LAMPIRAN

A. Diagram Alir
1. Preparasi Mikroba Uji

Bahan

Disiapkan kultur murni bakteri uji

Dibuat deret larutan Mac Farland

Dibuat pengenceran masing-masing bakteri

Disetarakan kekeruhannya

Diambil 3 atau 4 tetes dari pengenceran 10-5

Dituang ke dalam media NA

Diinkubasi 24 jam
sampai 42 jam pada suhu
37oC

A
A
 Hasil

2. Pengujian secara Difusi Sumuran

Bahan

Disiapkan petridis berisi NA

Dibuka petridis secara aseptis

Dibuat sumuran pada petridis

Dibuat bulatan NA pada sumur

Dimasukkan ke dalam beaker glass berisi alkohol

Ditetesi Antibioti
k

A
 Diinkubasi pada suhu 37oC selama
2 jam

Diamati zona bening

Diukur diameter

Hasi
l

3. Pengujian secara Difusi Paper Disk

Bahan

Disiapkan petridis berisi media NA

Diambil paper disk

Dicelupkan ke dalam beaker glass

yang berisi senyawa antibiotik

A
 Diletakkan ke dalam petridis
berisi bakteri uji

Diinkubasi pada suhu 37oC selama

2 jam

Diamati zona bening

Diukur diameter

Hasi
l

B. Dokumentasi

Gambar 1. Metode difusi sumuran Gambar 2. Metode difusi cakram

BAB III. METODOLOGI PRAKTIKUM

3.1 Waktu dan Tempat
Adapun waktu dan tempat praktikum ini dilaksanakan adalah pada hari
Senin, tanggal 4 November 2019 pukul 14:00 WIB di Laboratorium Mikrobiologi
Pangan dan Industri Program Studi Teknologi Hasil Pertanian Fakultas Pertanian
Universitas Syiah Kuala, Darussalam, Banda Aceh.

3.2 Alat dan Bahan

Adapun alat yang digunakan pada praktikum ini adalah petridis, gelas kimia,
pipet tetes, pelobang gabus no. 4, jangka sorong/penggaris, jarum ose. Sedangkan
bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah senyawa uji berupa antibiotik
(ekstrak jahe, ekstrak daun sirih atau minyak atsiri lainnya yang mengandung
antibiotik), kultur murni bakteri uji (seperti bakteri E. coli, Streptococus sp. dan
Salmonella sp.), media nutrient agar (NA), deret larutan standar Mac Farland dan
alkohol 70%.

3.3 Prosedur Percobaan

Adapun prosedur percobaan pada praktikum ini adalah sebagai berikut.
3.3.1 Preparasi Mikroba Uji
Disiapkan kultur murni bakteri uji seperti kultur murni E. coli, Streptococus
sp. dan Salmonella sp. Dibuat deret larutan standard Mac Farland. Dibuat
pengenceran masing-masing bakteri ke dalam media BPW (Buffered Peptone Water)
atau NaCl fisiologis sebanyak 10-5 pengenceran dan disetarakan kekeruhannya
dengan larutan standar Mac Farland II (konsentrasi mikroba 6.108 CFU/ml). Diambil
3 atau 4 tetes dari tabung reaksi pengenceran 10-5 dan dituangkan ke dalam media
padat (media NA). Diinkubasi selama 24 jam sampai 42 jam pada suhu 37oC.

3.3.2 Pengujian secara Difusi Sumuran

Disiapkan beberapa petridis berisi media nutrient agar (NA) yang telah
ditumbuhi bakteri uji. Dibuka petridis secara aseptis dan dibuat sumuran pada petridis
dengan menggunakan pelubang. Diambil bulatan NA pada sumur yang dibuat dengan
jarum ose secara hati-hati sehingga NA disekelilingnya tidak tergores/rusak.
Dimasukkan bulatan NA tersebut dalam beaker gelas berisi alkohol. Ditetesi
antibiotik (ekstrak daun sirih, ekstrak jahe atau minyak atsiri lainnya) ke dalam
petridis yang telah dibuat lubang. Diinkubasi pada suhu 37 oC selama 2 jam (petridis
tidak diletakkan terbalik). Diamati zona bening yang terbentuk dan diukur diameter
zona beningnya menggunakan jangka sorong (zona bening yang terbentuk
menunjukkan daya hambat bakteri oleh antibiotik).

3.3.3 Pengujian secara Difusi Paper Disk

Disiapkan beberapa petridis berisi media nutrient agar (NA) yang telah
ditumbuhi bakteri uji. Diambil kertas paper disk dan dicelupkan ke dalam beaker
gelas yang berisi senyawa antibiotik (ekstrak minyak jahe, daun sirih atau minyak
atsiri lainnya) selama 10 menit. Diletakkan kertas paper disk yang telah berisi
senyawa antibiotik ke dalam petridis berisi bakteri uji. Diinkubasi pada suhu 37 oC
selama 2 jam (petridis tidak diletakkan terbalik). Diamati zona bening yang terbentuk
dan diukur diameter zona beningnya menggunakan jangka sorong (zona bening yang
terbentuk menunjukkan daya hambat bakteri oleh antibiotik).

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Pengamatan

Kelompok Metode Zona Bening (cm)
1 Sumuran 0 cm
Cakram 0 cm
2 Sumuran 0 cm
Cakram Sereh wangi 1 cm
3 Sumuran 0 cm
Cakram 0 cm
4 Sumuran 0 cm
Cakram Sereh wangi 0,6 cm