol, manitol, xilitol dan sorbitol merupakan bahan kimia yang sering
ditambahkan ke dalam produk makanan maupun farmasi sebagai pemanis, sehingga diperlukan metode analisis
untuk identifikasi dan penetapan kadar senyawa tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh kondisi
yang optimal pada analisis campuran keempat senyawa gula poliol dan menetapkan kadar beberapa produk
pemanis buatan yang beredar dengan menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Analisis
dilakukan dengan menggunakan kolom Shodex Sugar SZ5532 (150 x 6,0 mm), detektor indeks bias RID-10A,
fase gerak asetonitril-air (85:15) dengan laju alir 1,2 mL/menit pada suhu kolom sebesar 65 oC. Didapatkan
koefisien korelasi (r) untuk xilitol, manitol, sorbitol, dan maltitol berturut-turut 0,9985; 0,9980; 0,9975; dan
0,9990 dengan rentang konsentrasi 2.000 µg/mL sampai dengan 7.000 µg/mL. Metode ini juga memenuhi
kriteria uji selektivitas. Pada penetapan kadar sampel, sampel A, B, C, D, dan E yang dipreparasi menggunakan
pelarut air, dilakukan pada kondisi analisis yang terpilih. Didapatkan bahwa sampel B dan C yang beredar di
pasaran tidak memenuhi persyaratan kadar zat dalam sediaan, sedangkan sampel A, D, dan E memenuhi syarat.

Keyword : Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, Maltitol, Manitol, Sorbitol, Xilitol.

Optimization Analysis of Maltitol, Mannitol, Sorbitol, and Xylitol by High Performance

Liquid Chromatography

Abstract

Polyol compounds, such as maltitol, mannitol, xylitol, and sorbitol, are chemical substances that often added into
food and pharmaceutical products, therefore analytical method is required for its identification and for
determining its concentration. This study is aimed to obtain an optimum analytical condition of the mixture of
four polyol compounds and to determine its content in a few artificial sweetener products using High
Performance Liquid Chromatography (HPLC). Analysis was done by using Shodex Sugar SZ5532 column (150
x 6.0 mm) with refractive index detector RID-10A, acetonitrile-water (85:15) as the mobile phase, flow rate 1.2
mL/min, and the temperature of the column was 65 oC. Correlation coefficient was obtained for xylitol, mannitol,
sorbitol, and maltitol consecutively 0.9985; 0.9980; 0.9975; and 0.9990 with the range of concentration from
2,000 µg/mL to 7,000 µg/mL. This method has also passed the criteria of selectivity test. Assay of the five
samples which was prepared by dissolving each sample contained polyol compounds with water, was determined
using the chosen analytical condition. Sample B and C didn’t meet the requirement of a chemical substance’s
content in dosage form, whereas sample A, D, and E met the requirement of a chemical substance’s content in
dosage form.

Keyword : High Performance Liquid Chromatography, Maltitol, Mannitol, Sorbitol, Xylitol.

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

Pendahuluan

Pemanis yang umumnya digunakan untuk makanan atau pada sediaan farmasi adalah sukrosa.
Sukrosa banyak digunakan karena sifatnya yang manis sehingga dijadikan sebagai pemanis
walaupun kalorinya cukup tinggi. Akan tetapi, sukrosa diketahui merupakan salah satu faktor
yang berkontribusi dalam menyebabkan berbagai penyakit, antara lain hipertensi, jantung
koroner, arteriosklerosis, dan karies pada gigi. Selain itu, konsumsi sukrosa yang berlebihan
dapat menyebabkan obesitas dan diabetes melitus tipe 2 (Apovian, 2004). Penyakit-penyakit
tersebut menjadi suatu perhatiFan bagi tenaga kesehatan ketika sukrosa akan dijadikan
sebagai salah satu bahan yang akan dikonsumsi (Olinger et al., 1998).

Oleh karena itu, pada masa kini banyak produk makanan dan produk farmasi memakai
pemanis yang merupakan suatu senyawa yang diketahui sebagai bahan bebas gula dan juga
rendah kalori, yaitu senyawa gula golongan poliol. Gula poliol sekarang lebih digemari
karena dapat ditujukan untuk orang-orang yang membutuhkan diet rendah kalori atau obesitas
dan memiliki kelainan metabolik, seperti orang yang terkena penyakit diabetes melitus. Gula
poliol yang biasanya digunakan antara lain sorbitol, xilitol, manitol, isomalt, maltitol, sirup
maltitol, laktitol, dan polidekstrosa (Papesa et al., 2001). Gula poliol memiliki keuntungan
antara lain tidak toksik, tidak iritan, dan yang paling penting adalah gula poliol tidak
dimetabolisme oleh insulin sehingga tidak mempengaruhi kadar gula dalam darah (Rowe et
al., 2009).

Menurut keputusan kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan (BPOM) nomor
HK.00.05.5.1.4547 tahun 2004, telah terjadi transisi epidemiologi dan perubahan gaya hidup
yang mendorong meningkatnya produksi pangan dengan menggunakan bahan tambahan
pangan pemanis buatan, salah satunya adalah gula poliol. Oleh karena itu, gula poliol harus
dianalisis dengan menggunakan metode analisis yang efektif dikarenakan gula poliol dapat
digunakan lebih dari satu di dalam suatu sediaan farmasi ataupun produk makanan sehingga
diperlukan suatu metode yang dapat menganalisis lebih dari 1 gula poliol secara simultan.
Metode analisis yang sudah ada belum dapat menganalisis lebih dari 1 gula poliol, selain itu
kondisi analisis tiap gula poliol berbeda-beda, seperti sorbitol dan maltitol dengan fase gerak
air, manitol dengan komposisi fase gerak asetonitril-air dan xilitol dengan fase gerak asam
sulfat 5mM (Forget & Spagnoli, 2006; Guo et al., 2012; Papesa et al., 2001; Tomo et al.,
2000). Pada penelitian ini, akan dilakukan analisis multikomponen yang belum pernah
dilakukan, yaitu campuran dari gula poliol yang secara bersamaan dianalisis menggunakan

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

KCKT dengan menggunakan detektor indeks bias. Ada berbagai metode yang digunakan
untuk menganalisis gula poliol, tetapi yang dianalisis hanya 1 saja. Ada beberapa metode
untuk menentukan sorbitol, yaitu (i) dengan metode polarimetri karena sorbitol dalam air
memberikan rotasi optis pada bidang polarisasi; (ii) metode enzimatik dengan menggunakan
enzim sorbitol dehidrogenase menghasilkan NAD+ yang akan mengoksidasi D-sorbitol
menjadi fruktosa dan NAD+ tereduksi menjadi NADH yang nantinya akan ditentukan
menggunakan spektrofotometer UV-vis; (iii) metode asam periodat, dimana dapat
menentukan konsentrasi sorbitol dengan menghitung seberapa banyak asam periodat yang
digunakan; (iv) metode kromatografi gas menggunakan kolom kapiler dan baku dalam; dan
(v) metode KCKT, dimana menggunakan baku dalam dan baku luar (Papesa et al., 2001).

Metode KCKT yang digunakan dalam penelitian adalah kolom resin penukar kation yang kuat
dengan ion logam yang berikatan dengan polistiren divinilbenzen tersulfonasi dan fase gerak
asetonitril-air, dimana merupakan teknik pemisahan yang tepat karena gula poliol akan
membentuk kompleks yang relatif kuat dengan ion logam dan terikat kuat (Heftmann, 1992).
Metode tersebut adalah metode berdasarkan hasil studi literatur, dimana metode analisis tiap
zat berbeda jika dianalisis secara tunggal. Pada penelitian ini, dilakukan modifikasi metode
sehingga didapatkan metode yang dapat menganalisis keempat gula poliol tersebut secara
simultan dan metode tersebut dapat diterapkan untuk tujuan pengawasan mutu.

Tinjauan Teoritis

Sorbitol

Sorbitol (C6H14O6) memiliki berat molekul 182,17 dengan nilai rotasi optik dan titik lebur
masing-masing +4,0 sampai +7,0 dan 110oC-112oC. Sorbitol bersifat sangat mudah larut
dalam air; sukar larut dalam metanol, etanol, dan asam asetat; dan praktis tidak larut dalam
eter dan kloroform. Pemerian sorbitol adalah serbuk hablur berwarna putih atau hampir putih,
tidak berbau, higroskopis, dan rasanya manis (Food Chemical Codex 5th edition, 2004; British
Pharmacopoeia, 2009; Rowe et al., 2009).

Gambar 1. Struktur kimia sorbitol

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

Manitol

Manitol (C6H14O6) memiliki berat molekul 182,17 dengan nilai rotasi optik dan titik lebur
masing-masing +23 sampai +25 dan 165oC-170oC. Manitol bersifat larut dalam alkalis dan
piridin; larut dalam 5,5 bagian air; larut dalam 83 bagian etanol 95%; larut dalam 18 bagian
gliserin; larut dalam 100 bagian propanol; sangat sukar larut dalam alkohol; dan praktis tidak
larut dalam eter dan kloroform. Pemerian manitol adalah serbuk hablur berwarna putih atau
hampir putih, tidak berbau, terasa sejuk di lidah, dan rasanya semanis glukosa tetapi tidak
semanis sukrosa (United States of Pharmacopoeia 32nd edition, 2008; Food Chemical Codex
5th edition, 2004; British Pharmacopoeia, 2009; Rowe et al., 2009).

Gambar 2. Struktur kimia manitol

Xilitol

Xilitol (C5H12O5) memiliki berat molekul 152,15 dengan nilai titik didih dan titik lebur
masing-masing 215oC-217oC dan 92oC-96oC. Xilitol bersifat larut dalam 1,6 bagian air; larut
dalam 15 bagian propilenglikol; larut dalam 16,7 bagian metanol; larut dalam 80 bagian
etanol; larut dalam 500 bagian 2-propanol; dan sangat sukar larut dalam gliserin. Pemerian
xilitol adalah serbuk hablur berwarna putih atau hampir putih, tidak berbau, terasa sejuk di
lidah, dan rasanya manis (Food Chemical Codex 5th edition, 2004; British Pharmacopoeia,
2009; Rowe et al., 2009).

Gambar 3. Struktur kimia xilitol

Maltitol

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

Maltitol (C12H25O11) memiliki berat molekul 344,31 dengan nilai rotasi optik dan titik lebur
masing-masing +105,5 sampai +108,5 dan 148oC-151oC. Maltitol bersifat sangat mudah larut
dalam air dan sukar larut dalam etanol. Pemerian maltitol adalah serbuk hablur berwarna
putih atau hampir putih, tidak berbau, dan rasanya manis (Food Chemical Codex 5th edition,
2004; British Pharmacopoeia, 2009; Rowe et al., 2009).

Gambar 4. Struktur kimia maltitol

Gula Poliol sebagai Pemanis Buatan

Menurut keputusan kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan (BPOM) nomor
HK.00.05.5.1.4547 tahun 2004 mengenai persyaratan penggunaan bahan tambahan pangan
pemanis buatan dalam produk pangan, definisi gula poliol adalah gula alkohol yang aman
dalam penggunaannya, yang secara alami dijumpai pada buah-buahan, antara lain laktitol,
maltitol, manitol, xilitol, dan sorbitol, sedangkan secara komersial diperoleh melalui proses
fermentasi monosakarida dengan menggunakan kapang/khamir untuk pangan, seperti
Moniliella pollinis. Sedangkan, definisi pemanis buatan adalah bahan tambahan pangan yang
dapat memberikan rasa manis pada produk pangan yang tidak atau sedikit mempunyai nilai
gizi atau kalori, hanya boleh ditambahkan ke dalam produk pangan dalam jumlah tertentu.
Sebagai contoh, sorbitol dapat digunakan dalam pembuatan produk pangan dengan
persyaratan sebagai berikut : permen dengan maksimum penggunaan 99%, permen karet
dengan maksimum penggunaan 75%, selai dan jelli dengan maksimum penggunaan 30%, dan
produk pangan yang dipanggang dengan maksimum penggunaan 30%.

Golongan poliol selain berfungsi sebagai pemanis buatan, dapat pula berfungsi sebagai
pemberi rasa, bahan pengisi, penstabil, pengental, anti-kempal, humektan, sekuestran, dan
bahan utama. Sebagai pemanis buatan, gula poliol dikategorikan oleh BPOM sebagai GRAS
(Generally Recognized as Safe), yaitu pernyataan aman bagi bahan tambahan pangan
termasuk pemanis buatan untuk ditambahkan ke dalam produk pangan dalam jumlah yang
sesuai dengan CPPB (Cara Produksi Pangan yang Baik), yang merupakan suatu pedoman

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

yang diterapkan untuk memproduksi pangan yang memenuhi standar mutu atau persyaratan
yang diterapkan secara konsisten (Badan Pengawasan Obat dan Makanan, 2004).

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Kromatografi adalah istilah umum untuk berbagai cara pemisahan berdasarkan partisi
cuplikan antara fase yang bergerak, dapat berupa gas atau zat cair, dan fase diam, dapat
berupa zat cair atau zat padat (Johnson & Stevenson, 1991). Salah satu kromatografi yang
paling sering digunakan sebagai metode analisis kuantitatif dalam industri farmasi dan
analisis farmasi di laboratorium adalah KCKT (Kupiec, 2004). KCKT merupakan teknik yang
lahir dari aplikasi teori dan instrumentasi kromatografi cair yang sebenarnya dikembangkan
untuk kromatografi gas (Lindsay, 1992). Keuntungan KCKT bila dibandingkan dengan
kromatografi cair tradisional adalah waktu analisis cepat, daya pisahnya baik, peka, pemilihan
kolom dan eluen yang bervariasi, kolom dapat digunakan kembali, ideal untuk molekul besar
dan ion, mudah untuk memperoleh kembali cuplikan, dan dapat menghitung sampel dengan
kadar yang sangat rendah (Johnson & Stevenson, 1991; Harmita, 2006). Selain digunakan
untuk menganalisis sampel, KCKT juga dapat digunakan untuk pemurnian pada berbagai
industri, baik industri farmasi, bioteknologi, lingkungan, polimer, ataupun makanan (Settle,
1997).

Berdasarkan jenis fase yang berperan, KCKT dapat dibagi menjadi kromatografi adsorpsi,
kromatografi partisi, kromatografi ion, dan kromatografi eksklusi. Kromatografi ion
menggunakan fase diam yang dapat menukar ion dengan ion dari fase gerak. Fase penyangga
dari fase diam yang sering digunakan adalah polistirena divinilbenzen yang memiliki
kelebihan pada selektivitas dan kestabilan (Harmita, 2006).

Detektor indeks bias merupakan detektor yang yang dikenal sebagai detektor universal karena
semua zat yang terlarut dapat dideteksi jika indeks biasnya berbeda dengan indeks bias fase
geraknya (Settle, 1997).

Analisis Kualitatif dan Analisis Semi-Kuantitatif

Menurut International Conference on Harmonisation, 1994, analisis kualitatif atau

identifikasi ditujukan untuk memastikan identitas suatu analit di dalam suatu sampel. Menurut
Community Reference Laboratories Residues, 2010, uji kualitatif memberikan hasil benar
atau tidak dengan menghiraukan konsentrasi analit. Analisis kualitatif dilakukan dengan

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

membandingkan sifat suatu sampel (contoh : spektrum, kromatogram, reaktivitas kimia, dan
sebagainya) dengan standar (International Conference on Harmonisation, 1994). Untuk
analisis kualitatif, parameter validasi yang dilakukan hanya uji spesifisitas atau selektifitas.
Analisis semi-kuantitatif bertujuan untuk mendapatkan konsentrasi suatu analit yang
mendekati konsentrasi aslinya. Analisis semi-kuantitatif berguna bagi analis untuk
mendapatkan rentang kurva kalibrasi untuk uji konfirmasi selanjutnya (kuantitatif).
Contohnya: uji inhibisi pertumbuhan mikroba, dimana yang dilihat adalah ukuran dari zona
penghambatan dengan suatu konsentrasi analit tertentu; uji biokimia, dimana harus mendapat
kurva kalibrasi (seperti ELISA, tetapi hanya jika uji tersebut spesifik untuk analit tunggal
saja); uji kromatografi, yang dikalibrasi untuk jangka waktu yang pendek dimana tidak
menguji respon sampel; uji fisikokimia (KCKT, KC-SM/SM) dimana uji presisi suatu metode
yang terukur tidak memenuhi persyaratan untuk uji kuantitatif. Berdasarkan definisi analisis
semi-kuantitatif yang telah disebutkan sebelumnya, maka dalam melakukan analisis semi-
kuantitatif perlu juga dilakukan uji linearitas untuk mendapatkan rentang kurva kalibrasi,
yang kemudian dapat juga menentukan batas deteksi dan batas kuantitasi (Community
Reference Laboratories Residues, 2010).

Metode Penelitian

Alat dan Bahan

Alat yang digunakan adalah kromatografi cair kinerja tinggi yang terdiri dari pompa (LC-
20AT), injektor manual, kolom Shodex Sugar SZ5532 (150 x 6,0 mm; Shodex, Jepang),
detektor indeks bias RID-10A (Shimadzu, Jepang), penghilang gas (Elmasonic S60H,
Jerman), syringe 50 µL ujung tumpul (Hamilton, Swiss), timbangan analitik (Shimadzu,
Jepang), oven kolom CTO-6AS (Shimadzu, Jepang), pengolah data komputer (CBM-106),
dan alat-alat gelas. Bahan yang digunakan adalah manitol (Amresco); maltitol (JK Bio-
Chem); sorbitol (Sorini Towa Berlian Corporindo); xilitol (Shandong Longlive Bio-
Technology); asetonitril (HPLC grade, Fulltime); aquabidest (PT Ikapharmindo Putramas);
sampel yang beredar di pasaran berupa serbuk gula dalam sachet, gula bubuk, dan gula cair.

Larutan Standar

Maltitol, manitol, sorbitol, dan xilitol ditimbang seksama masing-masing 50,0 mg dilarutkan
dengan air dalam labu ukur 10,0 mL sehingga diperoleh konsentrasi 5.000,0 µg/mL.
Kemudian dibuat larutan standar campuran yang mengandung maltitol, manitol, sorbitol, dan

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

xilitol ditimbang seksama masing-masing 50,0 mg dan dilarutkan dengan air dalam labu ukur
10,0 mL sehingga diperoleh konsentrasi 5000,0 µg/mL.

Optimasi Kondisi Analisis

Larutan standar maltitol, maltitol, xilitol, dan sorbitol masing-masing dengan konsentrasi
5.000,0 µg/mL disuntikkan sebanyak 20,0 µL dengan menggunakan fase gerak asetonitril-air
(70:30), (80:20), dan (85:15) dengan laju alir 0,8, 1,0 dan 1,2 mL/menit pada suhu 60 oC dan
65oC. Waktu retensi (tR), jumlah lempeng teoritis (N), Height Equivalent to a Theoritical
Plate (HETP), faktor ikutan (Tf), dan resolusi (R) yang diperoleh dicatat.

Uji Kesesuaian Sistem

Larutan induk campuran yang mengandung maltitol, manitol, xilitol, dan sorbitol dengan
masing-masing konsentrasi sebesar 5.000,0 µg/mL disuntikkan sebanyak 20,0 µL dengan
menggunakan kondisi analisis terpilih. Waktu retensi, N, HETP, faktor ikutan, dan resolusi
yang diperoleh dicatat, serta presisi pada 6 kali penyuntikan.

Pembuatan Kurva Kalibrasi Larutan Standar, Penentuan Koefisien Regresi (r), Limit Deteksi
(LOD), dan Limit Kuantitasi (LOQ)

Larutan standar maltitol, manitol, xilitol dan sorbitol dibuat dengan masing-masing
konsentrasi 10.000,0 µg/mL. Lalu, masing-masing larutan standar tersebut diencerkan
sehingga didapatkan konsentrasi masing-masing zat sebesar 2.000; 3.000; 4.000; 5.000; 6000;
dan 7000 µg/mL. Masing-masing larutan dengan seri konsentrasi tersebut disuntikkan
sebanyak 20,0 µL ke alat KCKT dengan menggunakan kondisi analisis yang terpilih sebanyak
2 kali dan dihitung nilai rata-ratanya. Kurva kalibrasi dibuat antara konsentrasi larutan standar
maltitol, manitol, xilitol, dan sorbitol dengan area kromatogram. Dari data yang diperoleh,
dilakukan perhitungan untuk mendapatkan persamaan regresi linier, koefisien korelasi (r),
batas deteksi (LOD), dan batas kuantitasi (LOQ).

Uji Selektivitas

Uji selektivitas dilakukan dengan cara menyuntikkan larutan yang mengandung matriks
plasebo untuk melihat kemungkinan gangguan dari eksipien pada daerah waktu retensi setiap
gula poliol tersebut. Hasil kromatogram larutan hasil uji selektivitas tidak boleh mengandung
gangguan di sekitar waktu retensi gula poliol sehingga tetap terpisah dengan baik walaupun
ada komponen lain.

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

Penetapan Kadar Sampel

Penetapan kadar sampel dilakukan pada beberapa sampel yang beredar di pasaran. Sampel A,
sampel B, dan sampel C berupa sachet berisi serbuk berwarna putih, sampel D berupa serbuk
berwarna putih, serta sampel E berupa cairan berwarna kuning yang jernih. Sampel A
ditimbang, dilarutkan dengan aquabidest dan dimasukkan ke dalam labu ukur 10,0 mL.
Kemudian, disonikasi selama 2 menit. Pengenceran dilakukan dengan mengambil 1,5 mL dari
larutan tersebut, dimasukkan ke dalam labu ukur 50 mL, dan volume dicukupkan hingga
batas. Sampel B ditimbang, dilarutkan dengan aquabidest, dimasukkan ke dalam labu ukur
50,0 mL, dan dicukupkan volumenya hingga batas. Selanjutnya, diambil 3,0 mL dari larutan
tersebut, lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 10,0 mL. Volume dicukupkan hingga batas.
Sampel C ditimbang, dilarutkan dengan aquabidest dan dimasukkan ke dalam labu ukur 50,0
mL. Setelah itu, diambil 5,0 mL, dimasukkan ke dalam labu ukur 10,0 mL, dan dicukupkan
volumenya hingga batas. Sampel D ditimbang seberat 1,5 g dan dimasukkan ke dalam labu
ukur 50,0 mL. Selanjutnya, dilarutkan dengan menggunakan aquabidest dan dicukupkan
volumenya hingga batas. Dari larutan tersebut, diambil 2,0 mL dan dimasukkan ke dalam labu
ukur 10,0 mL. Volume dicukupkan hingga batas. Sampel E diambil sebanyak 0,5 mL dan
dimasukkan ke dalam labu ukur 50,0 mL. Kemudian, dilarutkan dengan menggunakan
aquabidest dan volume dicukupkan hingga batas.

Masing-masing sampel di atas diambil sebanyak 20,0 µL dengan menggunakan kondisi

analisis terpilih, lalu disuntikkan sebanyak 2 kali pada masing-masing sampel. Dihitung kadar
gula poliol yang terkandung pada masing-masing sampel.

Hasil Penelitian

Optimasi Kondisi Analisis

Analisis maltitol, manitol, sorbitol, dan xilitol diperoleh kondisi optimum dengan
menggunakan kolom Shodex Sugar SZ5532 (150 x 6,0 mm) pada suhu 65°C; fase gerak
asetonitril − air (85:15); dan laju alir 1,2 mL/menit. Nilai statistik yang didapat mulai dari
nilai area, waktu retensi (tR), resolusi (R), faktor ikutan (Tf), jumlah lempeng teoritis (N) dan
Height Equivalent to a Theoritical Plate (HETP) pada kondisi optimum memenuhi syarat
metode analisis.

Uji Kesesuaian Sistem

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

Pada metode terpilih, dilakukan uji kesesuaian sistem sebanyak enam kali berupa penyuntikan
larutan campuran maltitol, manitol, sorbitol, dan xilitol dengan konsentrasi masing-masing
5.000,0 µg/mL. Dari hasil penyuntikan tersebut, diperoleh waktu retensi dan area masing-
masing zat. Waktu retensi (tR) xilitol, manitol, sorbitol, dan maltitol berturur-turut adalah
15,785 menit, 21,509 menit, 24,685 menit, dan 56,959 menit. Koefisien variasi yang didapat
dari uji kesesuaian sistem untuk xilitol, manitol, sorbitol, dan maltitol berturut-turut adalah
11,87%, 42,33%, 35,16%, dan 1,97%.

Gambar 5. Kromatogram uji kesesuaian sistem larutan standar xilitol (A), manitol (B), sorbitol (C), dan maltitol (D)

Pembuatan Kurva Kalibrasi Larutan Standar, Penentuan Koefisien Regresi (r), Limit Deteksi
(LOD), dan Limit Kuantitasi (LOQ)

Berdasarkan perhitungan statistik regresi linear diperoleh persamaan kurva kalibrasi dan nilai
koefisien korelasi (r) untuk larutan xilitol, manitol, sorbitol, dan maltitol masing-masing y =
79,79x – 6337 dan r = 0,9985; y = 100,6x - 80288 dan r = 0,9980; y = 88,09x – 85207 dan r =
0,9975; dan y = 103,3x – 12889 dan r = 0,9990. Batas deteksi untuk xilitol adalah 337,49
µg/mL, untuk manitol adalah 349,57 µg/mL, untuk sorbitol adalah 410,12 µg/mL, dan untuk
maltitol adalah 4.144,55 µg/mL. Batas kuantitasi untuk xilitol adalah 1.124,96 µg/mL, untuk
manitol adalah 1.165,24 µg/mL, untuk sorbitol adalah 1.367,05 µg/mL, dan untuk maltitol
adalah 13.815,18 µg/mL.

Uji Selektivitas

Uji selektivitas dilakukan dengan cara menyuntikkan larutan yang mengandung matriks
plasebo untuk melihat kemungkinan gangguan dari eksipien pada daerah waktu retensi setiap
gula poliol tersebut. Hasil kromatogram larutan hasil uji selektivitas tidak mengandung

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

gangguan di sekitar waktu retensi gula poliol sehingga metode tersebut dinyatakan memenuhi
persyaratan uji selektivitas.

Gambar 6. Kromatogram matriks blanko (kiri) dan kromatogram campuran xilitol, manitol, sorbitol, dan maltitol
dalam matriks (kanan)

Penetapan Kadar Sampel

Penetapan kadar sampel dilakukan pada beberapa sampel yang beredar di pasaran. Sampel A,
sampel B, dan sampel C berupa sachet berisi serbuk berwarna putih, sampel D berupa serbuk
berwarna putih, serta sampel E berupa cairan berwarna kuning yang jernih. Setelah ditimbang
sejumlah sampel padat dan diambil sejumlah volume untuk sampel cair masing-masing
sebanyak 2 kali, setiap sampel dilarutkan dalam air, disonikasi jika perlu, dan dicukupkan
volumenya hingga batas. Masing-masing sampel di atas diambil sebanyak 20,0 µL dengan
menggunakan kondisi analisis terpilih, lalu disuntikkan sebanyak 2 kali pada masing-masing
sampel. Dari hasil pengukuran, sampel A, B, C, D, dan E didapatkan kadar berturut-turut
sebesar 99,62% dan 98,30%; 86,07% dan 89,61%; 72,76% dan 75,06%; 99,18% dan 99,72%;
dan 100,26% dan 99,46%.

Pembahasan

Pada penelitian ini telah dilakukan optimasi analisis campuran gula poliol, yaitu maltitol,
manitol, sorbitol, dan xilitol secara kromatografi cair kinerja tinggi. Metode analisis dengan
menggunakan alat KCKT dipilih karena memiliki banyak kelebihan, yaitu daya pisahnya
baik, cara kerja yang sederhana, dan sensitif. Detektor yang digunakan pada penelitian adalah
detektor indeks bias karena gula poliol tidak memiliki gugus kromofor yang dapat dideteksi
dengan sinar UV dan tidak berfluorosensi. Selain itu, detektor indeks bias bersifat universal,
yaitu mendeteksi dan mengukur zat-zat dengan indeks bias yang berbeda dengan fase gerak
sehingga dapat mendeteksi dan menganalisis za-zat secara simultan.

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

Kondisi analisis yang optimal didapatkan dengan mengoptimasi komposisi fase gerak, laju
air, dan suhu kolom. Komposisi fase gerak yang digunakan terdiri dari asetonitril-air (7:3),
(8:2), dan (85:15). Kondisi analisis lainnya adalah menggunakan laju alir 0,8 mL/menit, 1,0
mL/menit, dan 1,2 mL/menit serta menggunakan suhu kolom 60oC dan 65oC. Pemilihan
kondisi analisis tersebut didasarkan pada teori bahwa semakin banyak asetonitril di dalam
komposisi fase gerak pada analisis gula poliol, semakin bagus pemisahannya karena semakin
sedikit air di dalam komposisi fase gerak, maka akan meningkatkan interaksi yang terjadi
antara gula poliol dengan ion logam yang terikat dengan fase diamnya sehingga
pemisahannya serta selektivitasnya meningkat (Corradini, 2000). Selain itu, suhu juga sangat
mempengaruhi kondisi analisis karena ketika suhu dinaikkan, maka indeks bias suatu zat juga
meningkat sehingga pemisahannya juga semakin bagus dan waktu analisisnya juga lebih
singkat. (Corradini, 2000). Kondisi terbaik yang didapatkan untuk analisis campuran maltitol,
manitol, sorbitol, dan xilitol adalah komposisi fase gerak asetonitril-air (85:15), laju alir 1,2
mL/menit, dan suhu kolom 65oC karena didapatkan faktor ikutan (Tf) kurang dari 2, HETP
(Height Equivalent to a Theoretical Plate) yang mendekati nol dan resolusi (R) yang lebih
besar dari 1,5 walaupun waktu analisisnya lebih lama bila dibandingkan dengan kondisi
analisis lainnya.

Pada metode terpilih, dilakukan uji kesesuaian sistem sebanyak enam kali berupa penyuntikan
larutan campuran maltitol, manitol, sorbitol, dan xilitol masing-masing berkonsentrasi 5.000,0
µg/mL. Dari hasil penyuntikan tersebut, diperoleh waktu retensi dan area masing-masing zat
yang kemudian dihitung rasio area setiap zat aktif. Waktu retensi setiap zat mulai dari xilitol,
manitol, sorbitol, dan maltitol berturur-turut adalah 15,785 menit, 21,509 menit, 24,685
menit, dan 56,959 menit untuk komposisi fase gerak terpilih, yaitu fase gerak asetonitril-air
(85:15). Koefisien variasi yang didapat dari uji kesesuaian sistem untuk xilitol, manitol,
sorbitol, dan maltitol berturut-turut adalah 11,87%, 42,33%, 35,16%, dan 1,97%. Walaupun
hasil yang didapatkan tidak memenuhi persyaratan uji kesesuaian sistem karena tidak presisi
(nilai koefisien variasi > 2), akan tetapi metode ini dapat digunakan untuk analisis semi-
kuantitatif sehingga dapat menentukan kadar suatu sampel yang mendekati kadar aslinya
(Community Reference Laboratories Residues, 2010).
Kurva kalibrasi menggambarkan hubungan antara resnpon detektor dengan konsentrasi analit
yang diketahui. Selama penelitian, kurva kalibrasi disiapkan setiap hari selama proses analisis
berlangsung karena sebaiknya kurva kalibrasi disiapkan pada waktu yang bersamaan dengan
persiapan larutan yang akan diinjeksikan. Hal tersebut dilakukan untuk meminimalisasi

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

kesalahan yang disebabkan oleh kondisi alat KCKT. Berdasarkan perhitungan statistik regresi
linear diperoleh nilai koefisien korelasi dan persamaan kurva kalibrasi untuk larutan xilitol,
manitol, sorbitol, dan maltitol masing-masing sebesar 0,9985 dan y = 79,79x - 6337; 0,9980
dan y = 100,6x - 80288; 0,9975 dan y = 88,09x - 85207; dan 0,9990 dan y = 103,3x - 12889.
Metode tersebut memberikan linearitas yang baik. Persamaan kurva kalibrasi tersebut
digunakan untuk menghitung batas deteksi dan batas kuantitasi untuk setiap zat. Batas deteksi
dan batas kuantitasi untul xilitol, manitol, sorbitol, dan maltitol berturut-turut sebesar 337,49
µg/mL dan 1.124,96 µg/mL; 349,57 µg/mL dan 1.165,24 µg/mL; 410,12 µg/mL dan 1.367,05
µg/mL; dan 4.144,55 µg/mL dan 13.815,18 µg/mL.
Metode analisis yang digunakan harus bersifat selektif, yaitu mampu mengkuantifikasi dan
memisahkan analit dari komponen dalam matriks sampel. Dalam suatu produk pemanis
buatan rendah kalori, komponen lain yang mungkin terdapat di dalamnya adalah pemanis
buatan lain dengan golongan yang berbeda dan eksipien-eksipien lainnya. Oleh karena itu,
untuk menguji selektivitas disuntikkan larutan yang mengandung pemanis buatan bukan
golongan gula poliol yang dilarutkan dalam air, kemudian diencerkan dengan fase gerak.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa metode tersebut selektif karena tidak terdapat
interferensi dari pemanis buatan bukan golongan gula poliol pada waktu retensi zat aktif, baik
xilitol, manitol, sorbitol, ataupun maltitol.
Penetapan kadar sampel dilakukan pada sampel yang berupa produk pemanis rendah kalori
mengandung gula poliol. Metode analisis yang didapatkan dapat menganalisis sampel secara
semi-kuantitatif, yaitu mendekati kadar aslinya. Dari hasil pengukuran, didapatkan bahwa ada
2 sampel (sampel B dan C) yang tidak memenuhi kriteria, yaitu nilai persen kadar yang
berkisar dari 90,0%-110,0% dan 3 sampel lainnya (sampel A, D, dan E) memenuhi
persyaratan kadar zat dalam sediaan.

Kesimpulan

Kondisi optimal untuk analisis camapuran maltitol, manitol, sorbitol, dan xilitol secara
KCKT, yaitu komposisi fase gerak asetonitirl-air (85:15), suhu kolom 65oC, dan laju alir 1,2
mL/menit dengan nilai resolusi ≥ 1,5; nilai HETP mendekati 0; dan nilai faktor ikutan ≤ 2.
Kadar yang diperolah pada sampel A, D, dan E memenuhi persyaratan kadar zat dalam
sediaan, yaitu 90,0% - 110,0%, sedangkan sampel B dan C tidak memenuhi persyaratan.

Saran

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

Untuk penelitian selanjutnya, perlu digunakan jenis kolom dan detektor lain untuk
memperoleh kondisi analisis yang lebih baik sehingga metode tersebut dapat dilanjutkan
menjadi metode yang dapat menganalisis secara kuantitatif.

Referensi

Apovian, C.M. (2004). Sugar-Sweetened Soft Drinks, Obesity, and Type 2 Diabetes. JAMA,
292(8).

Badan Pengawasan Obat dan Makanan. (2004). Persyaratan Penggunaan Bahan Tambahan
Pangan Pemanis Buatan dalam Produk Makanan. Jakarta : Kepala Badan Pengawasan
Obat dan Makanan Republik Indonesia

Community Reference Laboratories Residues (CRLs). (2010). Guidelines for the Validation
of Screening Methods for Residues of Veterinary Medicines (Initial Validation and
Transfer). 2 Juni 2014 <
http://crl.fougeres.anses.fr/publicdoc/Guideline_Validation_Screening_en.pdf>.

Corradini, C. (2000). Liquid Chromatography. Italy : Academic Press.

Food Chemical Codex. (2004). Food Chemical Codex 5th edition. Washington : The National
Academies Press

Forget, R., & Spagnoli, S. (2006). Excipient quantitation and drug distribution during
formulation optimization. J. Pharm. Biomed. Anal., 41(3), 1051–5.
doi:10.1016/j.jpba.2006.01.039

Harmita. (2006). Buku Ajar Analisis Fisikokimia. Depok : Departemen Farmasi FMIPA UI

Heftmann, E. (1992). Chromatography : Fundamentals and Applications of Chromatography

and Related Differential Migration Methods. New York : Elsevier Science Publishing
Company.

International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of

Pharmaceuticals for Human Use. Validation of Analytical Procedures: Text and
Methodology Q2(R1). October 1994. 8 Januari 2014 <
http://www.ich.org/fileadmin/Public_Web_Site/ICH_Products/Guidelines/Quality/Q2_R
1/Step4/Q2_R1__Guideline.pdf>.

Johnson, E.L., & Stevenson, R. (1991). Dasar Kromatografi Cair (Kosasih Padmawinata,
Penerjemah.). Bandung : Institut Teknologi Bandung

Lindsay, S. (1992). High Performance Liquid Chromatography. England : John Wiley &
Sons Ltd.

Olinger, I. P. M., & Haute, T. (1998). United States Patent [ 19 ], 3–8.

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014

Papesa, S., Jezek, D., & Kujundzic, D. (2001). Determination of Sorbitol Concentration in
Diet Chocolate by High-Performance Liquid Chromatography, 39(2), 129–133.

Rowe, R.C., Sheskey, P.J., & Quinn, M.E. (2009). Handbook of Excipients 6th edition. USA :
RPS

Settle, F. (1997). Handbook of Instrumental Techniques for Analytical Chemistry. New Jersey
: Prentice-Hall, Inc.

Tatebe, C., Ohtsuki, T., Otsuki, N., Kubota, H., & Sato, K. (2012). Extraction Method and
Determination of Sudan I Present in Sunset Yellow FCF by Isocratic High-Performance
Liquid Chromatography, 2012(August), 570–575.

The Department of Health. (2007). British Pharmacopoeia 2007. London : The Department
of Health.

The United States of Pharmacopoeial Convention. (2008). United States Pharmacocpoeia 32.
USA : The United States of Pharmacopoeial Convention.

Tomo, T., Shibata, T., Nasu, M., Shibata, K., Izumi, G., & Sofue, K. (2000). Evaluation of
Several Saccharides as Osmotic Agent for Peritoneal Dialysate. Perit. Dial. Int., 20,
727–733.

Optimasi analisis..., Jansen Wijaya Jap, FF UI, 2014