UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN PADA EKSTRAK DAUN

JERUK NIPIS (Citrus aurantifolia) DENGAN

MENGGUNAKAN METODE DPPH

( 1,1-DIPHENYL-2-PICRYLHYDRAZYL)

Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA KEDOKTERAN

OLEH :

Nilam Fajarwatiala
NIM : 1110103000083

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

UIN SYARIF HIDAYATULLAH

JAKARTA

1434 H / 2013 M
 KATA PENGANTAR

Assalamualaikum Warahmatullahi Wabarakatuh.

Puji syukur saya panjatkan kehadirat Allah SWT atas segala nikmat dan karunia
yang telah diberikan, sehingga saya dapat menyelesaikan penelitian ini tepat pada
waktunya. Saya menyadari tanpa bantuan, bimbingan dan do’a dari berbagai
pihak, sulit bagi saya untuk menyelesaikan penelitian ini. Oleh karena itu, saya
mengucapkan terima kasih kepada:

1. Prof. DR. (hc) dr. M.K. Tadjudin, Sp. And, dr. M. Djauhari
Widjajakusumah, DR. Arif Sumantri, M.Kes, Dra. Farida Hamid, MA
selaku Dekan dan pembantu dekan FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
yang selalu memimbing dan memberikan kesempatan kepada saya untuk
menempuh pendidikan di Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN
Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. Dr. Witri Ardini, M. Gizi, Sp. GK selaku Ketua Program Studi dan untuk
seluruh dosen Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta yang telah membimbing dan mengajarkan saya
selama menjalani masa didik di Program Studi Pendidikan Dokter FKIK
UIN Syarif Hidayatullah
3. Dr. Mukhtar Ikhsan, SpP(K), MARS dan Zeti Harriyati, M. Biomed selaku
dosen pembimbing, dimana selain mengarahkan juga memberikan
motivasi kepada saya sehingga penelitian ini bisa selesai pada waktunya
4. Kedua orang tua tercinta, Bpk. Mariman dan Ibu Ramilah serta adik saya
tersayang Sofiana Puspitasari yang selalu mendukung saya untuk
menyelesaikan penelitian ini
5. Suryani, S.Si yang banyak mengarahkan dan mengajari saya dalam
melakukan penelitian ini sehingga penelitian ini bisa selesai pada
waktunya
 6. Juniarti, S.Si dan Yuhernita, S.Si, M.Si yang telah memberi arahan,
petunjuk serta bahan sehingga penelitian ini dapat dilaksanakan.
7. Zuwwidatul Husna, Nabilla Ayesha Putri, Leliana Nurul Wachidah,
Achmad Ali Machfud selaku kakak tingkat di PSPD yang juga selalu
memberi nasihat dan pengarahan dalam melaksanakan penelitian ini.
8. Akhmad Hudan Eka Prayoga, Fithriyah, Naufal Farisatrianto, Nurazminah
Alwi dan Khoirul Ahmada Putra yang selalu mengingatkan, membantu
dan menyemangati saya dalam melakukan penelitian ini
9. Seluruh mahasiswa PSPD 2010 dan juga sahabat serta teman-teman yang
tidak bisa disebutkan namanya satu persatu

Saya menyadari laporan penelitian ini masih jauh dari kesempurnaan. Maka dari
itu, penulis menerima adanya kritik dan saran yang membangun untuk penelitian
ini

Demikian laporan penelitian ini saya tulis, semoga bermanfaat bagi masyarakat
dan para pembaca pada umumnya.

Ciputat, 13 September 2013

Penulis

vi
 ABSTRAK
Nilam Fajarwati. Program Studi Pendidikan Dokter. Uji aktivitas
antioksidan daun jeruk nipis (Citrus aurantifolia) dengan metode DPPH
( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl).2013
Banyak penyakit yang pada awalnya disebabkan oleh radikal bebas, sehingga
radikal bebas dan antioksidan banyak diteliti di dunia kesehatan. Daun jeruk nipis
(Citrus aurantifolia) diduga memiliki aktivitas antioksidan yang kuat seperti
halnya buah jeruk nipis yang mampu meredam aktivitas dari radikal bebas.
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak daun
jeruk nipis metode dengan DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl). Penelitian ini
dilakukan secara observasional. Ekstrak daun jeruk nipis didapatkan dengan cara
maserasi menggunakan pelarut metanol. Uji aktivitas antioksidan ekstrak daun
jeruk nipis dilakukan pada konsentrasi 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm dan 100 ppm.
Ekstrak daun jeruk nipis ditambah dengan DPPH (634µM). Vitamin C digunakan
sebagai kontrol positif. Pengukuran absorbansi untuk mengetahui aktivitas
antioksidan daun jeruk nipis menggunakan spektrofotomerer UV-Vis pada
panjang gelombang maksimum yaitu 515 nm. Hasil penelitian ini didapatkan
perubahan warna secara kualitatif baik pada esktrak daun jeruk nipis dan vitamin
C. Nilai IC50 ekstrak daun jeruk nipis senilai 93,41 ppm dan termasuk aktivitas
antioksidan kuat berdasarkan klasifikasi Blois.
Kata Kunci : antioksidan, ekstrak daun jeruk nipis (Citrus aurantifolia), DPPH

ABSTRACT
NilamFajarwati. Medical Education Study Program. Antioxidant Activity
Assay of Key Lime Leaves (Citrus aurantifolia) Extract by DPPH (1,1-
Diphenyl-2-Picrylhydrazyl) Method.2013.
Many health problems caused by free radical production so recent studies focused
on it. Key lime (Citrus aurantifolia) leaves has been predicted has a strong
antioxidant activity as strong as its fruit to reduce free radical activity. The aim of
this study is to know antioxidant activity of key lime leaves extract by DPPH (1,1-
diphenyl-2-picrylhydrazyl) method. Key lime leaves extracted by maceration with
methanol as its solvent. Antioxidant activity tested in different concentration 25
ppm, 50 ppm, 75 ppm and 100 ppm. Key lime leaves extract was added by DPPH
(634µM). This study used vitamin C as positive control. Absorbance measurement
used spectrophotometer UV-Vis in maximum wave length 515 nm to show the
antioxidant activity. Result of this study shows color differences both key lime
leaves and vitamin C on a qualitative scale. IC50 value of key lime leaves is 93,41
ppm and classified as strong antioxidant according to Blois classification.
Keywords: Antioxidant, Key Lime Leaves (Citrus aurantifolia) Extract, DPPH

vii
 DAFTAR ISI

Halaman

LEMBAR JUDUL ................................................................................ i

LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................ ii

LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................... iii

LEMBAR PENGESAHAN ................................................................. iv

KATA PENGANTAR .......................................................................... v

ABSTRAK ............................................................................................ vii

ABSTRACT .......................................................................................... vii

DAFTAR ISI ......................................................................................... viii

DAFTAR TABEL ................................................................................ xi

DAFTAR GAMBAR ............................................................................ xii

DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................ xiii

BAB 1. PENDAHULUAN ..................................................................... 1

1.1 Latar Belakang ................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah .............................................................. 2

1.3 Tujuan Penelitian ............................................................... 2

1.3.1 Tujuan Umum .......................................................... 2

1.3.2 Tujuan Khusus ......................................................... 2

1.4 Manfaat Penelitian ............................................................. 3

viii
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA .......................................................... 4

2.1 Landasan Teori ................................................................... 4

2.1.1 Tanaman Jeruk Nipis .................................................. 4

2.1.2 Simplisia .................................................................. 6

2.1.3 Ekstrak dan Ekstraksi ............................................... 6

2.1.3.1 Ekstrak ............................................................ 6

2.1.3.2 Ekstraksi ......................................................... 6

2.1.4 Radikal bebas .............................................................. 7

2.1.4.1 Dampak Radikal Bebas bagi Kesehatan ........ 8

2.1.5 Antioksidan ................................................................. 9

2.1.5.1 Vitamin C ....................................................... 10

2.1.6 Uji Aktivitas Antioksidan ........................................... 10

2.1.6.1 Metode DPPH................................................. 10

2.1.6.2 Metode ABTS................................................. 12

2.1.6.3 Metode Deoksiribosa ...................................... 12

2.1.6.4 Metode Xantin Oksidase ................................ 12

2.1.7 Spektrofotometer UV-Vis dan Absorbansi ................. 13

2.2 Kerangka Teori...................................................................... 14

2.3 Kerangka Konsep ............................................................... 15

2.4 Definisi Operasional .......................................................... 15

Bab 3. METODE PENELITIAN ........................................................ 16

3.1 Desain Penelitian ............................................................... 16

ix
 3.2 Waktu dan Tempat Penelitian ............................................ 16

3.3 Sampel................................................................................... 16

3.4 Alat dan Bahan Penelitian ..................................................... 16

3.4.1 Alat Penelitian............................................................. 16

3.4.2 Bahan Penelitian ......................................................... 17

3.5 Cara Kerja Penelitian ............................................................ 17

3.5.1 Penyiapan Sampel atau Pembuatan Simplisia Nabati . 17

3.5.2 Pembuatan Ekstrak Daun Jeruk Nipis ........................ 17

3.5.3 Pembuatan Larutan ..................................................... 17

3.6 Pengukuran Absorbansi ........................................................ 19

3.7 Manajemen Analisis Data Antioksidan ................................ 20

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................... 21

4.1 Hasil Ekstraksi Daun Jeruk Nipis ......................................... 21

4.2 Absorbansi dan % Penghambatan ......................................... 22

4.3 Penetapan Nilai IC50........................................................................................... 25

BAB 5. SIMPULAN DAN SARAN ..................................................... 27

5.1 Simpulan ............................................................................ 27

5.2 Saran .................................................................................. 27

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................... 28

LAMPIRAN ............................................................................................. 31

x
 DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 3.1 Klasifikasi aktivitas antioksidan ............................................... 20

Tabel 4.1 Nilai absorbansi dan % penghambatan

ekstrak daun jeruk nipis ............................................................ 23

Tabel 4.2 Nilai absorbansi dan % penghambatan vitamin C .................... 23

Tabel 4.3 Nilai IC50 ................................................................................... 25

Tabel 6.1 Perhitungan absorbansi, % penghambatan dan IC50

ekstrak daun jeruk nipis ............................................................ 32

Tabel 6.2 Perhitungan absorbansi, % penghambatan dan IC50

Vitamin C .................................................................................. 33

xi
 DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1 Tanaman jeruk nipis .............................................................. 5

Gambar 2.2 Daun jeruk nipis .................................................................... 5

Gambar 2.3 Rumus kimia DPPH dan DPPH-H ........................................ 11

Gambar 4.1 Larutan seri ekstrak konsentrasi

25 ppm, 50 ppm, 75 ppm, 100 ppm ...................................... 22

Gambar 4.2 Larutan seri vitamin C 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm,4 ppm ............ 22

Gambar 4.3 Persamaan regresi linier ekstrak daun jeruk nipis ................. 24

Gambar 4.4 Persamaan regresi linier vitamin C ....................................... 24

Gambar 6.1 Hasil determinasi ................................................................... 31

Gambar 6.2 Pengeringan daun jeruk nipis ................................................ 34

Gambar 6.3 Larutan hasil maserasi ........................................................... 34

Gambar 6.4 Proses evaporasi .................................................................... 34

Gambar 6.5 Ekstrak kental daun jeruk nipis .......................................... 34

Gambar 6.6 Penimbangan ekstrak daun jeruk nipis .................................. 34

xii
 DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1 Hasil Determinasi ............................................................... 31

Lampiran 2 Nilai Absorbansi, % Penghambatan dan IC50

Ekstrak Daun Jeruk Nipis....................................................... 32

Lampiran 3 Nilai Absorbansi, % Penghambatan dan IC50

Vitamin C ................................................................................ 33

Lampiran 4 Gambar Alat dan Bahan Penelitian ........................................ 34

Lampiran 5 Riwayat Penulis ...................................................................... 35

xiii
 BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Masalah

Banyak penyakit pada awalnya disebabkan karena reaksi oksidasi yang
berlebihan, sehingga saat ini radikal bebas dan antioksidan banyak dibahas dan
diteliti dalam dunia kedokteran dan kesehatan.1 Radikal bebas sudah sejak lama
dikenal bisa menyebabkan kerusakan membran sel, retikulum endoplasma dan
bisa mengganggu deoxyribonucleic acid (DNA) sel.2 Berbagai keadaan yang
mempengaruhi terbentuknya radikal bebas misalnya infeksi, rokok, terpajan
polutan, sinar ultraviolet (UV), olah raga, kekurangan gizi dan lain-lain.1,3 Radikal
bebas adalah suatu molekul yang sangat reaktif dengan elektron yang tidak
memiliki pasangan pada orbita luarnya, sehingga akan mencari reaksi agar
mendapatkan elektron pasangannya yang berujung pada kerusakan sel dan
jaringan.4
Meningkatnya produksi dan menurunnya eliminasi radikal bebas
bisa berakibat terjadinya stres oksidatif sehingga menyebabkan kerusakan sel dan
jaringan. Stres oksidatif juga dapat berkonstribusi pada proses penuaan dan
berbagai macam penyakit kronis seperti kanker dan neurodegenerasi.1,4,5
Didalam tubuh terdapat mekanisme kimiawi yang berperan dalam
mengontrol stres oksidatif yaitu antioksidan.1,4 Antioksidan yang ada dalam tubuh
atau yang biasa disebut dengan antioksidan endogen yaitu enzim katalase,
glutation peroksidase dan superoksida dismutase.1,6 Selain antioksidan yang
terdapat secara alami dalam tubuh, juga terdapat antioksidan yang berasal dari diet
sehari-hari atau antioksidan eksogen.1 Beberapa sumber antioksidan eksogen,
yaitu buah-buahan, sayur, biji-bijian karena mengandung vitamin E, vitamin A,
vitamin C dan beta karoten.7
Berdasarkan data di atas, buah juga termasuk sumber makanan yang kaya
antioksidan, Salah satu buah yang mempunyai aktivitas antioksidan yang tinggi
adalah jeruk nipis (Citrus aurantifolia) karena mengandung fenol dan flavonoid.8
1
 2

Penggunaan buah jeruk nipis untuk menyembuhkan berbagai macam penyakit

sudah dilakukan sejak ribuan tahun yang lalu. Selain buah jeruk nipis, daun jeruk
nipis juga sering digunakan sebagai obat oleh masyarakat.9
Penelitian yang sebelumnya menyebutkan bahwa daun jeruk nipis
memiliki aktivitas antioksidan yang kuat dengan nilai medianinhibitory
concentration (IC50) 76,9 ppm. Medianinhibitory concentration (IC50) adalah
konsentrasi ekstrak dalam µg/ml (ppm) yang dapat menghambat aktivitas oksidasi
radikal sebanyak 50 %. Adanya aktivitas antioksidan pada daun jeruk nipis karena
kandungannya kaya akan alkaloid, fenol, saponin, tannin, steroid dan flavonoid.9
Penelitian mengenai daun jeruk nipis di Indonesia sangat terbatas dan
belum ada publikasi. Sehingga perlu dilakukan penelitian karena ketersediaannya
yang berlimpah. Berdasarkan hal tersebut, peneliti ingin mengetahui aktivitas
antioksidan dengan metode DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) menggunakan
konsentrasi larutan uji yang berbeda untuk dibandingkan dengan penelitian
sebelumnya. Metode DPPH dipilih karena sederhana, akurat, cepat dan bisa
dilakukan dengan sedikit sampel.10

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan uraian latar belakang masalah diatas dapat dirumuskan
masalah penelitian: Apakah ekstrak daun jeruk nipis ( Citrus aurantifolia)
memiliki aktivitas antioksidan ?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum
 Mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak daun jeruk nipis menggunakan
metode DPPH dengan berbagai konsentrasi larutan uji
1.3.2 Tujuan Khusus
 Mengetahui nilai IC50 dari daun jeruk nipis
 Mengetahui apakah ekstrak daun jeruk nipis memiliki aktivitas antioksidan
sangat kuat, kuat, sedang, lemah atau tidak bisa digolongkan
 3

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Bagi Institusi
 Mengetahui adanya aktivitas antioksidan pada daun jeruk nipis sehingga
bermanfaat untuk pengembangan obat alami untuk penyakit-penyakit yang
disebabkan oleh radikal bebas
 Memberi informasi tentang manfaat daun jeruk nipis bagi penelitian
selanjutnya sehingga manfaat daun jeruk nipis bisa dikembangkan lebih
jauh lagi.
1.4.2 Bagi Peneliti
 Penelitian ini sebagai salah satu syarat untuk mendapatkan gelar Sarjana
Kedokteran di Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam
Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta
 Menambah wawasan peneliti tentang daun yang mengandung antioksidan
 Sebagai pengalaman peneliti untuk melakukan penelitian di bidang
kesehatan
1.4.3 Bagi Masyarakat
Memberi informasi kepada masyarakat mengenai aktivitas antioksidan
ekstrak daun jeruk nipis untuk mencegah penyakit yang disebabkan radikal
bebas.
 BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Landasan Teori

2..1.1 Tanaman Jeruk Nipis

Citrus aurantifolia atau biasa disebut jeruk nipis merupakan tanaman buah
yang berasal dari Asia. Tanaman ini tumbuh baik pada iklim tropis. Di Indonesia
sendiri keberadaannya sudah ratusan tahun yang lalu dan hingga saat ini sering
digunakan sebagai bumbu masakan.11 Tanaman ini memiliki ketinggian 150-
350cm.12 Tanaman ini memiliki buah yang berasa sangat asam dan berkulit tipis
serta bunga yang berwarna putih. Tanaman ini akan merontokan bunga dan
buahnya bila kecepatan angin > 40-48%. Temperatur optimal untuk tanaman ini
antara 25-30oC dan kelembapan yang ideal sekitar 70-80%. Tanah yang baik
untuk tanaman ini adalah tanah lempung sampai lempung berpasir, humus cukup,
air dan udara baik. pH tanah optimum sekitar 6. Tanaman ini juga menyukai air
yang mengandung garam 10% dan tumbuh baik dengan kemiringan tanah sekitar
30o.11

Menurut klasifikasi botani, tanaman jeruk nipis adalah sebagai berikut11:

 Divisi : Spermatophyta
 Sub divisi : Angiospermae
 Kelas : Dicotyledonae
 Ordo : Rutales
 Keluarga : Rutaceae
 Genus : Citrus
 Spesies :Citrus sp.

Tanaman jeruk nipis memiliki daun dengan panjang berkisar 4-6 cm,
berwarna hijau sampai kuning tua, berbentuk bulat panjang dan tumpul bagian

4
 5

ujung serta bertekstur agak kaku dengan bagian tepi daun berlekuk keatas.12,13
Berikut ini gambar morfologi tanaman jeruk nipis:

Gambar 2.1 Tanaman Jeruk Nipis

Sumber: www.goree.rice.edu

Gambar 2.2Daun Jeruk Nipis

Sumber :http://www.discoverlife.org

Ekstrak daun Citrus aurantifolia memiliki kandungan senyawa bioaktif

seperti : alkaloid, fenolik, saponin, tannin, steroid dan flavonoid. Senyawa fenolik
dan flavonoid tersebut bisa bersifat sebagai antioksidan. Selain bersifat
antioksidan daun jeruk nipis juga mempunyai sifat antimikrobakterial.9 Seperti
daun jeruk nipis, buah jeruk nipis juga mempunyai efek antioksidan. Buah jeruk
nipis juga memiliki efek antimikrobakteri, mencegah penyakit kanker dan
 6

degeneratif karena mengandung senyawa bioaktif seperti flavonoid, kumarin dan

psoralen.14,15

2.1.2 Simplisia

Simplisia adalah bahan alam yang digunakan sebagai obat dan belum
mengalami pengolahan apapun kecuali pengeringan. Terbagi menjadi dua yaitu
simplisia nabati dan hewani.16

2.1.3 Ekstrak dan Ekstraksi

2.1.3.1 Ekstrak

Ekstrak adalah sedian pekat yang didalamnya terdapat zat aktif yang telah
disaring dari simplisia nabati atau hewani menggunakan bantuan pelarut yang
sesuai. lalu, semua atau hampir semua pelarut diuapkan hingga tersisa massa atau
serbuk yang diperlakukan sedemikian rupa agar memenuhi standar baku yang
sudah ditetapkan.16

2.1.3.2 Ekstraksi

Ekstraksi merupakan proses pemisahan zat-zat dari bahan padat maupun

cair menggunakan bantuan pelarut. Pelarut yang digunakan hanya mengekstrak
substansi tanpa menyebabkan material lainnya ikut larut. Beberapa pelarut yang
sering digunakan adalah etanol, metanol, n-hexana, aseton, benzena, etil asetat
dan kloroform.16

Metode ekstraksi menggunakan pelarut dapat dilakukan dengan cara

dingin dan panas, yaitu :

 Cara dingin
a) Maserasi
Maserasi adalah suatu proses perendaman menggunakan pelarut untuk
menyaring simplisia dengan beberapa kali pengadukan. Ada 2 macam
maserasi yaitu maserasi kinetik dan remaserasi. Maserasi kinetik apabila
pada saat maserasi dilakukan pegadukan terus-menerus sedangkan
 7

remaserasi adalah dengan menambahkan pelarut setelah maserat pertama

disaring dan seterusnya.
b) Perkolasi
Perkolasi merupakan suatu proses penyaringan simplisia dengan
memakai pelarut yang selalu baru. Tahapan perkolasi, yaitu : pelembaman
bahan, tahap perendaman antara, perkolasi sebenarnya (penetesan atau
penampungan ekstrak) yang berakhir bila perkolat sudah mencapai 1-5
kali bahan. Perkolasi biasanya dilakukan pada temperatur kamar.16

 Cara panas terdiri dari refluks, digesti, sokletasi, infludasi dan dekoktasi.16
2.1.4 Radikal Bebas

Radikal bebas adalah suatu molekul yang memiliki satu atau lebih elektron
tidak berpasangan pada orbital luarnya, sehingga menyebabkan elektron yang
tidak berpasangan berusaha mendapatkan pasangannya dengan cara menyerang
dan berikatan dengan elektron disekitarnya. Bila radikal bebas berikatan dengan
elektron dari senyawa kovalen yang umumnya adalah molekul besar seperti lipid,
protein dan DNA, maka kerusakan yang terjadi akan lebih parah. Dampak yang
terjadi akibat kerja radikal bebas untuk mencari pasangannya adalah terbentuknya
radikal bebas baru yang berasal dari atom atau molekul yang elektronnya diambil.
Dapat juga berasal dari atom atau molekul yang telah diberikan elektron oleh
radikal bebas. Radikal bebas bisa stabil bila berikatan dengan radikal bebas
lainnya. Berbagai kerusakan dapat terjadi akibat aktivitas radikal bebas, seperti
gangguan fungsi sel dan kerusakan struktur sel yang memicu terjadi berbagai
penyakit.1

Secara umum terdapat 3 tahapan pembentukan radikal bebas, yaitu1 :

1) Inisiasi (awal pembentukan)

Fe++ + H2O2  Fe+++ + OH-+ .OH

R1-H + .OH  R1. + H2O
 8

2) Propagasi (pemanjangan rantai radikal)

R2-H + R1.  R2. + R1-H

R3-H + R2.  R3. + R2-H

3) Terminasi (radikal bebas bereaksi dengan radikal bebas lainnya atau

dengan penangkapan radikal yang menyebabkan pemanjangan rantainya
rendah)

R1. + R1.  R1-R1

R2. + R1.  R2-R1
R2. + R2.  R2-R2dst

2.1.4.1Dampak Radikal Bebas bagi Kesehatan

Pada kondisi fisiologis, jumlah radikal bebas yang rendah dibutuhkan

untuk ekspresi gen, pertumbuhan sel dan sebagai pertahanan terhadap infeksi.2
Dampak negatif dari radikal bebas akan terjadi bila mekanisme pertahanan tubuh
terhadap radikal bebas menurun.17

Radikal bebas dapat menyebabkan kerusakan sel endotel dengan cara

bereaksi dengan nitrat oksida menjadi peroksinitrit1. Pembuluh darah diseluruh
tubuh dapat terkena efeknya seingga bisa timbul keadaan seperti:

 Kerusakan pada pembuluh darah yang ada di retina mata menyebabkan

penurunan daya penglihatan sampai bisa terjadi kebutaan.
 Kerusakan pada pembuluh darah ginjal di glomerulus menyebabkan
gangguan fungsi ginjal dan bisa berakhir pada gagal ginjal tahap terminal.
 Menurunnya sistem pertahanan tubuh.
 Kerusakan pada pembuluh darah koroner dapat meningkatkan risiko
terjadinya penyakit jantung koroner dan stroke.1,5
 9

2.1.5 Antioksidan

Antioksidan adalah suatu senyawa yang dapat menangkal efek negatif

radikal bebas dalam tubuh dengan memberikan satu elektronnya kepada senyawa
radikal bebas. Radikal bebas dapat dihambat dengan cara mencegah dan
menghambatterbentuknya radikal bebas baru, menangkap radikal bebas,
pemutusan rantaian dengan memotong propagasi dan memperbaiki kerusakan
yang disebabkan radikal bebas. Secara umum antioksidan digolongkan menjadi 2
yaitu :

 Antioksidan enzimatis: enzim superoksida dismutase (SOD), katalase

dan glutation peroksidase
 Antioksidan non-enzimatis
-Larut lemak: tokoferol, karatenoid, flavonoid dan quinon
-Larut air: asam askorbat (Vitamin C), asam urat, protein pengikat logam
dan aprotein pengikat heme1

Selain itu, antioksidan juga digolongkan berdasarkan mekanisme kerjanya

menjadi 3 kelompok, yaitu :

 Antioksidan Primer

Antioksidan primer adalah senyawa yang mampu dengan cepat

memberikan atom hidrogen kepada senyawa radikal bebas sehingga berubah
menjadi senyawa stabil dan mencegah pembentukan radikal bebas baru
dengan memutus reaksi berantai (polimerasi). Antioksidan primer disebut
juga antioksidan enzimatis.

 Antioksidan Sekunder

Antioksidan sekunder disebut juga antioksidan eksogen atau non-

enzimatis. Mekanisme kerjanya dengan cara memotong reaksi oksidasi
berantai radikal bebas atau dengan menangkapnya, sehingga efek negatif
radikal bebas bisa dicegah. Sumber makanan yang mengandung antioksidan
tersier contohnya adalah sayuran, buah-buahan dan daging merah.
 10

 Antioksidan Tersier
Enzim DNA repair dan metionin sulfoksida reduktase merupakan
kelompok antioksidan tersier. Enzim-enzim ini berfungsi sebagai
perbaikan biomolekuler sel yang rusak akibat efek radikal bebas.1

Ada juga yang menggolongkan antioksidan berdasarkan sumbernya :

 Antioksidan Alami
Antioksidan yang berasal dari alam didapatkan dari tumbuhan dan telah
diisolasi seperti Vitamin C, vitamin E, karoten, polienol bioflavonoid dan
katekin.
 Antioksidan Sintetik

Antioksidan Sintetik digunakan untuk memelihara kualitas makanan

karena proses oksidasi terutama pada saat penyimpanan. Contohnya BHA
(Butylated Hidroxyanisol), BHT (Butylated Hydroxytoluene), TBHQ (
TertierButyl Hidroxy Quinon).18

2.1.5.1 Vitamin C

Vitamin C atau L-asam askorbat termasuk antioksidan yang larut dalam

air. Pada keadaan murni, vitamin C (C6H6O6) berbentuk kristal putih dan
mempunyai berat molekul 176,13. Antioksidan vitamin C dapat bereaksi dengan
radikal bebas dengan memindahkan satu elektron dan menghasilkan radikal
askorbil. Kemudian, radikal askorbil akan berubah menjadi askorbat dan
dehidroaskorbat.1

2.1.6 Uji Aktivitas Antioksidan

2.1.6.1 Metode DPPH

DPPH (1,1-Diphenyl-2-Picrylhidrazyl) merupakan radikal bebas dengan

massa molar relatif 394.33 (MrC18H12N5O6 = 394.33), bersifat stabil pada suhu
kamar dan mempunyai panjang gelombang maksimum 515-517 nm.19,20,21
Antioksidan akan memberikan sebagian atom hidrogen ke radikal bebas DPPH
agar menjadi lebih stabil (DPPH-H).19 Salah satu senyawa bioaktif yang dapat
 11

diisolasi dan bersifat antioksidan adalah flavonoid. Flavonoid akan menangkap

radikal bebas DPPH. Radikal bebas DPPH akan mengoksidasi flavonoid sehingga
terbentuk radikal dengan kereaktifan yang rendah. Flavonoid mendonorkan
radikal hidrogen dari cincin aromatik dan menghasilkan radikal flavonoid yang
bersifat tidak toksik.22 Berikut ini mekanisme penangkapan aktivitas DPPH oleh
antioksidan:

Gambar 2.3 Mekanisme DPPH menjadi DPPH stabil (DPPH-H)

Sumber :EkstrakMethanol Daun Surian Yang Berpotensi Sebagai Antioksidan.

makara sains

Prinsipnya pada metode DPPH melihat perubahan warna DPPH dalam

larutan dari ungu pekat menjadi kuning pucat karena aktivitas sampel yang
mengandung antioksidan yang mampu menangkap dan meredam aktivitas radikal
bebas. Semakin banyak DPPH yang diredam, warna larutan semakin berubah
menjadi pucat. Perubahan warna selain dapat dilihat secara kualitatif juga bisa
menggunakan spektrofotometer UV-Vis (spektrofotometer ultraviolet visibel) dan
dinilai absorbansinya. Pada spektrofotometer akan dilihat perubahan serapan
warna (nilai absorbansi). Absorbansi yang baik untuk larutan DPPH adalah
kurang dari 1. Tinggi rendahnya aktivitas antioksidan pada sampel dilihat dari
nilai efficient concentration (EC50) atau Inhibition Contentration (IC50) yaitu nilai
dimana 50% DPPH kehilangan sifat radikal bebasnya. Semakin kecil nilai IC 50
semakin tinggi aktivitas antioksidan pada sampel.19,23 Pengerjaan menggunakan
DPPH harus cepat dan hati-hati karena molekul DPPH mudah terdegradasi oleh
cahaya dan oksigen. Namun, metode DPPH lebih sederhana, akurat, cepat dan
bisa dilakukan dengan sedikit sampel.10
 12

2.1.6.2 Metode ABTS

Metode ABTS(2,2-Azinobis(3-ethylbenzothiazoline)-6-sulfonic acid)untuk

mengetahui aktivitas antioksidan pada makanan atau minuman. Secara kimia,
reagen ABTS bersifat stabil, larut dalam air dan lipid. ABTS yang merupakan
subtrat peroksidase dapat dioksidasi oleh H2O2 (peroksida) membentuk radikal
kation. Radikal ABTS stabil dapat dibentuk dengan oksidasi kalium persulfat
ABTS. Aktivitas penghambatan oleh antioksidan terlihat dari semakin hilang
warna ABTS yang diukur absorbansinya dengan spektrofotometer. 24

2.1.6.3 Metode Deoksiribosa

Deoksiribosa bila terdegradasi akan menghasilkan produk karbonil dan

dikarbonil seperti MDA atau malondialdehid. Dalam suasana asam MDA dengan
Thiobarbituric acid (TBA) menghasilkan kromagen berwarna merah muda.
Semakin banyak deoksiribosa yang terdegradasi maka semakin tinggi kromogen
MDA-TBA.25

2.1.6.4 Xantin Oksidase

Uji aktivitas antioksidan metode xantin oksidase menggunakan enzim

superoksida dismutase (SOD). Enzim SOD adalah salah satu dari antioksidan
endogen yang bekerja dengan mengkatalis radikal O2 (superoksida) menjadi H2O2.
Larutan hasil pencampuran antara larutan ekstrak dengan enzim SOD dan xantin
diukur absorbansinya.26

2.1.7 Spektrofotometer UV-Vis dan Absorbansi

Spektrofotometer UV-Vis adalah alat yang biasa digunakan untuk analisa

kuantitatif dan semikualitatif pada laboratorium biokimia. Prinsip kerjanya adalah
interaksi cahaya dan materi yaitu adanya penyerapan ultraviolet atau sinar tampak
oleh molekul sehingga terjadi eksitasi elektron pada orbital molekul.
Spektrofotometer UV-Vis akan melewatkan sinar pada kuvet (wadah berisi
larutan), kemudian akan terbaca panjang gelombang larutan dalam satuan nm.
Daerah spektrofotometer dibagi menjadi tiga yaitu near UV, Visible dan Very
 13

near Infrared (185-400 nm, 400-700 nm dan 700-1100 nm). Namun seringnya
pada rentang 185-900 nm. Dasar pengukuran absorbansi adalah hukum Lambert-
Beer yaitu absorbansi tergantung diameter kuvet (dalam cm), konsentrasi larutan
dan koefisien absorpsi molar (L mol-1cm-1). 27
 14

2.2 Kerangka Teori

Radikal Bebas

Antioksidan

Endogen Eksogen Metode DPPH

DPPH
Ekstrak daun jeruk nipis
(Citrus aurantifolia)
Memiliki elektron yang
tidak berpasangan
Terdapat senyawa bioaktif
seperti fenol dan flavonoid
DPPH menjadi DPPH-H yang
Bersifat antioksidan lebih stabil
dengan mendonorkan
atom hidrogen
Semakin banyak aktivitas
antioksidan terhadap DPPH

Perubahan warna larutan dari

ungu pekat menjadi kuning pucat

Absorbansi diukur dengan

Spektrofotometer UV-Vis pada
panjang gelombang maksimum
DPPH yaitu 515 nm. Absorbansi
baik <1

Perhitungan IC50

Daun jeruk nipis memiliki

aktivitas antioksidan tergolong
kuat
 15

2.3 Kerangka konsep

Ekstrak daun Kandungan senyawa Bersifat Metode DPPH

jeruk nipis bioaktif antioksidan

Spektrofotometer
UV-Vis

analisis

Keterangan : = diteliti

= tidak diteliti

2.4 Definisi Operasional

No. Variabel Definisi Cara ukur Alat ukur Skala Hasil ukur
ukur
1 Konsentrasi Konsentrasi V1M1=V2M2 - Numerik 25 ppm
ekstrak daun larutan uji dalam (perbandingan 50 ppm
jeruk nipis ppm (1 ppm = 1 ekstrak dengan mL 75 ppm
μg/mL) metanol) 100 ppm
2 Absorbansi Nilai absorbansi Diukur panjang Spektofoto Numerik nm
sampel pada masing- gelombang dengan meter
masing sampel alat spektofotometer
3 IC50 Nilai konsentrasi Persamaan regresi - Kategorik Klasifikasi
ekstrak yang linier Ordinal Blois:
mampu IC50 < 50
menghambat µg/ml = sangat
aktivitas proses kuat
oksidasi sebesar IC50 50-100
50 % µg/ml = kuat
IC50 101-150
µg/ml= sedang
IC50 151-200
µg/ml = lemah
IC50> 200
µg/ml = tidak
aktif
 BAB 3

METODE PENELITIAN

3.1 Desain Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian observasional untuk mengetahui

aktivitas antioksidan daun jeruk nipis dengan menggunakan metode DPPH.

3.2 Waktu dan Tempat penelitian

Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Biologi Fakultas Kedokteran

dan Ilmu Kesehatan (FKIK) Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah
pada bulan Maret sampai Agustus 2013

3.3 Sampel

Sebanyak 500 gram daun jeruk nipis yang digunakan dalam penelitian ini
didapatkan dari pekarangan rumah daerah Jakarta Selatan. Daun dipilih yang tidak
terlalu muda dan tua, tidak kering, tidak berjamur, sudah dibersihkan. Kemudian,
dideterminasi oleh Pusat Penelitian Biologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia
(LIPI) Bogor. Determinasi dilakukan untuk mengurangi kemungkinan kesalahan
identitas sampel. Hasil determinasi menunjukan bahwa sampel yang diuji benar
spesies Citrus aurantifolia. (lampiran 1). Kemudian dibuat larutan ekstraknya
dalam berbagai konsentrasi, yaitu : 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm, 100 ppm yang
masing-masing dibuat secara triplo.

3.4 Alat dan Bahan Penelitian

3.4.1 Alat penelitian

Timbangan analitik; tabung reaksi; tabung Erlenmeyer; cawan; gelas ukur;

labu ukur 10 mL; kaca arloji; batang pengaduk; botol gelap; gelas beaker;
mikropipet 10, 100, dan 1000 μl; tip 10, 100, 1000 μl; alumunium foil; shaker
waterbath; kuvet dan spektrofotometer UV-Vis Hitachi 2,2 solution

16
 17

3.4.2 Bahan Penelitian

Simplisia, metanol, DPPH, air aquades dan Vitamin C

3.5 Cara Kerja Penelitian

3.5.1 Penyiapan Sampel atau Pembuatan Simplisia Nabati

Daun jeruk nipis basah diambil dari pekarangan rumah daerah Jakarta
Selatan (sudah dideterminasi) kemudian dikeringkan dengan cara dijemur di
bawah sinar matahari. Daun yang telah kering diblender menjadi serbuk daun
jeruk nipis. 28
3.5.2 Pembuatan ekstrak daun jeruk nipis
Pembuatan ekstrak daun jeruk nipis (Citrus aurantifolia) dilakukan oleh
peneliti di laboratorium biologi dengan menggunakan metode maserasi dan
remaserasi yaitu menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau
28
pengadukan pada temperatur ruangan. Setelah dilakukan maserasi selama 24
jam dilakukan penyaringan untuk memisahkan filtrat dan residu. Filtrat kemudian
dilakukan evaporasi (penguapan) menggunakan rotator evaporator pada suhu
37oC untuk memisahkan pelarut metanol sehingga didapatkan ektrak kental daun
jeruk nipis. Kemudian residu direndam lagi dalam pelarut metanol untuk
dilakukan remaserasi.13

3.5.3 Pembuatan Larutan

a) Pembuatan Larutan DPPH 634 μM9

 Timbang DPPH sebanyak 0,0015 gram
 Larutkan dalam 6 mL metanol
 Larutan dikocok hingga homogen kemudian dimasukan ke dalam
botol gelap
 Absorbansi diukur dengan spektrofotometer UV-Vis untuk
memperoleh panjang gelombang maksimum.
b) Pembuatan Larutan kontrol

 Dalam 1800 μL metanol ditambahkan 200 μL larutan DPPH

 Larutan dikocok hingga homogen.
 18

c) Pembuatan Larutan uji

1. Larutan Induk (1000 ppm)

10 mg ekstrak daun jeruk nipis dilarutkan kedalam 10 mL
metanol= 10mg/10 mL = 1 mg/mL = 1000 μg/mL = 1000 ppm
2. Larutan Seri
a) 100 ppm
200 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai
volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan
DPPH.
b) 75 ppm
150 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai
volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan
DPPH.
c) 50 ppm
100 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai
volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan
DPPH.
d) 25 ppm
50 μL dari larutan 1000 ppm ditambahkan metanol sampai
volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan
DPPH.

a. Pembuatan Larutan Kontrol Positif (Vitamin C)29

Vitamin C berupa serbuk putih didapatkan dari Laboratorium Kimia
Obat Farmasi FKIK UIN Syarif Hidayatullah. Vitamin C yang
digunakan merupakan produk perusahaan VWR.
1. Larutan Induk (100 ppm)
1 mg Vitamin C murni dilarutkan dalam 10 mL metanol = 0,1
mg/mL = 100 μg/ml (ppm).
2. Larutan seri (1,2,3,4 ppm)
a) 1 ppm
 19

20 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai

volumenya 1800 μL. Kemudian ditambahkan 200 μL larutan
DPPH.
b) 2 ppm
40 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai
volumenya 1800 μL. Kemudian ditambahkan 200 μL larutan
DPPH.
c) 3 ppm
60 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai
volumenya 1800 μL. Kemudian ditambahkan 200 μL larutan
DPPH.
d) 4 ppm
80 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai
volumenya 1800 μL.Kemudian ditambahkan 200 μL larutan
DPPH.

3.6 Pengukuran Absorbansi

Semua larutan kontrol, larutan ekstrak daun jeruk nipis dan larutan standar
positif (vitamin C) dikocok menggunakan shaker waterbath dan diinkubasi pada
suhu 37oC selama 30 menit dalam keadaan gelap (ditutup alumunium foil). Hal ini
dilakukan karena radikal DPPH mudah didegradasi oleh cahaya. Kemudian
absorbansinya diukur menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang 515 nm.9 Setelah nilai absorbansinya didapat, dihitung persen
hambatan masing-masing larutan dengan menggunakan rumus:9,19,30

% Hambatan = (Abs0– Abssample) x 100%

Abs0

Setelah didapatkan % aktivitas hambatan dicari nilai IC50 melalui persamaan

regresi linier y = a + bx
 20

3.7 Manajemen Analis Data Antioksidan

Data antioksidan pada radikal DPPH (% penghambatan) ekstrak daun
jeruk nipis dianalisis dan dihitung nilaiIC50. Semakin kecil nilai IC50 berarti
aktivitas antioksidan semakin kuat. Pada penelitian ini nilai IC50 dianalisis dan
dihitung mengunakan persamaan regresi linear.19,30,31
Data % hambatan dankonsentrasi larutan digunakan untuk mencari nilai
IC50 dengan persamaan regresi linear y= a + bx, dimana y adalah % hambat 50
9,32
(senilai 50) dan x adalah nilai IC50. Berikut ini tabel mengenai klasifikasi
aktivitas antioksidan menurut Blois:

Tabel 3.1 Klasifikasi aktivitas antioksidan19,21:

No. Nilai IC50 Antioksidan

1. < 50 ppm Sangat kuat
2. 50-100 ppm Kuat
3. 100-150 ppm Sedang
4. 151-200 ppm Lemah
 BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Ekstraksi Daun Jeruk Nipis

Dari hasil ekstraksi didapatkan 31 gram simplisia dari 500 gram daun
jeruk yang dikeringkan. Dimana setelah maserasi didapatkan larutan ekstrak
sebanyak 480 mL. Metode maserasi dipilih karena prosedurnya sederhana,
mudah, murah, cepat dan dapat menghindari kerusakan senyawa bioaktif akibat
panas.28,33 Kemudian setelah dilakukan evaporasi didapatkan ekstrak kental daun
jeruk nipis sebesar 3,6 gram. Dalam penelitian ini menggunakan pelarut metanol
karena berdasarkan penelitian sebelumnya, aktivitas antioksidan daun jeruk nipis
lebih baik dengan menggunakan pelarut metanol dibandingkan pelarut lainnya.9
Selain itu, metanol merupakan pelarut polar yang bisa menarik senyawa bioaktif
yang bersifat polar seperti flavonoid. Pembuatan ekstrak pada penelitian ini tidak
mengukur kadar air dan kadar abu.
Hasil ekstraksi ditentukan oleh luas permukaan dan jenis pelarut. Jenis
pelarut dipilih berdasarkan sifat dari senyawa bioaktif simplisia yang akan
diambil.29

4.2 Absorbansi dan % Penghambatan

Hasil ekstraksi daun jeruk nipis selanjutnya diuji aktivitas antioksidan
menggunakan metode DPPH. Kemudian dibuat larutan kontrol, larutan seri
ekstrak daun jeruk nipis dan larutan seri vitamin C. Setelah diinkubasi akan
terlihat secara kualitatif ada tidaknya perubahan warna pada larutan. Berikut ini
gambar yang menunjukan perubahan warna larutan seri ekstrak daun jeruk nipis:

21
 22

25 ppm 50 ppm 75 ppm 100 ppm

Gambar 4.1 Larutan seri ekstrak konsentrasi 25 ppm ,50 ppm,75

ppm,100 ppm

Pada gambar 4.1 terlihat bahwa semakin besar konsentrasi semakin terlihat
perubahan warna ungu pekat menjadi lebih pucat. Pada konsentrasi 25 ppm dan
50 ppm terlihat warna ungu yang lebih pekat. Hal ini disebabkan baru sedikit
elektron bebas pada DPPH yang diikat oleh antioksidan. Pada konsentrasi 75 ppm
warna larutan menjadi ungu pucat menunjukan lebih banyak elektron yang diikat.
Pada konsentrasi 100 ppm terlihat warna kuning keunguan menunjukan bahwa
hampir semua elektron bebas pada DPPH telah berikatan dengan atom hidrogen
antioksidan yang ada dalam sampel sehingga mengubah DPPH menjadi DPPH-H
yang sudah kehilangan sifat radikal bebasnya.19
Vitamin C sebagai antioksidan digunakan sebagai kontrol positif karena
terbukti mempunyai aktivitas antioksidan yang kuat.9 Berikut ini adalah gambar
perubahan warna berbagai larutan seri vitamin C:

3 ppm 4 ppm
1 ppm 2 ppm

Gambar 4.2 Larutan seri vitamin C 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm, 4 ppm

 23

Pada gambar 4.2 terlihat pada rangkaian seri tabung adanya perubahan
warna menjadi lebih pucat, berarti vitamin C sudah memperlihatkan aktivitas
antioksidan pada konsentrasi kecil. Hal ini bisa menunjukan bahwa vitamin C
mempunyai aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
Setelah diamati secara kualitatif, larutan kontrol, larutan seri ekstrak daun
jeruk nipis dan larutan seri vitamin C diukur absorbansinya dengan menggunakan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang maksimum DPPH yaitu 515 nm. Hal ini
untuk mendapatkan nilai absorbansi yang maksimum juga.9 Kemudian dicari %
penghambatan masing-masing konsentrasi. Berikut ini nilai absorbansi dan %
penghambatan dari setiap konsentrasi ekstrak daun jeruk nipis dan vitamin C:
Tabel 4.1 Nilai absorbansi dan % penghambatan ekstrak daun jeruk nipis
No Konsentrasi Rata-rata nilai % Penghambatan
(ppm) absorbansi
1 25 ppm 0,561 9,3 %

2 50 ppm 0,472 23,7 %

3 75 ppm 0,396 36,02 %

4 100 ppm 0,273 55,89 %

*Larutan kontrol = 0,619 nm

Tabel 4.2 Nilai absorbansi dan % penghambatan vitamin C

No Konsentrasi Rata-rata nilai % Penghambatan
(ppm) absorbansi
1 1 ppm 0,561 9,3 %
2 2 ppm 0,498 19.5 %

3 3 ppm 0,389 37,15 %

4 4 ppm 0,283 54,28 %

*Larutan kontrol = 0,619
Berdasarkan 4.1 dan 4.2 terlihat semakin besar konsentrasi semakin kecil
absorbansinya karena semakin besar konsentrasi larutan, aktivitas antioksidan
semakin tinggi. Hal ini ditandai dengan semakin pudarnya warna DPPH dan
semakin besarnya nilai % penghambatan.
 24

Setelah mendapatkan data % penghambatan maka dibuat grafik antara

konsentrasi larutan (x) dan % penghambatan (y) dan didapatkan persamaan
regresi liniernya. Berikut persamaan regresi linier ekstrak daun jeruk nipis dan
vitamin C:
Gambar 4.3 Persamaan regresi linier ekstrak daun jeruk nipis

Gambar 4.4 Persamaan regresi linier vitamin C

 25

4.3 Penetapan Nilai IC50

Nilai IC50 dapat ditetapkan dengan menggunakan persamaan regresi linier.
Untuk memudahkan input data maka digunakan microsoft excel untuk mencari
persamaan regresi linier. Semakin kecil nilai IC50 maka semakin besar aktivitas
antioksidan.19 Setelah melakuan perhitungan, IC50 daun jeruk nipis dan vitamin C
sebagai berikut:
Tabel 4.3 Nilai IC50

No Bahan Nilai IC50

1. Ekstrak Daun Jeruk Nipis 93,41 ppm
2. Vitamin C 3,8 ppm

Tabel 4.4 menunjukan ekstrak daun jeruk memiliki nilai IC50 sebesar
93,41 ppm. Berdasarkan klasifikasi Blois termasuk dalam kategori antioksidan
kuat. Hal ini sesuai dengan penelitian yang sebelumnya dimana dengan
menggunakan pelarut metanol didapatkan nilai IC50 sebesar 76,9 ppm dan
tergolong antioksidan kuat.9 Lingkungan yang baik dapat mempengaruhi senyawa
bioaktif yang terkandung, daun jeruk nipis pada penelitian ini didapatkan dari
tanaman jeruk nipis yang tumbuh bebas di pekarangan, berbeda dengan penelitian
yang dilakukan sebelumnya daun jeruk nipis berasal dari herbarium yang
lingkungan untuk tumbuh sudah dikondisikan dengan baik. Sehingga hasil nilai
IC50 lebih kecil dari pada penelitian ini. Penelitian ini juga menggunakan
konsentrasi larutan seri ekstrak daun jeruk nipis yang lebih kecil dari penelitian
sebelumnya dan didapatkan hasil aktivitas antioksidan kuat juga. Aktivitas
antioksidan yang kuat disebabkan karena daun jeruk nipis banyak mengandung
senyawa bioaktif seperti flavonoid.9 Flavonoid merupakan metabolit sekunder
yang tersebar pada tumbuhan dan termasuk senyawa fenolik sehingga cenderung
mudah larut dalam pelarut polar.29 Flavonoid bersifat antioksidan sehingga
mampu meredam aktivitas radikal hidroksil, superoksidase dan sebagai
antilipoperoksidan.14 Berdasarkan tabel diatas juga menunjukan nilai IC50 vitamin
C 3,8 ppm dan tergolong sebagai antioksidan yang sangat kuat.
 26

Penelitian uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH pada daun Citrus
aurantium dan Citrus limetta tergolong sedang, sama dengan hasil pada buahnya.
Sedangkan untuk aktivitas antioksidan biji kedua jeruk tersebut tergolong kuat.34

Penelitian lain dengan metode yang sama buah jeruk nipis juga memiliki
14,15
aktivitas antioksidan yang tergolong kuat. Pada jeruk keprok, bali dan lemon
aktivitas antioksidan dalam pelarut metanol lebih baik dibandingkan pelarut etil
asetat dan n-heksana. Pada pelarut metanol tergolong aktivitas antioksidan sedang
sedangkan pada etil asetat dan n-heksana aktivitas antioksidan tidak bisa
digolongkan dalam kriteria Blois.35

Uji aktivitas antioksidan daun surian dengan metode DPPH didapatkan

aktivitas antioksidan tergolong sangat kuat dengan nilai IC50 lebih kecil
dibandingan vitamin C.10

Firman Allah dalam Surah Thaahaa :

"Yang telah menjadikan bagi kalian bumi sebagai hamparan, dan Yang telah
menjadikan bagi kalian di bumi itu jalan-jalan, dan menurunkan dari langit air
hujan, maka Kami tumbuhkan dengan air hujan itu berjenis-jenis dari
tumbuh-tumbuhan yang bermacam-macam. Makanlah dan gembalakanlah
binatang-binatang kalian. Sesungguhnya pada yang demikian itu, terdapat tanda-
tanda kekuasaan Allah, bagi orang-orang yang berakal."(Thaahaa [20]: 53-54)

Penelitian ini merupakan salah satu bentuk implementasi ayat di atas, dimana
sebagai orang yang berakal seharusnya kita banyak mencari tahu potensi yang ada
di bumi Allah ini. Penelitian ini menunjukan salah satu tanaman yang diturunkan
oleh Allah ternyata memiliki dampak yang baik bagi kesehatan.
 BAB 5
SIMPULAN DAN SARAN

5.1 Simpulan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, pada berbagai konsentrasi larutan uji
ekstrak daun jeruk nipis didapatkan aktivitas antioksidan. Nilai IC50 ekstrak daun
jeruk nipis sebesar 93,41 ppm tergolong sebagai antioksidan kuat menurut
Kriteria Blois.

5.2 Saran
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai peranan antioksidan daun
jeruk nipis dengan pelarut air, karena penggunaan pada masyarakat daun
jeruk nipis sering direbus untuk dijadikan obat.
2. Perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui kandungan senyawa bioaktif
ekstrak daun jeruk nipis yang bersifat antioksidan
3. Perlu dilakukan penelitian lanjut mengenai efek daun jeruk nipis lainnya
seperti toksisitas dan antimikrobakterial.

27
 28

DAFTAR PUSTAKA

1. Winarsi H. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas: potensi dan aplikasi dalam
kesehatan. Yogyakarta: Kanisius. 2007

2. Kunwar A, Priyadarsini KI. Free radicals, oxidative stress and importance of

antioxidants in human health. Journal medical and allied sciences. July 2011;1(2):
53-60

3. Yao Y, Vieira A. Comparative antioxidant properties of citrus species: evidence

for potent, non vitamin antioxidants in C.aurantifolia. International journal of
food, nutrion and public health. 2011;4(1)

4. Corwin J. E. Buku saku patofisiologi. Edisi 3. Jakarta: EGC. 2009

5. Kumar V, cotran RS, Robbins SL. Buku ajar patologi robbins. Edisi 7. Volume 1.
Jakarta: EGC. 2007

6. Marks DB, Marks AD, Smith CM. Biokimia kedokteran dasar sebuah pendekatan
klinis. Jakarta: EGC. 2000

7. National Cancer Institute. Antioxidant and cancer prevention: fact sheet [serial
online] 2004 july [cited 2013 june 15]. available from: URL:
www.cancer.gov/cancertopics/factsheet/prevention/antioxidant

8. Loizzo MR, Tundis R, Bonesi M, Menichini F, De Luca D, Colica C et al.

Evaluation of Citrus aurantifolia peel and leaves extracts for their chemical
composition, antioxidant and anti-cholinesterase activities. J Sci Food Agric.2012
Dec;92(15):2960-7.

9. Reddy LJ, Jalli RD, Jose B, Gopu S. Evaluation of Antibacterial & Antioxidant
Activities of The Leaf Essential Oil & Leaf Extract of Citrus aurantifolia. Asian
Journal of Biochemical and Pharmaceutical Research. May 2012;2:346-53

10. Yuhernita, Juniarti. Analisis Senyawa Metabolit Sekunder Dari Ekstrak Methanol
Daun Surian Yang Berpotensi Sebagai Antioksidan. Makara Sains. April
2011;15(1): 48-52

11. Prihatman K, editor. Jeruk [serial online] 2000 Pebruary [cited 2013July 22].
Available from: URL: http://www.warintek.ristek.go.id/

12. Rukmana R. Jeruk nipis: prospek agribisnis, budidaya dan pasca panen.
Yogyakarta: kanisius. 2003

13. Muhlisah F. Tanaman obat keluarga. Jakarta: penebar swadaya. 1999

14. Sidana J, Saini V, Dahiya S, Nain P, Bala S. A review on citrus: the boon of
nature.Journal pharmacy science review and research. Jan-Peb 2013 18(2): 20-27
 29

15. Ghafar MFA, Prasad N, Weng KK, Ismail A. Flavonoid, hespiridine, total
phenolic content and antioxidant activities from citrus species. African Journal of
Biotechnology. January 2010;9(3) : 326-30

16. Departemen Kesehatan RI. Parameter Standard Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.
Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. Jakarta : Depkes RI. 2000.hal.
1-12.

17. Gitawati R. Radikal Bebas- Sifat dan Perannya dalam Menimbulkan

Kerusakan/Kematian Sel. Cermin Dunia Kedokteran.1995;No.102: 33-36.

18. Ardiansyah. Antioksidan dan Peranannya bagi Kesehatan. Artikel IPTEK.2007

19. Molyneux P. The use of the stable free radical diphenylpicrylydrazyl (DPPH) for
estimating antioxidant activity. Jurnal Science Technology. Mar-Apr 2004;26(2):
212-8

20. Reynertson KA. Phytochemical Analysis of Bioactive Constituens from edible

Myrtaceae Fruit, Dissertation. New York : The City University of New York.2007

21. Blois, MS.Antioxidant Determinations By The Use of a Stable Free Radical,

Nature. 1958:1199-200

22. Amic D, Beslo D, Trinajstic, Davidovic. Structure-radical scavenging activity

relationships of flavonoids. Croatia Chem Acta 76 (1) : 55-61

23. Kistiana HD, ariviani S, Khasanah LU. Ekstraksi pigmen antosianin buah
senggani (Melastoma malabathricum auct. Non linn) dengan variasi jenis pelarut.
Jurnal teknosains pakan. Oktober 2012;1(1): 107

24. Ozgen M, Reese Neil R, Artemio Z et al. Modified 2,2-Azino-bis-3

ethylbenzothiazoline-6-sulfonic Acid (ABTS) Method to Measure Antioxidant
Capacity of Selected Small Fruits and Comparison to Ferric Reducing Antioxidant
Power (FRAP) and 2,2′-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) Methods. Journal of
Agriciultural and Food Chemistry. 2006: 1151-57

25. Halliwell B, Gutteridge JMC. Free Radical in Biology and Medicine. New York:
Oxford University Press.2000

26. Mun’im, Negishi O, Ozawa T. Antioxidative compounds from Crotalaria

sessiflora. Biosci Biotechnol Biochem. Pebruary 2003;67 (2)

27. Rouessac A. Chemical Analysis Modern Instrumentatiom Methods and

Techniques. England : Willey.2004
28. Harborne JB. Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan.
Terjemahan K. Padmawinata Edisi II. Bandung: ITB Press. 2006.
 30

29. Nabavi SF, Nabavi SN, Ebrahimzadeh MA, Asgarirad H. The Antioxidant
Activity of Wild Medlar (Mespilus germanical) Fruits, Stem Bark and Leaf.
African Journal of Biotechnology 10 January 2011;Vol.10(2): 283-9.

30. Widiyarti G, Sundowo A, Hanafi M. The free radical scavenging and anti-
hyperglycemic activities of various gambiers available in Indonesian market.
Makara Sains.November 2011; 15(2): 129-134

31. Kekuda TRP, Vinayaka KS, Kumar SUP, Sudharshan SJ. Antioxidant and
Antibacterial Activity of Lichen Extracts, Honey and Their Combination. Journal
of Pharmacy Research 2009;2(12):1875-1878.

32. Karamian R, Ghasemlou F. Screening of total phenol and flavanoid content,

antioxidant and antibacterial activities of the methanolic extracts of three silene
species from Iran. Journal of agriculture and crop sciences.2013;5: 305-312

33. Dhiya A, Monica M. Uji Aktivitas Antiradikal Bebas Ekstrak Buah Jeruk Bali
(Citrus maxima Burm.Fz) dengan Metode DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhidrazyl).
UNESA Journal of Chemistry. September 2012;1(2)

34. Umamaheswari M, Asokkumar K. In Vitro Antioxidant Activities Of Leaves,

Fruits And Peel Extract Of Citrus. International Journal of Phytopharmacy. Jan-
Peb 2012;2(1): 13-20

35. Wulandari RA , Winarti W. Penampisan Fitokimia Dan Uji Aktivitas Antioksidan

Dengan Metode Peredaman Radikal Bebas DPPH Dari Ekstrak Tiga Jenis Daun
Jeruk, Suku Rutaceae. FFUP.2011
 31

LAMPIRAN

Lampiran 1
Hasil Determinasi

Gambar 6.1 Hasil Determinasi

 32

Lampiran 2
Nilai Absorbansi, % Penghambatan dan IC50Ekstrak Daun Jeruk Nipis

Tabel 6.1 Perhitungan absorbansi, % penghambatan dan IC50 ekstrak daun jeruk
nipis

Konsentrasi Absorbansi Rata-rata % penghambatan(Abs0 – Abs sampel/

(ppm) (nm) Absorbansi (nm) Abs0) x 100% (%)
25  0,559 0,561
0,619– 0,561x100% = 9,3 %
 0,559
0,619
 0,566
50  0,462 0,472
0,619 – 0,472x100% = 23,7 %
 0,463
0,619
 0,491
75  0,385 0,396
0,619 – 0,396x100% = 36,02 %
 0,362
0,619
 0,442
100  0,268 0,273
 0,264 0,619 – 0,273x100% = 55,89 %
 0,288 0,619

Y = a + bx

50 = -6,795 + 0,608X

56,795 = 0,608 X

X = IC50 = 93.41
 33

Lampiran 3
Nilai Absorbansi, % Penghambatan dan IC50 Vitamin C

Tabel 6.2 Perhitungan absorbansi, % penghambatan dan IC50 Vitamin C

Konsentrasi Absorbansi Rata-rata % Penghambatan (Abs0 – Abs sampel/

(ppm) (nm) Absorbansi (nm) Abs0) x 100% (%)
1  0,578 0,561
0,619– 0,561x100% = 9,3 %
 0,602
0,619
 0,503
2  0,484 0,498
0,619 – 0,498x100% = 19.5 %
 0,482
0,619
 0,528
3  0,387 0,389
0,619 – 0,389x100% = 37,15 %
 0,388
0,619
 0,392
4  0,281 0,283
 0,280 0,619 – 0,283x100% = 54,28 %
 0,289 0,619

Y = a + bx

50 = -8,09 + 15,25 x

58.09 = 15,25 x

X = IC50 = 3.8
 34

Lampiran 4
Gambar Alat dan Bahan Penelitian

Gambar 6.2 Pengeringan Daun Jeruk Nipis Gambar 6.3 Larutan hasil maserasi

Gambar 6.4 Proses Evaporasi Gambar 6.5 Ekstrak Kental Daun

Jeruk Nipis

Gambar 6.6 Penimbangan Ekstrak Kental Daun Jeruk Nipis

 35

Lampiran 5
Riwayat Penulis

Identitas :

Nama : Nilam Fajarwati

Jenis Kelamin : Perempuan

Tempat, Tanggal Lahir : Karanganyar, 06 November 1993

Agama : Islam

Alamat : Jl. Tanah Kusir II RT 10/09 No. 21A, Kebayoran

Lama, Jakarta Selatan

E-mail : nilamfw@yahoo.co.id

Riwayat Pendidikan :

 1999 – 2005 : Sekolah Dasar Negeri 07 Pagi Jakarta

 2005 – 2007 : Sekolah Menengah Pertama Negeri 11 Jakarta
 2007 – 2010 : Sekolah Menengah Atas Negeri 06 Jakarta
 2010- sekarang : Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta