BAB 3

ISOLASI MIKROORGANISME METODE CAWAN TUANG

1.1 CAPAIAN PEMBELAJARAN

Setelah mengikuti praktikum “ISOLASI MIKROORGANISME METODE CAWAN
TUANG”, mahasiswa diharapkan dapat :
a. Menerapkan prinsip isolasi mikroorganisme metode cawan tuang dengan
baik dan benar
b. Menggunakan pipet mikro, vortex mixer dengan baik dan benar
c. Membuat pengenceran biakan secara aseptik dengan baik dan benar
d. Memindahkan biakan ke dalam cawan petri steril secara aseptic dengan
baik dan benar
e. Mengisolasi mikroorganisme dengan metode cawan tuang dengan baik dan
benar

1.2 METODOLOGI
ALAT DAN BAHAN
 Cawan petri steril
 Tabung reaksi steril
 Pembakar spritus
 Korek api
 Pipet mikro 100 – 1000 µL
 Tip pipet mikro steril
 Pipet ukur steril 10 mL
 Ball pipette
 Vortex mixer
 Incubator oven
 Autoclave
 Air steril
 Ethanol 70%
 Media (NA/PDA)
 Biakan campuran
mikroorganisme
CARA KERJA
 Tuliskan kode kelompok dan tanggal pada permukaan luar dasar cawan
petri .Beri nomor di bagian atasnya.
 Ambil 6 tabung reaksi berisi air steril masing-masing 9 ml, letakkan
di rak tabung reaksi dan beri penomoran.
 Kocok tabung reaksi berisi suspensi campuran bakteri (disediakan)
dengan gerakan kesamping, jangan sampai sumbatnya basah.
 Langkah selanjutnya dapat dilihat pada gambar 3-1 berikut.

Gambar 3-1 Urutan proses isolasi metode cawan tuang

 Ambil 1 ml campuran biakan secara aseptic dengan pipet mikro,

pindahkan ke tabung reaksi 1 , kocok.
 Ambil 1 ml dari tabung reaksi 1 campuran biakan secara aseptic dan
pindahkan ke tabung reaksi 2, kocok. Lakukan hal yang sama sampai
kelima tabung reaksi berisi bakteri.
 Dari masing-masing tabung, pindahkan 1 ml campuran biakan secara
aseptic ke 5 petridish steril (beri penomoran dan keterangan
pengenceran pada petridish sesuai dengan asal biakan tabung)
 Untuk variasi pengenceran tanyakan pada dosen pembimbing
 Tambahkan agar cair bersuhu ± 40C secukupnya ke dalam petridish
secara aseptik. Dengan posisi cawan petri di meja kerja, putar-
putarkan cawan petri searah jarum jam sebanyak 5 kali kemudian
berlawanan arah jarum jam juga sebanyak 5 kali. Selanjutnya putarkan
cawan petri hingga membentuk angka delapan sebanyak 5 kali. Kemudian
biarkan beku. Bungkus dengan kertas pembungkus dan inkubasi selama 2
x 24 jam dalam incubator oven dalam keadaan terbalik (tutup cawan di
bawah) pada suhu yang sesuai.
 Amati diameter (mm), warna, ketinggian koloni, tepian, bentuk,
konsistensi serta bau, lihat gambar 3-2 berikut.
 Gambar 3-2 Bentuk, tepian dan elevasi koloni hasil isolasi

 CATATAN : setelah pengamatan, jangan dibuang atau dibersihkan

untuk digunakan dalam perhitungan koloni (colony counter).
1.3 HASIL PENGAMATAN
Data yang didapat ditampilkan dalam tabel di bawah. Untuk tiap cawan
diamati bentuk, tepian dan elevasi tiap koloni yang tumbuh. Untuk kontaminan
(bila ada) dilaporkan tersendiri.

KOLONI ……………

PENGENCERAN………………….. BENTUK, TEPIAN, ELEVASI

KOLONI …………..

PENGENCERAN …………………. BENTUK, TEPIAN, ELEVASI

KOLONI …………..

PENGENCERAN …………………….. BENTUK, TEPIAN, ELEVASI

KOLONI …………

PENGENCERAN …………….. BENTUK, TEPIAN, ELEVASI

KOLONI ………….

PENGENCERAN ………………… BENTUK, TEPIAN, ELEVASI

KOLONI …………

PENGENCERAN ………………… BENTUK, TEPIAN, ELEVASI