BIOASSAY – UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA DAN BIOAUTOGRAFI

Tujuan : Praktikum mampu melakukan uji daya hambat mikroba menggunakan metode
cakram
Bahan dan alat :
• Ekstraksi bioaktif:
a) daun mangrove (Kel 1 dan 2) : Etil Asetat, metanol
b) bunga dan buah mangrove (Kel 3 dan 4) : Etil Asetat
c) Ulva (5 dan 6) : Etil Asetat, metanol
d) Sargassum (7 dan 8) : n-heksana
• Bakteri E. coli
• Media MHA (Mueller Hinton Agar)
• Antibiotik (kloramfenikol)
• Plate silika gel
• Pelarut KLT : n-heksana dan (Etil Asetat 1 : metanol 3)
• Paper disk
• Pipet tetes
• Timbangan analitik
• Cawan petrik
• Vortex
• Inkubator
• Penggaris

1. Paper disk

Persiapan ekstrak sampel Persiapan cawan petri Persiapan pencapitan

nanopartikel. Ket: cawan petri telah di Ket: pencapitan telah di
Ket: ektraks sampel dari sterilisasi sterilisasi
larutan stok yang telah di
buat
 Persiapan paper disk Penetesan ekstrak sampel Pemberian tanda setiap
Ket: paper disk dimasukkan Ket: Ekstrak sampel konsentrasi
kedalam cawan petri kosong, diteteskan ke dalam paper Ket: paper disk yang telah
di letakkan dengan disk secara perlahan diletakkan akan di berikan
memberikan jarak. berdasarkan konsentrasinya. tanda dengan menggunakan
Ekstrak ditetesnya sebanyak nomor, sesuai dengan
20 mikro dengan konsentrasi yang digunakan
menggunakan mikropipet

Pemanasan pencapit Pemindahan paper disk ke Proses wrapping cawan petri

Ket: Pencapin yang dalam cawan petri berisi Ket: cawan petri kemudian di
digunakan untuk media. wrap menggunakan plastik
memindahkan paper disk Ket: paper disk yang telah di wrapping agar tetap steril
dipanaskan terlebih dahulu teteskan ekstrak kemudian
untuk menjaga agar tetap dipindahkan kedalam cawan
steril petri berisi media MHA yang
telah memadat.

Proses Inkubasi
Ket: inkubasi dilakukan
selama 24 jam pada suhu
37oC

2. KLT
Persiapan ekstrak sampel
Ket: Siapkan ekstrak sampel
nanopartikel (0,5 mg, 1mg,
2 mg) dari larutan stok
Penumbuhan dan suspensi
bakteri uji
Ket: Tumbuhkan bakteri uji
(E. coli) pada media NA
miring di tabung reaksi.
Suspensikan bakteri yang
tumbuh pada media NB
(inkubasi 37oC, 24 jam)
Inokulasi bakteri stok pada
media MHA
Ket: inokulasi bakteri
dilakukan sebanyak 20
mikroliter dengan media
sebanyak 20 ml.

Pembuatan KLT

Pengambilan ekstrak sampel Penetesan ekstrak sampel Elusi plat ke dalam wadah
Ket: ekstrak sampel diambil Ket: ekstrak sampel di berisi eluen
dengan menggunakan teteskan sebanyak 3 tetes ke Ket: eluen yang digunakan
sedotan plat silika gel yaitu metanol dan etil asetat
dengan perbandingan 3:1.
Ditunggu hingga eluen
mencapai garis atas.

Peletakan plat dalam cawat Penuangan media MHA ke

petri
Ket: plat di letakkan ke dalam
cawan petri yang telah di
sterilkan.
cawan petri
Ket: tuang media MHA
dituangkan ke dalam cawan
petri dan didiamkan hingga
memadat

Pengamatan bercak pada

plas KLT yang sudah di elusi
Ket: pengamatan
menggunakan sinal UV 254
nm
Proses wrapping cawan petri Peletakan sekitar bunsen Proses Inkubasi
Ket: cawan petri kemudian Ket: cawan petri yang telah di Ket: inkubasi dilakukan
di wrap menggunakan wrab kemudian diletakkan di selama 24 jam pada suhu 37oC
plastik wrapping sekitaran bunsen untuk
menjaga agar tetap steril
HASIL
Kontrol

Negatif positif

Sebelum inkumasi sesudah inkumasi

Ket: hasil yang dilakukan Ket: hasil yang didapatkan
sebelum diinkubasi pada setelah diinkubasi pada suhu
suhu 37 drajat selama 24 37 drajat selama 24 jam.
jam Ekstrak daun mangrove tidak
dapat menghambat
pertumbuhan bakteri yang
diujikan yaitu bakteri E. coli
karena tidak tampak zona
jernih atau bening pada titik-
 titik tertentu yang
ada di cawan petri
Hasil perhitungan diameter zona hambat
(+) Kontrol positif
Diameter paper disk (CD) = 0,6 cm
Diameter zona bening (AB) = 3,3 cm
Diameter zona hambat = AB - CD = 3,3 - 0,6 = 2,7 cm