EFEK EKSTRAK BIJI JINTAN HITAM (Nigella

sativa) TERHADAP JUMLAH SPERMATOZOA

MENCIT YANG DIINDUKSI GENTAMISIN

Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA KEDOKTERAN

OLEH :

Hania Asmarani Rahmanita

NIM: 1111103000048

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH

JAKARTA

1435 H/2014 M
 KATA PENGANTAR

Assalamualaikum Warahmatullahi Wabarakatuh.

Puji syukur saya panjatkan kehadirat Allah SWT atas segala nikmat dan karunia
yang telah diberikan, sehingga saya dapat menyelesaikan penelitian ini tepat pada
waktunya. Saya menyadari tanpa bantuan, bimbingan dan do’a dari berbagai
pihak, sulit bagi saya untuk menyelesaikan penelitian ini. Oleh karena itu, saya
mengucapkan terima kasih kepada:

1. Prof. DR. (hc) dr. M.K. Tadjudin, Sp. And selaku Dekan FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta yang memberikan kesempatan kepada saya untuk
menempuh pendidikan di Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN
Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. Dr. Witri Ardini, M. Gizi, Sp. GK selaku Ketua Program Studi dan untuk
seluruh dosen Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta yang telah membimbing saya selama menjalani masa
didik di Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN Syarif Hidayatullah
3. dr. Nouval Shahab, SpU, Ph.D, FICS, FACS. dan dr. Nurmila, M. Kes.
selaku dosen pembimbing yang bersedia menyediakan waktu serta selalu
sabar memberikan arahan, bimbingan, dan motivasi kepada peneliti dari
awal hingga akhir penelitian ini.
4. Dr. Flori Ratna Sari, PhD dan dr. Lucky Briliantina, M.Biomed selaku
penguji sidang laporan penelitian ini
5. Ayahanda dr. Yuli Prapancha Satar, MARS serta ibunda Lydia
Rachmaningtyas yang menjadi inspirasi bagi peneliti, atas segala
dukungan dan doa yang tiada hentinya selalu dipanjatkan untuk
kesuksesan peneliti dalam segala aktivitas dalam hidup

v
 6. Kedua adik tercinta Maitsa Nadhila Amalina dan Shabrina Jeihan Mazaya
atas segala dukungan dan canda tawa yang dibagi
7. Lisna Fauziah, S.Far,Apt yang telah meluangkan waktunya untuk
membimbing dan membantu peneliti dalam melakukan proses ekstraksi
8. Suryani, S.Si yang telah meluangkan waktunya untuk memberikan kritik
dan saran selama proses penelitian berlangsung
9. Bapak Satpam dan Office BoyFKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta yang
senantiasa membukakan pagar saat penelitian di hari libur
10. Teman seperjuangan peneliti, Herlina Rahmah dan Nadisha Refira yang
selalu ada dan siap membantu, memberikan semangat serta saran dan
kritiknya selama penelitian berlangsung
11. Teman – teman VLDL tercinta, Leily Badrya, Yofara Maulidia Muslihah,
Madinatul Munawwaroh, Tiara Putri Methas, Raeiza Olyvia, dan Muflikha
Mayaziatas segala bentuk motivasi yang diberikan
12. Sahabatku, Laksmita Oktaviani, Shoffie Rahmawati, dan Meilinda Sari
yang setia menemani di kala suka dan duka serta menjadi penyemangat
bagi peneliti
13. Dimas Bagus Pamungkas, Johan Lazuardi, Fahrizal Haris Harahap,
Radhita Mufida dan Indah Nunik yang membantu selama proses penelitian
14. Seluruh teman – teman PSPD 2011 atas segala bantuan dan semangat yang
diberikan selama 3 tahun pendidikan preklinik

Saya menyadari laporan penelitian ini masih jauh dari kesempurnaan. Oleh karena
itu, peneliti menerima adanya kritik dan saran yang membangun untuk penelitian
ini

Demikian laporan penelitian ini saya tulis, semoga bermanfaat bagi masyarakat
dan para pembaca pada umumnya.

Ciputat, 11 September 2014

Peneliti

vi
 ABSTRAK
Hania Asmarani Rahmanita. Program Studi Pendidikan Dokter. Efek
Ekstrak Biji Jintan Hitam (Nigella sativa) terhadap Jumlah Spermatozoa
Mencit yang Diinduksi Gentamisin.

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek ekstrak biji jintan hitam (Nigella
sativa) terhadap jumlah sperma pada mencit yang diinduksi oleh gentamisin.
Mencit strain DDY jantan dibagi menjadi 3 kelompok dengan masing – masing 5
ekor mencit. Kelompok 1 (K1) merupakan kontroltanpa perlakuan, kelompok 2
(K2) diinduksi gentamisin dengan dosis 5 mg/kgBB secara injeksi intraperitoneal
selama 10 hari dan kelompok 3 (K3) diinduksi gentamisin selama 10 hari seperti
K2 dan diberikan ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa)dengan dosis 1 g/kgBB
i.p selama 21 hari selanjutnya. Semua mencit diterminasi pada hari ke-39 dan
diambil bagian vesicula seminalis untuk pembuatan preparat. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa gentamisin menurunkan jumlah sperma mencit secara
bermakna. Jumlah sperma pada kelompok yang ditambahkan ekstrak biji jintan
hitam (Nigella sativa) lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok yang hanya
diinduksi gentamisin. Ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) meningkatkan
jumlah sperma mencit yang diinduksi gentamisin.
Kata kunci : Gentamisin, Jumlah Spermatozoa, Ekstrak Biji Jintan Hitam (Nigella
sativa), Mencit

ABSTRACT
Hania Asmarani Rahmanita. Medical Education Program. The Effect of
Black Seed Extract (Nigella sativa) on Spermatozoa Count of Gentamycin
Induced Mice.

The aim of the study is to determine the effect of Nigella sativa seed extract on
spermatozos count ofgentamycin induced mice. Male DDY mice were divided
into three groups, with five animals for each group. Gentamycin was administered
via intraperitoneal injection at 1 g/kg body weight and extract of Nigella sativa
was similarly injected at a dose 1 g/kg body weight for the next 21 days. All mice
were sacrified on day 39 and seminal vesicle was excised in order to make wet
preparation of sperm. Group 1 (K1) served as control, group 2 (K2) was induced
by gentamycin, and group 3 (K3) was inducedby gentamycin and was followedby
adding Nigella sativa. Gentamycin decreased the number of spermatozoa. Higher
spermatozoa count demonstrated in group treated with Nigella sativa (K3)
compare with that in the groupinduced by gentamycin. Black Seed (Nigella
sativa) extractimprove the number of spermartozoa of gentamycin induced mice
Keywords: Gentamycin, Sperm Count, Black Seed (Nigella sativa) Extract, Mice

vii
 DAFTAR ISI

LEMBAR JUDUL.................................................................................................... i
LEMBAR PERNYATAAN...................................................................................... ii
LEMBAR PERSETUJUAN..................................................................................... iii
LEMBAR PENGESAHAN...................................................................................... iv
KATA PENGANTAR.............................................................................................. v
ABSTRAK................................................................................................................ vii
DAFTAR ISI............................................................................................................. x
DAFTAR GAMBAR................................................................................................ xi
DAFTAR TABEL..................................................................................................... xi
DAFTAR SINGKATAN.......................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN............................................................................................ xiii
BAB 1 PENDAHULUAN......................................................................................... 1
1.1.Latar Belakang...................................................................................................... 1
1.2.Rumusan Masalah................................................................................................. 3
1.3.Hipotesis............................................................................................................... 3
1.4.Tujuan Penelitian.................................................................................................. 3
1.4.1. Tujuan Umum.......................................................................................... 3
1.4.2. Tujuan Khusus......................................................................................... 3
1.5.Manfaat Penelitian................................................................................................ 4
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA............................................................................... 4
2.1.Landasan Teori..................................................................................................... 4
2.1.1. Anatomi Organ Reproduksi Pria.............................................................. 5
2.1.1.1 Testis....................................................................................... 5
2.1.1.2 Duktus Sistem Reproduksi Pria.............................................. 8
2.1.1.3 Kelenjar Aksesorius................................................................ 10
2.1.2. Fisiologi Sistem Reproduksi Pria............................................................ 11
2.1.2.1. Kontrol Hormon Reproduksi Pria.......................................... 11
2.1.2.2. Spermatogenesis.................................................................... 11
2.1.2.3. Maturasi Sperma di Epididimis.............................................. 16
2.1.2.4. Penyimpanan Sperma............................................................. 17
2.1.2.5. Semen.................................................................................... 17
2.1.3. Infertilitas Pria ....................................................................................... 18
2.1.3.1 Model Infertilitas Pria pada Hewan Coba 21
2.1.4. Analisis Semen........................................................................................ 21
2.1.5. Gentamisin.............................................................................................. 26
2.1.5.1 Struktur Kimia....................................................................... 26
2.1.5.2 Mekanisme Kerja................................................................... 26
2.1.5.3 Pengaruh Gentamisin terhadap Fertilitas................................ 27
2.1.6. Jintan Hitam (Nigella sativa).................................................................. 28
2.1.6.1 Kandungan Kimiawi Jintan Hitam (Nigella sativa)............... 30
2.1.6.2 Efek biji Jintan Hitam (Nigella sativa) terhadap Infertilitas... 32
2.2.Kerangka Teori ................................................................................................... 10
2.3.Kerangka Konsep................................................................................................
2.4.Definisi Operasional

viii
BAB 3 METODE PENELITIAN............................................................................ 36
3.1. Desain Penelitian................................................................................................. 36
3.2. Waktu dan Tempat Penelitian.............................................................................. 36
3.2.1 Waktu Penelitian...................................................................................... 36
3.2.2 Tempat Penelitian.................................................................................... 36
3.3. Populasi dan Sampel........................................................................................... 36
3.3.1 Populasi................................................................................................... 36
3.3.2 Sampel..................................................................................................... 36
3.3.2.1. Kriteria Inklusi....................................................................... 36
3.3.2.2. Kriteria Eksklusi..................................................................... 36
3.3.3 Besar Sampel........................................................................................... 37
3.4. Alat dan Bahan.................................................................................................... 38
3.4.1. Alat Penelitian......................................................................................... 38
3.4.2. Bahan Penelitian....................................................................................... 38
3.5. Identifikasi Variabel............................................................................................. 38
3.5.1 Variabel Terikat....................................................................................... 38
3.5.2 Variabel Bebas......................................................................................... 38
3.6. Alur Penelitian..................................................................................................... 39
3.7. Cara Kerja Penelitian........................................................................................... 40
3.7.1. Tahap Persiapan....................................................................................... 40
3.7.2. Tahap Pengujian...................................................................................... 41
3.7.3. Tahap Pengolahan.................................................................................... 42
3.8. Organisasi Penelitian........................................................................................... 42
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN.................................................................. 43
4.1. Hasil Penellitian.................................................................................................. 44
4.2. Analisis Data....................................................................................................... 46
4.3. Pembahasan......................................................................................................... 46
BAB 5 SIMPULAN DAN SARAN......................................................................... 49
5.1. Simpulan.............................................................................................................. 49
5.2. Saran.................................................................................................................... 49
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................... 50
LAMPIRAN.............................................................................................................. 54

ix
 DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1. Potongan sagital organ reproduksi pria.................................. 5
Gambar 2.2. Testis potongan sagital........................................................... 6
Gambar 2.3. Perdarahan testis..................................................................... 7
Gambar 2.4. Testis dan struktur disekitarnya.............................................. 10
Gambar 2.5. Kontrol hormone reproduksi pria............................................ 11
Gambar 2.6. Proses Spermatogenesis.......................................................... 12
Gambar 2.7. Spermatogenesis dan hubungannya dengan sel sustentakular 14
Gambar 2.8. Spermiogenesis....................................................................... 15
Gambar 2.9. Spermatozoon matang............................................................ 15
Gambar 2.10.Tipe aglutinasi berdasarkan letak penempelan....................... 24
Gambar 2.11.Morfologi sperma................................................................... 26
Gambar 2.12.Struktur kimia gentamisin...................................................... 27
Gambar 2.13.Bunga Nigella sativa.............................................................. 30
Gambar 2.14.Biji Nigella sativa................................................................... 31
Gambar 2.15.Struktur kimia thymoquinone................................................. 33
Gambar 4.1. Gambaran mikroskopik jumlsh sperma K1,K2,K3................ 44
Gambar 6.1. Surat keterangan sehat mencit................................................ 54
Gambar 6.2. Surat hasil determinasi tumbuhan.......................................... 54
Gambar 6.3. Bukti pembelian etanol 70%.................................................. 56
Gambar 6.4. Proses pencucian biji jintan hitam (Nigella sativa)................ 57
Gambar 6.5. Proses penjemuran biji jintan hitam (Nigella sativa)........... 57
Gambar 6.6. Proses penghalusan biji jintan hitam (Nigella sativa)............ 57
Gambar 6.7. Proses maserasi....................................................................... 57
Gambar 6.8. Proses filtrasi.......................................................................... 58
Gambar 6.9. Filtrat mengandung pelarut.................................................... 58
Gambar 6.10. Proses evaporasi..................................................................... 58
Gambar 6.11. Ekstrak kental biji jintan hitam (Nigella sativa).................... 58
Gambar 6.12. Adaptasi hewan sampel.......................................................... 59
Gambar 6.13. Pengukuran BB awal............................................................. 59
Gambar 6.14. Induksi gentamisin 5mg/kgbb i.p pada K2 dan K3.............. 59
Gambar 6.15. Pemberian ekstrak Nigella sativa 1g/kgbb i.p pada K3.... 59
Gambar 6.16. Proses Terminasi.................................................................... 59
Gambar 6.17. Pengambilan vesikula seminalis mencit................................. 59
Gambar 6.18. Pengeluaran cairan darivesikula seminalis mencit................ 60
Gambar 6.19 Sperma dilarutkan dalam larutan george................................ 60
Gambar 6.20 Sperma diamati di bawah mikroskop..................................... 60

x
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1. Komposisi Semen.......................................................................... 18

Tabel 2.2. Distribusi abnormalitas hasil analisis sperma terhadap
infertilitas ...................................................................................................... 21
Tabel 2.3. Klasifikasi derajat aglutinasi......................................................... 23
Tabel 2.4. Derajat motilitas sperma............................................................... 24
Tabel 2.5. Perbandingan kriteria normal analisis semen berdasarkan WHO
1999 dan WHO 2010..................................................................... 26
Tabel 2.6. Komposisi biji Nigella sativa........................................................ 31
Tabel 2.7. Komposisi fixed oil Nigella sativa................................................ 32

xi
 DAFTAR SINGKATAN

ATP : Adenosine triphosphate

BTB : Blood Testis Barrier
cAMP : Cyclic Adenosine Monophosphate
DDY :Deutschland, Denken, Yoken
FSH : Follicle Stimulating Hormone
GnRH : Gonadotropin Releasing Hormone
I.P : Intraperitoneal
LH : Luteinizing Hormone
ROS : Reactive Oxygen Species

xii
 BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Infertilitas merupakan salah satu hal yang kerap dibicarakan dan banyak
terjadi di masyarakat. Menurut WHO, definisi dari infertilitas adalah gangguan
reproduksi dimana tidak terjadi kehamilan setelah 12 bulan atau lebih pada
pasangan yang aktif berhubungan seksual secara teratur tanpa kontrasepsi.1
Menurut data dari WHO terdapat sekitar 50-80 juta pasangan mengalami
infertilitas di dunia. Pada tahun 2010 didapatkan data insidensi infertilitas
sebanyak 48.5 juta dari pasangan suami-istri di seluruh dunia, terutama di negara
berkembang.2-4 Tingkat infertilitas tertinggi terdapat di Benua Asia dan Afrika
diantaranya Indonesia, Nepal, Republik Afrika Selatan dengan insidensi masing –
masing (4,2% , 9,1% , dan 6,9%)5 Pria memilliki kontribusi yang cukup besaryaitu
sekitar 50% mengenai masalah infertilitas tersebut.6 Pada pria, sekitar 32,4%
infertilitas berkaitan dengan kualitas semen yang kurang baik seperti jumlah
sperma yang dihasilkan rendah, morfologi sperma yang abnormal, dan motilitas
sperma yang mengalami gangguan. Salah satu faktor penyebab penurunan
kualitas semen yang paling utama adalah produksi Reactive Oxygen Species
yang berlebihan seperti ion hidroksil, superoksida, hidrogen peroksida, hipoklorit,
dan radikal peroksil. Yang menyebabkan stres oksidatif dan menurunkan kualitas
sperma. Stres oksidatif dapat disebabkan oleh faktor eksogen dan endogen seperti
merokok, efek sinar ultraviolet, dan metabolisme obat seperti antibiotik salah
satunya adalah gentamisin.7-8
Gentamisin merupakan antibiotik golongan aminoglikosida yang bekerja
membunuh bakteri terutama gram negatif dengan cara mencegah sintesis protein, .
Resistensi pada gentamisin tergolong rendah,namun terdapat beberapa efek
samping dari gentamisin terutama adalah ototoksik dan nefrotoksik. Selain itu,
terdapat efek samping lainnya yang berhubungan dengan fertilitas yaitu
menyebabkan keabnormalan maturisasi sperma sehingga terjadi penurunan
produksi jumlah sperma, kelainan morfologi,dan gangguan motilitas sperma.9

1
 2

Secara normal, terdapat mekanisme dalam tubuh untuk melindungi diri dari
akumulasi ROS yaitu dengan produksi antioksidan. Antioksidan enzimatik terdiri
dari Superoxide dismutases (SOD), katalase, dan Gluthathione peroxidase.
Sedangkan, antioksidan non enzimatik diantaranya Vitamin C, Vitamin E, dan
karotenoid.10-11 Antioksidan juga didapatkan dari berbagai jenis tanaman
diantaranya biji jintan hitam (Nigella sativa) 10,12
Ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) dikenal juga dengan sebutan
habatussaudah berasal dari biji tumbuhan nigella sativa, yaitu tumbuhan biseksual
dari Family Ranunculaceae yang dipercaya oleh masyarakat sebagai obat dari
berbagai penyakit sejak zaman Rasulullah.12 Rasulullah shallallahu „alaihi wa
sallam bersabda,

‫ إِلَّا مِهَ السَّام‬،ٍ‫سَُْدَا َء شِفَاءٌ مِهْ كُلِّ دَاء‬

ّ ‫إِنَّ ٌَ ِذيِ الحَبَّتَ ال‬

“Sesungguhnya pada habbatussauda‟ terdapat obat untuk segala macam

penyakit, kecuali kematian” 12
Seorang ulama dan dokter muslim yang terkenal Ibnu Qayyim Al-Jauziyah dalam
kitab tibbun nabawi menjelaskan tentang habbatu saudah,
ّ‫ كل‬:‫ًءٍ بِأَمْزِ رَبٍِّا أي‬
ْ َ‫ تُدَمِّزُ كُلَّ ش‬:‫ مِثْلُ َقُْلًِِ تعالى‬، »ٍ‫ «شِفَاءً مِهْ كُلِّ دَاء‬:ًُُ‫ ََ َقُْل‬،‫ًٌَََِ كَثٍِ َزةُ الْمَىَافِعِ جِدًّا‬
ِ‫ ََتَدْخُلُ فًِ الْأَمْزَاضِ الْحَا ّرَةِ الٍَْا ِبسَت‬،ِ‫ ًٌَََِ وَافِعَتٌ مِهْ جَمٍِعِ الْأَمْزَاضِ الْبَارِ َدة‬،ُ‫شًء ٌقبل التَّدْمٍِزَ ََ َوظَائِ َزي‬

“Habbatus sauda memiliki sangat banyak manfaat, sabda Rasulullah shallallahu

„alaihi wa sallam, “obat untuk segala macam penyakit”, sebagaimana firman
Allah, “Menghancurkan segala sesuatu dengan perintahan Rabb-nya”. Yaitu
segala sesuatu yang bisa hancur dan semisalnya. Dan habbatus sauda
bermanfaat menyembuhkan segala macam penyakit yang bersifat dingin dan
penyakit yang bersifat panas dan kering.” 12
Dari penelitian terdahulu diketahui Nigella sativa memiliki banyak manfaat
bagi tubuh salah satunya sebagai antioksidan. Pada penelitian juga didapatkan
bahwa Nigella sativa dapat meningkatkan kualitas dari sperma.10,12
Sebelumnya telah dilakukan penelitian mengenai pengaruh gentamisin
terhadap jumlah spermatozoa dan penelitian mengenai efek Nigella sativa
terhadap model hewan infertilitas dengan metode lainnya. Hingga saat ini belum
 3

ada penelitian yang melaporkan efek Nigella sativa terhadap model hewan
dengan infertilitas yang diinduksi oleh gentamisin. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui efek Nigella sativa terhadap jumlah sperma akibat gentamisin. Selain
itu bertujuan untuk menambah khasanah pengetahuan mengenai efek Nigella
sativa terhadap jumlah spermatozoa sehingga dapat dijadikan alternatif
pengobatan untuk infertilitas pada pria.

1.2 Perumusan Masalah

Berdasarkan uraian di dalam latar belakang maka dapat dirumuskan masalah
penelitian yaitu: Apakah ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) dapat
menimbulakn efek terhadap jumlah spermatozoa pada mencit yang diinduksi
gentamisin?

1.3 Hipotesis
Pemberian ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) dapat meningkatkan
jumlah spermatozoa zmencit yang diinduksi gentamisin.

1.4 Tujuan
1.4.1 Tujuan Umum
Mengetahui efek pemberian ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa)
terhadap jumlah sperma mencit yang diinduksi gentamisin.
1.4.2 Tujuan Khusus
Mengetahui perbedaan jumlah spermatozoa mencit yang diberikan
gentamisin disertai pemberiaan ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa)
dan tanpa pemberian ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa).

1.5 Manfaat
1.5.1 Bagi Peneliti
- Sebagai salah satu syarat mendapatkan gelar Sarjana Kedokteran di
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri
Syarif Hidayatullah Jakarta.
 4

- Mendapatkan pengetahuan dan pengalaman dalam melakukan

penelitian menggunakan hewan coba di bidang kesehatan terutama
kasus fertilitas.

1.5.2 Bagi Masyarakat

- Memberikan bukti mengenai efektivitas dari ekstrak biji jintan hitam
(Nigella sativa) terhadap jumlah sperma.
- Memperkenalkan obat herbal sebagai pilihan lain pengobatan untuk
infertilitas pada pria.

1.5.3 Bagi Institusi

- Memberikan hasil berupa data tambahan mengenai efek pemberian
ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) terhadap jumlah sperma akibat
stres oksidatif yang diinduksi antibiotik gentamisin.
- Menambah referensi penelitian tentang kasus infertilitas, sehingga
dapat dijadikan dasar untuk penelitian selajutnya di Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta.
 BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Landasasan Teori

2.1.1. Anatomi Organ Reproduksi Pria

Gambar 2.1. Potongan sagital organ reproduksi pria. Terlihat organ reproduksi
pria terdiri dari testis, sistem duktus, dan kelenjar aksesorius

Sumber: Tortora,2009

Organ reproduksi pria seperti terlihat pada gambar 2.1 terdiri dari:

a. Testis berfungsi untuk memproduksi sperma dan mensekresikan hormon.

b. Sistem duktus (terdiri dari epididimis, duktus deferens, duktus ejakulatorius,
dan urethra) berfungsi untuk penyimpanan dan pematangan sperma serta
merupakan jalur transportasi sperma.
c. Kelenjar aksesoris(vesikula seminalis, prostat, dan kelenjar bulbouretra)
berfungsi untuk memberikan nutrisi kepada sperma dan mensekresikan cairan
yang keluar bersama sperma.

5
 6

d. Struktur pendukung lainnya seperti penis yang berfungsi untuk mendukung

testis.13

2.1.1.1 Testis
A. Struktur Testis
Testis adalah sepasang organ yang berbentuk oval. Testis kiri berada di bagian
yang lebih rendah dari testis kanan di dalam skrotum dengan panjang 5 cm dan
diameter 2,5 cm. Berat tiap testis (satu buah) yaitu 10-15 gram.13-14 Terlihat pada
gambar 4.2 secara histologi, testis terdiri dari 2 lapisan yaitu tunica albugenia
yang merupakan kapsul putih yang terdiri dari jaringan ikat dan tunica vaginalis
yaitu membran serosa yang menutupi testis.13Tunica albuginea membentuk septa-
septa di dalam testis yang membagi testis menjadi bebeapa bagian – bagian yang
disebut lobus. Tiap 200-300 lobus terdapat satu sampai tiga tubulus semeniferus.
Tubulus semeniferus merupakan tempat terjadinya spermatogenesis.13

Gambar 2.2. Testis potongan sagital. Terlihat dua lapisan testis yaitu tunica
vaginalis dan tunica albuginea
Sumber: Tortora,2009
 7

B. Perdarahan Testis
Testis diperdarahi oleh arteri testikular. Arteri testikular berasal dari aorta
setinggi pembuluh darah renal. Arteri testikular beranastomosis dengan arteri
yang menuju ke vas deferens memberikan nutrisi dan oksigen untuk vas deferens
dan epididimis. Pleksus vena pampiniform merupakan satu-satunya vena di
bagian testis, di bagian kanan vena ini menuju ke vena cava inferior dan di bagian
kiri menuju ke vena renalis.14

C. Jalur Limfatik Testis

Jalur limfatik pada testis seperti jalur limfatik pada umumnya yaitu bersama
dengan aliran dari vena dan melewati nodus limfatikus para aorta setinggi
pembuluh darah renal.14

Gambar 2.3 Perdarahan testis. Terlihat arteri testikular dan pleksus vena
pampiniform
Sumber: Clinical Anatomy,2006
 8

D. Persarafan Testis
Testis dipersarafi oleh serat-serat saraf simpatik Thoracal10 melalui pleksus
renalis dan aorta. Serat-serat aferen tersebut menghantarkan nyeri dari testis ke
arah pinggang.14

2.1.1.2 Duktus Sistem Reproduksi Pria

A. Duktus testis
Duktus terdiri dari tubulus seminiferus yang berlanjut menjadi bagian duktus
yang sangat pendek dan membentuk jaring – jaring duktus dalam testis yang
disebut rete testis. Kemudian setelah rete testis akan terdapat duktus yang
bergelung yang disebut duktus eferen dalam epididimis dan menuju duktus
epididimis.13

B. Epididimis
Epididimis seperti terlihat pada gambar 2.4 berbentuk menyerupai koma
berukuran panjang 4 cm yan berada di bagian batas posterior dari testis. Tiap
epididimis terdiri dari duktus epididimis yang bergulung Epididimis terbagi
menjadi bagian caput epididimis yaitu bagian yang berada paling superior dari
epididimis yang berhubungan dengan duktus eferen dari testis, bagian corpus
epididimis yaitu bagian yang lebih sempit di pertengahan epididimis, serta bagian
cauda epididimis yang merupakan bagian terkecil dan berada paling inferior. Pada
bagian cauda epididimis berhubungan dengan duktus (vas) deferens. Duktus
epididimis memiliki panjang 6 m apabila tidak dalam keadaan tergulung. Disusun
oleh epitel berlapis semu dan otot polos. Epididimis berfungsi untuk pematangan
sperma terjadi selama 14 hari.13

C. Duktus Deferens
Duktus deferens/vas deferens memiliki panjang sekitar 45 cm, berjalan keatas
dari bagian batas posterior epididimis melaluifuniculus spermaticus menuju
rongga pelvis membentuk putaran di daerah ureter dan berjalan turun ke arah
vesica urinaria. Bagian yang melebar di bagian pangkal disebut ampulla. Lapisan
 9

mukosa duktus deferens terdiri dari epitel berlapis semu dan lamina
propria(jaringan ikat areolar). Lapisan muskularisnya terdiri dari muscularis
longitudinal di bagian terluar dan terdalam serta muscularis sirkular pada bagian
tengah lapisan muskularis.13

D. Funiculus Spermaticus
Funiculus spermaticus merupakan struktur yang berjalan secara ascending
keluar dari skrotum. Terdiri duktusdeferens, arteri testikular, vena di bagian testis
(pleksus pampiniformis), saraf otonom, pembuluh limfatik, dan
MusculusCremaster.13

E. Duktus Ejakulatorius
Duktus ejakulatorius memiliki panjang 2 cm dan terbentuk dari gabungan
duktus-duktus yang berasal dari vesika seminalis sertaampulla duktus deferens.
Duktus ejakulatorius berada superior dari prostat dan berjalan secara inferior
anterior dari prostat. Duktus ejakulatorius berakhir pada uretra pars prostatika.13

F. Uretra
Uretra pada laki-laki berfungsi untuk sistem ekskresi urin dan sistem
reproduksi. Berfungsi untuk mengalirkan urin dan semen. Berukuran panjang 20
cm. Terbagi menjadi tiga bagian yaitu:
 Uretra pars prostatika
Memiliki panjang 2-3 cm dan berjalan melewati prostat.
 Uretra pars membranosa
Kelanjutan dari uretra pars prostatika yaitu uretra yang berjalan secara inferior
melewati otot perineum. Memiliki panjang sekitar 1 cm.
 Uretra pars spongiosa
Memiliki panjang 15-20 cm dan berakhir pada orificium uretraeksterna.15
 10

Gambar 2.4 Testis dan struktur disekitarnya

Sumber: Salladin,2004

2.1.1.3 Kelenjar Aksesoris

Kelenjar aksesoris pada sistem reproduksi pria terdiri dari vesikula seminalis ,
prostat, dan kelenjar bulbouretra.13

A. Vesikula Seminalis
Terdiri dari jaringan ikat dan lapisan otot polos dibawahnya. Duktus pada
vesika seminalis membentuk cabang-cabang yang menyerupai labirin.Vesika
seminalis mensekresikan cairan kekuningan yang menyusun 60% dari semen.
Cairan ini akan meninggalkan duktus di vesika seminalis menuju duktus
ejakulatorius.13,15

B. Prostat
Memiliki ukuran 4 cm diukur dari satu sisi ke sisi lainnya, sekitar 3 cm dari
atas ke bawah, dan sekitar 2 cm dari depan ke belakang. Terletak mengelilingi
duktus ejakulatorius inferior dari vesika urinaria. Stroma prostat terdiri dari
jaringan ikat dan otot polos seperti vesika seminalis.13,15
 11

C. Kelenjar Bulbouretra (Kelenjar Cowper)

Kelenjar bulbouretra atau kelenjarcowper adalah kelenjar yang berwarna
kecoklatan berbentuk sferis berdiameter 1 cm. Kelenjar bulbouretra
mensekresikan cairan yang berfungsi sebagai lubrikan dari penis dan menetralkan
keasaman akibat urin yang tertinggal pada daerah uretra yang dapat merusak
sperma.13,15

2.1.2. Fisiologi Sistem Reproduksi Pria

2.1.2.1 Kontrol Hormon Reproduksi Pria

Gambar 2.5 Kontrol hormon reproduksi pria

Sumber: Sherwood,2010

1. Hipothalamus menghasilkan hormon GnRH.

2. Menstimulasi hipofisis anterior menghasilkan hormon FSH dan LH
yang bekerja dengan mekanisme aktivasi cAMP.
 12

3. LH bekerja pada sel leydig yang berfungsi untuk meregulasi

sekresi testosteron.
4. FSH bekerja pada sel sertoli yang berfungsi pada spermatogenesis.
5. Testosteron yang dihasilkan oleh sel leydig memberikan negative-
feedback terhadap LH dengan 2 cara, yaitu dengan bekerja pada
hipotalamus menghambat GnRH sehingga secara tidak langsung
FSH dan LH yang dihasilkan juga menurun dan dengan bekerja
terhadap hipofisis anterior dengan menghambat LH secara selektif.
6. Inhibin yang dihasilkan oleh sel sertoli memiliki negative-feedback
terhadap FSH dengan bekerja pada hipofisis anterior dan
menghambat FSH secara selektif.16

2.1.2.2 Spermatogenesis

Gambar 2.6 Proses Spermatogenesis

Sumber: Sherwood,2010

Seperti terlihat pada gambar 2.6, spermatogenesis adalah proses terjadinya

pembelahan pada sel germinal menjadi dua yang disebut meiosis dan empat sel
 13

anakan berdiferensiasi menjadi spematozoa (sperma). Terjadi di tubulus

seminiferus selama masa aktif seksual disebabkan oleh stimulasi hormon-hormon
anterior pituitary gonadotropic, dimulai pada rata-rata usia 13 tahun dan berlanjut
sepanjang kehidupan, berlangsung selama 64- 74 hari dari spermatogonium
menjadi sperma 16-17

Spermatogenesis meliputi 3 tahapan yaitu:

 Proliferasi melalui mitosis
 Meiosis
 Packaging/Spermiogenesis16

A. Mitosis dan Meiosis

Sel sperma berasal dari primordial germ cells yang terbentuk di yolk sac. Pada
usia 5-6 minggu kehamilan sel-sel primordial bermigrasi menuju embrio dan
berkumpul di gonadal ridge. Lalu berdeferensiasi menjadi spermatogonia, yang
menyusun sepanjang perifer dari tubulus seminiferus, diluar blood testis barrier
(BTB).Sel sertoli berada di dinding tubulus seminiferus yang berfungsi untuk
memberi nutrisi bagi sel sperma. Sel germinal harus tetap berhubungan dengan sel
sertoli agar dapat bertahan hidup, dan kontak dipertahankan oleh jembatan
sitoplasma. Tight junctiondiantara sel-sel sertoli yang berdekatan di dekat lamina
basal membentuk BTB yang mencegah molekul-molekul besar masuk dari
jaringan interstisial dan bagian dari tubulus dekat lamina basalis (kompartemen
basalis) menuju regio dekat lumen tubulus (kompartemen adluminal) dan lumen.
Spermatogonia memperbanyak diri melalui proses mitosis, menghasilkan dua
tipe sel anakan yaitu spermatogonia tipe A dan tipe B. Spermatogonia tipe A tetap
berada diluar BTB dan terus memperbanyak diri dari mulai pubertas sampai
meninggal. Sehingga persediaan sel gamet tidak akan habis dan tetap fertil sampai
usia tua.
Spermatogonia tipe B bermigrasi mendekati lumen tubulus dan berdiferensiasi
menjadi sel-sel yang sedikit lebih besar yang disebut spermatosit primer. Sel-sel
ini harus melewati BTB dan bergerak menuju lumen tubulus.Di depan dari
spermatosit primer, tight junction diantara dua sel sustentakular dirusak,
sementara tight junction yang baru, terbentuk di sisi yang lain. Spermatosit
 14

bergerak maju ke arah lumen dan terpisah dari agen komponen darah, seperti
antibodi, serta ditahan oleh bantuan tight junction. Setelah terisolasi dari darah,
spermatosit primer mengalami meosis I, menghasilkan dua sel haploid spermatosit
sekunder. Tiap spermatosit sekunder mengalami meiosis II, menghasilkan 4
spermatid. Setiap tahap semakin mendekati lumen tubulus.Proses spermatogenesis
yang tersisa yaitu spermiogenesis. Tidak lagi terjadi pembelahan sel, tetapi terjadi
pematangan dari tiap spermatid menjadi spermatozoa.15,17-18

Gambar 2.7Spermatogenesis dan hubungannya dengan sel sustentakular

Sumber: Saladin,2004

B. Packaging/Spermiogenesis
Saat spermatid pertamakali terbentuk, spermatid masih memiliki karakteristik
dari sel-sel epitelioid, tetapi lama-lama mereka mulai berdeferensiasi dan
memanjang membentuk spermatozoa.
 15

Gambar 2.8 Spermiogenesis. Pada proses ini, spermatids membuang sitoplasma

ekor bertambah panjangdan menjadi spermatozoa
Sumber:Saladin,2004

Gambar 2.8.Spermatozoon matang (a) Struktur (B) Kepala dan ekor

spermatozoon (TEM)

Sumber:Saladin,2004

Spermatozoon terdiri dari 2 bagian, yaitu Head (kepala) yang dilindungi

oleh akrosomdan tail (ekor)
 16

2.1.2.1 Kepala (Head)

Kepala sperma terdiri dari nukleus yang terkondensasi berisi materi
kromosom yang kaya akan DNA dengan sitoplasma yang tipis dan lapisan
membran sel di permukaannya, bagian kepala dilindungi oleh akrosom yaitu
lisosom yg termodifikasi yang terbentuk dari apparatus golgi, berisi enzim yang
identik dengan yang dimiliki lisosom diantaranya yaitu hyaluronidase (dapat
mencerna filamen proteoglikan pada jaringan) dan enzim proteolitik(dapat
mencerna protein)yang berperan dalam penetrasi ovum. Enzim akan bersifat
inaktif sampai pada waktunya sperma berkontak dengan ovum.17-18

2.1.2.2 Ekor (Tail)

Ekor dari sperma dibagi menjadi 3 regio yaitu: midpiece, principal piece,
dan endpiece.Midpiece berbentuk silinder dengan panjang 5-9 µm dan lebar
setengah kali lebar kepala, merupakan bagian yang paling tebal. Terdiri dari
banyak mitokondria yang mengelilingi aksonema dari flagelum. Mitokondria
berfungsi untuk menghasilkan Adhenosine triphosphate (ATP) yang dibutuhkan
untuk pergerakan ekor ketika sperma berjalan di traktus reproduksi wanita.
Principal piece berukuran panjang 40 - 45 µm, bagian terbesar yang
menyusun ekor sperma. Terdiri dari aksonema yang dikelilingi oleh selubung
serat. Terdapat protein unik yang bernama CatSper pada bagian principal tail
yang berfungsi untuk bergerak maju.
Endpiece memiliki panjang 4-5 µm, hanya terdiri dari aksonema dan
merupakan bagian yang paling sempit dari sperma. Banyak mengandung
mitokondria, berperan menghasilkan energi untuk pergerakan sperma.15-17

2.1.2.3 Maturasi Sperma di Epididimis

Setelah pembentukan di tubulus seminiferus, sperma membutuhkan beberapa
hari untuk sampai di epididimis. Sebelumnya, sperma yang berada di tubulus
seminiferus dan sebelum memasuki epididimis merupakan sperma nonmotile dan
tidak dapat memfertilisasi ovum.Setelah sperma sampai di epididimis selama 18-
24 jam, mereka baru bersifatmotile namun protein inhibitor dalam cairan
epididimis menghambat pergerakan dari sperma sebelum terjadinya ejakulasi.18
 17

2.1.2.4 Penyimpanan Sperma

Kedua testis menghasilkan 120 juta sperma setiap hari. Sperma disimpan
dalam jumlah kecil di epididimis dan paling banyak disimpan di vas deferens.
Sperma dapat disimpan di vas deferens selama satu bulan. Selama penyimpanan,
sperma dalam keadaan inaktif dan dihambat oleh substansi inhibitorik dalam
sekret duktus. Setelah ejakulasi sperma menjadi motil, dan juga memiliki
kemampuan untuk memfertilisasikan sel ovum, atau disebut juga proses
maturisasi.
Sel-sel sertoli dan epitel epididimis mensekresikan cairan nutrien yang
diejakulasikan bersama sperma. Cairan ini mengandung hormon-hormon
(termasuk testosteron dan estrogen), enzim-enzim, dan nutrisi yang penting untuk
pematangan sperma.18

2.1.2.5 Semen
Semen adalah cairan yang dikeluarkan pada saat terjadi orgasme. Komposisi
dari semen yaitu cairan dan sperma yang berasal dari vas deferens (sekitar 10%
dari jumlah total), cairan yang disekresikan oleh vesikula seminalis (sekitar 60%),
cairan dari kelenjar prostat (sekitar 30%), dan sedikit dari kelenjar mukosa,
terutama dari kelenjar bulbouretra. Dengan demikian, bagian terbesar menyusun
dari semen adalah cairan vesikula seminalis, yang diejakulasikan paling terakhir.
Cairan prostat memberikan kesan menyerupai susu, cairan dari vesikula
seminalis dan kelenjar mukosa memberikan konsistensi kental pada semen.
Terdapat prostaglandin dengan konsentrasi tinggi pada semen yg berasal dari
vesika seminalis tapi fungsinya pada semen tidak diketahui. Selain itu enzim
pembekuan yang berasal dari cairan prostat menyebabkan fibrinogen dari cairan
vesikula seminalis membentuk koagulum fibrin yang menyebabkan semen
menempel pada bagian vagina yang lebih dalam dimana terdapat serviks.
Koagulum lalu lisis disebabkan oleh fibrinolisin yang terbentuk dari
profibrinolisin prostat.
Volume tiap ejakulasi yaitu sekitar 2,5-3,5 ml setelah beberapa hari tidak
mengalami ejakulasi. Bila ejakulasi terjadi berulang-ulang maka volume semen
dan sperma semakin berkurang. Tiap mililiter semen mengandung sekitar 100 juta
 18

sperma (Normal). Sperma bergerak dengan kecepatan 3 mm/menit di saluran

genital wanita. Sperma mencapai tuba uterina sekitar 30-60 menit setelah
kopulasi.
Sperma dapat bertahan selama beberapa minggu di duktus genital pria, setelah
diejakulasikan dalam semen, bertahan sekitar 24-48 jam pada suhu tubuh. Pada
suhu yang lebih rendah sperma dapat disimpan beberapa minggu dan apabila
dibekukan pada suhu dibawah -100oC sperma dapat disimpan beberapa tahun.17-18

Tabel 2.1 Komposisi Semen

Warna: Putih, Keabuan

Gravitasi Spesifik: 1.028
pH 7,35 – 7,50
Jumlah sperma : Sekitar 100 juta/mL, dengan jumlah sperma abnormal <20%
Komponen lainnya: Berasal dari vesika seminalis (60%
Fruktosa (1,5 – 6,5 mg/mL) dari volume total)
Phosphorylcoline
Ergothioneine
Asam Askorbat
Flavins
Prostaglandin
Spermine Berasal dari prostat (20% dari volume
Asam Sitrat total)
Kolesterol, Fosfolipid
Fibrinolisin, Fibrinogenase
Zink
Asam Fosfat
Fosfat Buffer
Bikarbonat
Hyaluronidase

Sumber: Ganong,2010 (telah diolah kembali)

2.1.3. Infertilitas Pria

Definisi klinis dari infertilitas pria adalah adanya parameter keabnormalan
pada semen laki-laki dari pasangan yang belum dapat mengandung setelah satu
tahun aktif berhubungan seksual secara teratur tanpa kontrasepsi. Menurut WHO,
mendefinisikan faktor infertilitas pria berdasarkan adanya satu atau lebih
keabnormalan pada analisis sperma atau adanya fungsi seksual dan ejakulasi yang
 19

tidak adekuat. Pada 50% pasangan yang tidak memiliki anak, infertilitas pria
ditemukan berkaitan dengan ketidaknormalan parameter semen.19
A. Penyebab infertilitas non-obstructive
1. Kelainan Hormonal
Idiopathic hypogonadotrophic hypogonadism disebabkan oleh defisiensi
dari folicle-stimulating hormone (FSH) dan lutenising hormone (LH).
Penyebab kongenital utama yaitu Kallmann's syndrome yang terjadi satu di
setiap 10.000 laki-laki.
2. Penyebab Genetik
Kelainan jumlah dan struktur kromosom ditemukan pada 5% laki-laki
infertil. Kelainan genetik meliputi mikrodelesi dari kromosom Y, aneuploidi, dan
translokasi kromosom.
3. Variococele
Kerusakan saluran vena menyebabkan gangguan pertukaran panas dari
funikulus spermatikus menyebabkan peningkatan suhu skrotum dan merusak
sperma.
4. Undescend testis
Pajanan testis terhadap suhu intra-abdominal yang tinggi menyebabkan
kerusakan pada proses spermatogenesis.
5. Pajanan Gonadotoksin
Gonadotoksin meliputi rokok, alkohol, insektisida, logam berat
6. Penyebab iatrogenik
Meliputi antiandrogen, steroid, radioterapi, dan kemoterapi
7. Orchitis
Orchitis dapat disebabkan oleh infeksi ascending pada traktus urogenital dan
dapat menyebabkan infertilitas.
8. Torsi testis
Apabila tidak dilakukan tindakan dalam 6 jam, maka dapat menyebabkan
kerusakan dan pengerutan permanen dari testis akibat nekrosis iskemik
9. Trauma testis
10. Tumor testis
11. Infertilitas autoimmune
 20

Antibodi antisperma diproduksi pada infertilitas autoimmune. Sel-sel germinal

secara normal dipisahkan oleh BTB dengan sistem imun. Namun adanya
kerusakan pada BTB menyebabkan sel germinal terpajan sistem imun dan
produksi antibodi antisperma.20

B. Penyebab infertilitas obstruktif

1. Congenital absence of the vas deferens
Dapat bersifat unilateral atau bilateral. Disebabkan oleh dua tipe defek
genetik dan terjadi pada 1% laki-laki infertil.
2. Obstruksi pembuluh darah
Penyebab tersering adalah obtruksi pembuluh darah di regio kanalis
inguinalis atau pelvis setelah operasi hernia.
3. Obstruksi epididimis
Obstruksi setingkat epididimis biasanya disebabkan oleh inflamasi, seperti
infeksi menular seksual atau infeksi traktus urinarius.
4. Obstruksi duktus ejakulatorius
Obstruksi dapat disebabkan oleh kista prostat kongenital atau batu prostat
atau prostatitis.20

C. Penyebab infertilitas saat koitus

1. Disfungsi erektil
2. Ejakulasi prematur
3. Deformitas penis
Pasien dengan hipospadi atau epispadia
4. Anejakulasi
Anejakulasi (anorgasmia) primer dapat terjadi sebagai akibat dari faktor
psikososial atau neurologis seperti penurunan sensitivitas organ genital atau
treshold refleks ejakulasi yang tinggi. Anejakulasi sekunder disebabkan oleh
tindakan operatif pada pelvis atau abdomen yang menyebabkan kerusakan pada
saraf simpatik.20
 21

2.1.3.1 Model Infertilitas Pria pada Hewan Coba

Penelitian mengenai infertilitas pria salah satunya dapat menggunakan hewan
model. Hewan yang paling sering digunakan adalah tikus dan mencit. Untuk
membuat hewan model menjadi infertil dapat mengubah susunan genetik maupun
menggunakan induksi zat kimia.21
Beberapa gen yang berkaitan dengan infertilitas dibagi menjadi beberapa
kelompok yaitu :
1. Gen yang berkaitan dengan defek meiosis
Terdiri dari gen SCP3 dan DMC 1 yang mengganggu pembelahan sperma
pada profase dan metafase meiosis 1
2. Gen yang berkaitan dengan struktur sperma
Diantaranya yaitu defek gen EGR4 yang menyebabkan perubahan struktur
dari sperma yang dihasilkan yaitu kerusakan berpisahnya bagian kepala
dan ekor sperma, kepala sperma yang menekuk ke belakang, dan ekor
sperma yang tefragmentasi
3. Gen yang berkaitan pada protein inti
Defek pada gen TNP1, TNP 2 menyebabkan defek pada perubahan
konversi protein histone sehingga menyebabkan produksi sperma dengan
morfologi abnormal.22
Zat kimia yang digunakan untuk menginduksi infertilitas sebagai
mutagen poten seperti N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) selain itu dapat
digunakan zat kimia yang dapat menginduksi terbentuknya radikal bebas
sehingga menyebabkan stres oksidatif dan merusak sperma, diantaranya
Nitrosamine pada asap rokok dan Colchicine.21

2.1.4. Analisis Semen

Analisis semen merupakan komponen kritikal untuk menentukan infertilitas
pada pria. Lima belas persen pasien dengan abnormalitas pada semen mengalami
infertilitas.

Tabel 2.2. Distribusi abnormalitas hasil analisis sperma terhadap infertilitas

Parameter Semen Insidensi (%)

 22

Adanya abnormalitas 37
Motilitas 26
Asthenospermia 24
Oligospermia 8
Aglutinasi 2
Volume 2
Morfologi 1
Azoospermia 8
Analisis sperma normal 5

Sumber: Parekattil,2012 (telah diolah kembali)

A. Pemeriksaan Makroskopik
Analisis sperma dimulai dengan pemeriksaan makroskopik setelah
pengenceran terjadi. Lima variabel yang dinilai yaitu volume, kekentalan,
warna, koagulasi, dan pH.
1. Tingkat keenceran (Liquefaksi)
Semen akan mengalami pengenceran dan menjadi lebih homogen dan pada
tahap akhir hanya terdapat sedikit area yang tetap mengental. Sampel
mengalami pengenceran total biasanya dalam 15 menit pada suhu kamar,
meskipun dapat mencapai 60 menit atau lebih namun jarang terjadi. Apabila
tidak terjadi pengenceran dalam 60 menit maka harus dilakukan pemeriksaan
berikutnya.23

2. Volume
Volume semen diketahui dengan cara menghitung beratnya, tetapi dapat
juga dihitung langsung. Volume semen yang diejakulasi berasal dari vesikula
seminalis, kelenjar prostat, dengan kontribusi dari kelenjar bulbouretra dan
epididimis.

3. Viskositas
Viskositas dapat diperiksa dengan cara mengambil semen dengan pipet
1,5mm dan biarkan semen jatuh ke bawah akibat gaya gravitasi. Apabila
benang-benang semen yang terbentuk >2 mm maka dikatakan bahwa viskositas
abnormal.
 23

4. Warna
Warna semen dengan tingkat keenceran yang normal dikatakan memiliki
warna abu-abu seperti susu.

5. pH
pH semen bersal dari keseimbangan dari cairan prostat yang bersifat asam
dan sekresi vesika seminalis yang basa. pH semen >7,2.23,24

B. Pemeriksaan Mikroskopik
Parameter pemeriksaan semen berdasarkan kriteria WHO, diantaranya yaitu:
1. Aggregasi/aglutinasi sperma
Mengamati terjadinya aglutinasi spermatozoa dengan sperma atau semen
non sperma lainnya dan juga tempat terjadinya agglutinasi. Agglutinasi dapat
terjadi namun dalam jumlah yang sedikit dan tidak mengganggu motilitas
sperma. Tipe aglutinasi berdasarkan derajat penempelan :

Tabel 2.3. Klasifikasi derajat aglutinasi

Grade 1: Isolated <10 spermatozoa tiap gumpalan,

spermatozoa yang bebas sangat
banyak
Grade 2: Moderate 10-50 spermatozoa tiap gumpalan,
spermatozoa yang bebas cukup
banyak
Grade 3: Large Gumpalan terdiri dari >50
spermatozoa, beberapa spermatozoa
masih bebas
Grade 4: Gross Semua sperma membentuk
gumpalan dan saling berhubungan

Sumber:WHO,2010 (telah diolah kembali)

 24

Tipe aglutinasi berdasarkan tempat penempelan

Gambar 2.9: Tipe aglutinasi berdasarkan letak penempelan

Sumber:WHO,2010

2. Motilitas sperma
Sperma diklasifikasikan sebagai motil atau non motil. Sperma motil akan
diklasifikasikan berdasarkan derajat motilitas. Derajat Motilitas sperma yaitu:

Tabel 2.4 Derajat motilitas sperma

Progressively Motile (PR) Spermatozoa aktif bergerak baik secara linier

atau lingkaran besar
Nonprogressive motility Apabila pergerakan spermatozoa tidak
(NP) menyebabkan pergeseran seperti bergerak
dalam lingkaran yang kecil

Immotile (IM) Non Motil

Sumber: WHO,2010 (telah diolah kembali)

 25

Motilitasnormal yaitu (PR+NP) % =38-42% dan PR =31-34%

3. Vitalitas sperma
Yaitu mengukur fungsi integritas dari membran sel sperma. Pemeriksaan ini
dilakukan terutama apabila ditemukan sperma imotil dalam jumlah yang besar
berfungsi untuk megetahui apakah sperma yang imotil hidup atau mati,
Terdapat dua cara; 1)Cara pewarnaan, apabila membran masih intak maka
kepala sperma tidak akan terwarna. 2) Dengan menggunakan cairan hipotonik,
spermatozoa dengan membran yang intak akan mengalami pembengkakan
membran dalam 5 menit.23

4. Konsentrasi sperma dan jumlah sperma

Konsentrasi sperma dihitung berdasarkan jumlah sperma per unit volume
semen atau dinyatakan dalam juta/mililiter sedangkan jumlah sperma tiap
ejakulasi dihitung berdasarkan volume jumlah spermatozoa di seluruh sperma
yang diejakulasikan dan didapatkan dengan mengalikan konsentrasi sperma
dengan volume sperma.23

5. Morfologi sperma
Spermatozoa normal terdiri dari bagian head (kepala), neck (leher), tail (ekor;
meliputi midpiece dan principal piece) Spermatozoa dikatakan baik apabila baik
kepala dan ekor dalam keadaan normal.
a. Head (kepala) harus halus, memiliki kontur yang teratur, dan secara umum
berbentuk oval. Harus terdapart regio akrosom mencakup 40-70% area kepala.
Tidak terdapat vakuola besar pada regio akrosom dan tidak lebih dari dua
akrosom kecil
b. Midpiece harus ramping, reguler, dan memiliki panjang hampir menyamai
kepala sperma. Aksis utama pada midpiece harus lurus dengan aksis utama
pada kepala sperma.
c. Principal piece harus memiliki kaliber yang sama, lebih tipis dari midpiece
dan memiliki panjang sekitar 45 µm (10 kali panjang kepala)23.24
 26

Gambar 2.10. Morfologi sperma

Sumber:Parekattil,2010

Tabel 2.5 Perbandingan kriteria normal analisis semen berdasarkan WHO 1999
dan WHO 2010

Sumber: WHO,2010

2.1.5. Gentamisin
Gentamisin adalah antibiotik golongan aminoglikosida. Antibiotik lainnya
yang termasuk aminoglikosida adalah streptomisin, amikasin, neomisin,
netilmisin, dan tobramisin.25
 27

2.1.5.1 Struktur Kimia

Aminoglikosida terdiri dari dua atau lebih gula amino yang bergabung
dengan ikatan glikosidik dengan nukleus heksosa di bagian sentral.Heksosa yang
terlibat biasanya baik streptidin atau 2-deoxystreptamine. Gentamisin termasuk ke
dalam aminoglikosida yang hanya memiliki 2 gula amino.9

Gambar 2.11. Struktur kimia gentamisin

Sumber: Yoshizawa,1998

2.1.5.2 Mekanisme kerja

Bersifat bakteriosidal atau membunuh bakteri secara langsung dengan
menghambat sintesis protein. Gentamisin berdifusi melalui kanal aqueous yang
terbentuk oleh protein porin di membran luar bakteri gram negatif agar dapat
masuk ke dalam ruang periplasmik. Transport dari gentamisin melewati membran
sitoplasma (membran dalam) beragantung pada transport elektron karena
dibutuhkan potensial membran listrik agar antibiotik dapat masuk. Fase transport
ini disebut Energy-dependent Phase (EDP1)
Setelah mencapai sel, gentamisin berikatan dengan polisom dan mengganggu
sintesis protein dengan cara menyebabkan misreading dan terminasi prematur
pada translasi mRNA. Menyebabkan protein-protein yang salah, diinsersikan ke
dalam sel, menyebabkan gangguan permeabilitas dan stimulasi lebih lanjut
terhadap transport gentamisin. Fase transport ini disebut energy-dependent
phaseII (EDP2). EDP2 berkaitan dengan kerusakan pada stuktur membran
sitoplasma.8
 28

2.1.5.3 Pengaruh Gentamisin terhadap Fertilitas

Fertilitas ditentukan oleh kualitas, kelainan morfologi, dan kuantitas sperma
yang dihasilkan. Dimana hal tersebut ditentukan pada saat proses
spermatogenesis. Salah satu mekanisme yang mengganggu spermatogenesis
adalah produksi Reactive Oxygen Species (ROS) yang berlebihan pada sperma.
Hal ini menyebabkan terjadinya fragmentasi DNA nukleus, peroksidasi lipid, dan
pindah silang (cross link) dari protein yang dapat menyebabkan kematian sel.
Pada semen, produksi radikal bebas berasal dari dua sumber yaitu dari leukosit
dan sperma. Seperti sel-sel lainnya, spermatozoa juga mengalami "oxygen-
paradox" dimana spermatozoa membutuhkan ROS untuk stimulasi pada
fosforilasi tirosin pada proses kapitasi. Namun ROS yang berlebihan dapat
mengganggu fungsi dan kehidupan sel. Spermatozoa sangat sensitif terhadap
ancaman ROS karena banyaknya jumlah polyunsaturated fatty acids di membran
dan kurangnya kemampuan untuk memperbaiki DNA. Peningkatan ROS
berkaitan dengan penurunan motilitas sperm, retensi dari residu sitoplasma, dan
kelainan pada midpiece sperma. Kerusakan pada DNA sperma menyebabkan
gangguan pada spermatogenesis.
Antioksidan berfungsi melindungi spermatozoa dari abnormalitas yang
diinduksi oleh ROS. Antioksidan mengikat ROS yang dihasilkan leukosit,
mencegah fragmentasi DNA, mengurangi kerusakan sitoplasma pada
spermatozoa, mencegah maturasi sperma premature, dan menstimulasi
spermatozoa.
Cairan semen mengandung antioksidan seperti superoxide dismutase,
catalase, dan glutathione peroxidase/glutathione reductase selain antioksidan
non-enzim sepeti vitamin C, urate, vitamin E, piruvat, glutathione, albumin,
vitamin A, ubiquitol, taurine. dan hypotaurine
Gentamisin mengganggu proses spermatogenesis dengan menginduksi
kerusakan oksidatif dengan meningkatkan pembentukan radikal bebas,
peroksidasi lipid, dan menurunkan level antioksidan.27
 29

2.1.6. Jintan Hitam(Nigella sativa)

Jintan hitam (Nigella sativa Linn) atau yang dikenal dengan sebutan
Upakunchika, Ajaji, Kalvanjika, Kalika, Kunchika, Kalunji,
Habbatusaaudah.Dalam bahasa inggris dikenal sebagai small fennel, black
cumin, dan black flower. Di Indonesia sendiri dikenal dengan sebutan jintan
hitam . Tanaman ini memiliki daerah habitat asli di kawasan Punjab, Himachal
Pradesh , Bihar, dan Assam yaitu kawasan – kawasan di India.Tetapi, sekarang
jintan hitam sudah banyak dikembangbiakkan di seluruh kawasan di dunia
seperti di Libanon, Syria, Israel, dan Eropa Selatan.28,30
Tanaman Nigella sativa tumbuh hingga mencapai tinggi 45 cm setiap
tahunnya, berbatang halus, berbau harum, bunganya berwarna biru pucat dengan
ukuran 2-2,5 cm dengan 5-10 kelopak; dengan panjang daun berukuran sekitar
2,5-5 cm; struktur biji sedikit datar, membujur, kaku, dan berbentuk seperti
corong, kecil, panjangnya berukuran 0,2 cm dan lebarnya 0,1 cm, berwarna
hitam. Tanaman ini mulai berbungan dan berbuah pada bulan Januari – April
dan mulai ditanam pada tanah yang kering pada bulan November – April dan biji
mulai berkecambah setelah 10 – 15 hari.28,30
Berdasarkan ilmu toksonomi dan klasifikasi tumbuhan jintan
hitamdikelompokkan sebagai berikut:28

Kerajaan (Kingdom) : Plantae

Divisi (Division) : Magnoliophyta
Kelas (Class) : Magnoliopsida
Bangsa (Order) : Ranunculales
Suku (Family) : Ranunculaceae
Marga (Genus) : Nigella
Jenis (Species) : Nigella sativa
 30

Gambar 2.12. Tanaman Nigella sativa

Sumber : Padmaa,2010

Gambar 2.13. Bunga Nigella sativa

Sumber: : Padmaa,2010
 31

Gambar 2.14 biji Nigella sativa

Sumber : Padmaa,2010

2.1.6.1 Kandungan Kimiawi Jintan Hitam (Nigella sativa)

A. .Biji Nigella sativa
Pada penelitian secara kualitatif ditemukan bahwa kandungan di dalam biji
Nigella sativa meliputi sterols, triterpenes, tannins, flavonoid, cardiac glycoside,
alkaloid, saponin, volatile oil, coumarins, glukosinolat, dan anthraquinon. 29-31

Tabel 2.6 Komposisi biji Nigella sativa

Constituent %Range (w/w)

Oil 31-35,5
Protein 16-19,9
Carbohydrates 33-34
Fiber 4,5-6,5
Ash 3,7-7
Saponins 0,013
Moisture 5-7

Sumber: Nickavar,2003 (telah diolah kembali)

 32

B. Komposisi minyak Nigella sativa

Analisis kimia dari minyak Nigella sativa menunjukkan adanya baik fixed oil
dan volatile oil. Dimana fixed oil merupakan komponen terbesar dan sekitar
0,4%-0,7% dari berat biji merupakan volatile oil.

Tabel 2.7 Komposisi fixed oil Nigella sativa

Constituent %Range (w/w)

Linoleic acid 44,7-56
Oleic acid 20,7-24,6
Linolenic acid 0,6-1,8
Arachidic acid 2-3
Palmitoleic acid 3
Eicosadienoid acid 2-2,5
Palmitic acid 12-14,3
Stearic acid 2,7-3
Myristic acid 0,16
Sterols 0,5

Sumber: Nickavar, 2003 (telah diolah kembali)

Komposisi volatile oil dari penelitian Adamu et al pada minyak Nigella

sativa2-methyl-5 (1-methyl ethyl)-bicyclo{3.1.0}hex-2-ene sebagai unsur utama
(62,28%) dari minyak Nigella sativa dan alfa-pinene merupakan unsur penyusun
dengan jumlah terkecil (2,28%) Berdasarkan penelitian El Tahir et al
menunjukkan bahwa minyak Nigella sativa mengandung 18,4-24% thymoquinone
dan 46% berbagai jenis alkohol primer (monoterpene) seperti p-cymene dan
pinene.30Menurut Omar et al dalam volatile oil terdapat thymoquinone,
dithomoquinone, thymohydroquinone, thymol, carvacrol, oxy-coumarin, 6-
methoxy-coumarin dan 7-hydroxy-coumarin, alfa-hedrin.30

C. Komposisi Non-minyak
1. Mineral
 33

Terdapat 0,5-1% Kalsium, 0,6% Fosfor, 0,6% K, 0,1% Na dari berat total
biji.
2. Saponin
Saponin terbanyak yaitu glycoside α-hiderin atau helixin atau melanthin.
3. Alkaloid
Tiga tipe alkaloid yang ditemukan yaitu indazole nigelicine, isoquinolone
nigellimine, dan indazole alkaloid nigellidine.31

2.1.6.2 Efek Nigella sativa terhadap Infertilitas

Infertilitas salah satunya ditandai dengan penurunan jumlah spermatozoa yang
dihasilkan dari jumlah normal. Reactive Oxygen Species (ROS) bersifat toksik
terhadap sperma sehingga sperma menjadi abnormal dan sedikit yang fungsional.
Salah satu zat yang terkandung dalam biji Nigella sativa adalah
thymoquinone. Thymoquinone merupakan antioksidan poten yang bekerja sebagai
superoxidant anion scavenger.31-34 Hal ini menunjukkan bahwa thymoquinone
berperan pada tahap intersepsi radikal bebas yaitu dengan mendonorkan
elektronnya pada radikal bebas. 35-37

Gambar 2.12. Struktur kimia thymoquinone

Sumber : Subhash, 2008

 34

5.2 Kerangka Teori

Hipotalamus

Gentamisin
GnRH

Hipofisis Anterior
Menurunkan Peroksidasi
antioksidan lipid
LH FSH
Pembentukan
radikal bebas
Sel leydig Sel sertoli

Testosteron Spermatogenesis

Stress
Spermatozoa Penurunan
Oksidatif
Sel leydig Kuantitas dan
kualitas sperma

Kerusakan
DNA Sperma

= Mengaktivasi

= Menginhibisi
Antioksidan Thymoquinone Nigella
sativa
 35

5.3 Kerangka Konsep

Gentamisin

Mencit

Infertilitas Nigella
sativa

Jumlah Jumlah Jumlah

sperma sperma sperma
tetap meningkat berkurang
 36

2.4 Definisi Operasional

No Variabel Definisi Alat ukur Hasil ukur Skala ukur

operasional
1 Kelompok Perbedaan  K1:Kelompok Kategorik
Perlakuan Hewan perlakuan yang Normal
diberikan pada  K2:Kelompok
ketiga kelompok yang
diinduksiinjeksi
peritoneal
gentamisin 5
mg/kgBB
selama 10 hari
 K3:Kelompok
yang diinduksi
gentamisin dan
ditambahkan
ekstrak biji
jintan hitam
(Nigella sativa)
10 mg/kgBB i.p
selama 21 hari

2 Spermatozoa Spermatozoa Haemocyt Jumlah Numerik

mencit yang dihasilkan ometer, spermatozoa
oleh mencit Mikroskop
berbentuk seperti cahaya
kait dengan
perbesaran
400x,
Counter
 BAB 3

METODE PENELITIAN

3.1 Desain Penelitian

Desain yang digunakan dalam penelitian adalah desain eksperimental
laboratorium

3.2 Waktu dan Tempat

3.3.1 Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan pada Bulan Maret - Agustus 2014
3.3.2 Tempat Penelitian
Penelitian dilakukan di laboratorium Animal House, laboratorium Biologi, dan
laboratorium Pharmacy Drug Research (PDR), gedung Fakultas Kedokteran dan
Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah, Jalan Kertamukti Nomor 05
Pisangan Ciputat, Tangerang Selatan 15419

3.3 Populasi dan Sampel

3.3.1 Populasi
Hewan percobaan yang digunakan adalah mencit strain DDY
(Deutschland Denken Yoken) yang diperoleh dari Departemen Patologi Fakultas
Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor (IPB).
3.3.2 Sampel
3.3.2.1. Kriteria Inklusi
 Mencit jantan strain DDY
 Umur 8-12 minggu
 Berat badan 25 - 35 gr
 Sehat ditandai dengan bergerak lincah
3.3.2.2. Kriteria Eksklusi
 Tampak sakit ditandai dengan gerakan lemas dan malas
 Penurunan berat badan >10%.

37
 38

 Mencit jantan strain DDY yang mati selama masa

percobaan

3.3.3 Besar Sampel

Berdasarkan Mead’s Resource Equation Formula yaitu:

E=N–B-T

E : Error Component (10-20)

N : Jumlah individu percobaan (sampel) dalam semua kelompok

(Dikurang 1)

B : Blocking Component (Dikurang 1) B=0

T : Jumlah kelompok terapi (Dikurang 1)

Maka N dapat ditentukan dengan sebagai berikut:

E=N–0–T E=N–0–T
10 = (N-1) – (T-1) 1320 = (N-1) – (T-1)
10 = (N-1) – 2 1320 = (N-1) – 2
10 = N -3 1320 = N-3
N 13 N 23

N = 13 – 23 kemudian dibagi menjadi 3 kelompok dengan jumlah yang sama.

Didapatkan jumlah sampel tiap kelompok terkecil adalah 5

Pada percobaaan ini terdapat 3 kelompok mencit:

1. Kelompok 1 : Kelompok mencit sehat (Normal)
2. Kelompok 2 : Kelompok mencit yang diberikan injeksi gentamisin
5 mg/kgBB.
3. Kelompok 3: Kelompok mencit yang diberikan ekstrak Nigella
sativa 1 g/kgBB.
 39

Besar sampel ditentukan sebesar 5 mencit per kelompok. Sehingga

dibutuhkan jumlah mencit strain DDY sejumlah 15 ekor.

3.4 Alat dan Bahan Penelitian

3.4.1 Alat Penelitian
A. Alat – alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah
 Pembuatan ekstrak: blender, timbangan analitik, timbangan jarum, gelas
ukur, botol kaca, wadah plastik, kain, tali, pemanas waterbath, rotari
evaporator, pengaduk, freezer, dan alumunium foil.
 Masa pemeliharaan hewan : timbangan untuk mengukur berat badan
mencit kandang, botol minuman dan tempat makanan, spuit1 cc
 Pengambilan vesikula seminalis dan terminasi: alat bedah minor, kaca
arloji, papan bedah, jarum pentul.
 Pembuatan sediaan histologi:tip dan mikropipet 100 µm dan 1000 µm,
haemocytometer, deck glass, mikroskop, dan counter.
3.4.2 Bahan Penelitian
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian adalah biji jintan hitam
(Nigella sativa) yang didapatkan dari Balai Penelitian Tanaman Obat dan
Aromatik (BALITRO). Bahan-bahan kimia yang digunakan adalah gentamisin
injeksi 2 ml (40mg/ml) yang dilarutkan dalam air distilasi (aquabides) menjadi 1
mg/ml, Na Cl 0,9%, larutan george, dan etanol 70%.

3.5 Identifikasi Variabel

3.5.1 Variabel Terikat
Variabel terikat pada penelitian ini adalah jumlah sperma mencit.
3.5.2 Variabel Bebas
Variabel bebas pada penelitian ini adalah kelompok perlakuan hewan.
 40

3.6 Alur Penelitian

Perizinan Ethical clearance

Persiapan alat dan bahan

Adaptasi mencit diberi pakan standar (7 hari)

Pemberian perlakuan kelompok

Kelompok 1(K1) Kelompok 2 (K2) Kelompok 3 (K3)

Pakan dan minum Pakan standar +
standar Induksi gentamisin 5
mg/kgbb i.p (10 hari)
Pakan standar + Induksi
gentamisin 5 mg/kgbb i.p
(10 hari) + ekstrak jintan
hitam (Nigella sativa) 1
g/kgbb i.p (21 hari)

Terminasi dan pembuatan preparat spermatozoa mencit

(hari ke-39)

Pengamatan terhadap jumlah spermatozoa mencit

Pengolahan data
 41

3.7 Cara Kerja Penelitian

3.7.1 Tahap Persiapan
1. Peneliti
- Menentukan hipotesis dasar dan tujuan khusus penelitian
- Melakukan briefing dan persamaan persepsi
- Menyiapkan alat perlindungan diri
2. Laboratorium
- Perizininan laboratorium biologi, laboratorium Pharmacy Drug
Research (PDR) dan animal house
3. Ekstraksi Biji Jintan Hitam (Nigella sativa)
Prosedur pembuatan ekstrak jintan hitam (Nigella sativa) dilakukan
dengan tiga prosedur yaitu, pengeringan, ekstraksi, dan evaporasi.
- Pengeringan
Biji jintan hitam (Nigella sativa) sebanyak 1 kg yang telah
dikonfirmasi secara taksonomi kemudian dicuci sampai bersih dan
dijemur dengan suhu matahari sampai kering (bebas kandungan air).
- Ekstraksi
Biji jintan hitam (Nigella sativa) dihaluskan dengan blender hingga
menyerupai bubuk lalu ditimbang dengan sebanyak 500 gr (sampel
kering) lalu dimasukkan ke dalam panci besar dan direndam dalam
etanol, kemudian dikocok hingga tercampur (sekitar 30 menit) dan
diinapkan selama satu malam (12 jam) sampai mengendap.
- Evaporasi
Larutan yang sudah diinapkan diambil lapisan atas dari hasil
campuran etanol dengan zat aktif yang sudah terambil dipisahkahan dari
kotoran – kotoran menggunakan saringan kemudian dimasukkan ke
dalam labu evaporasi 1 liter yang selanjutnya dipasang pada pada
evaporator dan diisi water bath dengan air sampai penuh. Semua
rangkaian alat dipasang, termasuk rotary evaporator, pemanas water
bath (diatur sampai 50oC) disambungkan dengan alat listrik, selanjutnya
dibiarkan sampai larutan etanol memisah dengan zat aktif yang sudah
ada dalam labu (sekitar 1,5-2 jam untuk 1 labu). Ekstrak biji jintan hitam
 42

(Nigella sativa) dimasukkan dalam botol dan disimpan dalam freezer

sampai digunakan, sebelum penggunaan perlu dibiarkan terlebih dahulu
agar suhu sama dengan suhu ruangan.
4. Adaptasi Hewan Sampel
Hewan percobaan yang digunakan adalah mencit jantanstrain
DDY berusia 8-12 minggu dengan berat badan 25-35 gram yang
diperoleh dari Departemen Patologi Fakultas Kedokteran Hewan Institut
Pertanian Bogor (IPB). Kemudian dibawa ke Animal House dan
diadaptasikan dengan lingkungan barunya selama 7 hari. Pada hari ke- 0
sampai ke- 7 mencit diberikan pakan dan minuman standar yang
disamakan agar seluruh mencit dalam keadaan yang sama.

3.7.2 Tahap Pengujian

1. Penginduksian dengan gentamisin
Gentamisin vial dengan sediaan 2 ml mengandung 40 mg/ml.
Sesuai dengan dosis yang akan digunakan yaitu 5 mg/kgbb dengan range
berat badan mencit yang digunakan sebesar 25-35 gram maka dilakukan
pengenceran dengan air distilasi (aquabides) akan diberikan secara
injeksi intraperitoneal selama 10 hari pada mencit kelompok 2
2. Pemberian ekstrak Nigella sativa terhadap mencit
Mencit di kelompok 3 kemudian diberikan ekstrak biji jintan
hitam (Nigella sativa) sebanyak 1 g/kgbb secara injeksi intraperitoneal,
satu kali sehari selama 21 hari sedangkan kelompok 1 sebagai kontrol
negatif. Dosis toksik dari ekstrak jintan hitam secara injeksi
intraperitoneal yaitu 1,69 gram/kgBB untuk pelarut air dan 2,25
gram/kgBB untuk pelarut etanol.
3. Pembuatan preparat dan pemeriksaan spermatozoa
Pada hari ke-39 setelah mencit diterminasi dengan
mendislokasikan leher. Selanjutnya dilakukan pembuatan preparat
dengan cara mengambil vesikula seminalis. Vesikula seminalis kemudian
diletakkan ke atas kaca arloji yang berisi 1 ml NaCl 0,9 % dan ditekan
dengan gunting bedah minor sampai cairan keluar dan menyatu dengan
 43

NaCl. Kemudian diambil 20 µl suspensi dan diaduk hingga homogen ke

dalam 980 µl larutan george.
Kemudian campuran diambil dari tabung menggunakan dan diletakkan
di atas bilik hitung NI kemudian ditutup menggunakan deck glass dan
diamati dibawah mikroskop dengan perbesaran lensa objektif 40x pada
lima lapang pandang. Lapangan pandang mikroskop diperiksa dan
dihitung dengan sistematis oleh peneliti. Pengambilan data dilakukan
sebanyak dua kali (duplo) untuk menghindari adanya kesalahan. Hasil
pengamatan dimasukkan ke dalam rumus:

Jumlah sperma = N x P x (0,05 x 106)

N= Jumlah sperma pada 5 lapang pandang

P= Konsentrasi pengenceran

3.7.3 Tahap Pengolahan Data

Hasil berupa data yang didapat adalah data primer hasil pengukuran di
laboratorium kemudian diolah menggunakan SPSS 16.00 for Windows. Perbedaan
jumlah sperma pada tiap kelompok diuji dengan test analysis of variance
(ANOVA). Analisis data diawali dengan pengujian normalitas data menggunakan
uji Shapiro Wilk, lalu dilakukan uji homogenitas dari varians data. Bila data tidak
normal dan varians data tidak homogen maka lakukan uji Kruskal-Wallis. Data
signifikan menurut ANOVA bila nilai p<0.05.

3.8 Organisasi Penelitian

Dalam penelitian ini pihak-pihak yang terlibat adalah 3 mahasiswi PSPD UIN
dan dengan bantuan dari dosen pembimbing serta tenaga medis laboratorium.
 BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil Penelitian

Penelitian ini mengenai efek pemberian ekstrak jintan hitam (Nigella sativa)
terhadap jumlah spermatozoa mencit jantan DDY yang diinduksi gentamisin.
Efektivitas anti infertilitas jintan hitam (Nigella sativa) terlihat dari perbaikan jumlah
sperma. Hasil penelitian mengenai efek pemberian ekstrak jintan hitam (Nigella
sativa) terhadap jumlah spermatozoa mencit DDY yang diinduksi gentamisin
disajikan dalam tabel 4.1.

Tabel 4.1 Rerata Jumlah Spermatozoa

Kelompok Uji N Rerata Jumlah Spermatozoa (jt/ml)

X ±SE

Kelompok Normal (K1) 5 61,25±2,59

Kelompok Induksi Gentamisin (K2) 5
Kelompok Gentamisin + Ekstrak 14,5 ± 1,22
Jintan Hitam (Nigella sativa) (K3) 5

83 ± 3,74

Berdasarkan tabel 4.1 didapatkan hasil bahwa kelompok mencit yang diberikan
terapi Nigella sativa dengan dosis 1 g/kgBB secara i.p setelah diinduksi gentamisin 5
mg/kgBB i.p selama 10 hari (K3) memiliki rerata jumlah spermatozoa lebih tinggi

yaitu 83 ± 8,3 dibandingkan kelompok mencit normal yang hanya diberi pakan dan

minum standar (K1) dan kelompok mencit yang diinduksi gentamisin sebagai 5

44
 45

mg/kgbb i.p selama 10 hari (K2). Kelompok K1 didapatkan rerata jumlah

spermatozoa 61,25±5,79. Sedangkan pada kelompok K2 didapatkan rerata jumlah

spermatozoa yang paling rendah dibandingkan K3 dan K1 yaitu 14,5 ± 2,7. Hasil ini

juga dapat terlihat pada perbandingan gambar 4.1. Jumlah spermatozoa K3 terlihat
lebih banyak dibandingkan spermatozoa K2 pada gambar sehingga dapat disimpulkan
bahwa terjadi penurunan jumlah spermatozoa pada K2 dibandingkan K1. Jumlah
spermatozoa K3 lebih banyak dibandingkan dengan jumlah spermatozoa K2 pada
gambar 4.1 sehingga. Berdasarkan data pada tabel 4.1 maka didapatkan presentase
peningkatan jumlah spermatozoa sebesar 82,5% pada kelompok yang mendapat
terapi ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) sebesar 1 g/kgBB secara i.p setelah
diinduksi oleh gentamisin dengan dosis 5mg/kgBB selama 10 hari.

K1 K2.

K3.

Gambar 4.1. Gambaran mikroskopik jumlah sperma K1,K2,K3

 46

4.2.Analisis Data
Analisis data dilakukan dengan menggunakan SPSS 16.00 for Windows
menggunakan data yang diperoleh berdasarkan hasil penelitian. Uji statistik yang
digunakan adalah Uji One Way Anova. Sebelum dilakukan uji One Way Anova data
harus memenuhi syarat yaitu data terdistribusi normal dan data memiliki varians yang
sama.
Data hasil penelitan dilakukan uji normalitas sebagai syarat menggunakan uji
One Way Anova. Berdasarkan uji Shapiro Wilk menunjukkan bahwa setiap varians
data memiliki signifikansi (p>0,05) maka dapat disimpulkan bahwa data terdistribusi
normal. Pada uji varians didapatkan data memiliki signifikansi (p > 0,05) yaitu
p=0,113 sehingga dapat disimpulkan bahwa varians data sama.
Pada uji One Way Anova didapatkan nilai p=0,000. Hipotesis nol pada uji One
Way Anova adalah tidak terdapat perbedaan hasil jumlah spermatozoa mencit
kelompok kontrol, yang diinduksi gentamisin, dan yang diberikan gentamisin serta
jintan hitam (Nigella sativa). Sedangkan hipotesis alternatifnya adalah terdapat
perbedaan hasil jumlah spermatozoa pada ketiga kelompok perlakuan. Dengan hasil
signifikansi data p>0,05 maka H0 ditolak dengan kesimpulan terdapat perbedaan
hasil jumlah spermatozoa pada ketiga kelompok.

4.3.Pembahasan
 47

Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa gentamisin dapat memengaruhi fertilitas

dengan menurunkan jumlah spermatozoa akibat produksi radikal bebas yang
berlebihan sesuai dengan penelitian sebelumya.
Gentamisin merupakan antibiotik golongan aminoglikosida. Hasil pada penelitian
kali ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan sebelumya yaitu oleh Kilarkaje
menyatakan bahwa pemberian gentamisin dengan dosis 5 mg/kgBB secara i.p selama
35 hari dapat menurunkan fertilitas disebabkan oleh produksi radikal bebas yang
berlebihan, penurunan dari antioksidan, dan peroksidasin lipid yang berlebihan . Hal
ini menyebabkan kerusakan pada struktur testis dan DNA dari sel germinal pada tikus
Sprague Dawley.9 Pada penelitian lebih lanjut oleh Raju et al didapatkan kesimpulan
bahwa pemberian gentamisin sebesar 5 mg/kgBB selama 35 hari secara i.p pada tikus
strain wistar dapat menyebabkan peningkatan produksi ROS sehingga menghambat
pembelahan sel germinal, menghambat sintesis protein di testis, dan menginduksi
apoptosis di vesikula seminalis.38 Selain itu, berdasarkan penelitian oleh Angulo et al,
diketahui bahwa gentamisin mengganggu proses spermatogenesis dengan
menginduksi kerusakan oksidatif dengan meningkatkan pembentukan radikal bebas,
peroksidasi lipid, dan menurunkan level antioksidan.27
Reactive Oxygen Species (ROS) yang berlebihan bersifat toksik terhadap berbagai
sel tubuh diantaranya sperma. ROS yang berlebihan dan penurunan produksi
antioksidan dapat menyebabkan stres oksidatif. Stres oksidatif pada testis dapat
menyebabkan gangguan pada proses oksidasi fosforilasi. Hal ini menyebabkan
produksi ROS menjadi meningkat. Stres oksidatif menyebabkan penurunan kadar
antioksidan sehingga tidak mampu mengubah oksigen reaktif (O*) menjadi senyawa
yang netral (O2).39 ROS menyerang 11 komponen sel diantaranya yaitu lemak. Pada
sperma terutama bagian membran kaya akan lemak dalam bentuk PUFA (Poly
Unsaturated Fatty Acid), reaksi ROS terhadap PUFA menyebabkan reaksi kimia
yang disebut peroksidasi lipid pada membran sperma sehingga merusak midpiece,
strukur aksonema, dan mengganggu proses kapitasi serta reaksi akrosomal. Hal ini
menyebabkan sperma menjadi abnormal dan tidak dapat matang sehingga
menurunkan jumlah sperma yang dihasilkan. Selain itu, ROS menginduksi terjadinya
 48

apoptosis secara berlebihan. Sehingga menurunkan jumlah spermatozoa matur.11

Keadaan ini ditunjukkan dengan menurunnya jumlah spermatozoa pada kelompok
kontrol positif (K2) dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif (K1).
Rerata jumlah spermatozoa pada kelompok mencit yang mendapatkan terapi
ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) lebih tinggi dibandingkan kelompok kontrol
positif. Didapatkan peningkatan jumlah spermatozoa sebesar 85,2% pada kelompok
yang diinduksi gentamisin dan mendapatkan ekstrak jintan hitam (Nigella sativa).
Hal ini diduga akibat kandungan antioksidan dalam ekstrak jintan hitam (Nigella
sativa) yaitu thymoquinone, nigellone, carvacrol, t-anethole, 4-terpineol.40
Hasil ini sesuai dengan penelitian – penelitian yang telah dilakukan
sebelumnya. Berdasarkan penelitian sebelumnya oleh Suzanah et al yang
menyatakan bahwa pemberian ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) dengan dosis
10 mg/kgBB secara i.p selama 32 hari pada mencit strain Balb/c yang diinduksi oleh
41
Cychlophosphamide mampu meningkatkan jumlah spermatozoa sebesar 68 %.
Perbedaan dengan penelitian kali ini yaitu pada zat yang digunakan untuk
menginduksi kerusakan spermatozoa, dosis ekstrak yang diberikan, dan lamanya
waktu pemberian ekstrak jintan hitam (Nigella sativa) sehingga selisih hasil
presentase perbaikan jumlah spermatozoa yang didapatkan dengan penelitian kali ini
tidak terlalu besar.
Said et al menyatakan bahwa pemberian ekstrak biji jintan hitam (Nigella
sativa) dengan dosis 1000 mg/kgBB oral selama 48 hari pada tikus wistar yang
diinduksi oleh Colchicine mampu meningkatkan jumlah spermatozoa sebesar
47,3%.42 Selisih presentase hasil peningkatan jumlah spermatozoa dengan hasil
penelitian kali ini lebih besar hal ini disebabkan oleh perbedaan dari zat yang
digunakan untuk merusak sperma, pelarut ekstrak yang digunakan, dosis, cara
pemberian serta lamanya pemberian ekstrak. Pada penelitian oleh Said et al
menggunakan pelarut air sedangkan pada penelitian kali ini menggunakan pelarut
etanol. Etanol lebih efektif dalam menarik komponen antioksidan pada biji jintan
hitam (Nigella sativa) hal ini sesuai dengan penelitian Amein et al yang menyatakan
bahwa komponen terbesar sebagai agen antioksidan pada biji jintan hitam (Nigella
 49

sativa) adalah thymoquinone. Zat ini tidak dapat larut di dalam air. Saat digunakan air
sebagai pelarut hanya sebagian kecil kandungan zat yang terikat sehingga efek
antioksidan tidak sebaik saat menggunakan pelarut etanol. Sehingga presentase
peningkatan jumlah spermatozoa tidak sebesar hasil penelitian kali ini.
Nigella sativa merupakan salah satu jenis tumbuhan yang memiliki manfaat
sebagai antioksidan yaitu bekerja sebagai superoxidant anion scavenger, yaitu
dengan membentuk senyawa radikal superoksida menjadi senyawa lain yang tidak
reaktif. Hal ini disebabkan oleh kandungan zat thymoquinone dalam biji jintan hitam
(Nigella sativa). Selain itu thymoquinone dapat meningkat produksi glutatuhione
yang merupakan antioksidan dalam tubuh. Sehingga mampu mengurangi
pembentukan radikal bebas dan peroksidasi lipid yang akan mengganggu integritas
membran dan DNA sperma. Hal ini menyebabkan peningkatan jumlah produksi
spermatozoa yang normal.
Pada penelitian kali ini terdapat beberapa hambatan dan kekurangan
diantaranya yaitu kurangnya waktu peneliti dalam melakukan penelitian sehingga
harus menggunakan waktu kuliah selain itu alat dan sarana prasarana yang kurang
lengkap di lembaga tidak memungkinkan untuk melakukan penelitian dengan
parameter ukur lainnya. Penelitian ini sendiri merupakan penelitian pertama untuk
melihat pengaruh dari ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) terhadap jumlah
spermatozoa mencit yang telah diinduksi oleh gentamisin terutama di Indonesia.
 BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN

5.1.Simpulan
Berdasarkan penelitian didapatkan adanya penurunan jumlah spermatozoa yang
bermakna pada kelompok mencit yang diinduksi gentamisin (K2) dibandingkan
kelompok normal (K1) dan didapatkan perbaikan jumlah spermatozoa pada
kelompok mencit yang diberikan gentamisin dan ekstrak jintan hitam (K3). Hal ini
menunjukkan bahwa gentamisin 5 mg/kgbb i.p mampu menurunkan jumlah
spermatozoa sehingga dapat digunakan sebagai model infertilitas pada hewan coba
dan pemberian ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) mampu meningkatkan jumlah
spermatozoa mencit yang diinduksi gentamisin sebesar 85,2%.

5.2.Saran
Saran untuk penelitian berikutnya, antara lain:
1. Dilakukan penelitian mengenai efek ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa)
terhadap jumlah spermatozoa secara in vivo
2. Dilakukan penelitian dengan parameter sperma yang lebih bervariasi baik
secara makroskopik maupun mikroskopik
3. Dilakukan penelitian menggunakan dosis ekstrak biji jintan hitam (Nigella
sativa) yang bervariasi untuk mengetahui dosis terendah dan tertinggi yang
memiliki efek sebagai anti infertilitas
4. Dilakukan penelitian dengan waktu pemberian ekstrak biji Nigella sativa yang
lebih bervariasi untuk mengetahui waktu minimal yang dibutuhkan untuk
memberikan pengaruh anti infertilitas
5. Dilakukan penelitian menggunakan metode pelarutan dari biji jintan hitam
(Nigella sativa) lainnya seperti minyak atau ekstrak metanol
6. Dilakukan pengujian ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) untuk
mengetahui fungsinya pada organ tubuh lain

50
 DAFTAR PUSTAKA

1. Zegers-Hochschild, Adamson GD, Mouzon J, Ishihara, Mansour R, Nygren K et al.

International committee for monitoring assisted reproductive technology (ICMRT)
and the world health organization (WHO) revised glossary of ART terminology.
Fertility and sterility J 2009;92:1520–4
2. Montoya JM, Bernal A, Borero C. Diagnostics in assisted human reproduction.
Reprod Biomed Online 2002;5:198-210
3. Mascarenhas MN, Flaxman SR, Boerma T, Vanderpoel S, Stevens GA. National,
regional, and global trends in infertility prevalence since 1990: A systematic analysis
of 277 health surveys. PLoS Med 2009;9(12):3-10
4. Adamson P, Krupp K, Freeman A, Klausner J, Reingold A, Madhivan P. Prevelance
and correlates of primary infertility among young women in Mysore, India. Indian J
of Med Res. October 2011;134(4):440–446.
5. Yadollah Badr, Madaen K, Ebrahimi S, Ehsan Nejad, Koushavar H. Prevalence of
infertility in Tabriz in 2004. Urology Journal 2006;3(2):87-91
6. Irvine DS. Epidemiology and aetiology of male infertility. Hum Reprod 1998;13,
suppl 1:33-44.
7. Barten J. Screening for infertility in Indonesia. Results of examination of 863 infertile
couples. Pubmed 1978;10(5):405-12.
8. Laurence L, John S, Keith L, Bruce C, Bjorn K. Aminoglycoside. In : Goodman and
gillman’s the pharmacological basis of therapeutic.12nd Ed. New York: Mc Graw-
Hill. 2011
9. Kilarkaje N. An aminoglycoside antibiotic gentamycin induces oxidative stress,
reduce antioxidant reserve and impairs spermatogenesis in rats. The Journal of Toxic
Sci 2008;33(1):85-96.
10. Saha R, Bhupendar K. Pharmacognosy and pharmacology of Nigella sativa. Int Res J
of Phar 2011;2(11)36-39.
11. Kartikeya, Shok G, Rakesh S. Oxidative stress and male infertility. Indian J of Med
Res 2009: 357-367.
12. Deuraseh N.The book of medicine (Kitab Al Tibb) of Sahihal-Bukhari prevention of
illness and preservation of health perspectives: Malaysia 2008. JBMS. Available at:
www.jbms.org .(February, 17th 2014)
51
 52

13. Tortora GJ, Derrickson B, et al. The reproductive system. In : Principles of anatomy
and physiology. 12th ed. USA : John Wiley & Sons, Inc. 2009. p1082-1094.
14. Ellis H. The male genital organ. In : Clinical anatomy.11stEd. Massachusetts, USA:
Blackwell Publishing, Inc. 2006. p116-123.
15. Saladin K. The male reproductive system. In : Saladin: Anatomy and physiology:The
unity of form and function.3rdEd. Georgia,USA:The McGraw-Hills Company 2004.
p1024-1043.
16. Sherwood L. The reproductive system. In : Human Physiology : From cells to
systems. 7th ed. USA : Brooks/Cole. 2010. p752-757.
17. Barrett KE et al. Endocrine and reproductive physiology. In : Ganong’s review of
medical physiology. 23rd ed. USA : Mc Graw Hill. 2010.
18. Guyton AC, Hall JE. Endocrinology and reproduction. In : Textbook of medical
physiology. 11st ed. Philadelphia, USA : Elsevier Saunders. 2006. p.996-1000.
19. British Acupuncture Council. Acupuncuture and male infertility. July 2011.
20. Raheem AA, Ralph D. Male infertility: Causes and investigation. In : Trends in
Urology & Men's Health 2011. p8-11.
21. Jamsai D, Bryan M. Mouse models in male fertility research. Asian J of Andr
2011.p139-151.
22. Christensen G, Carrell D. Animal models of genetic causes of male infertility. Asian J
of Andr 2002;4: 213-219.
23. World Health Organization. Laboratory manual for the examination and processing of
human semen.5thEd. Geneva, Switzerland: WHO Press 2010. p.13-69.
24. Parekattil SJ, Agarwal A. Male Infertility: Contemporary clinical approaches,
andrology, ART and antioxidant. New York, USA: Springer 2012. p15-21.
25. Wells BG et al. Infectious disease. In : Pharmacotherapy handbook. USA: Mc Graw-
Hill. 2006.
26. Dominique F, Yoshizawa S, Joseph DP. Structural origins of gentamicin antibiotic
action. The EMBO Journal 1998;17(22): 6437–6448.
27. Angulo C, Rodrigo M, Eduardo P, Hector M, Alex C, Franz V et al. Vitamin C and
oxidative stress in the seminiferous epithelium. Biol Res.2011;44:169-180.
28. KV Peter. Handbook of herbs and spices.Vol 2.Philadelphia,USA:Woodhead
Publishing. 2012.p391-411
29. Edi Junaedi. Kedahsyatan habatussaudah mengobati berbagai
penyakit.Jakarta:AgroMedia Pustaka.2011.p5
 53

30. Padmaa M. Nigella sativa-Linn.-Acomprehensive review. Indian J of Nat Prod and

Res 2010;1(4):409-429
31. Tembhurne SV, Feroz S, Bore M, Sakarkar D. A review on therapeutic potential of
Nigella sativa (kalonji) seeds. Journal of Medicinal Plants Research 2014;8(3):167-
177
32. Nickavar B, Mojab F, Javidnia K, Amoli M. Chemical composition of the fixed and
volatile oils of Nigella sativa L. from Iran. Verlag der Zeitschrift fur Naturforschun,
Tubingen 2003.p629-631.
33. Badary, Taha RA, Gamal, Abdel-Wahab et al. Thymoquinone is a potent superoxide
anion scavenger. Drug Chem Toxicol 2003;26(2):87-98.
34. Mohammad, Koji Y, Toshiki M, Yumi N, Katsumi S, Hiroaki S et al. Superoxide
anion radical scavenging activities of herbs and pastures in Northern Japan
determined using electron spin resonance spectrometry. Int J of Bio Sci
2007;3(6):349-355
35. Fadwa, Suha M, Soulaf J. Effect of Nigella sativa oil treatment on the sex organs and
sperm charactors in rats exposed to hydrogen peroxide. Mesopotamia J.of Agric 2008;
34(1)
36. Asma M, Hicham M, Kaouthar B, Benboubetra B, Hemama B. Polyphenolic profile
and antioxidant activities of Nigella sativa seed extracts in vitro and in vivo. World
Academy of Science, Engineering and Technology 2012.
37. Subhash, Fazlul H, Sarkar M, Ramzi M. From here to eternity - the secret of
Pharaohs: Therapeutic potential of black cumin seeds and beyond. Cancer Therapy
2008;6: 495-510
38. Raju B, Annapurna A, Siva R. Protective effects of rutin and naringin on gentamycin
induced testicular oxidative stress. Euro J of Gen Med 2011;8(1):57-64.
39. Jeffery EH. Biochemical mechanism of toxic cell injury. In : Haschek and Rousseaux.
Handbook of toxicology pathology. Urbana: Academic Press Inc 1991; p.47-87.
40. Ali AB and Ali TH. Effect of ultraviolet ray on the spermatogenesis and testes tissue
of albino swiss mice. Reasearch and Review in BioSciences 2007; 1(3).
41. Suzanah AR, Noor F, Shaik D, Shaik S, Saheera K. Protective effect of black seed
Nigella sativa (L.) against cyclophosphamide-induced toxicity on reproductive and
acrosomal function in mice. Middle-Eact J of Sci Research 2013; 17(7):955-964.
 54

42. Said S, Gaber M, Ayman E, Hosman E, Mostafa M. Role of nigella sativa seeds on
modulation testicular toxicity of colchicine repeated use in adult albino rats. Life
Science Journal 2013;10(4):1629-1639
43. Amein AA, Abdul AA, Mohammad AR, Nisar AS. Oral and intraperitoneal LD 50 of
thymoquinone, an active principle of nigella sativa, in mice and rats. J of Ayub Med
Coll Abbottabad 2008.20(2):25-27
 LAMPIRAN
Lampiran 1
Surat Keterangan Sehat Mencit

Gambar 6.1. Surat keterangan sehat mencit

55
 56

Lampiran 2
Surat Determinasi Tanaman Nigella sativa

Gambar 6.2. Surat hasil determinasi tumbuhan

 57

Lampiran 3
Bukti Pembelian Etanol 70%

Gambar 6.3. Bukti pembelian etanol 70%

 58

Lampiran 4

Proses Penelitian

1. Ekstraksi Biji Jintan Hitam (Nigella sativa)

Gambar 6.4 Proses pencucian biji Gambar 6.5. Proses penjemuran

jintan hitam biji jintanhitam
(Nigella sativa) (Nigella sativa)

Gambar 6.6.Proses penghalusan biji

Gambar 6.7. Proses Maserasi
jintan hitam
(Nigella sativa)
 59

Gambar 6.8. Proses filtrasi Gambar 6.9. Filtrat mengandung

pelarut

Gambar 6.10. Proses evaporasi

Gambar 6.11. Ekstrak kental

biji jintan hitam
(Nigella sativa)
 60

2. Pengujian terhadap Hewan Coba

Gambar 6.12. Adaptasi hewan sampel Gambar 6.13 Pengukuran BB awal

(D 0-7) (D 8)

Gambar 6.14 Induksi gentamisin Gambar 6.15 Pemberian ekstrak

5mg/kgbb.pada K2 Nigella sativa1 g/kgbb

dan K3 (D 8-D17) i.p pada K3(D18-38)

Gambar 6.17 Pengambilan vesikula

Gambar 6.16. Proses Terminasi
Seminalis mencit
(D-39)
 61

Gambar 6.18 Pengeluaran cairan

Gambar 6.19 Sperma dilarutkan
dari vesikula seminalis
dalam larutan george
mencit

Gambar 6.20 Sperma diamati

di bawah mikroskop
 62

Lampiran 5
Cara perhitungan

1. Induksi gentamisin
 Sediaan : Vial 2 ml
Konsentrasi 40 mg/ml
 Pengenceran
M1V1 = M2V2
40 mg.1 ml = 1 mg. V2
V2 = 40 ml (Pengenceran 40 kali)

 1 ml gentamisin + 3 ml aquabides = 40 ml
 Konsentrasi akhir = 40 mg/40 ml
1 mg/ml

2. Pemberian ekstrak
 Dosis ekstrak jintan hitam yang diberikan adalah 1 gram/kgBB
= 1000 mg/1000 gram
= 10 mg/10 gram
 Konsentrasi ekstrak yang dihasilkan : 1 gram/1ml
 Konsentrasi ekstrak yang diberikan : 10 mg/0,1ml
Sehingga 1000 mg ekstrak dilarutkan hingga mencapai 10 ml
 Dosis Pemberian
10 mg/0,1 x 30 gram = 30 mg/x = 0,3 ml
Jadi untuk mencit dengan berat badan 30 gram dibutuhkan 0,3 ml
ekstrak biji jintan hitam
 63

Lampiran 6
Riwayat Penulis
Identitas
Nama : Hania Asmarani Rahmanita
Jenis kelamin : Perempuan
Tempat, Tanggal Lahir : Jakarta, 20 April 1993
Agama : Islam
Alamat : Jalan Taman Agave 1 blok M2/3 RT 006 RW 014
Grand Galaxy City, Bekasi Selatan 17147
Email : hania.asmarani@hotmail.com

Riwayat Pendidikan
 1999 - 2005 : SD Islam Darussalam Bekasi
 2005 - 2008 : SMP Islam Al Azhar 6
Jakapermai
 2008 – 2011 : SMAN 1 Bekasi
 2011 – sekarang : Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN
Syarif Hidayatullah Jakarta