PEMBERIAN GEL EKSTRAK DAUN PEGAGAN (CENTELLA

ASIATICA) SEBAGAI PENINGKAT NEOVASKULARISASI,

FIBROBLAST, DAN EPITALISASI DALAM PENYEMBUHAN
LUKA TIKUS JANTAN

PROPOSAL

Oleh:

GEMPITA CAHAYA AULIA TAMBUNAN

NIM: 193307040047

PROGRAM STUDI MAGISTER SAINS BIOMEDIK

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS PRIMA INDONESIA
MEDAN
2020
KATA PENGANTAR

i
 DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR .......................................................................................... i

DAFTAR ISI ....................................................................................................... ii
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... iv
DAFTAR TABEL ............................................................................................... v
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................... 1
1.1. Latar Belakang .......................................................................................... 1
1.1. Rumusan Masalah ..................................................................................... 3
1.3. Tujuan Penelitian ....................................................................................... 3
1.4. Manfaat Penelitian .................................................................................... 4
BAB II KAJIAN PUSTAKA ............................................................................... 5
2.1. Anti Penuaan (Anti Aging) ......................................................................... 5
2.2. Kulit .......................................................................................................... 6
2.2.1. Anatomi dan Fisiologi Kulit Manusia .............................................. 6
2.2.2. Penuaan Kulit .................................................................................. 8
2.3. Luka .......................................................................................................... 9
2.3.1. Definisi Luka ................................................................................... 9
2.3.2. Pembagian Luka ............................................................................... 9
2.3.3. Mekanisme Penutupan Luka ........................................................... 10
2.3.4. Parameter penyembuhan luka ......................................................... 18
2.4. Penyembuhan luka ................................................................................... 19
2.4.1. Penyembuhan luka dan aging ......................................................... 19
2.4.2. Penyembuhan luka, sex hormone dan aging .................................... 19
2.4.3. Penyembuhan luka dan antioksidan nutrient ................................... 20
2.5. Tanaman Obat ......................................................................................... 23
2.5.1 Deskripsi Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) ............................ 24
2.5.2 Morfologi Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban ............................. 24
2.5.3 Klasifikasi Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) .......................... 26
2.5.4 Kandungan Bahan Aktif Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) ..... 26
2.6. Amoxicillin ............................................................................................. 28
2.7. Tikus putih (Rattus norvegicus) ............................................................... 28
2.7.1 Penyembuhan luka pada tikus putih ................................................ 29
2.8. Kerangka Berpikir ................................................................................... 29
2.9. Konsep Penelitian .................................................................................... 30

ii
 2.10. Hipotesis Penelitian ............................................................................... 31
BAB III METODE PENELITIAN ..................................................................... 31
3.1. Rancangan penelitian ............................................................................... 31
3.2. Tempat dan Waktu Penelitian .................................................................. 32
3.3. Populasi dan Sampel ................................................................................ 33
3.3.1 Variabilitas populasi ........................................................................ 33
3.3.2 Kriteria subyek ................................................................................ 33
3.3.3 Besaran Sampel ............................................................................... 33
3.3.4 Teknik penentuan sampel ................................................................ 33
3.4.Variabel Penelitian ................................................................................... 34
3.4.1 Klasifikasi variabel........................................................................... 34
3.4.2 Hubungan Antar Variabel ................................................................. 34
3.5.1 Definisi Operasional Variabel .......................................................... 35
3.5. Bahan, Instrumen Penelitian .................................................................... 37
3.5.1 Bahan penelitian ........................................................................... 37
3.5.3. Instrumen penelitian ..................................................................... 39
3.6.5.3 Hewan percobaan ......................................................................... 39
3.6. ProsedurPenelitian ................................................................................... 39
3.6.1. Sebelum Penelitian ....................................................................... 39
3.6.2. Pelaksanaan penelitian .................................................................. 40
3.6.3. Setelah Penelitian ......................................................................... 40
3.6.4. Pengambilan kulit ......................................................................... 40
3.6.5. Pembuatan preparat histologi ........................................................ 41
3.7. Pengamatan histologi ............................................................................... 43

iii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1. Struktur Anatomi Kulit ............................................................... ... 7

Gambar 2.2. Mekanisme Penyembuhan Luka...................................................... 14
Gambar 2.3. Gambar Tumbuhan Pegagan............................................................ 26
Gambar 2.4. Konsep Penelitian............................................................................. 31
Gambar 3.1. Rancangan Penelitian....................................................................... 32
Gambar 3.2. Alur Hubungan Antar Variabel........................................................ 34
Gambar 3.3. Alur Penelitian.................................................................................. 43

iv
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1. Perubahan Histologis dari Aging Skin................................................. 8

Tabel 3.1 Formulasi Gel Basis............................................................................ 39

v
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Angka harapan hidup semakin meningkat seiring dengan perkembangan
kemajuan ilmu kedokteran. Sementara itu, angka kelahiran mengalami penurunan
yang menjadikan populasi orang tua di dunia semakin meningkat. Manusia dari tiap
negara dan tiap zaman memiliki harapan hidup yang berbeda. Dengan semakin
meningkatnya angka harapan hidup manusia serta semakin meningkatnya jumlah
populasi orang tua, maka pada tahun 1993 lahirlah konsep Anti Aging Medicine,
yang menganggap dan memperlakukan penuaan sebagai suatu penyakit yang dapat
dicegah, dihindari, dan diobati untuk dapat kembali ke keadaan semula. Dengan
demikian, manusia tidak lagi harus membiarkan begitu saja dirinya menjadi tua
dengan segala keluhan, bahkan jika terpaksa harus mendapatkan pengobatan atau
perawatan yang belum tentu memberikan hasil yang sesuai dengan harapan mereka
(Pangkahila, 2011).
Faktor penyebab penuaan ada beberapa yang dapat dikelompokkan
menjadi faktor internal dan faktor eksternal. Beberapa faktor internal ialah radikal
bebas, hormon berkurang, proses glikolisasi, metilasi, apoptosis, sistem kekebalan
yang menurun, dan gen. Faktor eksternal yang utama ialah gaya hidup tidak sehat,
kebiasaan salah, polusi lingkungan, stress, dan kemiskinan (Pangkahila, 2011).
Karena kondisi tubuh manusia di usia tua yang menjadikannya kehilangan
kemampuan memperbaiki kerusakan karena penyebab apapun, maka teori ini pun
meyakini bahwa dengan pemberian medikasi yang tepat sebelum terlambat dapat
membantu mengembalikan proses penuaan. Mekanismenya dapat terjadi melalui
stimulasi kemampuan tubuh untuk melakukan perbaikan dan mempertahankan
organ tubuh dan sel. Proses penuaan berhubungan dengan perubahan yang terjadi
secara terus menerus pada semua jaringan, termasuk jaringan kulit. Kulit dapat
mengalami penuaan oleh karena faktor intrinsik dan diperberat oleh faktor
ekstrinsik (Pangkahila, 2011).
Kulit mempunyai fungsi yang sangat penting dalam kehidupan manusia,
antara lain dalam pengaturan keseimbangan air serta elektrolit, termoregulasi, dan

1
dapat berfungsi sebagai barier terhadap lingkungan luar termasuk mikroorganisme.
Kulit sangat mudah mengalami luka mengingat kulit merupakan organ tubuh yang
letaknya paling luar dan berfungsi sebagai barrier tubuh. Penyembuhan luka adalah
suatu hal yang esensial untuk pengembalian kontinuitas suatu jaringan yang
terputus dan pengembalian status fungsional kulit yang terganggu. Penyembuhan
luka melibatkan interaksi yang berkelanjutan antara sel-sel dan sel-matriks yang
terlihat dalam 4 fase penyembuhan luka yang saling tumpang tindih, yaitu fase
koagulasi, fase inflamasi, fase proliferasi - migrasi dan fase remodeling (Reddy,
2012).
Menurut Thomas (2005), perawatan terbaik dan optimal dalam
penanganan luka terbuka adalah dengan menggunakan bahan-bahan dan metode
yang dapat mempercepat kontraksi luka, mencegah terbentuknya jaringan granulasi
yang berlebihan, mencegah pertumbuhan bakteri, mampu mempertahankan pH
normal dan sebagai pelembab yang sesuai untuk mempercepat penutupan luka.
Beragam bentuk gangguan kesembuhan luka membuat peneliti di seluruh dunia
berusaha untuk menemukan bahan-bahan atau formula obat yang dapat membantu
mempercepat proses penyembuhan luka. Saat ini penggunaan bahan herbal untuk
pengganti obat-obat kimia telah banyak dilakukan, dan diistilahkan dengan
fitofarmaka (Sugianti, 2005).
Obat-obatan traditional tersebut tidak hanya digunakan dalam fase kuratif,
namun juga untuk fase preventif, promotif dan rehabilitasi. Obat-obatan tersebut
banyak digunakan karena keberadaannya yang mudah didapat, ekonomis dan
menurut penelitian memiliki efek samping yang relatif rendah serta memiliki efek
saling mendukung secara sinergis (Katno, 2007). Pegagan (Centella asiatica)
merupakan tanaman yang banyak di Indonesia, tumbuh di tanah yang agak lembap
dan cukup mendapat sinar matahari, seperti di padang rumput, sawah, pinggir
selokan, dan sebagainya. Pegagan mengandung beberapa senyawa saponin,
termasuk asiaticoside, asam asiatat, dan madecassoside yang memacu produksi
kolagen I, thankunside, isothankunside, brahmoside, brahmic acid, madasiatic
acid, meso-inosetol, centellose, carotenoids, garam kalium, natrium, kalsium, besi,
fosfor, vellarine, tannin, mucilago, resin, pektin, gula, vitamin B, sedikit vitamin C,

2
minyak atsiri, kalsium oksalat, dan amygdalin (Aziz dkk, 2017 dan Winarto dkk,
2005).
Tanin berperan sebagai antioksidan, antimikroba, dan memiliki efek
hemodinamik dengan vasokonstriksi dan pembuatan sumbatan mekanik untuk
menghentikan perdarahan yang ringan. Mekanisme kerja dari saponin dalam
penyembuhan luka adalah menstimulasi pembentukan kolagen tipe 1 yang berperan
penting dalam proses penutupan luka dan meningkatkan epitelisasi jaringan
(Miladiyah dan Prabowo, 2012). Saponin juga dapat meningkatkan aktivitas
antimikroba, antioksidan dan mempercepat migrasi sel epitel.
Penelitian terhadap tanaman ini masih belum banyak dilakukan. Di
masyarakat, tanaman ini banyak digunakan secara empiris digunakan sebagai
pengobatan, diantaranya tanaman pegagan telah banyak diketahui memiliki
manfaat dalam mengobati lepra, lupus, luka varikosa, eksema, psoriasis, diare,
demam, ammenore, meredakan kecemasan dan memperbaiki kesadaran. Demikian
penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh pemberian gel ekstrak daun
pegagan dalam meningkatkan neovaskularisasi, epitelisasi, dan jumlah fibroblas
pada tikus jantan.

1.2. Rumusan Masalah

Berdasarkan uraian di atas maka dapat disusun rumusan masalah sebagai
berikut:
1. Apakah pemberian gel ekstrak daun pegagan pada jaringan luka tikus jantan
tua dapat meningkatkan neovaskularisasi?
2. Apakah pemberian gel ekstrak daun pegagan pada jaringan luka tikus jantan
tua dapat meningkatkan jumlah fibroblas?
3. Apakah pemberian gel ekstrak daun pegagan pada jaringan luka tikus jantan
tua dapat meningkatkan ketebalan epitelisasi?

1.3. Tujuan Penelitian

1. Tujuan Umum
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh gel ekstrak daun
pegagan terhadap penyembuhan luka pada tikus jantan tua.
2. Tujuan Khusus

3
 a. Untuk mengetahui pengaruh pemberian gel ekstrak daun pegagan pada
jaringan luka tikus jantan tua dalam meningkatkan neovaskularisasi.
b. Untuk mengetahui pengaruh pemberian gel ekstrak daun pegagan pada
jaringan luka tikus jantan tua dalam meningkatkan jumlah fibroblas.
c. Untuk mengetahui pengaruh pemberian gel ekstrak daun pegagan pada
jaringan luka tikus jantan tua dalam meningkatkan epitelisasi.

1.4. Manfaat Penelitian

1. Manfaat Ilmiah
a. Penelitian ini diharapkan mampu membuktikan bahwa pemberian gel
ekstrak daun pegagan dapat memperbaiki proses penyembuhan luka
pada tikus jantan tua.
b. Penelitian ini diharapkan mampu menambah informasi terkait
kemampuan gel ekstrak daun pegagan dalam meningkatkan
neovaskularisasi, jumlah fibroblas dan epitelisasi pada luka tikus jantan
tua.
c. Hasil penelitian ini dapat dijadikan sebagai acuan bagi penelitian
lanjutan.
2. Manfaat praktis
Hasil penelitian ini diharapkan mampu menjadi acuan untuk pengobatan
alternatif apabila telah melalui uji klinis dan benar mampu memperbaiki proses
penyembuhan luka.

4
 BAB II

KAJIAN PUSTAKA

2.2. Anti Penuaan (Anti Aging)

Setelah mencapai usia dewasa, secara alami seluruh komponen tubuh tidak
dapat berkembang lagi. Terdapat 2 faktor yang mempengaruhi, yaitu: faktor
internal dan faktor eksternal. Beberapa faktor internal adalah radikal bebas, hormon
yang berkurang, dan genetik. Faktor eksternal yang utama adalah pola hidup yang
tidak sehat dan diet yang tidak sehat. Faktor-faktor ini dapat dicegah, diperlambat
bahkan mungkin dihambat sehingga kualitas hidup dapat dipertahankan. Lebih jauh
lagi usia harapan hidup dapat lebih panjang dengan kualitas hidup yang baik
(Pangkahila, 2007).
Usia harapan hidup yang lebih panjang disertai kualitas hidup yang
optimal inilah konsep baru dari ilmu kedokteran anti penuaan atau Anti Aging
Medicine (AAM). AAM ini didefinisikan sebagai bagian ilmu kedokteran yang
didasarkan pada penggunaan ilmu pengetahuan dan teknologi kedokteran terkini
untuk melakukan deteksi dini, pencegahan, pengobatan, dan perbaikan ke keadaan
semula berbagai disfungsi, kelainan, dan penyakit yang berkaitan dengan penuaan,
yang bertujuaan untuk memperpanjang hidup dalam keadaan sehat.
Dengan bertambahnya proses penuaan usia seseorang, dimana terjadi
penurunan berbagai fungsi organ tubuh ini dapat memicu munculnya penyakit
degeneratif. Penyakit degeneratif adalah suatu penyakit yang timbul akibat proses
kemunduran fungsi sel tubuh, dari keadaan normal menjadi lebih buruk. Penyakit
degeneratif dapat dikatakan pula sebagai penyakit yang mengiringi proses penuaan.
Apabila dibiarkan terus, dapat menimbulkan komplikasi akibat penyakit tersebut
sehingga memperburuk kualitas hidup seseorang (Karyani, 2003). Perlu dilakukan
upaya-upaya dalam menganggulangi penyakit degeneratif agar proses penuaan
dapat dihambat.

5
2.2. Kulit
2.2.1. Anatomi dan Fisiologi Kulit Manusia
Ketebalan kulit manusia itu bervariasi tergantung dari ras, lokasi, usia.
Secara umum ketebalan kulit berkisar 1,5 – 4,0 mm. Kulit terdiri dari tiga lapisan
yaitu epidermis, dermis dan hipodermis.
a. Epidermis
Epidermis merupakan lapisan terluar kulit yang secara terus – menerus
mengalami pembaharuan. Ketebalan epidermis berkisar antara 0,4 – 1,5 mm.
Epidermis juga menyediakan tempat tumbuh bagi appendage kulit (kelenjar
keringat, kelenjar pilosebaseus dan kuku). Epidermis terdiri dari lima lapisan
dari dalam keluar yaitu stratum basal, stratum spinosum, stratum granulosum,
stratum lusidum, stratum korneum.
Stratum basal/stratum germinativum sesuai dengan namanya lapisan ini
merupakan lapisan yang aktif bermitosis terdiri dari sel – sel keratinosit yang
berbentuk kolumnar yang melekat melalui filamen keratin pada membran basal
pada hemidesmosom, melekat pada sel sekitar lainnya sepanjang desmosome dan
memberikan pertumbuhan bagi sel yang lebih superfisial untuk membentuk
lapisan epidermis. Pada lapisan ini juga terdapat melanosit yang mengandung
butiran pigmen (melanosome). Stratum spinosum/ stratum malphigi terdiri dari
beberapa lapis sel berbentuk poligonal yang besarnya berbeda karena adanya
proses mitosis. Protoplasmanya jernih mengandung glikogen, inti di tengah,
semakin ke permukaan bentuk selnya semakin gepeng. Diberi nama spinosum
karena tepi dari sel-sel ini terdapat spine (duri). Di antara sel – sel spinosum ini
terdapat sel Langerhans. Stratum granulosum disebut juga lapisan keratohialin
terdiri dari 2-3 lapis sel gepeng dengan sitoplasma bergranula kasar dan terdapat
inti di antaranya. Granula ini adalah keratohialin terbentuk utamanya dari
profilagrin, filamen keratin dan lorikrin. Profilagrin berubah menjadi filagrin,
filagrin ini berperan pada hidrasi stratum korneum dan membantu filter radiasi
ultraviolet. Lapisan ini tampak jelas di kulit telapak tangan dan kaki. Stratum
lusidum terdiri dari sel – sel gepeng tanpa inti dengan protoplasma yang berubah
menjadi protein disebut eleidin. Lapisan ini tidak tampak jelas pada semua
bagian kulit, lebih jelas pada kulit telapak tangan dan kaki. Stratum korneum
disebut juga lapisan tanduk merupakan bagian kulit yang terluar, terdiri dari

6
 beberapa lapis sel gepeng yang mati dan tak berinti, protoplasmanya telah
berubah menjadi keratin (Wasiaatmadja, 2000).
b. Dermis
Lapisan yang berada di bawah epidermis dengan ketebalan yang jauh lebih tebal
dari epidermis, merupakan komponen terbesar pembentuk kulit sehingga
mempertahankan elastisitas dan kekuatan peregangan kulit. Dermis melindungi
tubuh dari trauma mekanik, mengikat air dan berperan pada termoregulasi dan
mengandung reseptor berbagai stimuli. Dermis bekerjasama dengan epidermis
dalam mempertahankan komponen masing – masing serta berinteraksi dalam
perbaikan dan pembentukan kembali kulit setelah perlukaan.
Dermis terdiri dari dua bagian yaitu papilar dermis dan retikuler dermis. Papila
dermis merupakan bagian dermis yang berbatasan langsung dengan epidermis
dengan ketebalan tidak lebih dari dua kalinya, mengandung pembuluh darah dan
ujung serabut saraf. Retikuler dermis menonjol ke hipodermis, terdiri dari serat
kolagen, elastin dan retikulin, terdapat pula fibroblas. Kolagen terbentuk dari
fibroblas, membentuk ikatan yang mengandung hidroksiprolin dan hidroksilisin
(Wasiaatmadja, 2000).

Gambar 2.1. Struktur anatomi kulit (Dikutip dari: Anonim, 2009)

c. Hipodermis
Hipodermis menyekat tubuh, sebagai bantalan dan pelindung kulit, cadangan
makanan dan memungkinkan mobilitas kulit dari jaringan di bawahnya.
Hipodermis terdiri dari sel – sel lemak yang berbentuk bulat, besar dengan inti

7
 yang terdesak ke tepi, karenanya dapat memberikan bentuk tubuh
(Wasiaatmadja, 2000).

2.2.2. Penuaan Kulit

Kulit merupakan organ yang kompleks dan dinamis dimana jika terjadi
proses penuaan maka perubahannya sangat nyata terlihat. Kulit dapat
memetabolisme hormon dan memiliki kemampuan untuk aktivasi dan inaktivasi
hormon. Penuaan pada kulit pada dasarnya terbagi atas penuaan intrinsik dan
ekstrinsik. Penuaan kulit intrinsik disebut juga penuaan kulit kronologis yang
timbul akibat usia. Perubahan ini terjadi akibat kerusakan endogen yang terus-
menerus dan terakumulasi yaitu terbentuknya Reactive Oxygen Species (ROS)
selama metabolisme oksidatif selular. Terbentuknya ROS menyebabkan kerusakan
di tingkat selular yaitu kerusakan membran, enzim dan DNA bahkan pada tingkat
mikroselular sehingga mempengaruhi hubungan antara DNA-protein.

Tabel 2.1. Perubahan histologis dari aging skin (Rieger, 2000)

Penuaan kulit intrinsik juga dipengaruhi oleh penurunan hormon dan

modifikasi dari growth factor yang menurun sesuai dengan pertambahan usia.
Hormon yang mengalami penurunan adalah hormon seks steroid yaitu estrogen,
testosteron, dehidroepiandosteron (DHEA) dan turunannya sulfat ester DHEAS.
Penurunan kadar hormon tersebut mempengaruhi penurunan molekul signaling
tertentu termasuk cytokine dan chemokine yang juga menurun seiring pertambahan
usia, hal ini dapat memperburuk beberapa fungsi kulit. Selain penuruan sintesis dan

8
sekresi molekul signaling juga terjadi penurunan reseptornya yang berhubungan
dengan pertambahan usia.
Penuaan kulit ekstrinsik disebut juga photoaging. Photoaging terjadi
sebagai akibat akumulasi dari radiasi UV dari matahari. UVC terabsorbsi langsung
pada lapisan ozon di atmosfer (Diffey, 2002). Komponen utama radiasi UV sinar
matahari adalah UVA, UVA ini dapat menembus sampai ke lapisan dermal yang
lebih dalam (Yaar, 2006). Efek lebih luas dari UVA pada kulit diasumsikan sebagai
akibat dari kerusakan oksidatif yang diperantarai dengan absorbsi UVA pada
tingkat selular yang mengakibatkan pembentukan ROS dan radikal bebas. Radiasi
UVB terutama mengenai epidermis yang langsung diserap oleh DNA selular yang
menyebabkan pembentukan lesi DNA. DNA mempunyai sistem perbaikan akan
tetapi perbaikan ini seringkali tidak sempurna. Jika sel sudah mengandung terlalu
banyak kerusakan DNA maka akan terjadi apoptosis (Yaar, 2006).

2.3. Luka
2.3.1. Definisi Luka
Luka adalah hilang atau rusaknya sebagian jaringan tubuh. Keadaan ini
dapat disebabkan oleh trauma benda tajam atau tumpul, perbahan suhu, zat kimia,
ledakan, sengatan listrik, atau gigitan hewan (Sjamsuhidajat dan Jong, 2005).

2.3.2. Pembagian Luka

Pembagian luka bedasarkan waktu penyembuhan luka dibagi menjadi 2
kategori yaitu luka akut dan luka kronis. Luka akut merupakan luka trauma yang
segera mendapat penanganan dan akan dapat sembuh dengan baik bila tidak terjadi
komplikasi. Kriteria luka akut adalah luka baru, mendadak, dan penutupannya
sesuai dengan waktu yang diperkirakan (Lipincott, 2003). Pada luka akut akan
alami fase-fase penutupan sistemik untuk mengembalikan integritas kulit seperti
semula. Contoh dari luka akut adalah luka bakar, luka tusuk
atau sayat dan luka luka operasi juga dikategorikan luka akut yang dibuat oleh ahli
bedah seperti luka jahit, skin graft (Fowler, 2000). Luka kronik adalah luka yang
berlangsung lama atau seringkali kambuh dimana terjadi gangguan pada proses
penutupan yang biasanya disebabkan oleh masalah multifaktorial dari penderita.
Pada luka kronik luka gagal sembuh pada waktu yang diperkirakan, tidak berespon

9
baik terhadap terapi dan punya tendensi untuk timbul kembali (Lippincott, 2003).
Pada luka kronis juga akan mengalami sebagian besar fase fase penutupan seperti
pada luka akut, tetapi tidak menghasilkan pengembalian integritas kulit seperti
sedia kala. Sesuai dengan rule of thumb, luka yang gagal untuk sembuh sempurna
sampai tiga bulan sudah dikatakan sebagai luka kronis. Tetapi pembagian
berdasarkan definisi ini tidak mempertimbangkan ukuran, lokasi anatomi luka, dan
dan hal hal yang merintangi penutupan luka (Adams et al., 2008).

2.3.3. Mekanisme Penutupan Luka

Perbaikan luka adalah usaha jaringan untuk mengembalikan struktur dan
fungsi normal setelah alami trauma, untuk mengembalikan fungsi perlindungan
terhadap kehilangan cairan, terhadap infeksi, membatasi masuknya organisme serta
benda asing, mengembalikan aliran darah dan aliran limfe kembali ke kondisi
normal dan mengembalikan integritas mekanik dari jaringan yang terluka.
Pengembalian struktur kulit yang sempurna seringkali dikorbankan demi untuk
pengembalian darurat fungsi dari kulit (Leong dan Phillips, 2004).
Regenerasi, berbeda dengan perbaikan luka, merupakan suatu pemulihan
sempurna seperti struktur jaringan semula tanpa pembentukan jaringan bekas luka.
Walaupun regenerasi merupakan hal yang paling ideal di dalam penutupan luka,
tetapi hal ini hanya ditemukan pada pertumbuhan embrio, pada organisme yang
lebih rendah seperti kepiting dan salamander, dan pada manusia hanya ditemukan
pada beberapa jaringan seperti pada tulang dan hati (Leong dan Phillips, 2004).
Hasil penutupan pada organ lain adalah jaringan fibrosis dan scar (Lorenz dan
Longaker, 2001).
Penutupan luka normal mengikuti pola pola yang dapat diperkirakan yang
dapat dibagi menjadi beberapa fase yang saling tumpang tindih dibedakan berdasar
perubahan selular dan aktivitas biokimia (Barbul, 2005). Fase penutupan luka
terdiri dari tiga fase yaitu fase inflamasi, fase proliferasi dan fase maturasi (Lorenz
dan Longaker, 2001).

10
1. Fase inflamasi
Inflamasi merupakan reaksi awal bila tubuh terkena luka (Li et al., 2007).
Fase ini terjadi segera setelah cedera dan dapat berlangsung sampai 4-6 hari
(Broughton et al., 2006). Reaksi awal adalah terjadinya vasodilatasi lokal,
keluarnya darah dan cairan menuju ruangan ekstravaskuler, dan terhambatnya
aliran limfatik. Semua ini mengakibatkan timbulnya tanda-tanda utama untuk
terjadinya suatu inflamasi, termasuk bengkak, merah dan panas. Respon inflamasi
akut ini biasanya antara 24-48 jam dan dapat menetap diatas 2 minggu untuk
beberapa kasus (Li et al., 2007). Fase ini merupakan tahap awal yang alami untuk
mengangkat jaringan debris dan mencegah infeksi yang invasif (Gurtner, 2007).
Fase ini dibagi menjadi dua yaitu respon vaskular dan respon seluler (Li et
al., 2007). Pada respon vaskular, perdarahan terjadi segera sesudah jaringan cedera
sebagai akibat dari terganggunya atau rusaknya pembuluh darah. Langkah pertama
dari proses penyembuhan luka adalah hemostasis. Hemostasis terdiri dari dua
proses utama: pembentukan fibrin clot dan koagulasi. Platelet adalah sel pertama
yang muncul sesudah terjadinya cedera dan mengatur hemostasis normal.
Perubahan trombin menjadi fibrinogen dan kemudian menjadi fibrin selama
agregasi platelet, menyebabkan fibrin clot terbentuk dan menghentikan perdarahan.
Komponen ke dua dari hemostasis adalah koagulasi melalui intrinsik dan
ekstrinsik coagulation pathways. Kerusakan jaringan melepaskan lipoprotein yang
dikenal sebagai tissue factor. Platelet meningkatkan pembentukan jaringan baru
melalui pelepasan beberapa growth factors kuat yang berpengaruh pada perbaikan
luka, seperti transforming growth factor alpha (TGF-α), transforming growth
factor beta (TGF-β), dan platelet-derived growth factor (PDGF) (Li et al., 2007).
Pada respon seluler, ciri-ciri fase inflamasi adalah masuknya lekosit ke daerah luka.
Segera setelah terjadinya luka sel netrofil dalam jumlah besar berpindah dari kapiler
menuju jaringan luka, kemudian jumlah netrofil menurun dan digantikan dengan
makrofag (perubahan dari monosit). Monosit segera berubah menjadi makrofag
pada jaringan luka fase selanjutnya, kurang lebih dalam 48 sampai 72-96 jam
setelah luka (Broughton et al., 2006; Gurtner, 2007).
Monosit ini ditarik ke jaringan luka oleh chemoattractans yang sama
dengan netrofil, juga oleh monocyte chemoattractant protein dan macrophage

11
inflammatory protein, oleh produk dari degradasi matriks ekstraseluler seperti
fragmen kolagen, fragmen fibronectin, dan trombin (Li et al., 2007). Makrofag
berperan penting dalam pengaturan sel seperti fungsifagositosis, memakan dan
mencerna serta membunuh organisme patogen, membersihkan debris jaringan dan
merusak sisa netrofil, menarik fibroblas ke jaringan luka dan memicu pembuluh
darah baru. Makrofag merupakan pabrik produksi growth factors seperti PDGF,
fibroblast growth factor (FGF), vascular endothelial growth factor (VEGF), TGF-
β, dan TGF-α (Keller et al., 2006).
Fase inflamasi ini, netrofil dan makrofag menghasilkan sejumlah besar
anion superoksid radikal, yang sering digambarkan sebagai ‘respiratory burst’.
Kemudian sel lain seperti fibroblas dirangsang oleh sitokin pro inflamasi untuk
memproduksi reactive oxygen spesies (ROS) (Keller., 2006). Selain efek positif
untuk membunuh bakteri, ROS ini juga berdampak negatif, menghambat migrasi
sel, merusak jaringan dan bahkan berubah menjadi neoplasma (Keller, 2006).
Untuk melindungi dari stres oksidatif, sel-sel mempunyai beberapa sistem untuk
mendetoksifikasi ROS, yaitu secara non-enzimatik dan enzimatik. (Keller et
al., 2006).
Suatu luka disebut luka kronis bila fase inflamasi menetap berbulan-bulan
bahkan tahunan. Fase inflamasi menetap pada keadaan luka yang hipoksia, infeksi,
defisiensi nutrisi, penggunaan obat-obatan tertentu, atau faktor lain yang
dihubungkan dengan respon imun pasien (Reddy et al, 2012). Luka kronis
membentuk jaringan nekrotik yang tercemar oleh organisme patogen atau
mengandung material asing yang tidak dapat di fagositosis selama fase akut
inflamasi. Granulosit tidak muncul, sebaliknya sel mononuklear terutama limfosit,
monosit, dan makrofag menetap pada daerah inflamasi. Tidak ada tanda-tanda
inflamasi. Makrofag menarik fibroblas dan dalam waktu yang lama memproduksi
sejumlah besar kolagen, membentuk masa encapsulated dari jaringan fibrous
dengan lambat, suatu granuloma (Li et al., 2007).

2. Fase Proliferasi
Fase proliferasi dimulai setelah respon akut dari hemostasis dan inflamasi
mulai berhenti, ancang-ancang perbaikan luka mulai dilakukan dengan

12
angiogenesis, fibroplasia dan epitelisasi. Pada fase ini ditandai dengan penyusunan
jaringan granulasi yang terdiri dari anyaman kapiler, fibroblasts, makrofag, jaringan
kolagen longgar, fibronektin dan asam hyaluronat (Leong dan Phillips, 2004). Fase
ini dimulai sekitar hari ketiga yang ditandai dengan peningkatan drastis dari koloni
sel dan produksi kolagen. Produksi kolagen sebenarnya telah dapat dideteksi mulai
sepuluh jam setelah trauma, mencapai puncaknya pada hari ketujuh, dimana luka
telah terisi penuh oleh jaringan kolagen (Lawrence dan Lowenstein, 2001).
Fibroblas dan myofibroblas di jaringan sekitar akan berproliferasi selama
tiga hari pertama lalu akan tertarik dan bermigrasi ke tempat perlukaan oleh TGF-
β dan platelet derived growth factor(PDGF) yang dilepaskan oleh sel yang
terinflamasi dan keping-keping darah. Fibroblas pada luka muncul pertama kali
pada hari ke-3 setelah perlukaan dan berproliferasi dengan aktif dan menghasilkan
protein matriks seperti fibronectin, proteoglycan dan prokolagen tipe 1 dan tipe 3,
kesemuanya ini terjadi hanya lokal saja. Pada akhir minggu pertama terdapat
akumulasi ECM yang banyak, ECM ini selanjutnya akan membantu migrasi sel dan
penting pada proses repair. Fibroblas yang telah bermigrasi akan berubah secara
fenotipnya menjadi myofibroblas yang terdiri dari gulungan actin yang tebal di
bawah membran plasma dan mempunyai pseudopodia yang aktif untuk melekatkan
diri ke fibronectin dan kolagen pada ECM. Kontraksi luka merupakan kejadian
yang penting dari proses reparasi yang
membantu untuk memperkecil tepi luka. Setelah selesai menjalankan tugasnya,
tumpukan fibroblas ini akan dihilangkan dengan apoptosis.

13
 Gambar 2.2. Mekanisme penyembuhan luka: Perlukaan (1), Fase Inflamasi (2),
Fase Proliferasi (3), Fase Remodelling (4) (dikutip dari : Adams,2012)

Kolagen merupakan komponen yang penting pada tiap fase penyembuhan

luka. Kolagen disintesis oleh fibroblas, kolagen ini memberikan integritas dan
kekuatan pada berbagai jaringan dan berperan penting khususnya pada fase
proliferasi dan remodeling. Kolagen bertindak sebagai pondasi pembentukan
matriks intraselular pada luka.
Modeling dan terbentuknya pembuluh darah baru merupakan hal yang
penting pada penyembuhan luka dan terdapat pada semua fase dari proses
reparative. Sejumlah faktor angiogenic yang disekresi selama fase haemostasis
akan merangsang angiogenesis. Keseimbangan yang baik terpelihara oleh faktor
aktivasi dan inhibisi. Zat stimulasi dan inhibisi bekerja secara langsung maupun tak
langsung pada sel endothelial yang berproliferasi melalui aktivasi mitosis,

14
rangsangan locomotion dan stimulasi sel host untuk melepaskan endothelial growth
factor.
Keadaan hipoksia, molekul – molekul dihasilkan dari jaringan sekitar
untuk merangsang proliferasi dan pertumbuhan sel – sel endothel melalui empat
tahapan yaitu produksi protease oleh sel endothel untuk degradasi lamina basal
pembuluh darah induk yang akan merangkak melalui ECM, kemotaksis, proliferasi
dan remodeling dan diferensiasi. FGF dan VEGF menjadi pengatur utama dalam
tiap proses tersebut. Awalnya pembuluh darah belum terbentuk dan jaringan hidup
yang letaknya terbatas pada tepi luka mendapatkan nutrisi secara perfusi dari
pembuluh darah yang sehat dan difusi dari intersisial yang sehat (Huang and Hsu,
2005).
Serabut kapilar mulai memasuki bekuan darah dan dalam beberapa hari
jaringan mikrovaskular terbentuk yang terdiri dari banyak kapiler baru. Kemotaksis
adalah mekanisme biokimia yang memampukan sel untuk memberikan respon yang
adekuat dari rangsangan lingkungan yang menentukan proliferasi, diferensiasi dan
migrasi. Migrasi tergantung dari jaringan yang kaya akan actin di bawah membran
plasma dan diatur oleh faktor fisik dan kimiawi sistem vaskular yaitu kemotaksis,
mekanotaksis, haptotaksis (Huang and Hsu, 2005).
Migrasi sel – sel epitel dimulai dari tepi luka dalam beberapa jam setelah
perlukaan. Selapis sel – sel yang terbentuk sebagai awalan dilanjutkan dengan
peningkatan yang nyata dari aktivitas mitosis sel epiteldi sekitar tepian luka. Sel –
sel bermigrasi melalui lapisan tersebut menempel pada matriks sementara di
bawahnya. Migrasi akan terhenti ketika sel – sel epitel matur bertemu dan
dilanjutkan dengan pembentukan basement membran (Diegelmann and Evans,
2004).
Banyaknya jaringan granulasi pada luka tergantung dari ukuran dan dalam
dari luka, jika luka dibiarkan menyembuh secara sekunder. Luka yang besar perlu
untuk diisi dengan jaringan granulasi sehingga sel epitel dari pinggir pinggir luka
dapat bermigrasi dan membuat epitel baru pada luka. Akhirnya jaringan granulasi
yang terdiri dari ikatan fibrin-fibronectin yang merupakan pembentuk bekuan darah
bersama dengan jaringan pengganti sementara matriks luka yang terdiri dari
proteoglikan, glikosaminoglikan, dan asam hyaluronat akan digantikan oleh

15
kolagen, kapiler kapiler baru, berbagai sel radang dan fibroblas (Adams et al.,
2008).
Angiogenesis berlangsung proporsional untuk perfusi darah dan tekanan
parsial oksigen arteri (Ueno et al., 2006). Pembuluh darah baru tumbuh ke dalam
matriks kolagen dibentuk oleh fibroblas. Secara klinis, kontraksi luka adalah respon
alami dari tubuh untuk melokalisasi dan membuat daerah lebih kecil serta
melindungi dirinya dari semua dampak negatif luka. Luka yang sembuh dengan
sendirinya tanpa perawatan khusus menunjukkan ini kekuatan dari tindakan
kontraksi luka. Sebenarnya epitelisasi mulai terjadi segera setelah luka dan
dirangsang oleh cytokine inflammatory.
Terakhir, epitelisasi ditandai dengan replikasi dan migrasi. Proses ini
mengembalikan epidermis utuh seperti semula. Faktor yang terlibat adalah migrasi
keratinosit pada jaringan luka, proliferasi keratinosit, diferensiasi neoepitelium
menjadi epidermis yang berlapis-lapis, dan mengembalikan basement membrane
zone (BMZ) menjadi utuh yang menghubungkan epidermis dan dermis (Li et al.,
2007). Epidermal growth factor (EGF), keratinocyte growth factor (KGF), dan
TGF-α merupakan faktor penting untuk merangsang migrasi keratinosit, proliferasi,
dan epitelisasi. Hari ke 7-9 sesudah epitelisasi, BMZ terbentuk.
Struktur kulit pada BMZ terdiri dari banyak protein matriks ekstraseluler
seperti kolagen dan laminins. Pada luka yang dibiarkan menyembuh secara
sekunder dan pada sebagian kecil luka yang menyembuh secara primer, akan
mengalami fenomena yang disebut kontraksi luka. Kontraksi luka merupakan suatu
proses dimana pinggir pinggir luka dan kulit sekitarnya ditarik menuju ke pusat
luka. Proses kontraksi luka ini biasanya terjadi sekitar minggu pertama setelah
terjadinya luka, dan mencapai puncaknya pada hari ke sepuluh, dengan kecepatan
sekitar 0,75 mm per hari. Proses ini merupakan cara yang paling efisien untuk
mengurangi luas permukaan luka sehingga menurunkan kebutuhan pembentukan
epitel untuk menutup luka (Lazarus et al., 2004).

3. Fase Maturasi

16
 Walaupun terlihat bertolak belakang, ternyata degradasi kolagen terjadi
bersamaan dengan pembentukannya supaya tercapai penutupan luka normal. Saat
sintesis kolagen seimbang dan sebanding dengan derajat degradasi kolagen, saat ini
lah dikatakan bahwa luka mengalami fase remodeling atau maturasi. Fase ini terjadi
sampai beberapa bulan bahkan ada yang sampai tahunan terutama pada luka-luka
yang besar dan dibiarkan menyembuh secara sekunder (Adams et al., 2008).
Kekuatan dari luka perlahan meningkat dengan didegradasinya kolagen
tipe III yang terbentuk pada fase-fase awal, oleh MMPs dan secara perlahan
digantikan dengan kolagen tipe I. Aktivitas dari MMPs sendiri diatur oleh TIMMPs
(Tissue Inhibitors of matrix Metalloproteinase) sehingga keseimbangan dari
sintesis, deposisi dan degradasi dari matriks ekstraselular dapat dipertahankan
(Barbul, 2005).
Setelah kolagen tipe I mulai terdapat pada luka dengan posisi sejajar
dengan garis tekanan, maka kekuatan dari luka meningkat. Peningkatan kekuatan
ini paling cepat pada awal minggu ke enam, dan kemudian akan melambat tetapi
akan tetap meningkat bahkan sampai tahunan. Kekuatan regangan dari luka
mencapai 50% seperti kulit normal dalam waktu tiga bulan, dan akhirnya secara
perlahan mencapai 80% pada akhir fase remodeling walaupun proses ini berjalan
sangat lambat dan menghabiskan waktu sampai beberapa tahun. Jaringan parut
yang awalnya berwarna kemerahan atau keunguan, akibat dari begitu banyaknya
jumlah kapiler yang dikandungnya, secara perlahan berubah warna menjadi putih
karena telah diserap kembali dan digantikan oleh kolagen tipe I.
Hasil akhir dari fase penutupan luka ini adalah suatu jaringan parut yang
kurang elastis, avascular dan rapuh yang sama sekali tidak terdapat jaringan kulit
tambahan seperti folikel rambut dan kelenjar keringat serta tidak akan kembali
melebihi 80% dari kekuatan regangan kulit normal yang tidak pernah terluka
(Adams et al., 2008).

17
2.3.4. Parameter penyembuhan luka
Terdapat beberapa parameter dalam penyembuhan luka yang dapat
diamati baik secara makroskopis maupun mikroskopis. Secara makroskopis dapat
dilihat dari berkurangnya luas luka, sedangkan secara mikroskopis dapat diperiksa
secara histopatologi jumlah sel-sel radang (neutrofil, makrofag, dan limfosit),
jaringan granulasi, jumlah neovaskuler, presentase re-epitelisasi, dan kepadatan
jaringan ikat (fibroblas) (Prasetyo et al., 2010). Jumlah neovaskuler, presentase
epitelisasi, dan kepadatan jaringan ikat (fibroblas) merupakan parameter
penyembuhan luka yang paling umum digunakan untuk menilai progress
kesembuhan luka. Hal ini karena ketiga parameter tersebut terlibat dalam proses
yang penting dalam proses penyembuhan luka (Prasetyo et al., 2010).
Angiogenesis adalah proses pertumbuhan pembuluh darah baru yang
disebut neovaskularisasi, terjadi bersamaan dengan fibroplasia dan saling
bergantung satu sama lain. Neovaskulasisasi ke daerah luka yang mencapai puncak
pembentukannya pada hari ke 3-5 setelah terjadinya luka dan perlahan jumlahnya
akan menurun sekitar hari ke 7. Kolagen dan matriks ekstraselular yang terbentuk
harus selalu mendapat oksigen dan nutrien agar proses metabolik dapat
berlangsung. Neovaskularisasi berfungsi sebagai sarana untuk memenuhi
kebutuhan penting ini (Huang and Hsu, 2005).
Peningkatan jumlah sel fibroblast pada jaringan yang mengalami luka, atau
sering disebut fibroplasia, juga merupakan proses yang sangat penting, dimana
terjadi pembentukan jaringan granulasi dan penyusunan kembali matriks dermal.
Fibroblas bermigrasi ke dalam luka; memproduksi sejumlah besar kolagen,
proteoglikan, elastin, dan protein matriks lain; serta berpartisipasi pada kontraksi
luka. Fibroblas itu sendiri berbentuk fusiformis diantara serabut-serabut jaringan,
memiliki tonjolan-tonjolan sitoplasma yang tidak teratur, inti bulat telur, besar,
kromatin halus, dan memiliki nukleus yang jelas. Pada jaringan ikat longgar
dijumpai berbentuk bintang atau stelata sebagai akibat serabut-serabut jaringan ikat
yang tidak teratur. Fibroblas memiliki banyak mikrofilamen proaktin serta
mikrotubul.
Dilain pihak, proses epitelisasi menunjukkan secara langsung fenotip proses
penyembuhan luka. Epitelisasi dimulai beberapa jam setelah jaringan terluka.
Proses ini dimulai dari pinggir luka dan akhirnya akan membentuk barier yang

18
menutupi seluruh permukaan luka. Migrasi keratinosit berperan pada pelapisan
kembali defek epidermal. Pada peristiwa ini keratinosit berubah bentuk,
sikloskleton tersusun kembali, serta ekspresi keratin dan protease (Adams et al.,
2008). Selanjutnya Bersama-sama dengan kolagen pembentukan lapisan dermis
semakin berkualitas dengan mengatur keseimbangan jaringan granulasi dan dermis.

2.4. Penyembuhan luka

2.4.1. Penyembuhan luka dan aging
Penuaan terjadi secara menyeluruh dengan kecepatan yang berbeda pada
tiap bagian tubuh yang menyebabkan munculnya abnormalitas, hal ini pula yang
terjadi pada penyembuhan luka. Pada dermis kulit yang menua terjadi penurunan
ketebalan, penurunan serat elastin, perubahan ground substance ECM dermal,
penurunan densitas dan vaskularisasi. Defek selular sehubungan dengan aging
ditandai dengan penurunan yang absolut jumlah populasi sel, ketidakteraturan
mikrosirkulasi, berkurangnya produksi makromolekul yang mengakibatkan
kehilangan kolagen dermis dan secara in vitro mengurangi kapasitas sel – sel
mesenchymal.
Hal-hal tersebut dapat merubah respon selular sebagai akibat dari perubahan
matriks yang terikat growth factor, migrasi dan proliferasi selular yang tidak sesuai
akibat perubahan struktur dan kuantitas matriks dan atau perubahan signaling
antara matriks dan sel yang menyebabkan perubahan ekspresi gen (Ashcroft, 2002).
Efek intrinsik aging pada penyembuhan luka di kulit sangat nyata dan morbiditas
luka akut maupun kronis berdampak besar pada pelayanan kesehatan (Ashcroft et
al., 1999). Penyembuhan luka pada organisme yang mengalami aging menjadi
terganggu ditambah dengan penyakit – penyakit kronis yang mengganggu integritas
kulit seperti diabetes, penyakit vaskular perifer (hipertensi venous, insufisiensi
arteri) (Gist et al., 2009). Bahkan komplikasi penyembuhan luka lebih sering terjadi
pada manusia lanjut usia yaitu terbukanya kembali luka yang telah menutup.

2.4.2. Penyembuhan luka, sex hormone dan aging

19
 Hormon seks memainkan peran penting dalam defisit penyembuhan luka
yang berkaitan dengan penuaan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa laki-laki tua
memiliki proses penyembuhan luka akut yang jauh lebih lambat dibandingkan
dengan perempuan tua (Gilliver et al., 2007). Penjelasan untuk fenomena ini adalah
bahwa hormone kelamin (sex hormone) seperti estrogen pada perempuan (estron
dan 17β-estradiol), androgen pada laki-laki (testosteron dan 5α- dihidrotestosteron,
DHT), dan prekursor steroid pada laki-laki dan perempuan dehydroepiandrosterone
(DHEA) memiliki efek yang signifikan pada proses penyembuhan luka (Gilliver et
al., 2007). Penelitian telah membuktikan bahwa perbedaan dalam ekspresi gen
antara laki-laki tua dan laki-laki muda pada proses penyembuhan luka secara
eksklusif diatur oleh estrogen (Hardman dan Ashcroft, 2008).
Estrogen mempengaruhi penyembuhan luka dengan mengatur berbagai
gen yang terkait dengan regenerasi, produksi matriks, protease inhibitor, fungsi
epidermis, dan gen terutama terkait dengan peradangan (Hardman dan Ashcroft,
2008). Studi menunjukkan bahwa estrogen dapat meningkatkan proses
penyembuhan luka yang menurun akibat proses penuaan, baik pada pria dan wanita,
sedangkan androgen cenderung memperlambat proses penyembuhan luka kulit
(Gilliver et al., 2007).

2.4.3. Penyembuhan luka dan antioksidan nutrient

Secara alami tubuh kita memiliki antioksidan endogen yang dihasilkan
sendiri oleh tubuh. Kapasitas antioksidan yang dimiliki oleh setiap individu
berbeda-beda, tergantung pola hidup yang dijalani masing-masing individu, serta
faktor usia. Sistem pertahanan tubuh yang utama dilakukan oleh antioksidan
endogen, selebihnya dilakukan oleh antioksidan eksogen. Antioksidan endogen
merupakan antioksidan alami yang dihasilkan tubuh atau disebut pula sebagai
antioksidan primer, sedangkan antioksidan eksogen terdiri atas antioksidan
sekunder, tersier, pengikat oksigen (oxygen scavenger), dan pengikat logam
(chelator atau sequestrans) (Lingga, 2012).
Antioksidan nutrient yang termasuk antioksidan eksogen adalah
komponen yang tidak dapat diproduksi tubuh dan hanya didapat dari makanan atau
suplemen, misalnya vitamin A, C, dan E, serta beberapa macam zat nirgizi antara

20
lain karotenoid, flavonoid, tanin dan sejumlah fitokimia lainnya (Lingga, 2012),
trace metals (selenium, manganese, zinc), omega-3, dan omega-6 (Huy et al.,
2008). Antioksidan yang didapat dari makanan memegang peranan penting dalam
membantu antioksidan endogen untuk mengatasi stres oksidatif. Masing-masing
nutrient ini unik dalam struktur dan fungsi sebagai antioksidan.
Flavonoids. Flavonoid berfungsi untuk membatasi pelepasan mediator
inflamasi. Aktivitas antiinflamasi flavonoid dilakukan melalui penghambatan
siklooksigenase dan lipooksigenase sehingga terjadi pembatasan jumlah sel
inflamasi yang bermigrasi ke jaringan perlukaan. Selanjutnya reaksi inflamasi akan
berlangsung lebih singkat dan kemampuan proliferatif dari TGF-β tidak terhambat,
sehingga proses proliferasi dapat segera terjadi. Aktivitas flavonoid yang lain
adalah dapat mempercepat proses penyembuhan luka didukung juga oleh
mekanisme antioksidan dalam melakukan penghambatan aktivitas radikal bebas
(Indraswary, 2011). Flavonoid dapat pula mencegah aktivitas radikal bebas yang
memperlambat proses inflamasi dengan berbagai mekanisme yang antara lain
dengan menstabilkan komponen dari radikal bebas tersebut. Reaktivitas yang tinggi
dari komponen hidroksil flavonoid mengakibatkan radikal bebas menjadi tidak aktif
sehingga aktivasi terhadap mediator inflamasi oleh radikal bebas dapat dihambat
(Indraswary, 2011).
Saponins. Saponin juga memiliki peranan khusus pada proses epitelisasi.
Saponin dapat meningkatkan fibronektin, kemudian gumpalan fibrin yang
terbentuk akan menjadi dasar dalam reepitelisasi pada jaringan. Maka dari itu bila
gumpalan fibrin cepat terbentuk, maka fibroblas akan segera berproliferasi ke area
luka untuk segera mengadakan pemulihan jaringan (Indraswary, 2011). Selain itu
saponin memiliki sifat antimikroba, sehingga infeksi dapat ditekan, karena luka
yang terinfeksi dapat menunda atau menghambat laju reepitelisasi (Robinson et
al.,1995). Saponin juga memiliki peran meningkatkan respon sel imun (Hoffmann,
2003). Hal ini juga dibuktikan oleh penelitian sebelumnya bahwa saponin memiliki
efek pada penyembuhan luka, dan terbukti dapat meningkatkan pembentukan
pembuluh darah (Morisaki et al., 1995).
Tannins. Tanin memiliki aktivitas antibakteri, secara garis besar
mekanisme yang diperkirakan adalah sebagai berikut : toksisitas tanin dapat

21
merusak membran sel bakteri, senyawa astringent tanin dapat menginduksi
pembentukan kompleks senyawa ikatan terhadap enzim atau subtrat mikroba dan
pembentukan suatu kompleks ikatan tanin terhadap ion logam yang dapat
menambah daya toksisitas tanin itu sendiri. Tanin diduga dapat mengkerutkan
dinding sel atau membran sel sehingga mengganggu permeabilitas sel itu sendiri.
Akibat terganggunya permeabilitas, sel tidak dapat melakukan aktivitas hidup
sehingga pertumbuhannya terhambat atau bahkan mati (Ajizah, 2004). Tanin juga
mempunyai daya antibakteri dengan cara mempresipitasi protein, karena diduga
tanin mempunyai efek yang sama dengan senyawa fenolik. Efek antibakteri tanin
antara lain melalui: reaksi dengan membran sel, inaktivasi enzim, dan destruksi atau
inaktivasi fungsi materi genetik (Masduki, 1996).
Fennol. Fennol Senyawa fenolik adalah salah satu kelompok yang paling
penting bertindak terminator radikal bebas dan antioksidan utama yang bersumber
dari tanaman. Pemberian senyawa fenol juga dapat meningkatkan migrasi fibroblast
dan aktivitas fibroblast dalam jaringan luka (Agar et al., 2015). Penelitian
sebelumnya mengungkapkan bahwa kandungan senyawa fenol yang tinggi pada
ekstrak tanaman A. kellalensis, A. biebersteinii, A. millefolium, dapat mempercepat
penyembuhan luka dengan meningkatkan produksi kolagen oleh sel fibroblast pada
berbagai jenis hewan coba, baik pada luka eksisi maupun luka insisi (Ghasemi et
al., 2009; Akkol et al., 2011). Telah banyak dilakukan penelitian yang mendapati
bahwa kandungan fenol yang tinggi pada bahan alam dapat mempercepat proses
penyembuhan luka karena aktivitas antioksidan dan scavenger radikal bebas dapat
menyediakan lingkungan yang fisiologis bagi proses penyembuhan luka itu sendiri
(Almeida et al., 2012).
Vitamin, mikronutrisi dan trace element. Vitamin C (asam ascorbic-L),
A (retinol) dan E (tocopherol) menunjukkan efek anti-inflamasi dan antioksidan.
Vitamin C banyak fungsinya dalam penyembuhan luka, dan defisiensi vitamin ini
mendatangkan berbagai efek terhadap perbaikan jaringan (Barbul,2005). Defisiensi
vitamin C menyebabkan terhambatnya penyembuhan, dan dikaitkan dengan
penurunan sintesis kolagen dan proliferasi fibroblast, penurunan angiogenesis, dan
peningkatan kekakuan pembuluh kapiler. Defisiensi vitamin C juga merusak respon
imun dan meningkatkan kerentanan terhadap luka infeksi (Campos et al., 2008).

22
Serupa dengan defisiensi vitamin A yang menyebabkan terhambatnya
penyembuhan luka. Property biologis vitamin A mencakup aktivitas anti oksidan,
peningkatan proliferasi fibroblast, modulasi proliferasi dan diferensiasi seluler,
peningkatan sintesis kolagen dan hyaluronate, penurunan MMP- mediated
extracellular matrix degradation (Barbul, 2005).
Vitamin E, sebuah antioksidan, mempertahankan dan menstabilkan
integritas membrane selular dengan memberikan proteksi terhadap rusaknya
oksidasi. Vitamin E juga berperan dalam anti-inflamasi dan menurunkan formasi
scar berlebih pada luka kronik. Experiemen pada hewan menunjukkan bahwa
suplemen vitamin E bermanfaat bagi penyembuhan luka (Barbul, 2005)., dan
vitamin E topical telah dipromosikan sebagai anti scar. Namun, studi klinis gagal
membuktikan manfat vitamin E dalam penyembuhan luka pada manusia. Seperti
disebutkan diatas, kebutuhan nutrisi luka bersifat kompleks, sehingga dukungan
nutrisi akan bermanfaat bagi penyembuhan luka kronik dan akut. Studi klinis
terbaru menguji efek suplemen protein yang diperkaya arginin, vitamin C, vitamin
E dan zinc terhadap luka tekan yang kronik dan terbukti bahwa suplemen nutrisi
berenergi tinggi ini memperbaiki penyembuhan (Heyman et al., 2008).
Kesimpulannya, protein, karbohidrat, arginin, glutamin, asam lemak
polyunsaturated, vitamin A, vitamin C, vitamin E, magnesium, copper, zinc, dan
besi berperan penting dalam penyembuhan luka dan defisiensi vitamin-vitamin
tersebut akan mempengaruhi penyembuhan. Studi lebih lanjut dibutuhkan untuk
lebih memahami bagaimana nutrisi mempengaruhi respon penyembuhan.

2.5 Tanaman Obat

Tumbuh-tumbuhan mempunyai kemampuan yang besar dalam mengobati
berbagai macam luka. Sejumlah besar tumbuh-tumbuhan digunakan oleh berbagai
suku bangsa di banyak negara untuk mengobati luka dan luka bakar. Bahan-bahan
alami ini dapat mengobati dan meregenerasi jaringan yang rusak dengan berbagai
mekanisme. Tanaman obat ini tidak hanya murah harganya dan mempunyai
kemampuan mengobati yang baik, tetapi juga aman (Thakur et al., 2011).
Menurut Nayak and Pereira (2006), keberadaan dari berbagai kandungan
utama dalam tumbuh-tumbuhan mendesak para ilmuwan untuk meneliti yang

23
berpengaruh pada penyembuhan luka. Kandungan obat yang bernilai pada tumbuh-
tumbuhan berupa kandungan bioactive phytochemical. Kandungan tersebut
meliputi berbagai macam unsur kimia seperti alkaloid, minyak esensial, flavonoids,
tannins, terpenoids, saponins, dan phenolic (Edeoga et al., 2005). Perlukaan pada
kulit rentan terjadi infeksi mikroba yang dapat berkembang menjadi sepsis pada
luka. Hal ini dapat terjadi karena daerah yang terluka merupakan media yang ideal
bagi berkembangnya organisme penyebab infeksi.
Pengobatan dengan topikal antibakteri merupakan salah satu cara terpenting
dalam perawatan luka. Ekstrak tanaman obat efektif menghentikan perdarahan dari
luka baru, menghambat pertumbuhan bakteri dan meningkatkan
penyembuhan luka (Okoli et al., 2007).

2.5.1 Deskripsi Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban)

Salah satu tumbuh-tumbuhan yang banyak dimanfaatkan oleh
masyarakat adalah pegagan, karena pegagan memiliki khasiat yang banyak
sehingga dapat digunakan sebagai obat tradisional. Obat tradisional adalah
bahan atau ramuan yang berasal dari tumbuhan, bahan hewan, bahan
mineral, sediaan galenik atau campuran dan bahan-bahan tersebut, yang
secara tradisional telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan
pengalaman (Zulkifli, 2008).
Obat tradisional pada saat ini banyak digunakan karena menurut
beberapa penelitian tidak terlalu menyebabkan efek samping, karena masih
bisa dicerna oleh tubuh. Beberapa perusahaan mengolah obat-obatan
tradisional yang dimodifikasi lebih lanjut. Bagian dari tumbuhan obat yang
bisa dimanfaatkan adalah akar, rimpang, batang, buah, daun dan bunga.
Bentuk obat tradisional yang banyak dijual dipasar dalam bentuk kapsul,
serbuk, cair, simplisia dan tablet. Selain itu obat tradisional mudah
dijangkau olah masyarakat dan baik harga maupun ketersediaanya (Zulkifli,
2008).

2.5.2 Morfologi Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban)

Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) merupakan tanaman liar

24
yang banyak tumbuh di perkebunan, ladang, tepi jalan, pematangan sawah
ataupun di ladang agak basah (Besung, 2009). Pegagan tumbuh merayap
menutupi tanah, tidak memiliki batang, tinggi tanaman antara 10 – 50 cm.
Pegagan memiliki daun satu helaian yang tersusun dalam roset akar dan
terdiri dari 2 – 10 helai daun. Daun berwarna hijau dan berbentuk seperti
kipas, buah berbentuk pinggang atau ginjal. Pegagan juga memiliki daun
yang permukaan dan punggungnya licin, tepinya agak melengkung ke atas,
bergerigi, dan kadang-kadang berambut, tulangnya berpusat di pangkal dan
tersebar ke ujung serta daunnya memiliki diameter 1-7 cm (Winarto, 2003).
Pegagan memiliki tangkai daun berbentuk seperti pelepah, agak
panjang dan berukuran 5 - 15 cm. Pada tangkai daun pegagan dipangkalnya
terdapat daun sisik yang sangat pendek, licin, tidak berbulu, berpadu dengan
tangkai daun. Pegagan memiliki bunga putih atau merah muda yang tersusun
dalam karangan yang berbentuk payung. Buah pegagan berbentuk lonjong
atau pipih, berbau harum dan rasanya pahit, panjang buah 2 – 2,5 mm. Buah
pegagan berdinding agak tebal, kulitnya keras, berlekuk dua, berusuk jelas,
dan berwarna kuning (Winarto, 2003).
Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) merupakan tumbuhan
berbiji tertutup dan berkeping dua. Merupakan tanaman herba yang
berpotensi dalam hal farmakologi (Dasuki, 1991). Pegagan memiliki akar
rimpang yang pendek serta mempunyai geragih (Savitri, 2006), akar
keluar dari buku dan berupa akar tunggang berwarna putih. Stolon
tumbuh dari system perakaran, memilki ukuran yang panjang dan tumbuh
menjalar . Pada setiap buku dari stolon akan tumbuh tunas yang akan
menjadi cikal bakal tumbuhan pegagan baru (Winarto, 2003).

25

4
 Gambar 2.3. Gambar tumbuhan pegagan . 1) Herba pegagan dengan
susunan daun dalam roset akar, 2) Tangkai daun dengan pangkal
menyerupai pelepah, 3) dan 4) Susunan tulang daun, 5) Bunga
(Winarto, 2003)

2.5.3 Klasifikasi Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban)

Menurut Winarto (2003) Berdasarkan pemaparan tentang pegagan
diatas maka klasifikasi dari pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) adalah
sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Divisio : Spermatophyta
Sub devisio : Angiospermae
Kelas : Dicotyledone
Ordo : Umbilales
Family : Umbilaferae (Apiaceae)
Genus : Centella
Spesies : Centella asiatica (L) Urban

2.5.4 Kandungan Bahan Aktif Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban)

Menurut Winarto (2003) pada pegagan (Centella asiatica (L.)
Urban) mengandung berbagai bahan aktif meliputi: 1) triterpenoid saponin,
2) triterpenoid genin, 3) minyak essensial, 4) flavonoid, 5) fitosterol, dan
bahan aktif lainnya. Kandungan bahan aktif yang terpenting dari beberapa

26
bahan aktif lainnya adalah triterpenoid saponin. Bahan aktif triterpenoid
saponin meliputi: 1) asiatikosida, 2) centellosida, 3) madekossida, 4) dan
asam asiatik.
Pegagan (Centella asiatica (L) Urban) yang banyak digunakan
sebagai obat alami mengandung berbagai bahan aktif, kandungan bahan
aktif itu adalah triterpenoid saponin. Bahan aktif triterpenoid saponin itu
meliputi asiatikosida, centellosida, madekossida, asam asiatik dan
komponen yang lain adalah minyak volatile, flavonoid, tannin, fitosterol,
asam amino dan karbohidrat. Bahan aktif triterpenoid saponin berfungsi
untuk meningkatkan aktivasi makrofag yang menyebabkan
meningkatnya fagositosis dan sekresi interleukin. Sekresi interleukin ini
akan memacu sel β untuk menghasilkan antibodi (Besung, 2009).
Bahan aktif asiatikosida dan madekossida mampu memperbaiki
kerusakan sel dan membentuk serat kolagen secara cepat, bahan aktif
tersebut juga mampu memperbaiki sel- sel granulosa pada ovarium. Selain
itu bahan aktif asiatikosida diketahui mempercepat penyembuhan luka
dengan jalan meningkatkan kandungan hidroksiplorin dan
mukopolisakarida yang merupakan bahan untuk mensintesis matriks
ekstra seluler. Asiatikosida dapat juga meningkatkan produksi antioksidan
baik dari golongan enzimatik dan non enzimatik ( Kusumawati, 2007).
Triterpenoid saponin pada pegagan (Centella asiatica (L.) Urban)
berfungsi untuk meningkatkan aktivasi makrofag. Bahan triterpenoid
saponin mampu memacu produksi kolagen I, yaitu protein pemacu proses
penyembuhan luka (Winarto, 2003). Asiatikosida mampu bekerja dalam
detoksifikasi pada hati dan merupakan marker dalam penentuan standar
baku pada pegagan (Centella asiatica (L.) Urban). Madekossida juga
berperan penting karena mampu memperbaiki kerusakan sel dengan
sintesis kolagen (Selfitri, 2008). Fibroblast sangat penting dalam
pembentukan serat kolagen, kolagen dibina atas protein dan merupakan
30% seluruh protein tubuh mamalia, oleh karena serat kolagen berperan
dalam penyembuhan luka atau kerusakan jaringan (Kusumawati, 2007).
Flavonoid adalah suatu kelompok yang termasuk ke dalam

27
senyawa fenol yang terbanyak di alam, senyawa-senyawa flavonoid ini
bertanggung jawab terhadap zat berwarna ungu, merah, biru dan sebagian
zat berwarna kuning dalam tumbuhan. Flavonoid dalam tumbuhan
mempunyai empat fungsi: 1) sebagai pigmen warna, 2) fungsi patologi, 3)
aktivasi farmakologi, 4) flavonoid dalam makanan (Handayani, 2005).
Fitosterol merupakan turunan senyawa sterol yang dahulu hanya
ditemukan pada hewan dalam bentuk kolesterol sebagai bahan baku
pembentuk hormon seks. Senyawa- senyawa fitosterol yang terdapat pada
tumbuhan antara lain: sitosterol, stimagsterol, dan kampesterol (Tisnajaya
dkk, 2005).

2.6. Amoxicillin
Farmakologi : Amoxicillin biasanya merupakan drug of choice pada
kelasnya karena lebih baik diabsorbsi pada pemberian oral dibandingkan dengan
antibiotik betalactam lainnya. Amoxicillin peka terhadap penurunan bakteri yang
memproduksi beta lactamase, dan kombinasi pemberian dengan clavulanic acid
dapat meningkatkan kepekaan.
Dosis : Untuk infeksi pada kulit yang ringan sampai sedang: dosis dewasa
adalah 250 – 500 mg setiap 8 jam, untuk infeksi pada kulit yang berat: dosis dewasa
adalah 500 – 875 mg setiap 8 jam.

2.7. Tikus putih (Rattus norvegicus)

Tikus putih (Rattus norvegicus) merupakan salah satu hewan percobaan
yang paling sering digunakan dalam penelitian penelitian oleh karena memiliki
struktur anatomi, fisiologi dan histologi organ yang secara sistematis hampir sama
dengan organ manusia. Selain itu, tikus putih lebih mudah didapatkan, lebih mudah
dipelihara, lebih cepat berkembang menjadi dewasa, tidak memperlihatkan
perkawinan musiman dan umumnya lebih mudah berkembang biak.Tikus termasuk
hewan mamalia, oleh sebab itu dampaknya terhadap suatu perlakuan mungkin tidak
jauh berbeda dibanding dengan mamalia lainnya (Gunter et al., 2002). Klasifikasi
tikus putih adalah sebagai berikut:
a. Kingdom : Animalia;
b. Filum : Chordata;

28
 c. Kelas : Mamalia;
d. Ordo : Rodentia;
e. Famili : Muridae;
f. Genus : Rattus;
g. Spesies : Rattus norvegicus.

Tikus dan manusia mempunyai jumlah gen pengkode protein yang sama,
yaitu sekitar 30.000, dengan tingkat kemiripan sebesar 99%. Dalam sebuah
penelitian oleh Dermitzakis yang langsung membandingkan urutan kromosom 21
pada manusia dengan kromosom pada tikus, didapatkan bahwa bahkan daerah
kromosom yang miskin gen menunjukkan kesamaan yang luas antara dua
organisme ini (Gunter et al., 2002).
Umumnya berat tikus laboratorium lebih ringan dibandingkan berat tikus
liar. Biasanya pada umur empat minggu beratnya 35-40 gram, dan berat dewasa
pada umur lima sampai enam bulan rata-rata adalah 200-250 gram. Tikus jantan tua
dapat mencapai 500 gram tetapi tikus betina jarang lebih dari 350 gram. Dalam
penelitian ini digunakan galur Wistar yaitu turunan galur albino dengan ciri-ciri
berwarna putih, berkepala lebar, telinga panjang dan ekornya lebih pendek daripada
badannya. (Gunter et al., 2002).

2.7.1 Penyembuhan luka pada tikus putih

Tikus putih dan manusia mempunyai tingkat homologi yang tinggi.
Sehingga dalam proses perbaikan luka,tikus putih memiliki fase-fase perbaikan
luka yang sama dengan manusia, dengan aktivitas mediator yang juga sama (Sheid
et al., 2000). Pada suatu penelitian menggunakan tikus putih, dilaporkan bahwa tiga
hari setelah perlukaan, luka pada tikus putih sudah mulai mengalami pembentukan
jaringan granulasi yang diikuti dengan reepitelisasi sehingga membuktikan fase
perbaikan luka terjadi secara tumpang tindih. Fibroplasia pada luka juga meningkat
pada hari ke lima sampai ke tujuh.

2.8. Kerangka Berpikir

Proses penuaan berhubungan dengan perubahan yang terjadi secara terus
menerus pada semua jaringan semua, termasuk jaringan kulit. Kulit dapat
mengalami penuaan oleh karena faktor intrinsik dan diperberat oleh faktor
ekstrinsik. Kulit sebagai organ tubuh yang letaknya paling luar dan berfungsi

29
sebagai barrier tubuh, ia mudah mengalami luka. Penyembuhan luka adalah suatu
hal yang esensial untuk pengembalian kontinuitas suatu jaringan yang terputus dan
pengembalian status fungsional kulit yang terganggu. Penyembuhan luka
melibatkan interaksi yang kontinu antara sel-sel dan sel-matriks yang terlihat dalam
4 fase penyembuhan luka yang saling tumpang tindih, yaitu fase koagulasi, fase
inflamasi, fase proliferasi - migrasi dan fase remodeling.
Perawatan terbaik dan optimal dalam penanganan luka terbuka adalah
dengan menggunakan bahan-bahan dan metode yang dapat mempercepat kontraksi
luka, mencegah terbentuknya jaringan granulasi yang berlebihan, mencegah
pertumbuhan bakteri, mampu mempertahankan pH normal dan sebagai pelembab
yang sesuai untuk mempercepat penutupan luka. Beragam bentuk gangguan
kesembuhan luka membuat peneliti di seluruh dunia berusaha untuk menemukan
bahan-bahan atau formula obat yang dapat membantu mempercepat proses
kesembuhan luka. Saat ini penggunaan bahan herbal untuk pengganti obat-obat
kimia telah banyak dilakukan, dan diistilahkan dengan fitofarmaka.
Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) merupakan tumbuhan berbiji
tertutup dan berkeping dua. Merupakan tanaman herba yang berpotensi dalam hal
farmakologi (Dasuki, 1991). Berdasarkan hasil skrining fitokimia Pegagan,
menunjukan bahwa pegagan mengandung flavonoid, tannin dan saponin. Ini
membuktikan pegagan mengandung senyawa aktif metabolit sekunder. Salah satu
kandungan penting yang dimiliki pegagan yang dapat mempercepat tahap inflamasi
adalah tannin. Tannin memiliki efek vasokonstriktor pada pembuluh darah kecil
superfisial. Dengan membatasi kehilangan cairan dan mencegah agregasi eksternal,
maka regenerasi jaringan dapat ditingkatkan.
Selain itu, ketika tannin berkontak dengan membran mukosa maka tannin
akan bereaksi dan berikatan silang dengan protein pada sel mukus dan epitel dari
mukosa, sehingga mukosa akan berikatan lebih kuat dan dibuat kurang permiabel.
Proses ini disebut sebagai astrigensia. Astringensia meningkatkan pertahanan
terhadap lapisan dibawah mukosa dari mikroorganisme dan iritan kimia.

2.9. Konsep Penelitian

Berdasarkan perumusan masalah dan kajian pustaka maka disusun
kerangka konsep sebagai berikut:

30
Faktor Internal: Gel ekstrak daun pegagan Faktor Eksternal:
- Usia - Infeksi
- Anemia - Luas luka
- Diabetes Mellitus - Penyakit
- Antioksidan
Luka pada tikus tua jantan:
- Neovaskularisasi
- Jumlah fibroblas
- Epitelisasi

: Yang diteliti
: Yang tidak diteliti

Gambar 2.4. Konsep Penelitian

2.10. Hipotesis Penelitian

Berdasarkan kerangka berpikir dan konsep, maka hipotesis yang dapat
diajukan adalah:
a. Pemberian gel ekstrak daun pegagan pada jaringan luka tikus tua jantan
meningkatkan neovaskularisasi.
b. Pemberian gel ekstrak daun pegagan pada jaringan luka tikus tua jantan
meningkatkan jumlah fibroblas.
c. Pemberian gel ekstrak daun pegagan pada jaringan luka tikus tua jantan
meningkatkan epitelisasi.

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1. Rancangan penelitian

Rancangan penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah
rancangan penelitian eksperimental Post test Only Control Group Design karena
populasi dianggap homogen. Skema rancangan penelitian sebagai berikut:

31
 Gambar 3.1. Rancangan Penelitian
Keterangan:
P = Populasi
S = Sampel
R = Random
O1 = Observasi jumlah fibroblas dan neovaskularisasi hari ke-4
kelompok kontrol
O2 = Observasi jumlah fibroblas dan neovaskularisasi hari ke-4
Kelompok perlakuan
O3 = Observasi epitelisasi hari ke-8 kelompok kontrol
O4 = Observasi epitelisasi hari ke-8 Kelompok perlakuan
P0 = kontrol (gel basis + antibiotik oral)
P1 = Perlakuan (gel ekstrak daun pegagan 20%+ antibiotik oral).

Takaran konversi dosis untuk manusia dengan berat badan (BB) 70 kg

pada tikus dengan BB 200 gram menurut tabel konversi Laurence (2008) adalah
0,018, sehingga perhitungan dosis sebagai berikut :
Dosis amoksilin sebagai profilaksis untuk pencegahan infeksi sekunder.
Dosis konversi adalah 70/50 bb x 1500 mg amoksilin x 0,0315 (untuk 350 gr tikus)
= 66,15 mg per hari.
66,15 : 3 = 22,05 mg / kali (untuk 350 gr tikus)

3.2. Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Fakultas Kedokteran Universitas
Prima Indonesia. Penelitian dilakukan selama 15 hari. Pemeriksaan histologi untuk
penghitungan jumlah fibroblas dan neovaskularisasi dilakukan pada hari ke 4 dan
pengukuran epitelisasi jaringan pada hari 8 dilaksanakan di Laboratorium Histologi
di Fakultas Kedokteran Universitas Prima Indonesia.

32
3.3. Populasi dan Sampel
3.3.1 Variabilitas populasi
Populasi pada penelitian adalah tikus putih yang sesuai dengan sampel
yang telah ditentukan dalam penelitian

3.3.2 Kriteria subyek

Sampel dalam penelitian ini adalah tikus putih (Rattus norvegicus)
dewasa, yang memenuhi kriteria inklusi dan kriteria eksklusi sebagai berikut:
Kriteria Inklusi:
a. Tikus putih (Rattus norvegicus) jantan dan sehat.
b. Umur 24 bulan karena umur tikus24 bulan memiliki persamaan dengan
manusia usia tua dan sudah mengalami proses penuaan intrinsik.
c. Berat 350-550 gram (Sheid, 2000).
Kriteria Eklusi: Tikus putih tidak mau makan.
Kriteria Drop Out: Tikus putih mati pada saat penelitian.

3.3.3 Besaran Sampel

Penelitian ini digunakan tikus sampel yang diperlukan dalam penelitian ini
berdasarkan rumus Federer (2011).
Rumus : ( n-1)(k-1) ≥ 15
n = jumlah sampel (mewakili pengulangan perlakuan pada kelompok sampel)
k = jumlah kelompok perlakuan (kelompok perlakuan yang akan diberikan adalah
2 macam) sehingga didapatkan hasil: (n-1)(2-1) ≥ 15 n= 16, jadi jumlah sampel
per kelompok minimal 16. Pada penelitian ini, peneliti menggunakan jumlah
sampel per kelompok 18 ekor tikus. Jumlah sampel keseluruhan 36 tikus.

3.3.4 Teknik penentuan sampel

Teknik penentuan sampel penelitian dilakukan dengan cara berikut :
a. Dari populasi tikus putih (Rattus norvegicus) diadakan pemilihan sampel
berdasarkan kriteria inklusi.
b. Dari sampel yang telah memenuhi syarat diambil secara random untuk
mendapatkan jumlah sampel.

33
 c. Dari sampel yang telah dipilih kemudian dibagi menjadi dua kelompok secara
random yaitu kelompok kontrol gel basis dan kelompok gel ekstrak daun
pegagan.

3.4. Variabel Penelitian

3.4.1 Klasifikasi variabel
a. Variabel bebas adalah pengolesan gel ekstrak daun pegagan dan pengolesan
gel basis.
b. Variabel tergantung adalah variabel yang merupakan hasil perlakuan
variabel bebas yaitu fibroblas, neovaskularisasi, dan epitelisasi.
c. Variabel kendali adalah variabel yang dapat dikendalikan antara lain jenis
tikus, umur, sehat, jenis kelamin yang sama, berat badan, tempat luka yang
sama, makanan dan minuman, temperatur.

3.4.2 Hubungan Antar Variabel

Variabel bebas: gel Variabel tergantung:

ekstrak daun - Fibroblas
pegagan - Epitelisasi
- Neovaskularisasi

Variabel kendali:
- Umur tiikus
- Jenis tikus
- Jenis kelamin
- Bobot badan
- Makanan34 dan
minuman
- Temperatur
 Gambar 3.2. Alur Hubungan Antar Variabel

3.5.1 Definisi Operasional Variabel

1. Variabel bebas
a. Gel ekstrak daun pegagan adalah sediaan gel dengan formulasi tertentu
(viskolam, propilenglikol, gliserin, TEA, DMDM hydantoin, aquadest)
ditambah ekstrak maserasi bertingkat daun pegagan (pelarut etanol 96%
dan etil asetat) dengan konsentrasi 20%, diaplikasikan sebanyak 3 kali
sehari.
b. Gel basis adalah sediaan gel dasar (viskolam, propilenglikol, gliserin,
TEA, DMDM hydantoin, aquadest) tanpa penambahan zat aktif,
diaplikasikan tiga kali sehari setiap hari untuk kelompok kontrol.
2. Variabel tergantung
a. Luka adalah hilang atau rusaknya sebagian jaringan tubuh. Keadaan ini
dapat disebabkan oleh trauma benda tajam atau tumpul, perbahan suhu,
zat kimia, ledakan, sengatan listrik, atau gigitan hewan (Sjamsuhidajat
dan Jong, 2005).Tikus wistar yang sehat dilukai kulit punggungnya
dengan mengambil kulit full thickness berdiameter 0,5 cm pada
punggungnya kemudian dioleskan dengan gel ekstrak daun pegagan.
Pengambilan kulit full thickness adalah pengambilan kulit dari lapisan
epidermis sampai dengan dermis (Falanga, 2007).
b. Amoksilin pada penelitian ini dipakai sebagai profilaksis untuk
pencegahan infeksi sekunder. Sebagai profilaksis amoksilin diberikan
selama 1 hari dengan dosis amoksilin per oral 22,05mg sebanyak 3 kali
sehari.
c. Neovaskularisasi adalah pertumbuhan kapiler baru pada daerah luka
Neovaskularisasi diperiksa pada hari ke 4 karena neovaskularisasi
puncaknya pada hari ke 3-5 setelah terjadinya luka. Pada pewarnaan HE,

35
 neovaskularisasi dapat diamati berupa endotelial berlumen dengan tunika
intima yang sangat tipis (±500 mikro meter). Dihitung jumlah
percabangan baru pada jaringan luka pada 5 lapang pandang dengan
menggunakan mikroskop binokuler pembesaran objektif 40x. Adanya
peningkatan regenerasi jaringan luka, dilihat dari perbedaan jumlah
neovaskularisasi secara signifikan dibandingkan dengan kontrol.
d. Fibroblas adalah sel-sel yang berbentuk fusiformis diantara
serabutserabut jaringan ikat yang berpengaruh dalam proses
penyembuhan luka. Fibroblas yang dilihat pada hari ke-4 karena
fibroblas akan mencapai jumlah puncaknya pada hari ke 3-5. Dihitung
jumlahnya dari 5 lapangan pandang rata-rata jumlah sel per lapangan
pandang dengan menggunakan mikroskop binokuler pembesaran
objektif 40x. Adanya peningkatan regenerasi jaringan luka, dilihat dari
perbedaan jumlah fibroblas secara signifikan dibandingkan dengan
kontrol.
e. Epitelisasi adalah Fase penyembuhan luka, adanya migrasi keratinosit,
diikuti dengan proliferasi keratinosit, diferensiasi neoepitel menjadi
epitel berlapis-lapis. Pemeriksaan epitelisasi pada hari ke 8 dilihat adanya
peningkatan regenerasi jaringan luka, Dihitung tingkat kerapatannya dari
5 lapangan pandang dengan menggunakan metoda morfometri,
satuannya mikrometer. Ketebalan epitel adalah ukuran ketebalan lapisan-
lapisan epidermis yang terbentuk pada daerah luka diukur dengan
mikroskop binokuler pada perbesaran 40x dengan metode
histomorfometri.
3. Variabel terkendali
a. Kondisi tikus : jantan, tua ,umur 24 bulan dan berat badan 250-300
gram.
b. Kualitas-kuantitas kandang adalah kandang pemeliharaan dengan atap
dari kawat,dilengkapi dengan tempat makanan-minuman dan
disediakan satu kandang untuk setiap tikusnya.
c. Kualitas-kuantitas makanan berupa konsentrat makanan ayam dan
minuman yang diberikan secara tidak terbatas (ad libitum).

36
 d. Suhu ruangan dipertahankan 20-25˚C.
e. Kelembaban dan pertukaran udara yang ekstrim harus dihindari. Aliran
udara dalam ruang harus lemah dan mantap (ruang berventilasi baik
dengan penyinaran normal).
f. Penempatan tikus setelah dilukai : tiap kandang hanya dihuni oleh 1
tikus,

3.5. Bahan, Instrumen Penelitian

3.5.1 Bahan penelitian
a. Makanan ternak standar
b. Gel basis
c. Amoksilin tablet
d. Ketamin 50 mg/kg bb
e. Neutral buffer formalin 10%
f. Bahan-bahan untuk sediaan histopatologi: Mayer’s Hematoxylin, larutan
eosin, xylol, alkohol dengan konsentrasi bertingkat (70%, 80%, 90%, 95%,
100%), larutan lithium carbonat, akuades, parafin.
g. Ektrak daun pegagan 20% (Foeniculum vulgare) didapatkan dari daun
pegagan lokal yang diekstrak dengan metode maserasi.

3.5.2. Pembuatan bahan ekstrak dari simplisia

1. Dipilih dan dikumpulkan daun pegagan yang masih segar tidak terlalu tua
atau muda. Daun pegagan diambil dari kebun tanaman obat Balai Penelitian
Tanaman Rempah dan Obat (Balitro) Departemen Pertanian Bogor.
Kemudian daun pegagan dicuci bersih dengan air.
2. Dikeringkan dengan menggunakan oven.
3. Dibuat ekstraksi secara maserasi bertingkat dengan menggunakan pelarut
etanol 96% dan etil asetat, yaitu suatu proses penyarian dengan cara
merendam simplisia pada suhu kamar dengan menggunakan pelarut etanol
96%, direndam selama 3 hari sambil diaduk atau dikocok, disimpan dalam

37
 botol berwarna gelap, dilakukan ekstraksi 3 kali. Setelah terbentuk filtrat
etanol, kemudian residu yang merupakan fraksi air dimaserasi lagi dengan
menggunakan pelarut etil asetat sehingga terbentuk filtrat etil asetat. Proses
selanjutnya, maseratnya dibebaskan dari pelarut dengan menguapkan secara
in vacuo dengan rotary evaporator, sehingga hasil akhir terbentuk ekstrak
berbentuk pasta.

3.5.2.1 Pembuatan bahan dasar gel

Bahan dasar gel, dibuat dengan formulasi sebagai berikut:
Pembuatan basis gel dilakukan dengan cara mencampurkan viskolam dan
sebagian air terlebih dahulu menggunakan alat Magnetic stirrer, kemudian
ditambahkan gliserin dan propilengglikol, dan DMDM hydantoin. Untuk
mendapatkan sediaan gel dengan homogenitas yang baik maka dilakukan
pengadukan dengan perlahan dan di tambahkan secara kontinyu. Untuk
mendapatkan derajat keasaman yang diinginkan maka harus ditambahkan TEA
secara perlahan sampai didapatkan derajat keasaman yang diinginkan.

Tabel 3.1. Formulasi Gel Basis

38
3.5.2.2 Pembuatan gel ekstrak daun pegagan
Gel ekstrak daun pegagan dibuat dengan cara memasukkan ekstrak daun
pegagan sebanyak 20 gram ke dalam lumpang dan ditambahkan basis gel sebanyak
80 gram sehingga total gel menjadi 100 gram. Ekstrak daun pegagan dimasukkan
sedikit demi sedikit kemudian digerus hingga homogen. Lalu masing-masing
formula disimpan dalam wadah gel.

3.5.3. Instrumen penelitian

Instrumen yang digunakan adalah kandang tikus individual, alat fiksasi
tikus, alat pencukur, pump biopsi dengan diameter 0,5 cm, timbangan merk Tanita
dan mistar, buku dan alat pencatatan data, alat-alat untuk pembuatan preparat,
mikroskop Olympus CX-21 Japan, video mikrometer FDR-A IV-560.

3.6.5.3 Hewan percobaan

Untuk penelitian ini digunakan tikus tua jantan galur wistar, usia 24 bulan
dan berat ± 350-500gram.

3.6. ProsedurPenelitian
3.6.1. Sebelum Penelitian
1. Tiga puluh enam ekor tikus putih galur wistar jantan tua yang sehat, umur 24
bulan, dengan berat ±300-500 gram diletakkan dalam kandang, masing-masing
kandang berisi satu ekor tikus.
2. Kandang terbuat dari wadah plastik berukuran 23 cm x 17 cm x 9,5 cm dengan
alas sekam padi dan tutup dari anyaman kawat yang kuat, tahan gigitan, tidak
mudah rusak sehingga hewan tidak mudah lepas.
3. Kandang diberi lampu, ditempatkan pada ruangan dengan ventilasi baik, cukup
cahaya, tenang, tidak bising, suhu diatur pada suhu kamar sekitar 25 0C dengan
kelembaban berkisar 50%. Kandang dibersihkan 3 hari sekali.
4. Tikus diadaptasikan selama 7 hari dan diberi diet standar dengan menggunakan
makanan merk HPS 511 dan air biasa untuk minum. Pemberian makanan dan
minuman secara ad libitum.

39
3.6.2. Pelaksanaan penelitian
1. Sebanyak 36 ekor tikus diadaptasi selama 1 minggu. Secara random tikus dibagi
menjadi 2 kelompok, yaitu sebagai kelompok kontrol dan kelompok perlakuan.
2. Semua tikus dicukur bulu punggungnya. Dan dilakukan biopsi dengan
disposable punch biopsy 6 mm, sehingga didapatkan full thickness wound pada
kelompok gel basis dan gel ekstrak daun pegagan.
3. Setelah dibuat luka, pada kelompok kontrol diberikan bahan dasar gel setiap
hari, sedangkan pada kelompok perlakuan diberikan gel ekstrak daun pegagan
setiap hari.
4. Semua tikus diberikan antibiotik amoksisilin secara oral. Dosis pemberian
antibiotik oral amoksilin mengacu pada dosis amoksisilin bagi manusia yaitu
Pemberian gel dilakukan setiap hari, gel basis untuk kelompok kontrol dan gel
ekstrak daun pegagan untuk kelompok perlakuan. Gel dioleskan langsung pada
luka secara rata. Setelah itu luka ditutup dengan kasa steril dan plester.
5. Pada hari keempat 9 tikus dari kelompok kontrol dan 9 tikus dari kelompok
daun pegagan dibius, untuk diambil sampel dari jaringan luka. Setelah itu semua
tikus dibunuh dan dikuburkan dengan baik karena tidak dapat dipakai lagi untuk
penelitian lainnya.
6. Pada hari kedelapan semua tikus dibius, untuk diambil sampel dari jaringan
luka. Setelah itu semua tikus dibius dan dikuburkan dengan baik karena tidak
dapat dipakai lagi untuk penelitian lainnya.

3.6.3. Setelah Penelitian

Tikus-tikus penelitian setelah dieutanasia segera langsung dikubur dengan
baik.

3.6.4. Pengambilan kulit

Pengambilan kulit dilakukan setelah tikus sebelumnya dieuthanasi dengan
menggunakan ketamin. Daerah punggung yang akan diambil kulitnya dibersihkan
dari bulu, kulit digunting dengan ketebalan ± 3 mm sampai dengan subkutan dan
diameter 1 cm. Kulit yang diperoleh kemudian difiksasi dengan larutan neutral
buffer formalin 10% dibiarkan pada suhu kamar selama ± 48 jam.

40
3.6.5. Pembuatan preparat histologi
3.6.5.1 Fiksasi Pembuatan Preparat Histologi
a. Fiksasi
Sediaan kulit dimasukkan ke dalam kantong plastik berisi larutan Natural
Buffer Formalin 10%. Fiksasi dilakukan selama 2 x 24 jam.
b. Penipisan (Trimming)
Sediaan kulit dipotong lebih tipis (tidak lebih dari 2,5 mm) dengan
menggunakan razor blade. Penipisan dilakukan dalam sekali gerakan
memotong. Daerah yang diambil adalah luka pada bagian tengah dengan tetap
menyertakan bagian epidermis sampai subkutan. Bagian luka dimasukkan ke
dalam kaset. Tiap kaset berisi 3 sampel.
c. Dehidrasi
Sediaan kulit kemudian dimasukkan ke dalam gelas berturut-turut berisi alkohol
70% selama 2 jam, alkohol 80% selama 2 jam, alkohol 90% selama 2 jam,
alkohol 95% I selama 2 jam dan alkohol 95% II selama 2 jam kemudian
dimasukkan kedalam alkohol 100% I selama 2 jam dan alkohol 100% II selama
2 jam.
d. Penjernihan (Clearing)
Sediaan kulit dimasukkan ke dalam xylol dengan 2 kali pergantian masing-
masing selama 2 jam.
e. Pencetakan (Embedding)
Sediaan dimasukkan ke dalam alat pencetak yang berisi parafin setengah
volume dan sediaan diletakkan ke arah vertikal dan horizontal sehingga
potongan melintang melekat pada dasar parafin. Setelah mulai membeku,
parafin ditambahkan sampai pencetak penuh dan didiamkan kembali sampai
mengeras. Setelah mengeras alat pencetak dapat dilepaskan, blok-blok parafin
dimasukkan ke dalam lemari es.
f. Pengirisan dengan mikrotom
Sediaan diiris menggunakan mikrotom setebal 5 mikron. Hasil potongan
dimasukkan ke dalam air hangat untuk meregangkan jaringan yang keriput pada
suhu 450C. Sediaan diangkat dari permukaan air dengan menggunakan gelas
objek yang diletakkan di atasnya. Preparat ini didinginkan sebentar supaya

41
 kering, lalu diberi tanda dan disimpan dalam inkubator temperatur 600 C
minimal 2 jam.

3.6.5.2 Pewarnaan
Sediaan diwarnai dengan pewarnaan umum Hemotoxylin Eosin (HE)
untuk melihat neovaskularisasi, epitelisasi, dan sel fibroblas.
Pewarnaan HE
Sediaan yang akan diwarnai HE dimasukkan ke dalam xylol I dan xylol II,
masing-masing untuk melarutkan parafin selama 2 menit. Berikutnya dilakukan
rehidrasi dimana sediaan secara berturut-turut dimasukkan ke dalam alkohol
bertingkat dimulai dari alkohol 100% selama 2 menit, alkohol 95% dan alkohol
80% masing-masing 1 menit.Selanjutnya sediaan dicuci dengan air kran selama 1
menit setelah itu dimasukkan ke dalam larutan Mayer’s Hematoxylin selama 8
menit lalu sediaan dicuci dengan air kran selama 30 detik. Selanjutnya dimasukkan
ke dalam larutan Lithium Carbonat selama 15-30 detik dan dicuci dengan air kran
selama 30 detik. Setelah itu sediaan dimasukkan ke dalam larutan Eosin selama 2-
3 menit dan dicuci lagi dengan air kran selama 30-60 detik. Sediaan yang telah
dicuci kemudian didehirasi dengan mencelupkannya ke dalam alkohol 95%
sebanyak 10 celupan, alkohol 100% yang pertama sebanyak 10 celupan dan alkohol
100 % yang kedua selama 2 menit. Langkah terakhir adalah sediaan dimasukkan ke
dalam larutan Xylol selama 1 menit dan dimasukkan ke dalam larutan Xylol yang
kedua selama 2 menit.

3.6.5.3. Penutup sediaan

Preparat dikeringkan terlebih dahulu sebelum ditutup. Setelah itu ditetesi
dengan menggunakan canada balsam sebelum ditutup menggunakan gelas penutup.
Canada balsam digunakan untuk merekatkan objek dengan slide dan gelas penutup.
Tunggu sampai preparat kering dan diberikan label. Label dituliskan : nama spesies,
nama organ / jaringan, potongan melintang / membujur, pewarnaan yang
digunakan, tanggal pembuatan. Kemudian preparat dapat disimpan atau diamati.

42
 3.7. Pengamatan histologi
Pengamatan histologi dilakukan pada sampel kulit yang telah diambil pada
hari ke-4 dan hari ke-8. Parameter yang diamati pada pemeriksaan histopatologi
adalah jumlah neovaskularisasi, ketebalan epitelisasi, dan menghitung jumlah
fibroblas dengan preparat yang digunakan adalah preparat yang telah diwarnai
dengan pewarnaan HE.
a. Pengamatan fibroblas secara histologi
Jumlah fibroblas dihitung dengan menggunakan mikroskop binokuler
(Olympus CX-21 Japan) dengan pembesaran objektif 40x. Pemotretan
dilakukan menggunakan video photo dengan tiga kali pengulangan.
b. Pengamatan neovaskularisasi secara histologi.
Jumlah neovaskularisasi dihitung dengan menggunakan mikroskop binokuler
(Olympus CX-21 Japan) dengan pembesaran objektif 40x. Pemotretan
menggunakan video photo dengan tiga kali pengulangan.
c. Pengamatan epitelisasi secara histologi
Pengukuran kerapatan epitel dengan mengukur tebal epitel menggunakan
metode histomorfometri dan satuannya mikrometer dengan memakai
mikrofotograf.

3.8. Alur Penelitian

Semua tikus dibuat luka yang sama dengan disposable punch biopsy 6 mm,
kemudian dibagi 2 kelompok secara acak

Kelompok kontrol 18 tikus Kelompok perlakuan 18 tikus

Kelompok kontrol: Kelompok gel ekstrak:

- Diberikan gel basis 1x/hari - Diberikan krim ekstrak 3x/hari
- Diberi oral amoxicilin 3x/hari - Diberi oral amoxicilin 3x/hari
selama 1 hari selama 1 hari

Tikus kelompok kontrol dan kelompok gel esktrak masing-masing diambil 9

ekor dibius dan diambil jaringan luka pada hari ke-4

43
 Sisa tikus kelompok kontrol 9 ekor dan kelompok gel ekstrak 9 ekor

Kelompok kontrol: Kelompok gel ekstrak:

- Diberikan gel basis 1x/hari - Diberikan gel ekstrak 3x/hari

Sisa tikus kelompok kontrol dan kelompok gel ekstrak dibius dan diambil
jaringan luka pada hari ke-7

Dinilai neovaskularisasi, jumlah fibroblas dan re-epitelisasi

Gambar 3.3. Alur Penelitian

3.9. Analisis data

Dalam penelitian ini seluruh hasil data dianalisis dengan menggunakan
Program SPSS versi 17.0, Analisis data meliputi :
1. Analisis deskriptif.
2. Analisis normalitas dengan Uji Shapiro-Wilk karena sampel berjumlah lebih
kecil dari 30 perkelompok dan data berdistribusi normal (p>0,05).
3. Uji homogenitas varians dengan Levene’s test yaitu varian data dinyatakan
homogen (p>0,05)
4. Analisis komparasi.
Pada penelitian ini Untuk membandingkan rerata parameter dua kelompok
perlakuan ini, pada data yang berdistribusi normal dan homogen digunakan uji
statistik parametrik dengan uji t independent. Pada data yang distribusinya tidak
normal atau tidak homogen digunakan uji Mann-Whitney U.

44
 DAFTAR PUSTAKA

Adams, C.A., Biffl, W.L., Cioffi, W.G. 2008. Wounds, Bites, and Stings. In:
feliciano, D.V., Mattox K.L., Moore E.E., editors. Trauma. 7th. Ed. New
York: McGraw-Hill. p. 1029-1048.
Agarwal, R., Gupta, S.K., S.S. Agarwal, S. Srivastava, R. 2008. Saxena
Oculohypotensive effects of Foeniculum vulgare in experimental models of
glaucoma Indian J. Physiol. Pharmacol. 52: 77–83
Ajizah, A. 2004, Sensitivitas Salmonella Typhimurium Terhadap Ekstrak Daun
Psidium Guajava L.Bioscientiae. 1(1) : 31-8.
Akkol, E.K., Koca, U., Pesin, I., Demet, Y., (2009). Evaluation of the Wound
Healing Potential of Achillea biebersteinii Afan. (Asteraceae) by in vivo
Excision and Incision Models. eCAM; doi:10.1093/ecam/ne p.039.
Anonim. 2009. Introduction to Wound Healing. London Health Sciences Centre.
Available at: www.ihscon.ca/Health Professionals/Wound Care/intro
/sructur.htm.

45
Ashcroft, G.S., Mills, S.J., and Ashworth, J.J. 2002. Ageing and Wound Healing.
Biogerontology, 3(6):337-345
Barbul, A. 2005. Wound Healing. In: Brunicardi,F.C., Anderson,D.K., Billir,T.R.,
Dunn,D.L., Hunter,J.G., Pollock,R.E., editors. Schwartz’s Principles of
Surgery. 8th. Ed. New York: McGraw-Hill. p.223-246.
Besung, Kerta nengah I. 2009. Pegagan (Centella aisatica) Sebagai Alternative
Pencegahan Infeksi Pada Ternak. Jurnal Penelitian vol.2. no 1 26
agustus 2009. Bali : Universitas Udayana
Broughton, II.G., Janis, J.E dan Attiger,C.E. 2006. Wound healing: an overview.
Plastic and Reconstructive Surgery. 117 (suppl) : 1 eS-32Es
Campos, A.C., Groth, A.K., Branco, A.B. 2008. Assessment and nutritional aspects
of wound healing. Curr Opin Clin Nutr Metab Care. 11:281-288.
Dasuki, Undang Ahmad. 1991. Sistematika Tumbuhan Tinggi. Bandung: ITB
Evitaphani, Progestip Juwita. 2009. Kontrasepsi Oral Tipe Minipil
http://koempoels.com/showthread.php?429-Kontrasepsi-Oral-Tipe-
Minipil-efektif- kah.
Diegelmann, R.F,and Evans, M.C. 2004. Wound healing: an Overview of Acute,
Fibrotic and Delayed Healing.Frontiers in Bioscience, 9:283-289
Edeoga, H.O., Okwu, D.E., Mbaebie, B.O. 2005. Phytochemical constituents of
some Nigerian medicinal plants. African Journal of Biotechnology. 4(7):
685-688.
Falanga, V.2001. Introducing the concept of wound bed preparation. Int Forum
Wound Care;16(Suppl.1):1- 4
Federer, W.T. 2011. Statistical Design and Analysis for Intercropping
Experiments.Volume 1, Two Crops. Springer Series in Statistics, Springer
– Verlag, Berlin
Fowler, E. 2000. Chronic Wounds: an Overview. In: Krasner D, editor. Chronic
Wound Care: A Clinical Sourcebook for Healthcare Professional
Pennsylvania: Health Management Publications Inc.
Ghasemi-mobarakeh,L., Prabhakaran, M.P., Morshed,M., Nasr-Esfahani, M. H.
And Ramakhrisna, S. 2009., Electrical stimulation of nerve cells using
conductive nano fibrous scaffolds for nerve tissu engineering. Tissue
Engineering Part A, 15(11), 3605-19.
Gilliver, S.C., Ashworth, J.J., Ashcroft, G.S. 2007. The hormonal regulation of
cutaneous wound healing. Clin Dermatol. 25(1):56-62.
Gist, S., Tio-Matos, I., Falzgraf, S., Cameron, S., and Beebe., M. 2009. Wound care
in the geriatric client. Clinical Interventions in Aging, 4:269-287
Gurtner, G.C. 2007. Wound Healing: Normal and Abnormal. In: Thorne, C.H.,
Beasley,R.W., Aston, S.J., Barlett,S.J., Gurtner, G.c, Spear, S.L., editors.
Grabb dan Smith’sPlastic surgery. 6th. Ed. Philadelphia: Lippincott
William dan Wilkin. p. 15-22.
Handayani, Sri. 2005. Analisa Dan Khasiat Daun Salam. Karya Ilmiah. Padang
: Jurusan Kimia Universitas Negeri Padang
Hardman, M.J., and Ashcroft, G.S. 2008. Estrogen, not intrinsic aging, is the major
regulator of delayed human wound healing in the elderly. Genome Biology.
2008;9(5):R80. doi:10.1186/gb-2008-9-5-r80.

46
Heyman, H., Van De Looverbosch, D.E., Meijer, E.P., and Schols, J.M. 2008.
Benefits of an oral nutritional supplement on pressure ulcer healing in long
term care residents. J Wound Care. 17:476-478.480.
Hofmann, R.W., Swinny, E.E., Bloor, S.J., Markham, K.R., Ryan, K.G., Campbell,
B.D., Jordan, B.R., Fountain, D.W. 2000. Responses of nine Trifolium
repens L. populations to ultraviolet-B radiation: differential flavonol
glycoside accumulation and biomass production. Annals of Botany.86: 527–
537.
Huang, L.S., and Hsu, S. 2005. Mechanotransduction in Endothelial Cell Migration.
J Cell Biochem, 96:1110-1126
Huy, L.A.P., He, H., Huy, C.P. 2008. Free Radical, Antioxidants in Disease and
Health. International Journal of Biomedical Science. 4(2): 89-95.
Indraswary, R. 2007. Efek Konsentrasi Ekstrak Buah Adas (Foeniculum vulgare
Mill) Topikal Pada Epitelisasi Penyembuhan Luka Gingiva Labial Tikus
Sprague Dwaley In Vivo. Majalah Universitas Sultan Agung. (2011).
Karyani, I. 2003. Mencegah Penyakit Degeneratif dengan Makanan. Cermin Dunia
Kedokteran. Vol. : 140.
Katno, dan Pramono, S., 2007, Tingkat Manfaat dan Keamanan Tanaman Obat dan
ObatTradisional. Available from: http://www.litbang.depkes.go .id/bpto/
kemanan_TO.pdf.
Keller, U., Kumin, A., Braun, S., Werner, S. 2006. Reactive Oxygen Species and
Their Detoxification in Healing Skin Wounds. Journal of Investigative
Dermatology Symposium Proceedings. Volume 11.
Kusumawati, D. 2004. Bersahabat dengan Hewan Coba. Yogyakarta: Gadjah
Mada University Press.
Lawrence, W.T., Lowenstein,A. 2001. Wounds: Biology, Pathology, and
management. In: Norton,J.A., Bollinger,R.R., Chang,A.E., Lowry,S.F.,
Mulvihill,S.J., Pass,H.I., Thompson,R.W., editors. Surgery:Basic Science
and Clinical Evidence. 2th. Ed. New York: Springer-Verlag. P.221-236.
Lazarus, G.S., Cooper D.M., Knighton D.R. 2004. Definition and guidelines for
assesment of Wounds and Evaluation of Healing. Arch Dermatol, 130(4):
489-93.
Leong, M., Phillips, L.G., 2004. Wound Healing. In: Beauchamp, R.D., Evers,
B.M., Mattox,K.L., editors. Sabiston Textbook of Surgery. 17th. Ed.
Philadelphia: Elsevier.p.182-204.
Li, J., Chen, J., Kirsner, R. 2007. Pathophysiology of acute wound healing. Clinics
in Dermatology. Vol: 25. p. 9-18.
Lingga, L. 2012. The Healing Power of Antioxidant. Jakarta: PT Elex Media
Komputindo. Hal: 1-6, 26-28.
Lippincolt, W. 2003. Wound Care Made Incredible easy. Philadelphia: Lippincolt
Williams, wilkin.p. 71-126.
Lorenz, H.P., Longaker,M.T. 2001. Wounds: Biology, Pathology, and
management. In: Norton,J.A., Bollinger,R.R., Chang,A.E., Lowry,S.F.,
Mulvihill,S.J., Pass,H.I., Thompson,R.W., editors. Surgery: Basic Science
and Clinical Evidence. 2th. Ed. New York: Springer-Verlag. P.221-236.
Masduki I, 1996. Efek Antibakteri Ekstrak Biji Pinang (Areca catechu) terhadap
S.aureus dan E. coli. Cermin Dunia Kedokteran. 109 : 21-4.

47
Miladiyah, I., and Prabowo, B.R. 2012. Ethanolic Extract of Anredera cordifolia
(Ten.) Steeis Leaves Improved Wound Healing in Guinea Pigs. Universa
Medicina. 31(1): 4-11.
Morisaki, N., Watanabe, S., Tezuka, M., Zenibayashi, M., Shiina, R., Koyama, N.,
Kanzaki, T., and Saito, Y. 1995. Mechanism of Angiogenic Effects of
Saponin from Gingseng Radix Rubra in Human Umblical Vein Endothelial
Cells. Br J Pharmacol. 115 (7):1188-93.
Nayak, B.S. and Pereira, L.M.P. 2006. Catharanthus roseus flower extract has
wound-healing activity in Sprague Dawley rats. BMC Complementary and
Alternative Medicine. Vol: 6. p. 41.
Okoli, C.O., Akah, P.A., Okoli, A.S. 2007. Potentials of leaves of Aspilia africana
(Compositae) in wound care: an experimental evaluation. BMC
Complementary and Alternative Medicine. Vol: 7, article 24.
Pangkahila, W. 2007. Anti-Aging Medicine: Memperlambat Penuaan
Meningkatkan Kualitas Hidup. Jakarta: Kompas. Halaman 94-99.
Prasetyo, B. F., Wientarsih I, dan Priosoeryanto, B.P. 2010. Aktivitas sediaan
Ekstrak Batang Pisang Ambon dalam Proses Penyembuhan Luka pada
Mencit, Jurnal Veteriner, 11. p:70-73.
Reddy, G. A. K., Priyanka, B., Saranya, S. C., Kumar, C. K. A. 2012. Wound
Healing Potential Of Indian Medicinal Plants. International Journal of
Pharmacy Review & Research. Vol 2. Issue 2. 2012. p75-87.
Rieger, M.M. Skin. In:__ Harry’s cosmeticology. 8.ed. New York: Chemical
Publishing, 2000. p.3-38.
Robinson, M. L., Overbeek, P. A., Verran D. J., Grizzle W. E., Stockard C. R.,
Friesel R., Maciag T., Thompson J. A. 1995. Extracellular FGF-1 acts as a
lens differentiation factor in transgenic mice. Development 121, 505–514.
Savitri, Evika Sandi. 2006. Studi Morfologi Tumbuhan Gulma Yang Berpotensi
Sebagai Obat Di Lingkungan Uin Malang. Jurnal Saintika vol. 3. No 02
mei - 2006. Malang : UIN Press
Sheid, A., Meuli, M., Gassmann, M., Wenger, R.H. 2000. Genetically Modified
Mouse Models In Studies On Cutaneous Wound Healing. Experimental
Physiology. 85; 687-704.
Sjamsuhidayat, R. Jong, W.D. 2005. Luka. In Sjamsuhidayat, R. Jong, W.D
Karnadiharja, W. Prasetyono, T . editors. Buku Ajar Ilmu Bedah edisi 3.
Jakarta: EGC. P. 314-17
Sugianti, B. 2005. Pemanfaatan Tumbuhan Obat Tradisional Dalam Pengendalian
Penyakit Ikan. Institut Pertanian Bogor: Bogor.
Thakur, R., Jain, N., Pathak, R., Sandhu, S.S. 2011. Practices in wound healing
studies of plants. Evid Based Complement Alternat Med. 2011,43, 808-6.
Tisnajaya, Djadjat. 2005. Pengkajian Kandungan Fitosterol pada Tanaman
Kedawung (Parkia roxburgii G. Don). Jurnal Biodiversitas Lembaga Ilmu
Pengetahuan Indonesia. Volume 7 No 1 hal 21-24
Ueno,C., Hunt,T.K.,dan Hopf, H.W. 2006. Using Physiology To Improve
SurgicalWound Outcomes. Plast Reconstr Surg; 117 (suppl): 59S-71S
Wasiaatmadja, S.M.,2000. Anatomi kulit ;Ilmu penyakit kulit dan kelamin, edisi 3
cetakan 2, FKUI. p. 16-20.
Winarto, W.R dan Maria Surbakti. 2003. Khasiat dan Manfaat Pegagan.
Jakarta: Agromedia Pustaka

48
Yaar, M., and Gilchrest, B.A. 2003. Aging of skin. In:Freedberg IM, Eisen AZ,
Wolff K, Austen KF, Goldsmith LA, Katz SI (eds) Fitzpatrick’s
dermatology in general medicine, vol 2. McGraw-Hill, New York, pp 1386-
1398
Zulkifli. 2004. Pengobatan Tradisional Sebagai Pengobatan Alternatif Harus
Dilestarikan. Karya Ilmiah. Sumatra: Universitas Sumatra Utara

49