PENGARUH MINYAK ZAITUN (EXTRA VIRGIN OLIVE OIL) DAN

MINYAK IKAN (OMEGA-3) TERHADAP GAMBARAN

HISTOPATOLOGI PANKREAS MENCIT

(Mus musculus) HIPERGLIKEMIK

Proposal Penelitian

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat untuk Mencapai Gelar Sarjana
Kedokteran

Disusun Oleh :

INDIRA YUNITA ALIE

11020140061

Pembimbing:

dr. Hj. Aryanti Bamahry, M.Kes, Sp.GK

dr. Amrizal Muchtar

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS MUSLIM INDONESIA

2017

i
 DAFTAR ISI
DAFTAR ISI ........................................................................................................... ii

DAFTAR GAMBAR .............................................................................................. v

DAFTAR TABEL .................................................................................................. vi

BAB I PENDAHULUAN...........................................................................................1

1.1 Latar Belakang ......................................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah .................................................................................... 4

1.3 Tujuan Penelitian ...................................................................................... 4

1.3.1. Tujuan Umum ................................................................................... 4

1.3.2. Tujuan Khusus .................................................................................. 4

1.4 Manfaat Penelitian .................................................................................... 5

1.4.1 Bagi Institusi Pendidikan .................................................................. 5

1.4.2 Bagi Masyarakat................................................................................ 5

1.4.3 Bagi Peneliti ...................................................................................... 5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA..............................................................................6

2.1. Diabetes Melitus ....................................................................................... 6

2.1.1. Definisi Diabetes Melitus.................................................................. 6

2.1.2. Klasifikasi Diabetes Melitus ............................................................. 6

2.1.3. Epidemiologi Diabetes Melitus ......................................................... 8

2.1.4. Patogenesis Diabetes Melitus Tipe 2 ................................................ 9

2.1.5. Tes Saring Diabetes Melitus ........................................................... 12

2.1.6. Diagnosis Diabetes Melitus ............................................................ 13

2.1.7. Penatalaksanaan Diabetes Melitus Tipe 2 ....................................... 15

2.2. Tanaman Zaitun (Oulea europea) .......................................................... 17

2.2.1. Taksonomi Tanaman Zaitun (Olea europaea) ................................ 18

ii
 2.2.2. Minyak Zaitun (Extra Virgin Olive Oil (EVOO)) ........................... 19

2.2.3. Manfaat Minyak Zaitun................................................................... 21

2.2.4. Manfaat Minyak Zaitun terhadap Diabetes ..................................... 23

2.3. Minyak Ikan (Omega 3) ......................................................................... 25

2.3.1. Definisi Omega 3 ............................................................................ 26

2.3.2. Manfaat Minyak Ikan (Omega 3) Pada Pasien Diabetes ................ 27

2.4. Mencit (Mus musculus) .......................................................................... 27

2.4.1. Taksonomi ....................................................................................... 27

2.4.2. Mencit dengan hiperglikemia .......................................................... 28

2.5. Tinjauan Umum Tentang Pankreas Mencit ............................................ 29

2.5.1 Anatomi dan Fisiologi Pankreas ........................................................... 29

2.5.2 Macam-Macam Sel Pulau Langerhans ................................................. 30

2.6. Hipotesis ................................................................................................. 30

2.7. Kerangka Teori ....................................................................................... 31

2.8. Kerangka Konsep ................................................................................... 32

BAB III METODE PENELITIAN.........................................................................36

3.1. Rancangan Penelitian ............................................................................. 33

3.2. Waktu dan Lokasi Penelitian .................................................................. 33

3.3. Subjek Penelitian .................................................................................... 33

3.3.1 Kriteria Inklusi ................................................................................ 33

3.3.2 Kriteria Eksklusi.............................................................................. 34

3.4. Teknik Sampling .................................................................................... 34

3.5. Perhitungan Jumlah Sampel ................................................................... 34

3.6. Variabel Penelitian ................................................................................. 35

3.7. Definisi Operasional Variabel dan Kriteria Objektif.............................. 35

iii
 3.8. Alat dan Bahan ....................................................................................... 37

3.8.1 Alat dan Bahan yang Digunakan..................................................... 37

3.9. Cara Kerja............................................................................................... 37

3.10. Alur Penelitian .................................................................................... 41

3.11. Teknik Analisis Data .......................................................................... 42

3.12. Etika Penelitian ................................................................................... 43

Daftar Pustaka ....................................................................................................... 44

iv
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1 Langkah-Langkah Dianosis DM dan Gangguan Toleransi Glukosa. .. 14

Gambar 2 Tanaman Olea europeae. ..................................................................... 18

Gambar 3 Minyak Zaitun (Extra Virgin Olive Oil) .............................................. 21

Gambar 4 Minyak Ikan (Omega 3). ...................................................................... 25

Gambar 5 Mencit (Mus musculus). ....................................................................... 28

Gambar 6 Organ Pankreas .................................................................................... 29

v
 DAFTAR TABEL

Tabel 1 Klasifikasi Diabetes Melitus .................................................................... 13

Tabel 2 Langkah-Langkah Dianosis DM dan Gangguan Toleransi Glukosa ...... 15

Tabel 3 Taksonomi Olea europaea. ....................................................................... 18

Tabel 4 Tipe Sel pada Pulau Langerhans .............................................................. 30

vi
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Diabetes Melitus (DM) merupakan suatu kelompok penyakit metabolik

dengan karakteristik hiperglikemia yang terjadi karena kelainan sekresi

insulin, kerja insulin atau kedua-duanya. (ADA, 2005).

Diabetes Melitus (DM) merupakan salah satu masalah kesehatan

masyarakat yang banyak menyita perhatian, baik secara global, regional,

nasional dan lokal. (Kemenkes RI, 2013).

Estimasi terakhir International Diabetes Federation (IDF), terdapat 382

juta orang yang hidup dengan diabetes di dunia pada tahun 2013. Pada tahun

2035 jumlah tersebut diperkirakan meningkat menjadi 592 juta orang. Data

International Diabetes Federation (IDF) tahun 2015 menyatakan jumlah

penyandang diabetes di Indonesia diperkirakan sebesar 10 juta. Di Indonesia,

data Riskesdas menunjukkan bahwa terjadi peningkatan prevalensi diabetes

dari 5,7% tahun 2007 menjadi 6,9% atau sekitar sekitar 9,1 juta pada tahun

2013. (IDF, 2013 dan Kemenkes, 2016).

Kadar glukosa darah merupakan determinan utama regulasi fungsi dan

massa sel pulau Langerhans. Peningkatan kadar glukosa darah dalam batas

fisiologis akan meningkatkan sekresi insulin dan mekanisme persinyalan lain

yang menguntungkan bagi tubuh. Akan tetapi, hiperglikemia yang berlangsung

1
kronis akan mengakibatkan timbulnya glukotoksisitas pada sel-sel pulau

Langerhans. Glukotoksisitas akan menyebabkan disfungsi dan perubahan

massa sel , sehingga terjadi penurunan sekresi insulin. (Chang et al, 2008).

Kondisi hiperglikemia menurut ROBERTSON et al. (2003) dapat

menghasilkan pembentukan spesies oksigen reaktif (ROS=reactive oxygen

species). ROS yang berlebihan dapat memperparah kerusakan sel beta

pankreas. Perubahan histopatologis pulau langerhans pada penderita diabetes

telah dilaporkan sejumlah peneliti. Hiperglikemia dapat menyebabkan

terjadinya hiperplasia dan hipertrofi sel endokrin pulau Langerhans, terutama

pada populasi sel yang menyusun sebagian besar pulau Langerhans, serta

neogenesis pulau Langerhans dari sel-sel baru. (Suarsana et al, 2010).

Salah satu upaya dalam penanganan diabetes melitus adalah dengan

menggunakan terapi non farmakologik. Menurut American Diabetes

Association (ADA), terapi non farmakologik pada penderita diabetes adalah

dengan memberikan Monounsaurated fatty acid (MUFA) dan Omega 3. Salah

satu tumbuhan yang memiliki MUFA adalah minyak zaitun sedangkan Omega

3 terdapat banyak pada minyak ikan. (ADA, 2015).

Minyak zaitun merupakan minyak yang mengandung MUFA sebagai

komponen utamanya. Komponen terbesar dalam bentuk asam oleat yang

mengandung banyak antioksidan (seperi tyrosol, hidroxytyrosol) serta

oleuropein yang beraktivitas sebagai antidiabetik dan antioksidan. Hal ini

dikaitkan dengan peningkatan aktivitas insulin, yaitu meningkatan sensitivitas

insulin pada jaringan yang dituju, peningkatan sekresi insulin, dan

2
memperbaiki sel-sel beta pankreas. (Slamet, 2006 dan De Bruyne et all..

2008).

Yuhardika, W (2013), telah melakukan penelitian mengenai minyak zaitun

yang mempunyai komponen mayor berupa asam lemak jenis MUFA yang

dapat mempengaruhi sensitivitas reseptor insulin dan membantu neogenesis

dan proliferasi sel beta pankreas. (Yuhardika, 2013)

Penelitian oleh Caterina, R (2007) penggunaan minyak ikan (Omega-3)

selama 2 bulan meningkatkan pemakaian insulin serta meningkatkan

senitifitas insulin pada pemakaian 6 bulan, disamping itu mengurangi jumlah

lemak di hati dan menormalkan profil lemak. (Caterina, 2007)

Penelitian-penelitian ini membuktikan firman Allah subhana wa taala

dalam al-quran tentang khasiat minyak zaitun dalam menyembuhkan

berbagai penyakit. Allah subhana wa taala telah bersumpah dengannya,

dalam surat At-Tin (95:1-2); Demi tin dan zaitun. Dan demi bukit Sinai

Allah subhana wa taala juga memujinya dalam Surah An-Nur (24:35) ;

yang dinyalakan dengan minyak dari pohon yang diberkahi. Yaitu pohon

zaitun yang tumbuh tidak di sebelah timur dan tidak pula di sebelah barat.

Minyaknya saja hampir-hampir menerangi walaupun tidak disentuh api

Berdasarkan latar belakang diatas, penelitian ini dirancang untuk melihat

pengaruh minyak zaitun (Extra virgin olive oil) dan minyak ikan (Omega-3)

terhadap gambaran histopatologi pankreas pada mencit (Mus musculus)

hiperglikemik.

3
1.2 Rumusan Masalah

Bagaimana pengaruh minyak zaitun (Extra virgin olive oil) dan minyak

ikan (Omega-3) terhadap gambaran histopatologi pankreas pada mencit (Mus

musculus) hiperglikemik ?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1. Tujuan Umum

Untuk mengetahui pengaruh minyak zaitun (Extra virgin olive oil) dan

minyak ikan (Omega-3) terhadap gambaran histopatologi pankreas pada

mencit (Mus musculus) hiperglikemik.

1.3.2. Tujuan Khusus

1. Mengetahui gambaran histopatologi pankreas sesudah pemberian diet

standar pada mencit hiperglikemik (Kelompok Kontrol).

2. Mengetahui gambaran histopatologi pankreas sesudah pemberian diet

standar dan Minyak zaitun (Extra virgin olive oil) pada mencit

hiperglikemik (Kelompok Minyak zaitun (Extra virgin olive oil)).

3. Mengetahui gambaran histopatologi pankreas sesudah pemberian diet

standar dan Minyak ikan (Omega-3) pada mencit dengan hiperglikemik

(Kelompok Minyak Ikan (Omega-3)).

4. Mengetahui gambaran histopatologi pankreas sesudah pemberian diet

standar dan Minyak zaitun (Extra virgin olive oil) dan Minyak ikan

(Omega-3) pada mencit hiperglikemik.

5. Membandingkan gambaran histopatologi pankreas mencit (Mus musculus)

pada kelompok kontrol, kelompok Minyak zaitun (Extra virgin olive oil),

4
 Minyak ikan (Omega-3) dan kelompok Minyak zaitun (Extra virgin olive

oil) ditambah Minyak ikan (Omega-3).

6. Mengetahui pengaruh minyak zaitun (Extra virgin olive oil) dan minyak

ikan (Omega-3) terhadap gambaran histopatologi pankreas pada mencit

(Mus musculus) hiperglikemik.

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Bagi Institusi Pendidikan

Sebagai acuan bagi peneliti selanjutnya yang ingin melakukan

penelitian mengenai pengaruh minyak zaitun (Extra virgin olive oil) dan

minyak ikan (Omega-3) pada penderita diabetes melitus.

1.4.2 Bagi Masyarakat

Sebagai bahan bacaan bagi masyarakat luas, diharapkan penelitian ini

dapat memberi informasi mengenai nutrisi yang dapat digunakan sebagai

terapi nonfarmakologik pada penyakit diabetes melitus.

1.4.3 Bagi Peneliti

Sebagai tambahan ilmu, kompetensi, dan pengalaman berharga bagi

peneliti dalam melakukan penelitian terkait dengan pengaruh minyak

zaitun (Extra virgin olive oil) dan minyak ikan (Omega-3) terhadap

gambaran histopatologi pankreas pada mencit (Mus musculus)

hiperglikemik.

5
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Diabetes Melitus

2.1.1. Definisi Diabetes Melitus

Menurut American Diabetes Association (ADA) 2005, diabetes melitus

merupakan suatu kelompok penyakit metabolik dengan karakteristik

hiperglikemia yang terjadi karena kelainan sekresi insulin, kerja insulin atau

kedua-duanya. Sedangkan menurut WHO 1980, dikatakan bahwa diabetes

melitus merupakan sesuatu yang tidak dapat dituangkan dalam satu jawaban

yang jelas dan singkat, tapi secara umum dapat dikatakan sebagai suatu

kumpulan problema anatomik dan kimiawi yang merupakan akibat dari

sejumlah faktor, dimana didapat defisiensi insulin absolut atau relatif dan

gangguan fungsi insulin. (PERKENI 2011)

2.1.2. Klasifikasi Diabetes Melitus

- DM Tipe 1

Diabetes melitus tipe 1 terjadi karena kerusakan sel pankreas (reaksi

autoimun). Sel pankreas merupakan satu-satunya sel tubuh yang

menghasilkan insulin yang berfungsi untuk mengatur kadar glukosa dalam

tubuh. Bila kerusakan beta pankreas telah mencapai 80-90% maka gejala

diabetes melitus akan mulai muncul (kardika et al., 2013). Pada diabetes

melitus tipe 1 kerusakan pankreas berat, produksi insulin tidak ada atau

minimal, sehingga mutlak memerlukan insulin dari luar tubuh. Maka dibates

6
 mellitus tipe 1 disebut juga diabetes melitus tergantung insulin, diabetes

melitus tipe 1 dapat timbul pada umur muda (anak-anak, remaja).

(Widowati, 2011)

- DM Tipe 2

Diabetes melitus tipe 2 adalah penyakit gangguan metabolik yang di

tandai oleh kenaikan glukosa darah akibat penurunan sekresi insulin oleh sel

beta pankreas dan atau ganguan fungsi insulin (resistensi insulin). Defisiensi

insulin dapat terjadi melalui 3 jalan, yaitu: (Fatimah & Noor, 2015)

1. Rusaknya sel-sel pankreas karena pengaruh dari luar (virus, zat

kimia, dll).

2. Desensitasi atau penurunan reseptor glukosa pada kelenjar

pankreas .

3. Desensitasi atau kerusakan reseptor insulin di jaringan perifer.

Pada diabetes melitus tipe 2 terjadi kekurangan insulin, tetapi tidak

seberat pada diabetes melitus tipe 1. Pada diabetes melitus tipe 2 selain

kekurangan insulin, juga disertai resistensi insulin yaitu adanya insulin tidak

bisa mengatur kadar glukosa darah untuk keperluan tubuh secara optimal,

sehingga ikut berperan terhadap meningkatnya kadar glukosa darah.

diabetes melitus tipe 2 biasanya muncul setelah umur 30-40 tahun, bahkan

timbul pada umur 50 atau 60 tahun. (Widowati, 2011)

- DM Tipe Lain

Diabetes tipe lain ini merupakan diabetes yang disebabkan oleh berbagai

penyebab lainnya yaitu defek genetik sel beta pankreas, defek genetik kerja

7
 insulin, penyakit eksokrin pankreas, endokrinopati, karena obat atau zat

kimia, infeksi, sebab imunologi yang jarang, sindrom genetik lain yang

berkaitan diabetes. (Luwiharto & Ginanti, 2014)

- DM Gestasional

Diabetes Melitus Gestasional (DMG) adalah intoleransi karbohidrat

ringan (toleransi glukosa terganggu) maupun berat, terjadi atau diketahui

pertama kali saat kehamilan berlangsung. (Pamolango et al., 2013)

Kehamilan merupakan kondisi diabetogenic yang ditandai dengan

hiperglisemia postprandial, hipoglisemia puasa dan resistensi insulin. Pada

sekitar 2-4% ibu hamil tidak dapat mengkompensasi keadaan ini sehingga

menimbulkan Diabetes Melitus Gestasional (DMG). (Hermanto et al., 2012)

2.1.3. Epidemiologi Diabetes Melitus

Berbagai penelitian epidemiologi menunjukkan adanya kecenderungan

peningkatan angka insidens dan prevalensi DM tipe-2 di berbagai penjuru

dunia. WHO memprediksi adanya peningkatan jumlah penyandang diabetes

yang cukup besar untuk tahun-tahun mendatang. Untuk Indonesia, WHO

memprediksi kenaikan jumlah pasien dari 8,4 juta pada tahun 2000 menjadi

sekitar 21,3 juta pada tahun 2030.

Berdasarkan data Badan Pusat Statistik Indonesia (2003) diperkirakan

penduduk Indonesia yang berusia di atas 20 tahun adalah sebesar 133 juta

jiwa. Dengan prevalensi DM pada daerah urban sebesar 14,7% dan daerah

rural sebesar 7,2%, maka diperkirakan pada tahun 2003 terdapat

penyandang diabetes sejumlah 8,2 juta di daerah urban dan 5,5 juta di

8
 daerah rural. Selanjutnya, berdasarkan pola pertambahan penduduk,

diperkirakan pada tahun 2030 nanti akan ada 194 juta penduduk yang

berusia di atas 20 tahun dan dengan asumsi prevalensi DM pada urban

(14,7%) dan rural (7,2%) maka diperkirakan terdapat 12 juta penyandang

diabetes di daerah urban dan 8,1 juta di daerah rural. Suatu jumlah yang

sangat besar dan merupakan beban yang sangat berat untuk dapat ditangani

sendiri oleh dokter spesialis/ subspesialis bahkan oleh semua tenaga

kesehatan yang ada. Mengingat bahwa DM akan memberikan dampak

terhadap kualitas sumber daya manusia dan peningkatan biaya kesehatan

yang cukup besar, semua pihak, baik masyarakat maupun pemerintah,

seharusnya ikut serta dalam usaha penanggulangan DM, khususnya dalam

upaya pencegahan. (Depkes RI, 2006)

2.1.4. Patogenesis Diabetes Melitus Tipe 2

Pada DM tipe 2, faktor yang menjadi penyebab DM disebabkan adanya

gangguan sekresi insulin ataupun gangguan kerja insulin (resistensi insulin)

pada organ target terutama hati dan otot. Awalnya resistensi insulin belum

menyebabkan diabetes secara klinis, namun seiring dengan kegagalan

kompensasi dari tubuh berupa keadaan hiperinsulinemia, glukosa darah

masih normal atau baru sedikit meningkat akibat sekresi insulin oleh sel

beta pankreas. Gejala klinis DM yang ditandai dengan terjadinya

peningkatan kadar glukosa darah yang memenuhi kriteria DM. (Longo et

al., 2012)

9
 Insulin dihasilkan oleh sel beta pankreas dan akan disekresikan dalam

darah sesuai kebutuhan. Secara fisiologis, insulin mengatur glukosa darah

bersama glukagon yang diproduksi oleh sel alfa pankreas. Insulin disintesis

dalam bentuk preproinsulin (prekursor insulin) pada retikulum endoplasma

sel beta, yang akan dipecah menjadi proinsulin oleh bantuan enzim

peptidase dan akan dikemas dalam secretory vesicle dalam sel tersebut.

Selanjutnya proinsulin akan diurai menjadi insulin dan peptida-C oleh

enzim peptidase, dan siap untuk disekresikan bersama melalui membran sel.

(Longo et al., 2012)

Pelepasan insulin dari simpanan granula sel beta pankreas dipicu oleh

peningkatan kadar glukosa darah yang berasal dari makanan dan minuman.

Insulin berfungsi mengalami glukosa agar selalu dalam batas-batas

fisiologis. Proses sekresi insulin dimulai dengan proses masuknya glukosa

melewati membran sel beta melalui Glucosa transporter 2 (GLUT 2) yang

terdapat dalam membran sel beta pankeras. Glukosa di dalam sel akan

mengalami glikolisis dan fosforilasi yang kemudian akan membebaskan

molekul ATP. ATP tersebut akan berperan dalam penutupan kanal K +

sehingga terjadi hambatan dalam pengeluaran ion K+ yang menyebabkan

depolarisasi membran. Keadaan ini menyebabkan pembukaan kanal Ca2+

sehingga terjadi peningkatan kadar Ca2+ intrasel. Keadaaan ini yang akan

memicu sekresi insulin ke dalam sirkulasi. (Longo et al., 2012)

Pada jaringan perifer seperti jaringan otot dan lemak, insulin berikatan

dengan reseptor pada membran sel tersebut. Ikatan ini akan menghasilkan

10
sinyal yang akan mereglukosasi glukosa dalam sel dengan cara peningkatan

GLUT-4 dan mendorong penempatannya pada membran sel. Melalui

reseptor GLUT- 4 inilah glukosa dimasukkan ke dalam sel dan selanjutnya

akan mengalami proses metabolisme. (Longo et al., 2012)

Mekanisme defisiensi insulin pada DM tipe 2 belum sepenuhnya jelas.

Awal DM tipe 2 terjadi hiperinsulinemia karena resistensi insulin, terjadi

pula peningkatan produksi amilin oleh sel beta pankreas, yang kemudian

akan mengendap di sel islet sebagai amiloid. Amiloid ini akan menyebabkan

refrakter pada sel beta pankreas dalam menerima sinyal dari glukosa. Selain

itu amiloid bersifat toksik pada sel beta, sehingga dari keadaan inilah hal

yang mendasari kerusakan sel beta yang menyebabkan gangguan sekresi

insulin pada pasien DM tipe 2. (Longo et al., 2012)

Pada dasarnya hal ini dapat terjadi baik pada reseptor insulin maupun

pada salah satu tahap proses transduksi sinyal yang diinduksi oleh ikatan

insulin dan reseptornya. Resistensi insulin berkaitan erat dengan obesitas

karena jaringan lemak juga merupakan jaringan endokrin yang dapat

berkomunikasi dengan otot dan hati melalui mediator yang dihasilkan sel

lemak. Sel lemak dapat menghasilkan Tumor Necrosis Factor (TNF), asam

lemak, leptin, dan resistin. (Salzler et al., 2007)

TNF dapat mempengaruhi transduksi sinyal pasca reseptor yang memicu

resistensi insulin. Kadar leptin yang menurun dan peningkatan resistin pada

berbagai hewan percobaan obesitas juga berkontribusi terhadap terjadinya

11
 resistensi insulin. Namun mekanisme peningkatan asam lemak pada obesitas

memicu resistensi insulin belum sepenuhnya diketahui. (Nobili, 2011)

Progresivitas penyakit ini sangat dipengaruhi oleh lingkungan seperti

gaya hidup dikarenakan dapat berlanjut pada gangguan metabolisme lemak,

protein, serta menyebabkan kerusakan berbagai organ dalam tubuh. (Longo

et al., 2012)

2.1.5. Tes Saring Diabetes Melitus

Pemeriksaan penyaring ditujukan pada mereka yang mempunyai resiko

DM namun tidak menunjukkan adanya gejala DM. Pemeriksaan penyaring

bertujuan untuk menemukan pasien dengan DM, Toleransi Glukosa

Terganggu (TGT) maupun Gula Darah Puasa Terganggu (GDPT), sehingga

dapat ditangani lebih dini secara tepat. Pasien dengan TGT dan GDPT juga

disebut sebagai intoleransi glukosa, merupakan tahapan prediabetes. Kedua

keadaan tersebut merupakan faktor risiko untuk terjadinya DM dan penyakit

kardiovaskular. Pemeriksaan penyaring dilakukan pada kelompok yang

memiliki salah satu faktor risiko. (PERKENI, 2006)

Pemeriksaan penyaring dapat dilakukan melalui pemeriksaan kadar

glukosa darah sewaktu atau kadar glukosa darah puasa. Pemeriksaan

penyaring juga dapat dilakukan pada saat pemeriksaan untuk penyakit lain

atau pemeriksaan kesehatan. Kadar glukosa darah sewaktu dan glukosa

darah puasa sebagai patokan penyaring dapat dilihat pada tabel. (PERKENI,

2006)

12
 Tabel 1 Klasifikasi Diabetes Melitus (PERKENI, 2006)
Destruksi sel beta, umumnya
menjurus ke defisiensi insulin
Tipe 1 absolut
a. Auotoimun
b. Idiopatik
Bervariasi, mulai yang dominan
resistensi insulin disertai
Tipe 2
defisiensi insulin relatif sampai
yang dominan defek sekresi
insulin disertai resistensi insulin
a. Defek genetik fungsi sel beta
b. Defek genetik kerja insulin
c. Penyakit eksokrin pankreas
d. Endokrinopati
Tipe lain e. Karena obat atau zat kimia
f. Infeksi
g. Sebab imunologi yang jarang
h. Sindrom genetik lain yang
berkaitan dengan DM
Diabetes melitus gestasional

2.1.6. Diagnosis Diabetes Melitus

Diagnosis DM ditegakkan atas dasar pemeriksaan kadar glukosa darah.

Diagnosis tidak dapat ditegakkan atas dasar adanya glukosuria. Untuk

penentuan diagnosis DM, pemeriksaan glukosa darah yang dianjurkan

adalah pemeriksaan glukosa secara enzimatik dengan bahan darah plasma

vena. Penggunaan bahan darah utuh (whole blood), vena ataupun kapiler

tetap dapat dipergunakan dengan memperhatikan angka-angka kriteria

diagnostik yang berbeda sesuai ketetapan oleh WHO. (PERKENI, 2006)

Berbagai keluhan dapat ditemukan pada penyandang diabetes.

Kecurigaan adanya DM perlu dipikirkan apabila terdapat keluhan klasik

DM seperti di bawah ini.

13
 a. Keluhan klasik DM berupa : poliuria, polidipsia, polifagia, dan

penurunan berat badan yang tidak dapat dijelaskan sebabnya.

b. Keluhan lain dapat berupa : lemah badan, kesemutan, gatal, mata

kabur dan disfungsi ereksi pada pria, serta pruritus vulvae pada

wanita.

Gambar 1 Langkah-Langkah Dianosis DM dan Gangguan Toleransi

Glukosa. (PERKENI, 2006)

Diagnosis TGT ditegakkan bila setelah pemeriksaan Tes Toleransi

Glukosa Terganggu (TTGO) didapatkan glukosa plasma 2 jam setelah

beban antara 140 199 mg/dl sedangkan di diagnosis sebagai GDPT bila

setelah pemeriksaan glukosa plasma puasa didapatkan antara 100 125

mg/dl. (PERKENI, 2006)

Diagnosis DM dapat ditegakkan melalui tiga cara. Pertama, jika keluhan

klasik ditemukan hasil pemeriksaan glukosa plasma sewaktu >200 mg/dl.

Kedua, apabila ditemukan gejala klasik dengan pemeriksaan glukosa plasma

14
 puasa > 126 mg/dl. Ketiga dengan TTGO, meskipun TTGO dengan beban

75g glukosa lebih sensitif dan spesifik dibanding dengan pemeriksaan

glukosa plasma puasa namun memiliki keterbatasan tersendiri yaitu, TTGO

sulit dilakukan berulang-ulang. Diagnosis DM dapat ditegakkan sesuai

dengan yang tercantum pada tabel di bawah. (PERKENI, 2006)

Tabel 2 Langkah-Langkah Dianosis DM dan Gangguan Toleransi

Glukosa. (PERKENI, 2006)

Gejala klasik DM
+
glukosa plasma sewaktu 200 mg/dL (11,1 mmol/L) glukosa
plasma sewaktu merupakan hasil pemeriksaan sesaat pada suatu
hari tanpa memperhatikan waktu makan terakhir
Gejala klasik DM
+
kadar glukosa plasma puasa 126 mg/dL (7,0 mmol/L) puasa
diartikan pasien tak mendapat kalori tambahan sedikitnya 8 jam
Kadar glukosa plasma 2 jam pada tes toleransi glukosa oral
(TTGO) 200 mg/dL (11,1 mmol/L) TTGO dilakukan dengan
standard WHO, menggunakan beban glukosa yang setara
dengan75 g glukosa anhidrus yang dilarutkan ke dalam air

2.1.7. Penatalaksaan Diabetes Melitus Tipe 2

Pengelolaan DM tipe 2, pemilihan penggunaan intervensi sangat

bergantung pada fase mana diagnosis diabetes ditegakkan yaitu sesuai

dengan kelainan dasar yang terjadi. Berupa (1) resistensi insulin pada

15
jaringan lemak, otot, dan hati. (2) Kenaikan produksi glukosa oleh hati dan

(3) Kekurangan sekresi oleh pankreas. (Yunir et al., 2009)

Penatalaksanaan DM dimulai dengan melakukan pendekatan non

farmakologi yang berupa edukasi, perencanaan makan untuk terapi nutrisi

medik, penurunan berat badan bila obesitas, dan kegiatan jasmani. Bila

penatalaksanaan non farmakologis ini belum dapat mengendalikan kadar

glukosa darah, maka diberikan tambahan terapi farmakologis. (PERKENI,

2006)

Terapi gizi medis pada prinsipnya adalah melakukan pengaturan pola

makan yang didasarkan pada status gizi penderita diabetes dan melakukan

modifikasi diet berdasarkan kebutuhan individual. Keuntungan yang bisa

didapatkan dari terapi gizi ini: dapat menurunkan kadar glukosa darah,

memperbaiki profil lipid, dan meningkatkan sensitivitas reseptor insulin.

(Yunir et al., 2009)

Jenis bahan makanan yang dianjurkan pada pasien diabetes mellitus

secara garis besar meliputi 55-65% karbohidrat, 10-15% protein, dan

lemak.Pada penderita DM tipe 2 pengaturan konsumsi lemak sangat

penting. Lemak mempunyai kandungan energi sebesar 9 kkal per gramnya.

Lemak sangat penting untuk membawa vitamin yang larut dalam lemak

seperti vitamin A, D, E, dan K. (PERKENI, 2006)

Berdasarkan ikatan rantai karbonnya, lemak dikelompokkan menjadi

lemak jenuh dan lemak tidak jenuh. Pembatasan lemak jenuh dan kolesterol

sangat disarankan bagi pasien DM karena terbukti dapat memperbaiki profil

16
 lipid. Asam lemak tidak jenuh rantai tunggal (monounsaturated fatty acid :

MUFA), merupakan salah satu asam lemak yang dapat memperbaiki kadar

glukosa darah dan profil lipid. (Yunir et al., 2009)

Pemberian MUFA pada penderita DM dapat menurunkan kadar

kolesterol trigliserida, kolesterol total, kolesterol (Very Low Density

Lipoprotein : VLDL) dan meningkatkan kadar kolesterol (High Density

Lipoprotein : HDL). Sedangkan asam lemak tidak jenuh rantai panjang

(polyunsaturated fatty acid = PUFA) dapat melindungi jantung,

menurunkan kadar trigliserida, memperbaiki agregasi trombosit. (Yunir et

al., 2009)

PUFA mengandung asam lemak Omega-3 yang dapat menurunkan

sintesis VLDL di dalam hati yang dan meningkatkan aktivitas enzim

lipoprotein lipase yang dapat menurunkan kadar VLDL di jaringan perifer,

sehingga dapat menurunkan kadar kolesterol (Low density lipoprotein :

LDL). Batasi konsumsi lemak jenuh dan asupan lemak bentuk trans serta

asam lemak tidak jenuh rantai panjang pada asupan kebutuhan kalori

perhari. (Yunir et al., 2009)

2.2. Tanaman Zaitun (Oulea europea)

Tanaman Zaitun (Olea europaea) dalam dunia ilmiah, buah zaitun

memiliki nama Olea europaea yang masih tergolong dalam famili

oleaceae. Pohon zaitun tumbuh sebagai perdu tahunan yang abadi dan mulai

menghasilkan buah pada usia lima tahun. Pada usia 15-20 tahun pohon

zaitun mampu memproduksi buah secara penuh dan mampu bertahan hidup

17
 hingga ratus bahkan ribuan tahun lamanya, sehingga tanaman yang awalnya

perdu dapat menjadi pohon besar. (Handayani, 2012)

Selain dikenal sebagai penambah cita rasa makanan, minyak ini juga

memiliki beragam manfaat, baik untuk kesehatan. Olea europaea tersebar

luas di negara-negara Mediterania, Afrika, semenanjung Arab, India, dan

Asia. Minyak zaitun dianggap sebagai minyak yang sehat karena

mengandung lemak tak jenuh yang tinggi (utamanya asam oleik dan

polifenol). (Handayani, 2012; Fehri et al., 1996)

Gambar 2 Tanaman Olea europeae. (Fehri et al., 1996)

2.2.1. Taksonomi Tanaman Zaitun (Olea europaea)

Tabel 3 Taksonomi Olea europaea. (Johnson, 2005)

Kingdom Green Plants

Subkingdom Tracheobionata-vascular plants
Superdivision Spermatophyta-seed plants
Division Kelas Magnoliophyta-flowering
Plants Magnoliopsida-Dicotyledons

18
 Subklas Asteridae
Oleaceae-ash, privet, lilac and
Famili
olives
Genus Olea
Spesies Europe

2.2.2. Minyak Zaitun (Extra Virgin Olive Oil (EVOO))

Extra virgin olive oil atau minyak zaitun murni adalah minyak yang

didapatkan dengan pemerasan secara langsung buah zaitun baik

menggunakan alat maupun tidak, dibawah suhu yang sesuai (cold pressing

method) agar tidak merubah atau mempengaruhi komposisi asli minyak

zaitun. Dalam hal ini, minyak zaitun yang dihasilkan oleh ekstraksi

pelarutatau proses re-esterifikasi, dan dicampur dengan minyak nabati

lainnya tidak termasuk kategori EVOO. (IOC, 2013)

Extra virgin olive oil terdiri dari fraksi gliserol (90-99% dari buah

zaitun) dan fraksi non gliserol (0,4-5% dari buah zaitun). Fraksi gliserol

EVOO terdiri dari MUFA, Polyunsaturated Fatty Acid (PUFA), dan

Saturated Fatty Acid (SFA), sedangkan fraksi non gliserol diantaranya

senyawa fenolik (hydroxytyrosol, oleuropein, caffeic acid, coumaric acid,

vanillic acid), -tokoferol, squalene, klorofil (pigmen warna), dan -karoten

yang berfungsi sebagai antioksidan (Cicerale et al., 2010; Ghanbari et al.,

2012).

Setiap 100 gram EVOO mengandung sekitar 95 gram lemak (90-99%

fraksi gliserol) yang terdiri dari: MUFA 73,7 gram; SFA 13,5 gram; dan

19
PUFA 7,9 gram (Assy et al, 2009). Asam lemak dengan jumlah banyak

yang terdapat di dalam minyak zaitun yaitu SFA [asam palmitat (C16:0),

asam stearat (C18:0)], MUFA [asam oleat (C18:1); asam palmitoleat

(C16:1)], dan PUFA [asam linoleat (C18:2), dan asam linolenat (C18:3)].

Hampir semua varietas minyak zaitun memiliki C16:0, C18:0, C18:1, dan

C18:2 sebagai komponen utama, C16:1 dan C18:3 ada dalam jumlah kecil.

Komponen utama EVOO adalah asam oleat, berkontribusi sekitar 55-75%

dari total asam lemak (Nugraheni, 2012).

Extra virgin olive oil, diperoleh secara eksklusif melalui prosedur fisik,

lebih dari sekedar lemak tak jenuh tunggal karena mengandung antioksidan

dalam jumlah yang tinggi, terutama senyawa fenolik dan vitamin E (-

tokoferol). (Fito et al., 2007)

Senyawa fenolik merupakan metabolit sekunder dari tanaman. Senyawa

fenolik ini dapat disintesis secara alami oleh tanaman sebagai respon

terhadap kondisi stres seperti infeksi, luka, dan radiasi UV (Ghanbari et al.,

2012).

Kelas-kelas senyawa fenolik yang terdapat dalam minyak zaitun adalah

asam fenolik (vanillic acid, coumaric acid, caffeic acid), fenolik alkohol

(hydroxytyrosol), flavonoid, secoiridoid (oleuropein) dan lignan. Asam

fenolik adalah kelompok pertama senyawa fenolik yang ditemukan di

EVOO, senyawa ini bersama dengan fenil-alkohol dan flavonoid terdapat

dalam sejumlah kecil di EVOO, sementara secoiridoids dan lignan adalah

senyawa fenolik yang paling banyak ditemukan (Ghanbari et al., 2012)

20
 Gambar 3 Minyak Zaitun (Extra Virgin Olive Oil) (Kinanthi, 2009)

2.2.3. Manfaat Minyak Zaitun

Menurut Kinanthi (2009), manfaat kandungan Minyak zaitun adalah

sebagai berikut:

a. Sumber squalene utama

Minyak zaitun mengandung senyawa seperti fenol, tokoferol, sterol,

pigmen, dan squalene, yang penting dalam kesehatan. Juga mengandung

triasilgliserol yang sebagian besar berupa asam lemak tak jenuh tunggal

jenis asam oleat (Omega-9). Kandungan asam oleat 55-83% dari total

asam lemak. Karena asam oleat merupakan asam lemak tak jenuh

tunggal, risiko teroksidasi lebih rendah daripada asam linoleat (Omega-6)

dan linolenat (Omega-3).

Keduanya termasuk kelompok asam lemak tak jenuh ganda. Asam

oleat mampu mereduksi serum LDL (low density lipoprotein) penyebab

aterosklerosis dan stroke. Konsentrasi squalene minyak zaitun tertinggi

21
 dibandingkan dengan jenis minyak lain. Jumlahnya bervariasi, mulai dari

2.500 - 9.250 g/gr. Minyak lain hanya mengandung 16 370 g/gr.

Squalene adalah zat organik berupa cairan eter tetapi bukan minyak

karena tidak mengandung asam lemak atau gugusan karboksil (COOH),

berwarna kuning atau putih bening, berbau khas. Secara alamiah

squalene terdapat di dalam tubuh dan tersebar di semua organ dan

jaringan. Minyak zaitun dikenal sebagai interferon inducer (IFN).

Interferon berfungsi meningkatkan jumlah maupun aktivitas sel natural

killer (NK) atau lymphocytes. (Kinanthi, 2009)

b. Antioksidan

Warna minyak zaitun murni sebagian besar disumbang oleh klorofil,

feofitin, dan karotenoid. Klorofil dan feofitin mampu melindungi minyak

terhadap oksidasi dalam kondisi gelap, sedangkan karotenoid

melindunginya dari oksidasi dalam kondisi terang. Ketiga pigmen

tersebut memudahkan penyerapan minyak di dalam tubuh.

Proses pemurnian minyak zaitun menghasilkan sejumlah komponen

lain yang bermanfaat, di antaranya hidroksitirosol dan tirosol.

Hidroksitirosol terbukti efektif meningkatkan aktivitas antioksidan dalam

plasma serta melindungi terhadap oksidasi LDL. Tirosol beserta

antioksidan fenolik lainnya mampu mengikat LDL, sehingga dapat

menunda proses aterosklerosis. Hasil samping tersebut mempunyai

aktivitas yang lebih baik dibanding minyak zaitun itu sendiri, khususnya

dalam mencegah oksidasi LDL. (Kinanthi, 2009)

22
2.2.4. Manfaat Minyak Zaitun terhadap Diabetes

Pada penderita DM terjadi peningkatan pemecahan adiposa yang akan

menyebabkan peningkatan asam lemak bebas dalam darah. Peningkatan

asam lemak bebas dalam darah akan menyebabkan ruang hidrofilik pada

membran sel berkurang, sehingga menyebabkan gangguan fluiditas

membran sel. Gangguan fluiditas membran akan mempersulit lokasi dari

protein reseptor kunci, yaitu G protein dan protein kinase C alpha (PKC),

dan juga menurunkan sensitivitas protein kunci terhadap hormon insulin.

Hal ini akan menyebabkan berkurangnya aksi metabolisme insulin dalam sel

sehingga respon jaringan berkurang. (Perona et al., 2007)

MUFA dapat mengubah komposisi asam lemak membran sel target

sehingga mempengaruhi fungsi reseptor insulin. Perubahan komposisi asam

lemak membran akan berefek pada proses transmisi sinyal yang melibatkan

sub unit G protein, dan protein PKC yang merupakan protein reseptor

kunci. MUFA menyebabkan terjadinya perubahan komposisi membran sel

menjadi lebih kaya akan asam lemak dengan tipe cis. Asam lemak tipe cis

mensubstitusi komponen ekor pada membran dan membentuk komponen

ekor yang bertekuk. Hal ini menyebabkan terbentuknya lebih banyak

ruangan diantara gugus kepala membran. (Perona et al., 2007)

Gugus kepala yang bersifat hidrofilik tersebut menjadi lebih luas, dan hal

ini meningkatkan fluiditas membran sel. Meluasnya ruang antar gugus

kepala dan meningkatnya fluiditas membran, memprofokasi lokalisasi dan

aktivitas dari protein reseptor kunci, yaitu sub unit G protein dan PKC.

23
Keduanya menjadi lebih mudah mencapai lokasi permukaan membran serta

sensitivitasnya terhadap sinyal meningkat. (Perona et al., 2007)

MUFA memiliki efek protektif dan promotif terhadap sel beta pankreas.

Disfungsi sel beta dapat ditekan oleh MUFA dengan cara mengurangi

kerusakan sel beta dan memicu neogenesis sel beta. Mekanisme utama yang

menyebabkan terjadinya kerusakan sel beta adalah toksisitas glukosa dan

lipid. Substitusi Saturated Fatty Acid (SFA) dengan MUFA menurunkan

toksisitas lipid pada sel beta dan merangsang perbaikan aksis enteroinsuler.

Perbaikan aksis enteroinsuler ini mengoptimalkan peran GLP-1 dalam

memicu neogenesis sel beta. Dengan mempertahankan dan meningkatkan

sel beta fungsional maka sekresi insulin pada diabetes melitus dapat

ditingkatkan. Sehingga, adanya neogenesis sel beta dan optimalisasi aksis

enteroinsuler dapat meningkatkan sekresi insulin oleh sel beta. (Kahn et al.,

2006)

Manfaat minyak zaitun untuk menjaga kesehatan jantung dan mencegah

stroke telah terbukti secara ilmiah. Sebuah studi menyebutkan, pasien

berusia 64 - 71 tahun menunjukkan penurunan total kolesterol setelah diberi

dua sendok makan minyak zaitun setiap hari. Riset di Barcelona

menunjukkan Extra virgin olive oil merupakan jenis minyak zaitun paling

baik untuk mencegah glukosa darah dan oksidasi LDL, serta meningkatkan

HDL. (Kinanthi, 2009)

24
2.3. Minyak Ikan (Omega 3)

Gambar 4 Minyak Ikan (Omega 3). (Saputro, 2012)

Minyak ikan termasuk senyawa lipid yang bersifat tidak larut dalam air

yang dibagi menjadi 2 golongan yaitu, minyak hati ikan (fish liver oil) yang

terutama dimanfaatkan sebagai sumber vitamin A dan D, dan minyak tubuh

ikan (body oil). (Saputro, 2012)

Minyak ikan dibentuk dengan cara esktraksi. Ekstraksi minyak adalah

suatu cara untuk mendapatkan minyak atau lemak dari bahan tertentu, cara

ekstraksi yang biasa dilakukan, yaitu metode extraksi dengan aseton,

hidrolisa, Dry Rendering, Wet Rendereing, ekstraksi dengan silase dan

ekstraksi metode tim. (Saputro, 2012)

Tahap-tahap pemurnian minyak ikan terbagi menjadi 6 tahap yaitu,

penyaringan, degumming, netralisasi, pemisahan sabun, pemucatan, dan

deodorisasi. Pemurnian bertujuan menghilangkan rasa dan bau yang tidak

enak, warna yang tidak menarik, dan memperpanjang masa penyimpanan

minyak sebelum dikonsumsi dan digunakan sebagai bahan mentah. Hasil dari

pemurnian adalah minyak ikan dengan kandungan asam lemak bebasnya (free

fatty acid/FFA). (Saputro, 2012)

25
2.3.1. Definisi Omega 3

Asam lemak Omega 3 adalah asam lemak tidak jenuh ganda yang

mempunyai ikatan rangkap banyak, ikatan rangkap pertama terletak pada

atom karbon ketiga dari gugus metil Omega, ikatan rangkap berikutnya

terletak pada nomor atom karbon ketiga dari ikatan rangkap sebelumnya.

(Diana et al., 2012)

Gugus metil Omega adalah gugus terakhir dari rantai asam lemak. Asam

lemak otak yaitu asam lemak esensial serta Omega 3 merupakan zat gizi

yang harus terpenuhi kebutuhannya. Asam lemak Omega3 ini turunan dari

prekursornya, yakni asam lemak esensial linoleat dan linolenat. Asam lemak

esensial tidak bisa dibentuk dalam tubuh dan harus didapatkan dari

makanan. Kemudian prekursor itu masuk dalam proses elongasi dan

desaturasi yang menghasilkan tiga bentuk asam lemak Omega 3: LNA

(asam alfa-linolenat (C18 :3,n-3)), EPA (eikosapentaenoat (C20:5,n- 3)),

serta DHA (dokosaheksaenoat (C22 :6, n-3). (Diana et al., 2012)

Ada 3 bentuk Omega 3 yaitu : Omega 3:LNA, EPA, serta DHA. Induk

dari asam lemak Omega 3 adalah alpha linolenic acid (ALA). ALA dengan

bantuan enzim delta-6-desaturase dapat berubah menjadi stearidonic acid

kemudian oleh enzim delta-5-desaturase dikonversi tubuh menjadi EPA dan

oleh enzim delta- 4-desaturase dirubah menjadi DHA. (Diana et a;., 2012)

Proses pembentukan DHA maupun Asam Arakidonat (AA) difasilitasi

oleh enzim desaturase dan elongase. Minyak ikan yang mengandung banyak

26
 DHA akan menghambat aktifitas enzim tersebut sehingga dapat

menghambat pembentukan AA. (Diana et al., 2012)

2.3.2. Manfaat Minyak Ikan (Omega 3) Pada Pasien Diabetes

Minyak ikan digunakan sebagai sumber utama asam lemak Omega-3

terutama EPA (eicosapentanoic acid) dan DHA (dekosohexanoic acid) yang

penting bagi kesehatan. Pada penderita diabetes, asam lemak Omega-3

dapat memperbaiki toleransi terhadap kelebihan kadar glukosa dalam darah

serta mencegah dan memperbaiki sindroma resistensi insulin. Homeostasis

glukosa darah pasien diabetes dengan pemberian suplemen Omega 3

memberikan peningkatan sensitivitas insulin yang lebih baik, serta

terjadinya penggunaan lipid yang lebih baik. (Saputro, 2012; Fachls et al.,

2014)

2.4. Mencit (Mus musculus)

2.4.1. Taksonomi

- Kingdom : Animalia

- Filum : Chordata

- Sub Filum : Vertebrata

- Kelas : Mamalia

- Ordo : Rodentia

- Sub Ordo : Myoimorphia

- Famili : Muridae

- Genus : Mus

- Spesies : Mus musculus

27
 Gambar 5 Mencit (Mus musculus). (Listyorini, 2013)

Mencit biasanya dipilih sebagai hewan uji karena ukurannya yang kecil,

masa hidup relatif pendek, mudah didapat, dan ketersediaan data pada

penelitian sebelumnya. Selain itu, mencit memiliki masa hidup relatif

singkat dan secara fisiologi diperkirakan sesuai atau identik dengan

manusia. Mencit mudah ditangani, bersifat penakut, fotofobik, cenderung

berkumpul sesamanya. Lebih aktif pada malam hari, suhu tubuh normal

37,4O celcius. (Listyorini, 2013)

2.4.2. Mencit dengan hiperglikemia

Kadar glukosa normal dalam darah mencit berkisar antara 62-175 mg/dl.

(Harkness, 1989). Kadar glukosa darah adalah suatu indikator klinis dari

kurang atau tidaknya asupan makanan sebagai sumber energi. Faktor yang

menentukan kadar glukosa darah adalah keseimbangan antara jumlah

glukosa yang masuk dan glukosa yang keluar melalui aliran darah. Hal ini

dipengaruhi oleh masuknya makanan, kecepatan masuk ke dalam sel otot,

jaringan lemak dan organ lain serta aktivitas sintesis glikogen dari glukosa

oleh hati. (Ganong, 1999)

28
2.5. Tinjauan Umum Tentang Pankreas Mencit

2.5.1 Anatomi dan Fisiologi Pankreas

Gambar 6 Organ Pankreas (Sherwood, 2001)

Menurut Sherwood (2001) pankreas adalah suatu organ yang terdiri dari

jaringan eksokrin dan endokrin. Bagian eksokrin pankreas mengeluarkan

larutan basa encer dan enzim-enzim pencernaan melalui duktus

pankreatikus ke dalam lumen saluran pencernaan. Diantara sel-sel eksokrin

pankreas tersebar kelompok-kelompok, atau pulau-pulau, sel endokrin

yang juga dikenal sebagai pulau-pulau Langerhans. Pankreas manusia

secara anatomi letaknya menempel pada duodenum dan terdapat kurang

lebih 200000-1800000 pulau Langerhans. Dalam pulau Langerhans normal

manusia dewasa, jumlah sel beta berkisar antara 75%-80% dari populasi sel

pulau Lagerhans. Pankreas terdiri dari dua jenis jaringan utama, yakni: asini

yang mensekresikan getah pencernaan ke dalam duodenum, dan pulau

Langerhans yang tidak mengeluarkan getahnya ke luar namun

mensekresikan insulin dan glukagon langsung ke dalam darah (Guyton

1994).

29
2.5.2 Macam-Macam Sel Pulau Langerhans

Pulau Langerhans mempunyai 4 macam sel yaitu: sel alfa yang

mensekresi glukagon, sel beta yang mensekresi hormon insulin, sel delta

yang mensekresi somatostatin untuk menghambat sekresi insulin dan

glukagon dan sel pankreatik polipeptida yang fungsinya belum diketahui

secara pasti (Underwood 1992). Jenis sel endokrin pankreas paling banyak

dijumpai adalah sel beta (Sherwood 2001).

Tabel 4 Tipe Sel pada Pulau Langerhans (Underwood 1992)

Tipe Sel Hormon yang Dihasilkan Rata-Rata (%)

Beta Insulin 70

Alfa Glukagon 20

Delta Somatostatin 8

PP Pankreatic Polipeptida 2

2.6. Hipotesis

H0 : Pemberian Minyak zaitun (Extra virgin olive oil) dan Minyak ikan

(Omega 3) memiliki efek terhadap gambaran histopatologi pankreas. pada

mencit hiperglikemia

H1 : Pemberian Minyak zaitun (Extra virgin olive oil) dan Minyak ikan

(Omega 3) tidak memiliki efek terhadap gambaran histopatologi pankreas.

pada mencit hiperglikemia.

30
2.7. Kerangka Teori

DM Tipe 2

Gangguan Sekresi Resistensi Insulin

Insulin pada Organ

Hiperglikemia

OHO dan
Insulin
Kadar Glukosa
Darah >200mg/dl

Aktivitas
Fisik
Terapi Gizi

Karbohidrat Lemak Protein

Unsatuturated Fatty Acid

Minyak zaitun Minyak Ikan

(MUFA) (PUFA)

Merangsang perbaikan aksis PPAR-Gamma

enteroinsuler menginduksi adipogenesis

Neogenesis sel beta Diferensiasi adiposit dan

pankreas remodelling jarigan lemak

Peningkatan Sekresi dan

sensitivitas Insulin

31
 Keterangan:

: Menyebabkan

: Menghambat

: Terdiri dari

2.8. Kerangka Konsep

Neogenesis sel
Minyak Meningkatk
beta pankreas an sekresi
Minyak zaitun (Extra virgin zaitun
Olive Oil) dan Minyak Ikan dan
(Omega-3) Diferensiasi sensitiitas
Minyak Insulin
adiposit dan
ikan
remodelling
jaringan lemak

Gambaran
Histopatologi
Pankreas
Keterangan :

: Variabel Independen

: Variabel Dependen

: Variabel Antara

32
 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1. Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian exsperimental laboratorik dengan

menggunakan rancangan post test only with control group design dengan

menggunakan hewan coba. Hewan coba yang digunakan adalah mencit

(Mus musculus) untuk mengetahui efek pemberian Minyak zaitun (Extra

virgin olive oil) dan Minyak ikan (Omega-3) terhadap gambaran

histopatologi pankreas pada mencit (Mus musculus) hiperglikemia.

3.2. Waktu dan Lokasi Penelitian

Penelitian dilakukan di Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas

Muslim Indonesia pada bulan Juni-Juli 2017.

3.3. Subjek Penelitian

Mencit jantan, sehat dan mempunyai aktivitas normal, berumur antara

2-3 bulan dengan berat kira-kira 20-30 gram.

3.3.1 Kriteria Inklusi

1. Mencit jantan

2. Mencit bergerak aktif.

3. Secara makroskopis tidak ada kelainan morfologi.

4. Mencit yang kadar glukosa darahnya 180 mg/dl setelah diberi pakan

tinggi karbohidrat

33
3.3.2 Kriteria Eksklusi

1. Mencit yang mati selama penelitian.

2. Mencit yang kadar glukosa darahnya <180 mg/dl setelah diberi pakan

tinggi karbohidrat

3.4. Teknik Sampling

Pengambilan sampel penelitian dilakukan secara purposive sampling,

setelah dilakukan dan pengukuran kadar GDS dan mencit dengan kadar

GDS < 180 mg/dl dieksklusi, kemudian dilanjutkan simple random

sampling untuk membagi subjek menjadi empat kelompok, yaitu :

a. Kelompok 1 diberi diet pakan standar dan diberi plasebo (kontrol).

b. Kelompok 2 diberi diet pakan standar dan diberi Minyak zaitun

(Extra virgin olive oil) denga dosis 0,441 gr/hari

c. Kelompok 3 diberi diet pakan standar dan diberi Minyak ikan

(Omega 3) dengan dosis 0,279 gr/hari.

d. Kelompok 4 diberi diet pakan standar dan diberi Minyak zaitun

(Extra virgin olive oil) dan Minyak ikan (Omega 3).

3.5. Perhitungan Jumlah Sampel

Seluruh sampel dibagi menjadi 4 kelompok. Sampel penelitian ini

ditentukan menurut rumus Federer untuk uji eksperimental, yaitu:

(t-1) (n-1) 15

Keterangan :

t = kelompok perlakuan

n = jumlah sampel perkelompok

34
 Perhitungan besar sampel tiap kelompok menggunakan rumus Federer :

(t-1) (n-1) 15

(4-1) (n-1) 15

3n-3 15

3n 18

n6

Jadi, 4 kelompok sampel masing-masing membutuhkan 6 ekor mencit,

maka dibutuhkan sampel sebanyak 24 ekor mencit.

3.6. Variabel Penelitian

a. Variabel Independen

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah Minyak zaitun (Extra virgin

olive oil) dan Minyak ikan (Omega3).

b. Variabel Dependen

Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah gambaran histopatologi

pankreas.

c. Variabel Antara

Variabel antara adalah variabel yang menghubungkan antara variabel

independen dan dependen. Variabel ini berupa mekanisme peningkatan

sekresi insulin.

3.7. Definisi Operasional Variabel dan Kriteria Objektif

a. Mencit (Mus musculus):

Mencit jantan (Mus musculus) yang digunakan dalam penelitian berumur

antara 2-3 bulan, dengan berat badan antara 20-30 gram.

35
b. Extra-Virgin Olive Oil:

Diperoleh dari jenis minyak zaitun murni yang dan diberikan kepada

mencit dengan dosis 0,441 gr/hari.

c. Minyak ikan (Omega-3)

Diperoleh dari minyak ikan yang mengandung 1 g OMEGA-3 dengan

komposisi EPA 440 mg dan DHA 370 mg (81 %), mg dan diberikan

kepada mencit dengan dosis 0,279 gr/hari.

d. Gambaran Histopatologi Pankreas Mencit

Gambaran hitopatologi pankreas dinilai oleh dokter ahli patologi dengan

menilai morfologi umum sel dan jaringan pankreas, berupa:

1. Jumlah rata-rata sel endokrin

2. Luas rata-rata pulau langerhans

3. Densitas pulau langerhans (jumlah rata-rata pulau

langerhans/mm2)

4. Diameter rata-rata pulau langerhans yang didapatkan dari

pemeriksaan histopatologi jaringan pankreas.

Kriteria Objektif:

Pada tikus diabetes derajat sedang, ditemukan hampir 67% pulau

Langerhans berdiameter kurang dari 150 m, sedangkan pada tikus normal

jumlah pulau Lengerhans yang berdiameter lebih dari 150 m sekitar 50%.

Pada kondisi diabetes derajat sedang, jumlah sel beta secara nyata

berkurang bahkan pada diabetes parah sel beta tidak ditemukan namun sel

alpha masih ditemukan di bagian perifer pulau Langerhans.

36
3.8. Alat dan Bahan

3.8.1 Alat dan Bahan yang Digunakan

a. Alat-alat yang digunakan

1. Kandang mencit beserta kelengkapan pemberian pakan dan minum

2. Gelas dan labun ukur

3. Spuit injeksi tuberculin

4. Sonde lambung mencit

5. Timbangan elektrik

6. Glukometer

7. Mikroskop

8. Slide

9. Scalpel

b. Bahan-bahan yang digunakan

1. Minyak zaitun (Extra virgin olive oil)

2. Minyak Ikan (Omega 3)

3. Aquadest

4. Pakan tinggi karbohidrat

5. Buffer sitrat

6. Formalin 10 %

7. Nacl 0,9%

8. Kloroform

3.9. Cara Kerja

1. Kandang mencit disiapkan

37
2. Mencit diadaptasikan dengan lingkungan selama 1 minggu dan

diberikan pakan standar dan air ad libitum.

3. Pemberian pakan tinggi karbohidrat selama 14 hari roti, jagung dan

personde air glukosa 12,5% dengan dosis 1 gr/KgBB/hari.

4. Kemudian dilakukan pengukuran GDS dengan menggunakan

glukometer pada hari ke-15 pada pagi hari. Mencit dengan kadar GDS <

180 mg/dl dieksklusi selanjutnya dikelompokkan menjadi 4 kelompok,

masing-masing kelompok 6 ekor mencit :

a. Kelompok 1 diberi diet pakan standar dan diberi placebo (kontrol).

b. Kelompok 2 diberi diet pakan standar dan diberi Minyak zaitun (Extra

virgin olive oil) denga dosis 0,441 gr/hari.

c. Kelompok 3 diberi diet pakan standar dan diberi Minyak ikan (Omega

3) dengan dosis 0,279 gr/hari.

d. Kelompok 4 diberi diet pakan standar dan diberi Minyak zaitun (Extra

virgin olive oil) dan Minyak ikan (Omega 3)

Perlakuan tersebut dilakukan selama 14 hari. Setelah itu, semua

mencit dianastesi menggunakan kloroform kemudian dibedah untuk

diambil organ pankreasnya. Pembedahan dan pengambilan organ

dilakukan menggunakan alat-alat bedah dan dilakukan secara hati-hati

agar organ yang diambil tidak rusak. Organ pankreas selanjutnya dicuci

dengan NaCl fisiologis. Setelah dicuci, organ pankreas difiksasi dengan

cara dimasukkan ke dalam botol berisi formalin 10%. Organ pankreas

38
 yang telah difiksasi kemudian dibuat preparat histologinya sesuai

prosedur.

Pemeriksaan histopatologi kemudian diamati di bawah mikroskop.

Hasil pewarnaan hematoksilin-eosin (HE) kemudian dilakukan melalui

analisis morfometrik dengan menilai jumlah sel endokrin, luas,

diameter, dan densitas pulau Langerhans. Sel-sel pulau Langerhans

diidentifikasi dengan perbesaran, dihitung, lalu dicatat. Jumlah seluruh

sel endokrin pulau Langerhans (n) pada pulau Langerhans dihitung dari

lima pulau Langerhans yang diamati secara acak dan dinyatakan dalam

satuan n/pulau. Diameter dari lima pulau Langerhans yang representatif

dari tiap preparat diukur dan dinyatakan dalam satuan nm. Semua

perubahan histopatologis yang terjadi pada pulau Langerhans, seperti

apoptosis atau nekrosis jaringan, dicatat.

3.10. Perhitungan Dosis Mencit pada Minyak Zaitun (Extra-Virgin Olive

Oil)

Dosis efektif pada manusia = 4,8 gr

Dosis manusia = 4,8 g / 60 kg = 0,08 gr

Dosis Mencit = Dosis manusia x faktor konversi mencit

Faktor konversi manusia

= 0,08 x 37/3 = 0,98 gr

Dosis mencit dengan berat rata rata 30 gram

= Dosis mencit x BB rata rata mencit

39
 1000

= 0,98/1000 x 30

= 0,0294 mg

Sediaan yang dibutuhkan untuk 1 mencit

= 15 ml/1 ml x 0,0294

= 0,441 gr/hari

Sediaan yang dibutuhkan mencit selama 14 hari

= 0,441 x 14

= 6,174 gr

3.11. Perhitungan Dosis Mencit pada Minyak Ikan (Omgea-3)

Dosis efektif pada manusia = 3 gr

Dosis manusia = 3 g / 60 kg = 0,05 gr

Dosis Mencit = Dosis manusia x faktor konversi mencit

Faktor konversi manusia

= 0,05 x 37/3 = 0,62 gr

Dosis mencit dengan berat rata rata 30 gram

= Dosis mencit x BB rata rata mencit

1000

= 0,62/1000 x 30

= 0,0186 mg

Sediaan yang dibutuhkan untuk mencit

= 15 ml/1 ml x 0,0186

40
 = 0,279 gr/hari

Sediaan yang dibutuhkan mencit selama 14 hari

= 0,279 x 14

= 3,906 gr

3.11Alur Penelitian

Mencit

t
41
 Pemberian Pakan Tinggi
Karbohidrat Selama 14 Eksklusi
Hari

Pengukuran Kadar Gula Kadar GDS < 180 mg/dL

Darah

Kadar GDS 180 mg/dL

Perlakuan Perlakuan Perlakuan Perlakuan

Kelompok 1 Kelompok II Kelompok III Kelompok IV

(Plasebo) (MZ) (FO) (MZ+FO)

kelo

kelompok I kelo
Intervensi selama 14 hari
9 kelompok I

Pengambilan organ pankreas dan kelompok I

difiksasi dengan formalin 10%

Pembuatan preparat histopatologi

Pemeriksaan histopatologi

Analisis dan Hasil

Kesimpulan

3.12Teknik Analisis Data

42
 Data yang diperoleh dianalisis secara statistik menggunakan program

Statistical Products and Service Solutions (SPSS) for Windows Release

21.0. Dilakukan uji homogenitas Shapiro-Wilk untuk melihat normalitas

distribusi data. Bila dijumpai nilai p > 0,05 maka distribusi normal,

sehingga teknik analisis data yang digunakan adalah uji one-way Anova

untuk melihat secara umum beda rerata gambaran histopatologi pankreas

mencit semua kelompok. Jika hasil uji Anova signifikan maka dilanjutkan

dengan post hoc test (Tukey) untuk mengetahui kelompok mana yang

berbeda bila terdapat perbedaan bermakna dengan nilai p < 0,05 pada uji

one-way Anova. Apabila dijumpai p < 0,05 pada uji homogenitas Shapiro-

Wilk, maka distribusi tidak normal. Dilakukan uji Kruskal-Wallis untuk

melihat beda rerata gambaran histopatologi pankreas mencit antar

kelompok. Terdapat perbedaan yang bermakna apabila nilai p < 0,05.

3.13 Etika Penelitian

Hal-hal yang terkait dengan etika penelitian ini adalah :

1. Menyertakan surat izin penelitian kepada pihak Fakultas Kedokteran

Universitas Muslim Indonesia

2. Menyertakan surat izin dari Fakultas Kedokteran dan dosen pembimbing

kepada laboratorium yang akan digunakan untuk meneliti.

3. Implikasi etik pada hewan, pengelolaan binatang coba pada penelitian

ini mengikuti animal ethics.

43
 Daftar Pustaka

1. Kementrian Kesehatan Republik Indonesia. 2013. Diabetes Melitus Penyebab

Kematian Nomor 6 di Dunia: Kemenkes Tawarkan Solusi CERDIK Melalui
Posbind [Online]. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Available: http://www.depkes.go.id [10 Desember 2016].
2. American Diabetes Assosiation. 2005. Diagnosis and Classification of
Diabetes Mellitus. In: Diabetes Care. USA: American Diabetes Association.
3. International Diabetes Federation. 2013. Managing Older People With Type 2
Diabetes. In: SINCLAIR, P. A., DUNNING, P. T. & COLAGIURI, P. S. (eds.)
IDF Global Guideline. Sidney, Australia: International Diabetes Federation.
4. Kementrian Kesehatan Republik Indonesia. 2016. Mari Kita Cegah Diabetes
dengan Cerdik [Online]. Jakarta: Kementrian Kesehatan Republik Indonesia.
5. I Nyoman Suarsana, B. P. P., M. Bintang dan T. Wresdiyati. 2010. Profil
Glukosa Darah dan Ultrastruktur Sel Beta Pankreas Tikus yang Diinduksi
Senyawa Aloksan. JITV, 15, 118.
6. Caterina R, et all. n-3 Fatty acids in the treatment of diabetic patients. Diabetic
Care 2007; 30:1012-21.
7. American Diabetes Assosiation. 2015 . Diabetes Care The Journal Of Clinical
And Applied Research And Education. In: Diabetes Care. USA: American
Diabetes Association
8. Suyono, S. 2006. Buku Ajar Ilmu Penyekit Dalam Jilid I Edisi IV. Jakarta:
Pusat Penerbitan Departemen Ilmu Penyekit Dalam Fakultas Kedokteran
Universitas Indonesia.
9. De Bruyne et all.. 2008. Nutrition and Diet Therapy: Principles and Practice.
7th edition. Belmont: Wadsworth Thomson Learning.
10. PERKENI. 2011. Konsensus pengelolaan dan pencegahan diabetes melitus
tipe 2 di Indonesia. http: //www.perkeni.net [16 Oktober 2016]
11. Widowati, W., 2011. Potensi Antioksidan sebagai Antidiabetes. JKM7.

12. Nobili V, Bedogni G, Aksi A, et al. Docosahexaenoid acid supplementation

decreases liver but content in children with non-alcoholic fatty liver

44
 disease:double blind randomized controlled clinical trial. Arch Dis Child
2011:2-4.
13. PERKENI. 2006. Konsensus Pengelolaan dan Pencegahan Diabetes Mellitus
Tipe 2 di Indonesia. http: //www.perkeni.net [16 Oktober 2016]
14. Longo DL, Kasper DL, Jameson JL, et al. Diabetes Mellitus Dalam Harrisons
Principles of Internal Medicine. 18th ed. USA : Mc Graw Hill Company. 2012
Chapter 334.
15. Salzler Michael J C, Crowford James M, Kumar V. Pankreas Dalam Robbins
Buku Ajar Patologi. Vol 2. Edisi 7. Jakarta : EGC. 2007. hal. 718.
16. Yunir E, Soebardi S. Terapi Non Farmakologis Pada Diabetes Melitus dalam
Buku Ajar Penyakit Dalam. Jilid III. Edisi V. Jakarta : Balai Penerbit FKUI.
2009. hal. 1891.
17. Kardika, I.B.W., Herawati, S. & Yasa, I.W.P.S., 2013. Preanalitik dan
Interpretasi Glukosa Darah untuk Diagnosis Diabetes Melitus
18. Fatimah & Noor, R., 2015. Diabetes Melitus Tipe 2. Majority. Vol. 4 No.5
19. Luwiharto, d.J. & Ginanti, d.P.D., 2014. Diabetes Melitus. Prodia
Occupational Health Institute.
20. Pamolango, M.A., Wantouw, B. & Sambeka, J., 2013. Hubungan Riwayat
Diabetes Melitus pada Keluarga Dengan Kejadian Diabetes Melitus
Gestational pada Ibu Hamil di PKM Bahu Kec Malalayang Kota
Manado.ejournal keperawatan

21. Hermanto, T., W, S. & Banjarnahor, D., 2012. Korelasi Antara HOMA-IR Ibu
Diabetes Melitus Gestasiona Trimester tiga dengan luaran maternal dan
Neonatal. Majalah Obstetri & Ginekologi, Vol. 20 No.3

22. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2006. Pedoman Pengendalian

Diabetes Melitus dan Penyakit Metabolik. Jakarta: Dirjen Pengendalian
Penyakit dan Penyehatan Lingkungan.
23. Handayani, Veni H., dan Satriono. (2012). Pengaruh Suplementasi Minyak
Zaitun Extra Virgin Terhadap Kolesterol Total dan Trigliserida Subjek
Hiperkolesterolemia, Laporan Penelitian, Dinas Kesehatan Provinsi NTB.

45
24. Fehri, B., Aiache, J.M., Mrad, S., Korbi, S., and Lamaison, J.L. (1996). Olea
Europea L : Stimulant, anti-ulcer, anti-inflamatory effects. Boll. Chim. Pharm.
(1): 42-49. [serial on line]. http://www.plantzafrica.com/
medmonographs/oleaeuropafric.pdf. [23 Desember 2016].
25. Johnson. 2005. Olive Oil. Nature International Weekly Journal of Science:
Arthritis Today
26. Kinanthi. 2009. Minyak zaitun (Sumber Lemak Nabati). [serial on line].
http://kinanthidiah.multiply.com/journal/item/4/. [ 19 Januari 2017].
27. Perona, Javier S et al. 2007. Consumption of Virgin Olive Oil Influences
Membrane Lipid Composition and Reglukosates Intracellular Signaling in
Elderly Adult With Typ2 Diabetes Mellitus. 256-262
28. Kahn, Ronald C et al.. 2006. Joslins Diabetes Mellitus. Fourth Edition.
Lippincot William & Wilkins.
29. Cicerale, S., Conlon, X., Barnett, N., Sinclair, A., Keast, R. 2008. The
influence of heat on biological activity and concentration of oleocanthal a
natural anti-inflammatory agent, in Asia Pacific journal of clinical nutrition :
proceedings of the Nutrition Society of Australia, HEC Press, McKinnon, Vic.
30. Ghanbari, R., Anwar, F., Alkharfy, KM., Gilani, AH., Saari, N. 2012. Valuable
Nutrients and Functional Bioactives in Different Parts of Olive (Olea europaea
L.): A Review. Int. J. Mol. Sci. 13, 3291-3340.
31. Nugraheni, K. 2012. Pengaruh pemberian minyak zaitun ekstra virgin
terhadap profil lipid serum tikus putih (rattus norvegicus) strain sprague
dawley hiperkolesterolemia. Semarang [ Artikel Penelitian].
32. Fito, M., Torre, RDL., Albaladejo, MF., Khymenetz, O., Marrugat, J., Covas,
MI. 2007. Bioavailability and antioxidant effects of olive oil phenolic
compounds in humans. 43, no. (4) : 375-381.
33. Listyorini, P.I., 2013. Uji Keamanan Extrak Kayu Jati (Tectona Grandis L.F)
Sebagai Bio-larvasida Aedes Aegypti terhadap Mencit. Unnes Public Health
Journal

46
34. Listyorini, P.I., 2013. Uji Keamanan Extrak Kayu Jati (Tectona Grandis L.F)
Sebagai Bio-larvasida Aedes Aegypti terhadap Mencit. Unnes Public Health
Journal.

35. Harkness, J. E., and J.E. Wagner. 1989. The Biology and Medicine of Rabbit
and Rodents. 2nd Edition. Lea & Febiger. Philadelpia.

36. Ganong, W. F. 1999. Fisiologi Kedokteran Edisi ke-4. Jonathan Oswari.

Terjemahan: Petrus Andrianto. Penerbit Buku Kedokteran E. G. C., Jakarta.

37. Saputro, Rendra. 2012. Peningkatan Jumlah Leukosit Dan Gambaran

Histologis Ginjal (Ren) Mencit (Mus musculus L) Jantan Galur Swiss Setelah
Pemberian Extrak Minyak Ikan Gabus. [perpustakaan.uns.ac.id]

38. Diana, Fivi Melva. 2012. Omega 3. Jurnal Kesehatan Masyarakat.

39. Falchs P et All. 2014. The Effect of n-3 Fatty Acids On Glucose Homeostasis
and Insulin Sensitivity.
40. Underwood JCE. 1992. General and Systemic Pathology. Edinburgh London
Madrid Melbourne New York and Tokyo : Churchill Livingstone.
41. Sherwood L. 2001. Fisiologi Manusia : Dari Sel ke Sistem. Ed ke-2. Alih
bahasa: Brahn U, editor: Beatricia IS. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC
42. Guyton AC. 1994. Fisiologi Kedokteran (Textbook of Medical
Physiology).Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran (EGC).
43. Chang-Chen KJ, Mullur R, Bernal-Mizrachi E. -cell failure as a complication
of diabetes. Rev Endocr Metab Disord. 2008; (9): 329-43.

47