Synthesis and use of deuterated fenamiphos and its metabolites as

internal standards for mass spectrometric analysis in water

M. Terreni "'*, E. Benfenati b, M. Pregnolato a, A. Bellini b, D. Giavini b, S.F. Bavetta ",
C. Molina c, D. Barcel6 c
~Dipartimento di Chimica Farmaceutica, Universitgl degli Studi di Pavia, Via Taramelli 12, 27100 Pavia. Italy
hlstituto di Ricerche Farmacologiche 'Mario Negri ", Via Eritrea 62, 20157 Milan, haly
~Department of" Environmental Chemistry, CID-CSIC, c/Jordi Girona 18-26, 08034 Barcelona, Spain

Abstrak

Aplikasi spektrometri massa (MS) semakin meningkat dalam analisis lingkungan, pengukuran
pestisida di Indonesia tertentu. Untuk memanfaatkan sepenuhnya kemampuan MS, penting untuk
memiliki standar berlabel yang tersedia kinerja analisis kuantitatif, meningkatkan akurasi dan presisi.
Kami mensintesis serangkaian deuterated standar internal yang sesuai dengan fenamiphos (la) dan
beberapa metabolitnya, menggunakan prosedur cepat dan murah bahan. Penggunaan 3-fluoro-3-
(heptafluoropropyl) -2- (nonaltuorobutyl) -cis-oxaziridine (IV) sangat menarik untuk persiapan metabolit
oksidatif dari fenamiphos (Ia), standar analitik dan deuterasi. Kami menggunakan senyawa ini untuk
analisis polutan ini dalam air. Kami menggunakan ekstraksi fase padat, menguji beberapa bahan, dan
cairan superkritis teknik ekstraksi. Analisis dilakukan dengan kromatografi gas-spektrometri massa,
dengan pemantauan ion yang dipilih (SIM) teknik, memperoleh hasil yang baik dengan metabolit
oksidatif senyawa Ia (senyawa IIa dan Ilia). Untuk lebih banyak metabolit polar Ib, lib dan Illb, analisis
kromatografi cair-spektrometri massa dalam mode SIM memberikan yang terbaik hasil.

Kata kunci: Analisis lingkungan; Analisis air; Fenamiphos; Pestisida; Senyawa organofosfor

1. Pendahuluan

MS telah diakui sebagai metode Pestisida oleh MS, sangat meningkatkan

referensiuntuk identifikasi berbagai polutan, dan
pestisida khususnya, dan telah diusulkan sebagai
validasi teknik karena sensitivitasnya yang
tinggi dimenentukan senyawa berdasarkan
mereka karakteristik chemico-fisik [1]. MS
sangat luas digunakan oleh EPA di AS dan di
Eropa untuk peningkatan jumlah aplikasi
kuantitatif. Satu alasannya adalah terbatasnya
ketersediaan internal yang sesuai standar (I.S.)
yang meningkatkan analisis kuantitatif
*Penulis yang sesuai.
akurasinya dan presisi. GC-MS dan LC-MS
dalam mode SIM memungkinkan senyawa yang
diberi label dengan isotop stabil untuk
digunakan sebagai A.S., memberikan akurasi
dan reproduktifitas yang baik, di tampilan
properti yang sangat mirip dengan property zat
yang akan dianalisis. AKU S. digunakan
terutama untuk mengkompensasi kehilangan
sampel selama pembersihan dan untuk
memperbaiki penyimpangan volume injeksi dan
variasi dalam respons detektor.
Dalam makalah sebelumnya [2] ethofumesate
dan metabolit dianalisis dalam air menggunakan
pentadeuteroethyl ethofumesate sebagai I.S.
Sebagai bagian dari proyek
analisis air (1-methylethyl) fosforamidik
asam etil 3-metil-4 (metiltio) fenil ester Ia
(fenamiphos, Gbr. 1) [4] dan metabolit
utamanya. Fenamiphos, pestisida ester
fosforamido secara luas digunakan di Eropa [1]
untuk kontrol tanah dan daun nematoda [5],
adalah nematicide sistemik, aktif terhadap ecto-
endo parasit, hidup bebas, pembentuk kistadan
nematoda simpul-akar. Analisis metabolit adalah
tugas penting lainnya dalam analisis air
kuantitatif residu pestisida mengingat
pentingnya toksikologis mereka pada
konsentrasi rendah. Metabolisme dari
fenamiphos termasuk hidrolisis [6] dan
dealkilasi [7,8] dari gugus fosforamido untuk
membentuk 3-metil 4-metiltiofenol dan etil asam
fosfamamid 3-metil-4 (metiltio) fenil ester Ib
(des-isopropil fenamiphos), masing-masing.
Metabolik penting lainnya jalur melibatkan
elaborasi oksidatif dari fungsi ini langsung pada
la atau pada metabolism produk Ib untuk
memberikan snlfoxides IIa yang sesuai, b dan
sulfon IIIa, b [6] (Gbr. 1).
bertujuan untuk memantau agrokimia
organofosfor di lingkungan [3], kami juga
tertarik pada
Oksidasi sulfida menjadi sulfoksida dan sulfon
adalah jalur yang sangat penting dalam
metabolism senyawa aktif biologis seperti
produk alami, obat-obatan, dan xenobiotik
lainnya [9,10]. Banyak contoh oksigenasi sulfur
dalam metabolisme pestisida dilaporkan [11].
Beberapa pestisida, misalnya fenamiphos [12],
dengan cepat diubah dalam air karena proses
lingkungan, dan ini dapat menghasilkan produk
yang sudah ada di dalam air Sampel. Dalam
kasus ini, penggunaan label berlabel I.S. adalah
dari sangat penting untuk menghindari kesalahan
karena prosedur. Analisis fenamiphos [3]
melibatkan penggunaan ekstraksi fase padat
(SPE) dengan Carbopack B atau C j8 dan HPLC
dengan detektor UV [13] fluorimetri,
konduktivitas elektrokimia dan MS dengan
antarmuka thermospray juga telah digunakan
sebagai Detektor HPLC [14-16]. Untuk analisis
GC, beberapa detektor telah digunakan [17-19].
MS juga telah digunakan [20-22] dengan
perangkap ion dalam bahan kimia mode ionisasi
(CI) dan dengan dampak elektron (El) ionisasi,
atau dengan deteksi positif-negatif CI berdenyut.
Beberapa penulis menganggap oksidasi
permanganat sebagai langkah awal dalam
penentuan simultan dari fenamiphos dan
metabolit oksidatifnya [23,24], dan sebagai A.S.
untuk analisis kuantitatif O-phenyl dimethyl
thiophosphinate dan O-2-naphtyl dimethyl
tiofosfat ditemukan cocok untuk organofosfor
pestisida secara umum [25]. Untuk menyiapkan
standar analitik dan deuterasi dari Kami
membutuhkan fenamiphos dan metabolit
oksidatifnyaprosedur yang mudah dan efisien.
Persiapan ini produk melalui oksidasi langsung
pestisida Ia dan senyawa yang disintesis terkait
Ib muncul khususnya mudah. Berbagai oksidan
telah digunakan untuk oksigenasi sulfida, tetapi
beberapa di antaranya sangat tinggi selektif dan
mampu berhenti di sulfoksida tanpa overoksidasi
signifikan terhadap sulfon [26]. Baru saja, 3-
fluoro-3- (heptafluoropropyl) -2-
(nonafluorobutyl) cis-oxaziridine IV telah
terbukti berfungsi sebagai baru, zat pengoksidasi
efektif, netral, dan aprotik [27-31]. Sulfida
alifatik dan aromatik telah dioksidasi secara
kemoselektif menjadi sulfoksida yang sesuai dan
sulfon [32]. Karena kondisi reaksi terutama
ringan kami memutuskan untuk belajar
oksigenasi dari agrokimia organofosfor Ia, boleh
oxaziridine IV, untuk mendapatkan metabolit
dan sesuai standar analitik yang dideuterasi.
Kemudian kami menggunakan senyawa ini
untuk analisis ini polutan dalam air oleh MS
dengan ion yang dipilih teknik pemantauan
(SIM) untuk meningkatkan kinerja analisis
kuantitatif pestisida ini dan metabolitnya dalam
air. Untuk pemulihan pestisida SPE lebih disukai
daripada ekstraksi cair-cair (LLE), karena
menawarkan beberapa keuntungan [33,34].
Beberapa bahan diuji sebagai fase ekstraktif dan
dibandingkan dengan hasil yang diberikan oleh
teknik SFE.
2. Percobaan
2. 1. Bahan kimia dan bahan
Perfluoro-cis-2,3-dialkyloxaziridine IV mudah
dibuat dari perfluoro tri-n-butylamine seperti
sebelumnya dilaporkan [35,36]. Oxaziridine IV
memiliki aroma yang tajam bau tetapi tidak ada
bahaya yang pernah dialami; memiliki untuk
ditangani dengan hati-hati, memakai sarung
tangan dan mengukur itu di bawah tenda. Flash
chromatography untuk pemurnian yang
disintesis produk dilakukan dengan gel silika 60
(63-200 / zm) dan TLC dijalankan pada gel
silika 60 F254 piring dari Merck (Darmstadt,
Jerman), menggunakan pelarut suling. Reagen
yang tersedia secara komersial pelarut tingkat
dipekerjakan tanpa pemurnian. Fenamiphos
standar dibeli dari Dr. Ehrenstorfer (Augsburg,
Jerman). Kartrid ekstraksi C js (lnsolute) (500
mg, 6 ml) diperoleh dari Teknologi Sorbent
Internasional (Jalan Baru, Hengoed, Mid
Glamorgan, UK), Kartrid ekstraksi LiChrolut
(500 mg, 6 ml) dari Merck, ENVIChromP,
ENVICarb (120-400 mesh) dan kartrid ekstraksi
ENV + (500 mg, 6 ml) dari Supelco (Bellefonte,
PA, USA). Chem-Elut dan fase sorbing natrium
sulfat dibeli dari Varian (Humboldt, CA, USA)
dan dari Merck. Itu pelarut yang digunakan
untuk sintesis dan ekstraksi adalah khusus untuk
analisis residu pestisida dan dibeli dari Merck
dan Carlo Erba (Milan, Italia).
2.2 Sintetik
(1-Methylethyl) phosphoramidic acid
ethyl 3- methyl-4 (methylthio) phenyl ester
(Ia).Senyawa la disintesis seperti yang
dilaporkan dalam referensi [37] dan data analitik
sesuai dengan yang dilaporkan.
Pentadeuteroethyl (1-methylethyl)
phosphoramidic acid ethyl 3-methyl-4
(methylthio) phenyl ester (lads).Untuk larutan
fosfor yang didinginkan (0 ° C)
oxychloride (5 mmol, 750 mg) dalam eter kering
(20 ml), larutan 3-metil-4-metilsulfenilfenol (5
mmol, 770 lap) dan trietilamin (5 mmol, 500
mg)
dalam pelarut yang sama (20 ml), ditambahkan
tetes demi tetes di bawah pengadukan kuat.
Campuran reaksi adalah diaduk selama 4 jam
pada 0 ° C kemudian diolah dengan natrium
etilat (5 mmol natrium dalam 2 ml etanol-ds).
Setelah 2 jam selanjutnya suspensi yang
dihasilkan adalah disaring dan dirawat pada 0 °
C dengan isopropilamin (10 mmol) dalam eter
(20 ml). Campuran diaduk untuk 2 jam maka
suspensi dicuci dua kali dengan air, dan lapisan
organik dikeringkan pada anhidrat
natrium sulfat dan terkonsentrasi dalam vakum.
Flash kromatografi (silika gel; kloroform-
metanol, 95: 5) diberikan murni Ia-d 5 (hasil
43%): m.p. 44-46 ° C; 3Lp NMR dan MS
dilaporkan pada Tabel 1 dan Gambar. 3 masing-
masing. Asam fosforamidat etil 3-metil-
4 (methylthio) phenyl ester (Ib). Senyawa Ib
tadinya disintesis seperti yang dilaporkan dalam
referensi [37] dan data analitik sesuai dengan
yang dilaporkan.
Pentadeuteroethyl phosphoramidic acid ethyl 3-
methyl-4 (methylthio) phenyl ester (Ib-ds).
Untuk a larutan oxychloride fosfor yang
didinginkan (0 ° C) (5 mmol, 750 mg) dalam
eter kering (20 ml), larutan 3-metil-4-
metilsulfenilfenol (5 mmol, 770 lap) dan
trietilamin (5 mmol, 500 mg) dalam jumlah yang
sama pelarut (20 ml) ditambahkan tetes demi
tetes di bawah kuat aduk. Campuran reaksi
diaduk selama 4 jam pada 0 ° C kemudian diolah
dengan natrium etilat (5 mmol of natrium dalam
2 ml etanol-ds). Setelah 2 jam berikutnya
suspensi disaring dan solusi yang dihasilkan
dirawat pada 0 ° C dengan amonia kering.
Campuran diaduk selama 2 jam, kemudian
suspensi dicuci dua kali dengan air, dan lapisan
organik dikeringkan
natrium sulfat anhidrat dan terkonsentrasi dalam
vakum. Pemurnian kromatografi flash (gel
silika; kloroform methanol, 95: 5) menghasilkan
Ib-d 5 murni (40% hasil): m.p. 65-68 ° C; 3119
NMR dan MS dilaporkan pada Tabel 1 dan
Gambar 3 masing-masing.
General procedure for the preparation of sulfoxide
metabolit dan standar deuterasi yang
sesuai.
Sulfida I oksidasi menjadi sulfoksida
yang sesuai II [37] menggunakan jumlah
ekuolekul dari oxaziridine IV dilakukan setelah
jenderal prosedur yang dilaporkan di bawah ini:
solusi dingin (0 ° C) sulfida (1 mmol) dalam
kloroform (15 ml) adalah diobati dengan
oxaziridine IV (1,16 mmol, 524 mg) di bawah N
2, dan campuran reaksi diaduk selama 10min.
Bahan yang mudah menguap telah dihapus di
vakum untuk memberikan sulfoksida murni
dalam hasil kuantitatif. (1-Methylethyl)
phosphoramidic acid ethyl 3- metil-4
(metilsulfinil) fenil ester (IIa) [38]: hasil
> 98%; mp 65-67 ° C; ~ H NMR (C2HC13) ~:
1.14, 1,19 (masing-masing, JH, H = 6,0 Hz, Jr,
.r, - 0,5 Hz, (CH3) 2CH, 6H), 1,34 (dt, JH, n =
8,0 Hz, CH3CH2OP,3H), 2.37 (s, CH3Ar, 3H),
2.68 (s, CH3SO, 3H), 3,14 (m, NH, 1H), 3.35
3.50 (m, CH (CH3) 2, 1H), 4.16 (dq, JH.la =
JH.p = 8.0 Hz, CH3CH2OP, 2H), 7.12
(m, H-6, 1H), 7.28 (m, H-2, 1H), 7.90 (d, 3j =
=8.5 Hz, H-5, 1H); 31p NMR (C2HC13) 6: 3.95
(brs); MS m / z (ra%): 319 (M +, 42), 304 (100),
276 (7), 234 (6),196 (27), 150 (19), 122 (68), 80
(25).
Pentadeuteroethyl (1-methylethyl)
phosphoramidicacid ethyl 3-methyl-4
(methylsulfinyl) phenyl ester (IIa-ds): hasil>
98%; minyak; 3 ~ p NMR dan MS dilaporkan
pada Tabel 1 dan Gambar. 3 masing-masing.
Asam fosforamidat etil 3-metil-4 (metilsulfinil)
fenilester (IIb): hasil 94%; data analitik sesuai
dengan yang dilaporkan sebelumnya [37].
Pentadeuteroethyl phosphoramidic acid ethyl 3-
metil-4 (metilsulfinil) fenil ester (IIb-ds): hasil
93%; mp 118-122 ° C; 31p NMR dan MS
dilaporkan pada Tabel 1 dan Gambar 3 masing-
masing.
Prosedur umum untuk persiapan sulfon
metabolit dan standar deuterasi yang sesuai.
Larutan dingin (0 ° C) sulfoksida (1 mmol)
dalam CF3CH2OH (15 ml) diolah dengan
oksaziridin IV (1,16 mmol, 524 mg) di bawah N
2, dan reaksinya campuran diaduk selama 30
menit. Bahan yang mudah menguap telah
dihapus di vacuo untuk memberikan sulfon
murni hasil kuantitatif.
(1-Methylethyl) phosphoramidic acid ethyl 3-
metil-4 (metilsulfonil) fenil ester (Ilia): hasil
94%; data analitik sesuai dengan yang
sebelumnya dilaporkan [37]. Pentadeuteroethyl
(1 -methylethyl) phosphoramidic acid ethyl 3-
methyl-4 (methylsulfonyl) phenyl ester (IIIa-ds):
hasilkan 98%; m.p. 83-85 ° C; 3Jp NMR dan
MS dilaporkan pada Tabel 1 dan Gambar 3
masing-masing. Asam fosforamidat etil 3-metil-
4 (metilsulfinil) phenyl ester (IIIb): Hasil 95%;
data analitik sesuai dengan yang dilaporkan
sebelumnya [37]. Pentadeuteroethyl
phosphoramidic acid ethyl 3- metil-4
(metilsulfinil) fenil ester (IIIb-ds): hasil > 98%;
m.p. 85-88 ° C; 3Jp NMR dan MS adalah
dilaporkan pada Tabel 1 dan Gambar. 3 masing-
masing.
2.3. Analisis instrumental
Titik lebur ditentukan pada hotstage
Kofler
aparatur dan tidak dikoreksi. Identitas
dan jumlah produk yang disintesis ditetapkan
oleh MS, tH NMR dan 31p NMR. IH dan 31p
Spektrum NMR direkam dengan Bruker AC 250
spektrometer. TMS (internal) dan asam fosfat
(eksternal) digunakan sebagai standar dan
C2HC13 sebagai pelarut. Pergeseran kimia
dilaporkan dalam ppm. DISMS spektrum produk
yang disintesis diperoleh pada instrumen VG TS
250 oleh E1 pada 70 eV dan kemurnian
ditentukan oleh GC-MS dalam ionisasi E1
analisis, dilakukan dengan instrumen ITD
Finnigan.
Analisis air fenamiphos Ia dan
metabolitnya IIa dan Ilia dilakukan oleh GC-MS
techM. Terreni et al. / J. Chromatogr. A 754
(1996) 207-219 211 niques. Sampel yang
diekstraksi dianalisis dengan GC HP 5890
dengan detektor MSD HP 5971 (Hewlett-
Packard, Palo Alto, CA, USA). Oven GC adalah
dilengkapi dengan kolom Mega (Legnano, Italia)
SE 52(15 m × 0,25 mm ID). Kromatografi
terbaik pertunjukan dicapai menggunakan liner
yang dinonaktifkandan pemrograman tekanan
masuk. Tekanan dari helium, gas pembawa,
awalnya disimpan pada 80 kPa untuk 2 hujan
kemudian diturunkan menjadi 30 kPa pada 680
kPa / mnt untuk sisa waktu. Injektor berada di
splitless mode pada 260 ° C. Oven diprogram
sebagai berikut: dimulai dengan 100 ° C (selama
3 menit), meningkat hingga 200 ° C pada 30 ° C
/ hujan dan kemudian 260 pada 10 ° C / hujan.
Suhu detektor ditahan pada 280 ° C dan energi
elektron berada pada 70 eV. Ion SIM dipilih
untuk analisis dilaporkan pada Tabel 2.
Untuk HPLC-electrospray MS (HPLC-ESP-MS)
analisis metabolit paling polar Ib, IIb dan IIIb
eluent dikirim oleh sistem gradien dari Pompa
Waters 616 dikontrol oleh Waters 600S
pengontrol dari Waters-Millipore (Milford, MA,
AMERIKA SERIKAT). Kondisi eluen LC
bervariasi dari 25:75 hingga 60:40 (v / v)
metanol-air dalam 20 menit pada 0,3 ml / mnt.
Kolom adalah 15 ram × 2,1 mm I.D., dikemas
dengan partikel 5 mm dari Zorbax, Rockland
Teknologi (Nuenen, Belanda) dilapisi dengan a
fase stasioner sianopropil. Gradien LC ini
sistem terhubung ke VG Platform ESP dari
Instrumen Penjara (Manchester, Inggris)
dilengkapi dengan probe aliran koaksial
Megaflow ESP [39]. Setelah LC pemisahan,
sampel dimasukkan ke dalam ESP sumber
bersama dengan gas nebulisasi, yang mengalir
langsung melalui ujung probe, memaksimalkan
efisiensi nebulisasi. Gas pengering ditambahkan
ke menghapus pelarut sebelum masuk ke dalam
analisa, dan untuk memfasilitasi kehancuran
ESP yang dibantu secara pneumatik
menggunakan VG Instrumen platform
digunakan pada laju aliran 0,3 ml / menit dan
suhu sumber 150 ° C. Akuisisi data dilakukan
dalam mode positif, kuantifikasi ion [M + Na] +
yang sesuai (Tabel 4) masing-masing
analit dalam mode pemindaian SIM, pada
tegangan ekstraksi dari 20 V. Akuisisi pindaian
penuh adalah antara re ~ z: 60 dan 400, dengan
waktu pemindaian 1,5 detik, untuk memperoleh
spectral informasi.

2.4. Ekstraksi ~ fenamiphos (la) dan
metabolit lIa dan Ilia
2.4.1. Persiapan sampel
Seratus ml sampel air mineral pada pH 7
dibubuhi dengan 2 #g l ~ dari fenamiphos dan
nya metabolisme. Senyawa ini berturut-turut
diekstraksi dari matriks air dengan SPE berbeda
kartrid (C ~ 8 atau LiChrolut atau ENV + atau
ENVIChromP atau ENVICarb) dan teknik SFE.
Semua ekstrak diuapkan di bawah aliran
nitrogen dan diencerkan dalam etil asetat untuk
analisis GC.
2.4.2. Ekstraksi fase padat
(i) C ~ 8: kartrid dikondisikan, tanpa
vakum, dengan 5 ml etil asetat dan 5 ml
metanol. Mereka kemudian dipindahkan ke
Supelco alat vakum dan sampel ditambahkan. Di
akhir bagian sampel fase dikeringkan di bawah
vakum untuk 15-20 hujan dan dielusi dengan 5
ml etil asetat tanpa vakum. (ii) LiChrolut
(ethylbenzene-divinylbenzene), ENV + dan
ENVIChromP (styrene-divinylbenzene): kartrid
dikondisikan pada tekanan atmosfer dengan 5 ml
metanol dan 5 ml suling air. Sampel
ditambahkan mengikuti yang sama prosedur
sebagai C ~ 8 dan dielusi dengan 6 ml metanol
(dua fraksi 3 ml dipisahkan oleh jeda 3 hujan).
(iii) ENVICarb (grafit karbon tidak berpori):
Kartrid dikondisikan, tanpa vakum,
pertama dengan 5 ml campuran diklorometana 8:
2 metanol, kedua dengan 5 ml metanol dan
ketiga dengan 10 ng ml ~ larutan asam askorbat
dalam 0,01 M HCI. Sampel ditambahkan seperti
yang dijelaskan untuk fase lainnya dan dielusi
dengan campuran 8: 2 dari diklorometana-
metanol [40].
2.4.3. Ekstraksi cairan superkritis
Semua ekstraksi dilakukan pada ISCO
CO2-SFX 220 model, spiking dengan air
mineral analit (2 # g 1 ~) dan mengumpulkan 1
ml air 212 M. Terreni et al. / J. Chromatogr. A
754 (1996) 207-219 ke ekstraksi yang diisi
natrium sulfat atau Chem-Elut peluru. Pelarut
penangkap adalah etil asetat atau diklorometana,
dipanaskan dengan lembut untuk menghindari
pembentukan es di ujung restriktor. Setelah
ekstraksi selesai, I.S. ditambahkan dan, setelah
sedikit prekonsentrasi, sampel dianalisis dalam
GCMS. Berbagai kondisi ekstraksi diuji untuk
optimalisasi prosedur dilaporkan pada table IV.
2.5. Persiapan sampel dan ekstraksi
metabolit polar Ib, lib dan llIb
dan dengan katup switching 817 untuk sampel
pilihan. Kartrid dikondisikan pada tekanan
positif, dengan 5 ml metanol dan 5 ml air.
Setelah menambahkan sampel pada aliran 10 ml
/ menit, itu kartrid dikeringkan selama 20 menit
dalam Baker SPE 12 Peralatan G dengan set
vakum pada 100 kPa. Elusi dengan 9 ml metanol
dilakukan dalam dua langkah dengan a jeda 5
menit, untuk meningkatkan pemulihan. Setelah
penambahan standar deuterasi dan penguapan
hati-hati pelarut hingga volume tetap 500 / zl,
dan penambahan 500 # 1 air, 20 / zl disuntikkan
ke LC-ESP-MS, menggunakan kondisi SIM.
Seratus ml sampel air tanah diasamkan untuk pH
4,5 berduri di 0,5 # g 1 - ~ dengan a campuran
fenamiphos metabolit. Senyawa-senyawa ini
diekstraksi dari matriks air dengan kartrid ENV+
(styrene-divinylbenzene).
SPE dilakukan menggunakan sampel
otomatis persiapan dengan kolom ekstraksi
(ASPEC) XL, dari Gilson (Villiers-le-bel,
Prancis). Sistem dilengkapi dengan pompa 306
LC eksternal untuk pengeluaran sampel melalui
kartrid SPE,
3. Hasil
3.1. Sintesis standar analitik
Phosphoramidates Ia, b dan yang terkait
dinonaktifkan standar diperoleh dengan reaksi 3-
metil-4-metilsulfenilfenol dengan
fosforodichlorhydric ester asam O-alkil dan
yang diinginkan amina (Gbr. 2). Asam
fosforodichlorhydricO-alkylester
dibuat menggunakan etanol-d5 disintesis standar
deuterasi. Oksigenasi fosforoamidat tersubstitusi
metiltio Ia, b dan yang terkait deuterated standar,
dengan satu dan dua padanan oksaziridin IV
memberikan sulfoksida yang sesuai IIa, b dan
sulfon IIla, b dalam hasil kuantitatif (Gbr.2).
Serangan selektif pada sulfur diamati
pada keduanyakasing tanpa oksidasi pada
nitrogen (member turunan hidroksilamino)
sebagaimana ditunjukkan oleh proton Analisis
NMR.
Dengan metode kami, produk oksidasi
adalah diisolasi dalam bentuk murni hanya
dengan menghapus, di bawah mengurangi
tekanan, pelarut, setiap reagen berlebih, dan
volatlu perfluoro cis-5-aza-4-nonene, diperoleh
sebagai produk dari oksidasi. Semua standar
deuterasi diperoleh dengan kemurnian isotop
yang sangat tinggi, seperti yang dilaporkan
dalam Tabel 1 adalah hasil yang diperoleh dan
analisis 3 ~ p NMR juga diringkas. Spektrum
massa standar deuterasidisintesis dilaporkan
pada Gambar. 3.
3.2. Analisis MS
Gambar 4A menunjukkan kromatogram
ion yang direkonstruksidari analisis GC-MS dari
fenamiphos (Ia) dan metabolit IIa dan IHa.
Parsial tumpang tindih metabolit IIa dan IIIa
tidak mempengaruhi pengukurandari daerah
puncak, karena dua senyawamemiliki jejak ion
yang terpisah, seperti yang dilaporkan dalam
Tabel lI. SemuaSenyawanya menunjukkan
linearitas yang baik pada rendahkonsentrasi
(LOD <9 pg ml - ~) dan komponen SIM
kromamatogram fenamiphos (Ia) pada
konsentrasi di sebelah LOD ditunjukkan pada
Gambar.5A. Untuk senyawa ini kurva kalibrasi
GC yang baik(Gbr. 6A) diperoleh dalam analisis
GC-MS dalam SIM kondisi, menyuntikkan I / zl
masing-masing larutan pada berbeda konsentrasi
yang diperoleh dengan pengenceran berurutan
dari solusi 2 ng / zl -j, dengan konsentrasi tetap
(5000 pg # 1-1) dari setiap standar deuterasi.
Menggunakan pemrograman tekanan, seperti
yang dilaporkan dalam bagian eksperimental,
lebih mudah daripada aliran konstan atau
prosedur tekanan konstan, resuiting dalam
peningkatan linearitas yang nyata. Bahkan dari
tekanan konstan ke pemrograman tekanan, r 2
meningkat sebagai berikut: dari 0,987 menjadi
1.000untuk
fenamiphos, dari 0,989 menjadi 0,999 untuk
sulfoksida dan dari 0,995 hingga 1.000 untuk
sulfonanya; peningkatan ini mungkin karena
bentuk puncak yang lebih baik diamati,
menghasilkan definisi area yang lebih baik untuk
dihitung. Meskipun des-isopropyl fenamiphos
(Ib) dianalisis di GC-MS memberikan puncak
yang baik pada konsentrasi tinggi, produk
degradasi fenamiphoskurang bagian isopropil
(senyawa Ib, lib dan IIIb) menyajikan beberapa
untuk LOD ditunjukkan, sebagai contoh, pada
Gambar. 5B. LoD dihitung menggunakan rasio
signal-to-noise 3 dannilai yang diperoleh untuk
senyawa yang diteliti, adalahdilaporkan pada
tabel IV. Kurva kalibrasi dan persamaan untuk
senyawa Ib, IIb dan IIIb dianalisis dalam LC-MS
adalah ditunjukkan pada Gambar. 6B. Kurva
kalibrasi ini adalah diperoleh pemantauan ion
[M + Na] + masing-masing metabolit dalam
kondisi SIM dan sistem itu linier menggunakan
enam poin dari 0,3 hingga 35 ng disuntikkan.
Salah satu kelebihan ionisasi electrospray adalah
kemungkinan CID (collisional induced
disociation), yang berarti bahwa molekul dapat
terfragmentasi dengan meningkatkan tegangan
ekstraksi dalam zona transportasi sistem.
Sebagai contoh, Gbr. 7melaporkan spektrum
senyawa IIIb-d 5, berbedategangan ekstraksi.
Pada potensial rendah, misalnya 20 V (Gbr. 7),
semuanyasenyawa tetap praktis dalam bentuk
kesulitan analitis dalam GCMS analisis. Mereka
memberi LOD tinggi, cukup besar
efek memori dan kurangnya linearitas di bagian
bawah rentang kurva kalibrasi. Karena itu kami
diujinAnalisis LC-ESP-MS dan relatif
direkonstruksi kromatogram dilaporkan pada
Gambar. 4B, sementara SIM kromatogram
senyawa lib pada konsentrasi berikutnya
molekul,dideteksi sebagai [M + H] ÷ (m / z 299
untuk senyawaIIIb-d 5) dalam mode positif.
Karena itukeasaman molekul juga membentuk
aduk dengannatrium, hadir sebagai pengotor
pelarut organic digunakan, menghasilkan
pembentukan puncak pangkalan dalam spektrum
yang sesuai dengan ion [M + Na] + (m / z 321).
Meningkatkan tegangan ekstraksi memberi lebih
tinggi fragmentasi molekul dan informasi
structural yang dapat berguna untuk
mengidentifikasi senyawa di sampel lingkungan
nyata. Kehadiran di molekul bagian yang
dideuterasi dalam senyawa IIIb-d s
memungkinkan identifikasi molekul utama
fragmen sebagai ion pada m / z 113 dan 266, itu
kemudian diidentifikasi masing - masing sebagai
[H2NP (O) OC22Hs] + ion dan ion yang berasal
darihilangnya radikal etyi-d 5.
3.3. Pemulihan air
Tabel 3 menunjukkan pemulihan
fenamiphos Ia dan metabolit IIa dan IIIa
diperoleh dengan teknik ekstraksi yang berbeda.
SPE yang disediakan bagus pemulihan untuk
semua senyawa, kecuali bahwa C8 tidak
dan IIIa mungkin dikaitkan dengan
kemungkinan cepatnya mereka transformasi
dalam air [12]. Karena SFE semakin penting
dalam lingkungan analisis karena kelebihannya
(tidak ada pelarut, lebih cepat persiapan sampel
dan selektivitas yang lebih besar) kami mencoba
untuk mengekstrak fenamiphos dan
metabolitnya IIa dan IIIa langsung dari sampel
air berduri. SFE disediakan hasil yang baik
untuk semua senyawa ini dan itu ditunjukkan
pada Tabel 4 menggunakan berbagai kondisi
ekstraksi. Sebuah Kenaikan suhu atau tekanan
menawarkan hasil yang baik untuk fenamiphos.
Seperti yang diharapkan, mempertimbangkan
polaritasnya, fenamiphos ditemukan lebih baik
dengan resin dan fase karbon grafit daripada
dengan C ~ 8. Pemulihan yang baik dan standar
tinggi deviasi yang diperoleh untuk pemulihan
metabolitIIa
menyebabkan luar biasa peningkatan pemulihan.
Namun pada 80 ° C kita menemukan bahwa ada
peningkatan air yang diekstraksi dengan cairan
superkritis, dan ini menyebabkan beberapa
masalah karena pembentukan es di akhir
pembatas. Untuk alasan ini kami memilih suhu
dari 60 ° C. Selain itu, bermanfaat untuk
menambahkan methanol.
ke sel, karena pemulihan membaik sementara
standar deviasi menurun (Tabel 4, Tes 6): dari
_ + 15-20% dengan nilai yang diperoleh untuk
senyawa I, II, III seperti yang dilaporkan pada
Tabel 3. Atas dasar hasil yang diperoleh untuk
fenamiphos Ia dan metabolit IIa dan IIIa, SPE
yang paling banyak metabolit polar Ib, IIb dan
IIIb dilakukan menggunakan fase ekstraksi
ENV. SPE ini menyediakan, untuk semua
senyawa polar ini, lebih dari 80% pemulihan
dengan nilai standar deviasi yang baik sebagai
dilaporkan pada Tabel 5.
4. Diskusi
Sintesis I.S. yang dideuterasi diperoleh oleh
prosedur mudah dan cepat, menggunakan bahan
yang tidak mahal dan mendapatkan hasil yang
tinggi atau hampir kuantitatif. Beberapa
komentar umum dapat dibuat tentang reaksi
dijelaskan. Hasil sulfoksida yang terisolasi dan
Sulfon selalu tinggi, seringkali kuantitatif. Itu
hasil oksidasi yang diperoleh membuktikan lebih
reaktif untuk mengoksidasi sulfoksida menjadi
sulfon secara kuantitatif hasil ketika digunakan
dalam jumlah stechiometric. Kesimpulannya,
prosedur yang digunakan tampaknya sangat
menarik untuk persiapan oksidatif metabolit,
standar analitik dan deuterasi dari senyawa
biokimia, toksikologi dan lingkungan mengingat
tingginya hasil bahan kimia, maka
kesederhanaan pemeriksaan, dan
kemungkinanmenangani oxaziridine IV tanpa
tindakan pencegahan khusus.
lanjut [32,37] itu oxaziridine IV
dapatmengoksidasi sulfida menjadi sulfoksida
secara kuantitatif dan tanpa overoksidasi yang
terdeteksi untuk sulfon. Ini adalah properti yang
sangat menarik untuk pereaksi yang pada saat
yang sama cukup
Ekstraksi oleh SPE dilakukan dengan ENV +
seperti yang dilaporkan dalam Bagian Bagian 2;
n = 4; analisis LC-MS dari ekstrak tersebut
adalah dilaporkan di Bagian 2 bagian
eksperimental.
Pekerjaan ini mengkonfirmasi potensi MS untuk
residu analisis pestisida, karena selektivitasnya
yang tinggi dan sensitivitas dalam identifikasi
puncak. Penggunaan senyawa yang dideuterasi
sebagai I.S. secara kuantitatif analisis
fenamiphos dan metabolitnya dalam air mungkin
tugas penting untuk masa depan, dengan
kemungkinan untuk menghilangkan artefak
karena produkdegradasi selama prosedur analitik
[12].
Pemulihan yang baik diperoleh untuk semua
produk dengan SPE dan SFE. Hasil yang
diperoleh menggunakan SFE menyarankan
bahwa metode ini harus dipertimbangkan
cepat dan terjangkau. Kami tidak mengetahui
yang lain studi menggunakan pendekatan SFE
ini, mungkin karena pembentukan es di
restriktor yang mempengaruhi analisis panjang
dan reproduktifitas. Kami punya memperhatikan
bahwa sedikit pemanasan mengumpulkan
pelarut dengan air sudah cukup untuk mengatasi
masalah tanpa kerugian analit yang signifikan
(ini tidak akan terjadi disarankan dengan zat
yang lebih mudah menguap). SFE juga
menunjukkan standar deviasi yang lebih rendah,
dibandingkan dengan SPE. Masalah dengan SFE
dapat menjadi sensitivitas metode analitik yang
digunakan, karena volume rendah digunakan
dalam kondisi yang dijelaskan. Di samping itu
SPE memungkinkan penggunaan volume yang
lebih besar dan jangkauan bahan yang berbeda
dapat digunakan untuk mendapatkan ekstraksi
optimasi. Seperti yang diharapkan, LC-MS
memberikan hasil yang lebih baik untuk
senyawa yang paling polar, sedangkan GC-MS
terbukti menjadi lebih sensitif dan karenanya
lebih bermanfaat untuk senyawa isopropil-
bagian. Meskipun aplikasi utama dari
electrospray teknik, pada awalnya, analisis
protein dan biomolekul dengan massa molekul
tinggi, aplikasi ke lingkungan dilakukan di yang
terakhir tahun menunjukkan potensi tinggi dari
teknik ini dalam bidang ini [39,41]. Pekerjaan
ini mengkonfirmasi kemampuan teknik ini untuk
menganalisis sangat polar dan senyawa kecil
seperti pestisida atau yang sesuai metabolit,
seperti yang dilaporkan di sini untuk mereka
yang tidaksetuju dengan GC-MS, metabolit lebih
kutub fenamiphos. Meskipun sampel yang
diekstraksi adalah dibubuhi dengan 0,5 / zg 1 -
~, sensitivitas ini teknik akan memungkinkan
untuk dengan mudah menentukan ini senyawa
pada 0,1 # g 1 J, menurut CEE Petunjuk Air
Minum.
Ucapan Terima Kasih
Pekerjaan ini didukung oleh Komisi Eropa
(Kontrak CEE EV5V-CT92-0061). Alfatech,
Genova, Italia dengan ramah menyediakan ISCO
SFX-220 extractor untuk SFE. Kami berterima
kasih kepada Dr. G. Resnati untuk persiapan
oxaziridine IV serta untuk Dr. R. Da Gasso
(Bayer S.p.A., Divisione Agraria) untuk a hadiah
murah hati dari 4-methylthio-3-methylphenol
dan Prof. G. Pagani untuk diskusi dan saran
yang bermanfaat
untuk persiapan artikel ini.
Referensi
References
[1] M. Fielding, D. Barcel6, A. Helweg, S.
Galassi, L. Torstensson,
P. van Zoonen, R. Wolter and G. Angeletti,
Pesticides
in Ground and Drinking Water (Water Pollution
Research Reports, No. 27), Commission of the
European
Communities, Brussels, 1992.
[2] M. Ten'eni, E. Benfenati, M. Natangelo, G.
Facchini and G.
Pagani, J. Chromatogr. A, 688 (1994) 243.
[3] M. Terreni, E. Benfenati, V. Pistotti and R.
Fanelli, Int. J.
Environ. Anal. Chem., 58 (1995) 31.
[4] H. Kayser, G. Schrader, US Pat., 2 978 479
(1961); C.A., 56
(1962) P8633e.
[5] C.R. Worthing, The Pesticide Manual. A
World Compendium,
British Crop Protection Council, Croydon, UK,
7th
ed., 1993.
[6l L. Simon and M. Spiteller, J. Agricol. Food
Chem., 40
(1992) 312.
[7] T.B. Waggoner, J. Agricol. Food Chem., 20
(1972) 157.
18] United States Environmental Protection
Agency, Fed. Regist.,
48 (1983) 29863; C.A. 99 (1983) 86724t.
[9] R.J. Huxtable, Biochemistry of Sulfur,
Plenum Press, New
York, 1983.
[10] S. Oae, Organic Sulfur Chemistry: Structure
and Mechanism,
CRC Press, Boca Raton, FL, 1991, p. 203.
Ill] R.D. O'Brien, Toxic Phosphorous Esters: [26] (a) S. Patai, Z. Rappoport, in C. Stirling
Metabolism and (Editor), The
Biological Effects, Academic Press, 1960. Chemistry of Sulfones and Sulfoxides, Wiley,
[12] C, Molina, P. Grasso, E. Benfenati and D. Chichester,
Barcel6, J. 1988. (b) G. Kresze, in D. Klamann (Editor),
Chromatogr. A, 737 (1996) In press. Methoden der
[13] A. Di Corcia and M. Marchetti, Environ. Organischen Chemie, Houben-Weyl, George
Sci. Technol., 26 Thieme Verlag,
(1992) 66. Stuttgart, Vol. E1 I, 4th ed., 1985, p. 669. (c) K.
[14] C.J. Miles, J. Chromatogr., 592 (1992) 283. Schank, in D.
[15] B.M. Patel, H.A. Moye and R. Weinberger, Klamann (Editor) Methoden der Organischen
J. Agric. Food Chemie,
Chem., 38 (1990) 126. Houben-Weyl, George Thieme Verlag, Stuttgart,
[16] T.A. Bellar and W.L. Budde, Anal. Chem., Vol. E11, 4th
60 (1988) 2076. ed., 1985, p. 1129. (d) S. Uemura, in B.M. Trost
117] B.D. Ripley and H.E, Braun, J. Ass. Off. and I.
Anal. Chem., 66 Fleming (Editors) Comprehensive Organic
(1983) 1084. Synthesis, Academic
[18] K.W. Edgell, E.L. Jenkins, A.V. Lopez and Press, Oxford, Vol. 7, 1991, p. 757. (e) M.
E. Longbottom, J. Madesclaire,
Ass. Off. Anal. Chem., 74 (1991) 295. Tetrahedron, 42 (1986) 5459. (f) A. Neudelman,
[19] T. Lipowska and S.J. Kubacki, Pr: Inst. The
Lab. Badaw. Prezem. Chemistry of Optically Active Sulfur
Spozyw., 23 (1973) 663. Compounds, Gordon
[20] H.J. Stan and G. Kellner, Biomed. Environ. and Breach Science Publisher, New York, 1984.
Mass Spectrom., [27] D.D. DesMarteau, V.A. Petrov, V.
18 (1989) 645. Montanari, M. Pregnolato
I21] G.C. Mattern, J.B. Louis and J.D. Rosen, J. and G. Resnati, Tetrahedron Lett., 33 (1992)
Ass. Off. Anal. 7245.
Chem., 74 (1991) 982. [28] A. Amone, R. Bernardi, M. Cavicchioli and
[22] J.P.G. Wilkins, A.R.C. Hill and D.F. Lee, G. Resnati, J.
Analyst (London), Org. Chem., 60 (1995) 2314.
110 (1985) 1045. [29] D.D. DesMarteau, A. Donadelli, V.
[23] F.E. Sondie, M.F. Lentz, R.R. Grondberg Montanari, V.A. Petrov
and J.P. Wargo, and G. Resnati, J. Am. Chem. Soc., 115 (1993)
Pesticide Analytical Manual, Vol. II, Food and 4897.
Drug Administration, [30] A. Amone, R. Bernardi, M. Cavicchioli,V.
Washington, DC, 1985, p. 11. Montanari and G.
[24] J.S. Thornton, J. Agric. Food Chem., 19 Resnati, J. Org. Chem,, 59 (1994) 5511.
(1971) 890.
[25] H.J. Stan and H. Goebel, J. Chromatogr.,
268 (1983) 55.