TEKNIK

ISOLASI Spread
Plate
Metode
Mengisolasi suatu mikroba ialah
memisahkan mikroba tersebut dari Pour
lingkungannya di alam dan Plate
Metode
menumbuhkannya sebagai biakan
murni dalam medium buatan. Streak
Plate
Metode
 Spread Plate Alat dan Bahan
Metode

Menginokulasi kultur
mikroba secara Spreader Bunsen Kultur Murni
pulasan/sebaran di Bakteri
permukaan media
agar yang telah
memadat.

Larutan Pipet Media NA

BPW Volume
 Cara Kerja Spread Plate Metode
1. Buatlah pengenceran 4. Bakar spreader yang
10-1 – 10-6 dari kultur sebelumnya telah
dicelupkan dalam
murni bakteri dengan
larutan pengencer. alkohol, biarkan dingin.

5. Tebarkan/sebarkan
2. Ambil tabung reaksi kultur bakteri dengan
yang mengandung spreader secara
kultur murni bakteri, merata dan biarkan
buka dan bakar leher sampai permukaan
tabung. agar mengering.
7. Bandingkan pertumbuhan
3. Pindahkan 0,1 ml dari tiap-tiap pengenceran 6. Setelah permukaan
kultur bakteri secara dan bandingkan agar mengering,
aseptis ke pertumbuhannya dengan selanjutnya inkubasikan
permukaan media hasil teknik spread plate secara terbalik selama 24
NA dalam cawan pada percobaan 2 (sterilisasi jam pada suhu kamar dan
petri. secara filtrasi). amati pertumbuhannya.
 Pour Plate Alat dan
Metode Bahan

Menginokulasi medium
agar yang sedang mencair
pada temperatur 45-50°c
Media NA dalam Cawan petri Kultur murni
dengan suspensi bahan
tabung reaksi steril bakteri
yang mengandung
mikroba, dan
menuangkannya ke dalam
cawan petri steril.
Pipet Volume Bunsen
 Cara Kerja Pour Plate Metode
1. Dinginkan media NA
dalam tabung reaksi sampai
suhu ± 45 – 50°C (cirinya :
terasa hangat dikulit/tidak
‘kemranyas’).
2. Buka tutup tabung
yang mengandung
kultur murni bakteri,
dan bakar leher botol.
3. Pindahkan 1 ml kultur
murni bakteri ke dalam
tabung reaksi yang
mengandung NA secara kultur murni bakteri ke dalam
aseptis.
6. Setelah agar memadat
diinkubasi terbalik pada suhu
kamar selama 24 jam.
Inkubasi terbalik dilakukan
setelah agar memadat. Amati
pertumbuhannya.
5. Goyangkan perlahan-
lahan untuk mencampur
kultur bakteri dengan NA
sampai homogen.
4. Bakar leher tabung di atas Penggoyangan petri jangan
bunsen, dan tuangkan media terlalu kuat. Pada saat
NA yang telah mengandung penuangan media, petri bisa
diletakkan dalam radius
cawan petri. maksimal 20 cm dari sumber
api.
 Streak Plate Alat dan
Metode Bahan

Umumnya digunakan untuk

mengisolasi koloni mikroba
pada cawan agar sehingga
didapatkan koloni terpisah dan Media NA dalam Kultur murni
merupakan biakan murni. cawan petri bakteri
Cara ini dasarnya ialah
menggoreskan suspensi bahan
yang mengandung mikroba
pada permukaan medium agar
yang sesuai pada cawan petri. Jarum Ose Bunsen
 Cara Kerja Streak Plate Metode
2. Ambil 1 ose kultur murni
1. Panaskan jarum ose bakteri dan goreskan pada
hingga memijar di atas permukaan media agar dimulai
bunsen, kemudian pada satu ujung. Perhatikan
dinginkan. Gunakan ose teknik penggoresan! (lihat
yang telah dingin untuk Gambar 3, 4, 5, 6). Ose
menggores pada disentuhkan pada permukaan
permukaan media agar media agar dalam cawan petri,
dalam cawan petri. sewaktu menggores ose
dibiarkan meluncur di atas
permukaan agar.

3. Setiap kali 4. Inkubasikan

menggoreskan ose secara terbalik pada
untuk kuadran suhu kamar selama
berikutnya, pijarkan 24 jam dan amati
ose terlebih dahulu pertumbuhannya.
dan biarkan dingin.
 TEKNIK
PENGENCERA Alat dan Bahan

N
Pengenceran adalah
melarutkan atau
melepasan mikroba dari
substratnya ke dalam air Pipet Ukur 1 ml Tabung Erlemeyer 100 ml Vortex
sehingga lebih mudah
penanganannya.

Garam Timbangan Sampel

Fisioligis Analitik
 Langkah-Langkah Pengenceran
(Sampel Padat)
1. Sediakan garam fisiologis steril
sebanyak 45 ml dalam erlemeyer 100
ml dan 9 ml garam fisiologis steril
dalam tabung reaksi.
2. Timbang sampel yang akan
diencerkan sebanyak 5gr.
3. Campurkan 5gr sampel ke dalam
45 ml garam fisiologis steril.
4. Homogenenisasikan sampel
hingga larut dalam garam fisiologis
menggunakan vortex.
5. Pipet 1 ml sampel dari larutan diatas
masukan ke dalam tabung reaksi yang
berisi 9 ml garam fisiologis (10^-2)
homogenkan. Lakukan pengeceran
selanjutnya dengan cara yang sama
sampai pengenceran yang dibutuhkan.
6. Pipet 1 ml atau 0,1 ml sampel dari
pengenceran yang akan dihitung
dan ditanam di cawan petri yang
berisi media.
 Langkah-Langkah Pengenceran
(Sampel Cair)
1. Sediakan garam fisiologis steril
sebanyak 9 ml garam fisiologis steril
dalam tabung reaksi.
2. Ambil sampel yang akan
diencerkan sebanyak 1 ml
menggunakan pipet.
3. Campurkan 1 mL sampel ke dalam
9 ml garam fisiologis steril (10-1)
4. Homogenenisasikan sampel
hingga larut dalam garam fisiologis
dengan vortex.
5. Pipet 1 ml sampel dari larutan
diatas masukan ke dalam tabung
reaksi yang berisi 9 ml garam
fisiologis (10-2) homogenkan.
Lakukan pengeceran selanjutnya
dengan cara yang sama sampai
pengenceran yang dibutuhkan.
6. Pipet 1 ml atau 0,1 ml sampel dari
pengenceran yang akan dihitung
dan ditanam di cawan petri yang
berisi media.
 TEKNIK PENGENCERAN

Gambaran Teknik
Pengenceran
 Video Praktik
Isolasi dan pengenceran

Klik Link dibawah ini :

Isolasi
( https://youtu.be/aCaP07nhBUA )

Pengenceran
( https://youtu.be/mFLyvm-wXPc )
( https://youtu.be/K-nUd6_6RRE )
( https://youtu.be/UEkG8lewIVg )