PENGARUH PEMBERIAN MINYAK ATSIRI GETAH POHON KENARI

(Canarium indicum L) TERHADAP EKSPRESI TUMOR NECROSIS

FAKTOR ALPHA (TNF-α), GAMBARAN HISTOPATOLOGI BRONKUS,
KADAR MALONDIALDEHID (MDA) DAN AKTIVITAS PROTEASE
TIKUS (Rattus norvegicus) MODEL ASMA

TESIS

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister Kimia

Oleh:
FAIJAL FACHRUDIN MBABHO
156090200011003

PROGRAM STUDI KIMIA

BIDANG MINAT BIOKIMIA

2018

i
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Allah SWT yang mengatur segala urusan manusia

dan atas segalah limpahan rahmat, taufik, serta hidayahNya sehingga penulis

dapat menyelesaikan proposal tesis “Pengaruh Pemberian Minyak Atsiri Getah

Pohon Kenari (Canarium indicum L) Terhadap Ekspresi Tumor Necrosis Faktor

Alpha (TNF-α), Gambaran Histopatologi Bronkus, Kadar Malondialdehid (MDA)

Dan Aktivitas Protease Tikus (Rattus norvegicus) Model Asma”.

Sholawat dan salam semoga tetap tercurah kepada Nabi Muhammad

SAW. Selama penyusunan tesis ini, penulis selalu menghadapi halangan dan

rintangan karena keterbatasan pengetahuan penulis, sehingga dalam penulisannya

penulis banyak melibatkan banyak pihak. Dosen pembibing yang selalu

memberikan masukan dan koreksi terhadap penulisan tesis. Oleh karena itu,

penulis menyampaikan terimahkasih kepada:

1. Prof. Dr. Aulanni’am, drh., DES selaku pembimbing I yang telah banyak

memberikan bimbingan, arahan, nasehat, dan semangat kepada penulis

2. Dr. Arie Srihardyastutie, S.Si., M. Kes selaku pembimbing II yang selalu

memberikan saran dan dukungan untuk perbaikan naskah yang sempurna.

ii
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ........................................................................................... i

KATA PENGANTAR ......................................................................................... ii

DAFTAR ISI ........................................................................................................ iii

DAFTAR TABEL ............................................................................................... vi

DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... vii

DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... viii

DAFTAR ISTILAH DAN LAMBANG ............................................................. x

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang ..................................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah ................................................................................ 5

1.3 Tujuan Penelitian.. ............................................................................... 6

1.4 Manfaat Penelitian ............................................................................... 6

1.5 Batasan Masalah................................................................................... 6

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Asma.................................................................................................... 8

2.1.1 Etiologi dan Gejala Klinis ......................................................... 8

2.1.2 Patomekanisme.......................................................................... 9

2.2 Hewan Model Asma ........................................................................... 11

2.3 Ovalbumin dan Lipopolisakarida ....................................................... 13

2.4 Tumor Necrosis Factor-Alpha (TNF-α) ............................................. 15

2.5 Malondialdehida (MDA) ..................................................................... 16

2.6 Protease .............................................................................................. 18

iii
 2.7 Gambaran Histopatologi Epitel Bronkus ............................................ 19

2.8 Pohon Kenari (Canarium indicum L) .................................................. 20

2.8.1 Getah (Resin) ............................................................................. 21

2.8.2 Getah Pohon Kenari .................................................................. 23

2.8.3 GC-MS ...................................................................................... 26

BAB III KERANGKA KONSEP PENELITIAN

3.1 Kerangka Teoritis ................................................................................ 27

3.2 Kerangka Konseptual .......................................................................... 28

3.3 Hipotesis .............................................................................................. 31

BAB IV METODE PENELITIAN

4.1 Tempat dan Waktu Penelitian .............................................................. 32

4.2 Populasi dan Sampel ............................................................................ 32

4.3 Rancangan Penelitian........................................................................... 33

4.4 Variabel Penelitian............................................................................... 33

4.5 Materi Penelitian .................................................................................. 34

4.5.1 Bahan ......................................................................................... 34

4.5.2 Alat ............................................................................................ 34

4.6 Tahapan Penelitian............................................................................... 35

4.6.1 Isolasi Minyak Atsiri Getah Pohon Kenari ............................... 35

4.6.1.1 Pengukuran Rendemen dan Uji GC-MS ................................ 36

4.6.1.1.1 Rendemen (%) minyak getah pohon kenari ................... 36

4.6.1.1.2 Uji GC-MS ..................................................................... 36

4.6.2 Persiapan Hewan Coba.............................................................. 36

4.6.3 Tatalaksana Sensitasi Alergi dengan Ovalbumin ...................... 37

iv
 4.6.4 Tatalaksana Sensitasi Alergi dengan Lipopolisakarida (LPS) .. 38

4.6.5 Terapi Dosis Ekstrak Getah Pohon Kenari ............................... 38

4.6.6 Pengambilan Organ Paru (Bronkus) ......................................... 38

4.6.7 Pembuatan Preparat Paru (Bronkus) ......................................... 39

4.6.8 Pewarnaan Hematoxylin Eosin .................................................. 40

4.6.9 Metode Imunohistokimia .......................................................... 41

4.6.10 Pengujian Aktivitas Protease ................................................... 42

4.6.11 Pembuatan Kurva Baku Malondealdehida (MDA) ................. 44

4.6.12 Pengukuran Kadar Malondialdehida ....................................... 44

4.6.13 Analisa Data ............................................................................ 45

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN

5.1 Komposisi Kimia Minyak Atsiri Getah Pohon Kenari .................... 46

5.2 Pengaruh Kadar MDA Terhadap Pemberian Minyak Atsiri Getah

Pohon Kenari Pada Hewan Tikus Model Asma .............................. 48

5.3 Aktivitas Protease Terhadap Pemberian Minyak Atsiri Getah Pohon

Kenari pada Hewan Tikus Model Asma .......................................... 54

5.4 Terapi Minyak Atsiri Getah Pohon Kenari Terhadap Gambaran

Histopatologi Otot Polos Bronkus pada Tikus Model Asma ........... 61

5.5 Ekspresi Tumor Necrosis Factor-Alpha (TNF-α) pada Bronkus Tikus

Model Asma Induksi Ovalbumin (OVA) dan Lipopolisakarida (LPS) 69

BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN

6.1 Kesimpulan ....................................................................................... 79

6.2 Saran ................................................................................................. 79

v
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 80

LAMPIRAN ......................................................................................................... 93

vi
 DAFTAR TABEL

Tabel

Halaman

4.1 Rancangan Penelitian ...................................................................................... 34

5.1 Minyak Atsiri Getah Pohon Kenari Hasil Distilasi Uap ................................. 46

5.2 Komponen Senyawa Penyusun Minyak Atsiri Getah Pohon Kenari .............. 47

5.3 Kadar MDA pada Serum Tikus Asma ............................................................ 49

5.4 Aktivitas Protease pada Organ Bronkus Tikus Asma ..................................... 54

5.5 Ekspresi TNF-α pada Organ Bronkus Tikus Asma ........................................ 72

L.3.1 Komposisi Larutan....................................................................................... 57

vii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar

Halaman

2.1 Perbandingan brokiolus normal dan asma ..................................................... 9

2.2 Jaringan sitokin pada asma............................................................................. 10

2.3 Poho kenari .................................................................................................... 21

2.4 Biosintesis senyawa terpen dan fenolik sekunder .......................................... 22

2.5 Getah pohon kenari (Canarium resin) ........................................................... 23

2.6 Struktur kimia metabolit sekunder (Canarium resin) .................................... 24

2.7 Jalur senyawa monoterpenoid minyak essensial memodulasi respon Infamasi 25

5.2 Tahapan Skema Pembentukan MDA ............................................................. 52

5.3 Gambaran Histopatologi Otot Polos Bronkus Tikus Model Asma

Menggunakan Pewarnaan Hemotoksilin-Eosin (HE) (Perbesaran 400x) ...... 62

5.4 Perbedaan Tingkat Ekspresi TNF-α Bronkus Tikus Model Asma yang

Dipapar OVA dan LPS dengan Metode Imunohistokimia (perbesaran 400x) 70

viii
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran

Halaman

1. Kerangka Operasional Rancangan Penelitian ................................................... 93

2. Perhitungan Dosis ............................................................................................. 97

3. Komposisi Larutan ............................................................................................ 97

4. Pembuatan Minyak Atsiri, Perhitungan Rendemen (%) dan Uji GC-MS Minyak

Getah Pohon Kenari ......................................................................................... 98

4.1. Pembuatan Ekstrak Getah Pohon Kenari dengan Metode

Destilasi Uap .................................................................................... 98

4.2. Perhitungan Rendemen Minyak Getah Pohon Kenari ..................... 99

4.3. Uji GC-MS Minyak Getah Pohon Kenari ........................................ 99

5. Perhitungan Dosis Ovalbumin .......................................................................... 100

6. Perhitungan Dosis Terapi .................................................................................. 101

7. Pembuatan Histologi Organ Bronkus Menggunakan Metode

Parafin .............................................................................................................. 102

8. Pewarnaan Hematoxylin-Eosin ......................................................................... 103

9. Metode Immunohistokimia ............................................................................... 104

10. Prosedur Pengukuran Aktivitas Protease ........................................................ 105

10.1. Pembuatan Larutan Stok Tirosin ................................................... 105

10.2. Pembuatan Larutan Baku Tirosin .................................................. 105

10.3. Pembuatan Panjang Gelombang Maksimum Tirosin .................... 105

10.4. Pembuatan Kurva Baku Tirosin ..................................................... 105

ix
 10.5. Pembuatan Larutan Kasein ............................................................ 106

10.6. Isolasi Protein................................................................................. 106

10.7. Pembuatan Larutan Blanko ............................................................ 107

10.8. Pengukuran Aktivitas Protease ..................................................... 107

11. Prosedur Pengukuran Kadar MDA ................................................................. 108

11.1. Pengukuran Panjang Gelombang Maksimum MDA ..................... 108

11.2. Pengukuran Kadar MDA pada Serum ........................................... 109

12. Hasil Statistika Uji Imunohistokimia .............................................................. 110

13. Hasil Statistika Uji Malondialdehida .............................................................. 111

14. Hasil Statistika Uji Aktivitas Protease ............................................................ 112

15. Hasil Immunoratio Terhadap Ekspresi TNF-α................................................ 113

16. Gambar Proses Isolasi Minyak Atsiri Getah Pohon Kenari ............................ 114

17. Gambar Pembagian Kandang Kelompok Tikus Model Asma ........................ 114

18. Rancangan Proses Perlakukan Kelompok Tikus Asma .................................. 115

x
 DAFTAR ISTILAH DAN LAMBANG

Simbol/Singkatan Keterangan
AA Asam Arakhidonat
AlOH3 Alumunium Hidroksida
ANOVA Analysis of Variance
APC Antigen Presentating Cell
BB Berat Badan
BNJ Beda Nyata Jujur
COX Siklooksigenase
Early Asthma Response (EAR) Reaksi Asma Awal
HE Hematoxylin Eosin
IgE Immunoglobulin E
IHK Imunohistokimia
IL Interleukin
Kg Kilogram
Late Asthma Response (LAR) Reaksi Asma Lambat
LBP Lipopolysacharide Binding Protein
LOX lipooksigenase
LPS Lipopolisakarida
LT Leukotrien
MCh Metacholine
MDA Malondialdehida
mg miligram
NaCl Natrium Klorida
OVA Ovalbumin
PAR Protease Activated Receptor
PBS Phosphate Buffer Saline
PFA Paraformaldehide Acid
PG Prostaglandin
PUFA Polyunsaturated fatty acid
RAL Rancangan Acak Lengkap
ROS Reactive Oxygen Species
TGF-β Transforming Growth Factor-Beta
Th2 T Helper 2
TLR-4 Toll-like Reseptor-4
TNF-α Tumor Necrosis Factor-α
μL mikroliter
μm mikrometer

xi